JPH1053599A - 胃腸運動刺激活性を示す環状モチリン−様ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 有効な胃腸運動刺激活性を有し、かつ増強
された代謝安定性を有する、胃腸運動活性の低下した基
礎レベルの治療に有効である薬剤を提供すること。 【解決手段】 光学活性異性体を含む式（Ｉ）で表され
るような胃腸運動刺激活性を有する環状ポリペプチド、
及び薬学的に許容されるその酸付加塩。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、有効な胃腸運動刺
激活性及び増強された代謝安定性を有する新規な環状ポ
リペプチドに関する。これらのペプチドは、糖尿病の胃
麻痺、麻痺性の腸閉塞及び手術後の腸閉塞のような胃腸
運動活性の基礎レベルが低下することを特徴とする症状
の治療に有効である。本発明はまたこれらの新規な環状
ポリペプチドを使用する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】モチリンは、空腹時のヒト及び他の様々
な他の種において十二指腸粘膜から定期的に放出される
直鎖状ポリペプチドホルモンである。ヒトモチリンは最
近カルシノイド癌細胞から単離及び精製されたばかりで
ある[De Clercq et al., Regulatory Peptides 55, 79-
84(1995)] 。ヒトモチリンにかなりの配列相同性を有す
る他の型のペプチドもブタ、イヌ、ネコ及びウサギの胃
腸組織からも単離された。ヒトモチリンはアミノ酸残基
からなり、式：

【０００３】

【化３】

【０００４】で表される。その生理学的な役割は完全に
決定されていないが、モチリンが胃の運動性を増大さ
せ、かつ中間消化性遊走筋電性複合物(interdigestive
migrating myoelectric complex)の発生を調節する役割
を果していることは明らかである。インビトロにおい
て、モチリンは単離されたヒト及びウサギの十二指腸断
片の収縮を誘導する。最近の研究は、モチリンがプラズ
マ膜における別の受容体へ結合してカルシウムの流入増
加を導くことにより平滑筋細胞を収縮するように刺激す
ることを示唆している。これに関連して、モチリン及び
幾つかのモチリン誘導体は、ヒト及びウサギの腔組織に
おける結合部位に放射線標識化されたモチリンと競合す
る。インビボにおいて、健康な被験者（ヒト）に投与し
た場合には、モチリンは腸内の通過時間を加速し、かつ
胃を空にする作用を増強する。さらに、モチリンの投与
により、糖尿病の胃麻痺を伴う患者において固体及び液
体を空にするように刺激されることが報告されている[P
eeters et al., Gastroenterology 102, 97-101 (199
2)] 。さらにモチリンは、胃腸管の腫瘍による麻痺性腸
閉塞を伴う患者の治療に使用された[Meyer et al., Me
d.Klin. 86, 515-517 (1991)]。

【０００５】モチリンのＮ−末端アミノ酸配列及びモチ
リンの真ん中部分の特定の残基は、インビトロにおける
収縮活性に必須である[Macielag et al., Peptides 13,
565-569(1992); Peeters et al., Peptides 13, 1103-
1107(1992); Poitras et al., Biochem. Biophys. Res.
Commun. 183, 36-40(1992)]。しかし、モチリンの短鎖
の類似体は、静脈内投与を行った場合にはほとんど又は
全く活性がなく、これは恐らくプラズマ及び組織におけ
る迅速な代謝的分解が原因である[Raymond etal., Regu
l. Pept. 50, 121-126(1994)]。より短いＣ末端を有
し、位置１２に３〜５の塩基性アミノ酸が結合し、位置
１〜１１に様々なアミノ酸置換基を有するモチリン様ポ
リペプチドは、モチリンの活性と同等もしくはそれ以下
であることが報告されている。代謝安定性がより増強さ
れたモチリン様ポリペプチドは報告されていない [日本
国特許番号2-311,495]。最近多数の一連のモチリンの一
部置換(point-substituted) 類似体及びフラグメントに
ついて、インビトロにおけるウサギの十二指腸平滑筋条
片への収縮効果のアッセイが行われた[Miller et al.,
Peptides, 16, 11-18(1995)]。これらのペプチドの効力
はモチリンのそれと同等かそれ以下であった。

【０００６】モチリンの大きな問題点は、ヒトにおいて
4.5 分という比較的短い半減期(t_{1/ 2})である[Christofi
des et al., Gastroenterology 76, 903-907 (1979)]。
この短い半減期のため、治療効果を得るために継続的注
入によりこのホルモンを投与する必要がある。モチリン
のような直鎖状のペプチドは非常に柔軟な分子であり、
生物学的な媒体中で複数のコンフォメーションで存在す
る。その結果、配列における各ペプチド結合は周囲の環
境に対して露出しており、代謝プロテアーゼにより分解
を受けやすい。現在までのところ、ほとんどのモチリン
の合成類似体は直鎖形状（configuration)である。一連
の環状モチリンフラグメントはインビトロにおいて収縮
活性が完全に失われていることが報告された[Miller et
al., Peptides, 16, 11-18(1995)]。これらのペプチド
は、モチリン（１−１２）アミドのアミノ末端内に計画
的に導入されたシステイン残基間にジスルフィド結合を
形成することにより得られた。従って、有効な胃腸運動
刺激活性を有し、かつ増強された代謝安定性を有するモ
チリン様ポリペプチドは胃腸運動活性の低下した基礎レ
ベルの治療に有効である。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は有効な
胃腸運動刺激活性を有し、かつ増強された代謝安定性を
有する、胃腸運動活性の低下した基礎レベルの治療に有
効である薬剤を提供することである。

【課題を解決するための手段】本発明は、光学活性異性
体を含む式（1)で表されるような胃腸運動刺激活性を有
する環状ポリペプチド、及び薬学的に許容されるその酸
付加塩に関する。

【０００８】

【化４】

【０００９】式中、基Ａ及び基Ｄは連結して環状構造を
形成し、Ｒ₁ は低級アルキルを表し、Ｒ₂ は水素又は低
級アルキルを表し、Ｒ₃ は水素又は低級アルキルを表
し、Ｒ₄ はフェニル又は置換フェニル（ハロゲン、ヒド
ロキシ及び低級アルコキシからなる群から選択される一
つ又はそれ以上の置換基で置換されていてもよいフェニ
ル基）を表し、Ｒ₅ は−ＯＨ又は−ＮＨ₂ を表し、Ａは
Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−リジン、
Ｌ−オルニチン及びＬ−2,4 −ジアミノ酪酸からなる群
から選択され、ＢはＬ−アラニン又はＬ−グルタミンで
あり、ＣはＬ−アルギニン又はＤ−アルギニンであり、
ＤはＬ−リジン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−2,4 −ジアミノ
酪酸、Ｌ−グルタミン酸及びＬ−アスパラギン酸からな
る群から選択され、Ｅは基Ｄ及び基Ｒ₅ 間の直接結合で
あるか、又はＬ−リジン或いはＤ−リジンであり、ｍは
０又は１であり、記号＊は不斉炭素原子を表し、Ｄ又は
Ｌ配置であってもよい（ただし、(a) ＡがＬ−グルタミ
ン酸又はＬ−アスパラギン酸である場合には、ＤはＬ−
リジン、Ｌ−オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸で
あり、及び (b)ＡがＬ−リジン、Ｌ−オルニチン又はＬ
−2,4 −ジアミノ酪酸である場合には、ＤはＬ−グルタ
ミン酸又はＬ−アスパラギン酸である。）。本発明は、
また、新規な環状ポリペプチドの使用方法に関する。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明の新規な環状ポリペプチド
は、モチリン受容体に高い親和性で結合し、胃腸組織に
おけるモチリンの蠕動効果をミミック（模倣）する。新
規なポリペプチドはまた、適当な組織のホモジネート中
で生物分解に対して上昇した安定性を示すため、インビ
ボにおけるより効果的な前運動性薬（prokinetic agent
s)である。モチリン様ポリペプチドは１３位のメチオニ
ンの代わりにロイシン残基を有しているため、より化学
的に安定であり、１０位と１４位のアミノ酸残基の側鎖
の間にラクタム橋かけ構造を有して、１８〜２１原子か
らなる環を形成しているため、より効力があり、かつ代
謝安定性に優れている。さらに、１位にアルキル化フェ
ニルアラニン残基を有しており、生物分解に対する安定
性が向上している。本発明のポリペプチドは、従って、
糖尿病の胃麻痺、麻痺性の腸閉塞及び手術後の腸閉塞の
ような胃腸運動の基礎レベルが低下することを特徴とす
る症状の治療に有効である。

