JP2002506437A - 癌の新規な検出および治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、癌、子宮内膜症および子宮内膜線維症の新たな診断および治療方法を提供する。さらに、癌、子宮内膜症および子宮内膜線維症を治療するための治療剤および医薬組成物も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 癌の新規な検出および治療方法 発明の分野 本発明は、一部には、癌、詳細には子宮内膜癌および乳癌、子宮内膜症および 子宮内膜線維症についての新たに開発されたアッセイ、ならびに上記疾病の治療 のために子宮内膜ステロイド結合蛋白II活性を転調させる治療薬剤の同定方法に 関する。 発明の背景 子宮内膜癌は年間新たに約４４５００の症例があり、年間約１００００人が死 亡する。癌がまだ内膜に限定して存在している時期に早期診断および治療を行え ば、治癒率は子宮切除術を行ったもののうち約９５％に達するであろう。パパニ コラウスミアは子宮内膜癌を示す可能性があるが、症例のわずか５０％において のみ有効である。残りのものについては、典型的には、不規則な膣出血が子宮内 膜癌の最初の臨床的徴候である。器官に限定して存在している癌の高感度検出方 法に対する必要性は大である。 ウテログロビンおよびＣＣ１０を包含するステロイド結合蛋白は、ポリ塩化ビ フェニルのメチルスルホニル代謝物と一緒にステロイドに結合する蛋白のクラス である。このクラスの蛋白のメンバーの正確な機能ははっきりしていないが、ウ テログロビンは、ＰＬＡ₂により媒介される応答を阻害することが示されている 。本発明遺伝子および遺伝子産物はウテログロビンおよびＣＣ１０に対して相同 性を示し、子宮内膜癌試料において発現増加を示し、また乳房組織において発現 されるものである。この遺伝子によりコードされる生成物を、子宮内膜ステロイ ド結合蛋白II（ＥＳＢＰII）と称し、それらのポリペプチドおよびポリヌクレオ チド配列をそれぞれ表１および２に示す。 発明の概要 これらの事柄および他の事柄のために、本発明の目的は、癌、詳細には子宮内 膜癌および乳癌、ならびに子宮内膜症および子宮内膜線維症のごとき種々の異常 な細胞増殖形態を治療し、その進行、寛解または再発をモニターする新たな方法 を提供する。さらに、癌、詳細には子宮内膜癌および乳癌、ならびに子宮内膜症 および子宮内膜線維症のごとき種々の異常な細胞増殖形態を治療するための治療 薬および医薬組成物をスクリーニングする方法も提供される。癌、詳細には子宮 内膜癌および乳癌、ならびに子宮内膜症および子宮内膜線維症のごとき種々の異 常な細胞増殖形態を治療するための治療薬および医薬組成物の使用も提供される 。 よって、本発明の１の態様によれば、ＥＳＢＰIIに結合し、その活性化を阻害 する化合物をスクリーニングする方法が提供される。 本発明のもう１つの態様によれば、ＥＳＢＰIIの過剰発現に関連した症状を治 療するための、かかる阻害化合物の使用方法が提供される。 本発明のさらにもう１つの態様によれば、ＥＳＢＰIIアンタゴニスト（阻害剤 ）が提供される。ＥＳＢＰIIを模倣し、ＥＳＢＰII結合分子に結合するが、ＥＳ ＢＰIIにより誘導される１の応答またはＥＳＢＰIIにより誘導される１つよりも 多い応答を引き起こさないものが好ましいアンタゴニストである。 ＥＳＢＰIIに結合し、あるいはこれと相互作用し、ＥＳＢＰIIの１の効果または ＥＳＢＰIIの１つよりも多い効果を抑制し、あるいはＥＳＢＰII発現を防止する ものが好ましいアンタゴニストである。 本発明の他の目的、特徴、利点および態様は、以下の説明により、当業者に明 らかとなるであろう。しかしながら、以下の説明および個々の具体例は本発明の 好ましい具体例を示すものであり、説明のためだけに示されるものである。以下 の説明を読み、本開示の他の部分を読めば、本発明の精神および範囲に属する種 々の変更および修飾は、当業者に容易に明らかとなるであろう。 発明の説明 本発明は、正常および異常なレベルを包含する、細胞、組織および体液中のＥ ＳＢＰII蛋白またはＥＳＢＰII ｍＲＮＡのレベルを検出するための定量的なら びに定性的診断アッセイに関する。