JPH10507626A

JPH10507626A - 細胞サイクルによって変化する細胞に特異的な活性化合物を用いる血管系の疾病の遺伝子療法

Info

Publication number: JPH10507626A
Application number: JP8508477A
Authority: JP
Inventors: ゼドラツェック，ハンス−ハラルト; ミュラー，ロルフ
Original assignee: ヘキスト、アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1994-08-26
Filing date: 1995-08-25
Publication date: 1998-07-28
Also published as: ES2155137T3; GR3033534T3; ES2190787T3; AU3387495A; ATE191507T1; PT804601E; AU3473295A; AU3263995A; IL115051A0; US5830880A; DE69529174T2; CA2198472A1; PT777739E; EP0777739B1; EP0802985B1; JPH10505234A; JPH10506526A; FI113787B; FI970674A0; EP0777740A1

Abstract

(57)【要約】血管系の疾病の遺伝子治療のためのＤＮＡ配列を記載する。ＤＮＡ配列の本質的要素は、活性化配列、プロモーターモジュールおよび活性物質に対する遺伝子である。活性化配列は、細胞に特異的な方法で、平滑筋細胞、活性化された内皮細胞、活性化されたマクロファージまたは活性化されたリンパ球で活性化される。この活性化は、細胞サイクルに特異的な方法でプロモーターモジュールによって制御される。活性物質は、平滑筋細胞の成長および／または血液凝固のインヒビターである。記載されたＤＮＡ配列をウイルスまたは非ウイルスベクターに挿入し、このベクターに標識細胞に親和性を有するリガンドを補足する。

Description

【発明の詳細な説明】細胞サイクルによって変化する細胞に特異的な活性化合物を用いる血管系の疾病の遺伝子療法技術分野血管系の疾病の遺伝子治療のためのＤＮＡ配列が記載されている。ＤＮＡ配列の本質的要素は、活性化配列、プロモーターモジュール、および活性物質に対する遺伝子である。活性化配列は、細胞に特異的な方法で、平滑筋細胞、活性化された内皮細胞、活性化されたマクロファージまたは活性化されたリンパ球で活性化される。この活性化は、細胞サイクルに特異的な方法でプロモーターモジュールによって制御される。活性物質は、平滑筋細胞の成長および／または血液凝固のインヒビターである。記載されたＤＮＡ配列をウイルスまたは非ウイルスベクターに挿入し、このベクターに標識細胞に親和性を有するリガンドを補足する。 1) 平滑筋細胞による血管の疾患血管系の平滑筋細胞は、主として動脈中膜に局在しており、局部的および全身の血圧制御に関与している。損傷のない健康な血管では、これらの平滑筋細胞は細胞分裂の静止状態にある(R．Rose，Nature 362，801(1993))。血管系が創傷を受けると、平滑筋細胞が血管壁の内膜層に移動して、そこで増殖し（新内膜形成 (neoinitima formation)）、細胞外マトリックス成分を形成する。平滑筋細胞の内膜増殖は、動脈硬化症の始まりにおける本質的要因と考えられている(J.S．Forrester et al.，Am．Coll．Cardiol．17，758(1991))。また、この平滑筋細胞の増殖により、血管形成手術の後および狭窄した血管のバルーン拡張の後に血管の再狭窄を引き起こす(R.S．Schwartz et al.，Am．Coll． Cardiol．29，1284(1992)，M.W．Lie et al.，Circulation 79，1374(1989))。知られているように、動脈硬化症並びに血管の狭窄症および再狭窄症により、最後には血管の血栓症を引き起こし、これにより生命を危険に陥れる梗塞を引き起こすことがしばしばある。しかしながら、今日までのところ、平滑筋の成長を抑制することによる血管の狭窄症を防止するのに有効な治療法は未だない。実際に、ヘパリンは平滑筋細胞の増殖を抑制することができることが知られているが(Cochran et al.，J．Cell Physiol．124，29(1995)、ヘパリンを使用すると、狭窄の形成を適度に防止することはできない。損傷を受けた血管での平滑筋細胞の成長を防止することによる心筋梗塞の危険性を除去する新規な方法が試験されたことは明白なことであった。この方法では、平滑筋細胞の成長を制御的に防止する遺伝子および分子の知識が用いられた。このように、プロト腫瘍遺伝子(protooncogene)ｃ-ｍｙｂおよびｃｄｃ２−キナーゼおよび「増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）」が平滑筋細胞の増殖に関与していることが知られている。血管損傷の直後に、その部位に局所的にアンチセンスｃ −ｍｙｂオリゴヌクレオチド(Simons et al.，Nature 359，67(1992))並びにアンチセンスｃｄｃ２−キナーゼオリゴヌクレオチドをアンチセンスＰＣＮＡオリゴヌクレオチド(Morishita et al.，Proc．Natl．Acad．Sci.90，8474(1993))と組合せて投与することによって、ラットの平滑筋細胞の増殖を防止することができた。同様な結果は、ネズミおよびブタにおいて、この場合にも血管の損傷の直後にその部位に局所的に、腫瘍遺伝子サプレッサーとして知られている網膜芽腫（Ｒｂ）遺伝子を投与することによって得られた。Ｒｂ遺伝子生成物のリン酸化による不活性化を防止するため、Ｒｂタンパク質のリン酸化が可能でない本質的に活性な形態をコードする点突然変異したＲｂ遺伝子を用いた（Ｔｈｒ−２４６、Ｓｅｒ−６０１、Ｓｅｒ−６０５、Ｓｅｒ−７８０、Ｓｅｒ−７８６、Ｓｅｒ−７８７、Ｓｅｒ−８００をＡｌａで置換し、Ｔｈｒ−３５０をＡｒｇで置換し、Ｓｅｒ−８０４をＧｌｕで置換したもの(Hamel et al.，Mol．Cell Biol．12，343 1(1992))。この突然変異したＲｂ遺伝子を、複製不全組換えアデノウイルスに組込み、このベクターを局所投与した(Chang et al.，Science 267,518(1995))。もう一つの実験的試みでは、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＡＶ− ＨＳ−ＴＫ）に対する遺伝子を挿入した複製不全組換えアデノウイルスを用いた。このキナーゼ遺伝子生成物は活性化合物前駆体（「プロドラッグ」）であるガンシクロビルをリン酸化することにより、これをＤＮＡ合成を阻害するヌクレオシド類似体に転換することができる。遺伝子ベクターＡＶ−ＨＳ−ＴＫを、管損傷を受けてから７日後に投与したが、ここでは損傷の部位に余りに局所的に投与したので、続いてガンシクロビルを１４日間に亙って毎日腹腔内に投与した。この処理によって、ラットでは平滑筋細胞の成長が顕著に抑制された(Guzman et al.，Proc．Natl．Acad．Sci.，91,1 0732(1994))。同じ種類の処理を用いると、ブタでも同様な結果が得られた(Ohno et al.，Science 265，781(1994))。しかしながら、ここではベクターの投与を血管に損傷を受けた直後に行い、ガンシクロビルを６日間毎日投与した。これらの実験は、平滑筋細胞の細胞分裂過程を妨害する様々な遺伝子療法による手段によって、血管の損傷の後に狭窄症を防止することができることを明確に示している。しかしながら、文献から知られているこれらの方法の不利な点は、活性物質（ベクター）を血管の損傷の部位に局所的に適用しなければならず、必要ならば、血管の関連部分を時々閉じて、ベクターが洗い流されてしまうのを防止しなければならないことである。このような方法が、狭窄を引き起こした血管のバルーン拡張の過程で実際に日常的に行われているが、かなりの努力が必要であり、またこれらに関しては血栓症や塞栓症の危険により患者をかなり危険に晒すことになる。一方、ベクターを局所的に投与するにも拘らず、それらは増殖平滑筋細胞だけに導入されるとは限らない。他の近接したまたは沿革の細胞に導入されると、専門家で今日論議されているような副作用（特に、細胞の形質転換および腫瘍の誘発）を引き起こす可能性がある(Friedmann，Science 244，1275(1989)，Plummer ，Scrip Magazine III/29(1995))。上記のベクターの投与に代わるものとして、平滑筋細胞の増殖の抑制を目的とする細胞成長抑制剤の全身的（例えば、静脈内または経口）投与では、血管の疾患の部位に僅かな一過性の効果しかないが、他方、内皮を損傷する危険がありかつ著しい急性および慢性の副作用が生じる。 2) 血栓症血栓症は治療が次第に困難になり、場合によっては動脈硬化症、動脈および静脈疾患、および局所性および全身性の免疫反応症候群のような代謝疾患の生命を脅かす合併症となる(Philipps et al.，Blood 71，831(1988)，Harker，Biomed ．Progr．8，17（1995）の総説)。多数の抗凝固薬、抗血栓薬、フィブリン溶解剤、および血小板凝固阻害薬が比較的長期間臨床的に使用されてきており、また新規物質が臨床試験に掛けられているが、血栓症の生命に関わる合併症は今日までのところ防止することもまたは適当な程度まで制御することもできない(White，Scrip Magazine 4，6(1994)，A ntiplatelet Trialist´Collaboration BMJ 308，81(1994))。従って、血栓症の防止および治療のための新規医薬品が強く望まれている(BMJ 305，567(1992)，Vinazzer，Biomedical Progress 6，17(1993))。血栓症のかなりの部分は、活性化したまたは損傷を受けた内皮細胞にその原因がある。これらの細胞自体、または血中で、これら自身または活性化したマクロファージ、リンパ球、血小板および顆粒球と共に、成長因子によって刺激されて増殖を開始した平滑筋細胞により、血栓系の活性化が起こる(Nemerson，Blood 71,1(1988)) 。この活性化により、最終的にはフィブリンが形成され、血小板が活性化されて凝集し、フィブリンの多いまたは血小板の多い血管を圧縮または閉塞する血栓が形成され、血栓症を引き起こす。動脈血管系の領域でのこの種の血栓症が、例えば心臓または脳では生命に関わる梗塞を引き起こす。抗血栓薬（例えば、ヘパリンまたはヘパリンの画分）、抗凝固薬（例えば、クマリン）、血小板凝集阻害薬（例えば、アスピリン）およびフィブリン溶解薬（例えば、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼまたは組織プラスミノーゲン活性剤（ｔｐＡ））を用いる今日までに確立された療法は、生命に関わる血栓症の予防作用および多くの臨床的研究によって明らかにされている存在する血栓に対する治療作用を実際に引き起こすが、この作用は不適当である。この理由は、かなりの程度まで、用いる治療薬の作用が疾患すなわち血栓の部位に限定されず、全身に作用するという事実によるものである。従って、これによって引き起こされる出血により、投与量および投与期間の増加が限定される。 3) 発明の一般的説明本発明は、患者に局所または全身投与することができ、主として、細胞分裂の過程にある平滑筋細胞だけに作用して、血管傷害または血管損傷の後に平滑筋細胞の増殖を抑制することによって、血管の狭窄または再狭窄を防止し、主として、生成する血栓の部位、すなわち活性化しおよび増殖する内皮細胞、内膜の平滑筋細胞、マクロファージおよび／またはリンパ球の部位だけで血栓を抑制し、または平滑筋細胞の増殖を抑制し、かつその部分の血栓を局所的に抑制する活性化合物（すなわち、医薬品）に関する。この活性化合物の主要成分は、下記の組成からなるＤＮＡ構築物である。（ＤＮＡは、本出願明細書の全文において、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）およびゲノムＤＮＡ配列の両方に対する共通用語として用いられる。）この活性化合物の主要要素は、細胞サイクルによって制御されるプロモーターモジュールである。細胞サイクルによって制御されるプロモーターモジュールは、例えばヌクレオチド配列−ＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ−である（下記を参照されたい）。このプロモーターモジュールの重要な機能は、細胞サイクルのＧ０／Ｇ１相における活性化配列の機能の抑制、およびＳ／Ｇ２相において、従って増殖細胞における細胞サイクルに特異的な発現である。プロモーターモジュールＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ−は、ヒトｃｄｃ２５ＣプロモーターのＧ２−特異性発現の詳細な研究の過程で発見された。出発点は、細胞サイクルのＧ１相におけるプロモーターの遮断に関与するリプレッサー要素（細胞サイクル依存性要素；ＣＤＥ）を見いだしたことであった(Lucibello et al. ，EMBO U．14，132(1995))。ゲノムジメチル硫酸フットプリント法および機能分析法(functional analyses)（第１および２図）を用いて、ＣＤＥはＧ１に特異的にリプレッサー（ＣＤＥ結合因子；ＣＤＦ）に結合することによって非増殖（Ｇ０）細胞での転写が抑制されることを示した。基底プロモーター(basal promo ter)の領域に局在化されているＣＤＥは、その抑制機能において、「上流の活性化配列」（ＵＡＳ）によって変化する。