JPH11326778A - 顕微鏡画像観察装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】顕微鏡鏡体に熱変形が生じた場合であっても、
観察者が煩雑な操作を行なうことなしに、常に対象画像
を観察視野の基準位置に位置するようにして表示させる
ことが可能な顕微鏡画像観察装置を提供すること。 【解決手段】画像中の観察対象に係る平面方向の第１の
位置情報及び観察光軸方向の第２の位置情報の少なくと
も一方を求め、かつ前記画像に係る平面方向の基準位置
に対する前記第１の位置情報のずれ量とずれ方向、及び
前記画像に係る観察光軸方向の基準値に対する前記第２
の位置情報のずれ量とずれ方向の少なくとも一方を算出
する算出手段（２３ｄ，２３ｑ）と、前記顕微鏡の対物
レンズと前記観察対象を載置したステージとの相対位置
を変化させる駆動手段（２３ｇ，２３ｒ）と、前記算出
手段で得たずれ量とずれ方向の少なくとも一方に基いて
前記駆動手段の駆動を制御する制御手段（２３ｅ３）
と、を具備。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、光学顕微鏡や走査
型レーザ顕微鏡に適用され、観察対象を画像表示する顕
微鏡画像観察装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】光学顕微鏡は、ステージ上に搭載したプ
レパラート上の試料を対物レンズで拡大して観察する構
成となっており、一般に試料への照明としてランプなど
の光源からの光をコンデンサレンズを用いて試料の観察
領域全体に均等になるように照射する構造を採用してい
る。通常、接眼レンズを介して像の観察を行なうが、画
像の簡単な観察、記録を行なえるようにテレビカメラで
撮影し、モニタディスプレイで観察する方法が一般的と
なっており、近年はテレビカメラの解像度も向上して鮮
明に観察を行なうことも可能となった。

【０００３】このように観察画像をデータとして扱うこ
とで、顕微鏡の接眼レンズを覗き込む動作が不要とな
り、特に試料として生物の培養細胞などの画像をモニタ
ディスプレイにて長時間観察することができる。また、
観察している画像をビデオテープレコーダにより容易に
記録することもできる。

【０００４】そして、さらに画像の観察を高い分解能で
コントラストよく行ないたい場合に、光学顕微鏡による
観察では照明系としてフレア等の問題があり、また特に
低コントラストの試料を観察する際に得られる画像が大
変見づらいものになるという不具合が発生する。これを
改善するものとして、点状光投射型（スポット光投射
型）の走査型光学顕微鏡が提案されている。

【０００５】この走査型光学顕微鏡は、高輝度の光を光
源から対物レンズを介して試料へ点状に照射し、試料か
らの反射光、もしくは点状の光を照射したことで試料か
ら発生する蛍光を、再び対物レンズ及び光学系を介して
点状に結像し、その光をピンホール開口を有する検出器
で検出して像の濃度情報を得るようにしたものである。

【０００６】ただし、これだけでは点状光源が照射され
たことによる１点の濃度情報しか得られないため、試料
をＸ軸、Ｙ軸の方向にそれぞれ移動して二次元平面内で
機械的に移動させるＸ−Ｙ走査方式を用いたり、光路の
走査をＣＲＴディスプレイなどの画像表示装置の画面走
査と同期させることで、Ｘ−Ｙ走査に対応した上記濃度
情報の信号の強度を表示し、画像として観察できるよう
にしている。

【０００７】以上が走査型光学顕微鏡の原理構成であ
り、光源としてレーザ光を使うと画像の解像が向上する
ことが広く知られており、実際に光源としてレーザ光を
用いたものは走査型レーザ顕微鏡と呼称されている。

【０００８】この走査型レーザ顕微鏡は、レーザ光を走
査することにより生じる試料の反射光または蛍光を、検
出器である光電子増倍管やフォトダイオードなどで光電
変換により電気信号に変換し、画像データとして保存、
加工、表示する構成をなしている。

【０００９】図１０は、一般的な走査型レーザ顕微鏡の
基本構成を示すブロック図である。図１０において、１
１は光学顕微鏡本体であり、レーザ光源１２を用いてこ
の光学顕微鏡本体１１の顕微鏡ステージ１１１上の試料
１１２表面にレーザ光によるスポット光を照射させる。
実際には、試料１１２表面上をＸＹ走査するために、レ
ーザ光源１２からのレーザ光に対し、２次元走査機構部
１３が対物レンズ１１３に対するスポット光の光路をＸ
Ｙ光路にそれぞれ振らせることになる。

【００１０】図１１は、２次元走査の原理を説明するた
めの図である。図１１では、Ｘ，Ｙ方向の各ガルバノミ
ラーＧＭ１，ＧＭ２の２枚を使った場合のＸＹ走査部の
概略例を示しており、テレビジョン方式で用いられる所
謂ラスタスキャンを実現している。スポット光を照射し
た結果、試料から得られる反射光または蛍光は、光学顕
微鏡本体１１の対物レンズ１１３を通り、２次元走査機
構部１３を介してピンホール板１４を通過した後、光検
出部１５で受光され、その輝度に応じた電気信号に光電
変換される。

【００１１】上記ピンホール板１４は、所定径のピンホ
ールが開孔され、光検出部１５の前面の結像位置に配置
されるもので、ピンホールを通過した光を検出すること
で試料面上の観察点で合焦している情報のみを検出で
き、共焦点効果が得られるようになる。なお、２次元走
査機構部１３を駆動する場合には、後述する信号処理部
１６内のＣＰＵ１６ｆから走査制御信号が発生され、同
時にＣＰＵ１６ｆで前記走査制御信号を基準にデータ処
理が行なわれる。

【００１２】そして、光検出部１５で検出された電気信
号は、信号処理部１６にて画像処理され、画像信号化さ
れてモニタディスプレイである表示部１７に送られ、こ
の表示部１７にて表示出力される。

【００１３】次に、上記信号処理部１６にて行なう信号
処理の内容を詳述する。光検出部１５で得た電気信号に
ついて、まず利得可変部１６ａで所望の電圧値となるよ
うに信号増幅を行ない、次にオフセット調整部１６ｂに
て所望のオフセット量の増減を行なう。そのオフセット
量は、ＣＰＵ１６ｆによりＤ／Ａ変換器１６ｈ，１６ｇ
を用いて所望の値に設定される。

