JPH10505234A

JPH10505234A - 細胞サイクル依存性である細胞に特異的な活性化合物を用いる中枢神経系の疾病の遺伝子療法

Info

Publication number: JPH10505234A
Application number: JP8508478A
Authority: JP
Inventors: ゼドラツェック，ハンス‐ハラルト; ミュラー，ロルフ
Original assignee: ヘキスト、アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1994-08-26
Filing date: 1995-08-25
Publication date: 1998-05-26
Also published as: PT802985E; PT777739E; GR3033535T3; ES2190787T3; JPH10506526A; FI970768A0; DE69529174T2; ES2146770T3; CA2198472A1; AU3473295A; EP0777739B1; FI970768A; IL115051A0; AU3518595A; EP0777740A1; EP0804601B1; CA2198474A1; AU696593B2; EP0777740B1; ATE199741T1

Abstract

(57)【要約】中枢神経系の疾病の遺伝子治療を目的として、ＤＮＡ配列を記載する。このＤＮＡ配列の本質的要素は、活性化配列、プロモーターモジュールおよび活性物質の遺伝子からなっている。活性化配列は細胞に特異的な方法で、活性化した内皮細胞またはグリア細胞中で活性化される。この活性化は細胞サイクルに特異的な方法でプロモーターモジュールによって制御される。活性物質は、神経成長因子、ドパミン代謝酵素、および／または神経細胞の保護因子である。記載されたＤＮＡ配列をウイルスまたは非ウイルスベクターに挿入し、これに、標識細胞に親和性を有するリガンドを補足する。

Description

【発明の詳細な説明】細胞サイクル依存性である細胞に特異的な活性化合物を用いる中枢神経系の疾病の遺伝子療法技術分野中枢神経系の疾病の遺伝子治療のためのＤＮＡ配列が記載されている。このＤＮＡ配列の本質的要素は、活性化配列、プロモーターモジュールおよび活性物質の遺伝子からなっている。活性化配列は細胞に特異的な方法で、活性化した内皮細胞またはグリア細胞中で活性化される。この活性化は細胞サイクルに特異的な方法でプロモーターモジュールによって制御される。活性物質は、神経成長因子、ドパミン代謝酵素、および／または神経細胞の保護因子である。記載されたＤＮＡ配列をウイルスまたは非ウイルスベクターに挿入し、これに、標識細胞に親和性を有するリガンドを補足する。１．中枢神経経および成長因子個体発生を終了すると、神経細胞は十分に分化し、最早分裂することができない細胞からなっている。−般的には、それらは神経細胞本体と神経細胞突起とを特徴とし、求心性（デントライト(dentrites)）および遠心性（神経突起）の突起に識別される。遠心性の神経突起は、神経細胞当たり通常は１個しか形成されないが、シナプスを介してその標的器官（神経細胞または他の種類の体細胞）と接触する。神経細胞の解剖学的構造および機能の保持は、ニューロン成長因子の存在下で行われる。一般的な意味において、ニューロン成長因子は向神経性因子である理解すべきである (Massague，Cell 49，437(1987)，Pusztai et al.，J．Pathol．169，19 1(1993)，Ibanez et al.，PNAS 89，3060(1992)，Sonoda et al.，BBRC 185，10 3（1992）の総説）。これらの因子としては、第１表のニューロン成長因子が挙げられる。狭義には、神経成長因子（ＮＧＦ）類は、これらの因子に包含されるべきである。ＮＧＦは、ＮＧＦレセプターに結合することによって作用し、これは、特に知覚神経線維上に形成される。ＮＧＦは、細胞内に吸収され、退化的に神経細胞本体に輸送される(Johnson et al.，J．Neurosci．7，923（1987）。神経細胞本体では、ＮＧＦは、サイクリックアデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）を増加させ、続いてＣａ⁺⁺の流出を増加させ(Schubert et al.，Nature 273，718(1978)、更に、イノシトール脂質代謝によりジアシルグリセロールの方種およびタンパク質キナーゼＣの活性化、およびイノシトール三リン酸放出によるＣＡ⁺⁺の細胞内放出をもたらすと思われる(Abdel-Latif，Pharmacol．Rev．38，227(1986))。特異的、特にシグナル導入タンパク質のリン酸化により、この誘導から、機能が変化する。これにより、軸索の成長に関与するタンパク質の形成が増加する。これらのタンパク質としては、チャーティン(chartin)タンパク質(Black et al. ，J．Cell Biol．103，545(1986))、タウタンパク質およびチューブリン(Drubin et al.，J．Cell Biol．101，1799(1985))が挙げられる。従って、α−チューブリンおよびβ−チューブリン神経フィラメントタンパク質（ＮＦ−Ｌ、ＮＦ− Ｍ、およびＮＦ−Ｈ）およびペリフェリン(Portier et al.，Devi Neuroscience 6，215(1983))，Parysek et al.，J．Neurosci．7，781(1987))の合成が増加している。同時に、コリンアセチルトランスフェラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、およびニューロン特異性エノラーゼのような神経系で重要な酵素、の濃度も増加する(Vinores et al.，J．Neurochemistry 37，597(1981), Rydel et al.，J．Neurosci．7，3639(1987))。また、ニューロテンシン(Tischler et al.，Reg．Pept．3，415(1982))およびニューロペプチドＹ(Allen et al.，Neurosci．Lett．46，291（1984）のような神経伝達物質、およびアセチルコリンレセプター(Mitsuka et al.，Brain Res． 314，255(1984))およびエンセファリンレセプター(Inoue et al.，J．Biol．Che m．257，9238(1982))のような神経伝達物質レセプターの濃度も増加する。同時に、シナプシン１の濃度が増加する(Romano et al.，J．Neurosci．7，1300(198 7))。最終的分析では、ＮＧＦは神経細胞の機能状態を保持する。同時に、ＮＧＦは、軸索の成長を開始し、促進する。この神経原性およびシナプス原性活性には、ＮＧＦが常に含まれていることが必要である(Smith，Science 242，708(1988)， Mitchison et al.，Neuron 1，761(1988))。これは、特に毛様の神経親和性因子（ＣＮＴＦ）について報告されている(Lin et al.