CN114514035A - 递送用于治疗疾病的治疗性生物制剂的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了用于治疗有需要的受试者的疾病或疾患的组合物和方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含悬浮在药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，所述颗粒包含至少一种治疗性生物制剂。

Description

递送用于治疗疾病的治疗性生物制剂的组合物和方法
相关申请
本申请要求2020年5月14日提交的美国申请No.63/024,703的权益、2019年9月13日提交的美国申请No.62/899,907和2019年9月13日提交的美国申请No.62/899,981的权益。以上申请的整个教授内容以引用的方式并入本文中。
政府支持
本发明是在政府支持下根据美国国家科学基金会(National ScienceFoundation)授予的授权号1831212进行的。政府在本发明中享有一定的权利。
技术领域
本公开涉及能够递送(例如皮下递送)用于治疗的生物药品的方法和组合物。具体地说，本文公开的递送方法使用高浓度、低体积和低粘度的生物制剂组合物，允许在实践中从静脉内递送转变成皮下递送治疗剂，并允许在实践中从频繁递送转变成不太频繁的皮下递送。
背景技术
在过去的几十年间，在发现和开发药物的过程中，生物制剂、尤其是抗体驱动了范式转移，帮助了先前几乎没有治疗选择权的患者。举例来说，当前的单克隆抗体(mAb)疗法常常需要大剂量，其通过静脉内(IV)输注以高体积和低浓度施用，这使得递送要花费数小时，引起患者的不适并增加感染的风险。皮下(SC)注射提供了更合乎需要的递送替代方式，因为它减少了医院和临床机构的负荷，需要更少的时间并降低并发症的风险。然而，SC注射需要低递送体积，这就需要治疗性生物制剂的浓度高，而浓度高这一点常常是难以获得的。低递送体积下高浓度的需求还会引起注射溶液非常粘稠，这会导致注射力过高。此外，高粘度的治疗性生物制剂的注射溶液，例如mAb，将引起蛋白质-蛋白质相互作用增加，从而导致产品损失，还影响产品的安全性。因此，需要高浓度、低体积、低粘度的注射能力以SC递送治疗性生物药品。
发明内容
本文提供了可用于治疗有需要的受试者的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
在一方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
本公开还在本文中提供了一种治疗有需要的受试者的炎性疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
在另一方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
本公开在本文中还提供了一种治疗有需要的受试者的肾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
在另一方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的皮肤疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
在另一方面，本公开提供了一种药学上有效的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
本公开还在本文中提供了一种治疗有需要的受试者的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
本发明的组合物和方法可用于治疗有需要的受试者的疾病或疾患，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物。在优选的实施方案中，治疗方法使用一种组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
附图说明
图1示出了使用具有4.7mm内径注射器筒的27规格超薄壁(UTW)针的注射力对比固体浓度的曲线图。
图2A示出了对于FDA标记制剂和颗粒组合物，在第0天归一化的ADCC％与mAb浓度的函数关系的曲线图。
图2B示出了对于FDA标记制剂和颗粒组合物，在40℃下存储30天后归一化的ADCC％与mAb浓度的函数关系的曲线图。
图3示出了大鼠(史泊格多利(Sprague Dawley))的IV利妥昔单抗(rituximab)水性、SC利妥昔单抗水性和SC利妥昔单抗颗粒(Elektroject)组合物群组的药物动力学特征图。
图4示出了在接受SC注射包含利妥昔单抗的水性制剂或颗粒组合物(Elektroject)后一分钟、2天和7天SKH1小鼠的荧光图像的照片。
图5示出了代表小鼠(Fox Chase SCID)的未处理组、SC利妥昔单抗水性组和SC利妥昔单抗组合物(Elektroject)群组的平均肿瘤体积生长曲线的图。
图6示出了对于水性制剂和颗粒组合物(Elektroject)，在SC注射后相对于体重归一化的尤卡坦小型猪(Yucatan minipig)的血浆中的mAb浓度与时间的函数关系的图。
图7示出了代表水性制剂和颗粒组合物(Elektroject)的粘度和注射力对比固体负荷的图。
具体实施方式
治疗性生物制剂、尤其是单克隆抗体(mAb)治疗剂显著地改善了人类疾病的治疗。然而，这些生物制剂的递送令患者有负担。标准施用常常通过以低浓度静脉内(IV)输注，可能要花费数小时来递送，这会引起患者不适，并增加患者感染的风险。尽管优选的是通过简单的注射进行皮下(SC)递送，但是SC递送体积(1.5-2.0mL)的限制需要抗体浓度超过100mg/mL，这常常是不可行的。溶液浓度超过100mg/mL是非常粘的，会引起非常高的注射力并且常常会使治疗性抗体组合物的分解蔓延。利用颗粒悬浮技术可递送>500mg/mL的治疗性生物制剂(例如抗体)浓度，同时保存治疗性生物制剂(例如mAb)完整的结构和生物活性。因此，通过将治疗性生物制剂的递送从IV转变成SC，为患者、医疗保健提供者、付款人和药物开发者提供了方便。在一些情况下，呈颗粒形式的生物制剂的浓度可使频繁SC注射的生物制剂进行不太频繁递送的SC注射。
本公开大体上涉及用于治疗(例如下调、逆转、抑制进展、预防)有需要的受试者的疾病或疾患的组合物和方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。关于确定本公开的组合物中的治疗性生物制剂的浓度的示例方法，参见本文中的实施例17。
本公开还涉及用于治疗有需要的受试者的癌症、炎性疾病或疾患、免疫性疾病、肾病、皮肤疾病或疾患、或者人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。在某些实施方案中，本文所述的组合物和方法还包含药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂，所述透明质酸降解剂可以与组合物同时、依序或间歇施用。在优选的实施方案中，透明质酸降解剂是透明质酸酶。
容易理解，如本文所概述的方面和实施方案是示例性的。以下关于多个方面和实施方案更详细的描述不意图限制本公开的范围，而仅仅代表多个方面和实施方案。此外，本领域技术人员在不脱离本公开的范围下可改变本文公开的组合物和方法。除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的技术人员通常所了解的含义相同的含义。本文中提及的所有公布和专利都以引用的方式并入。
治疗性生物制剂
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语、注释和其它科学术语都旨在具有本公开所属领域的技术人员通常所了解的含义。在一些情况下，本文中为了清晰和/或供随手参考，定义了具有通常理解的含义的术语，本文中包括这类定义不应该被视为表示它与本领域中一般了解的含义有很大的差异。本文中描述或提及的技术和程序一般很好理解，并且本领域技术人员通常使用常规的方法来采用。视情况而定，除非另作说明，否则涉及市售药盒和试剂使用的程序一般根据制造商界定的方案和/或参数来进行。如本文所用，短语“和/或”当在一列两个或更多个项目中使用时，意指所列出的项目中的任一个可以单独采用，或者可以采用所列出的项目中的两个或更多个项目的任何组合。举例来说，如果组合物被称作含有或排除组分A、B和/或C，则组合物可含有或排除单独A；单独B；单独C；A和B组合；A和C组合；B和C组合；或A、B和C组合。
治疗性生物制剂又名生物医药产品或生物药物，是在生物学来源中制造、从中提取或从中半合成的任何药物产品。治疗性生物制剂可包括大量产品，例如疫苗、血液和血液组分、过敏原、体细胞、基因疗法、组织和重组治疗性蛋白质。在一些实施方案中，治疗性生物制剂可以由糖、蛋白质或核酸或者这些物质的复杂组合构成，或者可以是活的实体，例如细胞和组织。生物制剂可以从多种天然来源如人、动物或微生物分离，并且可以通过生物技术方法或本领域中已知的其它技术产生。举例来说，基于基因的生物制剂和细胞生物制剂常用于治疗别的治疗无用的多种医学疾患。在本公开的某些实施方案中，治疗性生物制剂是抗体。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂是单克隆抗体(mAb)。
从最广泛的意义上来说，术语“抗体”和“免疫球蛋白”可互换使用，涵盖但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、完全人抗体、双互补位抗体、人源化骆驼科重链抗体和非人/人嵌合抗体，不管它们如何产生，即，使用免疫接种、重组、合成方法产生。“亲本抗体”是在抗体进行修饰以用于所欲用途，例如非人抗体进行人源化以用作人治疗性抗体之前，通过免疫系统暴露于抗原而获得的抗体。抗体可以是在血液或脊椎动物的其它体液中发现的丙种球蛋白，它在免疫系统中发挥结合抗原的功能，因此鉴定和/或中和异物。抗体可分配为不同的类别或同型。存在五种类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有称为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于序列和功能的差异，γ类别被进一步分成子类，例如人表达以下子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。基于恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的轻链可以分配为截然不同的两种类型中的一种，例如κ和λ。
公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及无数的免疫球蛋白可变区基因。在一些实施方案中，轻链分类成κ或λ。在其它实施方案中，重链分类成γ、μ、α、δ或ε，它们又分别界定了免疫球蛋白类IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在本公开的其它实施方案中，抗体是人抗体。在某些实施方案中，人抗体是IgG抗体。在某些其它实施方案中，IgG抗体是IgG1抗体。在本公开的优选实施方案中，抗体是单克隆抗体。
示例性抗体(免疫球蛋白)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kD)及一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N端界定了主要负责抗原识别的具有约100至110个或更多个氨基酸的可变区。术语“可变轻”链、结构域、区和组分可互换使用，缩写为“VL”或“VL”，是指抗体或抗体片段的轻链。类似地，术语“可变重”链、结构域、区和组分可互换使用，缩写为“VH”或“VH”，是指抗体或抗体片段的重链。抗体一般是杂四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链及两条相同的重(H)链构成。每条轻链通过一个共价二硫键连接于重链。两条重链通过一个或多个二硫键彼此连接，取决于重链同型。每条重链和轻链还具有有规则地间隔的链内二硫键。重链和轻链界定了特定的Ig结构域。具体地说，每条重链N端具有可变结构域(VH)，然后对于α和γ链每一条链是三个恒定结构域(CH)，对于p和c同型是四个CH结构域。每条轻链在N端具有可变结构域(VL)，然后在它的另一个末端是恒定结构域(CL)。VL与VH对准，CL与重链的第一恒定结构域(CHL)对准。恒定结构域包括Fc部分，所述Fc部分包含通过二硫化物结合在一起的两条重链的羧基端部分。抗体的效应功能如ADCC由Fc区的序列决定，Fc区还是在某些类型细胞上发现的Fc受体(FcR)的识别部分。
如本文公开，VH与VL一起配对形成“可变区”或“可变结构域”，包括抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可称为“VH”。轻链的可变结构域可称为“VL”。可变结构域含有“抗原结合位点”，所述抗原结合位点影响抗原结合并界定了特定抗体对它的特定抗原的特异性。可变区跨越约110个氨基酸残基，由称为框架区(FR)(一般是约4个)的具有15-30个氨基酸的相对恒定的延伸段组成，框架区被称为“高变区”(一般是约3个)的极具变化性的较短区域分开，高变区一般每个是9-12个氨基酸长。FR基本上采用p折叠构型，高变区形成环连接，在一些情况下，形成p折叠结构的一部分。在某些实施方案中，“高变区”是指抗体可变结构域的序列高变和/或形成结构界定环的区域。一般地，抗体包含六个高变区；三个在VH(H1、H2、H3)中，三个在VL(L1、L2、L3)中。“框架”或“FR”残基是除了本文中定义的高变区残基外的那些可变结构域残基。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指呈基本上完整的形式的抗体，不是如上定义的抗体片段。该术语尤其是指具有含有Fc区的重链的抗体。全长抗体可以是天然序列抗体或抗体变体。在某些实施方案中，“完整”或“全”抗体是包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域，例如人天然序列恒定结构域，或它们的氨基酸序列变体。
如上所指出，如本文所用的术语抗体，除非另有说明或上下文明显矛盾，否则包括保留了与抗原特异性地相互作用，例如结合的能力的抗体片段。已经展示了抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来进行。术语“抗体”内涵盖的结合片段的实例包括：(i)Fab'或Fab片段，由轻链可变结构域(VL)、重链可变结构域(VH)、轻链恒定区(CL)和重链恒定区结构域1(CH1)结构域组成的单价片段，或如WO2007/059782中所述的单价抗体；(ii)F(ab')2片段，包含两个由铰链区的二硫键连接的Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，基本上由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，基本上由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)dAb片段，Ward等人,Nature 341,544-546(1989)，它基本上由VH结构域组成，又称为结构域抗体，Holt等人；Trends Biotechnol.2003年11月；21(11):484-90；(vi)骆驼科或纳米抗体，Revets等人；Expert Opin Biol Ther.2005年1月；5(1):111-24；和(vii)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH被分开的基因编码，但它们可以使用重组方法，通过合成接头接合，所述合成接头使得它们能够被制成单一蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子(被称为单链抗体或单链Fv(scFv)，例如参见Revets等人；Expert OpinBiol Ther.2005年1月；5(1):111-24和Bird等人,Science242,423-426(1988)。除非另作说明或上下文明显指示，否则术语抗体涵盖这类单链抗体。尽管抗体的含义一般包括这类片段，但它们共同并且各自独立地是本发明的独特的特征，表现出不同的生物学性质和效用。本发明的上下文中的这些和其它有用的抗体片段将在本文中进一步论述。
如本文公开，“包括可变结构域的全抗体片段”包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双功能抗体；线性抗体、单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。“Fab片段”由整个轻链与重链的可变区结构域和一条重链的第一恒定结构域(CHI)一起组成。每个Fab片段对于抗原结合来说是单价的，即它具有单个抗原结合位点。“Fab’片段”与Fab片段的不同之处在于，在CHI结构域的羧基端处具有另外的几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中针对其中恒定结构域的半胱氨酸残基载有游离硫醇基的Fab’的名称。“F(ab’)2片段”大致对应于被二硫化物连接的两个Fab片段，它具有二价抗原结合活性，仍然能够与抗原交联。“Fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这一片段由一个重链和一个轻链可变区结构域呈紧密地非共价缔合的二聚物组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链和一个轻链可变结构域可以通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以呈“二聚物”结构缔合，类似于双链Fv种类中。从这两个结构域的折叠引发出六个高变环(来自重链和轻链各3个环)，这些高变环贡献了抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体抗原结合特异性。“单链Fv”还缩写成“sFv”或“scFv”，是包含被连接形成单条多肽链的抗体VH及VL结构域的抗体片段。在优选的实施方案中，scFv多肽在VH与VL结构域之间还包含多肽接头，所述多肽接头能够使scFv形成抗原结合所需的结构。在一些实施方案中，“单个可变结构域”是Fv的一半(只包含三个CDR，对抗原具有特异性)，它能够识别和结合抗原，但亲和力低于整个结合位点。
在一些实施方案中，术语“双功能抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，所述片段包含被连接至同一条多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)。所述小抗体片段通过以下来制备：在VH与VL结构域之间使用短的接头(约5-10个残基)构建sFv片段，从而实现可变结构域的链间配对而不是链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。在其它实施方案中，双功能抗体可以是二价的或双特异性的。在某些实施方案中，双特异性双功能抗体是两个“交叉”sFv片段的异源二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。本领域中一般还已知三功能抗体和四功能抗体。
如本文所述的抗体的“抗体片段”或“抗原结合片段”只包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合位点，因此保留结合抗原的能力。本公开涵盖的抗体片段的示例性实例包括(但不限于)：(i)Fab片段，它具有VL、CL、VH和CH1结构域；(ii)Fab'片段，它是在CH1结构域的C端具有一个或多个半胱氨酸残基的Fab片段；(iii)Fd片段，它具有VH和CH1结构域；(iv)Fd'片段，它具有VH和CH1结构域并在CH1结构域的C端具有一个或多个半胱氨酸残基；(v)Fv片段，它具有抗体单臂的VL和VH结构域；(vi)dAb片段，它由VH结构域组成；(vii)分离的CDR区；(viii)F(ab')2片段，包括两个由铰链区的二硫键连接的Fab’片段的二价片段；(ix)单链抗体分子(例如单链Fv；scFv)；(x)具有两个抗原结合位点的“双功能抗体”，包含连接至同一条多肽链中的轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)；(xi)包含一对串联Fd的“线性抗体”，区段(VH-CH1-VH-CH1)，与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。在一些实施方案中，“抗原结合位点”泛指至少包括高变区和框架区的分子，高变区和框架区是赋予V结构域抗原结合功能所需的。在本文所述的方法中，抗原结合位点可以呈抗体或抗体片段的形式(例如dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2或scFv)。在某些实施方案中，治疗性生物制剂是抗体片段。
在一些实施方案中，术语“单链Fv”或“scFv”或“单链”抗体可指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链。一般地，Fv多肽在VH与VL结构域之间还包含多肽接头，所述多肽接头能够使sFv形成抗原结合所需的结构。关于sFv的评论，参见Pluckthun,THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES,第113卷,Rosenburg和Moore编辑.Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体的群体获得的抗体，即构成该群体的个别抗体除可少量存在的天然存在的可能突变外均相同。单克隆抗体(mAb)是高度特异性的，针对抗原上的单个抗原位点或决定子。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点是它们可以在没有被其它抗体未污染下合成。单克隆抗体可以通过杂交瘤方法制备。还可以使用分子工程技术，将单克隆抗体与噬菌体抗体文库分离。本公开的单克隆抗体可以通过重组DNA方法产生，有时称为如本文公开的“重组抗体”或“重组单克隆抗体”。在一些实施方案中，单克隆抗体是抗体的单一种类，其中每个抗体分子识别相同的表位，因为所有产生抗体的细胞都源自于单个B-淋巴细胞细胞系。用于产生单克隆抗体(mAb)的方法一般沿着与制备多克隆抗体的方法相同的线路开始。在其它实施方案中，使用啮齿类动物如小鼠和大鼠产生单克隆抗体。在某些实施方案中，使用兔、绵羊或蛙细胞产生单克隆抗体。已知大鼠的使用，可能提供某些有利方面。通常使用小鼠如BALB/c小鼠，一般得到高百分比的稳定融合物。在本公开的其它实施方案中，抗体是单克隆抗体。在本公开的某些实施方案中，抗体是人单克隆抗体。在优选的实施方案中，IgG抗体是人单克隆抗体。
在其它实施方案中，可以使用本领域中已知的技术从噬菌体抗体文库分离重组抗体片段。参见例如Clackson等人,1991,Nature 352:624-628；Marks等人,1991,J.Mol.Biol.222:581-597。重组抗体片段可以源自于通过重组在细菌中产生的大的噬菌体抗体文库(Sblattero和Bradbury,2000,Nature Biotechnology 18:75-80；以及如本文所述)。使用本领域中已知的方法(参见例如Persic等人,1997,Gene 187:9-18)，编码抗体片段的VH和VL组分(即，scFv)的多核苷酸可以用于产生重组全长免疫球蛋白。
“分离的抗体”是已经进行鉴定并与它先前存在的环境的组分分开和/或从中回收的抗体。污染物组分是干扰抗体的治疗用途的物质，可包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。
如本文所用，“人抗体”是指具有与人产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。可使用本领域中已知的多种技术，包括噬菌体展示文库产生人抗体。人抗体可以通过向已经被修饰用于回应于抗原挑战而产生这类抗体但内源基因座已经报废的转基因动物施用抗原来制备。非人(例如啮齿类动物)抗体的“人源化”形式是含有源自于非人抗体的最小序列的嵌合抗体。如本文所用，“嵌合抗体”是具有来自第一抗体的可变结构域和来自第二抗体的恒定结构域的抗体，其中(i)第一和第二抗体来自于不同物种(Morrison等人,(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855)或(ii)第一和第二抗体来自于不同的同型，例如可变结构域来自IgG1抗体，恒定结构域来自IgG4抗体)。在一些实施方案中，从非人抗体如小鼠抗体获得可变结构域(“亲本抗体”)，从人抗体获得恒定结构域序列。在其它实施方案中，可变结构域是来自小鼠抗体的人源化可变结构域，恒定结构域是人抗体的。在很大程度上，人源化抗体是来自接受者的高变区的残基被来自非人物种如小鼠、大鼠、兔或具有所需抗体特异性、亲和力和能力的非人灵长类动物的高变区的残基(供体抗体)替代的人免疫球蛋白(接受者抗体)。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被对应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含没有在接受者抗体中或供体抗体中发现的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。一般说来，人源化抗体将包含至少一个和典型地两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)，典型地人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。
“亲和力成熟”抗体是一种这样的抗体，它在一个或多个高变区中具有一个或多个改变，引起抗体对抗原的亲和力与不具有那些改变的亲本抗体相比提高。在一些实施方案中，亲和力成熟抗体可以具有微摩尔的对靶抗原的亲和力。在其它实施方案中，亲和力成熟抗体可以具有纳米摩尔乃至皮摩尔的对靶抗原的亲和力。通过本领域中已知的程序产生亲和力成熟抗体。
“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体抑制或降低它结合的抗原的生物活性的抗体。在一些实施方案中，阻断抗体或拮抗剂抗体基本上完全抑制抗原的生物活性。如本文所用，“激动剂抗体”是一种模拟所关注的多肽的至少一种功能活性的抗体。如本文所用，在提及蛋白质抑制剂如拮抗剂的相互作用时，术语“抑制(inhibition/inhibit/inhibiting)”等意指相对于缺少所述抑制剂时蛋白质的活性或功能，负面影响，例如降低蛋白质的活性或功能。在一些实施方案中，抑制是指减少疾病或疾病症状。在其它实施方案中，抑制是指降低信号转导通路或信号传导通路的活性。因此，抑制包括至少部分地、部分地或完全阻断刺激、减少、防止或延迟激活，或失活、脱敏或下调信号转导或酶活性或蛋白质的量。
“结合亲和力”泛指分子(例如抗体)的单个结合位点与它的结合搭配物(例如抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另外指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内部结合亲和力，它反映了结合对的成员如抗体与抗原之间的1:1相互作用。分子X对它的搭配物Y的亲和力一般可由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域中已知的常见方法，包括本文所述的方法测量。低亲和力的抗体一般缓慢地结合抗原，往往容易解离，而高亲和力的抗体一般更快地结合抗原，往往保持结合更长时间。本领域中已知多种测量结合亲和力的方法，出于本公开的目的，可以使用其中的任一种。“表位”泛指被抗体的抗原结合位点结合的抗原部分。在一些实施方案中，在形成抗原结合位点的抗体CDR的高变环结合于如初级蛋白质结构中的氨基酸序列的意义上，表位可以是“线性的”。在其它实施方案中，表位是“构象表位”，即当残基以三级或四级蛋白质结构呈现时CDR的高变环结合于残基的表位。