これにより、ＣＤＥ結合因子は、細胞サイクル依存的に、すなわち非増殖細胞および細胞サイクルのＧ１相において、５′に結合した活性化物質タンパク質の転写活性化作用を阻害するという結論が得られた（第３図）。この結論を更に実験によって確かめたのであり、ウイルス性の非細胞サイクル制御初期ＳＶ４０エンハンサーをｃｄｃ２５最小プロモーター(minimum promote r)（ＣＤＥおよび３′位の開始部位からなる）と融合することによって、キメラプロモーターの細胞サイクルが明確に制御された（第４図）。次に、ｃｄｃ２５Ｃエンハンサーについて検討したところ、細胞サイクル依存的にＣＤＦによって制御される転写因子は、ＮＦ−Ｙ（ＣＢＦ）（Dorn et al.，Cell 50，863(1987 )，van Hijisduijnen et al.，EMBO J．9，3119(1990)，Coustry et al.，J．Bi ol．Chem．270，468(1995)）、Ｓｐ１（Kadonagaら，TIBS 11，10(1986)）、および新規である可能性があるＣＢＳ７に結合する転写因子であることが明らかになった。この研究において得られたもう一つの興味ある知見は、ｃｄｃ２５Ｃエンハンサー内のＮＦ−Ｙのみが、少なくとも１種類の他のＮＦ−Ｙ複合体またはＣＩＦと協同して効率的に転写を活性化することが見られたことである。ＮＦ− ＹもＳｐ１も両方ともグルタミン含量の高い活性化物質のクラスに属し、抑制の機構（例えば、特定の基底転写因子またはＴＡＦとの相互作用または干渉）に対する重要な情報を提供する。ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２のプロモーター配列を比較したところ、多くの領域で相同性が見られた（第５図）。ＣＤＥが３種類のプロモーター（含まれている多様性は機能上関連はない）総てに保存されてだけでなく、隣接Ｙ_cボックスも保存されている。予想されるように、これらの領域は総てイン・ビボでタンパク質結合を示し、ＣＤＥの場合には細胞サイクル依存性であった。更に、３種類のプロモーターは総て、ＣＤＥの突然変異によって制御解除されることも示された（第１表）。ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２配列を比較したところ、直ちにＣＤＥの３′の領域に著しい類似性のあることも明らかになった（細胞サイクル遺伝子相同領域；ＣＨＲ）（第５図）。この領域は機能上はＣＤＥと同様に重要であるが（第１表）、それはイン・ビボでのＤＭＳフットプリント法の実験では明らかではない。これに対する可能な説明は、この因子とＤＮＡの小さな溝(minor grooves)との相互作用である。電気泳動移動度シフト分析（ＥＭＳＡ）実験の結果は、ＣＤＥとＣＨＲとは一緒にタンパク質複合体であるＣＤＦに結合することを示している。これらの観察は、グルタミン含量の高い活性化物質のＣＤＦによって媒介される抑制は、細胞サイクルによって制御される転写において頻繁に起きる機構であることを示している。しかしながら、ｃｄｃ２５Ｃプロモーターを制御するのに重要なものは、ＣＤる。転写因子ＹＹ−１のイン・ビトロでの結合部位を含むこの領域での突然変異 (SetoおよびShenk，Nature354，241(1991)，UshevaおよびShenk，Cell 76，1115 (1994))により、完全に制御解除される。ＣＤＥ−ＣＨＲが基底プロモーターに近接していることを考慮すれば、ＣＤＦは基底転写複合体と相互作用すると思われる。活性化配列（ＵＡＳ＝上流活性化配列）は、転写因子を用いて形成されまたは標的細胞において積極的に相互作用するヌクレオチド配列（プロモーター配列またはエンハンサー配列）であると理解すべきである。用いられる活性化配列は、ＣＭＶエンハンサー、ＣＭＶプロモーター（（ＥＰ０１７３．１７７．Ｂ１）、ＳＶ４０プロモーター、または当業者に知られている任意の他のプロモーターまたはエンハンサー配列であることができる。しかしながら、本発明においては、好ましい活性化配列としては、特に平滑筋細胞、活性化した内皮細胞、または活性化したマクロファージまたはリンパ球で形成されるタンパク質をコードする遺伝子由来の遺伝子制御配列または要素が挙げられる。活性物質は、由来の部位において、治療効果、すなわち平滑筋細胞の増殖、血栓または（２種類の活性物質の場合には）両方の抑制をもたらすタンパク質についてのＤＮＡであると理解すべきである。活性化配列および活性物質に対するヌクレオチド配列の選択は、標的細胞および所望な活性物質によって変化する。本発明によるＤＮＡ構築物を当業者に慣用されている方法で構成して、ベクターとし、例えばこれをウイルスベクターに挿入し（これに関しては、D．Jolly，Canc er Gene Therapy 1，51(1994)）、或いは補足してプラスミドを得る。ウイルスベクターまたはプラスミドは、コロイド分散液、例えばリポソーム(Farhood et al.，Annals of the New York Academy of Sciences 716，23(1994))またはポリリシン／リガンド抱合体(Curiel et al.，Armals of the New York Academy of Sciences 716，36(1994))と複合体を形成することができる。医薬の調製も、同様に通常の薬学助剤を用いて行うことができる。この種のウイルス性または非ウイルス性ベクターに、選択された標的細胞上の膜構造に結合親和性を有するリガンドを補足することができる。従って、リガンドの選択は、標的細胞の選択によって変化する（本明細書、４．４以後、および５．４以後を参照されたい）。本発明による活性化合物を、下記の例によって更に詳細に説明する。 4) 平滑筋細胞の増殖の抑制のための活性化合物 4.1. 平滑筋細胞のための活性化配列の選択本発明において用いられる活性化配列は、特に平滑筋細胞中で形成したタンパク質をコードする遺伝子由来の遺伝子制御配列または要素であるのが好ましい。これらの遺伝子は、例えば下記のようなものである。トロポミオシン (Tsukahara et al.，Nucleic Acid Res．22，2318(1994)，Novy et al.， Cell Motility and the Cytosceleton 25，267(1993)，Wilton et al.， Cytogenetics and Cell Genetics 68，122(1995)) α−アクチン (Sartorelli et al.，Gens and Developm．4 1811(1990)，Miwa et al.， Nucleic Acids Res．18，4263(1990)) α−ミオシン (Kelly et al.，Can．J．Physiol．and Pharm．72，1351(1994)，Moussav i et al.，Mol．Cell．Biochem．128，219(1993) 成長因子のレセプター、例えばＰＤＧＦ、ＦＧＦ (Rubin et al.，Int．Congress Ser．925，131(1990)，Ross，Ann．Rev． Med．38，71(1987) アセチルコリンのレセプター (Dutton et al.，PNAS USA 90，2040(1993)，Durr et al.，Eur．J．Bioc hem．224，353(1994)) ホスホフルクトキナーゼ−Ａ Gekakis et al.，Biochemistry 33，1771(1994)，Tsujino et al.，J．Bi ol．Chem．264，15334(1989)，Castella-Escola et al.，Gene 91，225(1990)) ホスホグリセレートムターゼ (Nakatsuji et al.，Mol．Cell Biol．12，4384(1992)) トロポニンＣ (Lin et al.，Mol．Cell Biol．11，267(1991)) デスミン (Li et al.，J．Biol．Chem．266，6562(1991)，Neuromuscular Disorder s 3，423(1993)) ミオゲニン (Funk et al.，PNAS USA 89，9484(1992)，Olson，Symp．Soc．Exp．Biol ．46，331(1992)，Zhon et al.，Mol．Cell．Biol．14，6232(1994)，Atchley e t al.，PNAS USA 91，11522(1994)) エンドセリンＡのレセプター (Hosoda et al.，J．Biol．Chem．267，18797(1992)，Oreilly et al.，J ．Cardiovasc．Pharm．22，18(1993)，Hayzer et al.，Am．J．Med．Sci．304， 231(1992)，Haendler et al.，J．Cardiovasc．Pharm．20，1(1992)) ＶＥＧＦＶＥＧＦは、特に低酸素条件下で平滑筋細胞によって形成される(Berse e t al.，Mol．Biol．Cell 3，211(1992)，Finkenzeller et al.，BBRC 208，432( 1995)，Tischer et al.，BBRC 165，1198(1989)，Leung et al.，Science 246， 1306(1989)，Ferrara et al.，Endoc．Rev．13，18(1992))。これらのタンパク質に対する遺伝子のプロモーター配列は、下記の研究によって得ることができる。トロポミオシン (Gooding et al.，Embo J．13 3861(1994)) α−アクチン (Shimizu et al.，J．Biol．Chem．270，7631(1995)，Sartorelli et al. ，Genes Dev．4，1811(1999)) α−ミオシン (Kurabayashi et al.，J．Biol．Chem．265，19271(1990)，Molkentin et al.，Mol．Cell．Biol．14，4947(1994)) ＰＤＧＦのレセプター (Pistritto et al.，Antibiot．Chemother．46，73(1994)) ＦＧＦのレセプター (Myers et al.，J．Biol．Chem．270，8257(1995)，Johnson et al.，Adv ．Cancer Res．60，1(1993)，Chellaiah et al.，J．Biol．Chem．269，11620(1 994)，Yu et al.，Hum．Mol．Genetics 3，212(1994)，Wang et al.，BBRC 203 ，1781(1994)，Murgue et al.，Cancer Res．54，5206(1994)，Avraham et al. ，Genomics 21，656(1994)，Burgess et al.，Ann．Rev．Biochem．58,575(1989 )) ＭＲＦ−４ (Naidu et al.，Mol．Cell．Biol．15，2707(1995)) ホスホフルクトキナーゼＡ (Gekakis et al.，Biochem．33，1771(1994)) ホスホグリセレートムターゼ (Makatsuji et al.，Mol．Cell Biol．12，4384(1992)) トロポニンＣ (Ip et al.，Mol．Cell．Biol．14，7517(1994)，Parmacek et al.，Mol ．Cell．Biol．12，1967(1992)) ミオゲニン (Salminen et al.，J．Cell Biol．115，905(1991)，Durr et al.，Eur． J．Biochem．224，353(1994)，Edmondson et al.，Mol．Cell．Biol．12，3665( 1992)) エンドセリンＡのレセプター (Hosoda et al.，J．Biol．Chem．267，18797(1992)，Li and Paulia，J ．Biol．Chem．266，6562(1991)) デスミン (Li et al.，Neuromusc．Dis．3，423(1993)，Li and Capetanaki，Nucl ．Acids Res．21，335(1993)) ＶＥＧＦＶＥＧＦ遺伝子の遺伝子制御配列は、下記の通りである。 ^*ＶＥＧＦ遺伝子のプロモーター配列（５′−隣接領域） (Michenko et al.，Cell Mol．Biol．Res．40，35(1994)，Tischer et al.，J．Biol．Chem．266，11947(1991))、または ^*ＶＥＧＦ遺伝子のエンハンサー配列（３′−隣接領域） (Michenko et al.，Cell Mol．Biol．Res．40，35(1994)、または ^*ｃ−Ｓｒｃ遺伝子 (Mukhopadhyay et al.，Nature 375，577(1995)，Bonham et al.，Onco gene 8，1973(1993)，Parker et al.，Mol．Cell．Biol．5，831(1985)，Anders on et al.，Mol．Cell．Biol．5，1122(1985)、または ^*Ｖ−Ｓｒｃ遺伝子 (Mukhodpadhyay et al.，Nature 375，577(1995)，Anderson et al.，M ol．Cell．Biol．5，1122(1985)，Gibbs et al.，J．Virol．53，19(1985)) ^*「人工」プロモーターヘリックス−ループ−ヘリックス（ＨＬＨ）類の因子（ＭｙｏＤ、Ｍｙｆ−５、ミオゲニン、ＭＲＦ４(Olson and Klein，Genes Dev．8，1(1994)の総説）は、筋肉に特異的な転写活性化物質として記載されている。また、筋肉に特異的な転写活性化物質としては、ジンク・フィンガー・タンパク質(zinc finger protein)ＧＡＴＡ−４(Arcece et al.，Mol．Cell．Biol．