JPH07149792A - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JPH07149792A JPH07149792A JP6211216A JP21121694A JPH07149792A JP H07149792 A JPH07149792 A JP H07149792A JP 6211216 A JP6211216 A JP 6211216A JP 21121694 A JP21121694 A JP 21121694A JP H07149792 A JPH07149792 A JP H07149792A
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- JP
- Japan
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- peptide
- resin
- agent
- phe
- mild
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
(57)【要約】
【構成】一般式Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｘで示されるペプチ
ド。（式中、Ｘは、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏまたはＬｅ
ｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2 を表わす。） 【効果】温和なモルヒネ様鎮痛活性を有し、医薬品とし
て期待できる。
ド。（式中、Ｘは、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＰｒｏまたはＬｅ
ｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2 を表わす。） 【効果】温和なモルヒネ様鎮痛活性を有し、医薬品とし
て期待できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オピオイドレセプター
に結合性を有し、故に鎮痛麻酔剤や温和な催眠剤、温和
な覚惺剤、抗麻酔剤または抗ショック剤として期待され
る新規ペプチドに関する。
に結合性を有し、故に鎮痛麻酔剤や温和な催眠剤、温和
な覚惺剤、抗麻酔剤または抗ショック剤として期待され
る新規ペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】モルヒネ等の鎮痛麻酔薬（オピエート）
の作用機構の研究から脳はじめ各種臓器には、これらの
物質が特異的に結合するオピオイドレセプターの存在す
ることが見出された。さらに動物体内にはこのレセプタ
ーに結合し鎮痛作用を示すペプチド類が存在することが
見出され内因性オピオイドペプチドと総称されている。
これらペプチドは鎮痛作用のみならず各種ホルモンの分
泌調節や摂食の調節にも関与することが示されている。
の作用機構の研究から脳はじめ各種臓器には、これらの
物質が特異的に結合するオピオイドレセプターの存在す
ることが見出された。さらに動物体内にはこのレセプタ
ーに結合し鎮痛作用を示すペプチド類が存在することが
見出され内因性オピオイドペプチドと総称されている。
これらペプチドは鎮痛作用のみならず各種ホルモンの分
泌調節や摂食の調節にも関与することが示されている。
【０００３】一方、オピエートレセプターに親和性を有
するがそれ自身鎮痛作用を示さず、モルヒネ等鎮痛麻酔
薬の作用を妨げる物質はオピエートアンタゴニストと呼
ばれており、このような物質としてはナロクソンなどの
合成化合物がある。ナロクソンやナルトレクソンは各種
の原因によるショック症状を改善する効果や脳の発育を
促進する効果を有することが知られている。最近コーヒ
ー中に天然界で初めてオピエートアンタゴニストの存在
することが見出され、この物質はカフェインと共にコー
ヒーのもつ覚惺作用に関与する可能性が指摘されてい
る。即ち、オピエートレセプターに結合性を有する物質
はオピオイドまたはオピエートアンタゴニストであり、
それらは上記の如き生理作用を示す有用物質である。
するがそれ自身鎮痛作用を示さず、モルヒネ等鎮痛麻酔
薬の作用を妨げる物質はオピエートアンタゴニストと呼
ばれており、このような物質としてはナロクソンなどの
合成化合物がある。ナロクソンやナルトレクソンは各種
の原因によるショック症状を改善する効果や脳の発育を
促進する効果を有することが知られている。最近コーヒ
ー中に天然界で初めてオピエートアンタゴニストの存在
することが見出され、この物質はカフェインと共にコー
ヒーのもつ覚惺作用に関与する可能性が指摘されてい
る。即ち、オピエートレセプターに結合性を有する物質