在上述组合物和方法的一些实施方案中，治疗性生物制剂是抗体。在其它实施方案中，抗体包括但不限于3F8、阿巴伏单抗(Abagovomab)、阿巴西普(Abatacept)、阿昔单抗(Abciximab)、阿比妥珠单抗(Abituzumab)、阿泽奇单抗(Abrezekimab)、阿利鲁单抗(Abrilumab)、阿利土默单抗(Acritumomab)、阿克托舒单抗(Actoxumab)、阿比妥珠单抗(Abituzumab)、阿达木单抗-adbm(Adalimumab-adbm)、阿达木单抗-atto(Adalimumab-atto)、阿达木单抗-bwwb(Adalimumab-bwwb)、阿德木单抗(Adecatumumab)、Ado-曲妥珠单抗美坦辛(Ado-trastuzumab emtansine)、阿杜那单抗(Aducanumab)、阿法库单抗(Afasevikumab)、阿非莫单抗(Afelimomab)、阿柏西普(Aflibercept)、阿夫土珠单抗(Afutuzumab)、培戈-阿拉赛珠单抗(Alacizumab pegol)、ALD518、阿法西普(Alefacept)、阿仑单抗(Alemtuzumab)、阿莫罗布单抗(Alirocumab)、喷替酸阿妥莫单抗(Altumomabpentetate)、阿麦妥单抗(Amatuximab)、马安那莫单抗(Anatumomab mafenatox)、安德利昔单抗(Andecaliximab)、雷星-阿奈妥单抗(Anetumab ravtansine)、阿尼鲁单抗(Anifrolumab)、安芦组单抗(Anrukinzumab)、阿泊珠单抗(Apolizumab)、伊汀-阿普卢妥单抗(Aprutumab ixadotin)、阿替奴单抗(Arcitumomab)、阿利珠单抗(Ascrinvacumab)、阿塞珠单抗(Aselizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、阿度尤单抗(Atidortoxumab)、阿替奴单抗(Atinumab)、阿特利珠单抗(Atlizumab)、阿托木单抗(Atorolimumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、维汀-阿妥昔珠单抗(Azintuxizumab 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emtansine)、那呐妥单抗(Narnatumab)、那他珠单抗(Natalizumab)、那赛昔珠单抗(Navicixizumab)、那韦伏单抗(Navivumab)、那昔妥单抗(Naxitamab)、奈巴库单抗(Nebacumab)、耐昔妥珠单抗(Necitumumab)、奈莫利珠单抗(Nemolizumab)、NEOD001、奈瑞莫单抗(Nerelimomab)、奈伐苏单抗(Nesvacumab)、尼塔奇单抗(Netakimab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、尼塞韦单抗(Nirsevimab)、纳武单抗(Nivolumab)、巯诺莫单抗(Nofetumomab merpentan)、奥托萨昔单抗(Obiltoxaximab)、阿托珠单抗(Obinutuzumab)、奥卡妥珠单抗(Ocaratuzumab)、奥瑞珠单抗(Ocrelizumab)、奥度莫单抗(Odulimomab)、奥法木单抗(Ofatumumab)、奥拉木单抗(Olaratumab)、奥来鲁单抗(Oleclumab)、奥仑达利珠单抗(Olendalizumab)、奥洛组单抗(Olokizumab)、奥马珠单抗(Omalizumab)、奥布塔单抗(Omburtamab)、OMS721、奥那妥组单抗(Onartuzumab)、昂妥昔珠单抗(Ontuxizumab)、奥瓦利单抗(Onvatilimab)、奥匹努单抗(Opicinumab)、莫妥组单抗(Oportuzumab monatox)、奥戈伏单抗(Oregovomab)、奥替苏单抗(Orticumab)、奥昔珠单抗(Otelixizumab)、奥替利单抗(Otilimab)、奥乐妥珠单抗(Otlertuzumab)、奥塞芦单抗(Oxelumab)、奥扎奈珠单抗(Ozanezumab)、奥利组单抗(Ozoralizumab)、帕昔单抗(Pagibaximab)、帕利珠单抗(Palivizumab)、潘瑞鲁单抗(Pamrevlumab)、帕尼单抗(Panitumumab)、潘考单抗(Pankomab)、帕巴库单抗(Panobacumab)、帕萨妥珠单抗(Parsatuzumab)、帕考珠单抗(Pascolizumab)、帕妥昔珠单抗(Pasotuxizumab)、帕替组单抗(Pateclizumab)、帕曲妥单抗(Patritumab)、PDR001、乙二醇化非格司亭-jmdb(Pegfilgrastim-jmdb)、派姆单抗(Pembrolizumab)、佩姆莫单抗(Pemtumomab)、培拉凯珠单抗(Perakizumab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、培克珠单抗(Pexelizumab)、皮利珠单抗(Pidilizumab)、维汀-匹那妥珠单抗(Pinatuzumab vedotin)、平妥莫单抗(Pintumomab)、普拉鲁单抗(Placulumab)、洛扎利珠单抗(Plozalizumab)、泊加利珠单抗(Pogalizumab)、维汀-泊洛妥珠单抗(Polatuzumab vedotin)、泊奈组单抗(Ponezumab)、泊伽维昔单抗(Porgaviximab)、普拉珠单抗(Prasinezumab)、普利珠单抗(Prezalizumab)、普立昔单抗(Priliximab)、瑞托萨昔单抗(Pritoxaximab)、普林木单抗(Pritumumab)、PRO 140、奎利组单抗(Quilizumab)、雷妥莫单抗(Racotumomab)、雷曲妥单抗(Radretumab)、雷韦单抗(Rafivirumab)、雷泮赛珠单抗(Ralpancizumab)、雷莫芦单抗(Ramucirumab)、雷纳维单抗(Ranevetmab)、兰尼单抗(Ranibizumab)、瑞西巴库单抗(Raxibacumab)、雷瓦利单抗(Ravagalimab)、依库珠单抗(Ravulizumab)、瑞法奈珠单抗(Refanezumab)、瑞加韦单抗(Regavirumab)、瑞拉利单抗(Relatlimab)、壬托鲁单抗(Remtolumab)、瑞利珠单抗(Reslizumab)、利纳西普(Rilonacept)、利妥木单抗(Rilotumumab)、利努苏单抗(Rinucumab)、瑞莎珠单抗(Risankizumab)、利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs(Rituximab-abbs)、利妥昔单抗-pvvr(Rituximab-pvvr)、培戈-利伐巴珠单抗(Rivabazumab pegol)、培戈-利伐巴珠单抗(Rivabazumab pegol)、罗妥木单抗(Robatumumab)、Rmab、罗来度单抗(Roledumab)、若奇单抗(Romilkimab)、罗米司亭(Romiplostim)、洛莫索珠单抗(Romosozumab)、罗利珠单抗(Rontalizumab)、洛曼妥珠单抗(Rosmantuzumab)、特司林-洛伐妥珠单抗(Rovalpituzumab tesirine)、特司林-洛伐妥珠单抗(Rovalpituzumabtesirine)、罗维珠单抗(Rovelizumab)、洛利昔珠单抗(Rozanolixizumab)、鲁利单抗(Ruplizumab)、戈沙妥组单抗(Sacituzumab govitecan)、沙马组单抗(Samalizumab)、纬沙马妥单抗(Samrotamab vedotin)、萨皮利珠单抗(Sapelizumab)、萨瑞鲁单抗(Sarilumab)、萨特利珠单抗(Satralizumab)(SA237)、沙妥莫单抗喷地肽(Satumomab pendetide)、苏金单抗(Secukinumab)、塞鲁单抗(Selicrelumab)、瑟瑞妥单抗(Seribantumab)、塞托昔单抗(Setoxaximab)、塞曲舒单抗(Setrusumab)、司韦单抗(Sevirumab)、西罗珠单抗(Sibrotuzumab)、SGN-CD19A、SGN-CD33A、SHP647、西法木单抗(Sifalimumab)、司妥昔单抗(Siltuximab)、希特珠单抗(Simtuzumab)、希普利珠单抗(Siplizumab)、纬斯妥尤单抗(Sirtratumab vedotin)、斯库单抗(Sirukumab)、维汀-索非妥珠单抗(Sofituzumabvedotin)、索拉珠单抗(Solanezumab)、索利单抗(Solitomab)、索奈珠单抗(Sonepcizumab)、索土珠单抗(Sontuzumab)、斯帕珠单抗(Spartalizumab)、司达鲁单抗(Stamulumab)、硫索单抗(Sulesomab)、舒他伏单抗(Suptavumab)、苏替莫单抗(Sutimlimab)、舒维组单抗(Suvizumab)、苏托舒单抗(Suvratoxumab)、他贝芦单抗(Tabalumab)、替他珠单抗(Tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗(Tadocizumab)、塔妥珠单抗(Talacotuzumab)、他利珠单抗(Talizumab)、坦妥维单抗(Tamtuvetmab)、他尼组单抗(Tanezumab)、帕他莫单抗(Taplitumomab paptox)、他瑞妥单抗(Tarextumab)、他利昔珠单抗(Tavolimab)、特非珠单抗(Tefibazumab)、阿替莫单抗(Telimomab aritox)、维汀-特立妥珠单抗(Telisotuzumab vedotin)、替妥莫单抗(Tenatumomab)、替奈昔单抗(Teneliximab)、替利珠单抗(Teplizumab)、特迪妥单抗(Tepoditamab)、替妥木单抗(Teprotumumab)、特度鲁单抗(Tesidolumab)、特土罗单抗(Tetulomab)、泰派鲁单抗(Tezepelumab)、TGN1412、替布利珠单抗(Tibulizumab)、替西木单抗(Ticilimumab)、替拉珠单抗(Tildrakizumab)、替加组单抗(Tigatuzumab)、替米妥珠单抗(Timigutuzumab)、替莫鲁单抗(Timolumab)、替瑞利尤单抗(Tiragotumab)、替雷利珠单抗(Tislelizumab)、维汀替索图单抗(Tisotumab vedotin)、TNX-650、托珠单抗(Tocilizumab)、托木妥昔单抗(Tomuzotuximab)、托利珠单抗(Toralizumab)、托萨托舒单抗(Tosatoxumab)、托西莫单抗(Tositumomab)、托维图单抗(Tovetumab)、曲罗芦单抗(Tralokinumab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、曲妥珠单抗-anns(Trastuzumab-anns)、曲妥珠单抗-dkst(Trastuzumab-dkst)、曲妥珠单抗-dttb(Trastuzumab-dttb)、曲妥珠单抗美坦辛(Trastuzumabemtansine)、曲妥珠单抗-pkrb(Trastuzumab-pkrb)、曲利珠单抗(Tregalizumab)、曲美利单抗(Tremelimumab)、曲戈卢单抗(Trevogrumab)、西莫白介素单抗(Tucotuzumabcelmoleukin)、妥韦单抗(Tuvirumab)、乌妥昔单抗(Ublituximab)、乌洛鲁单抗(Ulocuplumab)、乌瑞鲁单抗(Urelumab)、乌珠单抗(Urtoxazumab)、优特克单抗(Ustekinumab)、乌托米单抗(Utomilumab)、他立林-伐达妥昔单抗(Vadastuximabtalirine)、伐纳利单抗(Vanalimab)、维凡妥组单抗(Vandortuzumab vedotin)、万替妥单抗(Vantictumab)、伐努赛珠单抗(Vanucizumab)、伐利昔单抗(Vapaliximab)、伐利苏单抗(Varisacumab)、伐立鲁单抗(Varlilumab)、伐利组单抗(Vatelizumab)、维多珠单抗(Vedolizumab)、维妥珠单抗(Veltuzumab)、维帕莫单抗(Vepalimomab)、维森库单抗(Vesencumab)、维西珠单抗(Visilizumab)、沃巴利珠单抗(Vobarilizumab)、伏洛昔单抗(Volociximab)、珀伽利珠单抗(Vonlerolizumab)、伏派利单抗(Vopratelimab)、玛汀-沃瑟妥珠单抗(Vorsetuzumab mafodotin)、伏妥莫单抗(Votumumab)、珍妥珠单抗(Xentuzumab)、XMAB-5574、扎鲁木单抗(Zalutumumab)、扎诺木单抗(Zanolimumab)、扎图昔单抗(Zatuximab)、泽妥珠单抗(Zenocutuzumab)、齐拉木单抗(Ziralimumab)、佐贝图昔单抗(Zolbetuximab)(IMAB362、克劳迪单抗(Claudiximab))、Ziv-阿柏西普(Ziv-aflibercept)或阿佐莫单抗(Zolimomab aritox)。
在上述组合物和方法的其它实施方案中，抗体是单克隆的。在某些实施方案中，单克隆抗体包括但不限于3F8、8H9、阿巴西普、阿巴伏单抗、阿昔单抗、阿比妥珠单抗、阿达木单抗-adbm、阿达木单抗-atto、阿达木单抗-bwwb、阿利鲁单抗、阿克托舒单抗、阿比妥珠单抗、阿泽奇单抗、阿利鲁单抗、阿克托舒单抗、阿达木单抗、阿德木单抗、Ado-曲妥珠单抗美坦辛、阿杜那单抗、阿法库单抗、阿非莫单抗、阿柏西普、阿夫土珠单抗、培戈-阿拉赛珠单抗、ALD518、阿法西普、阿仑单抗、阿莫罗布单抗、喷替酸阿妥莫单抗、阿麦妥单抗、马安那莫单抗、安德利昔单抗、雷星-阿奈妥单抗、阿尼鲁单抗、安芦组单抗(IMA-638)、阿泊珠单抗、阿替奴单抗、阿利珠单抗、阿塞珠单抗、阿特珠单抗、阿度尤单抗、阿替奴单抗、阿特利珠单抗(托珠单抗)、阿托木单抗、阿维鲁单抗、巴匹珠单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗(Bevacizumab)、贝伐单抗-awwb、BCD-100、贝妥莫单抗、贝戈洛单抗、贝拉西普(Belatacept)、贝利单抗、贝马里妥珠单抗、贝那利珠单抗、贝迈奇单抗、贝萨利单抗、柏替木单抗、贝索单抗、贝洛托舒单抗、比西单抗、比玛卢单抗、比美吉珠单抗、泊特埃单抗、比伐单抗美登素、布来鲁单抗、博纳吐单抗、布隆妥维单抗、布索组单抗、伯考赛珠单抗、布雷库单抗、维布妥昔单抗、布雷奴单抗、布罗达单抗、布洛赛珠单抗、布隆妥珠单抗、布罗索尤单抗、卡比利珠单抗、卡瑞利珠单抗、卡那津单抗、坎妥珠单抗美登素、雷坎妥珠单抗、卡普赛珠单抗、卡罗单抗喷地肽、卡芦单抗、卡罗妥昔单抗、卡妥索单抗、西利珠单抗、西米普利单抗、培戈-赛妥珠单抗、西利单抗、西妥昔单抗、赛必妥单抗、西妥珠单抗、Ch.14.18、泊西他组单抗、西妥木单抗、克拉扎珠单抗、克立昔单抗、泰坦-克利妥珠单抗、考曲妥珠单抗、培利汀-考非妥珠单抗、雷星-考妥昔单抗、可那木单抗、康赛珠单抗、考韦昔单抗、克瑞组单抗、CR6261、立赞利珠单抗、克罗特度单抗、库萨珠单抗、达西珠单抗、达利珠单抗、达罗托组单抗、培戈-达匹利珠单抗、达雷木单抗、德屈库单抗、登西珠单抗、地尼白介素、玛汀-地宁妥珠单抗、地诺单抗、地洛妥单抗生物素、地莫单抗、迪扎米珠单抗、地努妥昔单抗、地利伏单抗、多玛洛珠单抗、阿托度单抗、多塔利单抗、曲齐妥单抗、度戈妥单抗、度匹鲁单抗、度伐鲁单抗、度司妥单抗、度妥昔珠单抗、依美昔单抗、依库珠单抗、埃巴单抗、依决洛单抗、依法珠单抗、依芬古单抗、埃迪鲁单抗、依来努单抗、依更妥单抗、埃罗妥珠单抗、艾西莫单抗、艾马妥组单抗、依玛妥珠单抗、艾美赛珠单抗、依那妥组单抗、维汀恩弗妥单抗、培戈-恩利莫单抗、依诺妥珠单抗、依诺凯组单抗、依诺苏单抗、恩妥昔单抗、西依匹莫单抗、阿法依泊汀、阿法依泊汀-epbx、依帕珠单抗、依替珠单抗、厄瑞努单抗、厄利珠单抗、厄妥索单抗、依那西普、依那西普-szzs、埃达组单抗、埃替利单抗、伊曲立珠单抗、依维苏单抗、依洛尤单抗、艾韦单抗、因子VIII Fc融合蛋白、因子IX Fc融合蛋白、法索单抗、法拉莫单抗、法瑞西单抗、法妥组单抗、法司努单抗、FBTA05、非维珠单抗、非扎奴单抗、非巴组单抗、非拉妥组单抗、芬妥木单抗、非格司亭、非格司亭-sndz、非利伏单抗、法兰妥单抗、夫来库单抗、伏妥珠单抗、芳妥珠单抗、福雷芦单抗、弗雷韦卢单抗、瑞玛奈珠单抗、弗瑞索单抗、弗洛西单抗、夫卢维单抗、福拉奴单抗、伏妥昔单抗、伽奈珠单抗、加利昔单抗、加尼妥单抗、更汀芦单抗、伽妥珠单抗、加维莫单抗、格迪伏单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、吉伏组单抗、吉维单抗、净利尤单抗、吉妥昔单抗、维托汀-格巴妥木单抗、戈利木单抗、戈鲁昔单抗、戈奈单抗、古塞库单抗、伊巴组单抗、IBI308、替伊莫单抗、艾芦库单抗、艾达赛珠单抗、伊波妥组单抗、伊戈伏单抗、IMAB362、伊玛鲁单抗、伊普利单抗、英西单抗、伊马曲单抗、英克拉单抗、雷英妥昔单抗、维汀-英度妥单抗、英比利珠单抗、英夫利昔单抗、英夫利昔单抗-abda、英夫利昔单抗-dyyb、英夫利昔单抗-qbtx、英妥木单抗、伊诺莫单抗、奥英妥珠单抗、伊匹单抗、伊妥木单抗、伊沙妥昔单抗、伊卡利单抗、艾司妥单抗、伊利组单抗、依克珠单抗、凯利昔单抗、拉贝珠单抗、拉妥珠单抗、兰洛利珠单抗、兰帕利珠单抗、拉那鲁单抗、兰洛珠单抗、拉韦昔单抗、来瑞组单抗、来马索单抗、棱德里珠单抗、棱维单抗、仑兹鲁单抗、乐德木单抗、来罗单抗、来索伏单抗、来利珠单抗、来沙木单抗、利韦单抗、维汀-利法妥珠单抗、利戈组单抗、沙泰坦-利洛托单抗、林妥珠单抗、利瑞鲁单抗、洛德组单抗、洛吉维单抗、莫星-洛沃妥珠单抗、卢卡木单抗、培戈-鲁利珠单抗、鲁昔单抗、鲁妥珠单抗、鲁吉珠单抗、马帕木单抗、玛格妥昔单抗、马塔西单抗、马司莫单抗、玛弗利木单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、美替木单抗、米拉组单抗、明瑞莫单抗、米吉珠单抗、索星-米妥昔单抗、米妥莫单抗、莫妥昔单抗、莫格利珠单抗、莫那利珠单抗、莫罗木单抗、莫舒内珠单抗、莫维珠单抗、帕妥昔-莫昔土单抗、莫罗莫那-CD3、他那可单抗、那美芦单抗、埃托-那普妥莫单抗、那呐妥单抗、那他珠单抗、那赛昔珠单抗、那韦伏单抗、那昔妥单抗、奈巴库单抗、耐昔妥珠单抗、奈莫利珠单抗、NEOD001、奈瑞莫单抗、奈伐苏单抗、尼塔奇单抗、尼妥珠单抗、尼塞韦单抗、纳武单抗、巯诺莫单抗、阿托珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥瑞珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉木单抗、奥来鲁单抗、奥仑达利珠单抗、奥洛组单抗、奥马珠单抗、奥布塔单抗、OMS721、奥那妥组单抗、昂妥昔珠单抗、奥瓦利单抗、奥匹努单抗、莫妥组单抗、奥戈伏单抗、奥替苏单抗、奥昔珠单抗、奥替利单抗、奥乐妥珠单抗、奥塞芦单抗、奥扎奈珠单抗、帕昔单抗、帕利珠单抗、潘瑞鲁单抗、帕尼单抗、潘考单抗、帕巴库单抗、帕萨妥珠单抗、帕考珠单抗、帕妥昔珠单抗、帕替组单抗、帕曲妥单抗、PDR001、乙二醇化非格司亭-jmdb、派姆单抗、佩姆莫单抗、培拉凯珠单抗、帕妥珠单抗、培克珠单抗、皮利珠单抗、维汀-匹那妥珠单抗、平妥莫单抗、普拉鲁单抗、洛扎利珠单抗、泊加利珠单抗、维汀-泊洛妥珠单抗、泊奈组单抗、泊伽维昔单抗、普拉珠单抗、普利珠单抗、普立昔单抗、瑞托萨昔单抗、普林木单抗、PRO 140、奎利组单抗、特土罗单抗、雷妥莫单抗、雷曲妥单抗、雷韦单抗、雷泮赛珠单抗、雷莫芦单抗、雷纳维单抗、兰尼单抗、瑞西巴库单抗、雷瓦利单抗、依库珠单抗、瑞法奈珠单抗、瑞加韦单抗、瑞拉利单抗、壬托鲁单抗、瑞利珠单抗、利纳西普、利妥木单抗、利努苏单抗、瑞莎珠单抗-rzaa(Risankizumab-rzaa)、利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs、利妥昔单抗-pvvr、罗妥木单抗、Rmab、罗来度单抗、若奇单抗、罗米司亭、洛莫索珠单抗、罗利珠单抗、洛曼妥珠单抗、罗维珠单抗、洛利昔珠单抗、鲁利单抗、戈沙妥组单抗、沙马组单抗、萨瑞鲁单抗、萨特利珠单抗(SA237)、沙妥莫单抗喷地肽、苏金单抗、塞鲁单抗、瑟瑞妥单抗、塞托昔单抗、塞曲舒单抗、司韦单抗、西罗珠单抗、SGN-CD19A、SGN-CD33A、SHP647、西法木单抗、司妥昔单抗、希特珠单抗、希普利珠单抗、斯库单抗、维汀-索非妥珠单抗、索拉珠单抗、索利单抗、索奈珠单抗、索土珠单抗、斯帕珠单抗、司达鲁单抗、硫索单抗、舒他伏单抗、苏替莫单抗、舒维组单抗、苏托舒单抗、他贝芦单抗、替他珠单抗、他度珠单抗、塔妥珠单抗、他利珠单抗、坦妥维单抗、他尼组单抗、帕他莫单抗、他瑞妥单抗、他利昔珠单抗、特非珠单抗、阿替莫单抗、替妥莫单抗、替奈昔单抗、替利珠单抗、特迪妥单抗、替妥木单抗、特度鲁单抗、特土罗单抗(利洛托单抗)、泰派鲁单抗、TGN1412、替布利珠单抗、替西木单抗(曲美利单抗)、替拉珠单抗、替加组单抗、替米妥珠单抗、替莫鲁单抗、替瑞利尤单抗、替雷利珠单抗、TNX-650、托珠单抗(阿特利珠单抗)、托木妥昔单抗、托利珠单抗、托萨托舒单抗、托西莫单抗、托维图单抗、曲罗芦单抗、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-anns、曲妥珠单抗-dkst、曲妥珠单抗-dttb、曲妥珠单抗美坦辛、曲妥珠单抗-pkrb、TRBS07、曲利珠单抗、曲美利单抗、曲戈卢单抗、西莫白介素单抗、妥韦单抗、乌妥昔单抗、乌洛鲁单抗、乌瑞鲁单抗、乌珠单抗、优特克单抗、乌托米单抗、伐纳利单抗、维凡妥组单抗、万替妥单抗、伐努赛珠单抗、伐利昔单抗、伐利苏单抗、伐立鲁单抗、伐利组单抗、维多珠单抗、维妥珠单抗、维帕莫单抗、维森库单抗、维西珠单抗、沃巴利珠单抗、伏洛昔单抗、珀伽利珠单抗、伏派利单抗、玛汀-沃瑟妥珠单抗、伏妥莫单抗、珍妥珠单抗、XMAB-5574、扎鲁木单抗、扎诺木单抗、扎图昔单抗、泽妥珠单抗、齐拉木单抗、佐贝图昔单抗(IMAB362、克劳迪单抗)、Ziv-阿柏西普、阿佐莫单抗或来自人类患者的样品中的对应的抗药抗体。在优选的实施方案中，单克隆抗体是利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs或利妥昔单抗-pvvr。
在一些实施方案中，单克隆抗体是生物类似药。在其它实施方案中，生物类似药包括但不限于阿达木单抗-adbm、阿达木单抗-atto、阿达木单抗-bwwb、贝伐单抗-awwb、阿法依泊汀-epbx、依那西普-szzs、英夫利昔单抗-abda、英夫利昔单抗-dyyb、英夫利昔单抗-qbtx、非格司亭-sndz、乙二醇化非格司亭-jmdb、乙二醇化非格司亭-bmez、瑞莎珠单抗-rzaa、利妥昔单抗-abbs、利妥昔单抗-pvvr、曲妥珠单抗-anns、曲妥珠单抗-dttb、曲妥珠单抗-pkrb或曲妥珠单抗-dkst。在某些实施方案中，活性的生物类似物质是阿达木单抗、贝伐单抗、依诺肝素钠、阿法依泊汀、ξ依泊汀、依那西普、非格司亭、促卵泡素α、英夫利昔单抗、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、乙二醇化非格司亭、瑞莎珠单抗、利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs利妥昔单抗-pvvr、促生长激素、特立帕肽(Teriparatide)或曲妥珠单抗。在优选的实施方案中，生物类似药是利妥昔单抗、利妥昔单抗-abbs或利妥昔单抗-pvvr。
在其它实施方案中，靶向部分是来自完整多克隆抗体的抗体、完整单克隆抗体、抗体片段、单链Fv(scFv)突变体、多特异性抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定子部分的融合蛋白或其它的包含抗原识别位点的修饰免疫球蛋白分子。
本文提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的组合物和方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。在某些实施方案中，本文提供了治疗有需要的受试者的非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含利妥昔单抗；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
术语“治疗(treat/treating/treatment)”泛指治疗性治疗和防治性或预防性措施两者，例如治疗、预防、逆转和/或下调疾病或疾患。如本文所用，“治疗”意味着在内部或外部向具有一种或多种疾病症状或怀疑患有生物制剂具有治疗活性或预防活性的疾病的受试者施用治疗性生物制剂，例如含有本公开的任一种抗体或其抗原结合片段的组合物。典型地，治疗性生物制剂以有效减轻所治疗的受试者或群体中的一种或多种疾病症状的量施用，无论是通过诱导这类症状的消退还抑制这类症状的进展，达到任何临床上可测量的程度。治疗性生物制剂有效减轻任何特定的疾病症状的量可根据如受试者或患者的疾病状态、年龄和体重以及治疗性生物制剂在受试者或患者中引起所需反应的能力等因素而变化。疾病症状是否已减轻可通过医师或其它熟练医疗保健提供者通常使用的临床测量来评定以评定症状的严重度或进展状态。该术语还包括延迟与病症相关的症状的发展和/或降低这类病症的症状的严重度。该术语还包括改善现有的不受控制的或有害的症状、预防另外的症状以及改善或预防这类症状的根本原因。因此，该术语表示已经赋予患有病症、疾病或症状或者有可能显现这类病症、疾病或症状的人或动物受试者有益的结果。如本文所用，“治疗”在应用于人或兽医学受试者时是指治疗性治疗以及诊断应用。“治疗”在应用于人或兽医学受试者时涵盖治疗性生物制剂如本公开的抗体或抗原结合片段与人或动物受试者接触。需要治疗癌症的受试者包括已经患有良性、癌变前或非转移性肿瘤的受试者以及预防癌症发生或复发的受试者。在一些实施方案中，治疗的目标或结果可以是减少癌细胞的数目；减小原发瘤的尺寸；抑制(即，在某种程度上减缓和优选停止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即，在某种程度上减缓和优选停止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上减轻一种或多种与病症相关的症状。在一些实施方案中，治疗功效可以通过评定生存持续时间、疾病进展时间、反应率(RR)、反应持续时间和/或生活质量来测量。组合物中的治疗性生物制剂的浓度通常是约20mg/mL至约700mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675mg/mL至约700mg/mL。组合物中的治疗性生物制剂可具有每单位约0.5至约1.0活性、每单位约0.75至约1.0活性或每单位约0.9至约1.0活性。活性是相对于在形成颗粒前的相同治疗性生物制剂测量的。在优选的实施方案中，治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。如本文所用的术语“预防(prevent/preventing/prevention)”是指抑制或延迟有需要的受试者中的疾病或疾患发作的任何作用，包括向受试者施用药学上有效量的根据本公开的组合物。在本公开的某些实施方案中，“治疗”罹患疾病或疾患的受试者应包括不限于：(i)减缓、停止或逆转疾病或疾患的进展；(ii)减缓、停止或逆转疾病或疾患的症状的进展；(iii)降低疾病或疾患的复发可能性；和/或(iv)降低疾病或疾患的症状的复发可能性。
“癌变前”或“肿瘤形成前”泛指通常在癌症之前或发展成癌症的状态或生长。“癌变前”生长可具有特征在于异常的细胞周期调控、增殖或分化的细胞，所述细胞可通过细胞周期的标志物测定。
癌症的实例包括但不限于胚细胞瘤(包括髓母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌瘤、胃泌素瘤和胰岛细胞癌)、间皮瘤、神经鞘瘤(包括听神经瘤)、脑膜瘤、腺癌、黑色素瘤、白血病或淋巴系统恶性病、肺癌(包括小细胞肺癌(SGLG)、非小细胞肺癌(NSGLG)、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃或胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道肿瘤以及头颈癌。
在一些实施方案中，“与……相关的状态或症状”可以是作为癌症的后果、在癌症之前出现或由癌症引起的任何病变。举例来说，在癌症是皮肤癌的情况下，状态或相关症状可以是微生物感染。在癌症是继发瘤的情况下，疾患或症状可能涉及具有肿瘤转移的相关器官的器官功能不全。在其它实施方案中，本文所述的治疗方法用于最小化或治疗个体的与个体的癌症相关的状态或症状。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物。在优选的实施方案中，受试者是人。
可以通过本文所述的组合物和方法治疗的癌症的非限制性实例包括但不限于任何实体或非实体癌症和/或癌症转移，包括但不限于以下：胃肠道肿瘤(结肠癌、直肠癌、结直肠癌、结直肠癌症、结直肠腺瘤、遗传性非息肉病1型、遗传性非息肉病2型、遗传性非息肉病3型、遗传性非息肉病6型；结直肠癌症、遗传性非息肉病7型、小肠和/或大肠癌、食管癌、食管癌胼胝症、胃癌、胰腺癌、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜癌、隆凸性皮肤纤维肉瘤、胆囊癌、胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肾癌(例如，2型或1型韦尔姆斯氏瘤(Wilms’tumor))、肝癌(例如肝母细胞瘤、肝细胞癌、肝细胞癌症)、膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤、生殖细胞肿瘤、滋养细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、卵巢未成熟畸胎瘤、子宫、卵巢上皮、骶尾瘤、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤、成人上皮肿瘤、卵巢癌、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤、宫颈癌、子宫颈癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、鼻咽、乳腺癌(例如乳腺导管癌、浸润性导管内乳腺癌、散发性乳腺癌、乳腺癌易感性、4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺-卵巢癌)、鳞状细胞癌(例如头颈部)、神经原发性肿瘤、星形细胞瘤、神经节母细胞瘤、神经母细胞瘤、淋巴瘤(例如霍奇金病(Hodgkin's disease)、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt)、皮肤T细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、胸腺淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤)、胶质瘤、腺癌、肾上腺瘤、遗传性肾上腺皮质癌、脑恶性病(肿瘤)、多种其它癌瘤(例如支气管源性大细胞癌、导管癌、恶性腹水、艾氏腹水(Ehrlich-Lettre ascite)、表皮样癌、大细胞癌、路易士肺(Lewis lung)癌、髓样癌、粘液表皮样癌、燕麦细胞癌、小细胞癌、梭形细胞癌、棘细胞癌、移行细胞癌、未分化癌、癌肉瘤、绒毛膜癌、囊腺癌)、成室管膜细胞瘤、上皮瘤、红白血病(例如弗里德氏(Friend)、淋巴母细胞)、纤维肉瘤、巨细胞瘤、神经胶质肿瘤、胶质母细胞瘤(例如多形性、星形细胞瘤)、胶质瘤肝癌、异源杂交瘤、异源骨髓瘤、组织细胞瘤、杂交瘤(例如B细胞)、肾上腺样瘤、胰岛瘤、胰岛肿瘤、角化病、成平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、白血病(例如急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性淋巴母细胞性前B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性成巨核细胞性白血病、单核细胞性白血病、急性髓性白血病、急性髓系白血病、急性髓系白血病伴嗜酸性粒细胞增多症、B细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病、慢性髓系白血病、慢性白血病、B细胞白血病、嗜酸性粒细胞白血病、弗里德氏白血病、粒细胞性或髓细胞性白血病、毛细胞白血病、淋巴细胞白血病、成巨核细胞性、单核细胞性、单核细胞-巨噬细胞、成髓细胞性白血病、髓系白血病、骨髓单核细胞性白血病、浆细胞白血病、前B细胞白血病、早幼粒细胞白血病、亚急性白血病、T细胞白血病、淋巴样肿瘤、髓系恶性肿瘤倾向、急性非淋巴细胞白血病)、淋巴肉瘤、黑色素瘤、乳腺肿瘤、肥大细胞瘤、成神经管细胞瘤、间皮瘤、转移性肿瘤、单核细胞瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓瘤、肾母细胞瘤、神经组织胶质肿瘤、神经组织神经元肿瘤、神经鞘瘤、神经母细胞瘤、少突胶质瘤、骨软骨瘤、骨性骨髓瘤、骨肉瘤(例如尤文氏(Ewing’s)骨肉瘤)、骨质疏松症、骨转移、乳头状瘤、移行细胞、嗜铬细胞瘤、垂体瘤(浸润性)、浆细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤(例如尤文氏肉瘤、组织细胞肉瘤、詹森(Jensen)肉瘤、骨原性肉瘤、网状细胞肉瘤)、神经鞘瘤、皮下肿瘤、畸胎癌(例如多能)、畸胎瘤、睾丸肿瘤、胸腺瘤和毛发上皮瘤、胃癌、纤维肉瘤、多形性胶质母细胞瘤；多发性血管球瘤、李法美尼综合征(Li-Fraumeni syndrome)、脂肪肉瘤、林奇癌家族综合征II(lynch cancer family syndrome II)、男性生殖细胞肿瘤、肥大细胞白血病、甲状腺髓样癌、多发性脑膜瘤、内分泌肿瘤粘液肉瘤、家族非嗜铬性副神经节瘤、毛母质瘤、乳头状、家族性和散发性、横纹肌样肿瘤易感综合征、家族性、横纹肌样肿瘤、软组织肉瘤或图尔古特综合征(Turcot syndrome)伴胶质母细胞瘤。
根据本公开的一些实施方案，本文所述的组合物和方法还包含适合于治疗的抗癌剂，包括但不限于化学疗法、生物疗法、光力学疗法、营养疗法、近距放射疗法、免疫疗法或细胞疗法。在一些实施方案中，抗癌剂可杀死癌细胞(细胞毒性剂)。在其它实施方案中，抗癌剂可预防癌细胞繁殖(细胞生长抑制剂)。
