CN1675374A

CN1675374A - 肝脏疾病的治疗

Info

Publication number: CN1675374A
Application number: CNA038192063A
Authority: CN
Inventors: 阎云
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-08-19
Filing date: 2003-08-12
Publication date: 2005-09-28
Also published as: JP2006506975A; WO2004016744A2; EP1573063A2; CA2494293A1; KR20060015446A; AU2003259795A1; TW200405006A; WO2004016744A3; US20040101916A1; EP1573063A4

Abstract

一种确定一个体是否正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性的方法。该方法包括提供自该个体取得的样品，且确定样品中GADD45β表达水平或GADD45β活性水平。假如样品中GADD45β表达水平或GADD45β活性水平低于来自正常个体的样品，则表示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性。本发明也披露一种鉴定用来治疗肝病的化合物的方法，以及治疗这样的疾病的方法。

Description

肝脏疾病的治疗

背景技术

肝硬化症已被视为肝癌的前兆。有有力的流行病学证据显示，肝硬化症和肝癌与酒精消耗有关。一旦发生肝硬化症，停止酗酒也无法防止肝癌发展。

发明内容

本发明涉及生长停滞与DNA损害可诱导的基因45β((growth arrest andDNA-damage-inducible gene 45 beta)(GADD45β)在诊断及治疗肝病(如硬化症和肝癌)、以及鉴定治疗此种疾病的治疗性化合物中的用途。

在一个方面，本发明披露一种确定一个个体是否正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性的方法，上述肝病是如肝硬化或肝癌。在一个实施例中，该方法包含提供来自一个个体的样品(例如，肝脏样品)，以及在样品中测定GADD45β表达水平。若GADD45β在样品中的表达水平低于来自正常个体的样品，则显示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险。GADD45β的表达水平可以藉由测量GADD45βmRNA或GADD45β蛋白质的量来得到。GADD45βmRNA水平可由，例如原位杂交、PCR、或RNA印迹分析来测定。GADD45β蛋白质水平可以通过，例如蛋白质印迹分析来测定。在另一实施例中，方法包括提供来自一个个体的样品，以及测定样品中GADD45β活性水平。若样品中活性水平低于来自正常个体的样品，则显示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性。GADD45β活性可以通过，例如测定其抑制正常细胞生长及在异常肝细胞中诱导编程性细胞死亡的能力来决定。

另一方面，本发明披露一种鉴定治疗肝病，如肝硬化及肝癌，的化合物的方法。在一个实施例中，该方法包含使化合物与细胞(例如，肝细胞)接触，以及测定GADD45β在细胞内的表达水平。若化合物存在时GADD45β表达水平高于化合物不存在时的表达水平，则该化合物具有治疗肝病的潜力。细胞可以是经由S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)或醇(alcohol)处理的细胞、p53表达水平低于正常细胞的细胞、GADD45β基因的转录由含SEQ ID NO：1的启动子指导、表达CCAAT/NF-Y因子或是NF-κB因子的细胞、以及上述特性的结合的细胞。在另一个实施例中，方法包括使化合物与细胞接触，以及测定GADD45β在细胞内的活性水平。若有化合物存在时GADD45β活性水平活性高于无化合物存在时，则该化合物具有治疗肝病的潜力。