13，2235(1993)；Ip et al.，Mol．Cell．Biol．14， 7517(1994))およびＭＥＦ−２転写因子群(Yu et al.，Gene Dev．6，1783(1992) )が挙げられる。ＨＬＨタンパク質およびＧＡＴＡ−４は、筋肉に特異的な遺伝子のプロモーターを用いてだけでなく、非相同性の状況においても、すなわち人工プロモーターを用いても、筋肉に特異的な転写を示す。この主の人工プロモーターは、例えば下記のようなものである。 ^*筋肉に特異的なＨＬＨタンパク質の（ＤＮＡ）結合部位の多重コピー、例えばＥボックス（ＭｙｏＤ）（例えば、４×ＡＧＣＡＧＧＴＧＴＴＧＧＧＡＧＧＣ） (Weintraub et al.，PNAS 87，5623(1990)) ^*α−ミオシン重鎖遺伝子のＧＡＴＡ−４のＤＮＡ結合部位の多重コピー（例えば、５′−ＧＧＣＣＧＡＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＧＡＧＧＧＧＧＣＣＧＡＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＧＡＧＧ−３′） (Molkentin et al.，Mol．Cell．Biol．14，4947(1994)) 4.2. 平滑筋細胞に対する活性物質の選択本発明において活性物質は、ＤＮＡ配列であって、その発現タンパク質が平滑筋細胞の増殖を抑制するものを意味すると理解すべきである。これらの細胞サイクルインヒビターとしては、例えば下記のタンパク質に対するＤＮＡ配列が挙げられる。 a) 阻害タンパク質網膜芽細胞腫タンパク質（ｐＲｂ＝ｐ１１０）または関連のｐ１０７およびｐ１３０タンパク質(La Thangue，Curr．Opin．Cell Biol．6，443(1994)) 、ｐ５３タンパク質（Prives et al.，Genes Dev．7，529(1993))、ｐ２（ＷＡＦ−１）タンパク質（El-Deiry et al.，Cell 75，817(1993 )）、ｐ１６タンパク質(Serrano et al.，Nature 366，704(1993)，Kamb et al.，Science 264，436(1994)，Nobori et al.，Nature 368，753(1994))、他のｃｄＫインヒビター(Pines，TIBS 19，143(1995)の総説)、ＧＡＤＤ４５タンパク質(Papathanasiou et al.，Mol．Cell．Biol．11 ，1009(1991)，Smith et al.，Science 266，1376(1994))、ｂａｋタンパク質(Farrow et al.，Nature 374，731(1995)，Chittende n et al.，Nature 374，733(1995)，Kiefer et al.，Nature 374，736(1995))。これらの細胞サイクルインヒビターの細胞内で速やかに不活性化されるのを防止するには、発現したタンパク質の不活性化部位に突然変異を有し、それによってこれらのタンパク質機能は損なわれない遺伝子を用いるのが好ましい。網膜芽細胞腫タンパク質（ｐＲｂ／ｐ１１０）および関連のｐ１０７およびｐ１３０タンパク質は、リン酸化によって不活性化される。従って、ｐＲｂ／ｐ１１０、ｐ１０７またはｐ１３０ｃＤＮＡ配列であって、コードしたタンパク質のリン酸化部位をリン酸化することができないアミノ酸で置換する方法で突然変異したものを用いるのが好ましい。 Hamel et al．(Mol．Cell Biol．12，3431(1992))によれば、網膜芽細胞腫タンパク質（ｐ１１０）のｃＤＮＡ配列は、２４６、３５０、６０１、６０５、７８０、７８６、７８７、８００および８０４位のアミノ酸が置換されているため、リン酸化することができないが、ラージＴ抗原とのその結合活性は損なわれない。例えば、アミノ酸Ｔｈｒ−２４６、Ｓｅｒ− ６０１、Ｓｅｒ−６０５、Ｓｅｒ−７８０、Ｓｅｒ−７８６、Ｓｅｒ−７８７およびＳｅｒ−８００はＡｌａで置換され、アミノ酸Ｔｈｒ−３５０はＡｒｇで、アミノ酸Ｓｅｒ−８０４はＧｌｕで置換される。ｐ１０７タンパク質またはｐ１３０タンパク質のＤＮＡ配列も、同様に突然変異される。タンパク質ｐ５３は、細胞においてＭＤＭ２のような特異性タンパク質に結合することによって、または脱リン酸化したＣ−末端セリン３９２によってｐ５３をオリゴマー化することによって不活性化される(Schikawa et al.，Leuk emia and Lymphoma 11，21(1993)およびBrown，Annals of Oncology 4，623(199 3))。従って、セリン３９２によってＣ−末端で短縮されたｐ５３タンパク質のＤＮＡ配列を用いるのが好ましい。 b) 細胞成長抑制性または細胞毒性タンパク質活性物質は、細胞成長抑制性または細胞毒性タンパク質を発現するＤＮＡ配列を意味するものとしても理解すべきである。この種のタンパク質としては、例えば下記のものが挙げられる。ペルホリン(perforin)(Lin et al.，Immunol．Today 16，194(1995))、グランチーム(granzyme)(Smyth et al.，Immunol．Today 16，202(1995 ))、ＴＮＦ(Porter，TibTech 9，158 Sidhu et al.，Pharmc．Ther．57，79 (1993))、特に ^*ＴＮＦα(Beutler et al.，Nature 320，584(1986)，Kriegler et a l.，Cell 53，45(1988)、 ^*ＴＮＦβ(Gray et al.，Nature 312，721(1984)，Li et al.，J．Im munol．138，4496(1987)，Aggarwal e tal.，J．Biol．Chem．260，2334(1985) 。 c) 酵素しかしながら、活性物質は、細胞成長抑制剤の不活性前駆体を細胞成長抑制剤に転換する酵素のＤＮＡ配列を意味するものとも理解すべきである。不活性な予備物質（プロドラッグ）を開裂して活性な細胞成長抑制剤（薬物）とするこの種の酵素、およびそれぞれの場合における適当なプロドラッグおよび薬物は、既にDeonarain et al.，Br．J．Cancer 70，786(1994)、およびM ullen，Pharmac．Ther．63，199(1994)およびHarris et al.，Gene Ther．1，17 0(1994))によって明確に記載されている。例えば、下記の酵素の一つのＤＮＡ配列を用いることができる。単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ (Garapin et al.，PNAS USA 76，3755(1979)，Vile et al.，Cancer Re s．53，3860(1993)，Wagner et al.，PNAS USA 78，1441(1981)，Moelten et al .，Cancer Res．46，5276(1986)，J．Natl．Cancer Inst．82，297(1990))、帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ (Huber et al.，PNAS USA 88，8039(1991)，Snoeck，Int．J．Antimicr ob．Agents 4，211(1994))、細菌性ニトロレダクターゼ (Michael et al.，FEMS Microbiol．Letters 124，195(1994)，Bryant et al.，J．Biol．Chem．266，4126(1991)，Watanabe et al.，Nucleic Acids R es．18，1059(1990))、細菌性β−グルクロニダーゼ (Jefferson et al.，PNAS USA 83，8447(1986))、 Secale cereale由来の植物性β−グルクロニダーゼ (Schulz et al.，Phytochemistry 26，933(1987))、ヒトβ−グルクロニダーゼ (Bosslet et al.，Br．J．Cancer 65，234(1992)，Oshima et al.，PNA S USA 84，685(1987))、ヒトカルボキシペプチダーゼ(CB)、例えば ^*肥満細胞ＣＢ−Ａ (Reynolds et al.，J．Clin．Invest．89，273(1992))、 ^*膵臓ＣＢ−Ｂ (Yamamoto et al.，J．Biol．Chem．267，2575(1992)，Catasus et al. ，J．Biol．Chem．270，6651(1995))、細菌性カルボキシペプチダーゼ (Hamilton et al.，J．Bacteriol．174，1626(1992)，Osterman et al. ，J．Protein Chem．11，561(1992))、細菌性β−ラクタマーゼ (Rodrigues et al.，Cancer Res．55，63(1995)，Hussain et al.，J． Bacteriol．164，223(1985)，Conque et al.，Embo J．12，631(1993))、細菌性シトシンデアミナーゼ (Mullen et al.，PNAS USA 89，33(1992)，Austin et al.，Mol．Pharm ac．43，380(1993)，Danielson et al.，Mol．Microbiol．6，1335(1992)、ヒトカタラーゼまたはペルオキシダーゼ (Ezurum et al.，Nucl．Acids Res．21，1607(1993))、ホスファターゼ、特にヒトアルカリホスファターゼ ^*ヒトアルカリホスファターゼ (Gum et al.，Cancer Res．50，1085(1990))、 ^*ヒト酸性前立腺ホスファターゼ (Sharieff et al.，Am．J．Hum．Gen．49，412(1991)，Song et al. ，Gene 129，291(1993)，Tailor et al.，Nucl．Acids Res．18，4928(1990))、 ^*５型酸性ホスファターゼ (Gene 130，201(1993))、オキシダーゼ、特に ^*ヒトリシルオキシダーゼ (Kimi et al.，J．Biol．Chem．270，7176(1995))、 ^*ヒト酸性Ｄ−アミノオキシダーゼ (Fukui et al.，J．Biol．Chem．267，18631(1992))、ペルオキシダーゼ、特に ^*ヒトグルタチオンペルオキシダーゼ (Chada et al.，Genomics 6，268(1990)，Ishida et al.，Nucl．Aci ds Res．15，10051(1987))、 ^*ヒト好酸性ペルオキシダーゼ (Ten et al.，J．Exp．Med．169，1757(1989)，Sahamaki et al.，J ．Biol．Chem．264，16828(1989))、 ^*ヒトチロイドペルオキシダーゼ (Kimura，PNAS USA 84，5555(1987))。引用した酵素の分泌を促進するため、それぞれの場合にＤＮＡ配列に含まれる相同シグナル配列を、細胞外分泌を改良する非相同シグナル配列に代えることができる。３；Oshima et al.，PNAS 84，685(1987)）を、例えばヒト免疫グロブリ ture 332，323(1988)）に代えることができる。また、点突然変異により、リソソームでは比較的低い程度に保存される酵素のＤＮＡを選択する方が好ましい。この種の点突然変異は、例えばβ−グルクロニダーゼについて記載されている(Shipley et al.，J．Biol．Chem．268，1 2193(1933))。 4.3. 平滑筋に対する同一または異なる活性物質の組合せ本発明は、活性化合物であって、幾つかの同一な活性物質（Ａ，Ａ）または異なる活性物質（Ａ，Ｂ）のＤＮＡ配列の組合せが含まれているものにも関する。２個のＤＮＡ配列を発現させるには、「内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）」のｃＤＮＡを制御要素として挿入するのが好ましい。この種のＩＲＥＳは、MountfordおよびSmith（TIG 11，179（1995）、Kaufman et al.，Nucl．Acids Res．19，4485(1991)、Morgan et al.，Nucl．Acids Res．20，1293（1992）、およびDirks et al.，Gene 129，247(1993)、PelletierおよびSonenberg，Natur e334，320(1988)、Sugimoto et al.，BioTech．12，694(1994)によって記載されている。血栓物質Ａ（３′末端）のＤＮＡと抗血栓物質Ｂ（５′末端）とを連結することができる。この種の活性化合物は、組み合わせによって、本発明の意味において相加的または相乗的効果を示す。平滑筋細胞の内膜成長の結果として、また細胞サイクルインヒビターの作用の結果としてのアポプトーシスまたは壊死により、血栓系が活性化され血栓症が起こることがある。この種の血栓症は、抗凝固薬（アスピリン、ヘパリン、または別の抗血栓薬）を予防的に投与することによって防止することができる。この抗凝固薬は、全身的に、すなわち経口または非経口的に投与される。しかしながら、抗凝固薬の副作用により、平滑筋細胞の内膜成長の部位で適当な濃度となるのが妨げられることがしばしばある。従って、この種の抗凝固薬による血栓症の予防は、安全性に欠けるものである (Pukac，Am．J．Pathol．139，1501(1991))。本発明のもう一つの課題は、本発明の意味において請求の範囲に記載の活性化合物が、細胞サイクルインヒビターである活性物質に加えてもう一つの要素として、抗凝固薬である活性物質に対するＤＮＡ配列を含むことである。