JPH11225755A - 生分解性ポリマー分解酵素及びその製造方法 - Google Patents
生分解性ポリマー分解酵素及びその製造方法Info
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- JPH11225755A JPH11225755A JP3743598A JP3743598A JPH11225755A JP H11225755 A JPH11225755 A JP H11225755A JP 3743598 A JP3743598 A JP 3743598A JP 3743598 A JP3743598 A JP 3743598A JP H11225755 A JPH11225755 A JP H11225755A
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- Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
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- Y02W30/50—Reuse, recycling or recovery technologies
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- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Manufacture Of Porous Articles, And Recovery And Treatment Of Waste Products (AREA)
- Separation, Recovery Or Treatment Of Waste Materials Containing Plastics (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 生分解性ポリマーであるポリブチレンサクシ
ネート（ＰＢＳ）の分解に適する微生物、酵素、及びＰ
ＢＳの分解方法を提供する。 【解決手段】 ポリブチレンサクシネートの加水分解を
触媒する酵素活性を有するエステラーゼを生産するアシ
ドボラックス属微生物の培養物またはその処理物、ある
いはこの微生物菌体または培養物から採取したエステラ
ーゼの粗精製画分もしくは精製酵素をポリブチレンサク
シネートに、直接またはポリブチレンサクシネートを含
有する水溶液中で、接触させることにより、ポリブチレ
ンサクシネートを加水分解する。
ネート（ＰＢＳ）の分解に適する微生物、酵素、及びＰ
ＢＳの分解方法を提供する。 【解決手段】 ポリブチレンサクシネートの加水分解を
触媒する酵素活性を有するエステラーゼを生産するアシ
ドボラックス属微生物の培養物またはその処理物、ある
いはこの微生物菌体または培養物から採取したエステラ
ーゼの粗精製画分もしくは精製酵素をポリブチレンサク
シネートに、直接またはポリブチレンサクシネートを含
有する水溶液中で、接触させることにより、ポリブチレ
ンサクシネートを加水分解する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生分解性ポリマー
であるポリブチレンサクシネート（以下、ＰＢＳと略記
する）の加水分解を触媒する微生物由来の酵素であるエ
ステラーゼ、該エステラーゼを生産する微生物、該微生
物を培養することによるエステラーゼの製造法、及びそ
のようにして得られるエステラーゼを用いるＰＢＳの効
率的な分解方法に関する。
であるポリブチレンサクシネート（以下、ＰＢＳと略記
する）の加水分解を触媒する微生物由来の酵素であるエ
ステラーゼ、該エステラーゼを生産する微生物、該微生
物を培養することによるエステラーゼの製造法、及びそ
のようにして得られるエステラーゼを用いるＰＢＳの効
率的な分解方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、生分解性プラスチック製品は、投
棄後、土壌中や海水中に存在する微生物により分解され
得る素材として注目され、様々な生分解性ポリマーの開
発が試みられてきた。ＰＢＳは、大量に利用、廃棄され
るプラスチックに起因する諸問題を踏まえて開発された
生分解性プラスチックである。ＰＢＳの構成成分は１，
４−ブタンジオールとコハク酸とから成る脂肪族ポリエ
ステルであり、完全な生分解性であり、耐熱性に優れ
（Ｔｍ＞１００℃）、物性はポリエチレンに類似してお
り、その優れた物性から、将来性の高い高分子ポリマー
として注目されている。
棄後、土壌中や海水中に存在する微生物により分解され
得る素材として注目され、様々な生分解性ポリマーの開
発が試みられてきた。ＰＢＳは、大量に利用、廃棄され
るプラスチックに起因する諸問題を踏まえて開発された
生分解性プラスチックである。ＰＢＳの構成成分は１，
４−ブタンジオールとコハク酸とから成る脂肪族ポリエ
ステルであり、完全な生分解性であり、耐熱性に優れ
（Ｔｍ＞１００℃）、物性はポリエチレンに類似してお
り、その優れた物性から、将来性の高い高分子ポリマー
として注目されている。
【０００３】ＰＢＳの生分解性については、土壌中への
埋設試験等で証明されているものの、これを分解する微
生物及び分解酵素に関しては、本発明者が知る限り全く
報告されていない。使用後のＰＢＳ製品を効率的に分解
し、リサイクルあるいは他の有用物質へ転換する等の有
効利用技術の開発が望まれていた。
埋設試験等で証明されているものの、これを分解する微
生物及び分解酵素に関しては、本発明者が知る限り全く
報告されていない。使用後のＰＢＳ製品を効率的に分解
し、リサイクルあるいは他の有用物質へ転換する等の有
効利用技術の開発が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＰＢＳの分
解に適する微生物、および分解酵素を新たに見出し、ま
た微生物を用いた分解酵素の製造法、及びＰＢＳの分解
方法を提供することを課題とする。
解に適する微生物、および分解酵素を新たに見出し、ま
た微生物を用いた分解酵素の製造法、及びＰＢＳの分解
方法を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＰＢＳを
分解し得る微生物の分離を目的として鋭意研究を重ねた
結果、ＰＢＳを唯一の炭素源として分解、利用して生育
し、ＰＢＳを加水分解する触媒活性を有する酵素を産生
する新規微生物を自然界から分離することに成功し、本
発明を完成するに至った。
分解し得る微生物の分離を目的として鋭意研究を重ねた
結果、ＰＢＳを唯一の炭素源として分解、利用して生育
し、ＰＢＳを加水分解する触媒活性を有する酵素を産生
する新規微生物を自然界から分離することに成功し、本
発明を完成するに至った。
【０００６】かくして本発明によれば、（ａ）アシドボ
ラックス属微生物に由来する、ＰＢＳの加水分解を触媒
する酵素活性を有する新規エステラーゼ、（ｂ）該エス
テラーゼを生産する微生物、（ｃ）上記（ｂ）の微生物
を培地で培養し、その培養物から上記（ａ）のエステラ
ーゼを採取することを特徴とするエステラーゼの製造
法、（ｄ）上記（ｂ）の微生物菌体、またはこの微生物
菌体の培養物から採取したエステラーゼの粗精製画分も
しくは精製画分をＰＢＳに作用させ、ＰＢＳを効率的に
分解する方法が提供される。
ラックス属微生物に由来する、ＰＢＳの加水分解を触媒
する酵素活性を有する新規エステラーゼ、（ｂ）該エス
テラーゼを生産する微生物、（ｃ）上記（ｂ）の微生物
を培地で培養し、その培養物から上記（ａ）のエステラ
ーゼを採取することを特徴とするエステラーゼの製造
法、（ｄ）上記（ｂ）の微生物菌体、またはこの微生物
菌体の培養物から採取したエステラーゼの粗精製画分も
しくは精製画分をＰＢＳに作用させ、ＰＢＳを効率的に
分解する方法が提供される。
【０００７】本願において、ポリブチレンサクシネート
（ＰＢＳ）を加水分解する触媒活性を、単に「エステラ
ーゼ活性」ということがある。また、ポリブチレンサク