よって、例えば、正常対照体液または組織試 料と比較してＥＳＢＰII蛋白の過剰発現を検出するために本発明診断アッセイを 用いて、子宮内内膜癌および乳癌を包含する癌の存在を検出してもよい。本発明 のＥＳＢＰIIのごとき遺伝子の発現レベルを調べるための用いることのできるア ッセイ方法は当業者によく知られている。かかるアッセイ方法は、ラジオイムノ アッセイ、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、グリッディング（grid ding）、免疫組織化学的アッセイ、in situハイブリダイゼーションアッセイ、 競合結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含す る。これらのうち、生物学的液体中の遺伝子発現蛋白の検出にはＥＬＩＳＡがし ばしば好ましい。市販品から容易に利用できない場合には、まず、ＥＬＩＳＡア ッセイにおいてはＥＳＢＰIIに特異的な、好ましくはモノクローナル抗体が調製 される。さらに、一般的には、ＥＳＢＰIIに特異的に結合するリポーター抗体も 調製される。リポーター抗体は放射活性、蛍光または酵素試薬、例えばセイヨウ ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリ性ホスファターゼのごとき検出可能試薬 に結合する。 ＥＬＩＳＡを行うためには、ＥＳＢＰIIに特異的な抗体を、抗体が結合する固 体支持体上、例えば、ポリスチレンディッシュ上でインキュベーションする。つ いで、ウシ血清アルブミンのごとき非特異的蛋白とともにインキュベーションす ることによりディッシュ上の遊離の蛋白結合部位を被覆する。次に、分析すべき 試料をディッシュ中でインキュベーションし、その間にＥＳＢＰIIがポリスチレ ンディッシュに結合した特異的抗体に結合する。未結合試料をバッファーで洗い 流す。ＥＳＢＰIIを特異的に指向し、セイヨウワサビペルオキシダーゼに連結し たリポーター抗体がディッシュ中に付着し、リポーター抗体とＥＳＢＰII結合モ ノクローナル抗体との結合が生じる。ついで、未結合リポーター抗体を洗い流す 。ついで、発色性基質を包含するペルオキシダーゼ活性を検出する試薬をディッ シュに添加する。ＥＳＢＰII抗体と結合して固定化されたペルオキシダーゼが発 色反応生成物を生じる。一定時間内の発色量は試料中に存在するＥＳＢＰII蛋白 量に比例する。典型的には、標準曲線と比較して定量結果を得る。本発明に限ら ず、典型的には、定量的診断アッセイにおいて、疾病を示す陽性の結果とは、正 常な健康個体（集団の９９．８６％） の平均血中レベルの標準偏差の３倍よりも高い血中レベルを示す結果である。 競合アッセイを用いてもよく、競合アッセイにおいて、ＥＳＢＰIIに特異的な 抗体が固体支持体に結合され、標識ＥＳＢＰIIおよび宿主由来の試料が固体支持 体上を通過し、固体支持体に結合した標識の検出量が試料中のＥＳＢＰII量と相 関関係を有する。 子宮内膜癌および乳癌、ならびに子宮内膜症および子宮内膜線維症のごとき種 々の異常な細胞増殖のマーカーとしてのＥＳＢＰII ｍＲＮＡを検出するために 核酸法を用いてもよい。ポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)ならびにリガーゼ連鎖反 応(ＬＣＲ)および核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＡＢＡ）のごとき他の核酸法を 用いて、種々の悪性疾患の診断およびモニタリングを目的として悪性細胞を検出 してもよい。例えば、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）は、多くの他のｍＲＮ Ａ種と複合混合物となった特定のｍＲＮＡ集団の存在を検出するために使用でき る強力な方法である。ＲＴ−ＰＣＲにおいて、まず、逆転写酵素を用いてｍＲＮ Ａ種を逆転写して相捕的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）とし、ついで、ｃＤＮＡを標準的な ＰＣＲ反応により増幅する。よって、ＲＴ−ＰＣＲは、増幅により単一種ｍＲＮ Ａの存在を明らかにする。したがって、ｍＲＮＡがそれを生成する細胞に非常に 特異的なものである場合、ＲＴ−ＰＣＲを用いて特異的なタイプの細胞の存在を 確認することができる。 