【００１４】オフセット調整部１６ｂで得られた信号
は、次にＡ／Ｄ変換器１６ｃにてデジタル化された後、
記憶部１６ｄに画像データとして一時記憶される。記憶
部１６ｄに記憶された画像データは、その後ＣＰＵ１６
ｆにより適宜加工、表示、保存される。すなわち、加工
とはＣＰＵ１６ｆにより所望の画像処理を行なうことで
あり、表示とは記憶部１６ｄから読出した画像データを
Ｄ／Ａ変換器１６ｅにてアナログ化した後に上記表示部
１７に表示し、画像を観察することである。

【００１５】また特に、併せて試料の深さ方向の情報つ
まり３次元情報が必要な場合には、Ｚ走査駆動部１６ｊ
によりステージ１１１を所望のＺ位置へ移動させ、必要
な画像を順次記憶部１６ｄに構築させることにより、３
次元画像の表示、観察も可能となる。

【００１６】上記のような走査型レーザ顕微鏡では、異
なる画像観察システムであっても、同じ顕微鏡鏡体を使
用しているため、鏡体の性能が及ぼす影響は共通であ
る。一般に、顕微鏡の鏡体は金属の材質で作られてお
り、熱による鏡体自身の伸縮の影響がある。金属は、材
質により固有の熱収縮率を持ち、温度の変化により収縮
伸長をする。環境温度にもよるが、顕微鏡鏡体の熱安定
まで数時間程度かかることがよくある。また、外部温度
が変化するとさらに多くの安定時間を要する。この影響
は通常の観察では目立たないが、高倍率及び長時間の画
像観察においては、観察画像の位置が視野からずれる要
因となる。

【００１７】図１２は、観察対象となる試料が視野から
外れた場合を例示するもので、図１２（ａ）は観察視野
ＯＦのほぼ中心に観察細胞ＯＣが位置している状態、図
１２（ｂ）は顕微鏡鏡体の熱収縮により観察細胞ＯＣが
観察視野ＯＦの中心ＣＯＦから大きく外れている状態を
示す。具体的には、例えば１００倍観察において視野が
２０ｍｍである場合、試料が数十μｍずれることで視野
中心から外れることとなる。これは、顕微鏡鏡体に約１
０℃の温度変化が生じたことで実際に起こり得るもので
ある。

【００１８】上記温度変化による熱収縮が生じる主な原
因として、ランプ照明からの熱伝導、顕微鏡内部に配置
されているユニット、例えばＩＣ、モータ等の電気部品
からの熱、及び周囲の環境温度変化等が挙げられる。ま
た、この収縮現象は、顕微鏡の鏡体の形、ユニット構
成、材質等に影響を受けるものであって、一概にどのよ
うに変化するかを容易に知ることはできない。

【００１９】このような不具合を解消し、画像の取込み
状態を改善して見易い画像を取得するシステムが従来よ
りいくつか提案されている。例えば特開平９−１３８３
５３号公報には、一般的にレーザ顕微鏡の画像を取得す
るシステムが開示されている。このシステムでは、画像
の明るさの調整を行ない見易くした画像を取得してお
り、より詳しくは、見やすい画像を得るために画像の明
るさ成分に関して最適な調整を行なっている。

【００２０】また、特開平９−１９７２８７号公報で
は、レーザ顕微鏡のシステムにおいて、標本の位置を所
定の視野内に位置させることを目的としている。そし
て、接眼レンズから見ることのできる観察画像範囲位置
とモニタ画面に表示される範囲とがずれることがあるた
め、ステージの位置を再調整して観察視野内に合わせる
ようにしている。この手法として、入力手段により表示
画面上で指定された位置に対応するようステージを制御
し、ＸＹ移動させることで観察視野の中心に位置させて
いる。また、位置の入力手段としては、表示画面上にタ
ッチパネルを設けたり、あるいは表示画面にファンクシ
ョンスイッチを設けたりしている。

【００２１】

【発明が解決しようとする課題】上記特開平９−１３８
３５３号公報のシステムは、一般的なレーザ顕微鏡の画
像を取得するものであり、画像の明るさの調整を行なっ
て見やすい画像を取得している。しかしながら、画像の
明るさ成分に関しての調整のみしか行なっておらず、位
置のずれについては何ら補正が行なわれていない。

【００２２】また、上記特開平９−１９７２８７号公報
においては、モニタ画面を見ながら画像のずれを手動操
作により指定し、ずれ補正を行なっている。そのため、
画像を観察する毎に同様の操作を行なう必要があり、そ
の操作が煩雑となる。また、長時間にわたる観察におい
ては、顕微鏡鏡体の変形に伴なって観察像位置がずれ、
次の画像取込み及び観察操作の際には観察対象が観察視
野から大きく外れてしまい、再度観察対象を画像から探
さなければならない。このため、観察者は常に監視を続
行しなければならない。

【００２３】これは、基本的に接眼レンズからの観察画
像と走査して得たモニタ画像との位置ずれの補正が、初
期状態にしか対応していないことに起因するもので、顕
微鏡鏡体の熱変形が生じたときの観察画像の位置ずれ
は、その度毎に手動で補正せざるを得ない。

【００２４】本発明の目的は、顕微鏡鏡体に熱変形が生
じた場合であっても、観察者が煩雑な操作を行なうこと
なしに、常に対象画像を観察視野の基準位置に位置する
ようにして表示させることが可能な顕微鏡画像観察装置
を提供することにある。

【００２５】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
顕微鏡で得た画像を観察するための顕微鏡画像観察装置
であり、前記画像中の観察対象に係る平面方向の第１の
位置情報及び観察光軸方向の第２の位置情報の少なくと
も一方を求め、かつ前記画像に係る平面方向の基準位置
に対する前記第１の位置情報のずれ量とずれ方向、及び
前記画像に係る観察光軸方向の基準値に対する前記第２
の位置情報のずれ量とずれ方向の少なくとも一方を算出
する算出手段と、前記顕微鏡の対物レンズと前記観察対
象を載置したステージとの相対位置を変化させる駆動手
段と、前記算出手段で得たずれ量とずれ方向の少なくと
も一方に基いて前記駆動手段の駆動を制御する制御手段
と、を具備したことを特徴とする。

【００２６】このような構成とした結果、顕微鏡の顕微
鏡鏡体に熱変形が生じた場合であっても、観察者が煩雑
な操作を行なうことなしに、常に対象画像を観察視野の
基準位置に位置するようにして表示させることが可能と
なる。