在一些实施方案中，本文所述的组合物和方法还包含至少一种药学上可接受的细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。在其它实施方案中，细胞毒性剂或细胞生长抑制剂包括醋酸阿比特龙(Abiraterone Acetate)、阿比曲特(Abitrexate)(甲氨蝶呤(Methotrexate))、阿霉素(Adriamycin)(盐酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride))、阿朵希尔(Adrucil)(氟尿嘧啶(Fluorouracil))、马来酸氢阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、阿非尼特(Afinitor)(依维莫司(Everolimus))、阿地白介素(Aldesleukin)、爱宁达(Alimta)(培美曲塞二钠(Pemetrexed Disodium))、阿乐喜(Aloxi)(盐酸帕洛诺司琼(PalonosetronHydrochloride))、阿波氯宁(Ambochlorin)(苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、阿波宁(Amboclorin)(苯丁酸氮芥)、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑(Anastrozole)、阿瑞匹坦(Aprepitant)、阿可达(Aredia)(帕米膦酸二钠(Pamidronate Disodium))、瑞宁得(Arimidex)(阿那曲唑(Anastrozole))、阿诺新(Aromasin)(依西美坦(Exemestane))、阿仑恩(Arranon)(奈拉滨(Nelarabine))、三氧化二砷、菊欧文菌天冬酰胺酶(AsparaginaseErwinia chrysanthemi)、阿西替尼(Axitinib)、阿扎胞苷(Azacitidine)、贝可木(Becenum)(卡莫司汀(Carmustine))、贝乐达(Beleodaq)(贝利司他(Belinostat))、贝利司他、盐酸苯达莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、贝沙罗汀(Bexarotene)、比卡米特(Bicalutamide)(BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素(Bleomycin)、硼替佐米(Bortezomib)、博舒利夫(Bosulif)(博舒替尼(Bosutinib))、博舒替尼、白消安(Busulfan)、白舒非(Busulfex)(白消安)、卡巴他赛(Cabazitaxel)、卡博替尼-S-苹果酸盐(Cabozantinib-S-Malate)、开普拓(Camptosar)(盐酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他滨(Capecitabine)、卡铂(Carboplatin)、卡铂-紫杉酚(CARBOPLATIN-TAXOL)、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫瑞斯(Carmubris)(卡莫司汀)、卡莫司汀、康士得(Casodex)(比卡米特)、CeeNU(洛莫司汀(Lomustine))、色瑞替尼(Ceritinib)、司比定(Cerubidine)(盐酸道诺霉素(Daunorubicin Hydrochloride))、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-泼尼松(CHLORAMBUCIL-PREDNISONE)、顺铂(Cisplatin)、克拉芬(Clafen)(环磷酰胺)、氯法拉滨(Clofarabine)、氯法瑞斯(Clofarex)(氯法拉滨)、科罗拉(Clolar)(氯法拉滨)、考美曲(Cometriq)(卡博替尼-S-苹果酸盐)、更生霉素(Cosmegen)(放线菌素D(Dactinomycin))、克唑替尼(Crizotinib)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、(Cyfos)(异环磷酰胺(Ifosfamide))、阿糖胞苷(Cytarabine)、赛德萨-U(Cytosar-U)(阿糖胞苷)、癌得星(Cytoxan)(环磷酰胺))、达拉非尼(Dabrafenib)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、达克金(Dacogen)(地西他滨(Decitabine))、放线菌素D、达沙替尼(Dasatinib)、盐酸道诺霉素、地西他滨(Decitabine)、地加瑞克(Degarelix)、地尼白介素、盐酸右雷佐生(DexrazoxaneHydrochloride)、多西紫杉醇(Docetaxel)、盐酸多柔比星、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、伊夫得(Efudex)(氟尿嘧啶)、埃立特(Elitek)(拉布立酶(Rasburicase))、伊冷司(Ellence)(盐酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、乐沙定(Eloxatin)(奥沙利铂(Oxaliplatin))、艾曲泊帕(Eltrombopag Olamine)、伊梦得(Emend)(阿瑞匹坦(Aprepitant))、恩杂鲁胺(Enzalutamide)、盐酸表柔比星、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、厄维吉(Erivedge)(维莫德吉(Vismodegib))、盐酸埃罗替尼(Erlotinib Hydrochloride)、厄文纳(Erwinaze)(菊欧文菌天冬酰胺酶)、凡毕复(Etopophos)(磷酸依托泊苷(EtoposidePhosphate))、依托泊苷、磷酸依托泊苷、依维莫司、易维特(Evista)(盐酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、依西美坦、法乐通(Fareston)(托瑞米芬(Toremifene))、法瑞达(Farydak)(帕比司他(Panobinostat))、芙仕得(Faslodex)(氟维司群(Fulvestrant))、弗隆(Femara)(来曲唑(Letrozole))、非格司亭、福达华(Fludara)(磷酸氟达拉滨(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟达拉滨、氟乐斯(Fluoroplex)(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、福乐斯(Folex)(甲氨蝶呤)、福乐斯PFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRINOX、FOLFOX、福洛汀(Folotyn)(普拉曲沙(Pralatrexate))、氟维司群(Fulvestrant)、吉非替尼(Gefitinib)、盐酸吉西他滨(Gemcitabine Hydrochloride)、吉西他滨-顺铂(GEMCITABINE-CISPLATIN)、吉西他滨-奥沙利铂(GEMCITABINE-OXALIPLATIN)、健择(Gemzar)(盐酸吉西他滨)、吉泰瑞(Gilotrif)(阿法替尼马来酸氢盐(Afatinib Dimaleate))、格列卫(Gleevec)(甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate))、格利德(Gliadel)(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶(Glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、海乐卫(Halaven)(甲磺酸艾日布林)、和美新(Hycamtin)(盐酸拓扑替康(Topotecan Hydrochloride))、爱博斯(Ibrance)(帕博西尼(Palbociclib))、依鲁替尼(Ibrutinib)、爱鲁斯(Iclusig)(盐酸帕纳替尼(Ponatinib Hydrochloride))、伊达霉素(Idamycin)(盐酸伊达比星(IdarubicinHydrochloride))、盐酸伊达比星、艾代拉里斯(Idelalisib)、艾福斯(Ifex)(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、匹服平(Ifosfamidum)(异环磷酰胺)、甲磺酸伊马替尼、亿珂(Imbruvica)(依鲁替尼)、英立达(Inlyta)(阿西替尼)、易瑞沙(Iressa)(吉非替尼)、盐酸伊立替康、艾达斯(Istodax)(罗米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、易莎平(Ixempra)(伊沙匹隆)、佳卡法(Jakafi)(磷酸鲁索利替尼(Ruxolitinib Phosphate))、杰塔纳(Jevtana)(卡巴他赛)、那洛昔芬(Keoxifene)(盐酸雷洛昔芬)、凯洛斯(Kyprolis)(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、来那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸乐伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、乐卫玛(Lenvima)(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、甲酰四氢叶酸钙(Leucovorin Calcium)、瘤可宁(Leukeran)(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、聚左旋糖(Levulan)(氨基乙酰丙酸)、林法新(Linfolizin)(苯丁酸氮芥)、洛莫司汀、路普容(Lupron)(醋酸亮丙瑞林)、利普卓(Lynparza)(奥拉帕尼(Olaparib))、玛启波(Marqibo)(硫酸长春新碱脂质体(VincristineSulfate Liposome))、玛图兰(Matulane)(盐酸丙卡巴肼(ProcarbazineHydrochloride))、盐酸氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)、梅格施(Megace)(甲地孕酮(Megestrol Acetate))、甲地孕酮、梅尼斯特(Mekinist)(曲美替尼(Trametinib))、巯基嘌呤(Mercaptopurine)、美司那(Mesna)、美司那斯(Mesnex)(美司那)、美萨拉通(Methazolastone)(替莫唑胺(Temozolomide))、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、美萨特(Mexate)(甲氨蝶呤)、美萨特-AQ(甲氨蝶呤)、丝裂霉素C(Mitomycin C)、盐酸米托蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托曲斯(Mitozytrex)(丝裂霉素C)、莫佐比尔(Mozobil)(普乐沙福(Plerixafor))、玛斯杰(Mustargen)(盐酸氮芥)、突变霉素(Mutamycin)(丝裂霉素C)、马勒兰(Myleran)(白消安)、马洛萨(Mylosar)(阿扎胞苷)、诺维本(Navelbine)(酒石酸长春瑞滨(Vinorelbine Tartrate))、奈拉滨(Nelarabine)、奈萨(Neosar)(环磷酰胺)、蕾莎瓦(Nexavar)(甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼罗替尼(Nilotinib)、诺瓦得士(Nolvadex)(柠檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate))、纳拉特(Nplate)(罗米司亭)、奥拉帕尼、高三尖杉酯碱(Omacetaxine Mepesuccinate)、奥塔克(Ontak)(地尼白介素)、奥沙利铂、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、帕博西尼、盐酸帕洛诺司琼、帕米膦酸二钠、帕比司他、帕拉特(Paraplat)(卡铂)、铂尔定(Paraplatin)(卡铂)、盐酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、培美曲塞二钠、帕拉诺(Platinol)(顺铂)、帕拉诺-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺(Pomalidomide)、泊马斯特(Pomalyst)(泊马度胺)、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、泼尼松、盐酸丙卡巴肼、普玛塔(Promacta)(艾曲泊帕)、嘌呤醇(Purinethol)(巯基嘌呤)、普昔恩(Purixan)(巯基嘌呤)、二氯化镭223、盐酸雷洛昔芬、瑞戈非尼(Regorafenib)、雷利米得(Revlimid)(来那度胺)、雷马曲斯(Rheumatrex)(甲氨蝶呤)、罗米地辛、罗米司亭、柔比霉素(Rubidomycin)(盐酸道诺霉素)、磷酸鲁索利替尼(Ruxolitinib Phosphate)、甲苯磺酸索拉非尼、施达赛(Sprycel)(达沙替尼)、拜万戈(Stivarga)(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate)、索坦(Sutent)(苹果酸舒尼替尼)、昔诺韦(Synovir)(沙利度胺(Thalidomide))、昔瑞博(Synribo)(高三尖杉酯碱)、塔非拉(Tafinlar)(达拉非尼)、柠檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)、塔拉宾(Tarabine)PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(Tarceva)(盐酸埃罗替尼)、塔击汀(Targretin)(贝沙罗汀)、达希纳(Tasigna)(尼罗替尼)、紫杉酚(Taxol)(太平洋紫杉醇)、泰索帝(Taxotere)(多西紫杉醇)、替莫达(Temodar)(替莫唑胺)、替莫唑胺、坦罗莫司(Temsirolimus)、沙利度胺、撒利迈(Thalomid)(沙利度胺)、噻替派(Thiotepa)、拓扑杀(Toposar)(依托泊苷)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、驮瑞塞尔(Torisel)(坦罗莫司)、托特可(Totect)(盐酸右雷佐生)、曲美替尼、曲安达(Treanda)(盐酸苯达莫司汀)、曲砷诺(Trisenox)(三氧化二砷)、泰克泊(Tykerb)(二甲苯磺酸)、凡德他尼(Vandetanib)、万班(Velban)(硫酸长春碱(Vinblastine Sulfate))、万珂(Velcade)(硼替佐米)、维萨(Velsar)(硫酸长春碱)、威罗菲尼(Vemurafenib)、凡毕士(VePesid)(依托泊苷)、维杜(Viadur)(醋酸亮丙瑞林)、维达扎(Vidaza)(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、维卡萨(Vincasar)PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱(Vincristine Sulfate)、酒石酸长春瑞滨、维莫德吉、伏瑞斯特(Vorinostat)、维全特(Votrient)(盐酸帕唑帕尼)、维尔辛(Wellcovorin)(甲酰四氢叶酸钙)、赛可瑞(Xalkori)(克唑替尼)、希罗达(Xeloda)(卡培他滨)、多菲戈(Xofigo)(二氯化镭223)、安可坦(Xtandi)(恩杂鲁胺)、扎曲普(Zaltrap)(Ziv-阿柏西普)、泽波拉夫(Zelboraf)(威罗菲尼)、辛卡德(Zinecard)(盐酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、诺雷德(Zoladex)(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸(Zoledronic Acid)、唑林扎(Zolinza)(伏立诺他(Vorinostat))、择泰(Zometa)(唑来膦酸)、兹德力(Zydelig)(艾代拉里斯)、赞可达(Zykadia)(色瑞替尼)、兹提佳(Zytiga)(醋酸阿比特龙)或它们的组合。在优选的实施方案中，癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
如本文所述，CD20(又名Bp35)是一种限于B淋巴细胞的分化抗原，它在早期前B细胞发育期间表达并保留直到浆细胞分化。CD20是一种有用的B细胞淋巴瘤靶标，因为这个抗原在恶性B细胞(即，有增无减的增殖会引起B细胞淋巴瘤的B细胞)表面上以很高的密度表达。食品和药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)已经批准了抗CD20抗体利妥昔单抗
Figure BDA0003546294220000391
的治疗用途，用于治疗复发的和以前治疗过的低恶性度非霍奇金淋巴瘤(NHL)。利妥昔单抗通过结合于B细胞上的CD20抗原，通过被认为涉及补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的机制引起B细胞溶解来起作用。在某些实施方案中，治疗性生物制剂是抗体。在优选的实施方案中，抗体是抗CD20抗体。
在一些实施方案中，治疗性生物制剂是免疫疗法。在其它实施方案中，免疫疗法是抗CD20疗法。在某些实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗。在本文所述的组合物和方法的优选实施方案中，可用于治疗有需要的受试者的非霍奇金淋巴瘤(NHL)，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含利妥昔单抗；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。如本文所述，能够结合CD20抗原的任何抗体可用于本公开的方法中。结合CD20抗原的抗体包括例如：C2B8(利妥昔单抗；
Figure BDA0003546294220000392
)(美国专利No.5,736,137，以引用的方式明确并入本文中)；钇-[90]标记的2138鼠科抗体，称为Y2B8(美国专利No.5,736,137，以引用的方式明确并入本文中)；鼠科IgG2a 131，任选地经131 1标记，产生131 1-B1抗体
Figure BDA0003546294220000393
(美国专利No.5,595,721，以引用的方式明确并入本文中)；鼠科单克隆抗体1F5(Press等人Blood69(2):584-591(1987))；嵌合2H7抗体(美国专利No.5,677,180，以引用的方式明确并入本文中)；以及单克隆抗体L27、G28-2、93-1 133、B--Cl或NU--B2，从国际白细胞分型研讨会(International Leukocyte Typing Workshop)获得(Valentine等人,Leukocyte TypingIII(McMichael编辑,第440页,Oxford University Press(1987))。
在本公开的某些实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗。利妥昔单抗是基因工程化的嵌合鼠科/人单克隆抗体。利妥昔单抗是一种含有鼠科轻链和重链可变区序列和人恒定区序列的IgGκ免疫球蛋白。利妥昔单抗对CD20抗原具有大约8.0nM的结合亲和力并且可以从例如Genentech(South San Francisco,CA)购得。
在其它实施方案中，本公开中所用的抗CD20抗体可以与标准护理化学治疗剂/组合，例如CHOP化学疗法方案(它是由环磷酰胺、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱(vincristine)和泼尼松龙(prednisolone)的组合组成的方案)一起施用。已经批准利妥昔单抗与CHOP化学疗法组合用于治疗某些类型的淋巴瘤，并且该组合已被称为RCHOP化学疗法。在某些实施方案中，组合物还包含环磷酰胺、多柔比星、长春新碱或泼尼松龙中的至少一种。
在某些实施方案中，本文所述的抗体是结合肿瘤细胞的抗体，例如针对细胞表面受体或肿瘤相关抗原(TAA)的抗体。为了努力发现癌症疗法的有效细胞靶标，本领域技术人员已经设法鉴定跨膜或以其它方式与肿瘤相关的多肽，与一种或多种正常的非癌细胞相比，这些多肽在一种或多种特定类型的癌细胞的表面上特异性地表达。与非癌细胞的表面相比，这类与肿瘤相关的多肽常常更多地在癌细胞表面上表达。本领域中已知这类细胞表面受体和与肿瘤相关的抗原，并且准备好用于使用本领域中已知的方法和信息产生抗体。
本文所述的抗体可以靶向的细胞表面受体和TAA的示例性实例包括(但不限于)在美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)的核酸和蛋白质序列鉴定协议下列出的多种受体和TAA。与任何列出的细胞表面受体和TAA对应的核酸和蛋白质序列可在公共数据库如GenBank中获得，并在本领域中已知。
本文还提供了用于治疗有需要的受试者的炎性疾病和/或疼痛疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。在某些实施方案中，所述方法还包含非类固醇类消炎药(NSAID)。在其它实施方案中，NSAID可包括(但不限于)水杨酸酯(salicylate)、吲哚美辛(indomethacin)、氟比洛芬(flurbiprofen)、双氯芬酸(diclofenac)、酮洛酸(ketorolac)、萘普生(naproxen)、吡罗昔康(piroxicam)、特丁非隆(tebufelone)、布洛芬(ibuprofen)、依托度酸(etodolac)、萘布美酮(nabumetone)、替尼达普(tenidap)、阿氯酚酸(alcofenac)、安替比林(antipyrine)、氨基比林(aminopyrine)、安乃近(dipyrone)、氨基吡喃酮(aminopyrone)、苯基保泰松(phenylbutazone)、氯非宗(clofezone)、羟保泰松(oxyphenbutazone)、戊烯松(prenazone)、阿扎丙宗(apazone)、苄达明(benzydamine)、布可隆(bucolome)、辛可芬(cinchophen)、氯尼辛(clonixin)、地曲唑(ditrazol)、依匹唑(epirizole)、非诺洛芬(fenoprofen)、夫洛非宁(floctafenin)、氟灭酸(flufenamicacid)、苷氨苯喹(glaphenine)、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、洛索洛芬(loxoprofen)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、尼氟酸(niflumic acid)、非那西汀(phenacetin)、盐地磺胺(salidifamide)、舒林酸(sulindac)、舒洛芬(suprofen)、托美丁(tolmetin)、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物。
在本文所述的任一种方法的一些实施方案中，炎性疾病或疾患包括但不限于关节病、眼科疾病、视网膜疾病、克罗恩病(Crohn's disease)、肠易激综合征、斯耶格伦氏病(Sjogren’s disease)、组织移植排斥反应、哮喘、多发性硬化、硬皮病、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture’s syndrome)、动脉粥样硬化、慢性特发性血小板减少性紫癜、艾迪生病(Addison’s disease)、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease)、糖尿病、败血性休克、重症肌无力、盆腔炎症性疾病、炎症性肠病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、阑尾炎、胰腺炎或胆囊炎。
在其它实施方案中，炎性疾病或疾患是关节病。在一些实施方案中，关节病包括但不限于骨关节炎、类风湿性关节炎、脊柱关节炎、全身型幼年特发性关节炎、牛皮癣性关节炎、痛风、强直性脊柱炎或青年类风湿性关节炎。在某些实施方案中，受试者先前已经被诊断为患有炎性疾患。
在一些实施方案中，本文提供的方法是减少有需要的受试者中的炎症、疼痛或发烧的方法。在其它实施方案中，疼痛包括但不限于伤害感受性疼痛、神经病理性疼痛、心因性疼痛、爆发性疼痛、偶发性疼痛、背痛、肌肉骨骼疼痛、手术后疼痛、手术痛、内脏疼痛、关节疼痛、剧痛、炎性痛或慢性疼痛。在某些实施方案中，减少受试者的关节中的炎症。在本文所述的任一种方法的其它实施方案中，受试者患有关节病。
在一些实施方案中，炎性和/或疼痛疾病或疾患包括但不限于关节疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、神经病理性疼痛、伤害感受性疼痛、剧痛、慢性疼痛、炎性痛、手术痛、手术后疼痛、内脏疼痛、偶发性疼痛、爆发性疼痛、心因性疼痛、克罗恩病、肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)、斯耶格伦氏病、组织移植排斥反应、哮喘、多发性硬化、硬皮病、古德帕斯彻氏综合征、动脉粥样硬化、艾迪生病、帕金森氏病、阿尔茨海默病、糖尿病、败血性休克、重症肌无力、盆腔炎症性疾病、炎症性肠病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、阑尾炎、胰腺炎或胆囊炎。在一些实例中，炎性疾患是关节病。关节病的非限制性实例包括骨关节炎、类风湿性关节炎、脊柱关节炎、全身型幼年特发性关节炎、牛皮癣性关节炎、痛风、强直性脊柱炎或青年类风湿性关节炎。
在其它实施方案中，炎性和/或疼痛疾病或疾患是慢性或急性的炎性过程。在某些实施方案中，慢性或急性的炎性过程可以是类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎或败血症。
在一些实施方案中，炎性和/或疼痛疾病或疾患包括但不限于代谢综合征或疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激综合征(IBS)或炎症性肠病(IBD)。在其它实施方案中，炎症性肠病(IBD)是小肠克罗恩病(CDSB)、结肠克罗恩病(CDC)或溃疡性结肠炎(UC)。在某些实施方案中，代谢综合征或疾病涉及炎症，例如II型糖尿病、肥胖症或脂肪酸代谢病症。
在其它实施方案中，本文所述的组合物和方法可用于治疗免疫性疾病、继发于血液恶性病的获得性低丙种球蛋白血症、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome)、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌肉病变、朗-爱二氏肌无力综合征(Lambert-Eaton myasthenic syndrome)、多灶性运动神经病、重症肌无力、莫尔森-沃尔特曼综合征(Moersch-Woltmann syndrome)、继发性低丙种球蛋白血症特异抗体缺陷、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性溶血性贫血；瘢痕性类天疱疮、埃文斯综合征(Evans syndrome)、胎儿-母体/新生儿同种免疫性血小板减少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高风险同种异体造血干细胞移植、IgM副蛋白血症神经病、肾移植、多发性硬化、斜视性眼阵挛-肌阵孪-共济失调、输血后紫癜、中毒性表皮坏死溶解/史蒂文约翰逊综合征(TEN/SJS)、中毒性休克综合征、阿尔茨海默病、多发性骨髓瘤、败血症；B细胞肿瘤、外伤或细菌、病毒、真菌感染。
在本文所述的任一种方法的一些实施方案中，免疫性疾病是普通变异型免疫缺陷(CVID)、先天性无丙种球蛋白血症、维一奥二氏综合症(Wiskott-Aldrich syndrome)、严重联合免疫缺陷(SCID)、原发性低丙种球蛋白血症、伴抗体缺陷的原发性免疫缺陷病、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、婴儿低丙种球蛋白血症或无抗体的副肿瘤性小脑变性。
在其它实施方案中，免疫性疾病是自身免疫性疾病。在某些实施方案中，自身免疫性疾病包括但不限于多发性硬化、硬皮病、I型糖尿病、类风湿性关节炎、甲状腺炎、雷诺综合征(Reynaud’s syndrome)、斯耶格伦氏综合征、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性心肌炎、炎症性肠病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、系统性狼疮、视神经脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、溃疡性结肠炎、克罗恩病、多发性关节炎、移植物抗宿主反应、幼年起病型糖尿病、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、格雷夫斯病(Grave’s disease)、恶性贫血、慢性活动性(狼疮状)肝炎、牛皮癣性关节炎或神经性皮肤炎。
在某些实施方案中，免疫性疾病可根据低抗体水平、白血球功能因T-淋巴细胞问题而削弱、T-淋巴细胞问题、B-淋巴细胞问题、白血球的杀死和机能失调、异常的白细胞移动或异常的补体系统进行分类。在其它实施方案中，传染性疾病可以是免疫性疾病，即普通变异型免疫缺陷、选择性抗体缺陷、婴儿暂时性低丙种球蛋白血症、X连锁无丙种球蛋白血症(布鲁顿无丙种球蛋白血症(Bruton's agammaglobulinemia))、慢性皮肤粘膜念珠菌病、迪乔治异常(DiGeorge anomaly)、共济失调毛细血管扩张、严重联合免疫缺陷病、维一奥二氏综合症、X连锁淋巴组织增生综合征、人类免疫缺陷病毒、齐-希二氏综合征(Chediak-Higashi syndrome)、白细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症、髓过氧物酶、高免疫球蛋白血症E(乔-布二氏综合征(Job-Buckles syndrome))、白细胞粘附缺陷病、补体组分3(C3)缺乏症、补体组分6(C6)缺乏症、补体组分7(C7)缺乏症或补体组分8(C8)缺乏症。
在其它实施方案中，本文所述的方法还包括向患者施用治疗剂。在某些实施方案中，治疗剂是消炎药、抗组胺剂、止痛剂或皮质类固醇。在其它实施方案中，所述方法还包含非类固醇类消炎药(NSAID)。在一些实施方案中，NSAID可为水杨酸酯、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、酮洛酸、萘普生、吡罗昔康、特丁非隆、布洛芬、依托度酸、萘布美酮、替尼达普、阿氯酚酸、安替比林、氨基比林、安乃近、氨基吡喃酮、苯基保泰松、氯非宗、羟保泰松、戊烯松、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、辛可芬、氯尼辛、地曲唑、依匹唑、非诺洛芬、夫洛非宁、氟灭酸、苷氨苯喹、吲哚洛芬、酮洛芬、洛索洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸、非那西汀、盐地磺胺、舒林酸、舒洛芬、托美丁、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物。