格子状に配列されたクローンに対するハイブリダイゼーションを用いて、遺伝 子発現を検出し、そのレベルを定量することができる（グリッディング）。この アプローチにおいて、ＥＳＢＰII遺伝子をコードするｃＤＮＡが基材に固定され る。基材は適当なタイプのものであればよく、ガラス、ニトロセルロース、ナイ ロンまたはプラスチック等が挙げられるが、これらに限らない。ＥＳＢＰIIクロ ーンをコードするＤＮＡを基材に結合させ、ついで、分析対象（対象組織から単 離されたＲＮＡであってもよく、あるいはそのＲＮＡの相捕的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ ）コピーであってもよい）とともにインキュベーションする。分析対象またはハ イブリッドを検出するように設計された第２の分子に対する放射性標識または蛍 光標識を包含するいくつかの手段により、基材に結合したクローンと分析対象と の間のハイブリダイゼー ションを検出することができる。分析対象からのシグナル強度を既知標準のシグ ナル強度と比較することにより、遺伝子発現レベルの定量を行うことができる。 標的遺伝子のインビトロ転写、収量の定量、ついで、それを用いて標準曲線を描 くことにより、標準を得ることができる。 血液、尿、唾液、組織生検および剖検材料のごとき患者の体液および組織抽出 物（ホモジネートまたは可溶化組織）から得た試料について上記試験を行うこと ができる。 抗体 ＥＳＢＰIIポリペプチド、そのフラグメントもしくは他の誘導体、またはそれ らのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞を免疫原として用いてそれらに対 する抗体を得ることができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナル抗体ま たはモノクローナル抗体であってもよい。本発明は、キメラ、１本鎖、およびヒ ト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントまたはＦａｂ発現ライブラリーの生成物 も包含する。当該分野において知られた種々の手順を用いてかかる抗体およびフ ラグメントを得てもよい。 ポリペプチドを動物に直接注射することにより、あるいはポリペプチドを動物 (好ましくは、ヒトでない動物)に投与することにより、ＥＳＢＰIIに対して生成 した抗体を得ることができる。ついで、そのようにして得られた抗体は当該ポリ ペプチド自体に結合するであろう。このようにして、ポリペプチドのフラグメン トのみをコードする配列でさえも、本来のポリペプチド全体に結合する抗体を得 るために用いることができる。 モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系培養により生産される抗体を提供 する方法を用いることができる。例としては、ハイブリドーマ法（Kohler，G．a nd Milstein，C.，Nature 256:495-497(1975)）、トリオーマ法、ヒトＢ細胞ハ イブリドーマ法（Kozbor et al.，Immunology Today 4:72(1983)）およびヒトモ ノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法(Cole et al.,MON OCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R．Liss，Inc．(1985)中77-96 頁)が挙げ られる。 １本鎖抗体を得るために説明された方法（米国特許第４９４６７７８号）を適 用して、本発明の免疫原性ポリペプチド生成物に対する１本鎖抗体を得ることが できる。さらに、トランスジェニックなマウスまたは他の哺乳動物のごとき他の 生物を用いて免疫原性ＥＳＢＰIIに対するヒト化抗体を発現させてもよい。 よって、とりわけ、ＥＳＢＰIIに対する抗体を用いて、子宮内膜癌および乳癌 、ならびに子宮内膜症および子宮内膜線維症を包含する種々の異常な細胞増殖形 態を治療／抑制してもよい。 ＥＳＢＰII結合分子およびアッセイ ＥＳＢＰIIを用いて、ＥＳＢＰIIと相互作用する蛋白を単離することができ、 この相互作用は防御のための標的となりうる。