【００２７】請求項２記載の発明は、観察対象に対して
スポット光を走査して得られる光信号から画像を構築し
て観察するための顕微鏡画像観察装置であり、前記光信
号を検出する検出機構とは別に設けられ、前記画像を撮
像する撮像手段と、前記撮像手段で得た画像中の観察対
象に係る平面方向の第１の位置情報及び観察光軸方向の
第２の位置情報の少なくとも一方を求め、かつ前記画像
に係る平面方向の基準位置に対する前記第１の位置情報
のずれ量とずれ方向、及び前記画像に係る観察光軸方向
の基準値に対する前記第２の位置情報のずれ量とずれ方
向の少なくとも一方を算出する算出手段と、前記顕微鏡
の対物レンズと前記観察対象を載置したステージとの相
対位置を変化させる駆動手段と、前記算出手段で得たず
れ量とずれ方向の少なくとも一方に基いて前記駆動手段
の駆動を制御する制御手段と、を具備したことを特徴と
する。

【００２８】このような構成とした結果、特に走査型レ
ーザ顕微鏡等で、観察画像を得るためのレーザ光源や２
次元走査機構を用いることなしに、顕微鏡鏡体に熱変形
が生じた場合でも、観察者が煩雑な操作を行なうことな
しに、無駄な電力消費を抑え、レーザ光源の長寿命化を
図りながら、常に対象画像を観察視野の基準位置に位置
するようにして表示させることが可能となる。

【００２９】請求項３記載の発明は上記請求項１または
２記載の発明において、前記算出手段が、算出したずれ
量及びずれ方向の少なくとも一方を、顕微鏡鏡体の熱変
形に係る情報を基に補正することを特徴とする。

【００３０】このような構成とした結果、上記請求項１
または２記載の発明の作用に加えて、顕微鏡鏡体に熱変
形による平面方向または観察光軸方向の位置ずれが発生
した場合であっても対物レンズの合焦範囲を考慮してこ
れを補正することができる。

【００３１】請求項４記載の発明は上記請求項１乃至３
記載の発明において、前記第１の位置情報は前記観察対
象の重心位置であり、前記基準位置は前記画像の中心位
置であることを特徴とする。

【００３２】このような構成とした結果、上記請求項１
乃至３のいずれかに記載の発明の作用に加えて、顕微鏡
の顕微鏡鏡体に熱変形が生じた場合であっても、観察者
が煩雑な操作を行なうことなしに、常に対象画像を観察
視野の中心に位置するようにして表示させることが可能
となる。

【００３３】請求項５記載の発明は上記請求項１乃至３
記載の発明において、前記第２の位置情報と前記基準値
は、各々前記画像のコントラスト値であることを特徴と
する。

【００３４】このような構成とした結果、上記請求項１
乃至３のいずれかに記載の発明の作用に加えて、画像の
コントラスト値を基に観察光軸方向の位置ずれ、すなわ
ち合焦位置ずれを補正し、合焦位置のずれていない観察
画像を得ることが可能となる。

【００３５】請求項６記載の発明は上記請求項１乃至３
記載の発明において、前記第２の位置情報と前記基準値
は、各々前記対物レンズと前記ステージとの相対位置で
あることを特徴とする。

【００３６】このような構成とした結果、上記請求項１
乃至３のいずれかに記載の発明の作用に加えて、演算処
理を行なうことなく、前記対物レンズと前記ステージと
の相対位置を基に観察光軸方向の位置ずれ、すなわち合
焦位置ずれを補正し、合焦位置のずれていない観察画像
を得ることが可能となる。

【００３７】

【発明の実施の形態】（第１の実施の形態）以下、本発
明の第１の実施の形態について図面を参照して説明す
る。

【００３８】図１は、光学顕微鏡を用いた顕微鏡画像観
察装置の構成を示すブロック図である。光学顕微鏡本体
２１には、観察画像のＸＹ平面方向に移動可能なスキャ
ニングステージ２１１が設けられ、画像観察用のテレビ
カメラ２２が取付けられている。テレビカメラ２２で得
たステージ２１１上の試料２１３の画像信号は、信号処
理部２３１とモニタディスプレイからなる表示部２４へ
送られる。

【００３９】信号処理部２３１では、テレビカメラ２２
で得た画像信号をＡ／Ｄ変換器２３ａによりデジタル化
した後、記憶部２３ｂに記憶させる。この記憶部２３ｂ
に記憶された画像信号は、Ｄ／Ａ変換器２３ｃで読出さ
れて再びアナログ化された後、表示部２４とビデオテー
プレコーダからなる画像記録部２５へ送られる一方、重
心検出部２３ｄでも読出され、特定の画像処理、すなわ
ち観察視野中の観察対象である試料２１３における重心
位置の算出がなされる。

【００４０】なお、ＣＰＵ２３ｅ１の有する図示しない
メモリには、後述する光学顕微鏡本体２１の鏡体の熱変
形によって生じる位置ずれを補正するための補正処理情
報が記憶されている。

【００４１】さらに、重心検出部２３ｄでは、求めた重
心位置と観察視野の中心位置とのなす距離及び方向をず
れ情報として算出し、その算出結果により距離換算部２
３ｆが、その時点での光学顕微鏡本体２１における対物
レンズの倍率等を考慮し、実際のＸ，Ｙ各方向の移動量
に換算し、ＸＹ駆動部２３ｇへ送る。ＸＹ駆動部２３ｇ
では、距離換算部２３ｆから送られてくる情報に基い
て、光学顕微鏡本体２１のスキャニングステージ２１１
をＸ，Ｙ各方向へ駆動して移動させ、試料２１３の重心
位置と観察視野の中心位置とを一致させる。

【００４２】なお、記憶部２３ｂでの画像信号の記憶、
重心検出部２３ｄでの重心位置の算出、距離換算部２３
ｆでのずれ状態の算出、及びＸＹ駆動部２３ｇでのスキ
ャニングステージ２１１の駆動は、すべてＣＰＵ２３ｅ
１の駆動制御によりなされる。表示部２４では、テレビ
カメラ２２から直接送られる画像信号、あるいは信号処
理部２３１のＤ／Ａ変換器２３ｃから出力される画像信
号の一方を、モニタ画面で表示する。また、画像記録部
２５は、表示部２４を介して送られてきた画像信号ある
いはＤ／Ａ変換器２３ｃからの画像信号を順次記録す
る。