抗凝固薬の発現は、細胞サイクルインヒビターの発現と同様に、活性化配列および細胞サイクルによって制御されるリプレッサーモジュールによって制御される。細胞サイクルインヒビターおよび抗凝固薬の同時発現は、「内部リボソームエントリー部位」（ＩＲＥＳ）遺伝子要素によって制御するのが好ましい。用いる抗凝固薬は、例えばプラスミノーゲン活性化物質（ＰＡ）、すなわち組織ＰＡ（ｔＰＡ）またはウロキナーゼ様ＰＡ（ｕＰＡ）、タンパク質Ｃ、抗トロンビン−III、組織因子経路インヒビターまたはヒルジンに対する遺伝子である。これらの抗凝固薬に対するＤＮＡ配列を、下記に記載する。組織プラスミノーゲン活性化物質（ｔＰＡ） (Sasaki et al.，Nucl．Acids Res．16，5695(1988)，Penica et al.，Natu re 301，214(1983)，Wei et al.，DNA 4，76(1985)，Harries et al.，Mol．Bio l．Med．3，279(1986)) ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化物質（ｕＰＡ） (Miyake et al.，J．Biochem．104，643(1988)，Nelles et al.，J．Biol． Chem．262，5682(1987)) ｔＰＡおよびｕＰＡのハイブリッド (Kalyan et al.，Gene 68，205(1988)，Devries at al.，Biochem．27，256 5(1988)) タンパク質Ｃ (Foster et al.，PNAS 82，4673(1985)) ヒルジン (Maerki et al.，Semin．Thromb．Hemostas．17，88(1991)，De Taxis du P oet et al.，Blood Coag．Fibrin．2，113(1991)，Harvey et al.，PNAS USA 83 ，1084(1986)，Sachhieri et al.，EP 0324 712 B1，EP 0142 860 B1) セリンプロテイナーゼインヒビター（セルピン）、例えば ^*Ｃ−１Ｓインヒビター (Bock et al.，Biochem．25，4292(1986)，Davis et al.，PNAS USA 83，3 161(1986)，Que，BBRC 137，620(1986)，Rauth et al.，Proteine Sequences an d Data Analysis 1，251(1988)，Carter et al.，Eur．J．Bi ochem．173，163(1988)，Tosi et al.，Gene 42，265(1986)，Carter et al.，E ur．J．Biochem．197，301/1991)，Eldering et al.，J．Bio．Chem．267，7013 (1993)) ^*α１−抗トリプシン (Tosi et al.，Gene 42，265(1986)，Graham et al.，Hum．Genetics 85， 381(1990)，Hafeez et al.，J．Clin．Invest．89，1214(1992)，Tikunova et a l.，Bioorganicheskaja Khimia 17，1694(1991)，Kay et al.，Human Gene Ther ．3，641(1992)，Lemarchand et al.，Molekulaiaruaia Biologica 27，1014(19 93))，Lambach et al.，Human Mol．Gen．2，1001(1993)) ^*抗トロンビンIII (Stackhouse et al.，J．Biol．Chem．258，703(1983)，Olds et al.，Bio chem．32，4216(1993)，Laue et al.，Nucl．Acids Res．22，3556(1994)) 組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ） (Enjyoji et al.，Genomics 17，423(1993)，Wun et al.，J．Biol．Chem． 263，6001(1988)，Girard et al.，Thromb．Res．55，37(1989)) 4.4. 平滑筋細胞に対するリガンドの選択（上記９頁、５〜２１行目を参照されたい）コロイド分散液中のリガンド、例えばポリリシン−リガンド抱合体としては、平滑筋細胞に結合する物質が好ましい。これらには、平滑筋細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が挙げられ、例えば下記の通りである。抗体１０Ｆ３ (Prinseva et al.，Exp．Cell Res．169，85(1987)，American J．Path． 134，305(1989))またはアクチンに対する抗体 (Desmonliere et al.，Comptes Reudus des Seances de la Soc．de Biol et de ses Filiales 182，391(1988))、またはアンジオテンシンIIレセプターに対する抗体 (Butcher et al.，BBRA 196，1280(1993))、または成長因子のレセプターに対する抗体 (Mendelsohn，Prog．All．45，147(1988)，Sato et al.，J．Nat．Canc． Inst．81，1600(1989)，Hynes et al.，BBA 1198，165(1994))、または ^*ＥＧＦレセプター (Fan et al.，Cancer Res．53，4322(1993)，Bender et al.，Cancer Re s．52，121(1992)，Aboud-Pirak et al.，J．Nat．Cancer Inst．80，1605(1988 )，Sato et al.，Mol．Biol．Med．1，511(1983)，Kawamoto et al.，PNAS 80， 1337(1983)）または ^*ＰＤＧＦレセプター(Yu et al.，J．Biol．Chem．269，10668(1994)，Ke lly et al.，J．Biol．Chem．266，8987(1991)，Bown-Pope et al.，J．Biol．C hem．257，5161(1982)）または ^*ＰＧＦレセプター(Vanhalteswaran et al.，J．Cell Biol．115，418(19 91)，Zhan et al.，J．Biol．Chem．269，20221(1994))または ^*エンドセリンＡレセプターに対する抗体。ネズミモノクローナルは、人体に適用される形態で用いるのが好ましい。人体への適用は、Winter et al.，（Nature 349，293(1991)）およびHoogenbooms et al.，(Rev．Tr．Transfus．Hemobiol．36，19(1993))によって記載された方法で行われる。抗体断片は、先行技術に従って、例えばWinter(Nature 349，293(1 991))、Hoogenbooms et al.，(Rev．Tr．Transfus．Hemobiol．36，19(1993)) 、Girol(Mol．Immunol．28，1379(1991)およびHuston et al.，(Int．Rev．Immu nol．10，195(1993))によって記載された方法で調製される。更に、リガンドとしては、平滑筋細胞上の膜構造または膜レセプターに結合する総ての活性物質が挙げられる(Pusztai et al.，J．Pathol．169，191(1993)， Harris，Current Opin．Biotechnol．2，260(1991)の総説）。例えば、これらの物質としては、成長因子、またはそれらの断片またはそれらの部分配列であって、平滑筋細胞によって発現されるレセプターに結合するもの、例えば下記のようなものが挙げられる。ＰＤＧＦ (Westermark et al.，Cancer Res．51，5087(1991)，Ponten et al.，J．In vest．Dermatol．102，304(1994) ＥＧＦ (Modjtahedi et al.，Int．J．Oncol．4，277(1994)，Carpenter et al.，J ．Biol．Chem．265，7709(1990)) ＴＧＦβ (.Segarini，BBA 1155，269(1993)) ＴＧＦα (Salomon et al.，Cancer Cells 2，389(1990) ＦＧＦ (Burgess et al.，Annu．Rev．Biochem．58，575(1989) エンドセリンＡ (Oreilly et al.，J．Gardiovasc．Pharm．22，18(1993))。 4.5. 平滑筋細胞に対する活性化合物の調製本発明による活性化合物の調製を、下記の例によって更に詳細に説明する。 a) キメラプロモーターミオゲニンプロモーターＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒの構築ヒトミオゲニンプロモーター（Salmin et al.，J．Cell Biol．115，905 の３′末端で、ヒトｃｄｃ２５Ｃ遺伝子のＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒモジュール（ Lucibello et al.，EMBO J.，14，132（1995）によって公表された配列い）。連結は、当業者に知られておりかつ市販されている酵素を用いて行われる。また、ミオゲニンプロモーター配列の各種の断片が用いられる（第６図を参照されたい）。従って、ミオゲニンプロモーターのＴＡＴＡボックス b) 活性化合物の中心成分におけるプラスミドの構築このようにして調製したキメラミオゲニンプロモーターモジュール転写制御単位を、その３′末端で、ヒトβ−グルクロニダーゼの完全コード領域を含むＤＮＡの５′末端に連結する（Oshima et al.，PNAS USA 84，68 ６図を参照されたい）。このＤＮＡは、分泌に必要なシグナル配列をも含んでいる（２２個のＮ −末端アミノ酸）。細胞分泌を促進するため、このシグナル配列は、免疫 Nature 332，323(1988)）によって置換するのが好ましい（第７図）。このようにして調製した転写制御単位およびヒトβ−グルクロニダーゼに対するＤＮＡをｐＵＣ１９／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ由来のプラスミドベクターにクローニングし、これを直接またはコロイド分散液系でイン・ビボでの投与に用いることができる。或いは、キメラ遺伝子を、ウイルスベクターまたは他の好適なベクターに移して、注射することができる。 c) β−グルクロニダーゼ並びに組織プラスミノーゲン活性化物質に対する遺伝子を含むプラスミドの構築 2)の方法で調製したミオゲニンリプレッサーモジュールβ−グルクロニダーゼ要素を、その３′末端で、ポリオウイルスの「内部リボソームエン lletier and Sonenberg，Nature 334，320(1988))の５′末端に連結する。次に、この３′末端に、組織プラスミノーゲン活性化物質のＤＮＡ（位置末端を連結する。全構築物を、次にｐｕｃ１８／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ由来のプラスミドベクターにクローニングして、これを直接またはコロイド分散液系でイン・ビボでの投与に用いることができる。或いは、キメラ遺伝子をウイルスベクターまたは他の好適なベクターに移して、注射することができる（第８図）。 5. 血栓の抑制のための活性化合物 5.1. 血栓の抑制のための活性化配列の選択本発明の意味で用いられる活性化配列は、好ましくは平滑筋細胞、活性化された内皮細胞、活性化されたマクロファージまたは活性化されたリンパ球で検出可能なタンパク質をコードする遺伝子由来の遺伝子制御配列または要素である。 a) 平滑筋細胞平滑筋細胞中の遺伝子に対する活性化配列の例は、既に4.1.で述べられている。 b) 活性化内皮細胞特に、活性化内皮細胞中で形成されるタンパク質の例は、Burrows et al．（Plarmac．Therp．64，155(1994)）およびPlate et al．(Brain Pathol． 4，207(1994))によって記載されている。特に、内皮細胞で高度に存在するこれらのタンパク質としては、例えば脳に特異的な内皮グルコース−１−輸送体脳の内皮細胞は、この輸送体の極めて高度の発現によって識別され、Ｄ −グルコースの脳中への経内皮輸送を行う(Gerhart et al.，J．Neurosci．Res ．22，464(1989))。プロモーター配列は、Murakami et al．(J．Biol．Chem．26 7，9300(1992))によって記載された。エンドグリンエンドグリンは、ＴＧＦβの非シグナル伝達レセプターであると思われる (Gougos et al.，J．Biol．Chem．265，8361(1990)，Cheifetz，J．Biol．Chem ．267，19027(1992)，Moren et al.，BBRC 189，356(1992))。(1993))。これは正常な内皮中に少量存在するが増殖内皮で多量に発現する(Westphal et al.，J ．Invest．Derm．100，27(1993)，Burrows et al.，Pharmac．Ther．64，155(19 94))。プロモーター配列は、Bellon et al.，(Eur．J．Immunol．23，2340(1993 ))およびGe et al．(Gene 138，201(1994))によって記載された。ＶＥＧＦレセプター２種類のレセプターが識別されている(Plate et al.