ＥＳＢＰIIと他の因子との間の蛋 白−蛋白相互作用の阻害剤は、ＥＳＢＰII活性を転調させる薬剤の開発につなが る可能性がある。本明細書の用語「転調」は、ＥＳＢＰIIの機能に影響すること をいう。 よって、本発明は、ＥＳＢＰIIに結合する分子の同定方法も提供する。ＥＳＢ ＰIIに結合する分子に関する蛋白をコードする遺伝子を、例えば、リガンドパン ニングおよびＦＡＣＳソーティングのような当業者に知られた多くの方法により 同定することができる。かかる方法は、例えば、Coligan et al.，Current Prot ocols in Immunology 1(Rivett，A．J．Biochem．J．291：1-10(1993)):Chapter 5（1991）のような多くの研究室マニュアルに記載されている。 例えば、酵母ツーハイブリッド系（yeast two-hybrid system）は、転写アク チベーター活性の再構築を利用して、インビボにおいて第１の試験蛋白と第２の 試験蛋白との間の相互作用を検出するための方法を提供する。その方法は米国特 許第５２８３１７３号に開示されており、試薬類はClontechおよびStratageneか ら入手可能である。簡単に説明すると、ＥＳＢＰII ｃＤＮＡをＧａｌ４転写因 子ＤＮＡ結合ドメインに融合させ、酵母細胞において発現させる。目的とする細 胞から得られたｃＤＮＡライブラリーのメンバーをＧａｌ４のトランス活性化ド メインに融合させる。ＥＳＢＰIIと相互作用しうる蛋白を発現するｃＤＮＡクロ ーンは、Ｇａｌ４ 活性の再構築ならびにＧａｌＩ−ＧａｌＺのごときリポーター遺伝子発現のトラ ンス活性化を誘導するであろう。 もう１つの方法は、組み換えＥＳＢＰIIを用いてラムダｇｔ１１、ラムダＺＡ Ｐ（Stratagene）または同等のｃＤＮＡ発現ライブラリーをスクリーニングする ことである。組み換えＥＳＢＰII蛋白またはそのフラグメントをＦＬＡＧ、ＨＳ ＶまたはＧＳＴのごとき小型ペプチドタグに融合させる。ペプチドタグは、心筋 クレアチンキナーゼのごときキナーゼのためのリン酸化部位を有する可能性があ り、あるいはビオチン化されうる。組み換えＥＳＢＰIIを³²［Ｐ］でリン酸化し てもよく、あるいは未標識のまま使用してもよく、またストレプトアビジンまた はタグに対する抗体を用いて検出することができる。λｇｔ１１ｃＤＮＡ発現ラ イブラリーを目的細胞から作成し、組み換えＥＳＢＰIIとともにインキュベーシ ョンし、洗浄し、ＥＳＢＰIIと相互作用するｃＤＮＡクローンを単離する。例え ば、上記T．Maniatisらの文献参照。 もう１つの方法は、ｃＤＮＡがベクターの哺乳動物プロモーターとポリアデニ ル化部位との間に組み込まれている哺乳動物発現ライブラリーをスクリーニング することであり、ＣＯＳまたは２９３細胞に一時的にトランスフェクションし、 ついで、固定され洗浄された細胞を標識ＥＳＢＰII（好ましくは、ヨウ素化され たもの）とともに４８時間インキュベーションした後結合蛋白を検出し、オート ラジオグラフィーにより結合ＥＳＢＰIIを検出する。Sims et al.，Science 241 :585-589（1988）およびMcMahan et al.，EMBO J．10:2821-2832(1991)参照。こ の方法において、目的結合蛋白をコードするｃＤＮＡを含むｃＤＮＡのプールを 選択することができ、各プールをさらに分割し、ついで、一時的トランスフェク ション、結合およびオートラジオグラフィーのサイクルを繰り返すことにより目 的ｃＤＮＡを単離することができる。別法として、全ｃＤＮＡライブラリーを哺 乳動物細胞中にトランスフェクションし、プレートに結合したＥＳＢＰIIを含む ディッシュ上で細胞をパンニング（panning）することにより目的ｃＤＮＡを単 離することができる。洗浄後も結合している細胞を溶解させ、プラスミドＤＮＡ を単離し、細菌中で増幅し、ついで、単一ｃＤＮＡクローンが得られるまでトラ ンスフェクションおよびパンニングのサ イクルを繰り返す。Seed et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:3365（1987 ）およびAruffo et al.，EMBO J．6:3313(1987)参照。