はオピオイドまたはオピエートアンタゴニストであり、
それらは上記の如き生理作用を示す有用物質である。
【０００４】１９７９年にテシュマッヘル(Teschmache
r) らはモルモット回腸縦走筋神経叢収縮抑制試験によ
り、乳製品を検索したところ、牛乳カゼインペプトンか
らオピオイド活性のあるβ−カゾモルフィン（ヘプタペ
プチド）を単離した(Hoppe-Seyler's., Z. Physiol. Ch
em., 360, 1211 及び1217(1979)参照）。その後、この
β−カゾモルフィン７（ヘプタペプチド）の構造を基に
研究され、β−カゾモルフィン６、β−カゾモルフィン
５及びβ−カゾモルフィン４アミド（β−カゾモルフィ
ン７の約１００倍の活性を有する。）が合成されるに至
った(Chang, K. J. etal., Science 212, 75(1981)；同
Life Science., 30 1547(1982) ）。また、ジオドロウ
(Zioudrou)らは、牛乳α−カゼインのペプシン分解物中
にオピオイド活性を有するものの存在を認めた。これは
α−カゼインエクソルフィンと呼ばれる。(J. Biol. Ch
em., 254, 2446(1979)）。
r) らはモルモット回腸縦走筋神経叢収縮抑制試験によ
り、乳製品を検索したところ、牛乳カゼインペプトンか
らオピオイド活性のあるβ−カゾモルフィン（ヘプタペ
プチド）を単離した(Hoppe-Seyler's., Z. Physiol. Ch
em., 360, 1211 及び1217(1979)参照）。その後、この
β−カゾモルフィン７（ヘプタペプチド）の構造を基に
研究され、β−カゾモルフィン６、β−カゾモルフィン
５及びβ−カゾモルフィン４アミド（β−カゾモルフィ
ン７の約１００倍の活性を有する。）が合成されるに至
った(Chang, K. J. etal., Science 212, 75(1981)；同
Life Science., 30 1547(1982) ）。また、ジオドロウ
(Zioudrou)らは、牛乳α−カゼインのペプシン分解物中
にオピオイド活性を有するものの存在を認めた。これは
α−カゼインエクソルフィンと呼ばれる。(J. Biol. Ch
em., 254, 2446(1979)）。
【０００５】人乳カゼインからも同様のペプチドが生成
すれば、これを摂取することがヒト、特に乳児にとって
望ましいことであろう。又、他の食品タンパク質、例え
ば小麦グルテン、大豆タンパク中にも外在性のオピオイ
ド活性を示すペプチドが存在する可能性のあることが示
されている。
すれば、これを摂取することがヒト、特に乳児にとって
望ましいことであろう。又、他の食品タンパク質、例え
ば小麦グルテン、大豆タンパク中にも外在性のオピオイ
ド活性を示すペプチドが存在する可能性のあることが示
されている。
【０００６】本発明者らは、人乳タンパク質、牛乳タン
パク質、大豆タンパク質中に存在するチロシン残基を含
むフラグメントペプチドを分離又は合成的に得、オピオ
イド活性のスクリーニングを行なったところ、新規な活
性ペプチドを発見し、本発明を完成するに至った。
パク質、大豆タンパク質中に存在するチロシン残基を含
むフラグメントペプチドを分離又は合成的に得、オピオ
イド活性のスクリーニングを行なったところ、新規な活
性ペプチドを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】鎮痛剤、催眠剤、覚惺
剤、抗麻酔剤または抗ショック剤等の医薬として使用可
能な新規ペプチドの開発およびその製造が期待されてい
る。
剤、抗麻酔剤または抗ショック剤等の医薬として使用可
能な新規ペプチドの開発およびその製造が期待されてい
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、一般式Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ−Ｘで示されるペプチドを新規に製造する
ことに成功し、かつこれら新規ペプチドがオピオイド活
性を有し、前記医薬への使用が期待できることを見出
し、この発見に基づいて本発明を完成するに至った。
ｙｒ−Ｇｌｙ−Ｘで示されるペプチドを新規に製造する
ことに成功し、かつこれら新規ペプチドがオピオイド活
性を有し、前記医薬への使用が期待できることを見出
し、この発見に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００９】上記一般式中、Ｘは、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏまたはＬｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2を表わす。
ｒｏまたはＬｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2を表わす。
【００１０】本発明の新規ペプチドは、例えばタンパク
質の酵素分解物よりレセプターアッセイ法による活性試
験によりラット脳オピオイドレセプターに結合性を有す
るペプチドを後述されるような液体クロマトグラフィー
操作で抽出分離すればよい。あるいは、これらに基づ
き、従来慣用されるペプチド合成法を利用し構成アミノ
酸を順次結合させて化学合成することもできる。本発明
の新規ペプチドを構成するアミノ酸は、Ｌ−体、Ｄ−体
のいずれであってもよい。本発明の新規ペプチドは後述
の実施例に基づき、さらに慣用のペプチド合成法を利用
して（例えば泉屋ら著、合成化学シリーズ「ペプチド合
成」丸善（株）発行、昭和５０年参照。）製造すること
ができる。保護基による保護方法あるいはその脱離方法
についても同様である。本発明の新規ペプチドのうちア
ミド誘導体は慣用法、例えばＣ末端となるアミノ酸の代
わりにそのアミドを使用して同様にペプチド合成を行う
方法あるいは対応するペプチドエステルをアンモニアで
処理してアミド化する方法によって製造することができ
る。
質の酵素分解物よりレセプターアッセイ法による活性試
験によりラット脳オピオイドレセプターに結合性を有す
るペプチドを後述されるような液体クロマトグラフィー
操作で抽出分離すればよい。あるいは、これらに基づ
き、従来慣用されるペプチド合成法を利用し構成アミノ
酸を順次結合させて化学合成することもできる。本発明
の新規ペプチドを構成するアミノ酸は、Ｌ−体、Ｄ−体
のいずれであってもよい。本発明の新規ペプチドは後述
の実施例に基づき、さらに慣用のペプチド合成法を利用
して（例えば泉屋ら著、合成化学シリーズ「ペプチド合
成」丸善（株）発行、昭和５０年参照。）製造すること
ができる。保護基による保護方法あるいはその脱離方法
についても同様である。本発明の新規ペプチドのうちア
ミド誘導体は慣用法、例えばＣ末端となるアミノ酸の代
わりにそのアミドを使用して同様にペプチド合成を行う
方法あるいは対応するペプチドエステルをアンモニアで
処理してアミド化する方法によって製造することができ
る。
【００１１】本発明の新規ペプチドを有効成分として鎮
痛剤、催眠剤あるいは覚惺剤、抗麻酔剤、抗ショック剤
として使用するときには、遊離形または製薬上容認され
る無毒性の塩および酸付加塩とすることができる。本発
明において、製薬上容認しうる無毒性塩には、一般に使
用されている有機および無機の酸付加塩、例えば塩酸、
硫酸、スルホン酸、クエン酸、リン酸、安息香酸による
付加塩を採用すればよい。また、一方、Ｎａ，Ｋなどの
アルカリ金属塩やアンモニウム塩が含まれる。
痛剤、催眠剤あるいは覚惺剤、抗麻酔剤、抗ショック剤
として使用するときには、遊離形または製薬上容認され
る無毒性の塩および酸付加塩とすることができる。本発
明において、製薬上容認しうる無毒性塩には、一般に使
用されている有機および無機の酸付加塩、例えば塩酸、
硫酸、スルホン酸、クエン酸、リン酸、安息香酸による
付加塩を採用すればよい。また、一方、Ｎａ，Ｋなどの
アルカリ金属塩やアンモニウム塩が含まれる。
【００１２】本発明の新規ペプチドはヒトを包含する哺
乳動物に対する鎮痛剤あるいは催眠剤として有効であ
り、例えば胆石疝痛、腎石疝痛、癌などの痛み、術後期
における痛みなど種々の苦痛の除去のみならず、その催
眠作用により催眠薬などとしても有効である。一方、オ
ピエートアンタゴニストは麻酔解除や各種のショック症
状の改善に使用される薬剤として有効である。
乳動物に対する鎮痛剤あるいは催眠剤として有効であ
り、例えば胆石疝痛、腎石疝痛、癌などの痛み、術後期
における痛みなど種々の苦痛の除去のみならず、その催
眠作用により催眠薬などとしても有効である。一方、オ
ピエートアンタゴニストは麻酔解除や各種のショック症
状の改善に使用される薬剤として有効である。
【００１３】投与に際しては、経口投与として錠剤、カ
プセル剤またはエリキシル剤のような調剤でまたは非経
口投与として無菌溶剤液または懸濁液剤で処方すること
もできる。また、生理学的に認められるベヒクル、担
体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤などとと
もに一般に認められた製剤実施に要求される単位用形態
で混和、投与することももちろんできる。これらの組成
物または製造における活性物質の使用量は指示された範
囲の適当な用量が得られるようにするものである。有効
成分の投与量は患者の病気の重さ、体重および年令ある
いはその他の要因を考慮して決められる。
プセル剤またはエリキシル剤のような調剤でまたは非経
口投与として無菌溶剤液または懸濁液剤で処方すること
もできる。また、生理学的に認められるベヒクル、担
体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤などとと
もに一般に認められた製剤実施に要求される単位用形態
で混和、投与することももちろんできる。これらの組成
物または製造における活性物質の使用量は指示された範
囲の適当な用量が得られるようにするものである。有効
成分の投与量は患者の病気の重さ、体重および年令ある
いはその他の要因を考慮して決められる。
【００１４】本明細書における略号は次の如くである。
Ｔｙｒ：チロシン、Ｐｒｏ：プロリン、Ｐｈｅ：フェニ
ルアラニン、Ｓｅｒ：セリン、Ｇｌｙ：グリシン、Ｌｅ
ｕ：ロイシン、Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル、
Ｂｚｌ：ベンジル、Ｃｌ2 −Ｂｚｌ：２，６−ジクロル
ベンジル、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＯＤＳ：オクタ
デシルシラン、ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール、Ｔｏｓ：トシル、ＤＣＣＤ：ジシクロヘキシル
カルボジイミド。
Ｔｙｒ：チロシン、Ｐｒｏ：プロリン、Ｐｈｅ：フェニ
ルアラニン、Ｓｅｒ：セリン、Ｇｌｙ：グリシン、Ｌｅ
ｕ：ロイシン、Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル、
Ｂｚｌ：ベンジル、Ｃｌ2 −Ｂｚｌ：２，６−ジクロル
ベンジル、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＯＤＳ：オクタ
デシルシラン、ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール、Ｔｏｓ：トシル、ＤＣＣＤ：ジシクロヘキシル
カルボジイミド。
【００１５】
【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明す
る。
る。
【００１６】参考例 Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ
−ＮＨ2 の合成 これはヒトβ−カゼインの４１番目から４４番目の配列
に相当するペプチドのアミド化物である。
−ＮＨ2 の合成 これはヒトβ−カゼインの４１番目から４４番目の配列
に相当するペプチドのアミド化物である。
【００１７】製造例 ジメチルフォルムアミドで洗浄した５ｇのベンズヒドリ
ルアミン樹脂（0.89mmole/g)に、樹脂のアミノ基の３当
量に相当するＢｏｃ−Ｐｈｅ，ＨＯＢｔ，ＤＣＣＤを少
量のジメチルアミドにそれぞれ溶解後、この順序で添加
し、室温にて一夜反応せしめた。反応後樹脂をジメチル
ホルムアミド、塩化メチレン、エタノールおよびメタノ
ールにて各々３回洗浄した。樹脂に含まれる未反応のア
ミノ基は樹脂を５０mlの１０％無水酢酸を含むピリジン
中にて５分間の振盪を２回行うことによってアセチル化
し、反応後樹脂を５０mlのエタノールおよび５０mlのメ
タノールによって各々２回洗浄しＢｏｃ−Ｐｈｅベンズ
ヒドリルアミン樹脂を得た。２．３ｇのＢｏｃ−Ｐｈｅ
−ベンズヒドリルアミン樹脂（２ｇのベンズヒドリルア
ミン樹脂に相当）を塩化メチレンにて４回洗浄後、５５
％ＴＦＡ、１０％アニソールを含む塩化メチレン中にて
２分間、および３０分間の振盪を行うことによって脱Ｂ
ｏｃ化を行った。樹脂は塩化メチレン、３３％ジオキサ
ンを含む塩化メチレン、および塩化メチレンにて各々３
回洗浄を行った後、１０％トリエチルアミンを含む塩化
メチレン中にて５分間振盪、中和し、塩化メチレンにて
３回の洗浄を行いＰｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂と
した。この樹脂をジメチルフォルムアミドにて３回洗浄
した後、少量のジメチルフォルムアミドに溶解した３当
量のＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ＨＯＢｔ，ＤＣＣＤを
この順序で添加し、室温にて５時間振盪、カップリング
反応を行った。反応後樹脂はジメチルフォルムアミド、
塩化メチレン、エタノール、メタノールにて各々３回洗
浄し、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−ベンズヒド
リルアミン樹脂を得た。ニンヒドリン反応にて未反応の
アミノ基がないことを確認した後、同様にＢｏｃ−Ｐｒ
ｏおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）をこの順序
でカップルさせ、Ｂｏｃ−Ｔyr（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）−Ｐ
ｒｏ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミ
ン樹脂を得た。
ルアミン樹脂（0.89mmole/g)に、樹脂のアミノ基の３当
量に相当するＢｏｃ−Ｐｈｅ，ＨＯＢｔ，ＤＣＣＤを少
量のジメチルアミドにそれぞれ溶解後、この順序で添加
し、室温にて一夜反応せしめた。反応後樹脂をジメチル
ホルムアミド、塩化メチレン、エタノールおよびメタノ
ールにて各々３回洗浄した。樹脂に含まれる未反応のア
ミノ基は樹脂を５０mlの１０％無水酢酸を含むピリジン
中にて５分間の振盪を２回行うことによってアセチル化
し、反応後樹脂を５０mlのエタノールおよび５０mlのメ
タノールによって各々２回洗浄しＢｏｃ−Ｐｈｅベンズ
ヒドリルアミン樹脂を得た。２．３ｇのＢｏｃ−Ｐｈｅ
−ベンズヒドリルアミン樹脂（２ｇのベンズヒドリルア
ミン樹脂に相当）を塩化メチレンにて４回洗浄後、５５
％ＴＦＡ、１０％アニソールを含む塩化メチレン中にて
２分間、および３０分間の振盪を行うことによって脱Ｂ
ｏｃ化を行った。樹脂は塩化メチレン、３３％ジオキサ
ンを含む塩化メチレン、および塩化メチレンにて各々３
回洗浄を行った後、１０％トリエチルアミンを含む塩化
メチレン中にて５分間振盪、中和し、塩化メチレンにて
３回の洗浄を行いＰｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂と
した。この樹脂をジメチルフォルムアミドにて３回洗浄
した後、少量のジメチルフォルムアミドに溶解した３当
量のＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ＨＯＢｔ，ＤＣＣＤを
この順序で添加し、室温にて５時間振盪、カップリング
反応を行った。反応後樹脂はジメチルフォルムアミド、
塩化メチレン、エタノール、メタノールにて各々３回洗
浄し、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−ベンズヒド
リルアミン樹脂を得た。ニンヒドリン反応にて未反応の
アミノ基がないことを確認した後、同様にＢｏｃ−Ｐｒ
ｏおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）をこの順序
でカップルさせ、Ｂｏｃ−Ｔyr（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）−Ｐ
ｒｏ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミ
ン樹脂を得た。
【００１８】このようにして得たテトラペプチドアミド
樹脂の半量を分取し１mlのアニソールを加えた後、２５
mlのフッ化水素中、０℃にて１時間の攪拌を行いペプチ
ドの樹脂からの脱離と保護基の除去を行った。フッ化水
素を除去した後、ペプチドおよび樹脂をエーテルにて洗
浄し、５mlのＴＦＡにてペプチドの抽出を行った。この
抽出液に５０mlのエーテルを加えることによりペプチド
を沈殿せしめ遠心にて回収、５mlの水に溶解し、アンモ
ニア水にてpHを８．０に調整した後、室温にて１時間攪
拌することにより、セリン残基で生じた可能性のあるＮ
→Ｏアシル転位をペプチド結合に回復せしめた。このよ
うにして得た粗テトラペプチドアミドをＯＤＳカラム
（「Cosmosil 5Ｃ18」，１×２５cm、半井化学製）によ
る逆相液体クロマトグラフィーによって精製を行い２８
０nmに吸収を持つＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｃｒ−Ｐｈｅ−Ｎ
Ｈ2 （収量１１０mg）を得た。
樹脂の半量を分取し１mlのアニソールを加えた後、２５
mlのフッ化水素中、０℃にて１時間の攪拌を行いペプチ
ドの樹脂からの脱離と保護基の除去を行った。フッ化水
素を除去した後、ペプチドおよび樹脂をエーテルにて洗
浄し、５mlのＴＦＡにてペプチドの抽出を行った。この
抽出液に５０mlのエーテルを加えることによりペプチド
を沈殿せしめ遠心にて回収、５mlの水に溶解し、アンモ
ニア水にてpHを８．０に調整した後、室温にて１時間攪
拌することにより、セリン残基で生じた可能性のあるＮ
→Ｏアシル転位をペプチド結合に回復せしめた。このよ
うにして得た粗テトラペプチドアミドをＯＤＳカラム
（「Cosmosil 5Ｃ18」，１×２５cm、半井化学製）によ
る逆相液体クロマトグラフィーによって精製を行い２８
０nmに吸収を持つＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｃｒ−Ｐｈｅ−Ｎ
Ｈ2 （収量１１０mg）を得た。
【００１９】分析値 アミノ酸組成（６Ｎ−ＨＣｌ，１１０℃、２４時間加水
分解）： Ｔｙｒ0.95，Ｐｒｏ1.0，Ｓｅｒ0.94，Ｐｈｅ0.98，Ｎ
Ｈ3 0.89。 ＯＤＳカラム（「Cosmosil 5Ｃ18」，０．４６×１５cm