，Drugs of the Future 19，557(1994))。神経成長因子の神経親和性活性は、特に神経細胞の損傷に関して、例えば軸索の外科的分断に関して、実験的に立証されている。ＣＮＴＦを切断した神経の基端部に局所的に投与すると、外科的介入の後に死亡する神経細胞の割合は著しく減少する(Sendtner et al.，Nature 345,440(1990))。同時に、例えば神経ペプチド物質Ｐの濃度は、ＣＮＴＦを投与すると、脊髄神経節で著しく上昇する。座骨神経に損傷を受けたラットは、ＣＮＴＦを皮下投与すると、運動活性の回復が促進される(Lin et al.，Drugs of the Future 19，557(1994))。しかしながら、神経親和性因子の全身投与では、脊髄にありかつ血液−脳関門によって保護されている運動ニューロンが、軸索であって、関門の外側でも機能を示しかつこれによって神経親和性因子を吸収することができるものを有する場合にのみ有効である(Apfel et al.，Brain Res．605，1(1993))。神経細胞が、血液−脳関門の他の側、または反対側まで損傷を受けている場合には、神経親和性因子を頭蓋内に投与する必要がある。この方法では、視床軸索の分断の後の基部の視床ニューロンの逆行性変性(retrograde generation)は、実験により防止することができる(Clatterbuch et al.，PNAS 90，2222(1993)) 。しかしながら、再生過程を最良のものとする前提条件は、損傷を受けた神経細胞の部位に一定の神経親和性因子が存在することである。外科的損傷または損傷の軽減の時点に局所投与を行うことは可能であるが、これは外科的介入が一旦終了してしまえば、行うことは困難であるかまたはほとんど不可能である。例えば、鈍い外傷(blunt trauma)または毒素によるＣＮＳに対する散在性の損傷では、目標を定めて投与を行う機会は極めて僅かに限定される。外傷、免疫および毒素による影響を受けた結果として、グリア細胞が刺激されてＴＮＦαを産生することができる。このＴＮＦαは、その時点では神経細胞およびグリア細胞にとって有毒である(Owens et al.，Immunol．Today 15，566(19 94))。活性化合物をＣＮＳにできるだけ長時間存在させるため、神経親和性の活性化合物を発現する目的でイン・ビトロで導入した細胞（線維芽腫、内皮細胞および筋原細胞）を頭蓋内に注射する試みが行われている。この目的は、神経親和性の活性化合物を用いて、例えばパーキンソン病または痴呆症で外傷によりまたは退行的に損傷を受けた神経細胞の再生および機能を向上させることである。特に、パーキンソン病の場合には、イン・ビトロで導入された細胞を注射して、チロシンヒドロキシラーゼおよびドーパデカルボキシラーゼのような神経親和性酵素を分泌させ(Kopin，Ann．Rev．Pharmacol．Toxicol．32，467(1993)，Fisher et a l.，Physiol．Rev．11，582(1993)，Jiao et al.，Nature 362，450(1993))、またはヒト胎児性のドパミン作用性の黒質ニューロンを注射する(Loewenstein，Bi o/Technology 12，1075(1994))。しかしながら、この種の細胞は、限定された量でしか利用できない。一方、胎児性細胞の使用には、重大な倫理上の問題が起きている。代替法として、ベクターを直接脳に注射して、脳に細胞を形質導入して、所望な活性化合物を発現させることの可能性が検討されている(During et al.，Scie nce 266，1399(1994))。しかしながら、これらのベクターは細胞特異性をまったく示さないので、神経細胞がベクターによる感染またはトランスフェクションによって損傷を受ける危険性がかなりある。２．発明の説明本発明は、活性化合物であって、医薬品として患者に局所および全身投与することができ、かつこれによって神経特異性因子を神経細胞の損傷部位に比較的長期間に亙って産生するものに関する。この種の神経特異性因子は、神経細胞をそれ以上損傷を受けることから保護しかつ神経細胞の再生をもたらす神経親和性因子であることができる。しかしながら、神経特異性因子は、チロシンヒドロキシラーゼおよびドーパデカルボキシラーゼのようなチロシンからドパミンの合成に関与する酵素であることもできる。また、神経特異性因子は、ＴＮＦαを阻害しまたは中和する物質であることができる。この活性化合物の中心成分は、下記の要素からなるＤＮＡ構築物である。（本出願明細書の全文において、ＤＮＡは、相補性（ｃＤＮＡ）配列およびゲノムＤＮＡ配列の両方に共通の用語として用いられる。） 2.1. 活性化配列の選択活性化配列（ＵＡＳ＝上流活性化配列）は、標的細胞において形成されまたは活性を有する転写因子と相互作用するヌクレオチド配列（プロモーター配列またはエンハンサー配列）であって、内皮細胞またはグリア細胞において形成されまたは活性である転写因子と相互作用する配列と理解すべきである。ＣＭＶエンハンサーまたはＣＭＶプロモーター（ＥＰ０１７３１７７）、ＳＶ４０プロモーター、または当業者に知られている任意の他のプロモーター配列またはエンハンサー配列を、活性化配列として用いることができる。しかしながら、本発明においては、好ましい活性化配列としては、特に内皮細胞またはグリア細胞で形成されるタンパク質をコードする遺伝子由来の遺伝子制御配列または要素が挙げられる。 a) 内皮細胞で活性化される活性化配列これらのタンパク質の幾つかは、Burrows et al．(Pharmac．Therp．64，155( 1994)およびPlate et al．(Brain Pthol．4，207 (1994))によって記載されている。特に、これらの内皮細胞特異性タンパク質としては、例えば下記のものが挙げられる。脳特異性の内皮グルコース−１輸送体脳の内皮細胞は、Ｄ−グルコースの脳内への内皮経由輸送を行う目的でこの輸送体を極めて強力に発現する(Gerhart et al.，J．Neurosci．Res．22，464(1 989))。プロモーター配列はMurakami et al．(J．Biol．Chem．267，9300(1992) )によって記載されている。エンドグリンエンドグリンは、シグナル伝達性ではないＴＧＦβであると思われる(Gango s et al.，J．Biol．Chem．265，8361(1990)，Moren et al.，BBRC 189，356(19 92)，Cheifetz，J．Biol．Chem．267，19027(1992))。通常の内皮には少量含まれているが、増殖内皮では更に強力に発現する(Westphal et al.，J．Invest．D erm．100，27(1993)，Burrows et al.，Pharmac．Ther．64，155(1994))。プロモーター配列は、(Bellon et al.，Eur．J．Immunol． 23，2340(1993)，Ge et al.，Gene 138，201(1994))によって記載されている。ＶＥＧＦ配列２種類のレセプターが識別されている(Plate et al.，Int．J．