，Int．J．Cancer 59，520(1994))： ^*ＶＥＧＦレセプター−１（ｆｌｔ−１） (de Vries et al.，Science 255，989(1992)) 細胞質部分にｆｍｓ−様チロシンキナーゼを含む）、および ^*ＶＥＧＦレセプター−２（ｆｌｋ−１，ＫＤＲ） (Terman et al.，BBRC 187，1579(1992)) （細胞質部分にチロシンキナーゼを含む）。これらのレセプターはいずれも、内皮細胞にほぼ単独で見いだされる(Se nger et al.，Cancer Metast．Rev．12，303(1993))。他の内皮特異性レセプターチロシンキナーゼ ^*ｔｉｌ−１またはｔｉｌ−２ (Partanen et al.，Mol．Cell Biol．12，1698(1992)，Schnuerch and R isau，Development 119，957(1993)，Dumont et al.，Oncogene 7，1471(1992)) ^*Ｂ６１レセプター（Ｅｃｋレセプター） (Bartley et al.，Nature 368，558(1994)，Pandey et al.，Science 26 8，567(1995)，van der Geer et al.，Ann．Rev．Cell Biol．10，251(1994)) エンドセリン、特に ^*エンドセリンＢ (Oreilly et al.，J．Cardiovasc．Pharm．22，18(1993)，Benatti et a l.，J．Clin．Invest．91，1149(1993)，O´Reilly et al.，BBRC 193，834(199 3)。プロモーター配列は、Benatti et al.，J．Clin．Invest．91，1149(1 993)によって記載された。 ^*エンドセリン−１ (Yanasigawa et al.，Nature 332，411(1988)。プロモーター配列は、Wilson et al.，Mol．Cell．Biol．10，4654（199 0）によって記載された。エンドセリンレセプター、特にエンドセリン−Ｂレセプター (Webb et al.，Mol．Pharmacol．47，730(1995)，Haendler et al.，J．C ardiovasc．Pharm．20，1(1992))。マンノース−６−リン酸レセプター (Perales et al.，Eur．J．Biochem．226，225(1994) プロモーター配列は、Ludwig et al．(Gene 142，311(1994))，Oshima et al．（J.Biol．Chem．263，2553(1988)）およびohlmann et al．(PNAS USA 8 4，5575(1987))によって記載されている。 von Willebrand因子プロモーター配列は、Jahroudi and Lynch(Mol．Cell．Biol．14，999( 1994)，Ferreira et al.，Biochem．J．293，641（1993）およびAird et al.，P NAS USA 92，4567(1995))によって記載された。ＩＬ−１α，ＩＬ−１β ＩＬ−１は、活性化した内皮細胞によって産生される(Wamer et al.，J ．Immunol．139，1911(1987))。プロモーター配列はHnagen et al.，Mol．Carci nog．2，68(1986)，Tumer et al.，J．Immunol．143，3556(1989)，Fenton et a l.，J．Immunol．138，3972(1987)，Bensi et al.，Cell Growth Diff．1，491( 1990)，Hiscott et al.，Mol．Cell．Biol．13，6231（1993）およびMori et al .，Blood 84，1688(1994)によって記載された。ＩＬ−１レセプタープロモーター配列は、Ye et al.，PNAS USA 90，2295（1993）によって記載された。血管細胞付着分子（ＶＣＡＭ−１）内皮細胞でのＶＣＡＭ−１の発現は、リポ多糖類、ＴＮＦ−α(Neish e t al.，Mol．Cell．Biol．15，2558(1995))、ＩＬ−４(Iademarko et al.，J．C lin．Invest．95，264(1995)およびＩＬ−１(Marni et al.，J．Clin．Invest． 92，1866(1993))によって活性化される。ＶＣＡＭ−１のプロモーター配列は、Neish et al.，Mol．Cell．Biol ．15，2558(1995)，Ahmad et al.，J．Biol．Chem．270，8976(1995)，Neish et al.，J．Exp．Med．176，1583(1992)，lademarco et al.，J．Biol．Chem．267 ，16323(1992)およびCybulsky et al.，PNAS USA 88，7859(1991)によって記載された。合成活性化配列天然の内皮特異性プロモーターの代替物として、内皮細胞で優先的または選択的に活性を有する転写因子のオリゴマー化された結合部位からなる合成活性化配列を用いることもできる。これの例は転写因子ＧＡＴＡ−２であって、エンドセリン−１遺伝子における結合部位が５′−ＴＴＡＴＣＴ−３′であるものである(Lee et al.，Bio l．Chem．266，16188(1991)，Dorfmann et al.，J．Biol．Chem．267，1279(199 2)およびWilson et al.，Mol．Cell．Biol．10，4854(1990))。 c) 活性化したマクロファージおよび／または活性化したリンパ球本発明の意味における活性化配列は、免疫反応においてマクロファージおよび／またはリンパ球で多量に形成されるタンパク質に対する遺伝子プロモーター配列を意味するものとも理解すべきである。これらには、例えば下記のものが挙げられる。 ^*ＩＬ−１(Bensi et al.，Gene 52，95(1987)，Fibbe et al.，Blut 59， 147(1989))、 ^*ＩＬ−１レセプター(Colotta et al.，Immunol．Today Immunopath．72, 9(1994)，Ye et al.，PNAS USA 90，2295(1993))、 ^*ＩＬ−２(Jansen et al.，CII 39，207(1994)，Ohbe et al.，J．Biol． Chem．270，7479(1995))、 ^*ＩＬ−２レセプター(Semenzato et al.，Int．J．Clin．Lab．Res．22， 133(1992))、 ^*ＩＦＮγ(Kirchner，DMW 111，64(1986)，Lehmann et al.，J．Immunol ．153，165(1994))、 ^*ＩＬ−４(Paul，Blood 77，1859(1991)，te Velde et al.，Blood 76，1 392(1990))、 ^*ＩＬ−４レセプター(Vallenga et al.，Leukemia 7，1131(1993)，Galiz zi et al.，Int．Immunol．2，669(1990))、 ^*ＩＬ−３(Frendl，Int．J．Immunopharm．14，421(1992)、 ^*ＩＬ−５(Azuma et al.，Nucl．Acid Res．14，9149(1986)，Yokota et al.，PNAS 84，7388(1987))、 ^*ＩＬ−６(Brack et al.，Int．J．Clin．Lab．Res．22，143(1992))、 ^*ＬＩＦ(Metcalf，Int．J．Cell Clon．9，95(1991)，Samal，BBA 1260， 27(1995))、 ^*ＩＬ−７(Joshi et al.，21，681(1991))、 ^*ＩＬ−１０(Benjamin et al.，Leuk．Lymph．12，205(1994)，Fluchiger et al.，J．Exp．Med．179，91(1994))、 ^*ＩＬ−１１(Yang et al.，Biofactors 4，15(1992))、 ^*ＩＬ−１２(Kiniwa et al.，J．Clin．Invest．90，262(1992)，Gatelay ，Cancer Invest．11，500(1993))、 ^*ＩＬ−１３(Punnonen et al.，PNAS 90，3730(1993))，Muzio et al.， Blood 83，1738(1994))、 ^*ＧＭ−ＣＳＦ(Metcalf，Cancer 15，2185(1990))、 ^*ＧＭ−ＣＳＦレセプター(Nakagawa et al.，J．Biol．Chem．269，10905 (1994))、 ^*Ｉｔｅｇｒｉｎβ２タンパク質のような付着タンパク質(Nueda et al.， J．Biol．Chem．268，19305(1993))。これらのタンパク質のプロモーター配列は、下記のように記載された。 ^*ＩＬ−１レセプター (Ye et al.，PNAS USA90，2295(1993))、 ^*ＩＬ−１α (Hangen et al.，Mol．Carbinog．2，68(1986)，Turner et al.，J．Immu nol．143，3556(1989)，Mori et al.，Blood 84，1688(1994))、 ^*ＩＬ−１β (Fenton et al.，J．Immunol．138，3972(1987)，Bensi et al.，Cell Gr owth Diff．1，491(1990)，Turner et al.，J．Immunol．143，3556(1989)，His cott et al.，Mol．Cell．Biol．13，6231(1993))、 ^*ＩＬ−２ (Fujita et al.，Cell 46，401(1986)，Hama et al.，J．Exp．Med．181 ，1217(1995)，Kant et al.，Lymph．Rec．Interact．179(1989)，Kamps et al. ，Mol．Res．Cell．Biol．10，5464(1990)，Williams et al.，J．Immunol．141 ，662(1988)，Brunvand，FASEB J．6，A998(1992)，Matsui et al.，Lymphokine s 12，1(1985)，Tanaguchi et al.，Nature 302，305(1983))、 ^*ＩＬ−２レセプター (Ohbo et al.，J．Biol．Chem．270，7479(1995)，Shibuya et al.，Nuc l．Acids Res．18，3697(1990)，Lin et al.，Mol．Cell．Biol．13，6201(1993 )，Semenzato et al.，Int．J．Clin．Lab．Res．22,133(1992))、 ^*ＩＦＮγ (Ye et al.，J．Biol．Chem．269，25728(1994))、 ^*ＩＬ−４ (Rooney et al.，EMBO J．13，625(1994)，Hama et al.，J．Exp．Med．1 81，1217(1995)，Li-Weber et al.，J．Immunol．153，4122(1994)，148，1913( 1992)，Min et al.，J．Immunol．148,1913(1992)，Abe et al.，PNAS 89，2864 (1992))、 ^*ＩＬ−４レセプター (Beckmann ら，Chem．Immunol．51，107(1992)，Oharaら，PNAS 85，82 21(1988))、 ^*ＩＬ−３ (Mathey-Prevot et al.，PNAS USA 87，5046(1990)，Cameron et al.，Bl ood 83，2851(1994)，Arai et al.，Lymphokine Res．9，551(1990))、 ^*ＩＬ−３レセプター（αサブユニット） (Miyajima et al.，Blood 85，1246(1995)，Rapaport et al.，Gene 137 ，333(1993)，Kosugi et al.，BBRC 208，360(1995))、 ^*ＩＬ−３レセプター（βサブユニット） (Gorman et al.，J．Biol．Chem．267，15842(1992)，Kitamura et al.， Cell 66，1165(1991)，Hayashida et al.，PNAS USA 87，9655(1990))、 ^*ＩＬ−５ (Lee et al.，J．Allerg．Clin．Immunol．94，594(1994)，Kauhansky et al.，J．Immunol．152，1812(1994)，Staynov et al.，PNAS USA 92，3606(199 5))、 ^*ＩＬ−６ (Lu et al.，J．Biol．Chem．270，9748(1995)，Gruss et al.，Blood 80 ，2563(1992)，Ray et al.，PNAS 85，6701(1988)，Droogmans et al.，DNA-Seq uence 3，115(1992)，Mori et al.，Blood 84，2904(1994)，Liberman et al.， Mol．Cell．Biol．10，2327(1990)，Ishiki et al.，Mol．Cell．Biol．10，275 7(1990)、 ^*ＩＬ−７ (Pleiman et al.，Mol．Cell．Biol．11，3052(1991)，Lapton et al.，J ．Immunol．144，3592(1990))、 ^*ＩＬ−８ (Chang et al.，J．Biol．Chem．