【００１１】分子内共有結合の形成による本発明のペプ
チドの環化は、タンパク分解酵素による作用からアミノ
酸残基を遮蔽することにより代謝安定性を増加する。さ
らに、環状ペプチドは、剛直で明確な形状で存在し、相
当する直鎖類似体と比較して、より強い結合力を示す。
モチリンのような多くのブレイングット（brain-gut)ペ
プチドはＣＮＳ及び末梢の両方において受容体サブタイ
プと作用することにより幾つかの生理学的プロセスを調
節する。ペプチドの環化により目的の受容体に対してよ
り強い結合を与え、それによりインビボにおける望まし
くない副作用を制限してもよい。本発明におけるペプチ
ドのコンフォメーションの運動性を制限するストラテジ
ーは、リジン又はオルニチンの塩基性側鎖とグルタミン
酸又はアスパラギン酸の酸性側鎖との共有結合を行って
ラクタム橋かけ構造を形成することを含む。従来技術に
おいて使用された疎水性のシステイン橋かけに対して、
ラクタムのアミド結合は明らかに二極性を有し、かつ受
容体タンパク質の官能基と水素結合を形成することがで
きる。

【００１２】“環状ペプチド”又は“ラクタム”という
用語は、酸性アミノ酸（例えば、Asp 又はGlu)の側鎖カ
ルボキシル基と、塩基性アミノ酸（例えば、Lys 又はOr
n)の側鎖アミノ基とをアミド結合の形成により結合させ
たペプチドを意味する（ラクタム）。

【００１３】

【化５】

【００１４】という用語は、ペプチド鎖の１０番目のア
ミノ酸“Ａ”が、１４番目のアミノ酸“Ｄ”に結合して
環状（ラクタム）構造を形成していることを意味する。
用語“シクロ^10,14 ”は、上記で定義したように１０位
と１４位で環化したペプチドを意味する。用語“ｐＭＯ
Ｔ”は、ブタ又はヒトモチリンを意味する。ブタモチリ
ンは下記のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。

【００１５】

【化６】

【００１６】用語“ｐＭＯＴ（１−１４）”は、全配列
のうち最初の１４のアミノ酸を有するブタモチリンのフ
ラグメントを意味する。一般に、用語“ｐＭＯＴ”の後
の括弧内の番号は、完全な長さのｐＭＯＴポリペプチド
のフラグメントを示す。本明細書で使用される下記の省
略形を以下のように定義する。 Phe フェニルアラニン Tyr チロシン Leu ロイシン Ile イソロシン Val バリン Ala アラニン Gly グリシン Glu グルタミン酸 Asp アスパラギン酸 Lys リジン Orn オルニチン Dab 2,4-ジアミノ酪酸 Arg アルギニン Gln グルタミン Asn アスパラギン Thr トレオニン Pro プロリン Me メチオニン Alloc アリルオキシカルボニル Boc t-ブチルオキシカルボニル 2-Br-Z 2-ブロモベンジルオキシカルボニル

【００１７】Bzl ベンジル Cbz カルボベンジルオキシ 2-Cl-Z 2-クロロベンジルオキシカルボニル Dhbt 3,4-ジヒドロ-4- オキソベンゾトリアジン-3
- イル Fmoc フルオレニルメチルオキシカルボニル Mbh 4,4'- ジメトキシベンズヒドリル Mtr 4-メトキシ-2,3,6- トリメチルベンゼンスル
ホニル Pfp ペンタフルオロフェニル Trt トリチル BOP ベンゾトリアゾリルオキシ- トリスジメチル
アミノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート BOP-Cl ビス(2- オキソ-3- オキサゾリジニル) ホス
フィニッククロリド DCC N,N'- ジシクロヘキシルカルボジイミド DIC N,N'- ジイソプロピルカルボジイミド DIEA ジイソプロピルエチルアミン DPPA ジフェニルホスホリルアジド EDAC N-エチル-N'-ジエチルアミノプロピルカルボ
ジイミド HATU 2-(1H-7-アザベンゾトリアゾール-1- イル)-
1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート HBTU 2-(1H-ベンゾトリアゾール-1- イル)-1,1,3,
3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート HEPES N-[2- ヒドロキシエチル] ペピラジン-N'-[2
- エタンスルホン酸] HMPA ヒドロキシメチルフェノキシアセトキシ HOAt 7-アザ-1- ヒドロキシベンゾトリアゾール HOBt 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール MBHA 4-メチルベンズヒドリルアミノ PAM ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチ
ル PyBOP ベンゾトリアゾリルオキシ- トリピロリジノ
ホスホニウム= ヘキサフルオロホスフェート PeBrOP ブロモ- トリピロリジノホスホニウム= ヘキ
サフルオロホスフェート DCM ジクロロメタン DMF N,N-ジメチルホルムアミド NMM N-メチルモルホリン MMP N-メチルピロリジノン TCA トリクロロ酢酸 TEA トリエチルアミン TFA トリフルオロ酢酸 TFMSA トリフルオロメタンスルホン酸

【００１８】本発明は有効な胃腸運動刺激活性を有する
新規な環状ポリペプチド及び哺乳類、好ましくはヒトに
おける胃腸運動活性の基礎レベルの低下という症状を治
療する方法に関する。上記治療方法は、哺乳類に、光学
活性異性体を含む式（１）で表されるポリペプチド、及
び薬学的に許容されるその酸付加塩の症状を治療するた
めに薬学的に有効な量を投与することを含む。

【００１９】

【化７】

【００２０】式（１）において、ｍは０又は１であり、
記号＊は不斉炭素原子を表し、Ｄ又はＬ配置であっても
よく、各低級アルキル基は、１〜４炭素原子を含む。た
だし、(a) ＡがＬ−グルタミン酸又はＬ−アスパラギン
酸である場合には、ＤはＬ−リジン、Ｌ−オルニチン又
はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸であり、及び (b)ＡがＬ−リ
ジン又はＬ−オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸で
ある場合には、ＤはＬ−グルタミン酸又はＬ−アスパラ
ギン酸である。基Ａから基Ｅ及びＲ₁ からＲ₅は以下の
ように定義される。式（１）で示される本発明の新規な
化合物は、１４又は１５アミノ酸の長さを有していても
よい環状ポリペプチドである。新規なポリペプチドのア
ミノ酸成分の立体化学は本発明の必須の性質である。個
々のアミノ酸の絶対配置は、特に述べない限りＬであ
り、ただし、１位（アミノ末端アミノ酸、（Ｒ₁ ）
_m （Ｒ₂ ）（Ｒ₃)Ｎ−^* ＣＨ（ＣＨ ₂Ｒ₄ ）ＣＯ−）は
Ｌ又はＤでもよく、１２位（基Ｃ）はＬ又はＤ−アルギ
ニンでもよく、及び１５位（存在する場合には、基Ｅ）
はＬ−リジン又はＤ−リジンでもよい。

【００２１】１位、アミノ末端アミノ酸 （Ｒ₁ ）_m （Ｒ₂ ）（Ｒ₃)Ｎ−^* ＣＨ（ＣＨ₂ Ｒ₄ ）Ｃ
Ｏ− １位の、ポリペプチドのアミノ末端のアミノ酸（Ｒ₁ ）
_m （Ｒ₂ ）（Ｒ₃)Ｎ− ^* ＣＨ（ＣＨ₂ Ｒ₄ ）ＣＯ−は、
Ｌ又はＤ配置であってもよい。Ｒ₁ は低級アルキル、Ｒ
₂ 及びＲ₃ は水素又は低級アルキルである。“低級アル
キル”という用語は、直鎖及び分岐鎖の１〜４の炭素原
子を有する炭化水素基を意味する。Ｒ₁、Ｒ₂ 及びＲ₃
に適する低級アルキル基としては、メチル、エチル、プ
ロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びsec-ブ
チルが挙げられ、メチルが好ましい。

【００２２】ｍは０または１であり、０が好ましい。ｍ
が０である場合には、アミノ残基はＲ₂ 及びＲ₃ は水素
である一級アミンでもよいく。アミノ残基は一、二又は
三の二級アミン、三級アミン又は四級アンモニウム塩
（ｍは１）であってもよく、それぞれ、１〜４の炭素原
子を有する低級アルキル基、好ましくはメチル又はエチ
ルで置換されている。アミノ残基はまた、一つのプロパ
ルギル基で置換されて、Ｎ−プロパルギル、Ｎ−メチル
−Ｎ−プロパルギル、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−プロパル
ギル置換アミノ残基又は３以下のアリル基で置換されて
いてもよい。好ましくは、アミノ末端アミノ酸はＮ−置
換されており、好ましい置換基は１〜３のメチル基であ
る。