Cancer 59， 520(1994))： ^*ＶＥＧＦレセプター１（ｆｌｔ−１） (de Vries et al.，Science 255，989(1992) （細胞質部分にｆｍｓ様チロシンキナーゼを含む）、および ^*ＶＥＧＦレセプター２（ｆｌｔ−２） (Terman et al.，BBRC 187，1579(1992)) （細胞質部分にチロシンキナーゼを含む）これらのレセプターは、内皮細胞上にほぼ独占的に見られるものである(S enger et al.，Cancer Metast．Rev．12，303(1993))。他の内皮特異性レセプターチロシンキナーゼ ^*ｔｉｌ−１またはｔｉｌ−２(Partanen et al.，Mol．Cell Biol．12，1 698(1992)，Schnuerch and Risau，Development 119，957(1993)，Dumont et al .，Oncogene 7，1471(1992)) ^*Ｂ６１レセプター（Ｅｃｋレセプター） (Bartley et al.，Nature 368，558(1994)，Pandey et al.，Science 268，567( 1995)，van der Geer et al.，Ann．Rev．Cell Biol．10，251(1994)) Ｂ６１Ｂ６１分子は、Ｂ６１レセプターのリガンドを表す (Holzman et al.，J．Am．Soc．Nephrol．4，466(1993)，Bartley etal. ，Nature 368，558(1994)) エンドセリン、特に ^*エンドセリンＢ(Oreilly et al.，J．Cardiovasc．Pharm．22，18(1993) ，Benatti et al.，J．Clin．Invest．91，1149(1993)，O´Reilly et al.，BBR C 193，834(1993))。プロモーター配列は、Yanasigawa et al.，Nature 332，41 1（1988）およびBenatti et al.，J．Clin．Invest．91，1149(1993)によって記載されている。 ^*エンドセリン１(Yanasigawa et al.，Nature 332，411(1988))。プロモーター配列はWilson et al.，Mol．Cell．Biol．10，4654(1990)によって記載されている。エンドセリンレセプター、特にエンドセリンＢレセプター(Webb et al.，Mo l．Pharmacol．47，730(1995)，Haendler et al．J．Cardiovasc．Pharm．20，1 (1992)) マンノース−６−リン酸レセプター (Perales et al.，Eur．J．Biochem．226，225(1994)，Dahms et al.，Cell 50 ，181(1987)) プロモーター配列は、Ludwig et al．(Gene 142，311(1994))，Oshima et a l．(J．Biol．Chem．263，2553(1988))およびPohlmann et al．(PNAS USA 84，5 575(1987))によって記載されている。 von Willebrand因子プロモーター配列はJahroudi and Lynch(Mol．Ce1l．Biol．14，999(1994)) ，Ferreira et al.，Biochem．J．293，641(1993)およびAird et al.，PNAS USA 92，4567(1995))によって記載されている。ＩＬ−１αおよびＩＬ−１β ＩＬ−１は活性化した内皮細胞によって産生される(Warner et al.，J．Imm unol．139，1911(1987)) プロモーター配列は、Hangen et al.，Mol．Carcinog．2，68(1986)， Tumer et al.，J．Immunol．143，3556(1989)，Fenton et al.，J．Immunol．13 8，3972(1987)，Bensi et al.，Cell Growth Diff．1，491(1990)，Mori et al. ，Blood 84，1688（1994）およびHiscott et al.，Mol．Cell．Biol．13，6231( 1993)によって記載されている。ＩＬ−１レセプタープロモーター配列は、Ye et al.，PNAS USA 90，2295（1993）によって記載されている。血管細胞付着分子（ＶＣＡＭ−１）内皮細胞でのＶＣＡＭ−１の発現はリポ多糖類、ＴＮＦ−α(Neish et al. ，Mol．Cell．Biol．15，2558(1995))，ＩＬ−４(lademarco et al.，J．Clin． Invest．95，264(1995))，ＩＬ−１(Mami et al.，J．Clin．Invest．92，1866( 1993))によって活性化される。ＶＣＡＭ−１のプロモーター配列は、Neish et al.，Mol．Cell．Biol．15 ，2558 (1995)，Ahmad et al.，J．Biol．Chem．270，897 (1995)，Neish et al .，J．Exp．Med．176，1583(1992)，ladermarco et al.，J．Biol．Chem．267， 16323（1992）およびCybulsky et al.，PNAS USA 88，7859 (1991)によって記載されている。合成活性化配列内皮細胞中で優先的または選択的な活性を有する転写因子のオリゴマー化した結合部位からなる合成活性化配列を、天然内皮特異性プロモーターの代替物として用いることもできる。これらの合成活性化配列のの一例は、転写因子ＧＡＴＡ−２であり、エンドセリン１における結合部位が遺伝子．．．ＴＴＡＴＣＴ．．．である(Lee et al.，Biol．Chem．266，16188(1991)，Dorfmann et al.，J ．Biol．Chem．267，1279(1992)およびWilson et al.，Mol．Cell．Biol．10，4 854(1990))。 b) グリア細胞で活性化される活性化配列また、好ましい活性化配列は、グリア細胞中で特に多量に形成されるまたは活性を有する転写因子と相互作用するヌクレオチド配列（プロモーター配列またはエンハンサー配列）であると理解すべきである。これらの活性化配列としては、特に、グリア細胞で検出することができる下記のタンパク質をコードする遺伝子などに由来する遺伝子制御配列または要素が挙げられる。 ^*Schwann 細胞特異性タンパク質ペリアキシン (Gillespie et al.，Neuron 12，497(1994)) プロモーター配列はGillespie et al．(Neuron 12，497(1994))によって記載されている。 ^*グルタミンシンテターゼ (Akimoto et al.，Brain Res．72，9(1993))，Fressinaud et al，J．Cel l Physiol．149，459(1991))。プロモーター配列はChakrabarti et al．(Gene 153，163(1995))およびBh andarie et al．(J．