SEQ ID NO：1是位于GADD45β基因核苷酸-870到-1：

ggtgacagct gatgtgtatt gggctcttac tgtcagccgt attttatgcc

atgctctgca accagcgag gccggcgctg cagacccatt actcagacgg

gaacagagag gccgggagaa gcgaaatcac ccaggggctg gggtcgtcgc

agccaggaga gactccggcc ctcaccacca cctgggcgag atcacgctgc

aaacggggcc ccttcccggt gcagcccctc cacccccagc agaacttggg

aaaggcgcgg tccgggactc tccgcggatc gggaggggat tccaggcccc

cccgaaagtc cgggccgcct cgcgcgctgg aaatcccgcg cgcgccccga

accgcggctc ggctgccggg aaatcaggag aaaaaaactt ctgctttttt

ttcttttctg gcattcgcgg tcacctaccc ggcccccgcg cgccctcctc

ccggttctcg cccccacgtg gggcgccccc gcacgccgct cctccccctc

ccctccgtcg gccaaccgca gagctagctg cactcgccct tgtctttcca

ccaataggag gggcgaatga ctccactgag gccacgccca atgttcaagt

ctataaaagt cggtgccgga ggctcccagc tcagatcgcc gaagcgtcgg

actaccgttg gtttccgcaa cttcctggat tatcctcgcc aaggactttg

caatatattt ttccgccttt tctggaagga tttcgctgct tcccgaaggt

cttggacgag cgctctagct ctgtgggaag gttttgggct ctctggctcg

gattttgcaa tttctccctg gggactgccg tggagccgca tccactgtgg

attataattg caacatgacg (SEQ ID NO：1)

还在另一方面，本发明披露一种治疗肝病，如肝硬化或肝癌，的方法。该方法包括鉴定一个体是否正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性，并投药给该个体一组合物，以增加GADD45β基因在该个体内的水平。组合物可以是编码GADD45β蛋白的核酸、编码p53蛋白的核酸、GADD45β蛋白、p53蛋白质、S-腺苷甲硫氨酸、或是其组合。GADD45β蛋白或p53蛋白既指野生型GADD45β蛋白或野生型p53蛋白，亦指具有等同生物功能的变体(例如，野生型GADD45β蛋白或野生型p53蛋白的片段)。组合物可以直接投药给该个体的肝细胞。

本发明的范围内亦包括一种治疗肝病(如肝硬化及肝癌)的药物组合物。组合物可包含编码GADD45β蛋白的核酸，以及药学上可接受的载体。它也可以包含GADD45β蛋白本身，以及药学上可接受的载体。

本发明提供用以诊断及治疗与GADD45β表达量不足相关的肝病的方法。本发明的一个或更多个实施方式的细节将详载于后面随附的说明书中。本发明的其它特色、目的、及优点将从详细说明书与权利要求中清楚体现。

详细说明

本发明是基于一个意外的发现，即GADD45β基因在人肝硬化或是肝癌中下调，GADD45β基因的表达受S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)诱导，并且是p53依赖的。

本发明提供一种诊断与治疗肝病(如肝硬化及肝癌)、以及鉴定治疗这样的疾病的治疗性化合物的方法。

本发明的诊断方法涉及将制备自一个个体的样品中(例如，肝脏样品)的GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白质活性与制备自正常人，即没有罹患肝脏疾病的人，的样品进行比较。较低的GADD45β表达或活性水平显示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险。本发明的该方法可以独立使用或是与在适宜个体中诊断肝病的其它方法配合使用。

GADD45β表达水平可以在mRNA水平或在蛋白水平来测量。测量组织样品中的mRNA水平的方法在本领域已知。为了测量mRNA水平，可以将细胞溶解，溶胞产物内GADD45βmRNA含量、或纯化或半纯化自溶胞产物的RNA中的GADD45βmRNA水平，可以利用各种各样方法来测量，包括，但不限于利用可检测的标记的GADD45β特异性DNA或RNA探针进行杂交实验，以及利用适当的GADD45β特异性寡核苷酸引物进行定量或半定量的RT-PCR方法。另外，定量或半定量的原位杂交方法可以使用，例如组织切片或未溶解的细胞悬浮液、以及可检测的(例如，荧光或酶)标记的DNA或RNA探针。其它定量mRNA的方法包括RNA保护测定(RNAProfection assay)(RPA)以及SAGE。