半井化学社製）からの溶出条件： ０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルリニアグラジエン
ト（０〜４０％／４０ml／４０min ）にて２７％アセト
ニトリルで溶出した。
分解）： Ｔｙｒ0.95，Ｐｒｏ1.0，Ｓｅｒ0.94，Ｐｈｅ0.98，Ｎ
Ｈ3 0.89。 ＯＤＳカラム（「Cosmosil 5Ｃ18」，０．４６×１５cm
半井化学社製）からの溶出条件： ０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルリニアグラジエン
ト（０〜４０％／４０ml／４０min ）にて２７％アセト
ニトリルで溶出した。
【００２０】実施例１ Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏの合成 これはヒトβ−カゼインの５９番目から６３番目の配列
に相当するペプチドである。
ｕ−Ｐｒｏの合成 これはヒトβ−カゼインの５９番目から６３番目の配列
に相当するペプチドである。
【００２１】〔製造例〕２ｇのＢｏｃ−Ｐｒｏに１２ml
のエタノール、４mlの水を加えて溶解した後、重炭酸セ
シウム水溶液で中和、乾固しセシウム塩を得た。これに
当量のＣｌを含む８．９ｇのクロロメチル樹脂（１．２
８mmole Ｃｌ／ｇ）と６０mlのジメチルフォルムアミド
を加え、５０℃にて一夜攪拌の後、樹脂をジメチルフォ
ルムアミド、９０％ジメチルフォルムアミド、３００ml
のジメチルフォルムアミド、エタノールにて順序洗浄
し、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ樹脂（０．６０mmole/g ）を得た。
この樹脂に参考例と同様の方法に従って順次Ｂｏｃ−Ｌ
ｅｕ，Ｂｏｃ−Ｐｈｅ，Ｂｏｃ−Ｇｌｙ，Ｂｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）をカップルさせ該当するペンタペ
プチド樹脂を得た。このペプチド樹脂について参考例と
同様に脱保護し、精製を行いＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（試料１、収量120 mg/g樹脂）を得
た。
のエタノール、４mlの水を加えて溶解した後、重炭酸セ
シウム水溶液で中和、乾固しセシウム塩を得た。これに
当量のＣｌを含む８．９ｇのクロロメチル樹脂（１．２
８mmole Ｃｌ／ｇ）と６０mlのジメチルフォルムアミド
を加え、５０℃にて一夜攪拌の後、樹脂をジメチルフォ
ルムアミド、９０％ジメチルフォルムアミド、３００ml
のジメチルフォルムアミド、エタノールにて順序洗浄
し、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ樹脂（０．６０mmole/g ）を得た。
この樹脂に参考例と同様の方法に従って順次Ｂｏｃ−Ｌ
ｅｕ，Ｂｏｃ−Ｐｈｅ，Ｂｏｃ−Ｇｌｙ，Ｂｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｃｌ2 −Ｂｚｌ）をカップルさせ該当するペンタペ
プチド樹脂を得た。このペプチド樹脂について参考例と
同様に脱保護し、精製を行いＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（試料１、収量120 mg/g樹脂）を得
た。
【００２２】分析値（加水分解および溶出条件は参考例
と同一） アミノ酸組成： Ｔｙｒ0.95，Ｇｌｙ0.99，Ｐｈｅ0.98，Ｌｅｕ0.96，Ｐ
ｒｏ1.0 ＯＤＳカラムからの溶出位置：３５％アセトニトリル
と同一） アミノ酸組成： Ｔｙｒ0.95，Ｇｌｙ0.99，Ｐｈｅ0.98，Ｌｅｕ0.96，Ｐ
ｒｏ1.0 ＯＤＳカラムからの溶出位置：３５％アセトニトリル
【００２３】実施例２ Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈ
ｅ−ＮＨ2 の合成 これはヒトあるいはウシのα−ラクトアルブミンの５０
番目から５３番目に相当するペプチドのアミド化物であ
る。
ｅ−ＮＨ2 の合成 これはヒトあるいはウシのα−ラクトアルブミンの５０
番目から５３番目に相当するペプチドのアミド化物であ
る。
【００２４】〔製造例〕参考例の場合と同様に、Ｂｏｃ
−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂にＢｏｃ−Ｌｅ
ｕ，Ｂｏｃ−ＧｌｙおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2 −Ｂ
ｚｌ）をこの順序でカップルさせ、該当するテトラペプ
チドアミド樹脂を得た。さらに参考例の場合同様にフッ
化水素による脱保護、逆相液体クロマトグラフィーによ
る精製を行いＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2