269，25277(1994)，Sprenger et al.，J ．Immunol．153，2534(1994))、 ^*ＩＬ−１０ (Kim et al.，J．Immunol．148，3618(1992)，Platzer et al.，DNA Sequ ence 4，399(1994)，Kube et al.，Cytokine 7，1(1995))、 ^*ＩＬ−１１ (Yang et al.，J．Biol．Chem．269，32732(1994))、 ^*ＧＭ−ＣＳＦ (Nimer et al.，Mol．Cell．Biol．10，6084(1990)，Staynov et al.，PN AS USA 92，3606 J(B1995)，Koyano-Nakayama et al.，Int．Immunol．5，345(1 993)，Ye et al.，Nucl．Acids Res．22，5672(1994)) ^*ＧＭ−ＣＳＦレセプター（α−鎖） (Nakagawa et al.，J．Biol．Chem．269，10905(1994)) ^*マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）レセプター (Yue et al.，Mol．Cell．Biol．13，3191(1993)，Zhang et al.，Mol． Cell．Biol．14，373(1994))、 ^*ＩおよびII型マクロファージスカベンジャーレセプター (Moulton et al.，Mol．Cell．Biol．14，4408(1994))、 ^*ＩＬ−１３ (Staynov et al.，PNAS USA 92，3606(1995)) ^*ＬＩＦ (Gough et al.，Ciba Found．Symp．167，24(1992)，Stahl et al.，Cyto kine 5，386(1993)) ^*インターフェロン制御因子１であって、そのプロモーターがＩＬ−６並びにＩＦＮγまたはβによって刺激されるもの (Harrock et al.，EMBO J．13，1942(1994)) ^*ＩＦＮγ反応性プロモーター (Lamb et al.，Blood 83，2063(1994)) ^*ＩＦＮγ (Hardy et al.，PNAS 82，8173(1985)) ^*ＭＡＣ−１ (Dziennis et al.，Blood 85，319(1995)，Bauer et al.，Hum．Gene The r．5，709(1994)，Hickstein et al.，PNAS USA89，2105(1992))、 ^*ＬＦＡ−１α (Nueda et al.，J．Biol．Chem．268，19305(1993)，Aguta et al.，Bloo d 79，602(1992)，Cornwell et al.，PNAS USA 90，4221(1993))、 ^*ｐ１５０，９５ (Noti et al.，DNA and Cell Biol．11，123(1992)，Lopezcabrera et al.，J．Biol．Chem．268，1187(1993))。 5.2. 特に、血栓の抑制のための活性物質の選択本発明における活性物質としての、直接または間接的に血小板凝集または血栓因子を抑制し、またはフィブリン溶解を促進するタンパク質に対するＤＮＡ配列。この種の活性物質は、抗凝固薬として記載されている。抗凝固薬としては、例えばプラスミノーゲン活性化物質（ＰＡ）、すなわち組織ＰＡ（ｔＰＡ）またはウロキナーゼ様ＰＡ（ｕＰＡ）、またはタンパク質Ｃ、抗トロンビン−III、Ｃ −１Ｓインヒビター、α１−抗トリプシン、組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）、またはヒルジンに対する遺伝子が用いられる。これらの抗凝固薬に対するＤＮＡ配列は、既に4.3.節で記載されている。 5.3. 血栓の抑制のための２個の同一または異なる活性物質の組合せ本発明は、活性化合物であって、２個の同一の抗凝固薬物質（Ａ，Ａ）または２個の異なる抗凝固薬物質（Ａ，Ｂ）のＤＮＡ配列の組合せが含まれているものにも関する。これらのＤＮＡ配列の発現には、「内部リボソームエントリー部位」（ＩＲＥＳ）のｃＤＮＡを制御要素として挿入するのが好ましい。この種のＩＲＥＳは、例えばMontford and Smith（TIG 11，179(1995)，Kaufm ann et al.，Nucl．Acids Res．19，4485(1991)，Morgan et al.，Nucl．Acids Res．20，1293(1992)，Dirks et al.，Gene 128，247(1993)，Pelletier and So nenberg，Nature 334，320(1988),およびSugimoto et al.，BioTechn．12，694 （1994）によって記載された。抗血栓物質Ａ（３′末端）のＤＮＡと抗血栓物質Ｂ（５′末端）のＤＮＡとを連結することができる。この種の２個の同一または異なる遺伝子の組み合わせにより、選択した抗血栓物質の相加効果（同一遺伝子）または相乗効果が起こる。 5.4. 血栓の抑制のためのリガンドの選択例えばコロイド分散液でポリリシン−リガンド抱合体を含むウイルスまたは非ウイルスベクターに対するリガンドとしては、平滑筋細胞または増殖内皮細胞、または活性化したマクロファージおよび／またはリンパ球の細胞表面に結合する物質が好ましい。 a) 平滑筋細胞のリガンド平滑筋細胞に結合するリガンドの例は、既に4.4.節で記載されている。 b) 活性化した内皮細胞のリガンド本発明の意味では、これらとしては、例えばBurrows et al．(Pharmac．T her．64，155(1994)，Hughes et al．(Cancer Res．49，6214（1989）およびMar uyama et al．(PNAS USA 87，5744(1990))によって記載されているような内皮細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が挙げられる。特に、これらとしては、ＶＥＧＦレセプターに対する抗体が挙げられる。ネズミのモノクローナル抗体は、人体に適用される形態で用いるのが好ましい。人体への適用は、4,4.節に示した方法で行われる。抗体断片は、例えば4. 4.節に記載した方法で調製する。リガンドとしては、内皮細胞上の膜構造または膜レセプターに結合する総ての活性化合物も挙げられる。例えば、これらの化合物としては、末端位［ｌａｃｕｎａ］に更にマンノースを含む物質、ＩＬ−１または成長因子またはその断片またはそれらの部分配列であって、例えばＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβのような内皮細胞によって発現されるレセプターに結合するものが挙げられる(Pusztain et al.，J．Pathol．169，191(1993))。更に、これらの化合物としては、活性化したおよび／または増殖する内皮細胞に結合する付着分子も挙げられる。この種の付着分子、例えばＳＬｅｘ、ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１、ＬＥＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４は、既に記載されている(Augustin-Voss et al.，J．Cell Biol．119，483(1992)，Pauli et al.，Can cer Metast．Rev．9，175(1990)，Honn et al.，Cancer Metast．Rev．11，353( 1992)の総説)。 c) 活性化したマクロファージおよび／または活性化したリンパ球のリガンド本発明において、リガンドとしては、免疫細胞の表面に特異的に結合する物質も挙げられる。これらの物質としては、例えばPowelson et al.，Biotech． Adv．11，725（1993）によって記載されているような免疫細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が挙げられる。更に、これらのリガンドとしては、免疫細胞のＦｃγ−またはμ−レセプターにそれらの不変ドメインで結合するモノクローナルまたはポリクローナル抗体または抗体断片も挙げられる。ここではまた、ネズミのモノクローナル抗体は、人体に適用される形態で用いるのが好ましく（4.4.節を参照されたい）、断片は、例えば4.4.節に引用した方法論を用いて調製する。また、リガンドとしては、免疫細胞の表面の膜レセプターに結合する総ての物質が挙げられる。例えば、これらの物質としては、成長因子、例えばサイトカイン、ＥＧＦ、ＴＧＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦ、またはその断片、またはこの種の細胞によって発現されるレセプターに結合するものの部分配列が挙げられる。 5.5. 血栓の抑制のための活性化合物の調製本発明による活性化合物の調製を、下記の例によって更に詳細に説明する。 a) キメラプロモーターエンドセリンＩＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒの構築 n et al.，Mol．Cell．Biol．10，4854(1990)）またはＴＡＴＡボックスによっ２５Ｃ遺伝子(Lucibello et al.，EMBO J.，14，132(1995))のＣＤＥ−ＣＨＲは、当業者に知られておりかつ市販されている酵素によって行う。 b) 活性化合物の中心成分にキメラプロモーターエンドセリン−１−ＣＤＥ− ＣＨＲ−Ｉｎｒを含むプラスミノーゲンの構築上記のキメラエンドセリン−１プロモーターモジュール転写単位を、その３′末端で、組織プラスミノーゲン活性化物質の完全コード領域を含むＤＮ ure 301，214(1983))。このＤＮＡは、分泌に要するシグナル配列も含んでいる。転写制御単位および組織プラスミノーゲン活性化物質のＤＮＡを、ｐＵＣ１９／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ由来のプラスミドベクターにクローニングし、これを直接またはコロイド分散液系でイン・ビボでの投与に用いることができる。或いは、キメラ遺伝子を、ウイルスベクターまたは他の好適なベクターに移して、注射することができる。 c) キメラプロモーターミオゲニンＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒの構築ヒトミオゲニンプロモーター（Salmin et al.，J．Cell Biol．115，90 その３′末端で、ヒトｃｄｃ２５Ｃ遺伝子のＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒモジュールの５′末端に連結する（Lucibelloら，EMBO J．14，132(1995)に者に知られておりかつ市販されている酵素を用いて行われる。また、ミオゲニンプロモーター配列の各種の断片が用いられる（第１０図を参照されたい）。従って、ミオゲニンプロモーターのＴＡＴＡボックスを含むＤＮ４０も同様に用いることができる。 d) 活性化合物の中心成分にキメラプロモーターミオゲニンを含むプラスミドの構築この方法で調製したキメラミオゲニンプロモーターモジュール転写制御単位を、その３′末端で、組織プラスミノーゲン活性化物質の完全コード領域を含むＤＮＡの５′末端に連結する（第１０図を参照されたい）。このＤＮＡは、分泌に必要なシグナル配列をも含んでいる。転写制御単位および組織プラスミノーゲン活性化物質のＤＮＡを、ｐＵＣ１８／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ由来のプラスミドベクターにクローニングして、これを直接またはコロイド分散液系でイン・ビボでの投与に用いることができる。或いは、キメラ遺伝子をウイルスベクターまたは他の好適なベクターに移して、注射することができる。 e) 活性物質に対する２個の遺伝子を含むプラスミドの構築 c)に記載したミオゲニンＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ転写単位を、その３′ ′末端に連結する。連結は、当業者に知られておりかつ市販されている酵素を用いて行われる。ＴＦＰＩのＤＮＡの３′末端を、内部リボソーム入口部位のｃＤＮＡの rg，Nature 334，320(1988)）、この３′末端を、組織プラスミノーゲン活性化物質のＤＮＡの５′末端に独占的に連結する（第１１図を参照されたい）。この方法で調製したこの活性化合物を、ｐＵＣ１８／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ由来のプラスミドベクターにクローニングして、これを直接またはコロイド分散液系でイン・ビボでの投与に用いることができる。或いは、キメラ遺伝子をウイルスベクターまたは他の好適なベクターに移して、注射することができる。 6. 平滑筋細胞および／または血栓に対する活性化合物の作用局所または全身、好ましくは静脈内または動脈内投与の後、本発明に記載の活性化合物は、血管（特に内皮層）の傷害または損傷により、また適宜血管容積の内膜中に移動した後、直接接近し得る平滑筋細胞に、独占的にではないにしても支配的になる。組織特異性活性化配列および細胞サイクルによって制御されるリプレッサーモジュールの組み合わせにより、細胞サイクルインヒビターは分割する平滑筋細胞で主としてまたは独占的に活性化されるようになる。突然変異した細胞サイクルインヒビターの本発明に従って用いることによって、その一層長期間の増殖抑制効果が保証される。局所的（例えば、組織、体腔または組織間隙中）、または全身的、好ましくは静脈内または動脈内投与の後、本発明に記載の活性化合物は、独占的にではないにしても主として、平滑筋細胞、活性化したリンパ球または活性化したマクロファージが抗血栓物質を発現し、従ってこれは血栓の起源の部位に放出されるようにすることができる。