結合蛋白が分泌される場 合には、一時的にトランスフェクションされた細胞から得られる上清をアッセイ するための結合または中和アッセイが確立されたならば同様のプール法によりそ のｃＤＮＡを得ることができる。上清のスクリーニングのための一般的方法はWo ng et al.，Science 228:810-815(1985)に開示されている。 さらなる別法は、ＥＳＢＰIIと相互作用する蛋白を細胞から直接単離すること である。ＧＳＴまたは小型ペプチドタグとＥＳＢＰIIとの融合蛋白を作成し、ビ ーズ上に固定化する。生合成的に標識したあるいは未標識の蛋白抽出物を目的細 胞から調製し、ビーズとともにインキュベーションし、バッファーで洗浄する。 ＥＳＢＰIIと相互作用する蛋白をビーズから特異的に溶離させ、ＳＤＳ−ＰＡＧ Ｅにより分析する。精密配列決定により結合パートナーの一次アミノ酸配列を得 る。所望により、細胞蛋白のチロシンリン酸化のごとき機能的応答を誘導する薬 剤で細胞を処理することもできる。かかる薬剤の例は、成長因子またはインター ロイキン−２のごときサイトカインであろう。 さらにもう１つの別法は免疫アフィニティー精製である。組み換えＥＳＢＰII を標識または未標識細胞抽出物とともにインキュベーションし、抗ＥＳＢＰII抗 体とともに免疫沈降させる。プロテインＡ−セファロースを用いて免疫沈降物を 回収し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。ビオチン化により未標識蛋白を標識 し、ストレプトアビジンを用いてＳＤＳゲル上で検出する。精密配列決定により 結合パートナー蛋白を分析する。さらに、微量配列決定の前に、当業者に知られ た標準的な生化学的精製工程を用いてもよい。 さらにもう１つの別法は、結合パートナーを求めてペプチドライブラリーをス クリーニングすることである。組み換えタグ化または標識化ＥＳＢＰIIを用いて 、ＥＳＢＰIIと相互作用するペプチドをペプチドまたはホスホペプチドライブラ リーから選択する。ペプチドの配列決定により、相互作用蛋白中に見いだされう るコンセンサスペプチド配列の同定が可能となる。 これらの方法または他の方法のいずれかにより同定されるＥＳＢＰII結合パー ト ナーは当業者に知られたものであり、上で述べたそれらの推定結合パートナーを 本発明アッセイ方法に使用することができる。ＥＳＢＰII／結合パートナー複合 体の存在に関するアッセイを、例えば、酵母ツーハイブリッド系、複合体に特異 的な抗体を用いるＥＬＩＳＡまたはイムノアッセイにより行うことができる。Ｅ ＳＢＰII／結合パートナー相互作用を妨害または抑制する試験物質の存在下では 、試験物質のない対象と比較して複合体量が減少するであろう。 例えば、特異的抗体を用いるＥＬＩＳＡまたはイムノアッセイにより、あるい は放射性標識したＥＳＢＰIIを細胞または細胞膜とともにインキュベーションし 、ついで、遠心分離またはフィルター分離工程を行うことにより、遊離のＥＳＢ ＰIIまたは結合パートナーについてのアッセイを行う。ＥＳＢＰII／結合パート ナー相互作用を妨害または抑制する試験物質の存在下では、試験物質のない対象 と比較して遊離ＥＳＢＰIIまたは遊離結合パートナー量が増加するであろう。 本発明ポリペプチドを用いて、細胞または無細胞調合物中のＥＳＢＰII結合分 子のＥＳＢＰIIへの結合能を評価することもできる。 アゴニストおよびアンタゴニスト−アッセイおよび分子 ＥＳＢＰIIの活性を阻害、促進または転調させる化合物のスクリーニングのた めのプロセスにおいてＥＳＢＰIIを用いてもよい。 潜在的なＥＳＢＰIIアンタゴニストの例は、ＥＳＢＰIIに結合し、活性を妨害 する、分子またはペプチド、抗体、あるいは場合によってはオリゴヌクレオチド のごとき小型分子である。 また潜在的なアンタゴニストは、生物学的機能を失っており、ＥＳＢＰIIポリ ペプチドに結合した場合にその活性を阻害する、ＥＳＢＰIIの結合分子に密接に 関連した小型分子または蛋白、例えば結合分子のフラグメントを包含する。本明 細書の用語「結合分子」は、本発明ＥＳＢＰIIポリペプチドに特異的に結合する か、あるいはこれと相互作用する分子をいう。ＥＳＢＰII活性を増強または低下 させるコファクター、ユニットまたはサブユニットは結合分子の定義に包含され る。