【００４３】次に、本顕微鏡画像観察装置の動作につい
て説明する。テレビカメラ２２により撮像された観察対
象の画像信号は、信号処理部２３１にて画像処理され
る。すなわち、まずＡ／Ｄ変換器２３ａにおいてデジタ
ル化され、画像データとして記憶部２３ｂに記憶され
る。この記憶部２３ｂに記憶された画像データを用い
て、重心検出部２３ｄで観察対象となる試料の重心が求
められる。

【００４４】図２は、試料である観察細胞ＯＣの観察視
野ＯＦにおける位置関係を例示する図である。図２に示
すように、観察細胞ＯＣの重心ＣＯＣと観察視野ＯＦの
中心ＣＯＦとが大きく離れており、観察細胞ＯＣが観察
視野ＯＦ中の外れた位置にあることがわかる。なお、観
察当初の観察位置の設定に関しては、必ずしも自動で重
心位置を求めずとも、重心もしくは画像中心と思われる
位置を観察者が表示部２４を見て視野中心となるよう設
定してもよい。

【００４５】次に、観察を開始してからの時間経過に伴
ない、光学顕微鏡本体２１に生じる顕微鏡鏡体の熱変形
に起因した位置ずれの補正処理について説明する。信号
処理部２３１では、ＣＰＵ２３ｅ１が一定の時間間隔で
順次更新記憶されている記憶部２３ｂの画像データを重
心検出部２３ｄに読出し、観察対象となる試料の重心位
置を自動算出させる。そして重心検出部２３ｄは、算出
した重心位置と視野の中心位置との画素差を求め、求め
た画素差を続く距離換算部２３ｆで移動距離に換算す
る。

【００４６】図３は、上記画像データにおける観察細胞
ＯＣの重心ＣＯＣの位置と観察視野ＯＦの中心ＣＯＦの
位置との関係を示す図である。距離換算部２３ｆは、図
３に示すように重心検出部２３ｄで求められた画素差Ｌ
ｘ，Ｌｙを実際の移動距離に換算する。ここで実際の移
動距離とは、観察している対物レンズの倍率により決ま
る実寸法であり、それがスキャニングステージ２１１の
移動量Ｓｘ，Ｓｙとなる。

【００４７】例えば、使用するテレビカメラ２２がアス
ペクト比４：３、縦横の画素数６４０×４８０ドット
（正方格子画素）の画像信号を出力するものとし、観察
視野の対角線距離が２０ｍｍであったとすると、対物レ
ンズの倍率が１倍のときの観察視野ＯＦの横、縦の距離
は、それぞれ （横） ２０×４÷５＝１６ｍｍ （縦） ２０×３÷５＝１２ｍｍ となり、これを１画素間あたりの距離に換算すると、 （横縦共） １６ｍｍ÷６４０＝２５μｍ となる。

【００４８】もし、対物レンズの倍率が１０倍の観察
で、そのずれ量が画素数Ｌｘ＝２０画素、Ｌｙ＝１０画
素であったとすると、 Ｓｘ＝２５×２０÷１０＝５０［μｍ］ Ｓｙ＝２５×１０÷１０＝２５［μｍ］ となり、これが距離換算部２３ｆで換算されてＸＹ駆動
部２３ｇに送られる。ＸＹ駆動部２３ｇでは、この送ら
れてきた情報に基いて光学顕微鏡本体２１のスキャニン
グステージ２１１をＸ，Ｙ方向に移動させ、観察対象の
試料である観察細胞ＯＣの中心ＣＯＣを観察視野ＯＦの
中心ＣＯＦに一致させる。

【００４９】なお、上記位置補正処理において、実際に
は光学顕微鏡本体２１から送られる対物レンズの倍率の
情報をＣＰＵ２３ｅ１が読取り、その情報を重心検出部
２３ｄに与えることで移動量を得ることができる。

【００５０】以上の処理により移動制御された後の画像
は、観察対象が正確に視野の中心に位置することとな
り、Ｄ／Ａ変換器２３ｃにてアナログ化された後、表示
部２４に表示、あるいは画像記録部２５に記録される。
なお、Ｄ／Ａ変換器２３ｃから得た画像信号に代えて、
テレビカメラ２２で得た画像信号を直接表示部２４に表
示、あるいは画像記録部２５に記録するものとしてもよ
い。

【００５１】また、上記位置ずれの補正処理を実行する
補正処理情報、ここでは時間間隔は、実際の光学顕微鏡
本体２１の鏡体の熱変形の速度により異なるが、所望の
時間間隔を設定可能であるものとする。

【００５２】図４は、ＣＰＵ２３ｅ１のメモリに記憶さ
れている画像取得時間間隔をＴ１、位置ずれの補正時間
間隔をＴ２（Ｔ１＞Ｔ２）とした場合の、両者の関係を
例示した図である。上記補正処理は、画像取得から次の
画像取得までの間に行なわなければならないため、図４
に示すように、時間Ｔ１内で１回あるいは時間間隔Ｔ２
毎に複数回位置ずれ補正を行なうよう設定すればよい。

【００５３】また、リアルタイムで常に補正処理を行な
い観察対象を視野の中心に置きたい場合、テレビカメラ
２２の１画面の露光時間に同期して、例えばテレビジョ
ン方式がＮＴＳＣ方式であれば１／３０秒間隔で補正処
理を行なうことも可能である。

【００５４】一般に、顕微鏡鏡体の熱変形の速度は十分
に遅いものであるため、上記のような補正処理に要する
処理時間も十分確保することができ、見やすい位置にあ
る所望の観察が可能である。ただし、全体の処理時間
は、入力画像の取込み速度により制限される。

【００５５】以上の動作により、初期の設定を行なうの
みで、その後は顕微鏡鏡体に熱変形を生じた場合であっ
ても、自動的に長時間にわたって常に観察対象が視野の
中心に位置するようにでき、画像を観察、記録すること
が可能となる。

【００５６】また、画像記録部２５はビデオテープレコ
ーダからなるものとしたが、その他にもパーソナルコン
ピュータを介した記録媒体、例えば光磁気ディスク、ハ
ードディスク等を用いて記録するものとしてもよい。ま
た、テレビカメラ２２のサイズ、信号方式には制限はな
く、解像度の高いものであれば、位置合わせを行なう精
度がより高くなることは言うまでもない。また、テレビ
カメラを複数用いて、一度に複数の画像を得るようにし
てもよい。