シネート（ＰＢＳ）を加水分解する触媒活性を有する酵
素を、単に「エステラーゼ」ということがある。
（ＰＢＳ）を加水分解する触媒活性を、単に「エステラ
ーゼ活性」ということがある。また、ポリブチレンサク
シネート（ＰＢＳ）を加水分解する触媒活性を有する酵
素を、単に「エステラーゼ」ということがある。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下、本発明をその実施の形態と
ともに詳細に説明する。
ともに詳細に説明する。
【０００９】＜１＞本発明のエステラーゼ及び該エステ
ラーゼを生産する微生物 本発明のエステラーゼの製造及び該エステラーゼを用い
たＰＢＳの分解に用いられる微生物は、アシドボラック
ス（Acidovorax）属に属し、エステラーゼを構成的に発
現するか、または誘導物質あるいは温度等により誘導的
に発現するかなどの如何にかかわらず、培地で培養して
得られる菌体もしくは培養液中に該酵素活性を有してい
れば特に制限されない。このような微生物は、例えば以
下のような方法によって自然界より分離、取得、あるい
は既存の保存菌株より選定、取得することができる。
ラーゼを生産する微生物 本発明のエステラーゼの製造及び該エステラーゼを用い
たＰＢＳの分解に用いられる微生物は、アシドボラック
ス（Acidovorax）属に属し、エステラーゼを構成的に発
現するか、または誘導物質あるいは温度等により誘導的
に発現するかなどの如何にかかわらず、培地で培養して
得られる菌体もしくは培養液中に該酵素活性を有してい
れば特に制限されない。このような微生物は、例えば以
下のような方法によって自然界より分離、取得、あるい
は既存の保存菌株より選定、取得することができる。
【００１０】（１）ＰＢＳ分解微生物の分離 土壌、コンポスト、活性汚泥等から採取した試料を、培
地Ａ［組成：ＰＢＳ（分子量約４万、微粉末）２ｇ、Ｋ
Ｈ2ＰＯ4 ０．２ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 １．６ｇ、（ＮＨ
4)2ＳＯ4 １ｇ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．２ｇ、Ｎａ
Ｃｌ ０．１ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２０ｍｇ、Ｆｅ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍｇ、ＭｎＳＯ4０．５ｍｇ、Ｎ
ａ2ＷＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．５ｍｇ、Ｎａ2Ｍｏ4・２Ｈ2Ｏ
０．５ｍｇ、Ｐｌｙｓｕｒｆ（界面活性剤、第一化学
薬品社製）４０ｐｐｍ、蒸留水１Ｌ（ｐＨ７．０）］に
入れ、２０〜４０℃にて２〜４日間、好気的に振とう培
養し、その一部を新たな培地Ａに植え継ぐ操作を４〜５
回繰り返す集積培養を行う。培養後の培養物を寒天２％
を含む上記培地Ａの組成からなる乳化ＰＢＳ寒天平板培
地に塗抹し、２０〜４０℃にて２〜４日培養する。この
平板培地上にハローを形成するコロニーを単離し、以下
の固形ＰＢＳ分解試験に供し、ＰＢＳ分解酵素活性を有
する微生物を選定する。
地Ａ［組成：ＰＢＳ（分子量約４万、微粉末）２ｇ、Ｋ
Ｈ2ＰＯ4 ０．２ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 １．６ｇ、（ＮＨ
4)2ＳＯ4 １ｇ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．２ｇ、Ｎａ
Ｃｌ ０．１ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２０ｍｇ、Ｆｅ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍｇ、ＭｎＳＯ4０．５ｍｇ、Ｎ
ａ2ＷＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．５ｍｇ、Ｎａ2Ｍｏ4・２Ｈ2Ｏ
０．５ｍｇ、Ｐｌｙｓｕｒｆ（界面活性剤、第一化学
薬品社製）４０ｐｐｍ、蒸留水１Ｌ（ｐＨ７．０）］に
入れ、２０〜４０℃にて２〜４日間、好気的に振とう培
養し、その一部を新たな培地Ａに植え継ぐ操作を４〜５
回繰り返す集積培養を行う。培養後の培養物を寒天２％
を含む上記培地Ａの組成からなる乳化ＰＢＳ寒天平板培
地に塗抹し、２０〜４０℃にて２〜４日培養する。この
平板培地上にハローを形成するコロニーを単離し、以下
の固形ＰＢＳ分解試験に供し、ＰＢＳ分解酵素活性を有
する微生物を選定する。
【００１１】（２）固形ＰＢＳ分解試験 上記（１）で単離された微生物を、直径２．５ｍｍ、長
さ４ｍｍの円筒状のＰＢＳペレット ０．２ｇ／Ｌを唯
一炭素源とした前記培地Ａに接種し、２０〜７０℃にて
１〜２日間振とう培養後、ＰＢＳの重量が減少している
微生物を、ＰＢＳ分解酵素活性を有する微生物として選
定することができる。また、培養物をパラニトロフェニ
ルアセテートに作用させ、遊離するパラニトロフェノー
ルを４０５ｎｍの吸光度として検出することにより、エ
ステル加水分解活性を指標として選定することもでき
る。
さ４ｍｍの円筒状のＰＢＳペレット ０．２ｇ／Ｌを唯
一炭素源とした前記培地Ａに接種し、２０〜７０℃にて
１〜２日間振とう培養後、ＰＢＳの重量が減少している
微生物を、ＰＢＳ分解酵素活性を有する微生物として選
定することができる。また、培養物をパラニトロフェニ
ルアセテートに作用させ、遊離するパラニトロフェノー
ルを４０５ｎｍの吸光度として検出することにより、エ
ステル加水分解活性を指標として選定することもでき
る。
【００１２】このようにして取得できる微生物として、
アシドボラックス属に属する微生物、例えば、アシドボ
ラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株、ア
シドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−４
株、アシドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）Ｂ
Ｓ−５株等を挙げることができる。これらの微生物は、
以下に詳述するような菌学的諸性質を有しており、互い
に近縁な、いずれも新規微生物と推定される。
アシドボラックス属に属する微生物、例えば、アシドボ
ラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株、ア
シドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−４
株、アシドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）Ｂ
Ｓ−５株等を挙げることができる。これらの微生物は、
以下に詳述するような菌学的諸性質を有しており、互い
に近縁な、いずれも新規微生物と推定される。
【００１３】ア）ＢＳ−３株 １．形態学的性質（＋：陽性、−：陰性） 形 態 ： 短桿菌 胞子形成 ： − グラム染色性： − 運動性 ： −
【００１４】２．生理的性質 カタラーゼ ：（＋） オキシダーゼ ： − Ｏ−Ｆテスト ： − 硝酸塩の還元 ：（＋） インドールの生成 ： − グルコースからの酸生成：− アルギニン・ジヒドロラーゼ：− ウレアーゼ ：− aesculin hydrolysis：＋ ゼラチンの液化 ：（＋） β−ガラクトシダーゼ：＋ グルコースの資化性：＋ アラビノースの資化性：＋ マンノースの資化性：＋ マンニトールの資化性：＋ Ｎ−アセチルグルコサミンの資化性：− マルトースの資化性：＋ グルコン酸の資化性：＋ カプロン酸の資化性：− アジピン酸の資化性：＋ リンゴ酸の資化性 ：− クエン酸の資化性 ：− フェニルアセテートの資化性：− チトクロム・オキシダーゼ：−
【００１５】以上の菌学的諸性質を、バージェイズ・マ
ニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.