测量组织样品内的蛋白含量的方法在本领域也已知。许多这样的方法是利用抗体(例如单克隆或是多克隆抗体)，该抗体特异性地与GADD45β蛋白结合。在这样的方法中，抗体本身及与之结合的第二抗体可被可检测地标记。或者，抗体可以与生物素偶联，被可检测的标记的抗生物素蛋白(avidin)(一种与生物素结合的多肽)可以被用来检测生物素化抗体是否存在。本领域技术人员所熟悉的这些方法(包含“多层三明治”测试法)的组合可被用来提高方法的灵敏度。这些蛋白测量方法中的某些方法(如ELISA或蛋白印迹)可用于细胞胞溶产物，其它方法(如免疫组织法或荧光流式细胞计)可用于组织切片或未溶解的细胞悬浮液。测量标记量的方法将依赖于标记的特性，在本领域中也是熟知的。适当的标记包含，但不限于，放射性核素(如¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S、³H、或³²P)、酶(如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、荧光素酶、β-半乳糖苷酶)、荧光成分或蛋白(如荧光素、罗丹明、藻红素、GFP、或BFP)、或荧光成分(如由Quantum Dot Corporation，Palo Alto，CA提供的QdotTM nanoparticles)。其它可采用的方法包括定量免疫沉淀或补体结合分析。

GADD45β活性可以用本领域熟知的方法来测定，如通过测量其抑制细胞生长的能力以及在异常肝细胞中诱导编程性细胞死亡的能力(Takekawa和Saito(1998)Cell 85，521-530；Nakayama，et al.(1999)Biol.Chem.274，24766-24772；Selvakumaran，et al.(1994)Mol.Cell Biol.14，2352-2360；以及Liebermann和Hoffman(1998)Oncogene 17，33 19-3329)。

本发明亦提供一种鉴定候选化合物(例如，蛋白、肽、肽的拟态(peptidomimetics)、类肽(peptoids)、抗体、或是小分子)的方法，该候选化合物可增加细胞内GADD45β基因表达水平或是GADD45β蛋白活性水平。以此鉴定而得的化合物可用于治疗其特征在于GADD45β表达或活性异常的病症，如肝硬化和肝癌。

本发明的候选化合物可以用本领域已知的组合的文库方法中的许多方法中的任何方法获得。这样的文库包括肽文库、类肽文库(peptoid library)(其内的分子具有肽的功能性、但具有新的非肽骨架、可抵御酶降解的分子的文库)；空间上可从事的(addressable)平行固相或溶液相文库；由去褶合(deconvolution)或是亲和层析选择而得的合成文库；以及“一珠一化合物”(one-bead one-compound)文库。参见，例如，Zuckermann，et al.(1994)J.Med.Chem.37，2678-85；以及Lam(1997)Anticancer Drug Des.12，145。

合成分子文库的方法的例子可以在本领域发现，如DeWitt，et al.(1993)PNAS USA 90，6909；Erb，et al.(1994)PNAS USA 91，11422；Zuckermann，et al.(1994)J.Med.Chem.37，2678；Cho，et al.(1993)Science 261，1303；Carrell，et al.(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33，2059；Carell，et al.(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33，2061；和Gallop，et al.(1994)J.Med.Chem.37，1233。

文库内的化合物可以存在于溶液里(Houghten(1992)Biotechniques 13，412-421)、或在珠子上(Lam(1991)Nature 354，82-84)、在芯片上(Fodor(1993)Nature 364，555-556)、细菌(Ladner，美国专利号5,223,409)，孢子(Ladner，美国专利号5,223,409)、质粒(Cull，et al.(1992)PNAS USA89，1865-1869)或是噬菌体里(Scott和Smith(1990)Science 249，386-390；Devlin(1990)Science 249，404-406；Cwirla，et al.(1990)PNAS USA 87，6378-6382；Felici(1991)J.Mol.Biol.222，301-310；以及Ladner见前)。