【００２３】Ｒ₄ はフェニルまたは置換フェニル( フェ
ニル基は一つまたは複数の、ハロゲン、ヒドロキシ、お
よび低級アルコキシからなる群から選択される置換基で
あってもよい) である。好ましい置換または無置換アリ
ール基はフェニル、p-フルオロフェニル、p-クロロフェ
ニル、p-ブロモフェニル、p-ヨードフェニル、p-ヒドロ
キシフェニル、およびp-メトキシフェニルが挙げられ
る。高い胃腸蠕動活性を有する化合物として、好ましい
アミノ末端アミノ酸はＬ−フェニルアラニンおよびＤ−
フェニルアラニンである。好ましい（Ｒ₁ ）_m （Ｒ₂ ）
（Ｒ₃)Ｎ−^* ＣＨ（ＣＨ₂ Ｒ₄ ）ＣＯ−基は、ＣＨ₃ Ｎ
ＨＣＨ（ＣＨ₂ Ｃ₆ Ｈ₅ ）ＣＯ−、（ＣＨ ₃)₂ Ｎ−ＣＨ
（ＣＨ₂ Ｃ₆ Ｈ₅ ）ＣＯ−および（ＣＨ₃)₃ Ｎ⁺ ＣＨ
（ＣＨ₂ Ｃ₆Ｈ₅ ）ＣＯ−からなる群から選択されても
よい。

【００２４】１０位、基Ａ ポリペプチドの１０位の基Ａは、塩基性アミノ酸であっ
ても酸性アミノ酸であってもよい。基Ａがアミノ基側鎖
を有する塩基性アミノ酸である場合には、基Ｄの酸性ア
ミノ酸のカルボキシル基側鎖とアミド結合を形成するこ
とにより結合することができ、ラクタムを形成する。ま
たは、ポリペプチドの１０位の基Ａカルボキシル基塩側
鎖を有する産生アミノ酸である場合には、基Ｄの塩基性
アミノ酸のアミノ基側鎖とアミド結合を形成することに
より結合することができ、ラクタムを形成する。塩基性
アミノ酸は、例えば、Ｌ−リジン、Ｌ−オルニチン及び
Ｌ−2,4 −ジアミノ酪酸からなる群から選択されてもよ
い。酸性アミノ酸の例としては、Ｌ−グルタミン酸及び
Ｌ−アスパラギン酸からなる群から選択されてもよい。
好ましい基Ａのアミノ酸はＬ−グルタミン酸及びＬ−ア
スパラギン酸である。ＡがＬ−グルタミン酸又はＬ−ア
スパラギン酸である場合には、基ＤはＬ−リジン、Ｌ−
オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸である。ＡがＬ
−リジン、Ｌ−オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸
である場合には、ＤはＬ−グルタミン酸又はＬ−アスパ
ラギン酸である。

【００２５】１１位、基Ｂ ポリペプチドの１１位の基ＢはＬ−アラニン又はＬ−グ
ルタミンであるアミノ酸である。化合物が高いモチリン
受容体アゴニスト活性を有するためには、基Ｂのアミノ
酸はＬ−アラニンであることが好ましい。 １２位、基Ｃ ポリペプチドの１２位の基ＣはＬ−アルギニン又はＤ−
アルギニンであるアミノ酸である。好ましい基Ｃアミノ
酸はＬ−アルギニンである。 １３位、Ｌｅｕ モチリン様ポリペプチドがより高い化学安定性を有する
には、１３位のメチオニンの代わりにロイシン残基を有
する。

【００２６】１４位、基Ｄ ポリペプチドの１４位の基Ｄは、塩基性アミノ酸であっ
ても酸性アミノ酸であってもよい。基Ｄがアミノ基側鎖
を有する塩基性アミノ酸である場合には、基Ａの酸性ア
ミノ酸のカルボキシル基側鎖とアミド結合を形成するこ
とにより結合することができ、ラクタムを形成する。又
はポリペプチドの１４位の基Ｄがカルボキシル基側鎖を
有する酸性アミノ酸である場合には、基Ａの塩基性アミ
ノ酸のアミノ基側鎖とアミド結合を形成することにより
結合することができ、ラクタムを形成する。塩基性アミ
ノ酸は、例えば、Ｌ−リジン、Ｌ−オルニチン及びＬ−
2,4 −ジアミノ酪酸からなる群から選択されてもよい。
酸性アミノ酸の例としては、Ｌ−グルタミン酸及びＬ−
アスパラギン酸からなる群から選択されてもよい。好ま
しい基Ｄのアミノ酸はＬ−リジン及びＬ−オルニチンで
あり、Ｌ−リジンが好ましい。

【００２７】基Ｅ ポリペプチドの基Ｅは、基Ｄ及び基Ｒ₅ との間の直接結
合であるか、又はＬ−リジン或いはＤ−リジンである。
好ましい基Ｅアミノ酸はＬ−リジンである。 基Ｒ₅ ポリペプチドの基Ｒ₅ は、−ＯＨ又は−ＮＨ₂ である。
好ましいＲ₅ は−ＮＨ ₂ である。“ハロゲン”という用
語は４種類のハロゲン原子を含み、塩素が好ましい。好
ましい態様において、本発明の化合物は以下の式及びこ
れらの薬学的に許容される付加塩からなる群から選択さ
れる。

【００２８】

【化８】

【００２９】

【化９】

【００３０】各ケースにおいてアミノ酸は特に述べない
限りＬ−配置を表す。より好ましい態様において本発明
の化合物は以下の式及びこれらの薬学的に許容される付
加塩からなる群から選択される。

【００３１】

【化１０】

【００３２】

【化１１】

【００３３】最も好ましい態様において、本発明の化合
物は以下の式及びこれらの薬学的に許容される付加塩か
らなる群から選択される。

【００３４】

【化１２】

【００３５】本発明の化合物は、この分野において公知
の様々な方法（例えば固相ペプチド合成又は伝統的な液
相合成）により製造することができる。好ましくは、ペ
プチドはメリフィールド（J. Am. Chem. Soc. 85, 2149
-2154 (1963)）による固相法にて合成される。合成はペ
プチドをレジン支持体（典型的にはポリスチレンベー
ス、ポリハイプベース、ポリスチレン−ポリエチレング
リコールグラフト共重合体、又はポリアクリルアミド／
キーゼルゲル組成レジン）上に構築することにより行わ
れる。伸長するペプチド鎖は、固体支持体に、ヒドロキ
シメチルフェノキシアセトキシ（ＨＭＰＡ）、ヒドロキ
シメチルフェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）、又は
４−メチルベンズヒドリルアミノ（ＭＢＨＡ）のような
適する分子連結鎖により固体支持体につながれる。ペプ
チド鎖は次にフッ化水素、トリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）等
を使用した酸分解により連結鎖から開裂され、レジン支
持体から除去される。

【００３６】本発明の胃腸運動刺激ポリペプチドを固相
法又は液相法のどちらの合成法で合成するとしても、直
鎖ペプチド前駆体を構築するための基本的な合成アプロ
ーチ法は、適切に保護したアミノ酸又はペプチドフラグ
メントのカルボキシル基部分を他の適切に保護したアミ
ノ酸又はペプチドフラグメントのアミノ基と反応させる
ことによりアミノ酸サブユニットを結合し、新しいアミ
ド結合を形成する工程を含む。結合反応を効果的に行う
ために、カルボキシル基部分を活性化しなければならな
い。活性化は、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＡＣ、ＢＯＰ、Ｈ
ＢＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、又はＨＡＴＵのよ
うな通常の結合反応に使用する試薬を使用して行われ
る。ＰｙＢｒＯＰの場合を除いて、ＨＯＢｔ又はＨＯＡ
ｔの等量を活性化したアミノ酸成分のラセミ化を防ぐた
めに加えてもよい。相当するアミノ酸のカルボキシレー
ト塩の活性化に必要な場合には、ＮＭＭ、ＤＩＥＡ又は
ＴＥＡのような塩基を使用してもよい。