在一些实施方案中，所述方法可用于治疗神经母细胞瘤、肉瘤、脑癌、转移性脑癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌、淋巴瘤、结直肠癌症、转移性结直肠癌症、结肠直肠癌、结肠直肠肿瘤、非小细胞肺癌、癌瘤、血液癌症、恶性血液病、血液肿瘤、胃肠癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、转移性癌症、鳞状细胞癌、恶性腹水、胃癌、头颈癌、头颈部鳞状细胞癌、实体瘤、胰腺癌、骨转移、复发性多形性胶质母细胞瘤、恶性黑色素瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、表达粘连蛋白-4的癌症、慢性淋巴细胞性白血病、肾上腺皮质癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、B细胞癌、急性髓性白血病、透明细胞肾细胞癌、肾细胞癌、胃肠腺癌、胰腺肿瘤、胃肠腺癌、胰腺肿瘤、胃癌、鼻咽癌、胶质瘤、急性淋巴母细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、血小板凝聚抑制、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、艰难梭菌结肠炎、类风湿性关节炎、斑块型牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎、幼年特发性关节炎、新生儿溶血症、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化、高胆固醇血症、哮喘、过敏性哮喘、慢性哮喘、严重过敏性病症、过敏反应、炎性病变、炎症、早产儿视网膜病变、血栓栓塞、血栓症、肿瘤/免疫适应症、自身免疫性疾病的治疗、侵袭性念珠菌感染、减少青光眼手术后的结疤、白细胞病、系统性硬皮病、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)孢子、炭疽(预防和治疗)、免疫介导的炎性病症、免疫疾病、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)感染肿瘤坏死因子、减少心脏手术的副作用、黄斑变性(湿式)、新生血管性年龄相关的黄斑变性、中风后运动功能恢复、气道炎症、非恶性皮肤癌、胃肠道炎症、葡萄膜炎、多发性肌炎、脉络膜和视网膜新血管形成、肌肉萎缩、由矫形引起的肌肉萎缩、肌肉减少症、疼痛、由大肠杆菌引起的腹泻、阿尔茨海默病、败血症、由革兰氏阴性细菌引起的败血症、败血症(葡萄球菌(Staphylococcus))、病毒感染、骨质疏松症、骨髓炎、出血、传染性疾病/流感A、特应性疾病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、心脏病发作、中风、创伤性休克、B型肝炎、慢性B型肝炎、阑尾炎、急性坐骨神经痛、呼吸道合胞病毒感染、呼吸道合胞病毒预防、狂犬病(预防)、特发性肺纤维化、疼痛、HIV感染、巨细胞病毒感染、出血性休克、纤维化、经皮冠状动脉介入术、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染、预防器官移植排斥反应、移植物抗宿主病、逆转达比加群酯的抗凝作用、抗肿瘤药、肌肉生长抑制素抑制剂、血脂障碍、糖尿病、1型糖尿病、心脏成像、诊断剂或肿瘤检测。在其它实施方案中，器官移植排斥反应(宿主抗移植物反应)是对移植排斥反应的预防。在某些实施方案中，所述方法可用于治疗非恶性皮肤癌。在优选的实施方案中，所述方法可用于治疗非恶性皮肤癌。
本文提供了治疗有需要的受试者的肾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。在某些实施方案中，本文提供了治疗有需要的受试者的膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)、膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)病原、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、抗类固醇性肾病综合征、血管炎或它们的组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
关于肾病，“治疗”意指：(1)抑制疾病症状显现，例如使疾病的临床症状在可能患有疾病或易于显现疾病但还没有经历或显示疾病症状的动物(例如人)中不显现；(2)抑制疾病，例如抑制疾病或它的一种或多种临床症状显现；或(3)减轻或改善疾病，例如引起疾病或它的一种或多种临床症状消退。举例来说，治疗可指减轻与肾病相关的一种或多种症状。肾病的治疗不需要疾病全部消失。例如，一种或多种症状或不希望的疾病后果减少至少25％或至少50％就足够。
“降低”或“减少”意指数目、量、尺寸或强度变得更少或更小。在某些实施方案中，降低疾病(例如，例如局灶性节段性肾小球硬化(FSGS))风险包括显现疾病的可能性降低至少约20％，例如降低至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在其它实施方案中，降低疾病风险包括延迟疾病显现，例如延迟至少约六个月，例如约一年，例如约两年、约五年或约十年。
如本文中一般使用的术语“肾病”或“肾脏疾病”意指特定地引起肾损害的病症。肾病包括但不限于局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、高血压终末期肾病(ESRD)、继发于系统性红斑狼疮的肾病、糖尿病性肾病、高血压性肾病、IgA肾病、IgA肾炎、HIV相关的肾病、非糖尿病性慢性肾脏疾病、慢性肾脏疾病、返流性肾病、肾小球性肾炎、肾小球肾病、多囊肾病或黄嘌呤氧化酶缺乏症或它们的组合。肾病可以是慢性或急性的。如本文所述的慢性肾病，在某些实施方案中，可以从1期(肾功能轻微减弱)进展到2期(功能轻度减少)、3期(功能中度减少)、4期(功能重度减少)或5期(确定肾衰竭)。
在一些实施方案中，“与……相关的状态或症状”可以是作为肾病的后果、在肾病之前出现或由肾病引起的任何病变。举例来说，在肾病是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)的情况下，疾患或相关症状可以是微生物感染。在其它实施方案中，本文所述的治疗方法用于最小化或治疗个体的与个体的肾病相关的状态或症状。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物。在优选的实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，所需的反应是预防肾病(例如局灶性节段性肾小球硬化(FSGS))的显现。在其它实施方案中，所需的反应是延迟肾病(例如局灶性节段性肾小球硬化(FSGS))的显现或进展，例如延迟至少约三个月、至少约六个月、至少约一年、至少约两年、至少约五年或至少约十年。在某些实施方案中，所需的反应是减少肾病(例如局灶性节段性肾小球硬化(FSGS))的征象和症状，例如肾组织结疤和/或四肢中或与说话相关的神经症状。
如本文所公开，所述方法可以用于治疗肾病。在一些实施方案中，肾病是抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关血管炎(AAV)、特发性膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)、狼疮肾炎、系统性红斑狼疮(SLE)、微小病变(MCD)、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、抗体介导的肾移植排斥反应、膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、抗类固醇性肾病综合征、血管炎、IgA肾炎、糖尿病性肾病、慢性肾病、返流性肾病、肾小球性肾炎、肾小球肾病、多囊肾病或作为使ABO-/人白细胞抗原(HLA)不相容的肾移植能够进行的脱敏方案的一部分。在优选的实施方案中，所述方法可用于治疗膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)、膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)病原、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、抗类固醇性肾病综合征、血管炎或它们的组合。
在某些实施方案中，本文所述的方法可显著地减少患有普通形式肾脏疾病(称为膜性肾病)的人中的肾损害。在优选的实施方案中，所述方法可用作重度膜性肾病(MN)的一线疗法。
在某些实施方案中，所述方法在患有抗类固醇性肾病综合征的患者，尤其是那些患有局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)的患者和患复发性FSGS的年轻患者中可展现最佳的治疗结果。
在一些实施方案中，本文所述的方法可通过靶向和破坏B细胞来减少称为自身抗体(ANCA)的身体产生的有害抗体的数目。ANCA攻击健康组织和细胞，是由B细胞产生的。自身抗体靶向称为中性粒细胞的特定白血球，并且ANCA引起中性粒细胞粘到和凝集到身体不同组织和器官的小血管壁上。在其它实施方案中，所述方法可用于治疗会伤害肾的血管炎。
在某些其它实施方案中，所述方法可用于治疗尚未进行肾移植的受试者或已经被确定为有显现肾病风险的受试者的局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)或降低其显现可能性。
在一些实施方案中，受试者是终末期肾病(ESRD)患者、进行免疫抑制疗法的患者、AIDS患者、糖尿病患者、新生儿、移植患者、免疫系统机能失调的患者、老人、自身免疫性疾病患者、烧伤患者、癌症患者或急性护理环境下的患者。
如本文所述的方法可以与其它已知的治疗肾病的疗法组合施用。在一些实施方案中，组合物还包含至少一种治疗剂。例如，用本公开的组合物治疗的受试者还可以用血压药物、类固醇和/或免疫抑制剂治疗。治疗剂的实例包括血压药物(例如利尿剂(例如氯噻酮(chlorthalidone)、氯噻嗪(chlorothiazide)、利尿磺胺(furosemide)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、吲达帕胺(indapamide)、甲苯喹唑磺胺(metolazone)、盐酸阿米洛利(amiloride hydrochloride)、螺甾内酯(spironolactone)、氨苯蝶啶(triamterene)、布美他尼(bumetanide)或它们的组合)、α肾上腺素能拮抗剂(例如阿呋唑嗪(alfuzosin)、多沙唑嗪(doxazosin)、哌唑嗪(prazosin)、特拉唑嗪(terazosin)或坦洛新(tamsulosin)或者它们的组合)、中枢肾上腺素能抑制剂(例如可尼丁(clonidine)、胍法新(guanfacine)或甲基多巴(methyldopa)或者它们的组合)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂(例如贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(lisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)或群多普利(trandolapril)或者它们的组合)、血管紧张素II受体阻滞剂(例如坎地沙坦(candesartan)、依普沙坦(eprosartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、氯沙坦(losartan)、奥美沙坦(olmesartan)、替米沙坦(telmisartan)或缬沙坦(valsartan)或者它们的组合)、α阻滞剂(例如多沙唑嗪、哌唑嗪或特拉唑嗪或者它们的组合)、β阻滞剂(例如醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡替洛尔(carteolol)、美托洛尔(metoprolol)、纳多洛尔(nadolol)、奈必洛尔(nebivolol)、喷布洛尔(penbutolol)、吲哚洛尔(pindolol)、普萘洛尔(propranolol)、索洛托尔(solotol)或噻吗洛尔(timolol)或者它们的组合)、钙离子通道阻滞剂(例如氨氯地平(amlodipine)、苄普地尔(bepridil)、地尔硫卓(diltiazem)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼索地平(nisoldipine)或维拉帕米(verapamil)或者它们的组合)、血管扩张剂(例如肼苯哒嗪(hydralazine)或米诺地尔(minoxidil)或者它们的组合)和肾素抑制剂(例如阿利吉仑(aliskiren))或者它们的组合)、类固醇(例如皮质类固醇，例如可体松(cortisone)、泼尼松(prednisone)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)或泼尼松龙(prednisolone))或合成代谢类固醇(阿纳曲非(anatrofin)、阿纳昔瓦(anaxvar)、阿纳屈尔(annadrol)、勃拉睾酮(bolasterone)、癸酸达龙(decadiabolin)、癸酸诺龙(decadurabolin)、脱氢雄甾酮(dehydropiandrosterone，DHEA)、庚酸睾酮(delatestryl)、达尼波尔(dianiabol)、二氢龙(dihydrolone)、苯丙酸诺龙(durabolin)、美勃嗪(dymethazine)、伊诺维斯(enoltestovis)、双羟萘酸羟嗪(equipose)、γ羟基丁酸(gammahydroxybutyrate)、乙基雌烯醇(maxibolin)、美斯曲尔(methatriol)、甲基睾甾酮(methyltestosterone)、二乙胺苯丙酮(parabolin)、皮莫波啉(primobolin)、喹诺酮(quinolone)、塞拉波啉(therabolin)、曲佛波乐(trophobolene)和康力龙(winstrol))，或者免疫抑制剂，例如糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体或抗亲免素和/或霉酚酸酯(MMF)、FK-506、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、环磷酰胺、甲氨蝶呤、放线菌素D、抗胸腺细胞球蛋白(ATGAM)、莫罗单抗-CD3抗体(muromonoab-CD3 antibody)、巴息紫单抗(basilizimab)、达利珠单抗(daclizumab)、环孢菌素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、伏环孢素(voclosporin)、西罗莫司(sirolimus)、干扰素、英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、芬戈莫德(fingolimod)和/或多球壳菌素(myriocin))。在优选的实施方案中，组合物还包含以下中的至少一种：类固醇、苯海拉明(diphenhydramine)、扑热息痛(acetaminophen)、血压药物、免疫抑制剂或它们的组合。
本文还提供了治疗有需要的受试者的皮肤疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。在某些实施方案中，所述方法还包含非类固醇类消炎药(NSAID)。在其它实施方案中，NSAID可包括(但不限于)水杨酸酯、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、酮洛酸、萘普生、吡罗昔康、特丁非隆、布洛芬、依托度酸、萘布美酮、替尼达普、阿氯酚酸、安替比林、氨基比林、安乃近、氨基吡喃酮、苯基保泰松、氯非宗、羟保泰松、戊烯松、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、辛可芬、氯尼辛、地曲唑、依匹唑、非诺洛芬、夫洛非宁、氟灭酸、苷氨苯喹、吲哚洛芬、酮洛芬、洛索洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸、非那西汀、盐地磺胺、舒林酸、舒洛芬、托美丁、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物。
如本文所述的方法可以与其它已知的治疗皮肤疾病的疗法组合施用。在一些实施方案中，组合物还包含至少一种治疗剂。例如，用本公开的组合物治疗的受试者还可以用血压药物、类固醇和/或免疫抑制剂治疗。治疗剂的实例包括血压药物(例如利尿剂(例如氯噻酮、氯噻嗪、利尿磺胺、氢氯噻嗪、吲达帕胺、甲苯喹唑磺胺、盐酸阿米洛利、螺甾内酯、氨苯蝶啶、布美他尼或它们的组合)、α肾上腺素能拮抗剂(例如阿呋唑嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪或坦洛新或者它们的组合)、中枢肾上腺素能抑制剂(例如可尼丁、胍法新或甲基多巴或者它们的组合)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂(例如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利或群多普利或者它们的组合)、血管紧张素II受体阻滞剂(例如坎地沙坦、依普沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦、替米沙坦或缬沙坦或者它们的组合)、α阻滞剂(例如多沙唑嗪、哌唑嗪或特拉唑嗪或者它们的组合)、β阻滞剂(例如醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、卡替洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、奈必洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔、索洛托尔或噻吗洛尔或者它们的组合)、钙离子通道阻滞剂(例如氨氯地平、苄普地尔、地尔硫卓、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平或维拉帕米或者它们的组合)、血管扩张剂(例如肼苯哒嗪或米诺地尔或者它们的组合)和肾素抑制剂(例如阿利吉仑)或者它们的组合)、类固醇(例如皮质类固醇，例如可体松、泼尼松、甲基泼尼松龙或泼尼松龙)或合成代谢类固醇(阿纳曲非、阿纳昔瓦、阿纳屈尔、勃拉睾酮、癸酸达龙、癸酸诺龙、脱氢雄甾酮(DHEA)、庚酸睾酮、达尼波尔、二氢龙、苯丙酸诺龙、美勃嗪、伊诺维斯、双羟萘酸羟嗪、γ羟基丁酸、乙基雌烯醇、美斯曲尔、甲基睾甾酮、二乙胺苯丙酮、皮莫波啉、喹诺酮、塞拉波啉、曲佛波乐和康力龙)，或者免疫抑制剂，例如糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体或抗亲免素和/或霉酚酸酯(MMF)、FK-506、咪唑硫嘌呤、环磷酰胺、甲氨蝶呤、放线菌素D、抗胸腺细胞球蛋白(ATGAM)、莫罗单抗-CD3抗体、巴息紫单抗、达利珠单抗、环孢菌素、他克莫司、伏环孢素、西罗莫司、干扰素、英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、芬戈莫德和/或多球壳菌素)。在优选的实施方案中，组合物还包含以下中的至少一种：类固醇、苯海拉明、扑热息痛、血压药物、免疫抑制剂或它们的组合。具体地说，食品和药物管理局(FDA)已经批准利妥昔单抗与全身性类固醇组合用于治疗成人患者的肉芽肿性血管炎和显微镜下多血管炎。在优选的实施方案中，组合物还包含至少一种类固醇。
如本文中一般使用的术语“皮肤疾病”或“皮肤疾患”意指特定地引起皮肤损害的病症。皮肤疾病包括但不限于皮炎、接触性皮炎、湿疹、荨麻疹、红斑痤疮、皮肤中的疤痕性牛皮癣病变、牛皮癣、异位性皮炎、接触性过敏反应、粉刺、皮肤肌炎、寻常白斑病、寻常性鱼鳞癣、光过敏、婴儿血管瘤、寻常疣、牛皮癣、神经纤维瘤、大疱性表皮松解、异位性湿疹、食物过敏、肉芽肿性多血管炎(例如韦格纳肉芽肿(Wegener granulomatosis))、皮肤血管炎(例如急性出血性水肿、亨诺-许兰紫癜(Henoch-
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purpura)、过敏性血管炎)、原发性水疱病、皮肤肌炎、异位性皮炎(例如湿疹)、红斑狼疮或与针对表皮和真皮表皮交界中的多种结构支撑蛋白的自身抗体有关的原发性水疱病(例如自身免疫性大疱病)、寻常天疱疮和抗治疗性情况(例如落叶状天疱疮、与CD20+淋巴瘤相关的副肿瘤性天疱疮、大疱性类天疱疮、后天性大疱性表皮松解、粘膜类天疱疮)、难治性皮肤红斑狼疮、血栓性血小板减少性紫癜或它们的组合。
在一些实施方案中，如本文所述，有需要或公认有需要的受试者罹患皮肤疾病，包括例如皮炎、接触性皮炎、湿疹、荨麻疹、红斑痤疮、皮肤中的疤痕性牛皮癣病变、牛皮癣、异位性皮炎、接触性过敏反应、粉刺、皮肤肌炎、寻常白斑病、寻常性鱼鳞癣、光过敏、婴儿血管瘤、寻常疣、牛皮癣、神经纤维瘤、大疱性表皮松解、异位性湿疹、食物过敏、肉芽肿性多血管炎(例如韦格纳肉芽肿)、皮肤血管炎(例如急性出血性水肿、亨诺-许兰紫癜、过敏性血管炎)、原发性水疱病、皮肤肌炎、异位性皮炎(例如湿疹)、红斑狼疮或与针对表皮和真皮表皮交界中的多种结构支撑蛋白的自身抗体有关的原发性水疱病(例如自身免疫性大疱病)、寻常天疱疮和抗治疗性情况(例如落叶状天疱疮、与CD20+淋巴瘤相关的副肿瘤性天疱疮、大疱性类天疱疮、后天性大疱性表皮松解、粘膜类天疱疮)、难治性皮肤红斑狼疮、血栓性血小板减少性紫癜或它们的组合。
在其它实施方案中，皮肤疾病是肉芽肿性多血管炎(例如韦格纳肉芽肿)、皮肤血管炎(例如急性出血性水肿、亨诺-许兰紫癜、过敏性血管炎)、原发性水疱病、皮肤肌炎、异位性皮炎(例如湿疹)、红斑狼疮或与针对表皮和真皮表皮交界中的多种结构支撑蛋白的自身抗体有关的原发性水疱病(例如自身免疫性大疱病)、寻常天疱疮和抗治疗性情况(例如落叶状天疱疮、与CD20+淋巴瘤相关的副肿瘤性天疱疮、大疱性类天疱疮、后天性大疱性表皮松解、粘膜类天疱疮)、难治性皮肤红斑狼疮、血栓性血小板减少性紫癜或它们的组合。
在某些实施方案中，皮肤疾病是肉芽肿性血管炎，例如韦格纳肉芽肿或显微镜下多血管炎。肉芽肿性血管炎是一种可能致命的血管炎形式，其中例如存在抗体损害小血管壁和周围组织的免疫反应。在某些实施方案中，患肉芽肿性血管炎的患者罹患皮肤溃疡，例如摸得出的紫癜、结节、丘疹和水疱、坏疽性脓皮病、雷诺现象或它们的组合。
在某些其它实施方案中，皮肤疾病是皮肤血管炎。皮肤血管炎是一组病症，其中在皮肤中存在发炎的血管，例如毛细血管、小静脉、小动脉、淋巴管。皮肤血管炎的分类包括(但不限于)：毛细管炎，例如进行性色素性紫癜：毛细管炎的最常见形式、瘙痒性紫癜、色素性紫癜性苔癣样皮肤病、毛细血管扩张性环状紫癜、毛细管炎联合接触性变态反应、金黄色苔藓(lichen aureus)；小血管血管炎，例如特发性、药物或感染诱发的皮肤小血管血管炎(过敏性血管炎)、亨诺-许兰紫癜、急性婴儿出血性水肿、荨麻疹性血管炎、运动诱发的血管炎、持久隆起性红斑、恶性萎缩丘疹病(德戈斯病(degos))、冷球蛋白血症、复发性皮肤坏死性嗜酸性血管炎、ANCA相关的血管炎、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性血管炎/许尔-施特劳斯(Churg-Strauss)、肉芽肿性血管炎、淋巴瘤样肉芽肿病；中等血管血管炎、皮肤多发性结节性动脉炎、川崎氏病(Kawasaki disease)、结节性脉管炎；或大血管血管炎，例如颞动脉炎、高安病(Takayasu disease)、巨细胞性动脉炎。血管炎分类为III型过敏性反应，它涉及抗原抗体复合物，即结合于病变血管中的抗原的抗体。在其它实施方案中，皮肤疾病是异位性皮炎。异位性皮炎(湿疹)由多种免疫细胞与蛋白质之间的复杂的相互作用引起，并且在许多患者中特征是高水平的血清IgE。
人类免疫缺陷病毒(HIV)影响着免疫系统的特定细胞，称为CD4细胞或T细胞。随着时间的过去，HIV会破坏这些细胞，到了身体无法抗击感染和疾病的程度。已经有充分的证据证明HIV疾病的进展。未治疗的HIV几乎普遍致命，因为它最终压倒免疫系统，引起获得性免疫缺乏综合症(AIDS)。HIV治疗帮助处于疾病所有阶段的人，可以减缓或防止从一期进展到下一期。如本领域中已知的，HIV感染的临床征象和症状主要由以CD3和CD4抗原标记的淋巴细胞(CD4+T细胞)的重大损失引起。还公认的是AIDS中的传染物是HIV。在与病毒接触后的最初几周内的HIV感染症状的非限制性实例包括：发烧、头痛、喉咙痛、淋巴结肿大和皮疹。后面可能出现的另外的HIV感染症状包括：轻度感染、淋巴结肿大、腹泻、重量减轻、发烧、咳嗽和呼吸短促。HIV感染通常在约10年内进展至AIDS。到AIDS显现时，受试者的免疫系统已经遭到严重损害。HIV感染或AIDS的后期症状包括：夜汗淋漓、恶寒战栗或持续几个星期发烧超过38℃、咳嗽或呼吸短促、慢性腹泻、持续的白色斑或舌上或口腔中的罕见病变、头疼、无法解释的持续疲劳、视力模糊或斜视、重量减轻和皮疹或隆起。具有HIV感染或AIDS的受试者显现大量机会感染(例如细菌、病毒、真菌和原生动物感染)和癌症的风险也会增加。机会细菌感染的非限制性实例包括引起腹泻的细菌菌株(例如沙门氏菌属(Salmonellasp.)、弯曲杆菌属(Campylobacter sp.)、志贺氏菌属(Shigella sp.))、引起肺炎的细菌菌株(例如肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、肺炎霉浆菌属(Mycoplasma pneumonia)和肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae))、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。机会病毒感染的非限制性实例包括：巨细胞病毒(CMV)、C型肝炎、单纯疱疹病毒(口腔和生殖器疱疹)、带状疱疹病毒(shingles)、人乳头瘤病毒(HPV)、接触传染性软疣病毒(MCV)、埃-巴二氏病毒(EBV)和JC多瘤病毒。机会真菌感染的非限制性实例包括：曲霉属(Aspergillus)、白色念珠菌(Candida albicans)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、波萨达斯球孢子菌(Coccidioides posadasii)、新型隐球菌(Crytococcus neoformans)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。原生动物机会感染的非限制性实例包括：隐孢子虫属(Crytposporidium sp.)、贝氏等孢子球虫(Isospora belli)、微孢子虫属(Microsporidium sp.)(例如比氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi))、耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jiroveci)和弓形虫(Toxoplasma gondii)。具有HIV感染或AIDS的受试者显现癌症的风险也会增加，包括但限于：肛门发育不良或癌症、宫颈发育不良或癌症、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)和淋巴瘤。
如本文所用，术语“人类免疫缺陷病毒(HIV)感染”意指受试者中存在至少一种HIV病毒粒子，受试者中有可检测水平的HIV病毒粒子，或者受试者中存在HIV基因组核酸或有可检测水平的HIV基因组核酸。本领域中已知用于检测受试者中HIV病毒粒子或HIV基因组核酸的存在或水平的方法的非限制性实例。例如，本领域中已知用于检测或测量受试者中的HIV基因组核酸的水平的方法，例如逆转录酶聚合酶链式反应。本领域中还已知用于间接检测HIV病毒粒子的存在的方法，例如测量受试者中的抗HIV抗体滴度。关于人类免疫缺陷病毒(HIV)感染，“减少”是指数目、量或水平降低。例如，减少HIV病毒负荷是指所涉及的体液中HIV的量减少或降低。一般地，减少可以与起始数目、量或水平的初始值比较，但也可以与对照物或标准数目、量或水平比较。
在一些实施方案中，抑制CD4 T细胞的HIV感染的化合物包括例如进入抑制剂，例如第5型C-C趋化因子受体(CCR5)抑制剂、第4型C-X-X趋化因子受体(CXCR4)抑制剂、CD4抑制剂、gp120抑制剂和gp41抑制剂(例如恩夫韦肽(enfuvirtide))；和消炎药，例如羟氯奎(hydroxychloroquine)、氯喹(chloroquine)、PD-1抑制剂、I型干扰素、IL6、环加氧酶-2抑制剂、过氧化物酶体增殖物激活受体-c(PPAR-c)激动剂(例如吡咯列酮(pioglitazone)和来氟米特(leflunomide))、甲氨蝶呤、美沙拉嗪(mesalazine)和抗纤维化剂(例如血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂)。CCR5抑制剂的实例包括马拉维若(maraviroc)、阿拉韦罗(aplaviroc)和维瑞韦罗(vicriviroc)。其它进入抑制剂的实例包括TNX-355、PRO 140、BMS-488043、普乐沙福(plerixafor)、表没食子儿茶素没食子酸酯、抗gp120抗体(例如抗体b12)、格瑞弗森(griffithsin)、DCM205和设计锚蛋白重复蛋白(Designed Ankyrin RepeatProtein，DARPin)。HAART用于降低病毒显现抗性的可能性。用于HAART的化合物是众所周知的，包括例如以下药物的组合：两种或更多种核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)，核苷逆转录酶抑制剂例如替诺福韦(tenofovir)、恩曲他滨(emtricitabine)、叠氮胸苷(zidovudine，AZT)、拉米夫定(lamivudine，3TC)、阿巴卡韦(abacavir)和替诺福韦艾拉酚胺反丁烯二酸盐(tenofovir alafenamide fumarate)；以及一种或多种非核苷酸逆转录酶抑制剂(NNRTI)，例如依法韦仑(efavirenz)、利匹韦林(rilpivirine)和依曲韦林(etravirine)；整合酶抑制剂，例如拉替拉韦(raltegravir)和埃替拉韦(elvitegravir)；和/或蛋白酶抑制剂，例如瑞托那韦(ritonavir)、达芦那韦(darunavir)、阿扎那韦(atazanavir)、洛匹那韦(lopinavir)和考西司他(cobicistat)。最常用于治疗HIV感染的HAART药物包括核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂，例如替诺福韦、恩曲他滨和阿巴卡韦；和非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)，例如依法韦仑、奈韦拉平(nevirapine)或依曲韦林；蛋白酶抑制剂(PI)，例如阿扎那韦、瑞托那韦或达芦那韦；融合和进入抑制剂，例如恩夫韦肽和马拉维若；和整合酶抑制剂，例如拉替拉韦。在其它实施方案中，刺激潜伏HIV再活化的化合物包括例如组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，例如伏瑞斯特、泼米地辛(pomidepsin)、帕比司他、吉维司他(givinostat)、贝利司他、丙戊酸、CI-994、MS-275、BML-210、M344、NVP-LAQ824、莫塞替司他(mocetinostat)和长寿蛋白(sirtuin)抑制剂；NF-κB诱导剂，例如抗CD3/CD28抗体、肿瘤坏死因子α(TNFα)、罗斯左汀(prostratin)、离子霉素(ionomycin)、苔藓虫素-1(bryostatin-1)和皮克罗格(picolog)；组蛋白甲基转移酶(HMT)抑制剂，例如BIX-01294和毛壳素(chaetocin)；促细胞凋亡和细胞分化分子，例如JQ1、nutlin3、双硫仑(disulfiram)、阿非迪霉素(aphidicolin)、六亚甲基二乙酰胺(HMBA)、放线菌素D、阿柔比星(aclarubicin)、阿糖胞苷、Wnt小分子抑制剂和Notch抑制剂；免疫调节剂，例如抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体、抗TRIM-3抗体和BMS-936558；以及CD4 T细胞疫苗。还可以使用这类刺激剂的组合。一些刺激剂对HIV再活化的作用还可以通过与其它化合物组合来增强。
在其它实施方案中，“HIV感染症状”意指人类受试者中HIV感染或AIDS的可测量或可检测的任何身体表现。可以在医护专业人员检查身体期间检测一种或多种HIV感染症状。人中的HIV感染症状的非限制性实例包括：发烧、头疼、肌肉和关节疼痛、喉咙痛、皮疹、腹泻、淋巴结(例如颈部、腋窝或腹股沟淋巴结)肿大、盗汗、食欲不振、疲劳、重量减轻、干咳、呼吸短促、抑郁、周围神经病、意识模糊、意识水平变化、舌上或口腔中病变、视力模糊或斜视或者它们的组合。在某些实施方案中，“HIV感染症状”还包括受试者中呈现出一种或多种机会感染，例如细菌、病毒、真菌和/或寄生虫感染。通常在具有健康的免疫系统的人类受试者，例如免疫活性受试者中没有观察到机会感染。机会感染的非限制性实例包括：巨细胞病毒(CMV)感染、卡氏肺囊虫病(Pneumocystis carinii pneumonia，PCP)(耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jirovecii))、结核分枝杆菌感染、复发性肺炎、念珠菌病感染(鹅口疮)、球虫病、隐球菌病、单纯疱疹病毒感染(例如单纯疱疹病毒-1感染)、沙门氏菌感染、志贺氏菌感染、李斯特菌(Listeria)感染、弯曲杆菌(Campylobacter)感染、隐孢子虫病、微粒子病、鸟型分枝杆菌复合体(MAC或MAI)、星状病毒(astorvirus)、组织胞浆菌病、等孢子球虫病、腺病毒感染、轮状病毒感染、艰难梭菌(Clostridium difficile)感染、弓形体病(弓形虫)、新型隐球菌感染、马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffei)感染或它们的组合。