かかる結合分子は本発明の一部である。結合分子は天然に存在するものでな くてもよく、例え ば、ＥＳＢＰIIに特異的に結合する抗体または抗体由来の試薬であってもよい。 また潜在的なアンタゴニストは、アンチセンス法を用いて調製されたアンチセ ンス構築物を包含する。アンチセンス法を用いて、三重ヘリックス形成あるいは アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡにより遺伝子発現を制御することができ、いず れの方法もポリヌクレオチドのＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づくものである 。例えば、成熟ＥＳＢＰIIをコードするポリヌクレオチド配列の５’コーディン グ部分を用いて約１０〜４０塩基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオ チドを設計する。転写に関連した遺伝子の領域に対して相捕的となるようにＤＮ Ａオリゴヌクレオチドを設計し（三重ヘリックス−Lee et al.，Nucl．Acids Re s.，6:3073(1979);Cooney et al.，Science，241:456(1988)；およびDervan et al.，Science，251:1360(1991)参照）、そのことにより転写およびＥＳＢＰIIポ リペプチドの生成を妨害する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビ ボにおいてｍＲＮＡにハイブリダイゼーションし、ｍＲＮＡ分子のＥＳＢＰIIポ リペプチドへの転写をブロックする（アンチセンス−Okano，J．Neurochem.，56 :560(1991);Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Express ion，CRC Press，Boca Raton，FL(1988)）。上記オリゴヌクレオチドを細胞にデ リバリーして、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをインビボで発現させてＥＳＢ ＰIIポリペプチドの生成を抑制してもよい。このデリバリーは遺伝子治療を包含 する。 もう１つの潜在的なアンタゴニストは、ＥＳＢＰIIに結合し、これを結合分子 (例えば、基質)に近接できないようにして正常な生物学的活性を妨害する小型分 子である。小型分子の例は、小型ペプチドまたはペプチド様分子および有機化合 物を包含するが、これらに限らない。 さらに本発明は、子宮内膜癌および乳癌、子宮内膜症および子宮内膜線維症の ごとき過剰のＥＳＢＰII活性に関連した異常な症状を治療する方法を提供し、該 方法は、医薬上許容される担体と一緒になった有効量の上記阻害化合物（アンタ ゴニスト）を対象に投与してＥＳＢＰII活性を直接阻害すること、あるいはＥＳ ＢＰIIポリペプチドへの結合分子の結合をブロックすることを含む。 組成物およびキット かかるＥＳＢＰIIを阻害する化合物を適当な医薬担体と一緒に使用してもよい 。かかる組成物は治療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上許容 される担体または賦形剤を含む。かかる担体としては、セイライン、緩衝化セイ ライン、ブドウ糖、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ が挙げられるが、これらのものに限らない。処方は投与モードに適合させるべき である。 さらに本発明は、上記本発明組成物の１またはそれ以上の成分を入れた１また はそれ以上の容器を含む医薬パックおよびキットに関する。 投与 本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単独で使用してもよく、あるいは治療 化合物のごとき他の化合物と組み合わせて使用してもよい。 有効で便利な方法で、とりわけ、例えば、局所、経口、肛門、膣、静脈内、腹 腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または経皮経路で医薬組成物を投与することができ る。 一般的には、個々の症状または徴候の治療または予防に有効な量の医薬組成物 を投与する。