【００３７】又は、本発明のペプチドをアミノ酸成分の
活性エステルの反応により合成することもできる。その
ような活性エステルとしては、例えば、ペンタクロロフ
ェニルエステル、Ｐｆｐエステル、ｐ−ニトロフェニル
エステル、Ｄｈｂｔエステル等が挙げられる。本発明の
ペプチドの合成において、アミノ酸成分の他の反応性官
能基を適する保護基で保護しておかなければならない。
一般に、α−アミノ保護基の種類によってどのタイプの
側鎖保護基を使用しなければならないかが決定される。
例えば、α−アミノ基がそのＢｏｃ誘導体で保護されて
いる場合には、側鎖の保護は、通常ベンジルアルコール
のエステル、エーテル、ウレタン、又はカーボネート誘
導体を用いて行われる。シクロヘキサノールのエステル
及びエーテル誘導体もまた用いることができる。反対
に、α−アミノ基がＦｍｏｃ誘導体で保護されている場
合には、側鎖官能基は一般にｔ−ブタノールのエステ
ル、エーテル、又はウレタン誘導体で保護される。又
は、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃのどちらかを使用するアプロー
チの場合には、側鎖官能基をアリルアルコールのエステ
ル又はウレタン誘導体で保護してもよい。当然、特に本
発明のペプチドを液相法により合成する場合には、他の
保護基の組み合わせを使用してもよい。

【００３８】α−アミノ保護基であるＦｍｏｃの除去は
塩基（典型的にはピペラジン又はジエチルアミン）によ
り容易に行うことができる。側鎖保護基は、適当なカル
ボニウムイオン捕集剤の存在下、ＴＦＡ処理により行う
ことができ、同時にこの処理はまた、ペプチドのＣ末端
とレジン連結鎖との間の結合を開裂する。Ｂｏc 保護基
は通常希ＴＦＡ処理により除去される。しかし、ＴＦＡ
開裂後、α−アミノ基はＴＦＡ塩として存在する。伸長
したペプチド鎖のα−アミノ基を次のアミノ酸誘導体に
対して活性にするためには、レジン結合ペプチドをＴＥ
Ａ又はＤＩＥＡのような塩基で中和する。適当な捕集剤
を含む、フッ化水素酸又はＴＦＭＳＡのような強酸を次
に使用し、アミノ酸側鎖の脱保護及びペプチドのレジン
支持体からの開裂を行う。Ｆｍｏｃ又はＢｏｃのどちら
の方法においても、アリルオキシカルボニル又はアリル
エステル官能基の選択的脱保護は、モルホリン、ジメド
ン、又はトリ−ｎ−ブチルチンハイドライドのような適
当な求核剤存在下、Ｐｄ⁰処理により簡単に行うことが
できる[Loffet and Zhang, Int. J. Peptide Protein R
es. 42, 346-351 (1993)] 。

【００３９】固体支持体における側鎖と側鎖の環化は、
環化する残基側鎖の保護基を選択的に除去することがで
きる直行法を使用することが必要である。Ａｓｐ及びＧ
ｌｕ側鎖の９−フルオレニルメチル（ＯＦｍ）保護基及
びＬｙｓ、Ｏｒｎ及びＤａｂ側鎖の９−フルオレニルメ
トキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）をこの目的で使用するこ
とができる。これらの場合、Ｂｏｃ保護ペプチド−レジ
ンの側鎖保護基（ＯＦｍ及びＦｍｏｃ）はＤＭＦ中ピペ
リジンにより選択的に除去される。または、アリル及び
アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）保護基は、Ａｓ
ｐ／Ｇｌｕ及びＬｙｓ／Ｏｒｎ／Ｄａｂの側鎖にそれぞ
れ使用することができる。これらの場合、Ｂｏｃ−また
はＦｍｏｃ−保護ペプチド−レジンの側鎖保護基（アリ
ル及びＡｌｌｏｃ）は、トリ−ｎ−ブチルチンヒドリド
またはジメドンのような適当な求核剤存在下にＰｄ⁰ に
より選択的に除去される。

【００４０】環化は、ＤＣＣ、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＢＯ
Ｐ、ＰｙＢＯＰ、ＢＯＰ−ＣｌまたはＤＰＰＡを含む様
々な活性化剤を使用して固体支持体上で行うことができ
る。環化は、環化される残基が伸長するペプチド鎖内に
取り込まれさえすれば、合成のどの工程で行われてもよ
い。本発明のペプチドの場合、環化は、完全長の直線状
前駆ペプチドを合成したのち、選択的に行われる。次
に、脱保護及び固体支持体からのペプチドの切断は、上
記に述べた酸分解条件下に行われる。

【００４１】本発明は、アミノ末端部分（Ｒ₁ ）ｍ（Ｒ
₂ ）（Ｒ₃ ）Ｎ−を有するペプチドの合成法を提供す
る。ｍ＝１であり、及びＲ₂ 及びＲ₃ が低級アルキルで
ある場合、上記方法は、任意に適当な結合鎖をを介して
不溶支持体に結合した、適当に保護したペプチドのＮ−
末端アミノ基（ＮＲ₂ Ｒ₃ −（ＡＡ）ｎ−）と、式Ｒ₁
Ｈａｌ（式中、Ｒ₁ は上記に述べたように定義され、Ｈ
ａｌはハロゲン原子を意味する）で表される化合物との
反応工程を含む。反応は、炭酸ナトリウムまたは炭酸カ
リウムのような適当な酸結合剤の存在下、ＤＭＦまたは
ＮＭＰのような適する溶媒中で行われる。上記方法は、
より詳細に、Benoiton-Chen, Proced. 14th Europ. Pep
t. Symp., (1976), P.149 に記載されており、この内容
を全てここに引用する。アルキルハライドにより酸結合
剤存在下に行われる、そのようなＮ−末端アミノ基のア
ルキル化は、環状ペプチド主鎖形成の前または後に行わ
れてもよい。本発明のペプチドの場合には、アルキル化
は側鎖と側鎖の環化の後に選択的に行われる。

【００４２】本発明の化合物は、遊離塩基の形態で有効
ではあるが、安定性、結晶化の容易性、溶解性の上昇等
の目的において、薬学的に許容される酸付加塩の形態に
形成し、投与してもよい。これらの酸付加塩は、塩酸、
硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマル酸、臭化水素酸、グ
リコール酸、くえん酸、マレイン酸、リン酸、琥珀酸、
酢酸、硝酸、安息香酸、アスコルビン酸、ｐ−トルエン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、
ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸等のような適する
無機酸または有機酸から従来の方法により形成される。
好ましくは、酸付加塩は塩酸、酢酸、または琥珀酸から
調製される。本発明の化合物は薬学的組成物を与える薬
学的に許容される担体と混合することができる。遊離塩
基の本発明の化合物に適する担体としては、プロピレン
グリコール−アルコール−水、等張水、注射用無菌水
（ＵＳＰ）、emulPhorＴＭ−アルコール−水、クレマホ
ール−ＥＬ ＴＭまたは他の当業者に公知の適する担体
が挙げられる。

【００４３】本発明の化合物の酸付加塩に適する担体と
しては、等張水、注射用無菌水（ＵＳＰ）をそれぞれ単
独で使用するか、他のエタノール、プロピレングリコー
ルのような溶剤または他の当業者に公知の従来の溶剤と
の組み合わせが挙げられる。好ましい担体は、本発明の
化合物の等張水溶液である。本発明の化合物は、哺乳類
（例えば、動物またはヒト）に対し、目的の胃腸運動刺
激活性を与えるのに十分な量において投与することがで
きる。化合物の活性及び目的の治療効果の程度は異なる
ため、使用する化合物の投与量レベルもまた異なる。実
際の投与量はまた、患者の体重及び個々の患者の過敏性
などの一般的に認められる因子により決定される。従っ
て、各患者（ヒト）への単位投与量は体重１ｋｇあたり
約0.１μｇというような低量から変化させることがで
き、臨床医は目的の効果に合わせてもよい。好ましい最
低投与量は１μｇ／ｋｇ（体重）である。