在一些实施方案中，包括包含至少一种治疗性生物制剂或其盐的多个颗粒的组合物的施用减少了具有HIV感染或AIDS的受试者中的机会感染，或者降低了具有HIV感染或AIDS的受试者中显现机会感染的风险。举例来说，本文所述的方法可以显著降低具有HIV感染或AIDS的具有这类机会感染的受试者中机会细菌、真菌、病毒或寄生虫感染，例如本文所述的任一种示例机会细菌、真菌、病毒或寄生虫感染的一种或多种症状的数目或严重度、频率或持续时间。在其它实施方案中，例如与具有HIV感染或AIDS并且未接受治疗或接受另一种治疗形式的受试者或一组受试者相比，本文所述的方法降低具有HIV感染或AIDS并且不具有机会细菌、病毒、真菌或寄生虫感染的受试者中显现机会细菌、病毒、真菌或寄生虫感染，例如本文所述的任一种示例性机会细菌、真菌、病毒或寄生虫感染的风险。在其它实施方案中，例如与具有HIV感染或AIDS并且未接受治疗或接受另一种治疗形式的受试者或一组受试者相比，本文所述的方法降低具有HIV感染或AIDS的受试者中显现癌症，例如本文所述的任一种示例性癌症的风险。在某些其它实施方案中，组合物的施用引起受试者中的HIV滴度降低，显著的或可检测的降低，例如降低至少约5％、10％、15％、20％、25％或约30％，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐。
药物组合物
在某些实施方案中，本公开涉及一种组合物，例如药物组合物，所述组合物包含悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含任一种上述治疗性生物制剂。
在一方面，本公开提供了一种组合物，例如药学上有效的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
患者，包括但不限于人，可以通过向患者施用有效量的药物组合物来治疗，所述药物组合物包含在药学上可接受的液体载体或稀释剂存在下的活性治疗性生物制剂或其药学上可接受的前药或盐。活性物质可以通过任何适当的途径，例如肠胃外、皮内或皮下呈液体形式施用。肠胃外剂型旨在注射施用。常见的注射类型是静脉内静脉内(注射到静脉中)、皮下的(在皮肤下注射)和肌内(注射到肌肉中)。输注通常通过静脉内途径给与。
组合物中的活性治疗性生物制剂的浓度将取决于药物的吸收、失活和排泄率以及本领域的技术人员已知的其它因素。应当注意，剂量值还随有待减轻的疾患的严重度和可能的与抗逆转录病毒药物的药物-药物相互作用而变。还了解，对于任何特定的受试者，具体的给药方案应随时间根据个人的需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断进行调整，并且本文中阐述的浓度范围只是示例性的，并非旨在限制所要求的组合物的范围或实践。活性成分可以立刻施用，或者可以分成许多个较小的剂量，以变化的时间间隔施用。
治疗性生物制剂或其药学上可接受的前药或盐还可以与其它的不削弱所需作用的添加剂或活性物质或者与补充所需作用的物质(例如抗生素、抗真菌剂、消炎药或其它抗病毒剂，包括但不限于核苷化合物)混合。本文中用于皮内或皮下应用的溶液、悬浮液或组合物可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它的合成溶液；抗菌剂，例如苄醇或尼泊金甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐或它们的组合；以及用于调整张性的试剂，例如氯化钠或右旋糖；或它们的组合。肠胃外制剂可以装入由玻璃或塑料等制成的一次性的注射器或药筒中。在某些实施方案中，组合物从预灌封注射器中分配。
本公开的组合物和方法可以用于治疗有需要的受试者。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如人或非人哺乳动物。当向哺乳动物如人施用时，组合物优选作为包含例如本公开的组合物和药学上可接受的液体载体的药物组合物施用。本领域中已知药学上可接受的液体载体，包括例如水溶液，例如水或生理缓冲盐水；或其它溶剂或媒介物，例如二醇、甘油、油类(例如橄榄油)或可注射有机酯。在优选的实施方案中，当这类药物组合物用于人施用，例如用于肠胃外施用时，水溶液是无热原的，或基本上无热原的。在某些优选的实施方案中，药学上可接受的液体载体是非水的。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体可以含有生理学上可接受的试剂，这些试剂例如用以稳定或增加本公开的治疗性生物制剂的吸收。这类生理学上可接受的试剂包括例如碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖、海藻糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；或其它的稳定剂或赋形剂。包括生理学上可接受的试剂在内的药学上可接受的载体的选择取决于例如组合物的施用途径。在优选的实施方案中，组合物通过皮下注射器注射施用。
本文中短语“药学上可接受的”用以指在合理的医学判断范围内，适合与人和动物的组织接触使用，没有过度毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的那些治疗性生物制剂、物质、组合物和/或剂型。术语“药学上可接受的”可指当酌情向哺乳动物如人施用时不会产生不利的、过敏的或其它的不良反应的治疗性生物制剂和组合物。根据本公开，本领域技术人员已知包含抗体或另外的活性成分的药物组合物的制备。此外，对于哺乳动物，例人施用，应了解，制剂应该符合FDA生物标准办公室(Officeof Biological Standards)要求的无菌性、产热原性、一般安全性和纯度标准。
如本文所用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的物质、组合物或媒介物，例如液体、稀释剂、赋形剂或溶剂。每种载体必须在与组合物的其它成分相容的意义上是“可接受的”，并且对患者无害。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和它的衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)用于药物组合物中的其它的无毒相容物质。本领域技术人员可以用惰性材料稀释治疗性生物制剂或增加它的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，特别是海藻糖、甘露糖醇、a-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐还可以用作填充剂，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些市售稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-Rx 1500、Emcompress和Avicell。术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有的水溶剂(例如水、醇溶液/水溶液、盐水溶液、肠胃外媒介物，例如氯化钠、林格氏右旋糖等)、非水溶剂(例如丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯)、分散介质、涂层、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂或抗真菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、药物、药物稳定剂、凝胶剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、液体和营养素补充剂、象这类的材料和它们的组合，如本领域的一般技术人员所知。根据众所周知的参数调整pH值和药物组合物中的多种组分的确切浓度。
在一些实施方案中，用于肠胃外施用的药物组合物或制剂包括呈水溶性形式的活性治疗性生物制剂的水溶液。优选地，活性治疗性生物制剂的悬浮液可以制备成适当的油性注射组合物。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(例如芝麻油、玉米油)或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。任选地，组合物还可以含有合适的稳定剂或增加治疗性生物制剂的溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。药物组合物还可以包括含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、它们合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。可以通过在分散液情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等来预防微生物的作用。在某些情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。
合适的缓冲剂包括：乙酸和盐(1-2％w/v)；柠檬酸和盐(1-3％w/v)；硼酸和盐(0.5-2.5％)w/v)；或磷酸和盐(0.8-2％>w/v)。合适的防腐剂包括氯化苯甲烃铵(0.003-0.03％)w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；尼泊金酯(0.01-0.25％w/v)或硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。
如本文公开的药物组合物，例如制剂，可以通过包括例如以下的许多施用途径中的任一种施用于受试者：肠胃外(包括肌内、静脉内、皮下或鞘内，呈例如无菌溶液或悬浮液)；腹膜内；或皮下。在一些实施方案中，组合物通过肠胃外、皮下、经口、表皮、皮内、肌内、动脉间、腹膜内或静脉内注射施用。在某些实施方案中，组合物可以完全悬浮在非水液体载体中。适当施用途径和适合于适当施用途径的组合物的细节可见于例如美国专利No.6,110,973；5,763,493；5,731,000；5,541,231；5,427,798；5,358,970和4,172,896以及其中引用的专利中。如本文公开的术语“药物组合物”或“制剂”是指例如当向受试者施用时为了使组合物中的治疗性生物制剂有效而呈这类形式并且不含对组合物或制剂将施用的受试者具有不可接受的毒性的额外组分的制剂。这类组合物或制剂是无菌的。“无菌”组合物或制剂是无病菌的，或者不含所有活的微生物和它们的孢子。
组合物宜呈单位剂型呈现，并且可以通过制药领域众所周知的任何方法制备。可以与液体载体物质组合以产生单个剂型的活性成分的量将视治疗的宿主和特定的施用模式而变化。可以与载体物质组合以产生单个剂型的活性成分的量一般是产生治疗作用的治疗性生物制剂的量。一般地，百分之一百中，该量将在约1％至约99％活性成分，优选地约50％至约99％，最优选地约70％至约98％的范围内。
在本公开的一些实施方案中，适用于本公开的组合物可以肠胃外，尤其是皮下施用。
有效量的组合物可以每日以单个剂量施用，或者在一天内以分剂量(fractionaldose)施用，例如一天两至三次。举例来说，根据本公开的组合物的施用可以按例如一天3次或更多次的速率，一般在至少一周、2周、3周、4周或甚至4至15周的长时间内进行，任选地包含一个或多个停药期或在停药期之后重复。在一些实施方案中，组合物一天施用一次或多次，例如一天1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或更多次。在其它实施方案中，组合物施用约1至约31天，例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天。在某些实施方案中，组合物施用至少1天。在其它实施方案中，组合物施用一周或多周，例如1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或更多周。在其它实施方案中，组合物施用一个月或多个月，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个或更多个月。
在某些实施方案中，治疗性生物制剂的施用剂量可以是每天约1mg至约1,500mg、每天约5mg至约1,300mg、每天约10mg至约900mg、每天约20mg至约600mg、每天约40mg至约300mg、每天约150mg至约350mg、每天约40至约150mg、每天约25mg至约150mg、每天约2.5mg至约150mg、每天约20mg至约80mg或每天约1mg至约30mg。在其它实施方案中，治疗性生物制剂的施用剂量可以是约1,300毫克/天、约900毫克/天、约600毫克/天、约350毫克/天、约300毫克/天、约250毫克/天、约200毫克/天、约150毫克/天、约80毫克/天、约75毫克/天、约60毫克/天、约40毫克/天、约30毫克/天、约20毫克/天、约15毫克/天、约10毫克/天、约5毫克/天或约2.5毫克/天。在一些实施方案中，治疗性生物制剂的施用剂量是每天约10g至约1000mg。
在其它实施方案中，对于人受试者，根据治疗性生物制剂测量的日剂量将为每天约0.01mg/kg至每天约1500mg/kg。可以根据施用，适当地调整剂量以实现局部或全身所需的药物水平。例如，预期与IV输注相比，每天皮下施用的剂量将高一个数量级至几个数量级。如果在这类剂量下受试者中的反应不足，则在患者耐受性允许的程度上可以采用甚至更高的剂量(或通过更局部的递送途径，递送更有效的更高的剂量)。可以考虑每天多剂量以实现治疗性生物制剂适当的全身水平。
对于本文所述的任何治疗性生物制剂组合物，最初可根据动物模型确定治疗有效量。还可以从已经在人中测试的本公开的治疗性生物制剂和已知表现出相似的药理学活性的治疗性生物制剂(例如其它相关的活性剂)的人类数据中确定治疗有效剂量。肠胃外施用可能需要更高的剂量。可以基于相对生物利用率和所施用的治疗性生物制剂的效力调整施加的剂量。基于组合物和上述方法和本领域中众所周知的其它方法调整剂量以实现最大功效，并且在一般技术者的能力范围内。
为了帮助治疗性生物制剂溶解于水相环境中，可以添加表面活性剂作为添加剂。表面活性剂可以包括阴离子洗涤剂，例如十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯钠或磺酸二辛酯钠。可以使用阳离子洗涤剂并且可包括氯化苯甲烃铵或氯化苄乙氧铵。可以作为表面活性剂包括在组合物中的潜在非离子型洗涤剂包括聚桂醇(lauromacrogol)400、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧化乙烯氢化蓖麻油10、聚氧化乙烯氢化蓖麻油50和聚氧化乙烯氢化蓖麻油60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、聚山梨酸酯65和聚山梨酸酯80、蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素或羧甲基纤维素。这些表面活性剂可以单独或作为不同比率的混合物存在于本公开的治疗性生物制剂或衍生物的组合物中。
本公开包括在本公开的方法中使用治疗性生物制剂的药学上可接受的盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”包括衍生自无机酸或有机酸的盐，所述无机酸或有机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、磷酸、甲酸、乙酸、乳酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、琥珀酸、酒石酸、乙醇酸、水杨酸、柠檬酸、甲烷磺酸、苯磺酸、苯甲酸、丙二酸、三氟乙酸、三氯乙酸、萘-2-磺酸或其它酸。在一些实施方案中，药学上可接受的盐形式可以包括其中构成盐的分子的比率不是1:1的形式。举例来说，盐可以每分子碱包含超过一个无机酸或有机酸分子，例如每分子治疗性生物制剂两个盐酸分子。再举例来说，盐可以每分子碱包含少于一个无机酸或有机酸分子，例如每分子酒石酸两分子治疗性生物制剂。
在某些实施方案中，本公开涵盖的盐包括(但不限于)精氨酸、苯乙苄胺、苯乍生(benenthamine)、甜菜碱、氢氧化钙、胆碱、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙基氨基)乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、哈胺(hydrabamine)、1H-咪唑、L-赖氨酸、镁、4-(2-羟乙基)吗啉、哌嗪、钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、钠、三乙醇胺、缓血酸胺或锌盐。在其它实施方案中，本公开涵盖的盐包括(但不限于)Na、Ca、K、Mg、Zn或其它的金属盐。在其它实施方案中，本公开涵盖的盐包括(但不限于)烷基、二烷基、三烷基或四烷基铵盐。药学上可接受的盐还可以呈例如与水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等的多种溶剂化物形式存在。还可以制备这类溶剂化物的混合物。这类溶剂化物的来源可以来自于结晶溶剂，是制备或结晶的溶剂中固有的，或外加到这类溶剂的。
在其它实施方案中，蛋白质组合物可以被配制成中性或盐形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)并且用比如盐酸或磷酸的无机酸或比如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等有机酸形成。与游离羧基形成的盐还可以衍生自比如钠、钾、铵、钙或氢氧化铁的无机碱，和比如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因(procaine)等有机碱。
如本领域技术人员所理解的，本公开的组合物在施用于受试者后没有副作用的话，可以每天施用于受试者。
本文描述了本公开的优选实施方案。当然，本领域的一般技术人员在阅读以上描述后将显而易见那些优选实施方案的变化、改变、修改和同等方案的替代。本发明人预期熟练技术人员酌情采用这类变化、改变、修改和同等方案的替代，并且本发明人意图本发明以除本文特别描述外的方式实施。本领域技术人员将容易识别多个非关键参数，这些参数可改变、变化或修改，得到基本上相似的结果。因此，本公开包括随附权利要求书中叙述的主题物质的为适用法律所允许的所有修改和同等物。此外，除非本文中另外指示或上下文另外明显相矛盾，否则本公开涵盖上述要素呈它们的所有可能变体的任何组合。
同时本公开的每一要素在本文中描述为含有多个实施方案。应理解，除非另外指示，否则本公开所给出的要素的每一个实施方案都能够和本公开的其它要素的每一个实施方案一起使用，并且每一个这样的使用均意图形成本公开的不同的实施方案。
相关领域的一般技术人员将理解，一般技术者已知的信息，容易从本文中含有的本公开的描述显而易见本文所述的组合物和方法的其它合适的修改和改编，并且可以在不脱离本公开或它的任何实施方案的范围下进行。
定义
为了本公开，除非另外明确地陈述，将使用以下定义：
除非本文中另外指示或与上下文明显相矛盾，否则在描述本公开的上下文中使用的术语“一(a/an)”、“所述”和类似的指示物将被视为涵盖单数和复数。除非本文中另外指示或与上下文另外明显相矛盾，否则本文所述的所有组合物和方法均可按任何合适的顺序进行。除非另外要求，否则关于本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“例如”)的使用只是为了更好地说明本公开，而不是对本公开的范围施加限制。本说明书中的语言不应被视作指示任何未要求的要素是实施本公开必不可少的。
关于所给出的数值，例如温度和时间段的术语“约”意味着包括在指定值10％内的数值。
如本文所用，术语“施用”意指组合物实际经身体引入到受试者中或上(酌情)。根据本公开，涵盖将组合物引入到受试者中的任何和所有方法；所述方法不依赖于任何特定的引入方式并且不应该如此解读。本领域技术人员已知引入方式，并且本文中还例示出这些方式。
如本文所用，“氨基酸”或“残基”是指本领域中已知的任何天然或非天然存在的氨基酸、任何氨基酸衍生物或任何氨基酸模拟物。包括相应氨基酸的L-形式以及D-形式，不过L-形式通常优选。在一些实施方案中，该术语涉及20种天然存在的氨基酸中的任一种：甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、谷氨酰胺(Gin)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)，呈它们的L-形式。在某些实施方案中，氨基酸侧链可以是Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cys、Ser、Thr、Trp、Phe、Lys、Arg、His、Tyr、Asn、Gln、Asp、Glu或Pro的侧链。
如本文所用，除非上下文另外要求，否则术语“包含(comprise)”和该术语的变体如“包含(comprising/comprises/comprised)”不意图排除其它的添加剂、组分、整数或步骤。术语“包括”和“包含”可互换使用。如本文所用，短语“选自由……组成的组”、“选自”等包括指定物质的混合物。在本文中陈述数字界限或范围的情况下，包括终点。并且，明确地包括数字界限或范围内的所有值和子范围，好像明确地写出一样。除非明确地陈述，否则以单数提及要素并不意味着“一个且只有一个”，而是指“一个或多个”。除非另外明确地陈述，否则例如“一些”的术语是指一个或多个，并且例如“一”和“所述”的单数术语是指一个或多个。
如本文所用，术语“有效量”、“有效剂量”、“充足量”、“有效……的量”、“治疗有效量”、“药学上有效量”或它们在语法上的同等物意指一种剂量，它足以产生所需结果，改善或以一些方式减少症状，或停止或逆转疾患进展，并且提供临床医师或其它的合格观察员注意到的症状在主观上的减轻或客观上可鉴定的改善。通过施用本文所述的药物组合物改善特定疾患的症状是指与药物组合物的施用有关的任何减轻，无论永久还是临时、持续还是短暂。如上所述，“有效量”是指足以实现所需生物效应的任何量。结合本文提供的教授内容，通过挑选多种活性治疗性生物制剂和加权因子如效力、相对生物利用率、患者体重、不良副作用的严重程度和优选的施用模式，可以计划有效的预防性或治疗性治疗方案，该方案不会引起大的有害毒性，而是有效治疗特定的受试者。用于任何特定应用的有效量可以根据比如治疗的疾病或疾患、施用的本公开的特定治疗性生物制剂、受试者体型或者疾病或疾患的严重度的因素变化。本领域的一般技术人员可以凭经验确定本公开的特定治疗性生物制剂和/或其它的治疗剂的有效量，不需要进行过度的实验。一般优选使用最大剂量，即根据一些医学判断最高的安全剂量。可以考虑每天多剂量以实现治疗性生物制剂适当的全身水平。适当的全身水平可以通过例如测量患者的药物峰值或持续血浆水平来确定。“剂量(Dose)”和“剂量(dosage)”可互换使用。术语“剂量(dose)”或“剂量(dosage)”是指适用于受试者中的物理离散单元，每个单元含有预定量的治疗性组合物，所述量是通过结合它的施用(即，适当途径和治疗方案)进行计算以产生上文所论述的所需反应获得的。根据治疗次数和剂量施用的量取决于所需作用。向患者或受试者施用的本发明的实施方案的组合物的实际剂量可以由物理和生理学因素，例如受试者的体重、年龄、健康和性别、治疗的疾病类型、疾病渗透程度、先前的或同时进行的治疗介入、患者的特发病、施用途径以及特定治疗物质的效力、稳定性和毒性决定。举例来说，剂量还可包含每次施用约1μg/kg/体重至约1000mg/kg/体重(这一范围包括介于其间的剂量)或更多，以及其中可衍生的任何范围。在从本文中列出的数目衍生的范围的非限制性实例中，可以施用约5μg/kg/体重至约100mg/kg/体重、约5μg/kg/体重至约500mg/kg/体重等的范围。无论如何，负责施用的开业医师将决定组合物中活性成分的浓度和适于个别受试者的剂量。
术语“寡肽”用于指与多肽或蛋白质相对比具有更少的氨基酸成员的肽。本文所述的寡肽典型地由约两个至约四十个氨基酸残基构成。寡肽包括二肽(两个氨基酸)、三肽(三个氨基酸)、四肽(四个氨基酸)、五肽(五个氨基酸)、六肽(六个氨基酸)、七肽(七个氨基酸)、八肽(八个氨基酸)、九肽(九个氨基酸)、十肽(十个氨基酸)、十一肽(十一个氨基酸)、十二肽(十二个氨基酸)、二十肽(二十个氨基酸)、三十肽(三十个氨基酸)、四十肽(四十个氨基酸)等。寡肽还可以根据分子结构分类：铜绿菌素类(aeruginosins)、氰肽素类(cyanopeptolin)、微囊藻素类(microcystin)、、微绿木霉素类(microviridin)、微球肽类(microginin)、鱼腥藻肽类(anabaenopeptin)和环酰胺类(cyclamide)等。同源寡肽是包含相同氨基酸的寡肽。在优选的实施方案中，同源寡肽包含10个氨基酸的聚缬氨酸、聚丙氨酸和聚甘氨酸六聚体。
术语“肽”的含义被定义为两个或更多个氨基酸通过一个的羧基与另一个的氨基连接的小蛋白质。因此，在基本水平上，任何类型的肽合成都包括彼此添加氨基酸或肽分子或向现有的肽链中添加氨基酸或肽分子的重复步骤。术语“肽”一般具有约2个至约100个氨基酸，而多肽或蛋白质具有约100个或更多个氨基酸，一直到可从基因翻译的全长序列。另外，如本文所用，肽可以是多肽或蛋白质的子序列或部分。在某些实施方案中，肽由4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个或100个氨基酸残基组成。在优选的实施方案中，肽的长度在约30个至约100个氨基酸之间。在一些实施方案中，肽的长度在约40个至约100个氨基酸之间。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指当施用于受试者(优选人受试者)时是生理上可耐受的并且通常不产生过敏或类似的不良反应的组合物。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的管理机构批准或在美国药典或其它公认的药典中列出用于动物，更具体地说用于人。
如本文所用，“预防”病症或疾患的治疗剂是指在统计样本中，相对于未治疗的对照样本，减少所治疗样本中病症或疾患的发生，或相对于未治疗的对照样本，延迟病症或疾患发作或降低其一种或多种症状的严重度的治疗性生物制剂。
如本文所用，术语“前药”旨在涵盖在生理条件下转化成本公开的治疗活性生物制剂的治疗性生物制剂。制备前药的常用方法是包括一个或多个在生理条件下水解以展现所需分子的选定部分。在其它实施方案中，通过宿主动物的酶活性转化前药。例如，酯或碳酸酯(例如，醇或羧酸的酯或碳酸酯)是本公开的优选前药。在某些实施方案中，上文表示的组合物中的一些或所有分子可以用相应的合适前药替代，例如其中母体分子中的羟基以酯或碳酸酯形式呈现，或者母体治疗性生物制剂中存在的羧酸以酯的形式呈现。
术语“蛋白质”的含义被定义为由约20种不同氨基酸构建的线型聚合物。蛋白质中氨基酸的类型和序列由产生它们的DNA决定。在某些实施方案中，序列可以是天然的和非天然的。氨基酸的序列决定蛋白质的整体结构和功能。在一些实施方案中，蛋白质可含有50个或更多个残基。在优选的实施方案中，蛋白质的长度可含有超过约101个残基。蛋白质的净电荷可由两个因素决定：1)酸性氨基酸对比碱性氨基酸的总计数；和2)暴露正或负残基的特定溶剂pH环境。如本文所用，“带净正电荷或净负电荷的蛋白质”是在非变性pH环境下具有净正电荷或净负电荷的蛋白质。一般来说，本领域技术人员将会认识到，所有的蛋白质不管它们的氨基酸组成如何，取决于它们的pH和/或溶剂环境，都可以被认为是“带净负电荷的蛋白质”。例如，取决于溶剂pH，不同的溶剂可暴露负侧链或正侧链。蛋白质或肽优选地选自任何类型的酶或抗体或者它们的显示出与相应的酶或抗体基本上相同的活性的片段。蛋白质或肽可作为结构性物质(例如角蛋白)、作为酶、作为激素、作为转运蛋白(例如血红蛋白)、作为抗体或作为基因表达的调节剂。蛋白质或肽是细胞、组织和器官的结构、功能和调节所需的。
如本文所用的术语“基本上不含”是指大多数或大部分，如至少约51％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％、99.99％或至少约99.999％或更多。
术语“治疗”是领域中公认，包括向宿主施用一种或多种主题组合物，例如以减弱、改善或稳定现有的有害疾患或它的副作用。
应理解，所公开的方法或过程中的步骤的具体顺序或层次是示例性方法的说明。基于设计偏好，应理解，可以重新安排方法或过程中的步骤的具体顺序或层次。一些步骤可以同时进行。其它的步骤可在开/关时间段连续或间歇地进行，例如以规则的或不规则的时间间隔进行，并且时间段的持续时间和/或它们之间的配给量可以按照结构化或非结构化方式变化。所附方法权利要求以样品顺序呈现各步骤的要素，并不旨在限于所呈现的具体层次或顺序。例如“实施方案”的短语并不意味着这种实施方案适用于主题技术的所有配置。与实施方案有关的公开内容可适用于所有实施方案或者一个或多个实施方案。例如实施方案的短语可以指一个或多个实施方案，反之亦然。
本公开的方法
在包含治疗性生物制剂如mAb的治疗性组合物进行临床应用时，一般宜制备适合于所需应用的药物或治疗性组合物。在某些实施方案中，举例来说，药物组合物可包含至少约0.1％的活性治疗性生物制剂。在其它实施方案中，活性治疗性生物制剂可占单元重量的约2％至约99％或例如约50％至约99％，和其中可衍生的任何范围。
在大分子生物制剂如mAb下，溶解状态下分子间的相互作用会导致蛋白质不稳定性和高粘度。高粘度会使得难以处理和注射药物组合物。蛋白质不稳定性可减少有效剂量，使蛋白质少于治疗上有用的剂量，并且会形成聚集体，伤害患者。
如本文所述，基于微粒的组合物或悬浮液制剂可直接解决当前皮下递送治疗性生物制剂(例如mAb、蛋白质)的挑战，它是通过使治疗性生物制剂能够达到高浓度(>400mg/mL)，同时维持可注射，例如可注射的格式与极好的mAb或蛋白质稳定性。术语“颗粒”和“微粒”在本文中在最广泛的意义上可互换使用。在一些实施方案中，固体微粒限制了分子间的引起水性组合物中的高粘度和不稳定性的相互作用。在其它实施方案中，颗粒悬浮在液体载体媒介物中以防止溶解，直到注射。本文所述的组合物可被填充在预灌封注射器或注射装置格式，例如无针注射，消除了复杂的易于出错的复原程序的必要。本文所述的组合物中颗粒的高度分散性容易通过轻轻地摇动而再悬浮，这使得皮下注射对患者友好。在皮下空间内，包含本文所述的颗粒的治疗性生物制剂在注射后容易回到其原始的单体状态，实现了完全生物利用率。在优选的实施方案中，组合物不会损害治疗性生物制剂的质量并实现了较高的负荷，因此允许治疗性生物制剂如mAb通过皮下注射在预灌封注射器中递送。
本文提供了可用于治疗有需要的受试者的疾病或疾患的组合物和方法，所述方法包括向受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；其中颗粒具有少于约10％的治疗性生物制剂的聚集；并且组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约20mg/mL至约700mg/mL。
在一些实施方案中，疾病或疾患是癌症。在其它实施方案中，疾病或疾患是炎性疾病或疾患。在某些实施方案中，疾病或疾患是免疫性疾病。在某些其它实施方案中，疾病或疾患是肾病。在其它实施方案中，疾病或疾患是皮肤疾病或疾患。在其它实施方案中，疾病或疾患是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
粘度在可注射产品的处理和施用中起到重要的作用。对于悬浮液产品，高粘度会阻止悬浮液沉降，然而，药品可能难以通过27规格针递送，因为致动注射装置如注射器要花费更大的力。或者，使用更宽的针或需要更长的注射时间，这会降低患者对疗法的依从性。