2,［P.H.A.Sneath, N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol
(1986) Williams & Wilkins］）に従って調べたとこ
ろ、アシドボラックス・デラフィルディ（Acidovorax d
elafieldii）に近縁の新規の菌株であることが判明し
た。本発明者らは、本菌をアシドボラックス・エスピー
（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株と命名した。尚、本菌は
工業技術院生命工学工業技術研究所に受託番号：ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６６３３として寄託されている。
ニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.
2,［P.H.A.Sneath, N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol
(1986) Williams & Wilkins］）に従って調べたとこ
ろ、アシドボラックス・デラフィルディ（Acidovorax d
elafieldii）に近縁の新規の菌株であることが判明し
た。本発明者らは、本菌をアシドボラックス・エスピー
（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株と命名した。尚、本菌は
工業技術院生命工学工業技術研究所に受託番号：ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６６３３として寄託されている。
【００１６】イ）ＢＳ−４株 １．形態学的性質 形 態 ： 短桿菌 胞子形成 ： − グラム染色性： − 運動性 ：（＋）
【００１７】２．生理的性質 カタラーゼ ： ＋ オキシダーゼ ： ＋ Ｏ−Ｆテスト ： − 硝酸塩の還元 ： ＋ インドールの生成 ： − グルコースからの酸生成：− アルギニン・ジヒドロラーゼ：− ウレアーゼ ： − aesculin hydrolysis： ＋ ゼラチンの液化 ： − β−ガラクトシダーゼ：＋ グルコースの資化性： ＋ アラビノースの資化性：＋ マンノースの資化性： ＋ マンニトールの資化性：＋ Ｎ−アセチルグルコサミンの資化性：− マルトースの資化性： ＋ グルコン酸の資化性： ＋ カプロン酸の資化性： − アジピン酸の資化性： ＋ リンゴ酸の資化性 ： − クエン酸の資化性 ： − フェニルアセテートの資化性：− チトクロム・オキシダーゼ：＋
【００１８】以上の菌学的諸性質を、Bergey's Manual
of Systematic Bacteriology Vol.2,［P.H.A.Sneath,
N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol(1986)Williams&Wil
kins］に従って調べたところ、アシドボラックス・デラ
フィルディ（Acidovorax delafieldii）に近縁な新規の
菌株であることが判明した。本発明者らは、本菌をアシ
ドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−４株
と命名した。尚、本菌は工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３４として寄託
されている。
of Systematic Bacteriology Vol.2,［P.H.A.Sneath,
N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol(1986)Williams&Wil
kins］に従って調べたところ、アシドボラックス・デラ
フィルディ（Acidovorax delafieldii）に近縁な新規の
菌株であることが判明した。本発明者らは、本菌をアシ
ドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−４株
と命名した。尚、本菌は工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３４として寄託
されている。
【００１９】ウ）ＢＳ−５株 １．形態学的性質 形 態 ： 短桿菌 胞子形成 ： − グラム染色性： − 運動性 ： ＋
【００２０】２．生理的性質 カタラーゼ ： ＋ オキシダーゼ ： − Ｏ−Ｆテスト ： − 硝酸塩の還元 ： ＋ インドールの生成 ： − グルコースからの酸生成：− アルギニン・ジヒドロラーゼ：− ウレアーゼ ： − aesculin hydrolysis： ＋ ゼラチンの液化 ： ＋ β−ガラクトシダーゼ：＋ グルコースの資化性： ＋ アラビノースの資化性：＋ マンノースの資化性： − マンニトールの資化性：＋ Ｎ−アセチルグルコサミンの資化性：− マルトースの資化性： ＋ グルコン酸の資化性： ＋ カプロン酸の資化性： − アジピン酸の資化性： ＋ リンゴ酸の資化性 ： − クエン酸の資化性 ： − フェニルアセテートの資化性：− チトクロム・オキシダーゼ：−
【００２１】以上の菌学的諸性質を、Bergey's Manual
of Systematic Bacteriology Vol.2,［P.H.A.Sneath,
N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol(1986)Williams&Wil
kins］に従って調べたところ、アシドボラックス・デラ
フィルディ（Acidovorax delafieldii）に近縁な新規の
菌株であることが判明した。本発明者らは、本菌をアシ
ドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−５株
と命名した。尚、本菌は工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３５として寄託
されている。
of Systematic Bacteriology Vol.2,［P.H.A.Sneath,
N.S.Mair, M.E.Sharpe and J.G.Hol(1986)Williams&Wil
kins］に従って調べたところ、アシドボラックス・デラ
フィルディ（Acidovorax delafieldii）に近縁な新規の
菌株であることが判明した。本発明者らは、本菌をアシ
ドボラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−５株
と命名した。尚、本菌は工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３５として寄託
されている。
【００２２】尚、アシドボラックス・デラフィルディの
公知菌株は、運動性：−、オキシダーゼ：＋、マルトー
スの資化性：−であるのに対し、ＢＳ−３株は運動性：
−、ＢＳ−３株及びＢＳ−５株はオキシダーゼ：−、Ｂ
Ｓ−３株、ＢＳ−４株及びＢＳ−５株は共にマルトース
資化性：＋であった。
公知菌株は、運動性：−、オキシダーゼ：＋、マルトー
スの資化性：−であるのに対し、ＢＳ−３株は運動性：
−、ＢＳ−３株及びＢＳ−５株はオキシダーゼ：−、Ｂ