【００５７】さらに、上述した補正処理のための情報と
して、所望の時間間隔で得る熱変形の速度等の情報を用
いる他に、顕微鏡鏡体の温度を逐一検出することができ
る温度センサを鏡体に設け、その温度センサの検出結果
を基に、実際の鏡体の熱変形に応じて位置ずれを補正処
理するようにしてもよい。

【００５８】（第２の実施の形態）以下、本発明の第２
の実施の形態について図面を参照して説明する。

【００５９】図５は、レーザ顕微鏡を用いた顕微鏡画像
観察装置の構成を示すブロック図である。図５の基本構
成は上記第１の実施の形態に示した図１と同様であるた
め、図１と同一な部分に同一符号を付してその説明を省
略する。

【００６０】図５において、３１はレーザ顕微鏡本体で
あり、レーザ光源３２から発振されたレーザ光は、必要
に応じて光ファイバを介してレーザ顕微鏡本体３１に導
かれ、対物レンズを通り、そのスポット光が観察光軸と
直交する観察画像のＸＹ平面方向に移動可能なスキャニ
ングステージ２１１上に載置された試料２１３表面に照
射される。

【００６１】２次元走査機構部３３は、後述する信号処
理部２３２内の２次元走査駆動制御部２３ｌが発生する
走査制御信号により試料２１３に対してＸＹ走査するも
のであり、具体的には上記図１２で例示したように、２
枚のガルバノミラーを用いてＸ方向とＹ方向へ走査し、
レーザ光をラスタスキャンする。

【００６２】そして、試料２１３にスポット光を照射し
た結果得られる試料２１３からの反射光または蛍光を、
レーザ顕微鏡本体３１の対物レンズを介して図示しない
光路分割部により光路分割する。その分割された一方の
光を、２次元走査機構部３３を介してピンホール板３４
を通過させた後、一般に光電子増倍管（ＰＭＴ）で構成
される光検出部３５にて輝度に応じた電気信号に光電変
換する。

【００６３】ピンホール板３４は、所定径のピンホール
を開孔したものであり、光検出部３５の前面の結像位置
に配置される。ピンホール板３４を通過した光を光検出
部３５で検出することにより、試料面上の観察点での合
焦により得た情報のみを検出でき、共焦点効果が得られ
る。光検出部３５で変換された電気信号は、信号処理部
２３２において画像処理され、得られた画像信号が表示
部２４で表示されるとともに、画像記録部２５で記録さ
れる。

【００６４】信号処理部２３２では、まず光検出部３５
で得た電気信号を利得可変部２３ｈにて所望の増幅率に
より増幅し、次に増幅した電気信号についてオフセット
調整部２３ｉで所望分だけオフセット量の増減を行な
う。これらの設定量は、ＣＰＵ２３ｅ２がそれぞれＤ／
Ａ変換器２３ｊ，２３ｋに所望の値を可変設定すること
で決められる。そして、オフセット調整部２３ｉから出
力された信号がＡ／Ｄ変換器２３ａに送られてデジタル
化され、順次記憶部２３ｂに書込まれる。

【００６５】この記憶部２３ｂでのアドレス指定はＣＰ
Ｕ２３ｅ２により行なわれる。ＣＰＵ２３ｅ２は、２次
元走査駆動制御部２３ｌの制御による２次元走査機構部
３３での走査に同期して、記憶部２３ｂに１画面分の信
号を画像データとして記憶させる。

【００６６】次に、本顕微鏡画像観察装置の動作につい
て説明する。まず、２次元走査機構部３３によりレーザ
光源３２からのレーザ光を試料２１３表面に走査し、得
られた反射光または蛍光を順次ピンホール板３４を介し
て光検出部３５で検出する。光検出部３５では検出した
光に対して光電変換を行ない、信号処理部２３２の利得
可変部２３ｈ及びオフセット調整部２３ｉでその電気信
号の振幅及びオフセット値の調整をした後、Ａ／Ｄ変換
器２３ａでデジタル化して記憶部２３ｂに記憶する。

【００６７】この記憶部２３ｂに記憶された１画面分の
画像に対して画像処理が実行されるが、その画像処理の
内容自体は上記第１の実施の形態と同様であるので説明
を省略する。そして、常に観察対象となる試料の重心位
置が観察視野の中心位置と一致するよう、ＸＹ駆動部２
３ｇによりレーザ顕微鏡本体３１のスキャニングステー
ジ２１１を自動的に移動させる。

【００６８】一般的にレーザ顕微鏡の場合、画像取得の
方法としてはＸＹＴスキャン、ＸＹＺＴスキャンといっ
た時間経過を観察する方法があり、上記第１の実施の形
態の場合と同様に長時間観察が必要である。したがっ
て、このようなレーザ顕微鏡の画像取込みモードにおい
ても適切な位置補正を行なうことで、良好な画像の確実
な取得が可能となる。

【００６９】（第３の実施の形態）レーザ顕微鏡で画像
を取得するためには、レーザ光源、２次元走査機構部と
いった主要部分を動かす要素が必須となり、多大な電力
を消費する。これに対してテレビカメラで画像を得る場
合は、かかる消費電力がはるかに少ないという利点があ
る。また、特にレーザ顕微鏡で用いられる気体レーザ
は、一般的に固体レーザに比べて寿命が短い。したがっ
て、顕微鏡画像観察装置において画像の条件を抽出する
間は、レーザ光による走査を一時的に停止し、電源を切
断しておくことが望ましい。

【００７０】これは、画像の位置ずれに対する補正処理
を実行する場合も同様であり、やはりレーザ光による走
査にかかる停止作業が必要とされる。そのため、画像の
位置ずれの検出に関してはテレビカメラの画像を使い、
実際に記憶したい顕微鏡画像としてレーザ光の走査で得
た画像を記憶するという使い方を行なえば、必要な電力
消費を充分低く抑えることができる。

【００７１】以下、本発明の第３の実施の形態について
図面を参照して説明する。本第３の実施の形態では、レ
ーザ光の走査により顕微鏡画像を取得する時間間隔が長
い場合に、必要時以外はレーザ光の走査に係る回路の電
源を一時的に切断し、その間に複数回テレビカメラで画
像を得て、位置ずれの補正処理を行なう。

【００７２】図６は、レーザ顕微鏡を用いた顕微鏡画像
観察装置の構成を示すブロック図である。図６の基本構
成は上記第２の実施の形態に示した図５と同様であるた
め、図５と同一な部分に同一符号を付してその説明を省
略する。