粒度和分散性也影响注射能力，例如可注射性。常常建议颗粒比针的内径小至少3-10倍。即使一小部分的颗粒群大于针的内径，它们也会堵塞针，导致整剂被浪费掉。如本文所述，悬浮中的包含至少一种治疗性生物制剂的多个颗粒可在较高的浓度下实现较低的粘度。在一些实施方案中，如本文所述的多个颗粒可实现超过90％的蛋白质负荷，同时维持蛋白质的稳定性。本文所述的组合物包含在低于约100mPa·s下浓度为约400mg/mL的治疗性生物制剂，能够在不损害结构和功能生物活性下皮下递送治疗性生物制剂，例如蛋白质、mAb、药物组合物。
本文所述的颗粒是离散的，呈球状，并且分散性可控，特征尺寸在亚微米至几十微米范围内的，与例如在常规的冻干过程中通常产生的多孔单块“饼状物”形成对比。这种形态通常允许粉末在不进行后加工的情况下可流动(如低豪斯纳比(Hausner ratio)所描述)。
在一些实施方案中，颗粒的直径为约0.1至约1000μm，例如约1至约400μm、约1至约200μm、约1至约100μm、约1至约50μm、约1至约25μm、约1至约10μm、约10至约100μm、约50至约100μm、约50至约75μm或约75至约100μm。在其它实施方案中，颗粒的直径为约1至约100μm，例如约4至约100μm、约10至约100μm或约20至约50μm。
在某些实施方案中，颗粒可包括一种或多种剂，例如治疗性生物制剂。在其它实施方案中，颗粒的直径可为约0.1至约1000μm，例如约0.1至约90μm、约90至约230μm或约0.1至约1μm。在其它实施方案中，颗粒的粒度分散性可为约0至约0.9，例如约0至约0.7、约0至约0.5或约0至约0.2。测量粒度和分布的方法包括流式细胞术成像和对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面积来计算平均球半径或直径。
在一些实施方案中，颗粒的球形度可在约0.1至约1的范围内，例如至少约0.2、约0.4、约0.6或约0.8。测量颗粒球形度的方法包括对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面形状来计算平均圆度。可以扩展这类圆度因子以确认相应的球形度。
在其它实施方案中，颗粒具有小于约20％的治疗性生物制剂的聚集或小于约20％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在一些实施方案中，颗粒具有小于约10％的治疗性生物制剂的聚集或小于约10％的治疗性生物制剂的片段化，例如小于约9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，颗粒具有约3％至约1％的治疗性生物制剂的聚集。在某些其它实施方案中，颗粒具有约1％至约0.5％的治疗性生物制剂的聚集。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何聚集。在其它实施方案中，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的任何片段化。适于测量生物制剂的聚集和片段化的方法可通过使用尺寸排阻色谱法(SEC)来完成。
在一些实施方案中，与颗粒形成之前的治疗性生物剂相比，颗粒形成的过程在治疗性生物剂(例如，抗体或抗体片段)群体中提供小于约50％的电荷变体的变化(例如，小于约40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％或1％)。电荷变体可以是酸性的、碱性的或中性的，并且变化可以是由末端氨基酸的翻译后修饰引起的，如天冬酰胺脱酰胺或赖氨酸糖基化。例如，电荷变体包括通过失去C端赖氨酸残基而失去正电荷、两个赖氨酸残基的胺部分通过还原糖共价键合、或通过N端谷氨酰胺的环化使N端胺转化为中性酰胺。蛋白质(例如，抗体)上的负电荷可通过经由脱酰胺反应使天冬酰胺残基转化为天冬氨酸和/或异天冬氨酸残基而出现。
测量电荷变体的示例性方法包括阳离子交换色谱法(CIEX)，其中通过将对应于变体，如酸性、碱性或中性群体的峰下面积除以样品光谱中的所有峰下面所含有的累积面积来对变体进行定量。两个样品(例如，样品A和样品B)之间的电荷变体群体百分比的变化被计算为相应群体变体百分比的数值差，即通过从样品A的特定变体(例如，酸性)百分比中减去样品B的特定变体(例如，酸性)百分比，或者反过来。在某些实施方案中，可以类似地对群体内的所有变体扩展分析。
在某些实施方案中，与颗粒形成之前的起始治疗性生物制剂相比，颗粒具有小于约50％的治疗性生物制剂的电荷变体的变化，例如小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在优选的实施方案中，与颗粒形成之前的起始治疗性生物制剂相比，颗粒基本上没有治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。适于测量治疗性生物制剂的电荷变体的变化的方法可通过使用阳离子交换色谱法(CIEX)来完成。
根据本公开的颗粒是圆形的。圆形度可用作颗粒形状的指示。本文所述的颗粒可具有特征圆形度，例如具有基本上为圆形的相对形状。这一特征是基于颗粒的圆形度描述的并限定其形式。当颗粒具有完全圆形的结构时，圆形度是1.0。如本文所述的颗粒可具有约0.8、0.85、0.9、0.95、0.96、0.97、0.98或约0.99的圆形度。可通过对在电子显微镜等或流动型颗粒图像分析仪下观察到的图像进行图像处理来确定颗粒的直径和圆形度。还可以通过对颗粒进行圆形度测量并对所得值取平均值来确定圆形度。例如，可以使用以下公式来计算圆形度(circ)：
Figure BDA0003546294220000771
如本文所用，术语“周长”是指闭合平面图的边界或二维图像的所有边界的总和。如本文所用，术语“面积”是指颗粒的二维图像的截面积。颗粒的圆形度还可以被描述为颗粒的最小直径与其最大直径的比率。对于完美的圆来说，该比率是1。可通过将圆形度乘以100来计算圆形度百分比。可例如通过使用适于处理图像(例如通过显微镜法，特别是扫描电子显微镜法(SEM)或透射电子显微镜法(TEM)获得的图像)的任何软件测量纵横比来计算圆形度。在一些实施方案中，颗粒的圆形度为约0.10至约1.00，例如约0.20、0.30、0.40、0.50.0.60、0.70、0.75、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98或0.99至约1.00。在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.80至约1.00。在其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.85至约1.00。在某些其它实施方案中，颗粒的圆形度为约0.90至约1.00。在某些实施方案中，颗粒的圆形度为约0.95至约1.00。在某些优选的实施方案中，颗粒的圆形度为约0.98至约1.00。在优选的实施方案中，颗粒的圆形度为约1.00。在一些实施方案中，测量颗粒圆形度的方法包括对颗粒的扫描电子显微照片进行图像分析，其中基于颗粒投影到图像平面上的截面形状来计算平均圆度。可以扩展这类圆度因子以确认相应的圆形度。
在其它实施方案中，干组分的残留水分和/或溶剂含量按重量计小于约7％，例如按重量计小于约6％、5％、4％、3％、2％、1.9％、1.8％、1.7％、1.6％、1.5％、1.4％、1.3％、1.2％、1.1％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在一些实施方案中，颗粒具有按重量计小于约7％的残留水分。在其它实施方案中，颗粒具有按重量计小于约5％的残留水分。在某些实施方案中，颗粒具有按重量计小于约3％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计小于约1％的残留水分。
在一些实施方案中，颗粒具有按重量计约7％至约1％的残留水分。在其它实施方案中，颗粒具有按重量计约5％至约1％的残留水分。在优选的实施方案中，颗粒具有按重量计约3％至约1％的残留水分。在某些优选的实施方案中，颗粒按重量计基本上没有任何残留水分。
测量水分含量的示例性方法包括化学滴定法，例如涉及烘箱的卡尔费休滴定法(Karl Fischer titration)。还可以使用涉及热激发的失重法来测量包括水在内的多种溶剂。示例性方法包括利用红外光谱法的热重分析(TGA-IR)或气相色谱法-火焰离子化检测器气相色谱法(GC-FID/MS)。
在一些实施方案中，颗粒具有小于约50％的内部空隙空间，例如小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％。在某些实施方案中，颗粒可包括小于25％的内部空隙空间、小于10％的内部空隙空间、小于5％的内部空隙空间、小于3％的内部空隙空间、小于1％的内部空隙空间或小于0.1％的内部空隙空间。在优选的实施方案中，颗粒基本上没有任何内部空隙空间。适合确定内部空隙空间的方法可通过使用以下来完成：聚焦离子束扫描电子显微镜法(FIB-SEM)，它可用于目测“可接近的”和“难接近的”空隙空间；或者气体置换比重测定法(Micromeritics Instrument公司,Norcross,Ga)，它可测定“可接近的”空隙(从表面可接近的空隙空间，而不是类似核-壳结构的“从表面难以接近”的空隙)。气体比重测定法是一种常见的分析技术，它使用气体置换方法来测量体积。惰性气体如氦气或氮气用作置换介质。真实体积是总体积减去气体能达到的体积。通过将样品重量除以真实体积来计算密度。将样品密封在已知体积的仪器舱中，让适当的惰性气体进入，然后膨胀到另一个精确内部体积。测量膨胀前后的压力，并用于计算样品体积。将该体积除以样品重量，得到气体置换密度。如FIB-SEM或通过气体比重测定法所示，本公开的典型颗粒的横截面指示没有孔隙(基本上没有任何内部空隙空间)和低颗粒孔隙率，气体比重测定法使用氦气，在约22℃的温度下进行，得到通常平均为1.3g/cm3的密度，标准差为约0.0005g/cm3。
在其它实施方案中，颗粒表现出的骨架密度为约1至约6g/cm3，例如约1至约5g/cm3、约1至约3g/cm3、约1至约2g/cm3、约1至约1.5g/cm3或约1.1至约1.4g/cm3。骨架密度测量的示例性方法包括气体置换比重测定法。在某些实施方案中，颗粒表现出的密度为约0.1至约5g/cm3，例如约0.1至约2.5g/cm3、约0.1至约1.4g/cm3、约0.5至约1.4g/cm3或约1.0至约1.4g/cm3。在某些实施方案中，颗粒的密度为约1000mg/mL至约1500mg/mL、约1050mg/mL至约1500mg/mL、约1100mg/mL至约1500mg/mL、约1150mg/mL至约1500mg/mL、约1200mg/mL至约1500mg/mL、约1250mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL、约1310mg/mL至约1500mg/mL、约1320mg/mL至约1500mg/mL、约1330mg/mL至约1500mg/mL、约1340mg/mL至约1500mg/mL、约1350mg/mL至约1500mg/mL、约1360mg/mL至约1500mg/mL、约1370mg/mL至约1500mg/mL、约1380mg/mL至约1500mg/mL、约1390mg/mL至约1500mg/mL、约1400mg/mL至约1500mg/mL、约1410mg/mL至约1500mg/mL、约1420mg/mL至约1500mg/mL、约1430mg/mL至约1500mg/mL、约1440mg/mL至约1500mg/mL、约1450mg/mL至约1500mg/mL、约1460mg/mL至约1500mg/mL、约1470mg/mL至约1500mg/mL、约1480mg/mL至约1500mg/mL或约1490mg/mL至约1500mg/mL。在优选的实施方案中，颗粒的密度为约1000mg/mL至约1500mg/mL、约1300mg/mL至约1500mg/mL或约1320mg/mL至约1500mg/mL。
在一些实施方案中，颗粒具有按重量计大于约60％的治疗性生物制剂，例如按重量计大于约65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％的治疗性生物制剂。
在一些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基或它们的组合。在某些实施方案中，颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或它们的组合。
在其它实施方案中，碳水化合物可来自单糖、二糖、寡糖或多糖家族。在一些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、淀粉、海藻酸盐、黄原胶、半乳甘露聚糖(galactomanin)、琼脂、琼脂糖或它们的组合。在某些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。在优选的实施方案中，碳水化合物是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。基于葡萄糖单体的数目，环糊精可以三种不同的形式α、β和γ获得。α、β和γ环糊精中的葡萄糖单体的数目可分别为6、7或8。
在一些实施方案中，pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。在其它实施方案中，pH调节剂是柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、琥珀酸盐、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。在某些实施方案中，pH调节剂是盐酸或柠檬酸。
在其它实施方案中，盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。在优选的实施方案中，盐是氯化钠。
在一些实施方案中，螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸、喷替酸或它们的组合。在其它实施方案中，矿物质是钙、锌、二氧化钛或它们的组合。在某些实施方案中，聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或它们的组合。
在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTM N-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、月桂醇聚醚硫酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。在一些实施方案中，表面活性剂包括但不限于：(i)阳离子表面活性剂，例如十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、氯化苯甲烃铵、氯化苄乙氧铵、双十八烷基二甲基溴化铵；(ii)阴离子表面活性剂，例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、全氟辛烷磺酸盐、烷基醚磷酸盐；(iii)非离子表面活性剂，例如烷基酚乙氧基化物(TritonX-100)、脂肪醇乙氧基化物(八乙二醇单十二烷基醚)、椰油酰胺二乙醇胺、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇的脂肪酸酯(脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、吐温80、吐温20；以及(iv)两性离子表面活性剂，例如椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯、卵磷脂或脱水山梨糖醇酯。在优选的实施方案中，表面活性剂是脱水山梨糖醇酯、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯60或聚山梨醇酯80。在某些优选的实施方案中，表面活性剂是脱水山梨糖醇酯、聚山梨酸酯20或聚山梨醇酯80。在某些其它实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，如司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、司盘85等。
在一些实施方案中，蛋白质稳定剂是乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇或它们的组合。在某些实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、糖类、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。在优选的实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。如本文所述，与术语“蛋白质稳定剂”或“稳定化剂”同义使用的稳定剂可以是盐、碳水化合物、糖类或氨基酸，优选权威认可作为药物组合物中的合适添加剂或赋形剂的碳水化合物或糖。在优选的实施方案中，PEG是PEG 200、PEG 300、PEG3350、PEG 8000、PEG10000、PEG 20000或它们的组合。
适用于颗粒的乳化剂的实例包括但不限于HLB小于7的亲脂性剂，例如混合脂肪酸甘油一酯；混合脂肪酸甘油二酯；脂肪酸甘油一酯和甘油二酯的混合物；亲脂性聚甘油酯；甘油酯，包括单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸和其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；以及它们的混合物：单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸和其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；或它们的组合。在一些实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯20、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。在优选的实施方案中，山梨糖醇的脂肪酸酯是脱水山梨糖醇酯，例如司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、司盘85等。在某些优选的实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、脱水山梨糖醇单油酸酯或它们的组合。
在其它实施方案中，杀菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、氯化苄乙氧铵、戊二醛、β-丙内酯或它们的组合。
在某些实施方案中，氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。在优选的实施方案中，氨基酸是精氨酸、组氨酸、脯氨酸、天冬酰胺或它们的组合。
在一些实施方案中，抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或它们的组合。在其它实施方案中，蛋白质是鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、明胶或它们的组合。在某些实施方案中，有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或它们的组合。在其它实施方案中，防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。尼泊金酯可以是对羟基苯甲酸酯。在一些实施方案中，杀细菌剂是氯化苯甲烃铵(阳离子表面活性剂)、次氯酸盐、过氧化物、醇类、酚类化合物(例如石碳酸)或它们的组合。
在其它实施方案中，杀真菌剂是阿拉酸式苯(acibenzolar)、2-苯基苯酚、敌菌灵(anilazine)、香芹酮(carvone)、那他霉素(natamycin)、叠氮化钾或它们的组合。在某些实施方案中，维生素是硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、生物素、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、抗坏血酸、钙化醇、视黄醇、醌类或它们的组合。在其它实施方案中，防腐剂是硝酸钠、二氧化硫、山梨酸钾、山梨酸钠、苯甲酸钠、苯甲酸、羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。
许多营养培养基(优选无血清的)可单独或组合地用于本公开，包括市售的培养基或本领域中已知的其它培养基。这类培养基(全没有血清或已移除了血清)的实例包括ADC-1、LPM(无牛血清白蛋白)、F10(HAM)、F12(HAM)、DCCM1、DCCM2、RPMI 1640、BGJ培养基(Fitton-Jackson改良)、伊格尔基础培养基(Basal Medium Eagle)(BME-加有厄尔盐(Earle's salt)基质)、达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified EagleMedium)(DMEM-无血清)、格拉斯哥改良伊格尔培养基(Glasgow Modification EagleMedium，GMEM)、莱博维茨L-15培养基(Leibovitz L-15Medium)、McCoy's 5A培养基、培养基M199(M199E-有厄尔盐基质)、培养基M199(M199H-有汉克盐(Hank's salt)基质)、伊格尔最低必需培养基(MEM-E-有厄尔盐基质)、伊格尔最低必需培养基((MEM-H-有汉克盐基质)和伊格尔最低必需培养基(MEM-NAA-有非必需氨基酸)等等。此外，含血清的营养培养基也可用于根据本公开的组合物中，但使用含血清的培养基是不太优选的，因为血清有可能会被微生物剂污染，并且因为患者可能会对血清中所含的某些抗原组分产生免疫反应。
包含至少一种本文所述的治疗性生物制剂的多个颗粒可按多种方式制备，以及按例如PCT/US2017/063150、PCT/US2018/043774、PCT/US2019/033875、PCT/US20/15957、US62/799,696、US62/899,907、US62/899,981、US62/978,641和US63/011,820中公开的形成颗粒的任何方法制备，上述文献中的每一个以引用的方式整体并入本文中。
本公开的颗粒可以悬浮在水性液体载体、非水液体载体(例如有机液体)、离子液体载体、凝胶载体或它们的组合中以形成悬浮液组合物。悬浮介质还可包括例如碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、氨基酸、寡肽、生物赋形剂、化学赋形剂、杀菌剂、抗氧化剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、止痛剂和/或营养培养基。在一些实施方案中，其它组分中的每一种独立地为介质的0.0001至99％(w/v)，例如0.0001至90％(w/v)、0.0001至50％(w/v)、0.0001至10％(w/v)、0.0001至1％(w/v)或0.0001至0.1％(w/v)。
对于水性或非水悬浮液组合物或制剂，可使用高浓度的海藻糖溶液来稳定悬浮的颗粒并防止过早的溶解。在某些情况下，糖如果吸附到颗粒表面上，则用作空间稳定剂，但如果不吸附，则又可充当“拥挤”分子。拥挤分子可通过增强耗尽排斥来起作用。还描述了其它拥挤剂的这种稳定作用，这些拥挤剂例如(i)聚合物，例如PEG 200、PEG300、PEG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG 20000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸或羟乙基淀粉等(注意这些拥挤剂可以单独使用或者组合使用)；(ii)有机分子，例如N-甲基-2-吡咯烷酮(Miller等人J.Pharm.Sci.,2012,101,3763-3778)和(iii)糖或糖醇，尤其例如山梨糖醇、蔗糖和甘露糖醇。其它的“拥挤剂”包括盐，例如硫酸铵，它会竞争水合的水；和水溶性有机液体，例如N-甲基吡咯烷酮(NMP)，它会降低溶剂的介电常数并产生已占体积效应。
在一些实施方案中，液体载体(水和非水)中的表面活性剂可充当电荷稳定剂。表面活性剂吸附到颗粒表面上以控制它们之间的静电相互作用。在某些实施方案中，将表面活性剂添加到组合物时产生的静电排斥力足以阻止颗粒显著聚集。表面活性剂还可以阻止附着到容器或器皿。在其它实施方案中，聚合物可添加到液体载体中，充当空间稳定剂。
术语“粘度”用于描述流体用来抵抗剪切流动的特性。出于本公开的目的，可以使用流变仪，例如配有锥和板(2°/40mm)的AR-G2流变仪(TA Instruments,USA)，在25℃下在指定的剪切速率下测定粘度。在某些实施方案中，在牛顿体系中在剪切速率下测量粘度。在其它实施方案中，在100s-1或更大，例如1000s-1或大于1000s-1或大于10,000s-1或大于50,000s-1的剪切速率下测量粘度。如本文所用，术语“低速率”描述一种粘度小于约200mPa·s的组合物，例如液体载体。
在一些实施方案中，组合物的粘度小于约200mPa·s、小于约150mPa·s、小于约125mPa·s、小于约100mPa·s、小于约95mPa·s、小于约90mPa·s、小于约85mPa·s、小于约80mPa·s、小于约75mPa·s、小于约70mPa·s、小于约65mPa·s、小于约60mPa·s、小于约55mPa·s、小于约50mPa·s、小于约45mPa·s、小于约40mPa·s、小于约35mPa·s、小于约30mPa·s、小于约25mPa·s、小于约20mPa·s、小于约19mPa·s、小于约18mPa·s、小于约17mPa·s、小于约16mPa·s、小于约15mPa·s、小于约14mPa·s、小于约13mPa·s、小于约12mPa·s、小于约11mPa·s、小于约10mPa·s、小于约9.5mPa·s、小于约9mPa·s、小于约8.5mPa·s、小于约8mPa·s、小于约7.5mPa·s、小于约7mPa·s、小于约6.5mPa·s、小于约6mPa·s、小于约5.5mPa·s、小于约5mPa·s、小于约4.5mPa·s、小于约4mPa·s、小于约3.5mPa·s、小于约3mPa·s、小于约2.5mPa·s、小于约2mPa·s、小于约1.5mPa·s、小于约1mPa·s、小于约0.5mPa·s、小于约0.1mPa·s、小于约0.05mPa·s或小于约0.01mPa·s(一毫帕斯卡-秒)。在其它实施方案中，组合物的粘度为约0.01mPa·s至约10,000mPa·s，例如约0.01mPa·s至约1,000mPa·s、约0.01mPa·s至约100mPa·s、约0.01mPa·s至约50mPa·s、约0.01mPa·s至约25mPa·s、约0.01mPa·s至约10mPa·s、约0.01mPa·s至约5mPa·s或约0.01mPa·s至约1mPa·s。在某些实施方案中，组合物的粘度可在约0.27mPa·s至约200mPa·s，例如约0.27mPa·s至约50mPa·s、约1mPa·s至约30mPa·s或约20mPa·s至约50mPa·s范围内。在其它实施方案中，组合物的粘度在约0.27mPa·s至约200mPa·s，例如约0.27mPa·s至约100mPa·s、约0.27mPa·s至约50mPa·s、约0.27mPa·s至约30mPa·s、约1mPa·s至约20mPa·s或约1mPa·s至约15mPa·s范围内。在某些实施方案中，在牛顿体系中在剪切速率下测量粘度。在其它实施方案中，在约100s-1或更大，例如在约1000s-1或大于约1000s-1的剪切速率下测量粘度。组合物可包括按体积计约5至约90％的颗粒，例如约20至约90％、约40至约80％、约50至约60％或约70至约90％。组合物的治疗性生物制剂的浓度可以为约0.0001至约1000mg/mL，例如约100至约900、约150至约800或约200至约700mg/mL。控制粘度的方法包括温度调节和粘度调节添加剂。还可以使用液体的混合物来控制粘度。单位“mPa·s”和“cP”在本文中在最广泛的意义上可互换使用。
在其它实施方案中，组合物的粘度小于约200mPa·s。在一些实施方案中，组合物的粘度小于约150mPa·s。在某些实施方案中，组合物的粘度小于约100mPa·s。在其它实施方案中，组合物的粘度小于约80mPa·s。在某些其它实施方案中，组合物的粘度小于约50mPa·s。在一些实施方案中，组合物的粘度小于约40mPa·s。在其它实施方案中，组合物的粘度小于约30mPa·s。在某些实施方案中，组合物的粘度小于约20mPa·s。在其它实施方案中，组合物的粘度小于约10mPa·s。在某些其它实施方案中，组合物的粘度小于约5mPa·s。在一些实施方案中，组合物的粘度小于约3mPa·s。在其它实施方案中，组合物的粘度小于约2.5mPa·s。
在本文所述的公开内容的某些实施方案中，治疗性生物制剂在颗粒中的高浓度和颗粒在液体载体中的高浓度是可能的。在一些实施方案中，后者可通过混合各种尺寸的颗粒来实现。
在一些实施方案中，本文所述的治疗方法在组合物中使用的治疗性生物制剂的浓度为约20mg/mL至约700mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675mg/mL至约700mg/mL；约20mg/mL至约650mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625mg/mL至约650mg/mL；约20mg/mL至约600mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575mg/mL至约600mg/mL；约20mg/mL至约575mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550mg/mL至约575mg/mL；约20mg/mL至约550mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525mg/mL至约550mg/mL；约20mg/mL至约525mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500mg/mL至约525mg/mL；约20mg/mL至约500mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475mg/mL至约500mg/mL；约20mg/mL至约475mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450mg/mL至约475mg/mL；约20mg/mL至约450mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425mg/mL至约450mg/mL；约20mg/mL至约425mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400mg/mL至约425mg/mL；约20mg/mL至约400mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375mg/mL至约400mg/mL；约20mg/mL至约375mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350mg/mL至约375mg/mL；约20mg/mL至约350mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325mg/mL至约350mg/mL；约20mg/mL至约325mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300mg/mL至约325mg/mL；或约20mg/mL至约300mg/mL，例如约20、30、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275mg/mL至约300mg/mL。在其它实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约20mg/mL至约650mg/mL。在某些实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约100mg/mL至约500mg/mL。在其它实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约200mg/mL至约400mg/mL。在优选的实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约300mg/mL至约400mg/mL。在某些优选的实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约350mg/mL至约400mg/mL。在一些实施方案中，组合物中的治疗性生物制剂的浓度为约300mg/mL至约500mg/mL。