Ｓ−３株、ＢＳ−４株及びＢＳ−５株は共にマルトース
資化性：＋であった。
【００２３】＜２＞ＰＢＳ分解活性を有するエステラー
ゼの製造及びＰＢＳの分解 前記＜１＞に記載した方法で分離されるエステラーゼ活
性を有する微生物を培地で培養し、その培養物から前記
エステラーゼを採取するまたは培養物から、エステラー
ゼを採取することにより、エステラーゼを製造すること
ができる。ここで培養物とは、前記微生物菌体又は／及
び培養後の培地（培地に液体培地を用いた場合にはその
培養上清）をいう。前記微生物としては、アシドボラッ
クスに属し、エステラーゼを生産する微生物であれば特
に制限されないが、具体的にはアシドボラックス・エス
ピー ＢＳ−３株、ＢＳ−４株及びＢＳ−５株が好まし
い菌株として挙げることができる。
ゼの製造及びＰＢＳの分解 前記＜１＞に記載した方法で分離されるエステラーゼ活
性を有する微生物を培地で培養し、その培養物から前記
エステラーゼを採取するまたは培養物から、エステラー
ゼを採取することにより、エステラーゼを製造すること
ができる。ここで培養物とは、前記微生物菌体又は／及
び培養後の培地（培地に液体培地を用いた場合にはその
培養上清）をいう。前記微生物としては、アシドボラッ
クスに属し、エステラーゼを生産する微生物であれば特
に制限されないが、具体的にはアシドボラックス・エス
ピー ＢＳ−３株、ＢＳ−４株及びＢＳ−５株が好まし
い菌株として挙げることができる。
【００２４】エステラーゼ活性を有する微生物の培養
は、炭素源、窒素源、無機塩、各種ビタミン等を含む通
常の栄養培地で行うことができ、炭素源としては、例え
ばＰＢＳ等のポリエステル類、ブドウ糖、ショ糖、果
糖、麦芽糖等の糖類、エタノール、メタノール等のアル
コール類、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、マレイン
酸、フマル酸等の有機酸類、廃糖蜜等、好ましくはＰＢ
Ｓを単独、もしくはその他の炭素源と混合して用いられ
る。窒素源としては、例えばアンモニア、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等が
それぞれ単独もしくは混合して用いられる。また、無機
塩としては、例えばリン酸一水素カリウム、リン酸二水
素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他
にペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープ
リカー、カザミノ酸、ビオチン等の各種ビタミン等の栄
養素を培地に添加することができる。更に、鉄、マンガ
ン、モリブデン、タングステン、カルシウム等の金属塩
を培地に添加してもよい。尚、本願記載の３つの菌株で
は、エステラーゼの産生は乳化したＰＢＳで誘導される
ことが確認されており、本発明のエステラーゼの製造
法、及び本発明のＰＢＳの分解方法に用いるアシドボラ
ックス属微生物の培養物の調製においては、使用する培
地にＰＢＳを、好ましくは単独の炭素源として、添加し
ておくことが好ましい。
は、炭素源、窒素源、無機塩、各種ビタミン等を含む通
常の栄養培地で行うことができ、炭素源としては、例え
ばＰＢＳ等のポリエステル類、ブドウ糖、ショ糖、果
糖、麦芽糖等の糖類、エタノール、メタノール等のアル
コール類、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、マレイン
酸、フマル酸等の有機酸類、廃糖蜜等、好ましくはＰＢ
Ｓを単独、もしくはその他の炭素源と混合して用いられ
る。窒素源としては、例えばアンモニア、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等が
それぞれ単独もしくは混合して用いられる。また、無機
塩としては、例えばリン酸一水素カリウム、リン酸二水
素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他
にペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープ
リカー、カザミノ酸、ビオチン等の各種ビタミン等の栄
養素を培地に添加することができる。更に、鉄、マンガ
ン、モリブデン、タングステン、カルシウム等の金属塩
を培地に添加してもよい。尚、本願記載の３つの菌株で
は、エステラーゼの産生は乳化したＰＢＳで誘導される
ことが確認されており、本発明のエステラーゼの製造
法、及び本発明のＰＢＳの分解方法に用いるアシドボラ
ックス属微生物の培養物の調製においては、使用する培
地にＰＢＳを、好ましくは単独の炭素源として、添加し
ておくことが好ましい。
【００２５】培養条件は、通常、通気撹拌、振とう等の
好気条件下に、エステラーゼ活性を有する微生物の生育
し得る温度であれば特に制限はなく、また、培養途中の
ｐＨについても該微生物が生育し得るｐＨであれば特に
制限はない。培養中のｐＨ調整は、酸またはアルカリを
添加して行うことができる。
好気条件下に、エステラーゼ活性を有する微生物の生育
し得る温度であれば特に制限はなく、また、培養途中の
ｐＨについても該微生物が生育し得るｐＨであれば特に
制限はない。培養中のｐＨ調整は、酸またはアルカリを
添加して行うことができる。
【００２６】かくして得られる培養物から遠心分離等に
より、エステラーゼ活性を含有する培養液上清、及び微
生物菌体を取得することができる。
より、エステラーゼ活性を含有する培養液上清、及び微
生物菌体を取得することができる。
【００２７】培養液上清、あるいは微生物菌体からエス
テラーゼを抽出、精製する方法は、公知の酵素の精製法
のいずれの方法も適用できる。例えば、培養液上清から
の酵素の分離法としては、硫安沈殿法、限外濾過法等を
用い分離・濃縮でき、粗酵素画分として使用することが
できる。菌体の破壊法としては、超音波破砕、フレンチ
プレス、ホモジナイザー等を用いた機械的破壊法、リゾ
チーム等を用いた酵素的破壊法を用いることができる。
このようにして得られた菌体破壊物の可溶性画分または
その分画物についても、エステラーゼの粗酵素画分とし
て使用することができる。また、これらの粗酵素画分を
更に精製して得られる精製酵素を用いても良い。粗酵素
画分からのエステラーゼの精製は、通常、（イ）沈殿法
による分離、例えば硫安沈殿法、（ロ）クロマトグラフ
ィーによる分離、例えばイオン交換クロマトグラフィ
ー、アフィニティー吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過
クロマトグラフィー等、（ハ）電気泳動法による分離
法、及びこれらの方法の任意の組み合わせによって実施
することができる。
テラーゼを抽出、精製する方法は、公知の酵素の精製法
のいずれの方法も適用できる。例えば、培養液上清から
の酵素の分離法としては、硫安沈殿法、限外濾過法等を
用い分離・濃縮でき、粗酵素画分として使用することが
できる。菌体の破壊法としては、超音波破砕、フレンチ
プレス、ホモジナイザー等を用いた機械的破壊法、リゾ
チーム等を用いた酵素的破壊法を用いることができる。
このようにして得られた菌体破壊物の可溶性画分または
その分画物についても、エステラーゼの粗酵素画分とし
て使用することができる。また、これらの粗酵素画分を
更に精製して得られる精製酵素を用いても良い。粗酵素