Biol．Chem．266，7784(1991))によって記載されている。 ^*グリア細胞特異性タンパク質（グリア筋原線維酸性タンパク質＝ＧＦＡＰ） (Akimoto et al.，Brain Res．72，9(1993)) プロモーター配列は、Kumanishi et al．(Acta Neuropath．83，569 (199 2))，Besuard et al．(J．Biol．Chem．266，18877(1991)，Reeves et al．(PNA S USA 86，5178(1989))，Brermer et al．(Brain Res．7,277(1990))およびMaso od et al．(J．Neurochem．61，160(1993))によって記載されている。^* Ｓ１００ｂグリア細胞タンパク質 Shen et al.，Mol．Brain Res．21，62 1994)) プロモーター配列は、Zimmer et al．(Brain Res．Bulletin 37，417(199 5))によって記載されている。 ^*ＩＬ−６（ＣＮＴＦ） (Sparacio et al.，J．Neuroimmunol．39，231(1992)) プロモーター配列はChernajoosky et al．(J．Cell．Biochem．Suppl．0/ 13，73(1989))，Ray et al．(Mol．Cell Biol．10，5736(1990))，Droogmans et al．(DNA Sequence 3，115(1992))，Mori et al．(Blood 84，2904(1994))，Li berman et al．(Mol．Cell．Biol．10，2327(1990))およびIshiki et al．(Mol ．Cell．Biol．10，2757(1990))によって記載されている。 ^*５−ＨＴレセプター (Whitaker-Azmitia et al.，Synapse 14，201(1993)) プロモーター配列は、Elliott et al．(Neurochem．Int．25，537(1994)) ，Veldman et al．(Mol．Pharmac．42，439(1992))，Adham et al．(PNAS USA 9 0，408(1993))，Mochizuki et al．(BBRC 185，517(1992))およびJin et al．(J ．Biol．Chem．267，5735(1992))によって記載されている。 ^*ＴＮＦα (Perez et al.，Cell 63，251(1990)，Merrill et al.，J．Immunol．151 ，2132(1993)) プロモーター配列は、Takashiba et al．(Gene 131，307(1993))およびva n der Ahe et al．(Nucl．Acids Res．21，5636(1993))によって記載されている。 ^*ＩＬ−１０ (Owens et al.，Immunol．Today 15，566(1994)) プロモーター配列は、Kim et al．(J．Immunol．148，3618(1992))，Kube et al．(Cytokine 7，1(1995)およびPlatzer et al.(DNA-Sequence 4，399(199 4)) ^*インシュリン様成長因子レセプターＩおよびII プロモーター配列は、Cooke et al．(BBRC 177，1113(1991)),Kim et al ．(Mol．Endocrin．5，1964，(e1991))，van Dijk et al．((Mol．Cell．Endocr in．81，81(1991)，Raizis et al．(Biochem．J．289，133(1993))およびYu et al．(Nature 371，714(1994))によって記載されている。ＶＥＧＦＶＥＧＦは、脈管形成した組織で、特に低酸素条件下で形成される(Berse et al.，Mol．Biol．Cell 3，211(1992)，Finkenzeller et al.，BBRC 208，43 2(1995)，Tischer et al．BBRC 165，1198(1989)，Leung et al.，Science 246 ，1306(1989)，Ferrara et al.，Endoc．Rev．13，18(1992))。ＶＥＧＦ遺伝子の遺伝子制御配列は、下記の通りである。 ^*ＶＥＧＦ遺伝子のプロモーター配列（５′−隣接領域） (Michenko et al.，Cell Mol．Biol．Res．40，35(1994)，Tischer et al .，J．Biol．Chem．266，11947(1991))または ^*ＶＥＧＦ遺伝子のエンハンサー配列（３′−隣接領域） (Michenko et al.，Cell Mol．Biol．Res．40，35(1994)、または ^*ｃ−Ｓｒｃ遺伝子 (Mukhopadhyay et al.，Nature 375，577(1995)，Bonham et al.，Oncoge ne 8，1973)，Parker et al.，Mol．Cell．Biol．5，831(1985)，Anderson et a l，Mol．Cell．Biol．5，1122(1985))、または ^*ｖ−Ｓｒｃ遺伝子 (Multhopadhyay et al.，Nature 375，577(1995)，Anderson et al.,Mol ．Cell．Biol．5，1122(1985)，Gibbs et al.，J．Virol．53，19(1985)) 2.2 プロモーターモジュールの選択細胞サイクルによって制御されるプロモーターモジュールは、例えばヌクレオチド配列−ＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒであると理解すべきである。このプロモーターモジュールの本質的機能は、細胞サイクルのＧＯ／Ｇ１相における活性化配列の機能を抑制し、Ｓ／Ｇ２相および続いて増殖細胞における細胞サイクル特異発現を確保することである。プロモーターモジュールＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒは、ヒトｃｄｃ２５ＣプロモーターのＧ２特異性発現の詳細な研究に関連して見いだされた。出発点は、細胞サイクルのＧ１相におけるプロモーターの遮断に関与する制御要素（細胞サイクル依存性要素；ＣＤＥ）を見いだしたことであった(Lucibelloら，EMBO U．14， 132(1995))。ゲノムジメチル硫酸（ＤＭＳ）フットプリント法および機能分析法 (functional analyses)（第１および２図）を用いて、ＣＤＥはＧ１に特異的にリプレッサー（ＣＤＥ結合因子；ＣＤＦ）に結合することによって非増殖（Ｇ０）細胞での転写を阻害することが示された。基底プロモーター(basal promoter) の領域に配置されているＣＤＥは、その抑制機能において、「上流の活性化配列」（ＵＡＳ）によって変化する。これにより、ＣＤＥ結合因子は、細胞サイクル依存的に、すなわち非増殖細胞および細胞サイクルのＧ１相において、５′に結合した活性化物質タンパク質の転写活性化作用を阻害するという結論が得られた（第３図）。