（試料２、収量１２５mg）を得た。
−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂にＢｏｃ−Ｌｅ
ｕ，Ｂｏｃ−ＧｌｙおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2 −Ｂ
ｚｌ）をこの順序でカップルさせ、該当するテトラペプ
チドアミド樹脂を得た。さらに参考例の場合同様にフッ
化水素による脱保護、逆相液体クロマトグラフィーによ
る精製を行いＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2
（試料２、収量１２５mg）を得た。
【００２５】分析値（参考例と同一条件） アミノ酸組成： Ｔｙｒ0.96，Ｇｌｙ1.03，Ｌｅｕ0.98，Ｐｈｅ1.0，Ｎ
Ｈ3 0.94 ＯＤＳカラムからの溶出位置：３３．５％アセトニトリ
ル
Ｈ3 0.94 ＯＤＳカラムからの溶出位置：３３．５％アセトニトリ
ル
【００２６】実施例３ ラット脳オピオイドレセプター
アッセイの測定 （１）実験方法 前記実施例で製造したペプチドのオピオイド活性をスナ
イダー(Snyder)らの方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA., 7
0,2243(1973) 参照。）に準じて測定した。雄ウィスタ
ー系ラット（１００〜２００ｇ）の大脳（１．１〜１．
３ｇ）を摘出し、これをPotterホモジナイザーを使用し
て、１０mlの５０mMトリス−塩酸緩衝液（pH７．４）０
℃下ホモジナイズした。これを同一緩衝液で脳重量の１
００倍に希釈した後、遠心（１，０００rpm 、５分、０
℃）して沈殿を除去した。得られた溶液１．７mlに試料
あるいは塩酸モルヒネ（武田薬品工業社製）を加えて、
３５℃で５分間インキュベートした。続いて、〔 3Ｈ〕
−ナロクソン（ＮＥＮ，３７．７Ｃｌ／mmol）で最終濃
度１nM（３４，０００c.p.m.）となるように加え、再び
３５℃で１５分間インキュベートした。グラスフィルタ
ー(Whatman GF/B,2.4cm)を使用して減圧濾過を行い、レ
セプターの存在する膜成分をフィルター上に保持し、フ
ィルターを４mlの緩衝液で４回手早く洗浄した（所有時
間３０秒）。このフィルターを計測ヴァイアルに入れ、
１mlの１０％硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）を加え
て３０分以上放置した。その後、１０mlのＰＳＣ(Amars
ham 社製）を加えてよく振とうし、液体シンチレーショ
ンカウンターで計測した。ただし、大過剰の非放射性ナ
ロクソン存在下でもみられる結合量を差し引いたものを
特異的結合量とした。試料の活性は〔 3Ｈ〕−ナロクソ
ンの特異的結合を５０％阻害するに必要な試料の濃度
（ＩＣ50）で表示した。
アッセイの測定 （１）実験方法 前記実施例で製造したペプチドのオピオイド活性をスナ
イダー(Snyder)らの方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA., 7
0,2243(1973) 参照。）に準じて測定した。雄ウィスタ
ー系ラット（１００〜２００ｇ）の大脳（１．１〜１．
３ｇ）を摘出し、これをPotterホモジナイザーを使用し
て、１０mlの５０mMトリス−塩酸緩衝液（pH７．４）０
℃下ホモジナイズした。これを同一緩衝液で脳重量の１
００倍に希釈した後、遠心（１，０００rpm 、５分、０
℃）して沈殿を除去した。得られた溶液１．７mlに試料
あるいは塩酸モルヒネ（武田薬品工業社製）を加えて、
３５℃で５分間インキュベートした。続いて、〔 3Ｈ〕
−ナロクソン（ＮＥＮ，３７．７Ｃｌ／mmol）で最終濃
度１nM（３４，０００c.p.m.）となるように加え、再び
３５℃で１５分間インキュベートした。グラスフィルタ
ー(Whatman GF/B,2.4cm)を使用して減圧濾過を行い、レ
セプターの存在する膜成分をフィルター上に保持し、フ
ィルターを４mlの緩衝液で４回手早く洗浄した（所有時
間３０秒）。このフィルターを計測ヴァイアルに入れ、
１mlの１０％硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）を加え
て３０分以上放置した。その後、１０mlのＰＳＣ(Amars
ham 社製）を加えてよく振とうし、液体シンチレーショ
ンカウンターで計測した。ただし、大過剰の非放射性ナ
ロクソン存在下でもみられる結合量を差し引いたものを
特異的結合量とした。試料の活性は〔 3Ｈ〕−ナロクソ
ンの特異的結合を５０％阻害するに必要な試料の濃度
（ＩＣ50）で表示した。
【００２７】
【表１】
【００２８】実施例４ モルモット回腸縦走筋神経叢収