画分からのエステラーゼの精製は、通常、（イ）沈殿法
による分離、例えば硫安沈殿法、（ロ）クロマトグラフ
ィーによる分離、例えばイオン交換クロマトグラフィ
ー、アフィニティー吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過
クロマトグラフィー等、（ハ）電気泳動法による分離
法、及びこれらの方法の任意の組み合わせによって実施
することができる。
【００２８】上記の精製過程におけるエステラーゼを含
む画分の検出は、エステラーゼ活性を（Kayらの方法に
従い（International Biodeterioration and Biodegrad
ation, Vol.31, p.209-225 (1993)）、パラニトロフェ
ニルアセテートを基質とした加水分解反応により生成す
るパラニトロフェノールを、４０５ｎｍの吸光度増加と
して測定することにより行うことができる。また、ＰＢ
Ｓ微粉末の乳化液の濁度（６６０ｎｍ）の低下、あるい
は固形状ＰＢＳの重量減少によっても、エステラーゼ活
性を測定することができる。
む画分の検出は、エステラーゼ活性を（Kayらの方法に
従い（International Biodeterioration and Biodegrad
ation, Vol.31, p.209-225 (1993)）、パラニトロフェ
ニルアセテートを基質とした加水分解反応により生成す
るパラニトロフェノールを、４０５ｎｍの吸光度増加と
して測定することにより行うことができる。また、ＰＢ
Ｓ微粉末の乳化液の濁度（６６０ｎｍ）の低下、あるい
は固形状ＰＢＳの重量減少によっても、エステラーゼ活
性を測定することができる。
【００２９】上記のようにして得られるエステラーゼ活
性を有する微生物の培養物またはその処理物、あるいは
この微生物菌体または培養物から採取したエステラーゼ
の粗精製画分もしくは精製酵素をＰＢＳに、直接または
ＰＢＳを含有する水溶液中で、接触させることにより、
ＰＢＳを加水分解することができる。微生物菌体として
は、培養液から分離した菌体はもちろんのこと、菌体の
破砕物もしくは抽出物等も用いることができる。また、
培地として液体培地を用いた場合には、培養液を用いる
こともできる。さらに、微生物菌体、あるいは培養液上
清より得られるエステラーゼの粗酵素標品を用いてもよ
く、更に精製した酵素標品を使用してもよい。更に、上
記微生物菌体、その破砕物もしくは抽出物、または精製
酵素を担体に固定化したものも使用することができる。
性を有する微生物の培養物またはその処理物、あるいは
この微生物菌体または培養物から採取したエステラーゼ
の粗精製画分もしくは精製酵素をＰＢＳに、直接または
ＰＢＳを含有する水溶液中で、接触させることにより、
ＰＢＳを加水分解することができる。微生物菌体として
は、培養液から分離した菌体はもちろんのこと、菌体の
破砕物もしくは抽出物等も用いることができる。また、
培地として液体培地を用いた場合には、培養液を用いる
こともできる。さらに、微生物菌体、あるいは培養液上
清より得られるエステラーゼの粗酵素標品を用いてもよ
く、更に精製した酵素標品を使用してもよい。更に、上
記微生物菌体、その破砕物もしくは抽出物、または精製
酵素を担体に固定化したものも使用することができる。
【００３０】前記のようにして得られるエステラーゼを
生産する微生物菌体を担体に固定化する場合には、培養
物から回収されたまま、あるいは適当な緩衝液、例えば
０．０２〜０．２Ｍ程度のリン酸緩衝液（ｐＨ６〜１
０）等で洗浄された菌体を使用することができる。ま
た、エステラーゼ活性を有する培養液上清、あるいは培
養物から回収された菌体を、超音波、圧搾等の手段で粉
砕して得られる粉砕物、該粉砕物を水等で抽出して得ら
れるエステラーゼを含有する抽出物、培養液上清または
菌体からの抽出物を更に硫安塩析、カラムクロマトグラ
フィー等の処理を行って得られるエステラーゼの部分精
製成分等を担体に固定化したものも、本発明のＰＢＳの
加水分解に使用することができる。
生産する微生物菌体を担体に固定化する場合には、培養
物から回収されたまま、あるいは適当な緩衝液、例えば
０．０２〜０．２Ｍ程度のリン酸緩衝液（ｐＨ６〜１
０）等で洗浄された菌体を使用することができる。ま
た、エステラーゼ活性を有する培養液上清、あるいは培
養物から回収された菌体を、超音波、圧搾等の手段で粉
砕して得られる粉砕物、該粉砕物を水等で抽出して得ら
れるエステラーゼを含有する抽出物、培養液上清または
菌体からの抽出物を更に硫安塩析、カラムクロマトグラ
フィー等の処理を行って得られるエステラーゼの部分精
製成分等を担体に固定化したものも、本発明のＰＢＳの
加水分解に使用することができる。
【００３１】これら菌体、菌体破砕物、抽出物または精
製物の固定化は、それ自体既知の通常用いられている方
法に従い、アクリルアミドモノマー、アルギン酸、また
はカラギーナン等の適当な担体に固定化させる方法によ
り行うことができる。
製物の固定化は、それ自体既知の通常用いられている方
法に従い、アクリルアミドモノマー、アルギン酸、また
はカラギーナン等の適当な担体に固定化させる方法によ
り行うことができる。
【００３２】ＰＢＳの加水分解反応は、上記菌体もしく
はエステラーゼ等又はこれらを担体に固定化したもの
（以下、「菌体等」という）とＰＢＳを直接接触させる
ことにより、あるいは水溶液中で接触させることにより
行われる。水溶液中で反応を行う場合は、菌体等とＰＢ
Ｓを水溶液中で混合すればよい。その際、菌体等とＰＢ
Ｓを水溶液に加える順序は問わない。
はエステラーゼ等又はこれらを担体に固定化したもの
（以下、「菌体等」という）とＰＢＳを直接接触させる
ことにより、あるいは水溶液中で接触させることにより
行われる。水溶液中で反応を行う場合は、菌体等とＰＢ
Ｓを水溶液中で混合すればよい。その際、菌体等とＰＢ
Ｓを水溶液に加える順序は問わない。
【００３３】反応に用いる水性溶液は、ＰＢＳを含有す
る水溶液または適当な緩衝液、例えば０．０２〜０．２
Ｍ程度のリン酸緩衝液（ｐＨ６〜１０）とすることがで
きる。ＰＢＳの形態は、固形状ペレット、フィルム、超
音波破砕処理による微粉末等、何れの形態でも用いるこ
とができ、通常はこれらのＰＢＳを水溶液中に分散さ
せ、菌体等を作用させることにより、効率的に加水分解
を進行させることができる。
る水溶液または適当な緩衝液、例えば０．０２〜０．２
Ｍ程度のリン酸緩衝液（ｐＨ６〜１０）とすることがで
きる。ＰＢＳの形態は、固形状ペレット、フィルム、超
音波破砕処理による微粉末等、何れの形態でも用いるこ
とができ、通常はこれらのＰＢＳを水溶液中に分散さ
せ、菌体等を作用させることにより、効率的に加水分解
を進行させることができる。
【００３４】上記の水性溶液における酵素反応温度およ
びｐＨは特に限定されないが、通常１０〜６０℃、好ま
しくは２０〜４０℃が適当であり、反応液中のｐＨは５
〜１０、好ましくは６〜８付近とすることができる。ま
た、ｐＨの調整は、酸またはアルカリを添加して行うこ
とができる。
びｐＨは特に限定されないが、通常１０〜６０℃、好ま
しくは２０〜４０℃が適当であり、反応液中のｐＨは５
〜１０、好ましくは６〜８付近とすることができる。ま
た、ｐＨの調整は、酸またはアルカリを添加して行うこ
とができる。
【００３５】かくして得られるＰＢＳの加水分解による