【００４４】本発明の化合物は、既に述べた担体中の無
菌溶液または懸濁液という剤形で、認められる非経口経
路により投与することができる。これらの調製剤は少な
くとも約0.１重量％の本発明を含有しなければならない
が、量は、約0.１〜５０重量％の間で変化してもよい。
本発明の化合物は静脈注射で投与されることが好まし
く、使用される投与量は、体重７０ｋｇあたり、一般に
約0.１μｇ〜約５００ｍｇの範囲内であり、好ましくは
約１μｇ〜約５０ｍｇの間である。この投与量を一日１
〜４回投与してもよい。無菌溶液または懸濁液は次の補
助剤を含んでいてもよい：無菌希釈剤（例えば、注射用
水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グ
リセリン、プロピレングリコールまたは他の合成用溶
剤）；抗細菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメ
チルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸ま
たは亜硫酸水素ナトリウム）；キレート化剤（例えば、
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；バッファー（例
えば、酢酸、くえん酸またはリン酸バッファー）；及び
等張化剤（例えば、食塩またはデキストロース）。非経
口調製剤は、アンプル、使い捨てシリンジまたはガラス
製或いはプラスチック製の複数投与バイアル内に包含さ
れていてもよい。この明細書において、様々な文献が引
用されれいる。これらの文献の内容は、より完全に本発
明を述べるために全てここに引用される。以下、実施例
等を記載して本発明を具体的に記載するが、実施例は本
発明の例示のためであって、本発明の組成物及び化合物
の製造を限定するためのものではない。

【００４５】

【実施例】

実施例１ シクロ^10,14 〔Ａｓｐ¹⁰，Ｌｅｕ¹³，Ｌｙｓ¹⁴〕モチリ
ン−（１−１４）−ペプチドアミド（ブタ）ビストリフ
ルオロ酢酸塩 １ｇのＭＢＨＡレジン（１％架橋ジビニルベンゼン−ス
チレン：２００−４００メッシュサイズ；置換：0.２７
ｍｅｑ／ｇ）上に、ミリゲンモデル９６００ペプチド合
成機を使用して固相合成法によりポリペプチドの合成を
行った。全ての残渣をｔ−Ｂｏｃアミノ酸及びＤＩＣを
合成試薬に用いて結合した。側鎖保護基は以下のものを
用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ａｓｐ（ＯＦｍ）、Ｇｌｕ
（ＯＢｚｌ）、Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）、Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−Ｚ）。Ｇｌｎの結合は、脱水
素化を抑制するため1.２等量のＨＯＢｔを使用した。ア
ミノ酸残基Ｐｈｅ¹ 、Ｖａｌ² 、Ｐｒｏ³ 、Ｉｌｅ⁴ 、
Ｐｈｅ⁵ 及びＬｙｓ¹⁴は二重に結合した（double coupl
ed)(それぞれ２時間）。残りのアミノ酸残基は単独で結
合した（single coupled）（それぞれ２時間）。それぞ
れの結合において6.６７モル過剰のアミノ酸を使用し
た。Ｂｏｃ−Ｐｈｅ¹ の結合後、Ａｓｐ¹⁰及びＬｙｓ¹⁴
の側鎖ＯＦｍ及びＦｍｏｃ保護基は、レジンを２０％ピ
ペリジン／ＤＭＦ溶液５０ｍｌを２分間作用させること
により、それぞれ除去を行った。レジンをＤＭＦで洗浄
した（３×２５ｍｌ）。さらに５０ｍｌの２０％ピペリ
ジン／ＤＭＦ溶液を加え、レジンを１５分間混合した。
再び、レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。レ
ジン結合ペプチドのピペリジニウム塩を、２０％トリエ
チルアミン／ＤＭＦ溶液で１５分間処理を行い、トリエ
チルアンモニウム塩に変換した。レジンをＤＭＦで洗浄
した（３×２５ｍｌ）。ニンヒドリン試験は、遊離アミ
ンを検出した。

【００４６】Ｌｙｓ¹⁴のアミノ基とＡｓｐ¹⁰のカルボキ
シル基の側鎖と側鎖の環化は、レジンを２０ｍｌのＮＭ
Ｐに懸濁し、７２０ｍｇ（６等量）のＢＯＰ及び２５０
ｍｌ（６等量）のトリエチルアミンを添加することによ
り行われた。混合物を１０時間攪拌した。試薬を除去
し、レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。レジ
ン−結合ペプチドを再び７２０ｍｇ（６等量）のＢＯＰ
及び２５０ｍｌ（６等量）のトリエチルアミン（２×１
０時間）で処理を行った。レジンをＤＭＦ（３×２５ｍ
ｌ）及びＤＣＭ（３×２５ｍｌ）で洗浄した。ニンヒド
リン試験は、遊離アミンを検出しなかった。レジンを真
空下、一晩乾燥した。ペプチドをレジンから液体ＨＦ：
アニソール（１０：１）を用いて、−１０℃〜０℃にて
１時間処理を行って切断した。ＨＦの真空除去後、ペプ
チドを１５％酢酸水溶液中に抽出し、凍結乾燥を行い、
４００ｍｇ（８７％）の薄黄色の粉体を得た。

【００４７】得られた粗ペプチドの精製を、三本のＣ−
１８カラム（２５０×２０ｍｍ、１５μ、Vydac)を連続
使用して分取ＨＰＬＣ（Waters Delta-Prep 3000) によ
り行った。溶媒系は、0.1 ％ＴＦＡ：アセトニトリルを
３０分グラジエント（２０〜６０％アセトニトリル）を
使用し、２０ｍｌ／分の流速で２３０ｎｍのＵＶ検出に
より行った。各フラクションの純度を分析ＨＰＬＣによ
り評価した（0.１％ＴＦＡをバッファーとして使用し、
３０分で０〜１００％のアセトニトリルグラジエント溶
媒系を使用、ＵＶ検出：２１４ｎｍ、保持時間＝１６.3
分）。純粋なフラクションを混合し、凍結乾燥を行っ
て、８６ｍｇ（１６％）の目的のペプチドを、羊毛状の
（flocculent) 白色粉体として得た。 ＡＡＡ：Ａｓｎ／Ａｓｐ 0.88 (1) 、Ｔｈｒ 0.88 (1)
、Ｇｌｎ／Ｇｌｕ 2.02(2) 、Ｐｒｏ 1.01 (1) 、Ｇｌ
ｙ 1.01 (1) 、Ｖａｌ 0.90 (1) 、Ｉｌｅ 0.93(1) 、
Ｌｅｕ 1.00 (1) 、Ｔｙｒ 0.97 (1) 、Ｐｈｅ 1.94
(2) 、Ｌｙｓ 0.89(1) 、Ａｒｇ 1.01 (1) 。ＦＡＢ−
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）⁺ 計算値:1693.91 実測値:1694.60

【００４８】実施例２ シクロ^10,14 〔Ｎ−メチル−Ｐｈｅ¹ ，Ｇｌｕ¹⁰，Ａｌ
ａ¹¹，Ｌｅｕ¹³，Ｌｙｓ¹⁴〕モチリン−（１−１４）−
ペプチドアミド（ブタ）ビストリフルオロ酢酸塩 １ｇのＭＢＨＡレジン（１％架橋ジビニルベンゼン−ス
チレン：２００−４００メッシュサイズ；置換：0.２７
ｍｅｑ／ｇ）上に、ミリゲンモデル９６００ペプチド合
成機を使用して固相合成法によりポリペプチドの合成を
行った。全ての残渣をｔ−Ｂｏｃアミノ酸及びＤＩＣを
合成試薬に用いて結合した。側鎖保護基は以下のものを
用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｇｌｕ¹⁰（ＯＦｍ）、Ｇｌ
ｕ⁹ （ＯＢｚｌ）、Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）、Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−Ｚ）。Ｇｌｎの結合は、脱水
素化を抑制するため1.２等量のＨＯＢｔを使用した。ア
ミノ酸残基Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ¹ 、Ｖａｌ² 、Ｐｒｏ³ 、
Ｉｌｅ⁴ 、Ｐｈｅ⁵ 及びＬｙｓ¹⁴は二重に結合した（do
uble coupled)(それぞれ２時間）。残りのアミノ酸残基
は単独で結合した（single coupled）（それぞれ２時
間）。それぞれの結合において6.６７モル過剰のアミノ
酸を使用した。Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅを４等量のＢ
ＯＰ、４等量のＤＩＥＡ、及び４等量のＨＯＢｔを用い
て結合を行った。