この結論を更に実験によって確かめることができ、ウイルス性の非細胞サイクルによって制御される初期のＳＶ４０エンハンサーをｃｄｃ２５最小プロモーター(minimum promoter)（ＣＤＥおよび３′位の開始部位）と融合することによって、キメラプロモーターの細胞サイクルが明確に制御された（第４図）。次にｃｄｃ２５Ｃエンハンサーについて検討したところ、細胞サイクル依存的にＣＤＦによって制御される転写因子は、ＮＦ−Ｙ（ＣＢＦ）(Dorn et al.，Cell 50，8 63(1987)，van Hijisduijnen et al.，EMBO J．9，3119(1990)，Coustry et al. ，J．Biol．Chem．270，468(1995))、Ｓｐ１(Kadonaga ら，TIBS 11，10(1986) 、および新規でありかつＣＢＳ７に結合する転写因子であることが明らかになった。この研究において得られたもう一つの興味ある知見は、ｃｄｃ２５Ｃエンハンサー内のＮＦ−Ｙのみが、少なくとも１種類の他のＮＦ−Ｙ複合体またはＣＩＦと協同して効率的に転写を活性化することが見られたことである。ＮＦ−ＹもＳｐ１も両方ともグルタミン含量の高い活性化物質のクラスに属し、抑制の機構（例えば、特定の基底転写因子またはＴＡＦとの相互作用または干渉）に対する重要な情報を提供する。ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２のプロモーター配列を比較したところ、幾つかの領域で相同性が見られた（第５図）。３種類のプロモーター（含まれている多様性は機能上関連はない）総てに保存されているのは、ＣＤＥだけでなく、隣接Ｙ_cボックスも同様である。予想されるように、これらの領域は総てイン・ビボでタンパク質結合を示し、このタンパク質結合はＣＤＥの場合には細胞サイクル依存性であった。更に、３種類のプロモーターは総て、ＣＤＥの突然変異によって制御解除されることも示された（第２表）。ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２配列を比較したところ、直ちにＣＤＥの３′の領域に著しい類似性のあることも明らかになった（細胞サイクル遺伝子相同領域；ＣＨＲ）（第５図）。この領域は機能上はＣＤＥと同様に重要であるが（第２表）、それはイン・ビボでのＤＭＳフットプリント法の実験では明らかではない。これに対する可能な説明は、この因子とＤＮＡの小さな溝(minor grooves)との相互作用である。電気泳動移動度シフト分析（ＥＭＳＡ）実験の結果は、ＣＤＥとＣＨＲとは一緒にタンパク質複合体であるＣＤＦに結合することを示している。これらの観察は、グルタミン含量の高い活性化物質のＣＤＦによって媒介される抑制は、細胞サイクルによって制御される転写において頻繁に起きる機構であることを示している。しかしながら、ｃｄｃ２５Ｃプロモーターを制御するのに重要なものは、ＣＤＥ−ＣＨＲ領域だけでなく、基底プロモーターのヌクレオチド配列（位置＜−２０〜＞＋３０、第１図を参照されたい）内の開始部位（位置＋１）のものでもあることは明らかである。ＹＹ−１のイン・ビトロでの結合部位を含むこの領域での突然変異(Seto およびShenk，Nature 354，241(1991)，Usheva およびShenk， Cell 76，1115(1994))により、完全に制御解除される。ＣＤＥ−ＣＨＲが基底プロモーターに近接していることを考慮すれば、その結果としてＣＤＦは基底転写複合体と相互作用すると思われる。 2.3. 神経特異性因子の選択 a) ニューロン成長因子本発明において、神経特異性因子は、ニューロン成長因子をコードするＤＮＡ配列であると理解すべきである。例えば、これらのニューロン成長因子としては、特に下記のものが挙げられる。ＦＧＦ (Johnson et al.，Adv．Cancer Rec．60，1(1993))，Jay et al.，Scienc e 233，541(g1986)，Abrahahm et al.，EMBO J．5，2523(1986)，Science 233， 545(1986)，Mergia et al.，BBRC 138，644 9()1986)，Schweigerer，Nature 32 5，257(1987)，PNAS USA 84，842(1987)) 神経成長因子（ＮＧＦ） (Haktzopoulous et al.，Neuron 13，187(1994)，Takeda et al.， Neuroscience 55，23(1993)，Cartwright et al.，Brain Res．15，67(1992)) 脳由来の神経親和性因子（ＢＤＮＦ） (Zhang et al.，J．Neurobiol．25，1517(1994)，Maisonpierre et al.， Genomics 10，558(1991)，DNA Sequence 3，49(1992),Timmusk et al.，Neuron 10，475(1993)) ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３） (Hallboeoek et al.，Eur．J．Neurosci．5，1(1993)，Rodriguez-Tebar et al.，Philiosoph．Transact．Roy．Soc．Biol．Sci．331，255(1991)，Leing aertner et al.，Eur．J．Neurosci．6，1149(1994)) ニューロトロフィン−４（ＮＴ−４） (Ibanes et al.，PNAS 89，3060(1992)，Ny et al.，PNAS 89，3060(1992 )) 毛様神経親和性因子（ＣＮＴＦ） (Ishiki et al.，New Biologist 3，63(1991)，Ray et al.，Mol．Cell B iol．9，5537(1989)，Leung et al.，Neuron 8/6，1045(1992)，Bootha et al. ，Gene 146，303(1994)) b) 酵素更に、神経特異性因子は、例えば下記のものをコードするｃＤＮＡ配列である。チロシンヒドロキシラーゼ (Goc et al.，Mol Cell Neurosci．3，383(1992)，Boularand et al.，J ．Biol．Chemistry 270，3748(1995))、またはドーパデカルボキシラーゼ (Maras et al.，Eur．J．Biochem．201，385(1991)，Nayatsu，Neurosci ． Res．12，315(1991)，Ichinose et al.，Biochem．31，11546(1992)，Levanthai et al.，Mol．Brain Res．17，227(1993)，Sumiichinose et al.，J．Neuroche m．64，514(1995)) c) サイトカインおよびそのインヒビター神経特異性因子は、ＴＮＦαの神経毒性効果を抑制しまたは中和するタンパク質をコードするＤＮＡ配列であるとも理解すべきである。