【００７３】図６において、２次元走査機構部３３の対
物レンズ側には光路分割部４１が設けられ、レーザ光の
走査を行なっていない状態では、この光路分割部４１に
より観察対象となる試料２１３の光像をテレビカメラ４
２に導く。テレビカメラ４２により撮像された観察対象
の画像信号は、信号処理部２３３内のＡ／Ｄ変換器２３
ｍでデジタル化された後に記憶部２３ｎに記憶される。
この記憶部２３ｎは、記憶制御部２３ｏの制御に基いて
送られくる画像信号を記憶し、記憶部２３ｎに記憶され
る画像に基いて、重心検出部２３ｄが観察視野中におけ
る観察対象となる試料の重心位置を検出する。

【００７４】そして、レーザ光の走査により得られた顕
微鏡画像の記憶部２３ｂへの記憶は記憶制御部２３ｐに
より、またテレビカメラ４２で得られた画像の記憶部２
３ｎへの記憶は記憶制御部２３ｏにより、それぞれ制御
される。ＣＰＵ２３ｅ３では、光路分割部４１を切換え
るとともに、これら記憶制御部２３ｐ，２３ｏを統括制
御して、記憶部２３ｂと記憶部２３ｎのいずれか一方で
顕微鏡画像を記憶するよう切換制御する。

【００７５】このような構成とすることにより、試料の
観察を行なう場合には、レーザ光源３２で発振したレー
ザ光を２次元走査機構部３３で当該試料の表面に走査し
ながら照射する。そして、光路分割部４１を光検出部３
５側に切換えることで、試料２１３から得られた反射光
あるいは蛍光はピンホール板３４を通過し、光検出部３
５で検出される。

【００７６】光検出部３５は、検出した光を順次電気信
号に光電変換し、その電気信号は利得可変部２３ｈ，オ
フセット調整部２３ｉを介してＡ／Ｄ変換器２３ａでデ
ジタル化され、記憶制御部２３ｐの制御により記憶部２
３ｂに記憶され、適宜Ｄ／Ａ変換器２３ｃを介して表示
部２４で表示出力される。

【００７７】一方、上述した観察の合間に観察視野の位
置ずれの補正処理を行なう場合には、光路分割部４１を
テレビカメラ４２側に切換え、試料の画像を光路分割部
４１を介してテレビカメラ４２で撮像する。テレビカメ
ラ４２で得られた画像信号は、Ａ／Ｄ変換器２３ｍでデ
ジタル化され、記憶制御部２３ｏの制御により記憶部２
３ｎに記憶される。

【００７８】この記憶部２３ｎに記憶された画像に基い
て、重心検出部２３ｄは試料の重心位置を算出し、さら
にその重心位置と観察視野の中心とのずれ量を座標値で
算出し、その結果を距離換算部２３ｆに送出する。距離
換算部２３ｆでは、送られてきたずれ量の情報と対物レ
ンズの倍率とから上記第１の実施の形態で説明したよｖ
うにＸＹ各方向のずれ量の示す各距離を算出し、その算
出結果をＸＹ駆動部２３ｇに出力する。ＸＹ駆動部２３
ｇは、この距離換算部２３ｆからの距離値に応じてレー
ザ顕微鏡本体３１のスキャニングステージ２１１をＸ，
Ｙ各方向に移動させる。これにより、レーザ顕微鏡本体
３１の鏡体に熱変形等が生じた場合であっても、観察視
野の中心に確実に試料の重心が位置し、試料を観察視野
の中央で観察することができるようになる。

【００７９】（第４の実施の形態）上記第１乃至第３の
実施の形態では、いずれも位置ずれの補正処理として観
察光軸に直交するＸＹ平面に沿ってステージの移動を行
なうものとしたが、観察光軸と平行したＺ方向へも位置
ずれが生じることがある。この問題は、自動合焦機能を
有する顕微鏡であれば、後述するようにＺ方向の補正処
理をＸＹ方向の補正処理と並列して実行することで解決
できる。これにより、特に焦点深度の浅い対物レンズを
使用するような場合であっても、確実に試料の高さ方向
の変化に対応させ、常に合焦を得ることができる。

【００８０】顕微鏡において観察者が観察する際に、Ｘ
Ｙ方向の位置を決める調整操作を行なうとともに、Ｚ方
向の合焦位置を決める。具体的には、ステージのＸＹ操
作、Ｚ操作を行ない所望の位置を確定することで、ＸＹ
観察位置合わせと合焦を行なう。これは、一般的に行な
われている位置合わせである。したがって、ＸＹ方向の
位置決めにより観察重心位置を決め、Ｚ方向の位置決め
により合焦位置を決めることになる。本第４の実施の形
態では、このときのＺ方向の合焦位置をＺ０とし、この
状態で撮像された初期画像のコントラスト値を合焦位置
ずれ補正の基準とする。

【００８１】以下、本発明の第４の実施の形態について
図面を参照して説明する。

【００８２】図７は、レーザ顕微鏡を用いた顕微鏡画像
観察装置の構成を示すブロック図である。図７の基本構
成は上記第３の実施の形態に示した図６と同様であるた
め、図６と同一な部分に同一符号を付してその説明を省
略する。本第４の実施の形態では、観察光軸方向（Ｚ方
向）の位置ずれ、すなわち合焦位置ずれに関して、その
ずれ量を以下の処理にて補正し、合焦位置で撮像した初
期の観察画像に対して合焦位置のずれていない観察画像
を得ることを可能とする。

【００８３】図７において、コントラスト算出部２３ｑ
は、記憶部２３ｎに記憶された観察対象の初期の画像の
コントラスト値を、該初期画像の各周辺画素間の差分値
を用いて算出する。

【００８４】図８は、試料である観察細胞ＯＣの画像を
示す図である。図８において、８１，８２は、それぞれ
コントラスト値算出用のＸ，Ｙラインを示している。コ
ントラスト算出部２３ｑは、図８に示す画像におけるＸ
Ｙ平面内でのＸライン８１とＹライン８２の輝度の差分
値の絶対値の和をコントラスト値とする。この場合、Ｘ
ライン８１，Ｙライン８２でのコントラスト値とＺ位置
でのコントラスト値は、以下のようになる。