【００４９】Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ¹ の結合後、Ｇ
ｌｕ¹⁰及びＬｙｓ¹⁴の側鎖ＯＦｍ及びＦｍｏｃ保護基
は、レジンを２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５０ｍｌを
用いて２分間処理することにより、それぞれ除去を行っ
た。レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。さら
に５０ｍｌの２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加え、レ
ジンを１５分間混合し、再び、レジンをＤＭＦで洗浄し
た（３×２５ｍｌ）。レジン結合ペプチドのピペリジニ
ウム塩を、２０％トリエチルアミン／ＤＭＦ溶液で１５
分間処理を行い、トリエチルアンモニウム塩に変換し
た。レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。ニン
ヒドリン試験は、遊離アミンを検出した。Ｌｙｓ¹⁴のア
ミノ基とＧｌｕ¹⁰のカルボキシル基の側鎖と側鎖の環化
は、レジンを２０ｍｌのＮＭＰに懸濁し、７２０ｍｇ
（６等量）のＢＯＰ及び２５０ｍｌ（６等量）のトリエ
チルアミンを添加することにより行われた。混合物を１
０時間攪拌した。試薬を除去し、レジンをＤＭＦで洗浄
した（３×２５ｍｌ）。レジン−結合ペプチドを再び７
２０ｍｇ（６等量）のＢＯＰ及び２５０ｍｌ（６等量）
のトリエチルアミン（２×１０時間）で処理を行った。
レジンをＤＭＦ（３×２５ｍｌ）及びＤＣＭ（３×２５
ｍｌ）で洗浄した。ニンヒドリン試験は、遊離アミンを
検出しなかった。レジンを真空下、一晩乾燥した。ペプ
チドをレジンから液体ＨＦ：アニソール（１０：１）を
用いて、−１０℃〜０℃にて１時間処理を行って切断し
た。ＨＦの真空除去後、ペプチドを１５％酢酸水溶液中
に抽出し、凍結乾燥を行い、２００ｍｇ（４５％）の薄
黄色の粉体を得た。

【００５０】得られた粗ペプチドの精製を、三本のＣ−
１８カラム（２５０×２０ｍｍ、１５μ、Vydac)を連続
使用して分取ＨＰＬＣ（Waters Delta-Prep 3000) によ
り行った。溶媒系は、0.1 ％ＴＦＡ：アセトニトリルを
３０分グラジエント（２０〜６０％アセトニトリル）を
使用し、２０ｍｌ／分の流速で２３０ｎｍのＵＶ検出に
より行った。各フラクションの純度を分析ＨＰＬＣによ
り評価した（0.１％ＴＦＡをバッファーとして使用し、
３０分で０〜１００％のアセトニトリルグラジエント溶
媒系を使用、ＵＶ検出：２１４ｎｍ、保持時間＝１8.２
分）。純粋なフラクションを混合し、凍結乾燥を行っ
て、４０ｍｇ（１０％）の目的のペプチドを、羊毛状の
（flocculent) 白色粉体として得た。 ＡＡＡ：Ｔｈｒ 1.00 (1) 、Ｇｌｎ／Ｇｌｕ 1.10 (1)
、Ｐｒｏ 1.10 (1) 、Ｇｌｙ 1.10 (1) 、Ａｌａ 1.10
(1) 、Ｖａｌ 0.87 (1) 、Ｉｌｅ 1.00 (1) 、Ｌｅｕ
2.20 (2) 、Ｔｙｒ 1.10 (1) 、Ｐｈｅ 1.10 (1) 、Ｌ
ｙｓ 2.20 (2) 。ＦＡＢ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）⁺ 計算値:1
621.0 実測値:1621.0

【００５１】実施例３ シクロ^10,14 〔Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｐｈｅ¹ ，Ｇ
ｌｕ¹⁰，Ａｌａ¹¹，Ｌｅｕ¹³，Ｌｙｓ¹⁴〕モチリン−
（１−１４）−ペプチドアミド（ブタ）ビストリフルオ
ロ酢酸塩 １ｇのＭＢＨＡレジン（１％架橋ジビニルベンゼン−ス
チレン：２００−４００メッシュサイズ；置換：0.２７
ｍｅｑ／ｇ）上に、ミリゲンモデル９６００ペプチド合
成機を使用して固相合成法によりポリペプチドの合成を
行った。全ての残渣をｔ−Ｂｏｃアミノ酸及びＤＩＣを
合成試薬に用いて結合した。側鎖保護基は以下のものを
用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｇｌｕ¹⁰（ＯＦｍ）、Ｇｌ
ｕ⁹ （ＯＢｚｌ）、Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）、Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）、Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−Ｚ）。Ｇｌｎの結合は、脱水
素化を抑制するため1.２等量のＨＯＢｔを使用した。ア
ミノ酸残基Ｐｈｅ¹ 、Ｖａｌ² 、Ｐｒｏ³ 、Ｉｌｅ⁴ 、
Ｐｈｅ⁵ 及びＬｙｓ¹⁴は二重に結合した（double coupl
ed)(それぞれ２時間）。残りのアミノ酸残基は単独で結
合した（single coupled）（それぞれ２時間）。それぞ
れの結合において6.６７モル過剰のアミノ酸を使用し
た。

【００５２】Ｂｏｃ−Ｐｈｅ¹ の結合後、Ｇｌｕ¹⁰及び
Ｌｙｓ¹⁴の側鎖ＯＦｍ及びＦｍｏｃ保護基は、レジンを
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液５０ｍｌを用いて２分間
処理することにより、それぞれ除去を行った。レジンを
ＤＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。さらに５０ｍｌの
２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液を加え、レジンを１５分
間混合し、再び、レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２５
ｍｌ）。レジン結合ペプチドのピペリジニウム塩を、２
０％トリエチルアミン／ＤＭＦ溶液で１５分間処理を行
い、トリエチルアンモニウム塩に変換した。レジンをＤ
ＭＦで洗浄した（３×２５ｍｌ）。ニンヒドリン試験
は、遊離アミンを検出した。Ｌｙｓ¹⁴のアミノ基とＧｌ
ｕ¹⁰のカルボキシル基の側鎖と側鎖の環化は、レジンを
２０ｍｌのＮＭＰに懸濁し、７２０ｍｇ（６等量）のＢ
ＯＰ及び２５０ｍｌ（６等量）のトリエチルアミンを添
加することにより行われた。混合物を１０時間攪拌し
た。試薬を除去し、レジンをＤＭＦで洗浄した（３×２
５ｍｌ）。レジン−結合ペプチドを再び７２０ｍｇ（６
等量）のＢＯＰ及び２５０ｍｌ（６等量）のトリエチル
アミン（２×１０時間）で処理を行った。レジンをＤＭ
Ｆ（３×２５ｍｌ）及びＤＣＭ（３×２５ｍｌ）で洗浄
した。ニンヒドリン試験は、遊離アミンを検出しなかっ
た。Ｐｈｅ¹ のｔ−ＢＯＣ基を５０ｍｌの５０％ＴＦＡ
／ＤＣＭ溶液（アニソール（５％）を捕集剤として含
む）を用いてレジンを処理することにより除去した（１
×２分及び１×１５分）。

【００５３】レジンをＤＣＭ（２×５０ｍｌ）、２０％
ＤＩＥＡ／ＤＣＭ（２×５０ｍｌ）、２０％ＤＩＥＡ／
ＤＭＦ（１×５０ｍｌ）、及び最後にＤＭＦ（３×５０
ｍｌ）で洗浄した。レジンを２０ｍｌのＤＭＦに懸濁し
た。この懸濁液に、５ｍｌのヨウ化メチル及び0.５ｇの
炭酸ナトリウムを加え、混合物を２０時間攪拌した。レ
ジンを濾過し、ＤＭＦ（５×５０ｍｌ）及びＤＣＭ（５
×５０ｍｌ）で洗浄し、一晩真空乾燥を行った。レジン
を真空下、一晩乾燥した。ペプチドをレジンから液体Ｈ
Ｆ：アニソール（１０：１）を用いて、−１０℃〜０℃
にて１時間処理を行って切断した。ペプチドを１５％酢
酸水溶液中に抽出し、凍結乾燥を行い、４００ｍｇ（８
７％）の薄黄色の粉体を得た。得られた粗ペプチドの精
製を、三本のＣ−１８カラム（２５０×２０ｍｍ、１５
μ、Vydac)を連続使用して分取ＨＰＬＣ（Waters Delta
-Prep 3000) により行った。溶媒系は、0.1 ％ＴＦＡ：
アセトニトリルを３０分グラジエント（２０〜６０％ア
セトニトリル）を使用し、２０ｍｌ／分の流速で２３０
ｎｍのＵＶ検出により行った。各フラクションの純度を
分析ＨＰＬＣにより評価した（0.１％ＴＦＡをバッファ
ーＡとして使用し、３０分で０〜１００％のアセトニト
リルグラジエント溶媒系を使用、ＵＶ検出：２１４ｎ
ｍ、保持時間＝１7.６分）。純粋なフラクションを混合
し、凍結乾燥を行って、５６ｍｇ（１２％）の目的のペ
プチドを、羊毛状の（flocculent) 白色粉体として得
た。 ＡＡＡ：Ｔｈｒ 0.96 (1) 、Ｇｌｎ／Ｇｌｕ 2.10 (2)
、Ｐｒｏ 1.03 (1) 、Ｇｌｙ 1.08 (1) 、Ｖａｌ 0.11
(1) 、Ｉｌｅ 1.00 (1) 、Ｌｅｕ 2.15 (2) 、Ｔｙｒ
1.03 (1) 、Ｐｈｅ 1.06 (1) 、Ｌｙｓ 2.06 (2) 。Ｆ
ＡＢ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）⁺ 計算値:1706.0 実測値:1705.
8