分解生成物は、ＰＢＳ合成のためのリサイクル原料、あ
るいはその他の有用物質を生産するための原料として利
用することもできる。
分解生成物は、ＰＢＳ合成のためのリサイクル原料、あ
るいはその他の有用物質を生産するための原料として利
用することもできる。
【００３６】
【実施例】以上に本発明を説明してきたが、下記の実施
例により更に具体的に説明する。しかしながら、実施例
は本発明の具体的な認識を得る一助とみなすべきのもの
であり、本発明の範囲を何等限定するものではない。
尚、本実施例に用いたＰＢＳは、市販品（商品名「ビオ
ノーレ」＃３０２０、昭和高分子社製）を使用した。
例により更に具体的に説明する。しかしながら、実施例
は本発明の具体的な認識を得る一助とみなすべきのもの
であり、本発明の範囲を何等限定するものではない。
尚、本実施例に用いたＰＢＳは、市販品（商品名「ビオ
ノーレ」＃３０２０、昭和高分子社製）を使用した。
【００３７】
【実施例１】エステラーゼ活性を有する微生物の分離 （１）ＰＢＳ分解微生物の分離 土壌、コンポスト、活性汚泥等から採取した試料を、培
地Ａ［組成：ＰＢＳ（分子量約４万、微粉末） ２ｇ、
ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 １．６ｇ、（ＮＨ
4)2ＳＯ4 １ｇ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．２ｇ、Ｎａ
Ｃｌ ０．１ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２０ｍｇ、Ｆｅ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍｇ、ＭｎＳＯ4０．５ｍｇ、Ｎ
ａ2ＷＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．５ｍｇ、Ｎａ2Ｍｏ4・２Ｈ2Ｏ
０．５ｍｇ、Ｐｌｙｓｕｒｆ ４０ｐｐｍ、蒸留水
１Ｌ（ｐＨ７．０）］１０ｍｌに投入し、３０℃にて４
日間、好気的に振とう培養した。この培養物１ｍｌを新
たな培地Ａ１０ｍｌに植え継ぎ、更に４日間培養した。
この集積培養の操作を５回行った後、寒天２％を含む上
記培地Ａの組成からなる乳化ＰＢＳ寒天平板培地に塗抹
し、３０℃にて２〜４日培養した。この平板培地上に生
育し、ハローを形成するコロニーを単離した。
地Ａ［組成：ＰＢＳ（分子量約４万、微粉末） ２ｇ、
ＫＨ2ＰＯ4 ０．２ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 １．６ｇ、（ＮＨ
4)2ＳＯ4 １ｇ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．２ｇ、Ｎａ
Ｃｌ ０．１ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２０ｍｇ、Ｆｅ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍｇ、ＭｎＳＯ4０．５ｍｇ、Ｎ
ａ2ＷＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．５ｍｇ、Ｎａ2Ｍｏ4・２Ｈ2Ｏ
０．５ｍｇ、Ｐｌｙｓｕｒｆ ４０ｐｐｍ、蒸留水
１Ｌ（ｐＨ７．０）］１０ｍｌに投入し、３０℃にて４
日間、好気的に振とう培養した。この培養物１ｍｌを新
たな培地Ａ１０ｍｌに植え継ぎ、更に４日間培養した。
この集積培養の操作を５回行った後、寒天２％を含む上
記培地Ａの組成からなる乳化ＰＢＳ寒天平板培地に塗抹
し、３０℃にて２〜４日培養した。この平板培地上に生
育し、ハローを形成するコロニーを単離した。
【００３８】（２）固形ＰＢＳ分解試験 上記（１）で単離された微生物のうちハロー形成能が高
い菌株を、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状のＰＢ
Ｓペレット ０．２ｇ／Ｌを唯一炭素源とした前記培地
Ａに接種後、３０℃にて２週間振とう培養を行い、ＰＢ
Ｓの重量が減少している微生物を、エステラーゼ活性を
有する微生物として選定した。
い菌株を、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状のＰＢ
Ｓペレット ０．２ｇ／Ｌを唯一炭素源とした前記培地
Ａに接種後、３０℃にて２週間振とう培養を行い、ＰＢ
Ｓの重量が減少している微生物を、エステラーゼ活性を
有する微生物として選定した。
【００３９】上記分離操作、及び固形ＰＢＳ分解試験に
より、エステラーゼ活性を有するそれぞれ異なる３株、
ＢＳ−３，ＢＳ−４，ＢＳ−５株を取得した。この分離
菌株について、前記の如く更に菌学的諸性質を調べた結
果、アシドボラックス・デラフィルディ（Acidovorax d
elafieldii）に類似しているが、いずれも異なる性質を
有しており、新規菌株であることが判明した。そこで、
取得した３菌株を、アシドボラックス・エスピー（Acid
ovorax sp.）ＢＳ−３株、アシドボラックス・エスピー
（Acidovorax sp.）ＢＳ−４株、アシドボラックス・エ
スピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−５株と各々命名した。
より、エステラーゼ活性を有するそれぞれ異なる３株、
ＢＳ−３，ＢＳ−４，ＢＳ−５株を取得した。この分離
菌株について、前記の如く更に菌学的諸性質を調べた結
果、アシドボラックス・デラフィルディ（Acidovorax d
elafieldii）に類似しているが、いずれも異なる性質を
有しており、新規菌株であることが判明した。そこで、
取得した３菌株を、アシドボラックス・エスピー（Acid
ovorax sp.）ＢＳ−３株、アシドボラックス・エスピー
（Acidovorax sp.）ＢＳ−４株、アシドボラックス・エ
スピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−５株と各々命名した。
【００４０】
【実施例２】アシドボラックス・エスピー（Acidovorax
sp.）ＢＳ−３株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 ＰＢＳとして、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状の
ＰＢＳペレットを用いた、前記培地Ａ１００ｍｌに、実
施例１で単離されたＢＳ−３株を植菌し、３０℃にて１
５日間振とう培養した。培養後の培養液１ｍｌを、０．
２重量％の微粉末を乳化させた１０ｍＭリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ７．０）に添加後、３０℃にて振とう条
件下反応させ、溶液の濁度の減少を６６０ｎｍにて測定
することによりＰＢＳの分解を検出し、エステラーゼの
存在を確認した。対照系として、培養液無添加系につい
ても同様に濁度を測定した。反応後の濁度の反応前の濁
度に対する相対値を表−１に示した。
sp.）ＢＳ−３株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 ＰＢＳとして、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状の