一般的には、少なくとも約１０μｇ／体重ｋｇの量となるように組 成物を投与する。たいていの場合、１日約８ｍｇ／体重ｋｇを超えない量となる ように投与する。好ましくは、たいていの場合、用量は約１０μｇ／体重ｋｇな いし約１ｍｇ／体重ｋｇである。症状、その重さ、投与経路、合併症等を考慮し て、各治療方法および徴候に合った標準的方法により最適用量が決定されるであ ろう。 ワクチン 本発明のもう１つの態様は、動物、特に、哺乳動物における免疫学的応答を誘 導する方法に関し、該方法は、子宮内膜癌および乳癌、子宮内膜症および子宮内 膜線維症のごとき以上な細胞増殖の疾病から動物を防御する抗体を生成させるに 十分なＥＳＢＰIIまたはそのフラグメントもしくは変種を動物に接種することを 含む。本発明のさらにもう１つの態様は、動物における免疫学的応答の誘導方法 に関し、該方法は、遺伝子治療により、ＥＳＢＰIIまたはそのフラグメントもし くは変種をコー ドする遺伝子をデリバリーし、ＥＳＢＰIIまたはそのフラグメントもしくは変種 をインビボにおいて発現させて該動物を疾病から防御する抗体を生成させる免疫 学的応答を誘導することを含む。 本発明のさらなる態様は、動物、特に、哺乳動物宿主に導入された場合に、該 動物においてＥＳＢＰII遺伝子またはそれによりコードされる蛋白に対する免疫 学的応答を誘導する免疫学的組成物に関し、該組成物は、組み換えＥＳＢＰII遺 伝子またはそれによりコードされる蛋白を含み、あるいは該ＥＳＢＰII遺伝子ま たはそれによりコードされる蛋白の抗原をコードし発現するＤＮＡを含む。 ＥＳＢＰIIポリペプチドまたはそのフラグメントは、それ自体抗体を産生しな いが、第１の蛋白の安定化さることができ、融合蛋白を生じさせることのできる 補蛋白（co-protein）と融合させることができる。このような融合組換え蛋白は 、好ましくは、さらに、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）また はベータガラクトシダーゼのごとき、蛋白を可溶化し、その産生および精製を容 易にするような比較的大きい抗原性補蛋白を含む。さらに、補蛋白は、免疫系の 全身的な刺激を与えるという意味で、アジュバントとして作用してもよい。補蛋 白は第１の蛋白のアミノまたはカルボキシ末端のいずれかに結合してもよい。 本発明はまた、本発明の免疫原性組換えポリペプチドおよび／またはポリヌク レオチドと適当な担体とからなるワクチン処方も包含する。蛋白は胃で破壊され うるので、非経口的投与（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、皮内等の投与を包含 する）が望ましい。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファー、抗細菌 剤、およびその処方を個体の体液、好ましくは血液と等張にする溶質を含有して もよい水性および非水性滅菌注射溶液、ならびに懸濁化剤または増粘剤を含有し てもよい水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。処方は、単位投与または複数 投与用コンテナ、例えば、密封されたアンプルおよびバイアルに入れて提供され 、使用直前に滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵することが できる。ワクチン処方はまた、処方の免疫原性を高める水中油系のごときアジュ バント系および当該分野において知られている他の系を有してもよい。投与量は ワクチンの比活性に依存し、慣用的実験操作によって容易に決定できる。 ＥＳＢＰIIを参照して本発明を説明したが、本発明は自然発生的フラグメント ならび実質的には組み換え蛋白の免疫学的特性に影響しない付加、欠失または置 換を有する類似蛋白（例えば、５０％またはそれ以上の配列相同性を有する）を 包含する。 また本発明は、変化したＥＳＢＰIIレベルを有するトランスジェニック動物の 製造方法であって、ＥＳＢＰIIにより誘導される疾病を有する動物の製造方法を 提供する。宿主の適当な受精卵または胚に本明細書開示のＥＳＢＰIIをコードす る核酸をトランスフェクションすることによりトランスジェニック非ヒト動物を 得てもよい。