【００８５】 ＣＸ＝Σ｜Ｄ（Ｘｎ，Ｙｋ）−Ｄ（Ｘｎ＋１，Ｙｋ）｜² …（１） ＣＹ＝Σ｜Ｄ（Ｘｋ，Ｙｎ）−Ｄ（Ｘｋ，Ｙｎ＋１）｜² …（２） ＣＺ＝ＣＸ＋ＣＹ …（３） ここで、Ｘｎ，Ｙｎは画像中の各画素の位置を示し、Ｄ
（Ｘｎ，Ｙｎ）はＸｎ，Ｙｎ位置での画像の輝度を示
す。また、ｋは任意の画像位置である。（１），（２）
式に示すＣＸ，ＣＹは、Ｘ，Ｙラインでのコントラスト
値、（３）式に示すＣＺは最終的なＺ位置でのコントラ
スト値であり、ＣＸとＣＹを加算することによりＺ位置
でのコントラスト値ＣＺを求める。

【００８６】図９は、光軸方向の位置（Ｚ位置）に対す
るコントラスト値の変化を示す図である。前述したよう
にコントラスト算出部２３ｑによりＺ位置でのコントラ
スト値を求めた後、光軸方向の位置ずれの補正を行な
う。この場合、今回取得した画像に対して、同様にコン
トラスト算出部２３ｑでコントラスト値（Ｚｎの位置で
のコントラスト値）を算出し、前回取得した初期画像の
コントラスト値（合焦位置Ｚ０でのコントラスト値）と
比較する。

【００８７】これら二つのコントラスト値が異なれば合
焦位置がずれているため、ＣＰＵ２３ｅ３は以下のよう
にＺ駆動部２３ｒでステージ２１１を光軸方向で移動さ
せ、前記二つのコントラスト値が一致する光軸位置すな
わち合焦位置Ｚ０を探す。すなわち、光軸方向の位置ず
れ補正処理の際に上記二つのコントラスト値が異なる場
合、今回取得したコントラスト値が合焦位置Ｚ０のとき
の値と一致するようにステージ２１１をＺ方向で動か
す。

【００８８】まずＣＰＵ２３ｅ３は、標本２１３と対物
レンズの衝突を防ぐため、初めにそれらが離れる方向へ
Ｚ駆動部２３ｒによりステージ２１１を移動する。この
移動量は、使用している対物レンズの焦点深度量のステ
ップに合わせる。これは、焦点深度内でステージ２１１
を動かしても、合焦範囲内であるため変化を認識できな
いからである。

【００８９】このとき、ステージ２１１を２または３ス
テップ移動してコントラスト値が大きくなるなら、合焦
位置のコントラスト値に至るまで、同じ方向で移動を続
け合焦点に合わせる。もし、コントラスト値が小さくな
るなら、合焦点からずれてゆくので、ステージ２１１を
逆方向へ移動し、合焦位置に到達するようＺ方向の位置
合わせを行なう。このＺ方向の位置ずれ補正処理を行な
う時間間隔は、実際の顕微鏡鏡体の熱変形の速度により
異なるが、所望の時間間隔を設定可能である。

【００９０】なお、画像取得時間と位置補正時間の関係
については、第１の実施の形態の説明で用いた図４と同
様であり、例えば、画像取得時間（Ｔ１）に対し、位置
ずれ補正時間（Ｔ２）とした場合（Ｔ１＞Ｔ２）、位置
補正は次の画像取得までの間に行なわれなければならな
いため、Ｔ１内にＴ２の時間間隔で複数回（あるいは１
回）位置ずれ補正を行なうよう設定すればよい。また、
リアルタイムで常に補正処理を行ない、観察位置を中心
に置きたい場合、テレビカメラの１画面の露光時間に同
期して例えば１／３０ｓ間隔で補正処理を行なうことも
可能である。

【００９１】一般に、通常の熱変形の速度は十分に遅い
ため、処理時間も十分確保でき、所望の観察が可能にな
る。ただし、全体の処理時間は、入力画像の取り込み速
度に制限される。以上により、初期の設定を行なうのみ
で、その後は自動でＺ方向の位置ずれ補正を行ない長時
間の画像記録が可能となるため、観察に係る作業効率が
向上する。

【００９２】また、Ｚ方向の位置ずれ補正を画像のコン
トラスト値を基に行なうのでなく、対物レンズとステー
ジの相対距離を基に行なうようにしてもよい。この場
合、顕微鏡本体に対物レンズとステージの相対距離を測
定するセンサを設け、このセンサで測定される相対距離
をＣＰＵ２３ｅ３で検出する。そしてＣＰＵ２３ｅ３
は、補正処理時に、検出した相対距離と初期の合焦時に
おける相対距離とが一致するよう、Ｚ駆動部２３ｒによ
りステージ２１１を光軸方向で移動させる。

【００９３】また、画像記録部２５はビデオテープレコ
ーダからなるものとしたが、その他にもパーソナルコン
ピュータを介した記録媒体、例えば光磁気ディスク、ハ
ードディスク等を用いて記録するものとしてもよい。ま
た、テレビカメラ２２のサイズ、信号方式には制限はな
く、解像度の高いものであれば、位置合わせを行なう精
度がより高くなることは言うまでもない。また、テレビ
カメラを複数用いて、一度に複数の画像を得るようにし
てもよい。

【００９４】一般的にレーザー顕微鏡の場合、ＸＹＴス
キャン、ＸＹＺＴスキャンといった方法により時間経過
に応じて画像を取得し観察をするため、長時間の観察が
必要となる。しかし、以上このようなレーザ顕微鏡の画
像取り込みモードによれば、適切な位置補正を行なうこ
とで、長時間による良好な画像の取得が可能となる。こ
れにより、ＸＹ方向すなわち平面方向だけでなく、光軸
方向の合焦ずれも補正され、長時間において観察位置が
ずれない画像を取得できる。

【００９５】なお、本発明はその要旨を逸脱しない範囲
内で種々変形して実施することが可能であるものとす
る。

【００９６】（変形例）上記各実施の形態では示さなか
ったが、当然ながらレーザ顕微鏡システムでは、透過検
出画像に関しても同様の処理を実行することができる。
また、複数の画像に対しても同様の位置ずれの補正処理
を行なうことが可能である。その場合の構成は上記各実
施の形態と同様で、異なる波長の蛍光画像を同時または
時分割により記憶部２３ｎに記憶する。そして、複数の
蛍光画像に対してそれぞれ位置ずれの補正処理を行な
い、全ての画像に対して補正処理を終了した後、表示部
２４にてマルチ画像を表示させる。