ＰＢＳペレットを用いた、前記培地Ａ１００ｍｌに、実
施例１で単離されたＢＳ−３株を植菌し、３０℃にて１
５日間振とう培養した。培養後の培養液１ｍｌを、０．
２重量％の微粉末を乳化させた１０ｍＭリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ７．０）に添加後、３０℃にて振とう条
件下反応させ、溶液の濁度の減少を６６０ｎｍにて測定
することによりＰＢＳの分解を検出し、エステラーゼの
存在を確認した。対照系として、培養液無添加系につい
ても同様に濁度を測定した。反応後の濁度の反応前の濁
度に対する相対値を表−１に示した。
【００４１】
【表１】
【００４２】（２）エステル加水分解活性の検出 上記（１）で得られた培養液を遠心分離（３，０００ｘ
ｇ，２０分）により上清画分と菌体画分とに分け、各画
分につきエステル加水分解活性を測定した。エステル加
水分解活性は、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７．０、３０℃）中にて、パラニトロフェニルアセテー
トを基質とし、１分間加水分解反応させることにより生
成するパラニトロフェノールを４０５ｎｍの吸光度増加
として検出した。尚、菌体画分については、１０ｍＭリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）により十分洗浄
後、活性測定に供した。エステル加水分解活性は、培養
液１ｍｌ量当たりの吸光度増加をエステル加水分解活性
とした。結果は、培養液上清画分の活性値を１００とし
た相対値として表−２に示した。
ｇ，２０分）により上清画分と菌体画分とに分け、各画
分につきエステル加水分解活性を測定した。エステル加
水分解活性は、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７．０、３０℃）中にて、パラニトロフェニルアセテー
トを基質とし、１分間加水分解反応させることにより生
成するパラニトロフェノールを４０５ｎｍの吸光度増加
として検出した。尚、菌体画分については、１０ｍＭリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）により十分洗浄
後、活性測定に供した。エステル加水分解活性は、培養
液１ｍｌ量当たりの吸光度増加をエステル加水分解活性
とした。結果は、培養液上清画分の活性値を１００とし
た相対値として表−２に示した。
【００４３】
【表２】 表−２：ＢＳ−３株のエステル加水分解活性 ─────────────────────── 培養液上清画分 菌体画分 対照（無添加） ─────────────────────── １００ ２６ ＜０．０１ ───────────────────────
【００４４】以上より、培養液上清画分と菌体画分の双
方にエステラーゼが存在することが確認された。
方にエステラーゼが存在することが確認された。
【００４５】
【実施例３】アシドボラックス・エスピー（Acidovorax
sp.）ＢＳ−４株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 前記、実施例２と同様に、ＢＳ−４株を培養し、培養液
についてＰＢＳの分活性を測定した。結果を表−３に示
した。
sp.）ＢＳ−４株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 前記、実施例２と同様に、ＢＳ−４株を培養し、培養液
についてＰＢＳの分活性を測定した。結果を表−３に示
した。
【００４６】
【表３】
【００４７】（２）エステル加水分解活性の検出 前記、実施例２と同様にして培養液上清画分と菌体画分
とについてエステル加水分解活性を測定した。結果を表
−４に示した。
とについてエステル加水分解活性を測定した。結果を表
−４に示した。
【００４８】
【表４】 表−４：ＢＳ−４株のエステル加水分解活性 ─────────────────────── 培養液上清画分 菌体画分 対照（無添加） ─────────────────────── １００ ２０ ＜０．０１ ───────────────────────
【００４９】以上より、培養液上清画分と菌体画分の双
方にエステラーゼが存在することが確認された。
方にエステラーゼが存在することが確認された。
【００５０】
【実施例４】アシドボラックス・エスピー（Acidovorax
sp.）ＢＳ−５株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 前記、実施例２と同様に、ＢＳ−５株を培養し、培養液
についてＰＢＳの分解活性を測定した。結果を表−５に
示した。
sp.）ＢＳ−５株によるエステラーゼの生産 （１）ＰＢＳ分解活性の検出 前記、実施例２と同様に、ＢＳ−５株を培養し、培養液
についてＰＢＳの分解活性を測定した。結果を表−５に
示した。
【００５１】
【表５】
【００５２】（２）エステル加水分解活性の検出 前記、実施例２と同様にして培養液上清画分と菌体画分
とについてエステル加水分解活性を測定した。結果を表
−６に示した。
とについてエステル加水分解活性を測定した。結果を表
−６に示した。
【００５３】
【表６】 表−６：ＢＳ−５株のエステル加水分解活性 ─────────────────────── 培養液上清画分 菌体画分 対照（無添加） ─────────────────────── １００ ２２ ＜０．０１ ───────────────────────
【００５４】以上より、培養液上清画分と菌体画分の双
方にエステラーゼが存在することが確認された。
方にエステラーゼが存在することが確認された。
【００５５】
【実施例５】アシドボラックス・エスピー（Acidovorax
sp.）ＢＳ−３株によるエステラーゼの生産、及びＰＢ
Ｓ分解の経時変化 ＰＢＳとして、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状の
ＰＢＳペレットを用いた、前記培地Ａ１００ｍｌに、実
施例１で単離されたＢＳ−３株を植菌し、３０℃にて１
８日間振とう培養した。培養経過に伴い５ｍｌの培養液
を適宜採取し、菌体の生育度、ＰＢＳの分解度、エステ
ル加水分解活性につき各々分析した。
sp.）ＢＳ−３株によるエステラーゼの生産、及びＰＢ
Ｓ分解の経時変化 ＰＢＳとして、直径２．５ｍｍ、長さ４ｍｍの円筒状の
ＰＢＳペレットを用いた、前記培地Ａ１００ｍｌに、実
施例１で単離されたＢＳ−３株を植菌し、３０℃にて１
８日間振とう培養した。培養経過に伴い５ｍｌの培養液
を適宜採取し、菌体の生育度、ＰＢＳの分解度、エステ
ル加水分解活性につき各々分析した。
【００５６】採取した培養液は、５分間静置後、上層液
につき５８０ｎｍの濁度を測定し、生育菌体量とした。
この時沈降したＰＢＳペレットを回収し、蒸留水にて洗
浄、乾燥後、重量測定することによりＰＢＳ分解度（ｍ
ｇ／１００ｍｌ培養液）とした。エステル加水分解活性
は、ＰＢＳペレットを除いた上記上層液について、更に
遠心分離後（３，０００ｘｇ，２０分）、上清液画分、
及び菌体画分とに分離し、各画分について、パラニトロ
フェニルアセテートを基質として測定した。これらの測
定の結果を表−７に示した。
につき５８０ｎｍの濁度を測定し、生育菌体量とした。