在某些实施方案中，在水性液体中溶解后持续存在的特征尺寸大于或等于约100μm的不溶性颗粒物质被称为可见颗粒(VP)。在本文所述的公开内容的优选实施方案中，组合物基本上不含可见颗粒(VP)。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。如本文所用，术语“生理相关的水性液体”是指分布在胞外区室中的任何含水体液，例如细胞外液、组织间隙液、血管内流体(血液、血浆和淋巴)和脑脊髓液。
在其它实施方案中，在水性液体中溶解后持续存在的特征尺寸为约1μm至约100μm的不溶性颗粒物质被称为亚可见颗粒(SvP)。SvP以约0个至100,000,000个/mL的量存在，例如约0个/mL至约10,000,000个/mL、约0个至约1,000,000个/mL、约0个至约500,000个/mL、约0个至约100,000个/mL、约0个至约50,000个/mL、约0个至约10,000个/mL、约0个至约6,000个/mL、约0个至约1,000个/mL、约0个至约600个/mL、约0个至约250个/mL、约0个至约100个/mL、约0个至约60个/mL或约0个至约10个/mL。在其它实施方案中，特征尺寸大于或等于10μm的颗粒的计数为约0个至约6,000个/mL，例如约0个/mL至约1,000个/mL、约0个至约100个/mL、约0个至约10个/mL、约0个至约5个/mL、约0个至约3个/mL或约0个至约1个/mL。在某些实施方案中，特征尺寸大于或等于25μm的颗粒的计数为约0个至约600个/mL，例如约0个/mL至约100个/mL、约0个至约10个/mL、约0个至约3个/mL、约0个至约1个/mL、约0个至约0.5个/mL或约0个至约0.1个/mL。测量SvP的示例性方法包括在将治疗性生物制剂复原和稀释至标准浓度(例如，约100mg/mL或约1mg/mL)后，用Coulter计数器、HIAC Royco或微流成像系统分析治疗性生物制剂。在其它实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中大于约10μm颗粒的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约100,000,000个/mL。在某些实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中大于约10μm颗粒的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约6000个/mL。在优选的实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中大于约25μm颗粒的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约600个/mL。在某些优选的实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物基本上不含不溶性亚可见颗粒(SvP)。
在某些实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约100,000,000/mL。在一些实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约6000/mL。在其它实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物中特征尺寸超过约25μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约600/mL。在优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
在一些实施方案中，在水性液体中溶解后持续存在的特征尺寸为约100nm至约1μm的不溶性颗粒物质被称为亚微米颗粒(SMP)，并且有时被称为纳米颗粒。认为这类SMP的存在会引起免疫原性，因此应避免，以将这类作用减到最少。定量地，SMP以约0个至5×1012个/mL的量存在，例如约0个至约0.5×1012个/mL、约0个至约50×109个/mL、约0个至约10×109个/mL、约0个至约5×109个/mL、约0个至约0.5×109个/mL、约0个至约50×106个/mL、约0个至约1×106个/mL、约0个至约500,000个/mL、约0个至约200,000个/mL、约0个至约100,000个/mL、约0个至约10,000个/mL、约0个至约5000个/mL或约0个至约1000个/mL。定量测量SMP的示例性方法包括在将治疗性生物制剂复原和稀释至标准浓度(例如，约100mg/mL、约1mg/mL或约1μg/mL)后，用NanoSight、微流成像系统、与多角度激光散射耦合的不对称场流分级(asymmetric field flow fractionation coupled to a multi-angle laser lightscattering，AF4 MALS)、动态光散射(DLS)或FlowCam成像分析治疗性生物制剂。定性地，SMP在与起始单体治疗性生物制剂溶液相当的范围内。在优选的实施方案中，在水性液体中溶解后，组合物基本上不含亚微米颗粒(SMP)。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
如本文公开的，术语“免疫原性”是指治疗性生物制剂(抗原)的注射组合物诱导免疫应答，而“抗原性”是指治疗性生物制剂的组合物与先前存在的抗体的反应。抗原性和免疫原性统称为“免疫反应性”。在优选的实施方案中，组合物的免疫原性与包含呈单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。在某些优选的实施方案中，组合物基本上无免疫原性。
特定组合物的毒性与治疗作用之间的比率是它的治疗指数，可以表示为介于LD50(化合物使群体50％死亡的量)与ED50(化合物在群体50％中有效的量)之间的比率。表现出高治疗指数的组合物是优选的。从细胞培养物分析和/或动物研究获得的治疗指数数据可用于配制用于人的剂量范围。这类化合物的剂量优选地在包括ED50的血浆浓度范围内，几乎没有毒性。剂量可以在这一范围内变化，取决于采用的剂型和利用的施用途径，例如皮下注射。参见例如Fingl等人,THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS,第1章,第1页,1975。个别医师可考虑到患者的状态和递送组合物的特定方法来选择确切的组合物、施用途径和剂量。
肿瘤药物或消炎药常常有显著的副作用，这些副作用是由脱靶毒性，例如血液毒性、神经毒性、心脏毒性、肝脏毒性、肾毒性、耳毒性或脑毒性引起的。举例来说，紫杉醇如多西紫杉醇会引起以下副作用：感染、中性粒细胞减少、贫血、粒细胞减少性发热、过敏性、血小板减少、骨髓毒性、骨髓抑制、神经病、味觉障碍、呼吸困难、便秘、厌食、指甲病症、体液潴留、乏力、疼痛、恶心、腹泻、呕吐、疲劳、非特定的神经认知问题、眩晕、脑病、粘膜炎、脱发、皮肤反应、肌痛或它们的组合。
在本文所述的公开内容的一些实施方案中，毒性是血液毒性、神经毒性、胃肠毒性、心脏毒性、肝脏毒性、肾毒性、耳毒性或脑毒性。在其它实施方案中，与毒性相关的副作用可以是中性粒细胞减少、白血球减少、血小板减少、骨髓毒性、骨髓抑制、神经病、疲劳、非特定的神经认知问题、眩晕、脑病、贫血、味觉障碍、呼吸困难、便秘、厌食、指甲病症、体液潴留、乏力、疼痛、恶心、呕吐粘膜炎、脱发、皮肤反应、肌痛、过敏性、过敏反应或它们的组合。
在某些实施方案中，组合物的毒性与包含单体治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。在优选的实施方案中，组合物的毒性与包含呈单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比降低。在某些优选的实施方案中，组合物基本上无毒。
如本文所述的公开内容涉及一种高度浓缩的组合物，所述组合物包含多个颗粒，所述颗粒悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂，其中所述组合物在水、缓冲液或其它生理相关的水性液体，例如患者体内的生物流体中溶解时，混浊性与类似的包含单体治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上类似。术语“混浊度”意指在水、缓冲液或其它生理相关的水性液体，例如患者体内的生物流体中以所需浓度溶解之后，保持不溶的个别颗粒引起的流体的混浊或模糊。如本文所用，如在哺乳动物或人体内可能遇到的“生理相关”条件可适用。熟练的技术人员将能够根据本文所述的组合物的最后应用确定最适合于测试的条件集合。在一些实施方案中，组合物在水性液体中溶解后的混浊度与包含单体治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。在优选的实施方案中，组合物在水性液体中溶解后基本上不混浊。在某些优选的实施方案中，水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
在某些实施方案中，本公开涉及低混浊度的高度浓缩的组合物，所述组合物包含非水液体载体中的碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸和包含治疗性生物制剂的多个颗粒。在优选的实施方案中，本公开涉及低混浊度的高度浓缩的组合物，所述组合物包含油酸乙酯中的海藻糖、盐酸精氨酸、琥珀酸钠、琥珀酸、柠檬酸、柠檬酸钠、组氨酸、盐酸组氨酸、氯化钠、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精、聚山梨醇酯或脱水山梨糖醇单油酸酯和包含抗体的多个颗粒。在某些优选的实施方案中，组合物在水、水性缓冲液或任何生理相关的水性液体中溶解后基本上不混浊。
在某些实施方案中，颗粒可悬浮在非水或水性液体载体中，从而形成药学上可接受的非水或水性组合物。重要地，产生具有至少一种治疗性生物制剂的非水或水性组合物的过程不会显著地改变如本文所述的生物制剂的结构或生物活性。另外，在某些其它实施方案中，本公开允许递送较高剂量的治疗性生物制剂，同时将递送体积减到最少，缩短施用时间，和/或减少疼痛。
在一些实施方案中，液体载体是非水的或水性的。在其它实施方案中，液体载体是非水的。在其它实施方案中，液体载体是水性的。
在其它实施方案中，非水液体载体是有机溶剂或离子液体。在一些实施方案中，有机溶剂是苯甲酸苄酯、椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、玉米油、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯、二甲基乙酰胺、二甲基异山梨醇酯、二甲亚砜、糖呋喃醇、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯(例如Miglyol)、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁子香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、简单醇类(例如乙醇、辛醇、己醇、癸醇、丙醇和丁醇)、γ-丁内酯、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酸、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨醇酯、乙醇胺、丙酸、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯、丙酮缩甘油、异山梨醇二甲醚、甲酸乙酯、乙酸乙基己酯或它们的组合。在其它实施方案中，离子液体包含吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍、卤化物、硫酸盐、磺酸盐、碳酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、PF6-、BF4-、三氟甲磺酸盐、全氟丁基磺酸盐、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸盐、七氟丁酸盐、卤代铝酸盐或它们的组合。在优选的实施方案中，有机溶剂是油酸乙酯、甘油三酯(例如Miglyol)、月桂酸乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、癸酸乙酯、琥珀酸二乙酯、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯或它们的组合。在某些优选的实施方案中，有机溶剂是油酸乙酯或甘油三酯。
在一些实施方案中，水性液体载体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、5％右旋糖或缓冲液。在其它实施方案中，缓冲液是乙酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲盐水、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、二甲胂酸盐缓冲液、甲酸铵缓冲液、尿素溶液或它们的组合。在优选的实施方案中，水性液体载体是水。
在某些实施方案中，非水或水性液体载体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、止痛剂或它们的组合。在优选的实施方案中，非水或水性液体载体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或它们的组合。在某些优选的实施方案中，水性液体载体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、氨基酸或它们的组合。
在其它实施方案中，碳水化合物可来自单糖、二糖、寡糖或多糖家族。在一些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖、淀粉、海藻酸盐、黄原胶、半乳甘露聚糖、琼脂、琼脂糖或它们的组合。在某些实施方案中，碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。在优选的实施方案中，碳水化合物是海藻糖、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。基于葡萄糖单体的数目，环糊精可以三种不同的形式α、β和γ获得。α、β和γ环糊精中的葡萄糖单体的数目可分别为6、7或8。
在一些实施方案中，pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。在其它实施方案中，pH调节剂是柠檬酸盐、组氨酸、磷酸盐、琥珀酸盐、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。在某些实施方案中，pH调节剂是盐酸或柠檬酸。
在其它实施方案中，盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。在优选的实施方案中，盐是氯化钠。
在一些实施方案中，螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸、喷替酸或它们的组合。在其它实施方案中，矿物质是钙、锌、二氧化钛或它们的组合。在某些实施方案中，聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或它们的组合。
在其它实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTM N-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、月桂醇聚醚硫酸钠、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。在一些实施方案中，表面活性剂包括但不限于：(i)阳离子表面活性剂，例如十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、氯化苯甲烃铵、氯化苄乙氧铵、双十八烷基二甲基溴化铵；(ii)阴离子表面活性剂，例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、全氟辛烷磺酸盐、烷基醚磷酸盐；(iii)非离子表面活性剂，例如烷基酚乙氧基化物(TritonX-100)、脂肪醇乙氧基化物(八乙二醇单十二烷基醚)、椰油酰胺二乙醇胺、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇的脂肪酸酯(脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、吐温80、吐温20；以及(iv)两性离子表面活性剂，例如椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱和3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯、多库酯、卵磷脂或脱水山梨糖醇酯。在优选的实施方案中，表面活性剂是脱水山梨糖醇酯、聚山梨酸酯20或聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，蛋白质稳定剂是乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、糖类或它们的组合。在某些实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精、乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸或它们的组合。在优选的实施方案中，蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。在某些优选的实施方案中，PEG是PEG 200、PEG 300、EG 3350、PEG 8000、PEG 10000、PEG20000或它们的组合。如本文所述，与术语“稳定化剂”同义使用的稳定剂可以是盐、碳水化合物、糖类或氨基酸，优选权威认可作为药物组合物中的合适添加剂或赋形剂的碳水化合物或糖。
适用于非水或水性液体载体的乳化剂的实例包括但不限于HLB小于7的亲脂性剂，例如混合脂肪酸甘油一酯；混合脂肪酸甘油二酯；脂肪酸甘油一酯和甘油二酯的混合物；亲脂性聚甘油酯；甘油酯，包括单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸和其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；以及它们的混合物：单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯和二棕榈酸甘油酯；脂肪酸的甘油基-乳酸酯；丙二醇酯，包括丙二醇单棕榈酸酯、丙二醇单硬脂酸酯和丙二醇单油酸酯；脱水山梨糖醇酯，包括脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯；脂肪酸和其皂，包括硬脂酸、棕榈酸和油酸；或它们的组合。在一些实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。在优选的实施方案中，乳化剂是聚山梨醇酯80、脱水山梨糖醇单油酸酯或它们的组合。
在其它实施方案中，杀菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、氯化苄乙氧铵、戊二醛、β-丙内酯或它们的组合。
在某些实施方案中，氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。在优选的实施方案中，氨基酸是精氨酸、组氨酸、脯氨酸、天冬酰胺或它们的组合。
在一些实施方案中，抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或它们的组合。在其它实施方案中，蛋白质是鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、明胶或它们的组合。在某些实施方案中，有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或它们的组合。在其它实施方案中，防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。尼泊金酯可以是对羟基苯甲酸酯。在一些实施方案中，杀细菌剂是氯化苯甲烃铵(阳离子表面活性剂)、次氯酸盐、过氧化物、醇类、酚类化合物(例如石碳酸)或它们的组合。
在其它实施方案中，杀真菌剂是阿拉酸式苯、2-苯基苯酚、敌菌灵、香芹酮、那他霉素、叠氮化钾或它们的组合。在某些实施方案中，维生素是硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、生物素、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、抗坏血酸、钙化醇、视黄醇、醌类或它们的组合。在其它实施方案中，防腐剂是硝酸钠、二氧化硫、山梨酸钾、山梨酸钠、苯甲酸钠、苯甲酸、羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。
许多营养培养基(优选无血清的)可单独或组合地用于本公开，包括市售的培养基或本领域中已知的其它培养基。这类培养基(全没有血清或已移除了血清)的实例包括ADC-1、LPM(无牛血清白蛋白)、F10(HAM)、F12(HAM)、DCCM1、DCCM2、RPMI 1640、BGJ培养基(Fitton-Jackson改良)、伊格尔基础培养基(BME-加有厄尔盐基质)、达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM-无血清)、格拉斯哥改良伊格尔培养基(GMEM)、莱博维茨L-15培养基、McCoy's5A培养基、培养基M199(M199E-有厄尔盐基质)、培养基M199(M199H-有汉克盐基质)、伊格尔最低必需培养基(MEM-E-有厄尔盐基质)、伊格尔最低必需培养基((MEM-H-有汉克盐基质)和伊格尔最低必需培养基(MEM-NAA-有非必需氨基酸)等等。此外，含血清的营养培养基也可用于根据本公开的组合物中。
在一些实施方案中，止痛剂是对乙酰氨基酚(paracetamol)、组胺受体拮抗剂(例如，H1或H2阻滞剂)、NSAID、COX-2抑制剂、塞来昔布(Celecoxib)、罗非昔布(Rofecoxib)、伐地昔布(Valdecoxib)、帕瑞昔布(Parecoxib)、罗美昔布(Lumiracoxib)、依托昔布(Etoricoxib)、非洛昔布(Firocoxib)、扑热息痛、鸦片制剂(opiates)、右丙氧芬(Dextropropoxyphene)、可待因(Codeine)、曲马多(Tramadol)、阿尼利定(Anileridine)、哌替啶(Pethidine)、氢可酮(Hydrocodone)、吗啡、羟考酮(Oxycodone)、美沙酮(Methadone)、二乙酰吗啡(Diacetylmorphine)、氢吗啡酮(Hydromorphone)、羟吗啡酮(Oxymorphone)、左啡诺(Levorphanol)、丁丙诺啡(Buprenorphine)、芬太尼(Fentanyl)、舒芬太尼(Sufentanyl)、埃托啡(Etorphine)、卡芬太尼(Carfentanil)、二氢吗啡(dihydromorphine)、二氢可待因(dihydrocodeine)、蒂巴因(Thebaine)、罂粟碱(Papaverine)、地普喹酮(diproqualone)、氟吡汀(Flupirtine)、三环抗抑郁药、扑热息痛或利多卡因(lidocaine)或它们的组合。在某些实施方案中，止痛剂是扑热息痛或利多卡因。
在根据如本文所述的公开内容的优选实施方案中，颗粒组合物与包含呈单体形式的治疗性生物制剂的水性组合物相比治疗性生物制剂的稳定性提高。“稳定”组合物是其中的所有治疗性生物制剂在所需存储温度，例如4-40℃下存储时基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的组合物。希望制剂在存储时基本上保留它的物理和化学稳定性以及它的生物活性。一般基于组合物的预期保质期选择存储期。此外，在组合物冷冻(至例如-70℃)和解冻后，例如1、2或3次冻融循环后，组合物应稳定。可在本领域中获得用于测量蛋白质稳定性的多种分析技术并综述于例如Peptide and Protein DrugDelivery,247-301,Vincent Lee编辑,Marcel Dekker公司,New York,N.Y.,Pubs.(1991)和Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)。可以测量在选定温度下在选定时间段内的稳定性。可以多种不同的方式定性地和/或定量地评估稳定性，包括评估聚集体形成(例如使用尺寸排阻色谱法、通过测量混浊度和/或通过目测检查)；通过使用阳离子交换色谱法或毛细管区带电泳评定电荷异质性；氨基端或羧基端序列分析；质谱分析；SDS-PAGE分析以比较还原和完整的抗体；肽图(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能等。在一些实施方案中，组合物稳定至少一个月。在其它实施方案中，组合物稳定至少两个月。在某些其它实施方案中，组合物稳定至少三个月。在某些优选的实施方案中，组合物在40℃下稳定至少三个月。
在某些实施方案中，组合物还包含至少一种药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或它们的组合。
在一些实施方案中，本文公开的组合物和方法还包含药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂，所述透明质酸降解剂可以与组合物同时、依序或间歇施用。皮下组织或细胞外基质由包埋在氨基多糖的粘弹性凝胶内纤维蛋白网构成。透明质酸是皮下组织主要的氨基多糖。透明质酸呈粘性聚合物被成纤维细胞分泌到间质组织中，随后在淋巴中通过透明质酸酶的作用局部降解。氨基多糖是细胞外基质复杂的线性多糖，特征是N上取代的己糖胺和糖醛酸的重复二糖结构，如透明质酸的情况下。
例如通过增强和/或增加通过注射器注射施用的组合物的体积，本公开的透明质酸降解剂可增强包含多个颗粒的组合物的皮下施用，从而改善治疗性生物制剂的吸收。经由透明质酸的可逆水解，例如透明质酸的可逆降解，透明质酸降解剂如透明质酸酶的使用可改善治疗性生物制剂皮下施用至体循环中。细胞外基质中透明质酸的降解暂时打开了皮下组织中的通道，从而允许安全地且舒适地施用更大的体积至皮下组织中。此外，透明质酸的降解暂时降低皮下组织的粘度并促进注射的液体分散，从而有助于它们的吸收。透明质酸酶的作用是局部而且可逆的，在24至48小时内透明质酸组织完全重建。参见例如Frost,G.I.,“Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20):an enabling platform forsubcutaneous drug and fluid administration”,Expert Opinion on Drug Delivery,2007；4:427-440]。通过降解透明质酸增加皮下组织的渗透性与透明质酸酶能够增加包含同时、依序或间歇施用的多个颗粒的组合物的分散和吸收的功效相关。
在一些实施方案中，组合物还包含至少一种透明质酸降解剂，例如药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂。在某些实施方案中，透明质酸降解剂是透明质酸酶(hyaluronidase enzyme)，本文中又称为透明质酸酶(hyaluronidase)。在一些实施方案中，透明质酸酶是可溶性的中性活性透明质酸酶。在某些实施方案中，透明质酸酶是哺乳动物透明质酸酶。在特定实施方案中，哺乳动物透明质酸酶是人透明质酸酶。在优选的实施方案中，人透明质酸酶是重组人透明质酸酶，例如rHuPH20。适用于本文公开的组合物和方法中的某些重组人透明质酸酶可从Halozyme Therapeutics(San Diego,CA)购得，例如rHuPH20。
根据本公开的某些实施方案，透明质酸降解剂可与组合物同时、依序或间歇施用。如本文所用，术语“同时”或“接近同时”施用是指同时施用组分，例如组合物和透明质酸降解剂同时施用。在一些实施方案中，透明质酸降解剂和组合物在单个组合物中施用，例如共同配制。在其它实施方案中，透明质酸降解剂和组合物作为分开的制剂施用。然而，一种组分可在几分钟或几小时内，例如在同一次预约就诊或就诊施用。这类施用被称为“依序”施用。在某些实施方案中，依序施用是指透明质酸降解剂和如本文所述的组合物依序施用。在优选的实施方案中，先施用透明质酸降解剂，然后施用一剂或多剂组合物。在某些其它实施方案中，组分可以作为共同制剂或分开的制剂，例如每天、每周或每个月间歇施用。在优选的实施方案中，先施用透明质酸降解剂。例如，可施用初始较高的负荷剂量，然后是一个或多个较低剂量的透明质酸降解剂和/或组合物。然而，其它的给药方案可适用。这些治疗的进展容易通过本领域技术人员已知的常规技术和测定法监测。
术语“注射能力”或“可注射性”是指通过使用注射装置可向受试者施用液体组合物或制剂的相对容易程度。具体地说，可注射性或注射能力部分地受组合物或制剂的粘度、注射或传输流速和针的特征(例如长度和规格)影响。在一些实施方案中，通过在各种剪切速率下测量组合物或制剂的粘度来测定注射能力或可注射性。在其它实施方案中，通过测量启动由筒、柱塞和针组成的标准注射装置所需的脱离力和/或滑动力来测定注射能力或可注射性。在某些其它实施方案中，注射器的筒具有至少6mm的内径。如本文所述，包括包含至少一种治疗性生物制剂的多个颗粒的组合物的注射能力优于具有大致相同浓度的水性单体治疗性生物制剂的水性组合物或制剂的注射能力。术语“注射能力”或“可注射性”还可以指通过装备有16-33规格的任选地薄壁或超薄壁(UTW)针注射药物组合物或制剂的性能。在某些实施方案中，注射器装备有至少13mm长的针。注射能力取决于例如压力或注射所需要的力、流动均匀度、抽吸量和没有堵塞等因素。组合物的注射能力可通过比较粘度降低的组合物与没有添加降低粘度剂的组合物的注射力来评定。如本文所述的粘度降低的组合物可提高注射能力，其中与在另外相同的条件下具有相同浓度的水性单体治疗性生物制剂的标准组合物相比，注射力降低至少10％，优选至少30％，更优选至少50％，最优选至少75％。或者，组合物的注射能力可通过比较在用相同力按下注射器时注射例如约2.0mL、优选约1.5mL、更优选约1.0mL、最优选约0.5mL的相同体积的水性单体治疗性生物制剂组合物所需的时间来评定。短语“流速”是指每单位时间可通过所给定的截面积的流体体积。一般说来，流速的公式是Q＝A×v，其中Q是流速，A是流动路程中的一点的截面积，v是该点的液体平均速度。在某些实施方案中，流速是恒定的。在优选的实施方案中，流速至少是约0.1mL/sec。
术语“注射脱离力”是指在以稳定速率射出注射器的内容物前克服标准注射装置的注射器筒与柱塞之间的摩擦所需的力，例如打破柱塞的静摩擦所需的最大力。该力施加在注射器柱塞轴的朝外端，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物通过规定规格和长度的注射器针射出。在某些实施方案中，在启动期间通过放置在注射器柱塞的朝外端的测力传感器测量注射脱离力。