【００９７】さらに、上記第２〜４の実施の形態では、
光検出部３５を光電子増倍管（ＰＭＴ）で構成するもの
として説明したが、これに限らず、フォトダイオード
（ＰＤ）、ＣＣＤ、ＣＭＤ等の光電変換の効率が良いも
のであれば他の素子を用いてもよい。また２次元走査機
構部３３は、ガルバノミラーや、共振ガルバノミラー、
ポリゴンミラー、あるいはＡＯＤでもよく、要はＸＹの
走査が制御できればよい。また、上述した位置合わせの
処理は、ハードウェアとソフトウェアのどちらでも実現
可能である。

【００９８】

【発明の効果】本発明のようにすれば、光学顕微鏡ある
いは走査型レーザ顕微鏡等において、顕微鏡鏡体に熱変
形が生じた場合であっても、観察者が煩雑な操作を行な
うことなしに、常に対象画像を観察視野の基準位置に位
置するようにして表示させることが可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の第１の実施の形態に係る光学顕微鏡を
用いた顕微鏡画像観察装置の構成を示すブロック図。

【図２】本発明の第１の実施の形態に係る試料である観
察細胞ＯＣの観察視野ＯＦにおける位置関係を例示する
図。

【図３】本発明の第１の実施の形態に係る画像データに
おける観察細胞ＯＣの重心ＣＯＣと観察視野ＯＦの中心
ＣＯＦを示す図。

【図４】本発明の第１の実施の形態に係る画像所得時間
間隔と位置ずれの補正時間間隔の関係を例示した図。

【図５】本発明の第２の実施の形態に係るレーザ顕微鏡
を用いた顕微鏡画像観察装置の構成を示すブロック図。

【図６】本発明の第３の実施の形態に係るレーザ顕微鏡
を用いた顕微鏡画像観察装置の構成を示すブロック図。

【図７】本発明の第４の実施の形態に係るレーザ顕微鏡
を用いた顕微鏡画像観察装置の構成を示すブロック図。

【図８】本発明の第４の実施の形態に係る試料である観
察細胞ＯＣの画像を示す図。

【図９】本発明の第４の実施の形態に係る光軸方向の位
置に対するコントラスト値の変化を示す図。

【図１０】従来例に係る一般的な走査型レーザ顕微鏡の
基本構成を示すブロック図。

【図１１】従来例に係る２次元走査の原理を説明するた
めの図。

【図１２】従来例に係る観察対象となる試料が視野から
外れた場合を例示する図。

【符号の説明】

２１…光学顕微鏡本体 ２１１…スキャニングステージ ２１３…試料 ２２…テレビカメラ ２３１，２３２，２３３…信号処理部 ２３ａ…Ａ／Ｄ変換器 ２３ｂ…記憶部 ２３ｃ…Ｄ／Ａ変換器 ２３ｄ…重心検出部 ２３ｅ１，２３ｅ２，２３ｅ３…ＣＰＵ ２３ｆ…距離換算部 ２３ｇ…ＸＹ駆動部 ２３ｈ…利得可変部 ２３ｉ…オフセット調整部 ２３ｊ…Ｄ／Ａ変換器 ２３ｋ…Ｄ／Ａ変換器 ２３ｌ…２次元走査駆動制御部 ２３ｍ…Ａ／Ｄ変換器 ２３ｎ…記憶部 ２３ｏ…記憶制御部 ２３ｐ…記憶制御部 ２３ｑ…コントラスト算出部 ２３ｒ…Ｚ駆動部 ２４…表示部 ２５…画像記録部 ３１…レーザ顕微鏡本体 ３２…レーザ光源 ３３…２次元走査機構部 ３４…ピンホール板 ３５…光検出部 ４１…光路分割部 ４２…テレビカメラ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】顕微鏡で得た画像を観察するための顕微鏡
   画像観察装置であり、 前記画像中の観察対象に係る平面方向の第１の位置情報
   及び観察光軸方向の第２の位置情報の少なくとも一方を
   求め、かつ前記画像に係る平面方向の基準位置に対する
   前記第１の位置情報のずれ量とずれ方向、及び前記画像
   に係る観察光軸方向の基準値に対する前記第２の位置情
   報のずれ量とずれ方向の少なくとも一方を算出する算出
   手段と、 前記顕微鏡の対物レンズと前記観察対象を載置したステ
   ージとの相対位置を変化させる駆動手段と、 前記算出手段で得たずれ量とずれ方向の少なくとも一方
   に基いて前記駆動手段の駆動を制御する制御手段と、 を具備したことを特徴とする顕微鏡画像観察装置。
2. 【請求項２】観察対象に対してスポット光を走査して得
   られる光信号から画像を構築して観察するための顕微鏡
   画像観察装置であり、 前記光信号を検出する検出機構とは別に設けられ、前記
   画像を撮像する撮像手段と、 前記撮像手段で得た画像中の観察対象に係る平面方向の
   第１の位置情報及び観察光軸方向の第２の位置情報の少
   なくとも一方を求め、かつ前記画像に係る平面方向の基
   準位置に対する前記第１の位置情報のずれ量とずれ方
   向、及び前記画像に係る観察光軸方向の基準値に対する
   前記第２の位置情報のずれ量とずれ方向の少なくとも一
   方を算出する算出手段と、 前記顕微鏡の対物レンズと前記観察対象を載置したステ
   ージとの相対位置を変化させる駆動手段と、 前記算出手段で得たずれ量とずれ方向の少なくとも一方
   に基いて前記駆動手段の駆動を制御する制御手段と、 を具備したことを特徴とする顕微鏡画像観察装置。
3. 【請求項３】前記算出手段は、算出したずれ量及びずれ
   方向の少なくとも一方を、顕微鏡鏡体の熱変形に係る情
   報を基に補正することを特徴とする請求項１または２に
   記載の顕微鏡画像観察装置。
4. 【請求項４】前記第１の位置情報は前記観察対象の重心
   位置であり、前記基準位置は前記画像の中心位置である
   ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の顕
   微鏡画像観察装置。
5. 【請求項５】前記第２の位置情報と前記基準値は、各々
   前記画像のコントラスト値であることを特徴とする請求
   項１乃至３のいずれかに記載の顕微鏡画像観察装置。
6. 【請求項６】前記第２の位置情報と前記基準値は、各々
   前記対物レンズと前記ステージとの相対位置であること
   を特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の顕微鏡
   画像観察装置。