縮抑制試験 （１）実験方法 基本的にはKosterlitzらの方法(Br. J. Pharmacol., 3
3, 266(1968)）に従って行った。３００〜３５０ｇのモ
ルモットにより摘出した回腸から縦走筋神経叢標本を調
製した。標本の一端は糸を経てアイソメトリックトラン
ジューサにつなぎ、他方は内容積２mlのマグヌス管の底
に固定した。栄養液（１１８mM NaCl,4.75mM KCl，１１
９mM ＫＨ2 ＰＯ4 ，２．５４mM ＣａＣｌ2 ，１．２
mM ＭｇＳＯ4 ，２５mM ＮａＨＣＯ3 ，１１mM Gluc
ose)をマグヌス管にみたし、３７℃に保ち、９５％Ｏ2
−５％ＣＯ2 混合ガスを通気した。マグヌス管内の電極
に１０秒に１回の割合で電気刺激（５０Ｖ，０．１mse
c）を与え得られた収縮の強さを電気的に記録した。収
縮を５０％抑制するのに必要なペプチドの濃度（Ｉ
Ｃ50）を求めオピエートアゴニスト作用を評価した。
縮抑制試験 （１）実験方法 基本的にはKosterlitzらの方法(Br. J. Pharmacol., 3
3, 266(1968)）に従って行った。３００〜３５０ｇのモ
ルモットにより摘出した回腸から縦走筋神経叢標本を調
製した。標本の一端は糸を経てアイソメトリックトラン
ジューサにつなぎ、他方は内容積２mlのマグヌス管の底
に固定した。栄養液（１１８mM NaCl,4.75mM KCl，１１
９mM ＫＨ2 ＰＯ4 ，２．５４mM ＣａＣｌ2 ，１．２
mM ＭｇＳＯ4 ，２５mM ＮａＨＣＯ3 ，１１mM Gluc
ose)をマグヌス管にみたし、３７℃に保ち、９５％Ｏ2
−５％ＣＯ2 混合ガスを通気した。マグヌス管内の電極
に１０秒に１回の割合で電気刺激（５０Ｖ，０．１mse
c）を与え得られた収縮の強さを電気的に記録した。収
縮を５０％抑制するのに必要なペプチドの濃度（Ｉ
Ｃ50）を求めオピエートアゴニスト作用を評価した。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【発明の効果】以上の説明から明らかな如く、本発明の
新規ペプチドは温和なモルヒネ様鎮痛活性を有し、医薬
品として期待できる。
新規ペプチドは温和なモルヒネ様鎮痛活性を有し、医薬
品として期待できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/17 ＡＡＣ 38/00 ＡＢＮ Ａ６１Ｋ 37/18 ＡＢＮ
Claims (1)
- 【請求項１】一般式 Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｘ で示されるペプチド。（式中、Ｘは、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−
ＰｒｏまたはＬｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ2 を表わす。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6211216A JP2513439B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6211216A JP2513439B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 新規ペプチド |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60114461A Division JPH0735398B2 (ja) | 1985-05-28 | 1985-05-28 | 新規ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07149792A true JPH07149792A (ja) | 1995-06-13 |
| JP2513439B2 JP2513439B2 (ja) | 1996-07-03 |
Family
ID=16602228
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6211216A Expired - Lifetime JP2513439B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2513439B2 (ja) |
-
1994
- 1994-09-05 JP JP6211216A patent/JP2513439B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2513439B2 (ja) | 1996-07-03 |
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