要鉴定能调制细胞内GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白活性水平的化合物，细胞(如肝细胞)先与候选化合物接触后，相对于没有候选化合物存在时，评价GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白活性水平。细胞可以是包含GADD45β基因、但不在自然状态下表达它的细胞、在自然状态下表达GADD45β基因的细胞、或是经修饰以表达重组核酸序列的细胞、例如具有与标记物基因融合的GADD45β启动子。细胞也可以是用S-腺苷甲硫氨酸或是醇处理的细胞、与正常细胞中相比在较低水平表达p53量的细胞、GADD45β基因的转录受包含SEQ ID NO：1的启动子指导、表达CCAAT/NF-Y因子或是NF-κβ因子的细胞、或是上述这些特征的组合的细胞。GADD45β基因表达或标记物基因表达和GADD45β蛋白活性水平或标记物蛋白活性可以用前述方法或是本领域已熟知的任何其它方法测定。当GADD45β基因或标记物基因的表达量或GADD45β蛋白或标记物蛋白的活性水平在候选化合物存在时高于候选化合物不存在时，候选化合物被确定为治疗肝病的潜在药物。

本发明亦提供治疗肝病的方法。将要被治疗的个体通过测量来自一个体的由前述方法所制备的样品内，GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白水平来加以确定。若GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白水平在来自个体的样品中低于来自正常人的样品，个体是用有效量的在个体内调制GADD45β水平的化合物进行治疗的候选者。

治疗方法可以在体内或回体(ex vivo)进行，单独或是与其它药物或疗法合用。

在一体内方法中，将治疗性化合物(例如，包含调制细胞内GADD45β基因表达水平或GADD45β蛋白活性水平或GADD45β蛋白本身的化合物的组合物投药给该个体。一般地，该化合物将被悬浮于药学上可接受的载体(如生理食水)中，以口服、或静脉注入、皮下、肌肉、鞘内、腹腔内、直肠内、阴道内、鼻内、胃内、气管内、或肺内注射或植入的方式给药。治疗肝病时，化合物可以直接送入肝组织。

所需剂量依赖于：给药途径、配方性质、个体疾病的性质、个体的身材、体重、体表面积、年龄、性别、所施用的其它药物与主治医师的判断的选择。合适的剂量在0.01-100.0μg/kg的范围内。考虑到可利用的化合物的多样性以及各种给药途径的不同的效力，预料到所需要的剂量会有很大不同。例如，口服给药预计比静脉注射给药需要更高剂量。正如在本领域已很好地认识的，这些剂量水平的差异可通过使用用于优化的标准经验途径来调整。将化合物包埋进合适的传递载体内(如聚合微粒或可植入装置)有可能增强传输的效力，尤其对口服传递而言。

另外，包含编码GADD45β蛋白的核酸序列的多核苷酸可被传入个体，例如，藉由使用本领域已知的聚合性、可生物降解的微颗粒或是微胶囊传输装置。

另一个达到核酸摄取的方法是利用用标准方法制备的脂质体。载体可以单独掺入这些传输媒介物中，或是与组织特异性的抗体一起被掺入。或者，可以制备由通过静电力或共价键附着于多聚L-赖氨酸的质粒或其它载体组成的分子共轭物。多聚L赖氨酸与能与靶细胞上受体结合的配体结合。(Cristiano，et al.(1995)J.Mol.Med.73，479)。或者组织特异性靶向可以通过利用本领域已知的组织特异性转录调控元件(TRE)来达到。传送“裸DNA”(即不用传输媒介物)到肌肉内、皮层内或皮下部位是另一个达到体内表达的方法。

在相关的多核苷酸(如表达载体)中，将一能表达编码GADD45β蛋白的核酸序列被可操作地接合到启动子或增强子-启动子组合上。增强子提供时间上、位置上、及水平上的表达特异性。不同于启动子的是，只要有启动子存在，增强子能在位于距转录起始位点不同距离的地方发挥功能。增强子亦可以位于转录起始位点的下游。