これらのタンパク質としては、例えば下記のものが挙げられる。ＴＧＦβ (Massague，Ann．Rev．Cell．Biol．6，597(1990)，Kondiah et al．J．B iol．Chem．265，1089(1990)，Gamier et al.，J．Mol．Biol．120，97(1978)) ＴＧＦβは、ＴＮＦαによって媒介される細胞毒性を抑制する(Merrill e t al.，J．Immunol．151，2132(1993)，Quin et al.，Armals of Surgery 220， 508(1994)) 可溶性ＴＮＦレセプター (Nophar et al.，EMBO J．9，3269(1990)，Himmler et al.，DNA Cell Bi ol．9，705(1990)，Aggarwa et al.，Nature 318，665(1985)，Gray et al.，PN AS 87，7380(1990)，Tartaglia et al.，Immunol．Today 13，151(1992)，Loetc her et al.，Cell 61，351(1990)，Schall et al.，Cell 61，361(1990)，Smith et al.，Science 248，1019(1990)，Goodwin et al.，Mol．Cell．Biol．11，3 020(1991)) ＴＮＦレセプターは、ＴＮＦαを中和する。総説: Olsson et al.，Eur． Cytokine Netw．4，169(1993))。ＩＬ−１０ (Moore et al.，Science 248，1230(1990)，Vieira et al.，PNAS USA 8 8，1172(1991)，Kim et al.，J．Immunol．148，3618(1992)) ＩＬ−１０は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−２およびＩＬ−４の形成を抑制する(Schlaak et al.，Scand．J．Immunol．39，209(1994)，Vieira et al.， PNAS USA 88，1172(1991)，Benjamin et al.，Leuk．Lymph．12，205(1994)) 可溶性ＩＬ−１レセプター ^*ＩＬ−１レセプターＩ (Sims et al.，PNAS USA 86，8946(1989)，Dower et al.，J．Exp．Med． 162，501(1985)，Chizzonite et al.，PNAS 86，8029(1989) ^*ＩＬ−１レセプターII (McMahan et al.，EMBO J．10，2821(1991)，Sims et al.，Science 241 ，585(1988)) 可溶性ＩＬ−１レセプターは、ＩＬ−１の活性を中和する(Colotta et al .，Immunol．Today 15，562(1994)，Sims et al.，Clin．Immunol．Immunopath ．72，9(1994)) ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト (Eisenberg et al.，Nature 343，341(1990)，Carter et al.，Nature 34 4，633(1990)) 可溶性ＩＬ−６レセプター (Mackiewicz et al.，Cytokine 7，142(1995)) しかしながら、本発明において、一方では、上記のサイトカインおよび成長因子、またはレセプターの細胞外残基と、他方ではヒト免疫グロブリンのＦｃ残基との間に形成した融合タンパク質のＤＮＡ配列を、活性物質として用いることもできる。この種のＤＮＡ配列およびその調製は、ＥＰ０４６４６３３Ａ１号明細書に記載されている。 2.4. 数個の神経特異性因子の組合せ本発明は、活性化合物であって、同一な神経特異性因子（Ａ，Ａ）または異なる神経特異性因子（Ａ，Ｂ）のＤＮＡ配列の組合せが含まれているものにも関する。２個のＤＮＡ配列の発現のためには、「内部リボソームエントリー部位」（ＩＲＥＳ）のｃＤＮＡは、制御要素として挿入するのが好ましい。この種のＩＲＥＳは、例えばMountford およびSmith（TIG 11，179（1995）、 Kaufman ら，Nucl．Acids Res．19，4485(1991)、Morgan et al.，Nucl．Acids Res．20，1293（1992）、およびDirks et al.，Gene 129，247(1993)、Pelletie r およびSonenberg，Nature 334，320（1988）、Sugimoto et al.，BioTech．12 ，694(1994)によって記載されている。従って、ポリオウイルスのＩＲＥＳ配列のｃＤＮＡ(５′ＵＲＴの位置＜１４０〜＞６３０；Pelletier and Sonenberg，Nature 334，320(1988))を用いて、抗炎症物質ＡのＤＮＡ（３′末端）および抗炎症物質ＢのＤＮＡ（５′末端）を連結することができる。組み合わせによっては、この種の活性化合物は本発明の意味において相加的（Ａ＋Ａ，Ａ＋Ｂ１）または相乗的効果を示す。 2.5. ベクターの構築新規ＤＮＡ構築物を、当業者が慣れた方法で完全なベクターとする。このベクターはウイルスまたは非ウイルス性のものであることができる。例えば、新規なＤＮＡ構築物をウイルスベクターに挿入し（この場合には、D.Jolly，Cancer Gene Therapy 1，51（1994）を参照されたい）、またはプラスミドとして用いる。ウイルスベクターまたはプラスミドをコロイド状分散液、例えばリポソームと複合体を形成し(Farhood et al.，Annals of the New York Academy of Science 716，23(1994))、またはポリリシン／リガンド抱合体または他の慣用されている補助物質と共に医薬品として処方することもできる(Curiel et al.，Annals o f the New York Academy of Science 716，36(1994))。 2.6. リガンドの選択ウイルスおよび非ウイルス性ベクターを、リガンドにより補足することができる。増殖する内皮細胞の表面に結合する物質は、例えばポリリシン／リガンド抱合体におけるリガンドとして好ましい。これらの物質としては、例えばBurrows et al．(Pharmac．Ther．64，155(1994))またはＥＰ０４０８８５９Ａ２号明細書9)に記載されているように、内皮細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が挙げられる。これらの物質としては、特にＶＥＧＦレセプターに対する抗体が挙げられる。ネズミモノクローナル抗体は、人体に適用される形態で用いるのが好ましい。人体への適用は、Winter et al．(Nature 349，293(1991))およびHoogenbooms e t al．(Rev．Tr．Transfus．Hemobiol．36，19(1993))によって記載された方法で行われる。