活性化合物は、その細胞特異性並びに細胞サイクル特異性により、高度の安全性が確保されるので、これを高投与量でかつ必要ならば、数日または数週間の間隔で繰り返し投与して、平滑筋細胞の増殖によって引き起こされる血管の閉塞の予防または治療、および／または血栓症の予防および／または治療を行うことができる。第１図〜第１１図の説明第１図：イン・ビボで見いだされたタンパク質結合部位を有するｃｄｃ２５Ｃプロモーター領域のヌクレオチド配列（ゲノムＤＭＳフットプリント法；●（黒丸）：完全な構成上の保護；○（白丸）：部分的な構成上の保護；＊（星印）：細胞サイクルによって制御されたＧ１に特異的な保護）。ＣＢＳ：構成結合部位；ＣＤＥ：細胞サイクル依存性要素。灰色に下塗した領域は、Ｙ_cボックス（ＮＦ−Ｙ結合部位）を示している。開始部位は、黒四角形で示す。第２図：ｃｄｃの突然変異によるＧ₀における特異的なｃｄｃ２５Ｃプロモーターの抑制解除。第３図：ＣＤＥによるｃｄｃ２５Ｃエンハンサーの制御を模式的に表したもの。第４図：ＣＤＥによるＳＶ４０エンハンサーのＧ₀／Ｇ₁特異的抑制。第５図：ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２プロモーターにおけるＣＤＥ−ＣＨＲ領域および５′Ｙｃボックスでの相同性。第６図：ヒトミオゲニン（Ｍｙｆ−４）プロモーター、ＣＤＥおよびＣＨＲリプレッサー要素を有する３′融合プロモーターモジュール、およびエフェクターとしてのの各種部分からなるキメラ構築物(90shima et al.，PNAS USA84，685(1987))。位置の詳細は、ミオゲニン遺伝子についてのSalminen et al.，J．Cell Biol．1 15，905(1991)の詳細またはｃｄｃ２５ＣについてのLucibello et al.，EMBO J ．14，132(1995)によって用いられた系に関するものである。第７図： β−グルクロニダーゼの相同シグナル配列の（ヒト免疫グロブリンの）非相同シグナル配列による置換。免疫グロブリン（ＨｕＶＨｃＡＭＰ）のシグナル配列（ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴ）の位置の詳細は、Riechmann et al.，Natu re 332，323(1988)に関するものである。代替：β−グルクロニダーゼの細胞外分泌を一層良好にするためのＩｇのシグナルペプチドの挿入。(B)を参照されたい。第８図：ヒトミオゲニン（Ｍｙｆ−４）プロモーター、ＣＤＥおよびＣＨＲリプレッサー要素およびヒトβ−グルクロニダーゼのＤＮＡを含む３′−融合プロモーターモジュール、制御ヌクレオチド配列としての内部リボソームエントリー部位、および組織プラスミノーゲン活性化物質に対するＤＮＡの様々な部分からなるキメラ構築物。位置の詳細は、ミオゲニンについてはSalminen et al.，J．Cell Bio l．115，905(1991)に関し、ＣＤＥ／ＣＨＲ−Ｉｎｒ要素についてはLucibello e t al.，EMBO J．14，132(1995)に関し、β−グルクロニダーゼについてはOshima et al.，PNAS USA 84，685(1987)に関し、免疫グロブリンのシグナル配列についてはRiechmann et al.，Nature 332，323(1988)に関し、ポリオウイルスの内部リボソーム入口部位についてはPelletier and Sonenberg，Nature 334，320（ 1988）に関し、ヒト組織プラスミノーゲン活性化物質についてはPennica et al. ，Nature 301，214(1983)に関する。第９図：ヒトエンドセリン−１プロモーター、ＣＤＥおよびＣＨＲリプレッサー要素を含む３′−融合プロモーターモジュール、およびエフェクターとしてヒト組織プラスミノーゲン活性化物質に対するのＤＮＡ（完全コード領域、Pennica et al. ，Nature 301，214(1983)）の様々な部分からなるキメラ構築物。位置の詳細は、エンドセリン−１遺伝子についてはWilson et al.，Mol．Cell．Biol．10，48 545(1990)の詳細またはｃｄｃ２５ＣについてはLucibello et al.，EMBO J．14 ，132(1995)によって用いられる系に関する。第１０図：ヒトミオゲニン（Ｍｙｆ−４）プロモーター、ＣＤＥおよびＣＨＲリプレッサー要素を含む３′−融合プロモーターモジュール、およびエフェクターとしてのヒト組織プラスミノーゲン活性化物質に対するＤＮＡ（完全コード領域）の様々な部分からなるキメラ構築物。位置の詳細は、ミオゲニン遺伝子についてはSalm inen et al.，J．Cell Biol．115，905(1991)に関し、またはｃｄｃ２５ＣについてはLucibello et al.，EMBO J．14，132(1995)によって用いられる系に関し、組織プラスミノーゲン活性化物質についてはPennica et al.，Nature 301，21 4(1983)の詳細に関する。第１１図２個のエフェクター遺伝子を有するキメラ構築物。組織因子経路インヒビターについての位置の詳細は、^* ）Wun et al.，J．Biol．Chem．263，6001 o(n1988)．^** ）Girard et al.，Thromb．Res．55，37(1989) に関し、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）ｃＤＮＡについては、Pelletier an d Sonenberg，Nature 334，320（1988）に基づいている。第１表：ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２の細胞サイクル制御転写におけるＣＤＥおよびＣＨＲの役割ＨＩＨ３Ｔ３細胞での遷移トランスフェクションの結果は、ＲＬＵｓ／１０００として表す。ｍＣＤＥ：突然変異したＣＤＥ（位置：−１３：Ｇ→Ｔ）；ｍＣＨＲ：突然変異したＣＨＲ位置：−６〜−３）

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年５月２４日【補正内容】請求の範囲１．血管系の疾病の予防または治療のための活性化合物であって、活性化物質配列と、細胞サイクルによって制御されるプロモーターモジュールと、細胞サイクルインヒビターおよび／または血栓インヒビターである活性物質のＤＮＡ配列とからなるＤＮＡ構築物を含んでなる、活性化合物。２．プロモーターモジュールがＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ要素を有し、かつｃｄｃ２５Ｃプロモーター領域（ヌクレオチド配列：ＧＧＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＡＴＧＧＴＣＡＡＣＧＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＣＴＴサイクル依存性要素（ヌクレオチド配列：ＴＧＧＣＧＧ）からなり、ＣＨＲが細胞サイクル遺伝子相同領域（ヌクレオチド配列：ＧＴＴＴＧＡＡ）からなり、Ｉｎｒが開始部位（位置＋１）および開始に重要な隣接配列からなるものである、請求の範囲第１項に記載の活性化合物。３．平滑筋細胞で形成される転写因子によって制御される活性化物質配列（プロモーターまたはエンハンサー配列）を含んでなる、請求の範囲第１項または第２項に記載の活性化合物。４．活性化物質配列として、ＣＭＶエンハンサー、ＣＭＶプロモーターまたはＳＶ４０プロモーター、またはトロポミオシン、α−アクチン、α−ミオシン、ＰＤＧＦレセプター、ＦＧＦレセプター、ＭＲＦ−４、アセチルコリンレセプター、ホスホフルクトキナーゼＡ、ホスホグリセレートムターゼ、トロポニンＣ、ミオゲニン、エンドセリンレセプターまたはデスミン、または活性化物質配列として筋肉特異性ＨＬＨタンパク質（Ｅボックス）またはＧＡＴＡ−４についての結合部位の多重コピー、またはＶＥＧＦにっいてのプロモーター配列、またはＶＥＧＦについてのエンハンサー配列、またはｃ−Ｓｒｃまたはｖ−ＳｒｃについてのＤＮＡ配列であって、ＶＥＧＦ遺伝子を制御するものを含んでなる、請求の範囲第３項に記載の活性化合物。５．活性物質のＤＮＡ配列が、網膜芽細胞腫タンパク質ｐ１１０またはｐ１０７、およびｐ１３０タンパク質であり、またはｐ５３タンパク質、またはｐ２１タンパク質、Ｐ１６タンパク質または別の「サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄＫ）」インヒビター、またはＧＡＤＤ４５タンパク質、またはｂａｋタンパク質、または細胞成長抑制または細胞毒性タンパク質、または細胞成長抑制剤の前駆体を開裂して細胞成長抑制剤を形成する酵素である細胞サイクルインヒビターをコードするものである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。６．網膜芽細胞腫タンパク質（ｐＲｂ／ｐ１１０）が、２４６、３５０、６０１、６０５、７８０、７８６、７８７、８００および８０４位のアミノ酸の置換によりリン酸化することができず、しかしながら例えばアミノ酸Ｔｈｒ−２４６、Ｓｅｒ−６０１、Ｓｅｒ−６０５、Ｓｅｒ−７８０、Ｓｅｒ−７８６、Ｓｅｒ−７８７およびＳｅｒ−８００がＡｌａで置換されたもの、アミノ酸Ｔｈｒ− ３５０がＡｒｇで置換されたものおよびＳｅｒ−８０４がＧｌｕで置換されたものように、大型のＴ抗原との結合活性を喪失せず、またはｐ１０７タンパク質が、ｐＲｂ／ｐ１１０と同様の方法で突然変異され、またはＰ１３０タンパク質が、ｐＲｂ／ｐ１１０と同様の方法で突然変異されたものである、請求の範囲第５項に記載の活性化合物。７．タンパク質ｐ５３のＤＮＡ配列が、セリン３９２を除去することによってＣ末端が短縮されたものである、請求の範囲第５項に記載の活性化合物。８．細胞サイクルインヒビターがペルフォリン、グランチーム、ＴＮＦαまたはＴＮＦβである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。９．細胞サイクルインヒビターが酵素であり、この酵素が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ、ニトロレダクターゼ、β−グルクロニダーゼ（特に、ヒト、植物または細菌性β−グルクロニダーゼ）、カルボキシペプチダーゼ、（好ましくは、シュドモナス由来のもの）、ラクタマーゼ（好ましくは、Bacillus cereus 由来のもの）、ピログルタメートアミノペプチダーゼ、Ｄ−アミノペプチダーゼ、オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ホスファターゼ、ヒドロキシニトリルリアーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼまたはグリコシダーゼであり、この酵素についてのシグナル配列が相同性であり、または細胞分泌を良好にするには、非相同性であるものである、請求の範囲第１〜4項のいずれか１項に記載の活性化合物。１０．リソソーム保存が酵素のＤＮＡ配列の点突然変異によって減少し、細胞外分泌が増加された、請求の範囲第９項に記載の活性化合物。１１．数個の同一または異なる抗腫瘍物質のＤＮＡ配列を含み、それぞれの場合に２個のＤＮＡ配列が内部リボソーム入口部位のＤＮＡ配列によって互いに接続されてなる、請求の範囲第１〜１０項のいずれか１項に記載の活性化合物。１２．活性物質のＤＮＡ配列が血栓インヒビターをコードするものである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。１３．細胞サイクルインヒビターのＮＤＡ配列が血栓インヒビターのＮＤＡ配列によって補足され、これらの２種類の配列を内部リボソームエントリー部位のＤＮＡ配列によって互いに接続すされてなる、請求の範囲第１〜１０項のいずれか１項に記載の活性化合物。１４．血栓インヒビターのＮＤＡ配列がｔＰＡ、ｕＰＡ、ｔＰＡおよびｕＰＡのハイブリッド分子、タンパク質Ｃ、抗トロンビンIII、ＴＦＰＩ、Ｃ−インヒビター、α１−抗トリプシンまたはヒルジンをコードするものである、請求の範囲第１２項に記載の活性化合物。１５．増殖する内皮細胞で形成される転写因子によって制御される活性化物質配列（プロモーターまたはエンハンサー配列）を含んでなる、請求の範囲第１項または第２項に記載の活性化合物。１６．内皮グルコース−１輸送体、エンドグリン、ＶＥＧＦレセプター−１または−２、レセプターチロシンキナーゼｔｉｌ−１またはｔｉｌ−２、Ｂ６１レセプター、Ｂ６１リガンド、エンドセリン、特にエンドセリン−Ｂ、−１、マンノース−６−リン酸レセプター、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１β、ＩＬ−１レセプター、ＶＣＡＭ−１、von Willebrand因子、またはＧＡＴＡ−２のような内皮細胞で優先的または選択的に活性を有する転写因子のオリゴマー化した結合部位であって５′−ＴＴＡＴＣＴ−３′である結合部位からの合成活性化物質配列を含んでなる、請求の範囲第１５項に記載の活性化合物。１７．マクロファージまたはリンパ球の活性化で特定の程度まで形成される転写因子によって制御される活性化物質配列（プロモーターまたはエンハンサー配列）を含んでなる、請求の範囲第１項または第２項に記載の活性化合物。１８．