适当的表达载体包含质粒及病毒载体，如疱疹病毒、逆转录病毒、牛痘病毒、减弱的牛痘病毒、金丝雀痘病毒、腺病毒、腺伴随病毒，以及其它等。

多核苷酸可以在药学上可接受的载体内给药。药学上可接受的载体是适于投药给人体的生物性相容媒介物，如生理食盐水或脂质体。治疗上有效量，是在所治疗的个体上能产生医学上所需结果(如GADD45β水平增加)的多核苷酸的量。正如在医学领域已熟知的，对任何个体的剂量依赖于许多因子，包含个体身材、体表面积、年龄、所施用的特殊化合物、性别、给药时间及途径、一般健康状况、以及同时施用的其它药物。剂量可能会不同，但多核苷酸给药的优选剂量是10⁶～10¹²拷贝的多核苷酸分子。若有需要，这一剂量可以重复施用。给药途径可以是前述中任一种。

治疗与GADD45β活性不足相关的肝病的个体时所使用的回体策略可以将编码GADD45β蛋白的多核苷酸序列转染或转导入获自个体的细胞。或者，细胞可以在体外用载体转染，该载体被设计成通过同源重组方式在细胞基因组的天然发生的内源性GADD45β基因的转录起始位点上游插入新的活性启动子。这样的方法，即将原本已经在很大程度上沉默的基因“接通”的方式，在本领域是已熟知的。选择和扩展能以所需水平表达GADD45β的细胞后，再将转染或转导过的细胞送回个体。细胞可以是广泛类型中的任何一种，包括，但不限于，神经细胞、造血细胞(如骨髓细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、T细胞、或B细胞)，成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、角质细胞、或肌肉细胞。只要这些细胞能在个体内存活，就可作为GADD45β蛋白的来源。

回体方法包括下列步骤：从个体收集细胞，培养细胞，用表达载体转导细胞，以及在适合GADD45β表达的条件下维持细胞。这些方法在分子生物学领域是熟知的。转导步骤是通过使用任何用于回体基因治疗的标准方法而完成的，包括磷酸钙、脂质体转染法、电穿孔法、病毒感染、以及biolistic基因转移。另外，脂质体或聚合微粒皆可被使用。成功转导的细胞可随后按，例如GADD45β基因的表达进行挑选。细胞可以随后注入或植入个体。

此外，用于治疗肝病的治疗组合物可以包含S-腺苷甲硫氨酸、编码p53蛋白的核酸，或p53蛋白本身。这些组合物及前述的GADD45β组合物可以单独使用或是组合使用。

下面的特殊实施例应被解释为仅仅是阐释性的，而并非以任何方式对公开的其它部分进行限定。相信本领域技术人员可基于此说明书在最大程度上利用本发明，而不需要进一步的详细说明。在此所引用的所有文献亦以其整体被列入本文的参考文件。

GADD45β基因在人肝硬化及肝癌中是下调的

用微阵列(microarray)进行的全部基因表达轮廓图(global geneexpression profiling)被用来分析HCC(肝细胞癌)组织和相应的正常肝组织中12,800种基因和寡核苷酸的表达水平的变化。

微阵列实验重复四次，结果用不同的软件来分析。与正常肝脏相比，GADD45β在肝细胞癌中是表达量最低的基因之一。

微阵列的结果经由RNA印迹来证实。一段213bp的包括GADD45β外显子3的GADD45βcDNA探针可以经由对GenBank序列号XM_030487的GADD45β序列进行RT-RCR而得到。GAPDH被用作RNA上样的对照。与正常肝组织中的表达相比较，GADD45β的表达在肝癌组织和肝癌细胞系HepG2和Hep3B中均较低。

此外，免疫组织化学研究证实，GADD45β在酒精肝硬化及肝癌组织中与正常肝组织相比均低表达。慢性肝硬化组织中的GADD45β表达仍高于肝癌组织的相应病灶。相反地，在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、鳞癌、或肉瘤组织中，GADD45β并未低表达，暗示GADD45β的低表达是肝组织特异的。

用RNA印迹检验人类GADD45α与GADD45β mRNA在不同组织中的表达。GADD45β mRNA可以很容易地在肾、肝、与肺中检测到，暗示GADD45β基因在解毒组织中的表达。GADD45αmRNA与GADD45β一样在大多数组织中检测的到，但被发现在骨骼肌组织中增高。GADD45α和β二者在正常肝组织中表达量均最高，暗示它们是肝组织特异性基因。