抗体断片は、当該技術分野の状況に従って、例えばWinter et al． (Nature 349，293(1991))、Hoogenbooms et al．(Rev．Tr．Transfus.Hemobiol ．36，19(1993))、Girol（Mol．Immunol．28，1379(1991)またはHuston et al． (Int．Rev．Immunol．10，195(1993)）によって記載された方法で調製される。更に、これらの物質としては、内皮細胞上の膜構造または膜レセプターに結合する総ての物質が挙げられる。活性物質としては、例えば、成長因子、またはそれらの断片またはそれらの構成配列であって、内皮細胞によって発現されるレセプター、例えばＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦおよびＴＧＦβに結合するものが挙げられる(Pusztain et al.，J．Pathol．169，191(1993))。更に、これらの物質としては、末端にマンノースを有し、かつナイロン費細胞のマンノース６−リン酸レセプターに結合する物質が挙げられる(Perales et al.，Eur．J．Biochem ．226，225(1994))。更に、これらの物質としては、活性化したおよび／または増殖する内皮細胞に結合する付着分子が挙げられる。この種の付着分子、例えばＳＬｅｘ、ＬＦＡ− １、ＭＡＣ−１、ＬＥＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４は、既に記載されている（Au gustin-Voss et al.，J．Cell Biol．119，483(1992)，Pauli et al.，Cancer M etast．Rev．9，175(1990)およびHonn et al.，Cancer Metast．Rev．11，353（ 1992）の総説）。更に、グリア細胞の表面に結合する物質は、リガンドと考えるべきである。これらの物質としては、例えばMirsky et al．(Cell and Tissue Res．240，7 23(1985))、Coakham et al．(Prog．Exp．Tumor Rex．29，57(1985))およびMcKe ever et al．(Neurobiol．6，119(1991))によって報告されているように、グリア細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が挙げられる。これらの膜構造としては、神経付着分子、例えばＮ−ＣＡＭ、特にそのポリペプチド鎖Ｃ(Nybroe et al.，J．Cell Biol．101，2310(1985))。これらの物質としては、グリア細胞の膜構造または膜レセプターに結合する総ての活性化合物が挙げられる。例えば、これらの物質としては、末端にマンノースを有しかつマンノース６−リン酸レセプター(Perales et al.，Eur．J．Bioch em．226，225(1994))、インシュリンおよびインシュリン様成長因子(Merrill et al.，J．Clin．Endocrin．Metab．71，199(1990))、ＰＤＧＦ(Ek et al.，Natu re 295，419(1982))に結合するもの、および関連の膜レセプターに結合するこれらの成長因子の断片が挙げられる。 2.7. 活性化合物の調製新規な活性化合物の調製を、下記の実施例によって更に詳細に説明する。 a) キメラプロモーターエンドセリンＩＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒの構築ヒトエンドセリン−１プロモーター（位置＜−１７０〜＞−１０）またはＴＡＴＡボックスを除去することによって切断した変異体（位置＜−１７０〜＞−４０）をその３′末端で、ヒトｃｄｃ２５Ｃ遺伝子のＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒモジュール（位置＜−２０〜＞＋１２１）の５′末端に連結する（第６図）。この連結は、当業者に知られておりかつ市販されている酵素を用いて行われる。 b) 活性化合物の中心成分を含むプラスミドの構築この方法で調製したキメラエンドセリン−１リプレッサーモジュール転写単位を、その３′末端で、長さが１５２アミノ酸のＩＬ−１レセプターアンタゴニストの完全コード領域を含むＤＮＡの５′末端に連結する（位置＜２５〜＞５５７ Eisenberg et al.，Nature 343，341(1990)）。このＤＮＡは、分泌に必要なシグナル配列（２５個のＮ−末端アミノ酸）をも含んでいる。転写制御単位およびＩＬ−１レセプターアンタゴニストＤＮＡを、直接(Yovandich et al.，Hum．Ge ne Ther．6，603(1995))またはコロイド分散液系で用いて、イン・ビボでのトランスファーを行うことができるｐＵＣ１９／１９またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐ由来のプラスミドにクローンする。または、一緒に結合した転写制御単位およびＩＬ−１レセプターアンタゴニストＤＮＡを、当業者によく知られているウイルスベクターまたは他の非ウイルスベクターに移すことができる。 2.8. 活性化合物の活性例えば腫瘍の部位で局所投与の後、または頭蓋内またはクモ膜下投与、または全身、好ましくは静脈内または動脈内投与の後、本発明の活性化合物は、組織特異性エンハンサーおよび基底プロモーターによって、独占的にではないにしても主に増殖する内皮細胞だけまたは増殖するグリア細胞が、神経特異性因子を分泌することができるようになる。この種の内皮細胞の増殖またはグリア細胞の増殖は、神経の損傷をも同時に引き起こした領域および組織損傷に対する反応として予想されるものである。従って、新規な活性化合物は、神経損傷の部位における神経特異性因子の濃度を高くすることができる。活性化合物の細胞特異性およびその細胞サイクル特異性により高度の安全性が約束されるので、これを高投与量で用い、必要ならば、数日または数週間の間隔で繰り返し用いて、神経損傷の治療を行うこともできる。第１図〜第６図の説明第１図：イン・ビボで見いだされたタンパク質結合部位を有するｃｄｃ２５Ｃプロモーター領域のヌクレオチド配列（ゲノムＤＭＳフットプリント法；●（黒丸）：完全な構成上の保護；○（白丸）：部分的な構成上の保護；＊（星印）：細胞サイクルによって制御されたＧ１に特異的な保護）。ＣＢＳ：構成結合部位；ＣＤＥ：細胞サイクル依存性要素。灰色に下塗した領域は、Ｙ_cボックス（ＮＦ−Ｙ結合部位）を示している。開始部位は、黒四角形で示す。第２図：ｃｄｃの突然変異によるＧ₀における特異的なｃｄｃ２５Ｃプロモーターの抑制解除。第３図：ＣＤＥによるｃｄｃ２５Ｃエンハンサーの制御を模式的に表したもの。第４図：ＣＤＥによるＳＶ４０エンハンサーのＧ₀／Ｇ₁特異的抑制。第５図：ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡおよびｃｄｃ２プロモーターでのＣＤＥ−ＣＨＲ領域および５′Ｙｃボックスにおける相同性。