【００５４】実施例４ ２％ブタ腎臓ホモジネート中におけるインビトロ安定性
試験 ほとんどの小さい直線状ポリペプチドと同様に、モチリ
ンは腎臓の刷子縁（brush border) によって代謝される
と考えられる。従って、腎臓ホモジネートは本発明のペ
プチドの比インビボ生物安定性を評価するモデルシステ
ムとして選択された。研究に使用した全てのペプチドは
ブタ腎臓内で25℃でインキュベートを行った（Pel Free
ze, Inc., Rogers, Arkansas)(２％ｗ／ｖ；最終体積＝
４ｍｌ；バッファー＝ＨＥＰＥＳ ｐＨ7.０）。初期基
質濃度及び初期標品（Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ）濃度は、両方
共0.５ｍｇ／ｍｌであった。適するインキュベーション
時間及びサンプリング間隔を決定するために、各ペプチ
ドにつき、それぞれ２回実験を行った。第１回めの実験
は、ペプチドの安定性をみるためにラフに行った。全て
のサンプリングは２回行った。試料体積は１８０μｌで
あった。

【００５５】試料の洗浄を、２０μｌの１００％ＴＣＡ
（最終体積＝２００μｌ；最終ＴＣＡ濃度＝１０％）を
用いて行った。試料の平衡を確実にするために５〜１０
秒間混合し、沈殿したタンパクを遠心分離を行った。自
動注入装置、５μ Vydac C-18 分析カラム及び２１４ｎ
ｍにセットしたWaters 481 UV 検出器を有するWatersHP
LC システムを使用して分析を行った。注入体積は８０
μl であった。初期溶媒条件は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中の
２０％アセトニトリル／８０％（0.１％）ＴＦＡ溶液で
あり、３５分グラジエントを行い、１ｍｌ／分の速度で
６３％アセトニトリル／３７％（0.１％）ＴＦＡとなる
ように行った。ポリペプチド基質及び代謝ピークの、内
標準に対する比率をとり、二つの試料の比率の平均を取
った。ペプチド基質の平均比率をパーセントで表し、時
間に対してプロットした。第一次速度をデータ処理に用
いた。基質の消失する割合をEnzfitter program(Biosof
t)を用いて計算した。比半減期を次の関係式から決定し
た。 t_1/2 = 0.693/k

【００５６】実施例５ モチリン受容体結合親和性の評価 本発明のペプチドのモチリン受容体結合親和性を、Borm
ans, Peeters and Vantrappen, Regul. Pept., 15, 143
-153 (1986) に記載の一般的方法を用いて評価した。ウ
サギの平滑筋膜腔（rabbit antral smooth muscle memb
rane) に結合した[¹²⁵Ｉ−Ｔｙｒ⁷,Ｎｌｅ¹³] モチリン
（ブタ）を置換するペプチドの能力を、１０^-11 〜１０
^-4Ｍの濃度で二回（各回二度行った）試験することによ
り評価した。ラベルの５０％を置換する濃度（ＩＣ₅₀）
は、ラベルされたモチリン及び非ラベルされたモチリン
が結合する単一クラスのモチリン受容体が同等の親和性
を有し、非協同性であるという仮定を行って、置換を表
す式にデータを挿入することにより得た。挿入は、ＳＡ
Ｓ−ソフトウェアの反復最小二乗法を用いて行った（SA
S Institute, Inc., Cary, NC, USA) 。一連の比較実験
から、モチリン自身の脱離（dissociation) 定数は、0.
７５ｎＭ（ｐＫｄ＝9.１２）であると計算され、この値
は全ての計算に使用された。５０％のラベル置換を起こ
す濃度は、その負対数を用いて表される（ｐＩＣ₅₀）。

【００５７】実施例６ ウサギ十二指腸平滑筋条片組織浴アッセイ ウサギの十二指腸断片の収縮性応答を、Depoortere et
al., J. Gastrointestinal Motility, 1, 150-159 (198
9)の方法に従って、組織浴中で等張的に測定した。実験
のプロトコールは、１時間の平衡時間；１０^-4Ｍのアセ
チルコリンのチャレンジ、その後の洗浄期間；（最後
に）１０^-7Ｍのモチリンを添加した化合物の累積投与量
−応答曲線；及び最後に１０^-4Ｍのアセチルコリン、か
らなる。もし、１０^-4Ｍのアセチルコリンに対する最終
応答が最初の応答より５％より大きく異なった場合に
は、その結果は破棄した。化合物は、１０^-11 〜１０^-4
Ｍの間の濃度で試験を行った。モチリンに対する最大の
応答の５０％に相当する点（Ｅ _max ) を、データ点を
式：Ｅ＝Ｅ_max （１＋ＥＣ₅₀／〔Ｌ〕）に挿入して決定
した。弱い活性の化合物に対しては、１０^-7Ｍモチリン
に対する９０％の応答をＥ _max として使用した。５０％
の応答を与える投与量は負対数（ｐＥＣ₅₀）を用いて表
される。

【００５８】実施例７ イヌ胃腸管における収縮活性 雌雄両方の雑種犬を、ペントバルビタールナトリウム塩
６５ｍｇ／ｋｇを静脈投与を行い麻酔を行った。腹部の
正中線の切開を行った。十二指腸断片を置き、断片への
末端動脈を確認し、適当な大きさの最も至近の動脈の脂
肪及び筋膜を拭って清浄にした。適する直径の針に角度
をつけ、チップを清浄にした動脈内に挿入した。針を動
脈内に血管の痙攣が収まるまで約３０秒間保持し、次
に、カテーテルを動脈内に挿入し、000 絹縫合糸で縫合
した。細いポリエチレンカテーテル（１０−１５ｃｍ）
を、一方の端部に挿入されている針と共に、もう一方の
端部の位置で切断した。針の端を、三つ口ストップコッ
クに固定し、カテーテルを１０ｍＭのグルコースを含有
するヘパリン化したクレブスリンゲル重曹液で満たし
た。大量のクレブス液（空気を含まない）を動脈カテー
テル内に注入し、断片内のブランチング(blanching) の
分配を記録した。もし、面積が過度に広い場合には、そ
の部分への循環が保持される限り、動脈の側副枝は結紮
されていた。循環筋肉収縮がベックマンR611ディノグラ
フ(Beckman R611 dynograph)で記録できるように曲げ
た、バス（Bass) 型のストレインゲージを漿膜に縫合し
た。銀ワイヤー電極をストレインゲージの両方のサイド
上の漿膜下に挿入し、刺激単体ユニットを通じてグラス
S88 電気刺激装置に接続した。電場刺激を、４０Ｖ、0.
5 ｍｓ及び５ｐｐｓという条件で行い、ペン記録計の振
幅を収縮応答が得られるようにセットした。

【００５９】全ての注入するペプチドはクレブス液に溶
解し、連続希釈を行って、どの濃度においても注入され
る最大体積が１ｍｌとなるように調製した。ストックの
クレブス液を除く全ての溶液を、実験の日中氷上に保持
し、その日の終わりには廃棄した。投与量−応答曲線を
得るために、約１ｍｌのヘパリン化したクレブス液を最
初にサイトに注入してフラッシュ（flush)コントロール
を得た。ペプチドアゴニスト（１ｍｌのクレブス液でフ
ラッシュした体積１ｍｌのもの）を、最大の振幅が得ら
れるまで指数的に増加させて注入した。注入サイトは次
に0.１％ＢＳＡを含むクレブス液でフラッシュし、動脈
内に残る全てのペプチドを置換した。モチリン受容体に
作用するペプチドに対しては、これらはタキフィラキシ
ーを誘導するので最大投与量を越えて注入しないように
注意が必要であった。従って、応答が明らかになるため
に、0.3 または0.5 ｌｏｇ単位の増加が使用された。投
与量−応答を決定するために使用されたサイトは、１／
２〜１時間毎であった。各サイトにおける電場刺激に対
する更正応答振幅を測定し、該サイトに対し１００％と
した。各投与量におけるアゴニストに対する応答振幅を
測定し、更正応答の％として計算し、濃度に対してプロ
ットした。応答のＥＤ₅₀は、５０％の更正応答を得るの
に必要なアゴニストの量を表している。このことは、応
答及び活性の効力並びに投与量が明確に区別できるもの
ではないことを反映している。