この時沈降したＰＢＳペレットを回収し、蒸留水にて洗
浄、乾燥後、重量測定することによりＰＢＳ分解度（ｍ
ｇ／１００ｍｌ培養液）とした。エステル加水分解活性
は、ＰＢＳペレットを除いた上記上層液について、更に
遠心分離後（３，０００ｘｇ，２０分）、上清液画分、
及び菌体画分とに分離し、各画分について、パラニトロ
フェニルアセテートを基質として測定した。これらの測
定の結果を表−７に示した。
【００５７】
【表７】 表−７：ＢＳ−３株によるエステラーゼ生産、及びＰＢＳの分解 ─────────────────────────────────── 培養日数 生育量 エステラーゼ活性 ＰＢＳ減少量 ────────────── （Day） （ＯＤ580nm） 培養上清液 菌体画分 （mg/100ml培地） （U/ml） （U/ml） ─────────────────────────────────── ０ ０ ＜０．０１ ＜０．０１ ０ ７ ０．１１ ＜０．０１ ＜０．０１ ４ １２ ０．１８ ０．０５ ０．０２ ９ １４ ０．５６ ０．４ ０．０８ ４７ １６ ０．７５ ０．３ ０．１ ７５ １８ ０．９２ ０．０５ ０．０６ ９０ ───────────────────────────────────
【００５８】
【発明の効果】本発明により、ポリブチレンサクシネー
ト（ＰＢＳ）を分解する新規エステラーゼ、該エステラ
ーゼ生産微生物、該エステラーゼの製造法、及び該エス
テラーゼを用いたＰＢＳの分解法が提供される。
ト（ＰＢＳ）を分解する新規エステラーゼ、該エステラ
ーゼ生産微生物、該エステラーゼの製造法、及び該エス
テラーゼを用いたＰＢＳの分解法が提供される。
【００５９】本発明のエステラーゼを用いることによ
り、ＰＢＳを効率的に分解することができ、プラスチッ
ク廃棄物問題の解決に寄与するとともに、リサイクル
等、資源の有効利用が図れる。
り、ＰＢＳを効率的に分解することができ、プラスチッ
ク廃棄物問題の解決に寄与するとともに、リサイクル
等、資源の有効利用が図れる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｂ０９Ｂ 3/00 ＺＡＢＡ //(Ｃ１２Ｎ 9/18 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (9)
- 【請求項１】 アシドボラックス（Acidovorax）属微生
物に由来する、ポリブチレンサクシネートの加水分解を
触媒する酵素活性を有するエステラーゼ。 - 【請求項２】 アシドボラックス属微生物が、アシドボ
ラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株、Ｂ
Ｓ−４株又はＢＳ−５株から選ばれる請求項１記載のエ
ステラーゼ。 - 【請求項３】 請求項１記載のエステラーゼを生産する
アシドボラックス・エスピー ＢＳ−３株。 - 【請求項４】 請求項１記載のエステラーゼを生産する
アシドボラックス・エスピー ＢＳ−４株。 - 【請求項５】 請求項１記載のエステラーゼを生産する
アシドボラックス・エスピー ＢＳ−５株。 - 【請求項６】 ポリブチレンサクシネートの加水分解を
触媒する酵素活性を有するエステラーゼを生産するアシ
ドボラックス属微生物を培地で培養し、その培養物から
前記エステラーゼを採取することを特徴とするエステラ
ーゼの製造法。 - 【請求項７】 ポリブチレンサクシネートの加水分解を
触媒する酵素活性を有するエステラーゼを生産するアシ
ドボラックス属微生物の培養物またはその処理物、ある
いはこの微生物菌体または培養物から採取したエステラ
ーゼの粗精製画分もしくは精製酵素をポリブチレンサク
シネートに、直接またはポリブチレンサクシネートを含
有する水溶液中で、接触させることを特徴とする、ポリ
ブチレンサクシネートの分解方法。 - 【請求項８】 アシドボラックス属微生物が、アシドボ
ラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株、Ｂ
Ｓ−４株又はＢＳ−５株から選ばれる請求項６記載のエ
ステラーゼの製造法。 - 【請求項９】 アシドボラックス属微生物が、アシドボ
ラックス・エスピー（Acidovorax sp.）ＢＳ−３株、Ｂ
Ｓ−４株又はＢＳ−５株から選ばれる請求項７記載のポ
リブチレンサクシネートの分解方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3743598A JPH11225755A (ja) | 1998-02-19 | 1998-02-19 | 生分解性ポリマー分解酵素及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3743598A JPH11225755A (ja) | 1998-02-19 | 1998-02-19 | 生分解性ポリマー分解酵素及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11225755A true JPH11225755A (ja) | 1999-08-24 |
Family
ID=12497449
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3743598A Pending JPH11225755A (ja) | 1998-02-19 | 1998-02-19 | 生分解性ポリマー分解酵素及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11225755A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006008780A (ja) * | 2004-06-23 | 2006-01-12 | Mitsubishi Chemicals Corp | ポリエステル系樹脂の分解処理方法 |
| WO2006078011A1 (ja) | 2005-01-21 | 2006-07-27 | Japan Science And Technology Agency | 新規ポリエステル系プラスチック分解菌、ポリエステル系プラスチック分解酵素およびその酵素をコードするポリヌクレオチド。 |
-
1998
- 1998-02-19 JP JP3743598A patent/JPH11225755A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006008780A (ja) * | 2004-06-23 | 2006-01-12 | Mitsubishi Chemicals Corp | ポリエステル系樹脂の分解処理方法 |
| WO2006078011A1 (ja) | 2005-01-21 | 2006-07-27 | Japan Science And Technology Agency | 新規ポリエステル系プラスチック分解菌、ポリエステル系プラスチック分解酵素およびその酵素をコードするポリヌクレオチド。 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051004 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060214 |