第６図：ヒトエンドセリン−１プロモーター、ＣＤＥおよびＣＨＲリプレッサー要素を含む３′融合プロモーターモジュール、およびエフェクターとしてのヒトβ−グルクロニダーゼのＤＮＡ（完全コード領域、位置＜２５〜＞５５７：Eisenberg et al.，Nature 343，341(1989)）の様々な残基からなるキメラ構築物。位置の表示は、それぞれ、エンドセリン１遺伝子に対するWilson et al.，Mol．Cell． Biol．10，4854（1990）の表示、およびLucibello et al.，EMBO J．15，132(19 95)によって使用されたｃｄｃ２５Ｃに対する系を表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 37/24 Ｃ０７Ｋ 14/475 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．中枢神経系の疾患の予防または治療のための活性化合物であって、活性化配列と、細胞サイクルによって制御されるプロモーターモジュールと、神経特異製因子のＤＮＡ配列とからなるＤＮＡ構築物を含んでなる、活性化合物。２．プロモーターモジュールがＣＤＥ−ＣＨＲ−Ｉｎｒ要素を有し、かつｃｄｃ２５Ｃプロモーター領域（ヌクレオチド配列：ＧＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＡＴＧＧＴＣＡＡＣＧＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＴＧＡＴＡＴＴＣＴＴＧ）の位置＜−２０〜＞＋３０を含んでなり、ここで、ＣＤＥが細胞サイクル依存性要素（ヌクレオチド配列：ＴＧＧＣＧＧ）からなり、ＣＨＲが細胞サイクル遺伝子相同領域（ヌクレオチド配列：ＧＴＴＴＧＡＡ）からなり、Ｉｎｒが開始部位（位置＋１）および開始に重要な隣接配列からなるものであり、またはこのプロモーターモジュールの機能上活性な変異体および突然変異体である、請求の範囲第１項に記載の活性化合物。３．内皮細胞、またはグリア細胞で形成される転写因子によって制御される活性化配列を含んでなる、請求の範囲第１項に記載の活性化合物。４．活性化配列として、ＣＭＶプロモーター、ＣＭＶエンハンサーまたはＳＶ４０プロモーター、または脳に特異的な内皮グルコース−１−輸送体、エンドグリン、ＶＥＧＦレセプター１または２、レセプターチロシンキナーゼｔｉｌ−１またはｔｉｌ−２、Ｂ６１レセプター、Ｂ６１リガンド、エンドセリン、特にエンドセリンＢまたはエンドセリン１、マンノース−６−リン酸レセプター、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１β 、ＩＬ−１レセプター、ＶＣＡＭ−１またはvon Willebrand因子、またはＧＡＴＡ−２のような結合部位が５′−ＴＴＡＴＣＴ−３′である内皮細胞中で優先的または選択的に活性である転写因子のオリゴマー化した結合部位、または Schwann 細胞に特異的なペリアキシン、グルタミンシンテターゼ、グリア特異性タンパク質、グリア細胞タンパク質Ｓ１００ｂ、インターロイキン−６、５− ヒドロキシトリプタミンレセプター、ＴＮＦα、ＩＬ−１０またはインシュリン様成長因子レセプター、またはＶＥＧＦのプロモーター配列、またはＶＥＧＦのエンハンサー配列、またはｃ −ＳＲＣまたはｖ−ＳＲＣのｃＤＮＡ配列であってＶＥＧＦ遺伝子を制御するものを含んでなる、請求の範囲第２項に記載の活性化合物。５．神経特異性因子のＤＮＡ配列が、ニューロン成長因子、特にＦＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４またはＣＮＴＦ、またはＴＧＦβ、可溶性ＴＮＦレセプター、ＩＬ−１０、可溶性ＩＬ−１レセプター、または可溶性ＩＬ−６レセプター、またはＬ−１レセプターアンタゴニスト、またはサイトカイン（例えば、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０またはＩＬ−１レセプターアンタゴニスト）または可溶性サイトカインレセプター（例えば、ＴＮＦレセプター、ＩＬ−６レセプターまたはＩＬ−１レセプター）から形成された融合タンパク質、または免疫グロブリンのＦｃ残基、またはチロシンヒドロキシラーゼまたはドーパデカルボキシラーゼをコードするものである、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の活性化合物。６．２個の同一または２個の異なる神経特異性因子のＤＮＡ配列を含み、２個のＤＮＡ配列が互いに内部リボソームエントリー部位のＤＮＡ配列を介して接続してされてなる、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の活性化合物。７．ベクターに挿入された、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の活性化合物。８．ベクターがウイルスである、請求の範囲第７項に記載の活性化合物。９．ウイルスがレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、単純ヘルペスウイルス、またはワクシニアウイルスである、請求の範囲第８項に記載の活性化合物。１０．プラスミドに挿入された、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の活性化合物。１１．コロイド分散系で調製された、請求の範囲第７〜１０項のいずれか１項に記載の活性化合物。１２．コロイド分散系がリポソームである、請求の範囲第１１項に記載の活性化合物。１３．コロイド分散系がポリリシンリガンドである、請求の範囲第１２項に記載の活性化合物。１４．内皮細胞またはグリア細胞の膜構造に結合するリガンドで補足された、請求の範囲第７〜１３項のいずれか１項に記載の活性化合物。１５．リガンドが、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体、またはその抗体断片であって、その可変ドメインによって、内皮細胞またはグリア細胞の膜構造に結合するものであるか、または末端にマンノースを有する物質、サイトカインまたは成長因子、またはその断片または構成配列であって、内皮細胞またはグリア細胞上のレセプターに結合するものである、請求の範囲第１４項に記載の活性化合物。１６．膜構造が、成長因子、例えばＩＬ−１、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ（特にＦＩＴ−１およびＫＤＲ）、ＴＧＦβ、インシュリンまたはインシュリン様成長因子（ＩＬＧＦ）のレセプターからなり、または付着分子、例えばＳｌｅＸ、ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１、ＬＥＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４からなり、またはマンノース６−リン酸レセプターからなる、請求の範囲第１５項に記載の活性化合物。１７．静脈内または動脈内注射、傷害の部位への局所投与、または中枢神経系の腔部への注射のための製剤とされた、請求の範囲第１〜１６項のいずれか１項に記載の活性化合物。