【００６０】

【表１】 表１ 結合及び収縮実験におけるモチリン受容体アゴニストの活性 化合物 ｐＩＣ₅₀ ｐＥＣ₅₀ [Leu¹³]pMOT(1-22) 9.18 8.13 [Leu¹³]pMOT(1-14) 8.36 7.55 シクロ ^10,14[Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 8.69 7.33 シクロ ^10,14[Asp¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 8.82 7.77 シクロ ^10,14[Lys¹⁰,Leu¹³,Asp¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 8.83 7.37 シクロ ^10,14[Glu¹⁰,Leu¹³,Orn¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 8.59 7.63 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.96 7.69 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ D-Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 9.18 7.89 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 9.20 7.96 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ D-Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.91 7.89 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Lys¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.76 7.81 シクロ ^10,14[N-Me-D-Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 8.26 6.87 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 8.61 7.38 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹², Leu¹³,Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.99 7.68

【００６１】

【表２】 表１（続き） 結合及び収縮実験におけるモチリン受容体アゴニストの活性 化合物 ｐＩＣ₅₀ ｐＥＣ₅₀ シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 8.65 6.98 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 9.24 7.95 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.75 7.72 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.54 7.72 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.81 7.34 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 8.87 7.76 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 9.04 8.73 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 7.94 7.89 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹², Leu¹³,Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 7.90 7.02

【００６２】

【表３】 表２ ２％ブタ腎臓ホモジネート中のモチリン受容体アゴニストの半減期 化合物 Ｔ_1/2 （分） [Leu¹³]pMOT(1-22) 30.2 [Leu¹³]pMOT(1-14) 7.5 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 21 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ D-Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 437 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 16 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ >200 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹², Leu¹³,Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 39 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 103 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 31 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴, Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 413 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 85

【００６３】

【表４】 表２（続き） ２％ブタ腎臓ホモジネート中のモチリン受容体アゴニストの半減期 化合物 Ｔ_1/2 （分） シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 49 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 267 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 35

【００６４】

【表５】 表３ イヌ胃腸管内におけるモチリン受容体アゴニストの活性 化合物 ＥＤ₅₀ ^* [Leu¹³]pMOT(1-22) 0.04 [Leu¹³]pMOT(1-14) 1.54 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.04 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴ D-Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.04 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.002 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴, D-Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.42 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹², Leu¹³,Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 1.00 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 0.36 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.03 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³,Lys¹⁴] pMOT(1-14)アミト゛ 0.15 シクロ ^10,14[Me-N-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 0.01 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³ Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.30

【００６５】

【表６】 表３（続き） イヌ胃腸管内におけるモチリン受容体アゴニストの活性 化合物 ＥＤ₅₀ ^* シクロ ^10,14[Me₃N ⁺ Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.40 シクロ ^10,14[Me₃N⁺ Phe¹,Glu¹⁰,Ala¹¹,Leu¹³, Lys¹⁴,Lys¹⁵]pMOT(1-15)アミト゛ 0.34 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Glu¹⁰,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 0.04 シクロ ^10,14[N-Me-Phe¹,Asp¹⁰,Ala¹¹,D-Arg¹²,Leu¹³, Lys¹⁴]pMOT(1-14)アミト゛ 3.00 ^* ＥＤ₅₀はナノモルで表されている。

【００６６】多数の本発明の実施例が記載されている
が、本発明の観点から逸脱せずに本発明を使用する他の
実施態様を与えるように基本的な部分を変更することが
可能であることは明らかである。そのような全ての変更
及び改変は、実施例により示された特別な実施態様より
も特許請求の範囲に記載される本発明の観点の中に含ま
れるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マーク ジェイ メイシーラグ アメリカ合衆国 ニュージャージー州 08876ブランチバーグ セニカ トレイル ８ (72)発明者 ユン キム ディーテルバック アメリカ合衆国 ニュージャージー州 08812ダネリン リンカーン ストリート 612 (72)発明者 ジェームズ フローランス アメリカ合衆国 ニュージャージー州 07834デンヴィル シダー レイク ウェ スト 100

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 光学活性異性体を含む、以下の式(1) で
   表される胃腸運動刺激活性を示す環状ポリペプチドまた
   はその薬学的に許容される酸付加塩。 【化１】 式中、基Ａ及び基Ｄは結合して環状構造を形成し、Ｒ₁
   は低級アルキルを表し、Ｒ₂ は水素または低級アルキル
   を表し、Ｒ₃ は水素または低級アルキルを表し、Ｒ₄ は
   フェニルまたは置換フェニルを表し（フェニル基はハロ
   ゲン、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選
   択される一つまたはそれ以上の置換基で置換されていて
   もよい）、Ｒ₅ はＯＨまたはＮＨ₂ を表し、Ａは、Ｌ−
   グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−
   オルニチン、及びＬ−2,4 −ジアミノ酪酸からなる群か
   ら選択され、ＢはＬ−アラニン又はＬ−グルタミンであ
   り、ＣはＬ−アルギニン又はＤ−アルギニンであり、Ｄ
   はＬ−リジン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−2,4 −ジアミノ酪
   酸、Ｌ−グルタミン酸及びＬ−アスパラギン酸からなる
   群から選択され、Ｅは基Ｄ及び基Ｒ₅ 間の直接結合であ
   るか、又はＬ−リジン或いはＤ−リジンであり、ｍは０
   又は１であり、記号＊は不斉炭素原子を表し、Ｄ又はＬ
   配置であってもよい。（ただし、(a) ＡがＬ−グルタミ
   ン酸又はＬ−アスパラギン酸である場合には、ＤはＬ−
   リジン、Ｌ−オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸で
   あり、または (b)ＡがＬ−リジン、Ｌ−オルニチン又は
   Ｌ−2,4 −ジアミノ酪酸である場合には、ＤはＬ−グル
   タミン酸又はＬ−アスパラギン酸である。）
2. 【請求項２】 光学活性異性体を含む、以下の式 (1)で
   表される環状ポリペプチドまたはその薬学的に許容され
   る酸付加塩を、哺乳類に治療上有効な量を投与すること
   を含む、哺乳類の胃腸運動刺激の基礎レベルが低下した
   症状を治療する方法。 【化２】 式中、基Ａ及び基Ｄは結合して環状構造を形成し、Ｒ₁
   は低級アルキルを表し、Ｒ₂ は水素または低級アルキル
   を表し、Ｒ₃ は水素または低級アルキルを表し、Ｒ₄ は
   フェニルまたは置換フェニルを表し（フェニル基はハロ
   ゲン、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選
   択される一つまたはそれ以上の置換基で置換されていて
   もよい）、Ｒ₅ はＯＨまたはＮＨ₂ を表し、Ａは、Ｌ−
   グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−
   オルニチン、及びＬ−2,4 −ジアミノ酪酸からなる群か
   ら選択され、ＢはＬ−アラニン又はＬ−グルタミンであ
   り、ＣはＬ−アルギニン又はＤ−アルギニンであり、Ｄ
   はＬ−リジン、Ｌ−オルニチン、Ｌ−2,4 −ジアミノ酪
   酸、Ｌ−グルタミン酸及びＬ−アスパラギン酸からなる
   群から選択され、Ｅは基Ｄ及び基Ｒ₅ 間の直接結合であ
   るか、又はＬ−リジン或いはＤ−リジンであり、ｍは０
   又は１であり、記号＊は不斉炭素原子を表し、Ｄ又はＬ
   配置であってもよい。（ただし、(a) ＡがＬ−グルタミ
   ン酸又はＬ−アスパラギン酸である場合には、ＤはＬ−
   リジン、Ｌ−オルニチン又はＬ−2,4 −ジアミノ酪酸で
   あり、または (b)ＡがＬ−リジン、Ｌ−オルニチン又は
   Ｌ−2,4 −ジアミノ酪酸である場合には、ＤはＬ−グル
   タミン酸又はＬ−アスパラギン酸である。）