用RNA印迹测定醇处理后GADD45α与GADD45β在HepG2克隆中的表达。结果显示，经醇处理后，GADD45α表达以剂量依赖的形式增加，但GADD45β的表达则没有改变。这一结果暗示，这两个基因在酒精相关的DNA损害中扮演不同角色，虽然这两个基因家族成员之间序列有80％的同源性。在HepG2细胞内，缺乏GADD45β对醇处理的反应，暗示GADD45β功能异常与人肝癌发生有关系。

SAMe诱导GADD45β表达

用SAMe对GADD45β进行诱导，在CL-48正常肝细胞与HepG2细胞二者间表现出不同反应模式。CL-48和HepG2细胞用0、0.1mM、及2.0mMSAMe处理。经72小时处理后，利用RNA印迹来分析GADD45β表达，以18S RNA作内上样对照。结果证明，在CL-48细胞中，GADD45β被低剂量的SAMe诱导，而在较高剂量SAMe时诱导到达平台。然而在HepG2细胞中，诱导仍是剂量依赖的。此结果暗示，SAMe通过GADD45β诱导肝癌细胞的编程性细胞死亡。

GADD45β的表达是p53SAme依赖的

用RNA印迹检验在不同的p53背景下，SAMe处理后GADD45β的表达。在HepG2(p53野生型)中，GADD45β的表达被SAMe在不同剂量范围上调。相反地，在Hep3B(无p53)中，GADD45β的表达不受SAMe诱导。这一结果暗示，SAMe所诱导的GADD45β表达增加是p53依赖的。

GADD45β启动子的分析

测量GADD45β近端启动子区域指导的荧光酶活性，用对照β-Gal活性加以标准化。在位于-870～-1bp的片段显示最高的启动子活性。该区域中预测的启动子元件包括USF/N-Myc、NF-Y、CCAAT盒以及TATAA盒。

利用CCAAT/NF-Y因子对GADD45β进行转录调控

核蛋白分别由未经处理的CL-48细胞、及经过2.0mM的SAMe或是200mM醇处理48小时的CL-48细胞中提取。利用相应于GADD45β启动子区域内CCAAT/NF-Y盒的末端标记寡核苷酸，与提取的核蛋白一起孵育，结合复合物然后经由6％阻滞凝胶分离。利用未标记的寡核苷酸竞争物和NF-Y抗体鉴定GADD45β启动子Pα区内的蛋白结合位点。相较于未受处理的对照，用SAMe处理后主要条带的量降低。在超迁移(super-shift)测定中，结合复合物在SAMe处理的样品中被迁移，这与在SAMe处理的细胞中GADD45β过表达相一致。

利用NF-κB因子对GADD45β进行转录调控

核蛋白如前述进行提取。相应于GADD45β启动子区域内NF-κB盒的末端标记寡核苷酸序列与提取的核蛋白一起孵育，结合复合物然后经由6％阻滞凝胶分离。相较于未受处理的CL-48对照细胞，用SAMe或醇处理的细胞表现出一种结合复合物的量减少，另一种结合复合物的量增加。此结果显示用SAMe或醇给药后转录因子参与GADD45β表达的调控。

其它实施方式

本说明书所披露的所有特征可以在任何组合方式下进行组合。这一说明书中所披露的每一特征可以被服务于相同、等同或类似目的的替代特征所代替。因此，除非另有明确说明，所披露的每一特征只是等同或相似特征的具有通用性质系列中的一个例子。

从上述说明书中，本领域技术人员可轻易确定本发明的本质特征，并在不脱离本发明的精神和范围内，对本发明进行各种变动和修饰以使其适应于各种用途和条件。因此，其它实施方式也都在下面权利要求的范围之内。

Claims

1.一种用来确定一个体是否正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性的方法，该方法包含：

提供来自该个体的样品，以及

确定该样品中GADD45β的表达水平；

其中若样品中GADD45β的表达水平低于来自正常个体的样品，则显示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性。