例えば、米国特許第４７３６８６６号、５１７５３８５号、５１７ ５３８４号および５１７５３８６号参照。得られたトランスジェニック動物を、 変化したＥＳＢＰIIレベルを研究するための動物モデルとして使用してもよい。 特に、有用なトランスジェニック動物は、ＥＳＢＰIIポリペプチドの変化した発 現に関連した検出可能な表現型を示すものである。 ついで、問題の表現型を逆転または悪化させる能力について薬剤をスクリーニ ングしてもよい。 a．子宮内膜ステロイド結合蛋白II（配列番号：１）b．子宮内膜ステロイド結合蛋白IIヌクレオチド配列（配列番号２） 実施例 以下の実施例により本発明をさらに説明する。実施例は、特定の具体例を参照 することにより本発明を説明するためだけのものである。これらの例示は、本発 明の特定の態様を説明するものであり、開示した発明の範囲を限定するものでは ない。 特記しない限り、すべての実施例は、当業者によく知られ、常套的な標準的方 法を用いて行われる。Sambrook et al.，MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANU AL，2nd Ed.;Cold Spring Harbor Library Press，Cold Spring Harbor，N．Y． (1989)（本明細書では「Sambrook」という）のごとき標準的な研究室マニュアル に記載されたようにして、以下の実施例についての常套的な分子生物学的方法を 行うことができる。 特記しない限り、以下の実施例に示したすべての部または量は重量で示される 。 特記しない限り、以下の実施例中におけるフラグメントのサイズ分離は、Samb rookおよび例えばGoeddel et al.，Nucleic Acids Res．8:4057(1980)による文 献のごとき他の多くの文献に記載されているアガロースおよびポリアクリルアミ ドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）という標準的方法を用いて行われる。 実施例１ 正常組織および子宮内膜腫瘍組織におけるＥＳＢＰIIレベルを評価するために 、２種の子宮内膜腫瘍および対応正常組織からｍＲＮＡを抽出した。ついで、逆 転写酵素を用いてｃＤＮＡの第１鎖を調製し、ＥＳＢＰIIに特異的なプライマー を用いてポリメラーゼ連鎖反応を行った。各試料において同量の出発ｃＤＮＡを 用いることにより結果を正規化した。得られた生成物をゲル電気泳動、ついで、 臭化エチジウム検出により分析した場合、ＥＳＢＰIIは子宮内膜腫瘍において、 それに隣接する組織と比較して少なくとも５倍発現されることがわかった。 実施例２ ＥＳＢＰIIの組織分布を調べるために、種々の組織からｍＲＮＡおよびｃＤＮ Ａを調製し、ＥＳＢＰIIプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行った。 結果を以下に示す： 子宮内膜 ＋ 子宮内膜癌 ＋＋＋＋＋ 乳腺 ＋＋ 前立腺 不存在 結腸 不存在 結腸癌 不存在 肺 不存在 肺癌 不存在 肝臓 不存在 肝臓癌 不存在 膵臓 不存在 心臓 不存在 骨格筋 不存在 末梢血細胞 不存在

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．治療上有効量のＥＳＢＰIIアンタゴニストを患者に投与することを含む、 子宮内膜癌、乳癌、子宮内膜症または子宮内膜線維症の治療方法。 ２．細胞、組織および体液中の異常に高いＥＳＢＰIIポリペプチドのレベルを 分析することを含む、子宮内膜癌、乳癌、子宮内膜症または子宮内膜線維症の診 断方法。 ３．診断方法がＥＬＩＳＡを含むものである請求項２の方法。 ４．診断方法が免疫組織化学的方法である請求項２の方法。 ５．細胞、組織および体液中の異常に高いまたは低いＥＳＢＰII転写レベルを 分析することを含む、子宮内膜癌、乳癌、子宮内膜症または子宮内膜線維症の診 断方法。 ６．診断方法がノーザンブロット分析を含むものである請求項５の方法。 ７．診断方法がin situハイブリダイゼーションを含むものである請求項５の 方法。 ８．診断方法がＲＴ−ＰＣＲを含むものである請求項５の方法。 ９．診断方法がグリッディングを含むものである請求項５の方法。