サイトカインまたはそのレセプター、特にインターロイキン（ＩＩ） −１αまたはＩｌ−１β、Ｉｌ−１レセプター、Ｉｌ−２、Ｉｌ−２レセプター、インターフェロンγ、Ｉｌ−３、Ｉｌ−３レセプター、Ｉｌ−４、Ｉｌ−４レセプター、Ｉｌ−５、Ｉｌ−６、Ｉｌ−７、Ｉｌ−８、Ｉｌ−９、Ｉｌ−１０、Ｉｌ−１１、Ｉｌ−１２、Ｉｌ−１３、Ｍ−ＣＳＦレセプター、マクロファージスカベンジャーＩ型またはII型レセプター、インターフェロン制御因子１、ＩＦＮ −γ反応性プロモーター、ＩＦＮ−γ、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＧＭ−ＣＳＦレセプター、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ− ＣＳＦ）、付着タンパク質、例えばＬＦＡ−１Ｍａｃ−１またはｐ１５０／９５、または白血病抑制因子（ＬＩＦ）についてのプロモーター配列を含んでなる、請求の範囲第１７項に記載の活性化合物。１９．活性物質についてのＤＮＡ配列が血栓インヒビターをコードするものである、請求の範囲第１５〜１８項のいずれか１項に記載の活性化合物。２０．血栓インヒビターのＤＮＡ配列が組織プラスミノーゲン活性化物質（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、ｔＰＡおよびｕＰＡのハイブリッド、タンパク質Ｃ、抗トロンビンIII、組織因子経路インヒビター、Ｃ−１インヒビター、α１−抗トリプシンまたはヒルジンをコードするものである、請求の範囲第１９項に記載の活性化合物。２１．複数の同一または異なる血栓インヒビターのＤＮＡ配列を含み、２個のＤＮＡ配列が互いに内部リボソームエントリー部位のＤＮＡ配列によって接続されてなる、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。２２．ベクターに挿入された、請求の範囲第１〜２１項のいずれか１項に記載の活性化合物。２３．ベクターがウイルスである、請求の範囲第２２項に記載の活性化合物。２４．ウイルスがレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、単純ヘルペスウイルスまたはワクシニアウイルスである、請求の範囲第２２項に記載の活性化合物。２５．プラスミドに挿入された、請求の範囲第１〜２４項のいずれか１項に記載の活性化合物。２６．コロイド分散液系で調製される、請求の範囲第２２〜２５項のいずれか１項に記載の活性化合物。２７．コロイド分散液系がリポソームである、請求の範囲第２６項に記載の活性化合物。２８．コロイド分散液系がポリリシンリガンドである、請求の範囲第２６項に記載の活性化合物。２９．平滑筋細胞、活性化した内皮細胞、活性化したマクロファージ、または活性化したリンパ球の膜構造に結合するリガンドで補足された、請求の範囲第２２〜２８項のいずれか１項に記載の活性化合物。３０．リガンドが、ポリクローン性またはモノクローン性抗体、またはその抗体断片であって、その可変ドメインによって、平滑筋細胞、活性化した内皮細胞、活性化したマクロファージまたは活性化したリンパ球の膜構造に結合し、またはサイトカインまたは成長因子、またはその断片または部分配列であって、平滑筋細胞、活性化した内皮細胞、活性化したマクロファージまたは活性化したリンパ球上のレセプターに結合するものであるか、またはＳＬｅＸ、ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１、ＬＥＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４のような付着分子である、請求の範囲第２２項に記載の活性化合物。３１．内皮細胞の膜構造が、マンノースのレセプター、ＩＬ−１または成長因子、例えばＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβである、請求の範囲第３０項に記載の活性化合物。３２．膜構造がアクチン、アンギオテンシンIIレセプター、ＥＧＦレセプター、ＰＤＧＦレセプター、ＦＧＦレセプター、またはエンドセリンレセプターである、請求の範囲第３０項に記載の活性化合物。３３．膜構造が、サイトカイン、成長因子、インターフェロン、ケモカインのレセプター、特に幹細胞因子、Ｉｌ−１、Ｉｌ−２、Ｉｌ−３、Ｉｌ−４、Ｉｌ−６、Ｉｌ−８、Ｉｌ−１０、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦまたはＴＮＦαのレセプターである、請求の範囲第３２項に記載の活性化合物。３４．筋肉、結合組織、肝臓、腎臓、脾臓、肺または皮膚のような組織への注射、皮膚または粘膜への局所適用、関節、胸膜腔、腹膜腔またはクモ膜下腔のような体腔への注射、または動脈または静脈注射のような血管系への注射のための製剤とされた、請求の範囲第１〜３３項のいずれか１項に記載の活性化合物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/22 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＢ 38/46 ＡＤＳ 37/54 ＡＤＳ 38/55 ＡＢＲ 37/64 ＡＢＲ 47/48 37/66 48/00 37/24 //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．腫瘍症の予防または治療のための活性化合物であって、活性化配列と、プロモーターモジュールと、抗腫瘍物質に対するＤＮＡ配列とからなるＤＮＡ構築物を含んでなる、活性化合物。２．プロモーターモジュールがＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ要素を有し、かつｃｄｃ２５Ｃプロモーター領域（ヌクレオチド配列：ＧＧＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＡＴＧＧＴＣＡＡＣＧＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＣＴＴイクル依存性要素（ヌクレオチド配列：ＴＧＧＣＧＧ）からなり、ＣＨＲが細胞サイクル遺伝子相同領域（ヌクレオチド配列：ＧＴＴＴＧＡＡ）からなり、Ｉｎｒが開始部位（位置＋１）および開始に重要な隣接配列からなるものである、請求の範囲第１項に記載の活性化合物。３．内皮細胞または増殖する内皮細胞に直近の細胞で形成される転写因子によって制御される活性化配列を含んでなる、請求の範囲第１項に記載の活性化合物。４．ＣＭＶプロモーター、ＣＭＶエンハンサーまたはＳＶ４０プロモーター、または内皮グルコース−１輸送体、エンドグリン、ＶＥＧＦレセプター−１または− ２、レセプターチロシンキナーゼｔｉｌ−１またはｔｉｌ−２、Ｂ６１レセプター、Ｂ６１リガンド、エンドセリン、特にエンドセリン−Ｂ、−１、マンノース −６−リン酸レセプター、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１β、ＩＬ−１レセプター、ＶＣＡＭ−１、von Willebrand因子、またはＧＡＴＡ−２のような内皮細胞で優先的または選択的に活性を有する転写因子のオリゴマー化した結合部位であって５′−ＴＴＡＴＣＴ−３′である結合部位からの合成活性化配列、またはＶＥＧＦについてのプロモーター配列、またはＶＥＧＦについてのエンハンサー配列、またはｃ−ＳＲＣまたはｖ−ＳＲＣについてのｃＤＮＡ配列であって、ＶＥＧＦ遺伝子を制御するもの、またはマウス哺乳動物腫瘍ウイルスのプロモーター配列またはステロイドレセプターのプロモーター配列を含んでなる、請求の範囲第３項に記載の活性化合物。５．抗腫瘍活性化合物のＤＮＡ配列が、網膜芽細胞腫タンパク質ｐ１１０またはｐ１０７、およびｐ１３０タンパク質であり、またはｐ５３タンパク質、またはｐ２１タンパク質、Ｐ１６タンパク質または別の「サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄＫ）」インヒビター、またはＧＡＤＤ４５タンパク質、またはｂａｋタンパク質、または脈管形成を阻害するタンパク質、または細胞毒性作用を有するタンパク質、または炎症を刺激するタンパク質、または細胞成長抑制剤の前駆体を開裂して細胞成長抑制剤を形成する酵素をコードするものである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。６．網膜芽細胞腫タンパク質（ｐＲｂ／ｐ１１０）が、２４６、３５０、６０１、６０５、７８０、７８６、７８７、８００および８０４位のアミノ酸の置換によりリン酸化することができず、しかしながら特にアミノ酸Ｔｈｒ−２４６、Ｓｅｒ−６０１、Ｓｅｒ−６０５、Ｓｅｒ−７８０、Ｓｅｒ−７８６、Ｓｅｒ − ７８７およびＳｅｒ−８００がＡｌａで置換されたもの、アミノ酸Ｔｈｒ−３５０がＡｒｇで置換されたものおよびＳｅｒ−８０４がＧｌｕで置換されたもののように大型のＴ抗原との結合活性を喪失せず、またはｐ１０７タンパク質が、ｐＲｂ／ｐ１１０と同様の方法で突然変異され、またはＰ１３０タンパク質が、ｐＲｂ／ｐ１１０と同様の方法で突然変異されたものである、請求の範囲第５項に記載の活性化合物。７．タンパク質ｐ５３のＤＮＡ配列が、セリン３９２を除去することによってＣ末端が短縮されたものである、請求の範囲第５項に記載の活性化合物。８．抗腫瘍物質が、プラスミノーゲン活性化物質インヒビター−１（ＰＡＩ −１）、ＰＡＩ−２、ＰＡＩ−３、アンギオスタチン、血小板因子４、ＴＩＭＰ −１、ＴＩＭＰ−２またはＴＩＭＰ−３である、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。９．抗腫瘍物質がペルフォリン、グランチーム、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ −１２、インターフェロン、例えばＩＦＮα、ＩＦＮｂ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、オンコスタチンＭ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１ α、ＭＩＰ−１β、ＮＡＰ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＬＩＦ、ＩＬ−１１またはＩＬ−１３である、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。１０．抗腫瘍物質が免疫グロブリンのＦｃ断片を有する融合タンパク質である、請求の範囲第９項に記載の活性化合物。１１．抗腫瘍物質が酵素であり、この酵素が、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ、ニトロレダクターゼ、β−グルクロニダーゼ（特に、ヒト、植物または細菌性β−グルクロニダーゼ）、カルボキシペプチダーゼ、（好ましくは、シュドモナス由来のもの）、ラクタマーゼ（好ましくは、Bacillus cereus由来のもの）、ピログルタメートアミノペプチダーゼ、Ｄ−アミノペプチダーゼ、オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ホスファターゼ、ヒドロキシニトリルリアーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼまたはグリコシダーゼである、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の活性化合物。１２．リソソーム保存が酵素のＤＮＡ配列の点突然変異によって減少され、細胞外分泌が増加された、請求の範囲第１１項に記載の活性化合物。１３．酵素のシグナル配列が相同性シグナル配列によって置換されて、細胞外分泌が向上された、請求の範囲第１１項に記載の活性化合物。１４．数個の同一または異なる抗腫瘍物質のＤＮＡ配列を含み、それぞれの場合に２個のＤＮＡ配列が内部リボソーム入口部位のＤＮＡ配列を介して互いに接続されてなる、請求の範囲第１〜１３項のいずれか１項に記載の活性化合物。１５．ベクターに挿入された、請求の範囲第１〜１３項のいずれか１項に記載の活性化合物。１６．ベクターがウイルスである、請求の範囲第１５項に記載の活性化合物。１７．ウイルスがレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、単純ヘルペスウイルスまたはワクシニアウイルスである、請求の範囲第１６項に記載の活性化合物。１８．プラスミドに挿入された、請求の範囲第１〜１４項のいずれか１項に記載の活性化合物。１９．コロイド分散液系で調製される、請求の範囲第１５〜１８項のいずれか１項に記載の活性化合物。２０．コロイド分散液系がリポソームである、請求の範囲第１９項に記載の活性化合物。２１．コロイド分散液系がポリリシンリガンドである、請求の範囲第２０項に記載の活性化合物。２２．内皮細胞の膜構造に結合するリガンドによって補足された、請求の範囲第１５〜２１項のいずれか１項に記載の活性化合物。２３．リガンドが、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体、またはその抗体断片であって、その可変ドメインによって、内皮細胞の膜構造に結合し、またはサイトカインまたは成長因子、またはその断片または部分配列であって、平滑筋細胞上のレセプターに結合するものであるか、またはＳＬｅＸ、ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１、ＬＥＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４のような付着分子である、請求の範囲第２２項に記載の活性化合物。２４．内皮細胞の膜構造が、マンノースのレセプター、ＩＬ−１または成長因子、例えばＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβである、請求の範囲第２３項に記載の活性化合物。２５．静脈内、動脈内または腹腔内注射、組織、組織裂への注射、または局所投与のための医薬製剤中の、請求の範囲第１〜２４項のいずれか１項に記載の活性化合物。