2.如权利要求1所述的方法，其中该样品为肝脏组织样品。

3.如权利要求2所述的方法，其中该肝病是肝硬化。

4.如权利要求2所述的方法，其中该肝病是肝癌。

5.一种用来确定一个体是否正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性的方法，该方法包含：

提供来自该个体的样品，以及

确定该样品中GADD45β活性水平；

其中若样品中GADD45β活性水平低于来自正常个体的样品，则显示该个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性。

6.如权利要求5所述的方法，其中该样品为肝脏组织样品。

7.如权利要求6所述的方法，其中该肝病是肝硬化。

8.如权利要求6所述的方法，其中该肝病是肝癌。

9.一种用来鉴定治疗肝病的化合物的方法，该方法包含：

使化合物与表达GADD45β基因的细胞接触，以及

测定GADD45β基因在细胞内的表达量，

其中若化合物存在时GADD45β表达水平高于化合物不存在时，则显示该化合物是治疗肝病的候选物。

10.如权利要求9所述的方法，其中该细胞为肝细胞。

11.如权利要求10所述的方法，其中该肝病是肝硬化。

12.如权利要求10所述的方法，其中该肝病是肝癌。

13.如权利要求10所述的方法，其中该细胞用S-腺苷甲硫氨酸处理。

14.如权利要求10所述的方法，其中该细胞用醇处理。

15.如权利要求10所述的方法，其中该细胞以低于正常细胞的水平表达p53基因。

16.如权利要求10所述的方法，其中GADD45β基因的转录是由包含SEQ ID NO：1的启动子指导的。

17.如权利要求16所述的方法，其中该细胞表达CCAAT/NF-Y因子或是NF-κB因子。

18.一种用来鉴定治疗肝病的化合物的方法，该方法包含：

使化合物与表达GADD45β基因的细胞接触，以及

测定细胞中GADD45β活性水平，

其中若GADD45β活性水平在化合物存在时高于化合物不存在时，则显示该化合物是治疗肝病的候选物。

19.如权利要求18所述的方法，其中细胞为肝细胞。

20.如权利要求19所述的方法，其中该肝病是肝硬化。

21.如权利要求19所述的方法，其中该肝病是肝癌。

22.如权利要求19所述的方法，其中该细胞用S-腺苷甲硫氨酸处理。

23.如权利要求19所述的方法，其中该细胞用醇处理。

24.如权利要求19所述的方法，其中该细胞以低于正常细胞的水平表达p53基因。

25.如权利要求19所述的方法，其中GADD45β基因的转录是由包含SEQ ID NO：1的启动子指导的。

26.如权利要求25所述的方法，其中该细胞表达CCAAT/NF-Y因子或是NF-κB因子。

27.一种治疗肝病的方法，该方法包含：

鉴定一个体正罹患肝病或是有发展为肝病的危险性，以及

投药给该个体一组合物，以增加该个体内GADD45β水平。

28.如权利要求27所述的方法，其中该肝病是肝硬化。

29.如权利要求27所述的方法，其中该肝病是肝癌。

30.如权利要求27所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

31.如权利要求27所述的方法，其中该组合物包括编码GADD45β蛋白的核酸。

32.如权利要求31所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

33.如权利要求27所述的方法，其中该组合物包括GADD45β蛋白。

34.如权利要求33所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

35.如权利要求27所述的方法，其中该组合物包括S-腺苷甲硫氨酸。

36.如权利要求35所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

37.如权利要求27所述的方法，其中该组合物包括编码p53蛋白的核酸。

38.如权利要求37所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

39.如权利要求27所述的方法，其中该组合物包括p53蛋白。

40.如权利要求39所述的方法，其中该组合物投药至肝细胞内。

41.药物组合物，其包含编码GADD45β蛋白的核酸以及药学上可接受的载体。

42.药物组合物，其包含GADD45β蛋白以及药学上可接受的载体。