术语“注射滑动力”、“滑动力”或“注射力”是指保持标准注射装置的内容物的稳定射出所需的力，例如一旦克服了静摩擦就维持柱塞移动所需的力。该力施加在注射器柱塞轴的朝外端，并且方向沿着注射器筒的轴线。注射器的内容物通过规定规格和长度的注射器针射出。术语“牛顿体系”或“N”意指在每一点与局部应变速率成线性比例或几乎成线性比例的一系列剪切速率。
在一些实施方案中，组合物使用约2N至约80N的注射力进行分配。在其它实施方案中，组合物使用约2N至约40N的注射力进行分配。在其它实施方案中，组合物使用约2N至约30N的注射力进行分配。在某些其它实施方案中，组合物使用约2N至约25N的注射力进行分配。在某些实施方案中，组合物使用如下注射力进行分配：约2N至约20N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20N；约2N至约19N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19N；约2N至约18N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18N；约2N至约17N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17N；约2N至约16N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16N；约2N至约15.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5N；约2N至约15N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15N；约2N至约14.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5N；约2N至约14N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14N；约2N至约13.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5N；约2N至约13N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13N；约2N至约12.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5N；约2N至约12N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12N；约2N至约11.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5N；约2N至约11N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11N；约2N至约10.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5N；约2N至约10N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10N；约2N至约9.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5N；约2N至约9N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9N；约2N至约8.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5N；约2N至约8N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8N；约2N至约7.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5N；约2N至约7N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7N；约2N至约6.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5N；约2N至约6N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6N；约2N至约5.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5N；约2N至约5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5、5N；约2N至约4.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4、4.5N；约2N至约4N，例如约2N至约2.5、3、3.5、4N；或约2N至约3.5N，例如约2N至约2.5、3、3.5N。在优选的实施方案中，注射力为约2N至约15N。
在其它实施方案中，组合物使用约3N至约80N的注射力进行分配。在一些实施方案中，组合物使用约3N至约40N的注射力进行分配。在其它实施方案中，组合物使用约3N至约30N的注射力进行分配。在某些其它实施方案中，组合物使用约3N至约25N的注射力进行分配。在某些实施方案中，组合物使用如下注射力进行分配：约3N至约20N，例如约3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5至约20N；约3.5N至约19N，例如约4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5至约19N；约4N至约15N，例如约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5至约15N；约4N至约14.5N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5N；约4N至约14N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14N；约4N至约13.5N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5N；约4N至约13N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13N；约4N至约12.5N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5N；约4N至约12N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12N；或约4N至约11.5N，例如约4N至约4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5N。在优选的实施方案中，注射力为约2N至约25N。在其它优选的实施方案中，注射力为约2N至约20N。在某些优选的实施方案中，注射力为约2N至约15N。在一些实施方案中，当组合物中的治疗性生物制剂的浓度增加时，注射力以比组合物的粘度低的速率增加。
如图1所示，使用具有4.7mm内径注射器筒的27规格超薄壁(UTW)针研究注射力对比颗粒组合物。图1中的结果显示，当平均滑动力对最多600mg/mL的组合物浓度作图时，使用多达约11.5N的注射力进行分配颗粒组合物。针对固体球状颗粒的浓缩悬浮液，使用Krieger-Dogherty模型拟合数据。20N(牛顿)作为典型滑动力极限的参考绘制。参见实施例6。在本文所述的方法和组合物的其它实施方案中，当组合物中的治疗性生物制剂的浓度增加时，注射力以比组合物的粘度低的速率增加。如图7所示，与保持成比例的水性制剂的粘度和注射力相比，当颗粒组合物的蛋白质浓度增加时，颗粒组合物的粘度(Elektroject)和注射力岔开。
本发明的实施方案的治疗性组合物宜呈可注射组合物的形式施用，所述可注射组合物包含：悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐。在一些实施方案中，组合物通过肠胃外、皮下、经口、表皮、皮内、肌内、动脉间、腹膜内或静脉内注射施用。在其它实施方案中，组合物通过皮下注射施用。在某些实施方案中，组合物通过注射器注射施用。在某些优选的实施方案中，组合物从预灌封注射器中分配。
本文所述的治疗性生物制剂可被配制用于肠胃外施用，例如被配制用于经由静脉内、肌内、皮下、阴道内或甚至腹膜内途径注射。通常，这类组合物可以制成悬浮液；还可使颗粒制剂乳化。在一些实施方案中，通过预灌封装置，例如无针注射装置、药筒或注射器注射施用组合物。在其它实施方案中，组合物通过皮下注射器注射施用。在某些实施方案中，组合物以一个或多个剂量施用。在优选的实施方案中，组合物以单个剂量施用。在某些其它实施方案中，组合物以多个剂量施用。
适合于可注射使用的药物组合物包括无菌非水或水性液体载体；包括芝麻油、花生油、玉米油或丙二醇水溶液的组合物；以及临用方制备无菌可注射溶液或分散液的无菌颗粒。在所有情况下，组合物必须无菌，必须是流动的，达到容易注射的程度。它在当前良好制造程序(current good manufacture procedure，cGMP)和储存条件下也是稳定的，必须防止如细菌和/或真菌的微生物的污染作用。
本文所述的方法的施用可包括使用16-33规格针施用组合物。16-33规格针可具有约19mm(3/4英寸)或更小，或优选约13mm(1/2英寸)或更小的长度。在某些实施方案中，本文所述的方法的施用包括使用27-33规格针施用组合物。在其它实施方案中，27-33规格针具有约13mm(1/2英寸)或更小的长度。在其它实施方案中，组合物从以下中分配：25规格至33规格针，例如26、27、28、29、30、31、32规格至33规格针；26规格至33规格针，例如27、28、29、30、31、32规格至33规格针；27规格至33规格针，例如28、29、30、31、32规格至33规格针；28规格至33规格针，例如29、30、31、32规格至33规格针；29规格至33规格针，例如30、31、32规格至33规格针；或30规格至33规格针，例如31、32规格至33规格针。在某些实施方案中，组合物从以下中分配：27规格至30规格针；例如28、29规格至30规格针。在优选的实施方案中，组合物从27规格针中分配。在某些优选的实施方案中，组合物从30规格针中分配。
本文所述的任一种方法的施用可包括以单次皮下施用向受试者施用一定剂量的组合物。在本文所述的任一种方法中，所述方法还可包括向受试者共同施用至少一种另外的治疗剂，例如透明质酸酶、细胞毒性剂或细胞生长抑制剂、非类固醇类消炎药(NSAID)、药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或它们的组合。
可使用多种已知的途径和技术向人或动物受试者活体内施用如本文所述的组合物。举例来说，组合物可呈可注射的溶液、悬浮液或乳液提供，并使用常规的针和注射器经由肠胃外、皮下、经口、表皮、皮内、肌内、动脉间、腹膜内、静脉内注射施用。或者，无针注射装置也适合于施用。在一些实施方案中，组合物通过注射器注射或无针注射施用。在其它实施方案中，组合物通过无针注射施用。在某些其它实施方案中，无针注射是液体喷射注射。无针注射涵盖广泛的药物递送系统，它们使用洛伦兹力(Lorentz)、冲击波、气体压力或电泳力推进药物通过皮肤来驱动药物通过皮肤，消除了皮下注射针的使用。如本文所用，术语“喷射注射”是指无针注射法，其中组合物被强力推动通过孔口，从而产生能够穿透哺乳动物皮肤的高压超细液体流。在某些实施方案中，喷射注射用于根据本公开的组合物的肠胃外、皮下、经口、表皮、皮内、肌内、动脉间、腹膜内或静脉内注射。在优选的实施方案中，喷射注射用于皮下注射。
在一些实施方案中，组合物在向受试者施用后不到约5小时，例如4小时、3小时、2小时、1小时内溶解。在其它实施方案中，组合物在向受试者施用后不到约60分钟，例如59分钟、58分钟、57分钟、56分钟、55分钟、54分钟、53分钟、52分钟、51分钟、50分钟、49分钟、…10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟内溶解。在其它实施方案中，组合物在向受试者施用后不到约20分钟内溶解。在某些实施方案中，组合物在向受试者施用后不到约10分钟内溶解。在某些优选的实施方案中，组合物在向受试者施用后不到约60秒，例如59秒、58秒、57秒、56秒、55秒、54秒、53秒、52秒、51秒、50秒、49秒、…10秒、9秒、8秒、7秒、6秒、5秒、4秒、3秒、2秒、1秒内溶解。
在根据本文所述的公开内容的优选实施方案中，当施用组合物时，可在数秒内发生完全溶解，降低了由皮下空间中持续存在的颗粒造成的任何免疫学风险。举例来说，与同等剂量的水性单体mAb相比，包含mAb的颗粒的给药已经显示会产生如本文所述的类似的药物动力学(PK)特征(AUC、Cmax和Tmax)和功效(减少肿瘤生长)。在某些优选的实施方案中，组合物在施用于受试者后立即溶解。
本文所述的方法证明，皮下递送高浓度Ab(300-400mg/mL蛋白质)组合物没有损失生物活性。通过使用油酸乙酯(EO)作为液体载体，多种Ab已经实现了这一点。油酸乙酯是一种在25℃下具有约6mPa·s的低粘度的脂肪酸酯，并且在存储或活体内溶解期间不与颗粒进行化学相互作用。在一些实施方案中，油酸乙酯预防颗粒在注射前聚集并使颗粒容易再悬浮。
可使用本文所述的多种Ab产生具有可控制的大小分布(多分散指数<0.2)的致密(1.32g/cm3)的圆形颗粒。聚焦离子束扫描电子显微镜法(FIB-SEM)可用于确定颗粒是否不含空隙空间，这对于达到组合物中的高蛋白负荷是重要的；并且X-射线光电子能谱法(XPS)可用于控制颗粒的径向分布。在某些实施方案中，粒度可为约5至约10μm，这对于达到低粘度组合物来说是较合宜的，但又足够小，从而防止27规格针中注射器堵塞。通过将颗粒以约400mg/mL(蛋白质380mg/mL，稳定赋形剂20mg/mL)负载在油酸乙酯(EO)液体载体中，可以形成粘度为约20mPa·s(与约4N的注射力相关)的治疗性组合物，它适合存储在预灌封注射器中。
如本文所述，使用尺寸排阻色谱法(SEC)、差示扫描荧光测定法(DSF)、圆二色性(CD)、阳离子交换色谱法(CIEX)和亚可见颗粒(SvP)分析表征组合物中的颗粒的结构稳定性。此外，使用流式细胞术和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)测定法分析生物活性的保存。
又如本文所述，SEC数据证实了与含有1.9％聚集体的标记制剂(呈FDA批准的制剂的水性mAb)相比，在加工后没有观察到聚集体形成，相比之下，重新配制的颗粒组合物含有1.8％聚集体。在40℃下存储30天后，DSF示出了整个样品小于1℃的热漂移，并且CD无法检测到二级结构的任何差异(β-折叠百分比)。根据法规规定(ICH Q6B)，使用CIEX分析蛋白质的电荷变体，以确保在本文所述的方法期间以及存储时没有发生化学改性。在某些实施方案中，在存储后，组合物发生化学改性的倾向低于FDA标记制剂。这是因为在呈颗粒形式的固态下蛋白质更稳定。
在40℃下存储30天后，通过流式细胞术测定法证明了生物活性的保存。在FDA标记制剂与如本文所述的那些组合物之间没有明显可辨别的差异。还进行ADCC测定法以通过暴露与Ab一起孵育的靶细胞系，评定每种Ab对它的靶标的结合和效应功能。如图2A和图2B所示，在FDA标记制剂的情况下，在存储后生物活性显著降低，而对于组合物中的颗粒，没有观察到活性下降。
在体内研究开始前，无菌地获得用于组合物的颗粒。细菌内毒素水平比公认的注射标准(0.05EU/mg至0.25EU/mg)低约3个数量级。此外，微生物生长测定表明没有看得见的生长。
在大鼠药物动力学(PK)、SC清除(小鼠)和功效(小鼠异种移植)方面，本文所述的组合物与水性FDA标记制剂相当。图3中示出了史泊格多利大鼠(每种条件n＝5)中水性mAb制剂(SC注射)和mAb组合物(SC)的PK特征，这些PK特征相当，完全在公认的80-125％生物等效极限内。已经证明了颗粒的活体内溶解行为确保组合物可在与标准水性制剂相比类似的速率下从注射部位清除，因为不溶解的颗粒可能会触发免疫原性反应。参见实施例7。
通过使荧光染料与利妥昔单抗缀合，可目测活体内颗粒在SKH1(无毛小鼠)的上背区域中的溶解，如图4所示。参见实施例9。通过荧光信号，观察到水性制剂和颗粒组合物的清除类似。在14天后处死动物，并收获五个主要器官(肝、脾、肾、肺和心脏)，均化，并定量荧光。观察到的荧光可以忽略，表明了利妥昔单抗被完全地代谢，而且颗粒未被运输至动物的主要器官。功效研究依赖于对用水性制剂和颗粒组合物处理的Fox Chase SCID小鼠中DOHH-2异种移植肿瘤尺寸的测量。如所预料的，图5说明颗粒组合物阻止肿瘤的生长，与水性单体mAb制剂相当。参见实施例8。此外，在注射部位或在任一只注射小鼠的任何主要器官，都没有显著的毒性或其它病变。
进一步的体内研究已经扩展至小型猪血液学、血清化学和PK。已经显示血液学和血清化学测量在正常的范围内，任一组的血清化学(第3天)或血液学(第7天)标记物没有显著的变化。初步PK特征(每种条件n＝2)显示尤卡坦小型猪中类似的生物利用率，其中皮下空间与人的皮下空间非常相似，如图6所示。参见实施例10。
药盒
在多个实施方案中，预想一种药盒，所述药盒包括包含至少一种治疗性生物制剂的多个颗粒。举例来说，药盒可包括一个或多个另外的容器，每个容器具有多种材料中的一种或多种(例如试剂，任选地呈浓缩形式，和/或装置)，这些材料从使用本文所述的组合物的商业和用户立场来说合乎需要的。这类材料的非限制性实例包括(但不限于)缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器、药筒；托架、包装、容器、小瓶，和/或列出内容物的管标签，和/或使用说明书，以及具有使用说明书的包装说明书。在一些实施方案中，本发明的实施方案涵盖一种用于施用实施方案的疗法的药盒。药盒可包含一个或多个密封的预灌封注射器或药筒，所述注射器或药筒含有任一种本公开的药物组合物。药盒可包括例如至少一种抗体，以及制备、配制和/或施用实施方案的组分或进行所公开的治疗方法的一个或多个步骤的试剂。在其它实施方案中，药盒还可以包含合适的容器，它是一种不会与药盒的组分反应的容器，例如Eppendorf管、注射器、瓶子或管。容器可由例如塑料或玻璃的可灭菌材料形成。在优选的实施方案中，组合物从预灌封注射器中分配。
药盒还可包括指令表，它概述了本文中阐述的方法的程序步骤，并按照与本文所述或本领域的一般技术人员已知的程序基本上相同的程序。指令信息可在计算机可读媒体中，该计算机可读媒体含有机器可读的指令，这些指令在使用计算机执行时，显示用于递送药学上有效量的治疗性生物制剂的真实或虚拟程序。
标签任选地在容器上或与容器相关联。举例来说，当形成标签的字母、数字或其它特征附连、模制或蚀刻到容器本身时，标签在容器上，当它存在于又容纳容器的贮器或托架内时，例如作为包装说明书，标签与容器相关联。此外，标签可用于指示内容物将用于特定的治疗应用。此外，标签可指示例如在本文所述的方法中内容物的使用说明。在某些实施方案中，药物组合物呈现于包装或分配器装置中，该装置含有一个或多个含有本文提供的治疗性生物制剂的单位剂型。包装例如含有金属或塑料薄膜，例如泡罩包装。或者，包装或分配器装置可附有施用说明书。或者，包装或分配器可以附有与容器相关的通告，它的形式是由管理药物制造、使用或销售的政府机构规定的，该通告反映出该机构批准所述药物形式用于人或兽医学施用。这类通告例如是美国食品和药物管理局批准用于处方药物的标记或是批准的产品插页。在一些实施方案中，制备在相容的药物液体载体中配制的含有本文提供的治疗性生物制剂的组合物，放入适当的容器中，并标记用于治疗所指示的疾患。
在一些情况下，如本文提供的液体组合物在预灌封注射装置，例如注射器或无针注射中进行配制。在一些实施方案中，液体组合物配制成约0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL、2.0mL、2.1mL、2.2mL、2.3mL、2.4mL或约2.5mL的体积。在其它实施方案中，有待施用的组合物的体积是约2.5mL。在某些实施方案中，有待施用的组合物的体积是约2.0mL，优选约1.5mL，更优选约1.0mL，最优选约0.5mL。在优选的实施方案中，从预灌封注射器中分配的组合物的体积是约1.5mL至约2.0mL。
在其它情况下，组合物还包含药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂，例如透明质酸酶。在一些实施方案中，有待施用的组合物，例如与至少一种透明质酸降解剂一起配制的组合物的体积小于约2.0L，例如小于约1.8L、1.5L、1.2L、1.0L、0.8L、0.5L、0.3L、0.1L或约800mL、700mL、600mL、500mL、400mL、300mL、200mL、100mL、90mL、80mL、70mL、60mL、50mL、40mL、30mL、20mL、10mL、9.0mL、8.0mL、7.0mL、6.0mL、5.0mL、4.0mL、3.0mL或约2.5mL。在其它实施方案中，有待施用的组合物少于约20.0mL。在某些实施方案中，有待施用的组合物少于约10.0mL。在某些其它实施方案中，有待施用的组合物少于约5.0mL。
在一些实施方案中，这类药盒包含泡罩包装中的本公开的预灌封注射装置，例如注射器或无针注射。泡罩包装本身里面可无菌。在其它实施方案中，在进行杀菌，例如最终灭菌前，根据本公开的预灌封注射装置，例如注射器或无针注射可以放在这类泡罩包装内。
通过参考以下实施例将会更容易理解一般性描述的公开内容，这些实施例仅出于说明本公开的某些方面和实施方案的目的而包括，并不旨在进行限制。
范例
缩写
Figure BDA0003546294220001141
埃
aa 氨基酸
BSA 牛血清白蛋白
℃ 摄氏度
cm 厘米
d 天
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMA N,N-二甲基苯胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DTE 二硫赤藓糖醇
DTT 二硫苏糖醇
EDT 1,2-乙二硫醇
EDTA 乙二胺四乙酸
eq. 当量
Et 乙基
g 克
h 小时
HPLC 高效液相色谱法
Hz 赫兹
IV 静脉内
kJ 千焦
LC-MS 液相色谱质谱法
m 间
mAb 单克隆抗体
MALDI-MS 基质辅助激光解吸电离质谱法
Me 甲基
MHz 兆赫
min 分钟
μg 微克
μL 微升
μm 微米
μM 微摩尔
mg 毫克
mL 毫升
mm 毫米
mM 毫摩尔
mol 摩尔
nm 纳米
NMP N-甲基吡咯烷酮
p 对
PBS 磷酸盐缓冲盐水
PEG 聚乙二醇
PEGA 聚乙二醇聚丙烯酰胺
ppm 百万分率
ps 皮秒
RP-HPLC 反相-高效液相色谱法
rpm 转/分钟
s 秒
SC 皮下
sec 秒
SEM 扫描电子显微镜法
t 叔
tert 叔
UHMW 超高分子量聚乙烯
ug 微米
UTW 超薄壁
UV 紫外
V 伏
vol％ 体积百分比
wt％ 重量百分比
免疫疗法
熟练的技术人员将理解，免疫疗法可以用于本文所述的实施方案的方法。在治疗有需要的受试者的疾病或疾患，例如癌症、炎性疾病或疾患、免疫性疾病、肾病、皮肤疾病或疾患、或者人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的背景下，免疫治疗剂一般依赖于免疫效应细胞和治疗性生物制剂或免疫效应物的使用，以靶向和治疗疾病或疾患，例如癌症、炎性疾病或疾患、免疫性疾病、肾病、或者皮肤疾病或疾患、或者人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。利妥昔单抗
Figure BDA0003546294220001161
就是这样的一个例子。免疫效应物可以是例如对靶细胞表面上的一些标志物具有特异性的抗体。抗体可以用作疗法的效应物，或者它可以补充其它的细胞以实际上影响细胞。多种效应细胞包括但不限于细胞毒性T细胞和NK细胞。
在一些实施方案中，本文所述的方法特征是一种治疗患者的方法，所述方法通过向患者施用包含在用于皮下施用的组合物中包含至少一种治疗性生物制剂的多个颗粒的组合物，例如如本文所述的组合物。在某些实施方案中，患者患有疾病或疾患。在优选的实施方案中，组合物通过皮下注射器注射以单剂量施用。在其它实施方案中，患者患有癌症、炎性疾病或疾患、免疫性疾病、肾病、或者皮肤疾病或疾患、或者人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
在免疫疗法的某些实施方案中，肿瘤细胞必须负载一些标志物，这些标志物负责靶向大部分其它细胞，，即不存在于大部分其它细胞上。存在着许多肿瘤标志物，它们适合于本实施方案的背景下的靶向。常见的肿瘤标志物包括但不限于CD20、癌胚抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、唾液酸化的路易斯抗原(Sialyl Lewis Antigen)、MucA、MucB、PLAP、层粘连蛋白(laminin)受体、erb B或p155。免疫疗法的另一个方面是将抗癌作用与免疫刺激作用组合。还存在免疫刺激分子，包括但不限于：细胞因子，例如IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN；趋化因子，例如MIP-1、MCP-1、IL-8和生长因子，例如FLT3配体。目前在研究中或使用中的免疫疗法的实例是免疫佐剂，例如牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、二硝基氯苯和芳族化合物(美国专利No.5,801,005和5,739,169；Hui和Hashimoto,1998；Christodoulides等人,1998)；细胞因子疗法，例如干扰素α、β和γ、IL-1、GM-CSF和TNF(Bukowski等人,1998；Davidson等人,1998；Hellstrand等人,1998)；基因疗法，例如TNF、IL-1、IL-2和p53(Qin等人,1998；Austin-Ward和Villaseca,1998；美国专利No.5,830,880和5,846,945)；以及单克隆抗体，例如抗CD20、抗神经节苷脂GM2和抗p185(Hollander,2012；Hanibuchi等人,1998；美国专利No.5,824,311)。考虑一种或多种抗癌疗法可以与本文所述的抗体疗法一同采用。
材料
从一家供应商购得Roche的利妥昔单抗的生物类似药，该供应商提供与FDA标记一致的水性组合物中的抗体，所述标记定义为10mg/mL利妥昔单抗、9mg/mL氯化钠、7.35mg/mL二水合柠檬酸钠和0.7mg/mL聚山梨醇酯80。用于加工颗粒的定制“进料溶液”的组合物是通过修改FDA标记制剂产生的，方式是通过脱盐，接着浓缩并添加所需的赋形剂。从Equitech-Bio公司(Kerrville,TX)获得人IgG。
细胞培养：将DOHH2人B细胞淋巴瘤细胞(DSMZ)维持在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素G/链霉素(streptomycin)的洛斯维·帕克纪念研究所(Roswell Park MemorialInstitute，RPMI)培养基中。
动物：将雌性野生型史泊格多利白化大鼠(Charles River Lab)圈养在Tufts大学比较医学部门(Tufts CMS)的动物机构。所述动物的所有使用，遵照国家研究委员会(National Research Council)的《实验动物管理与使用(Guide for the care and useof laboratory animals)》进行并按照实验动物照护与使用委员会(InstitutionalAnimal Care and Use Committee，IACUC)批准的详细书面方案进行。
将CR雌性CB.17SCID小鼠(Charles River Labs)圈养在Charles River Labs的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经Charles River Labs的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
将雄性(阉割)尤卡坦猪(S&S Farms,Constantine,MI)圈养在CBSET公司的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经CBSET公司的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
将雌性野生型Balb/c小鼠(Charles River Labs)圈养在Tufts大学比较医学部门(Tufts CMS)的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经Tufts CMS的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
如本领域中已知，用于人的治疗有效量也可以从动物模型确定。举例来说，可以配制用于人的剂量以实现被认为在动物中有效的浓度。可通过如上所述监测治疗性生物制剂的效力并调大或调小剂量来调整人中的剂量。基于上述方法调整剂量以实现在人中的最大功效在一般技术者的能力范围内。可在动物模型中配制剂量，以实现包括如在细胞培养物中确定的IC50(实现症状的半最大抑制的剂的浓度)的浓度范围。这类信息可用于更准确地确定人中的有用剂量。可例如通过高效液相色谱法(HPLC)测量血液或组织样品中的水平。一般说来，典型受试者的剂的剂量当量是约1ng/kg至约100mg/kg。
肿瘤异种移植模型：收集70％汇合度的DOHH2人B细胞淋巴瘤细胞，并皮下(SC)施用于雌性CB.17SCID小鼠的腰窝中。以0.1毫升/小鼠的细胞注射体积注射0％Matrigel中1×107DOHH-2肿瘤细胞。在开始处理前，当肿瘤到达80-120mm3的平均尺寸时，进行成对匹配。
方法
FlowCam：使用动态图像分析仪FlowCam测量颗粒大小。将样品在异丙醇中稀释至约1mg/mL，并通过细通道。记录颗粒的图像并根据尺寸和形状进行分析(加权计数)。
ImageJ测量：对SEM图像使用ImageJ分析来测量颗粒直径。对600X图像进行分析。对图像运行ImageJ颗粒分析工具，根据每个对象轮廓识别圆形度>0.8且尺寸>0.5um的对象(加权计数)。目视检查这些轮廓是否适配良好。使用ImageJ直径工具，手动剔除任何错误识别的颗粒，并且手动包括并测量任何遗漏的颗粒。
加速存储方案：将所有样品转移到Wheaton E-Z提取圆底玻璃小瓶中进行老化(2mL或4mL体积，取决于样品)。将玻璃小瓶用石蜡膜密封，置于40℃烘箱中，并在老化期间每天进行目视检查以确保完整性。
粘度测量：除非另外说明，否则使用AR-G2流变仪(TA Instruments)和25mm板在25℃下测量悬浮液粘度。以1000s-1(由边缘效应造成的实验限制)进行测量，其低于27规格针经历的剪切速率，但对于悬浮液来说是在牛顿体系中。每个测量重复三次(重复之间的间隔约60s)以评估悬浮液的短期物理稳定性。在每次测量之前，记录校准标准以确认仪器设置。还可以通过应用哈根-泊肃叶方程(Hagan-Poiseuille equation)使用悬浮液通过针的流速，由注射力计算粘度。
可注射性测量：除非另外说明，否则使用定制的力传感器装置和带有27规格超薄壁针(TSK)的1mL Norm-ject模型注射器，在以0.1mL/s射出1mL悬浮液(400mg/mL颗粒)期间测量注射力。
卡尔费休：采用卡尔费休分析进行水分含量的测试。将大约100mg颗粒在烘箱中加热到105℃，并通过库仑法测定释放的水。
骨架密度：通过气体比重测定法测量骨架密度。气体为氮气或其它相容气体，且颗粒质量可为0.0413g。
颗粒溶解：将磷酸盐缓冲盐水(PBS)添加到干颗粒样品中以产生10mg/mL的最终浓度(颗粒质量/mL溶液)。将样品放在速度设定为“35”和角度设定为“15”的VWR角形摇床上。在1分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、90分钟和120分钟时，从样品小瓶中取出10μL等分试样，测量并记录280nm下的吸光度。将所有样品的Ab，例如mAb浓度对时间作图。
盐含量：通过使用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)测量钠含量来记录盐含量。使用钠标准物(ICPTraceCERT，1000mg/L)准备校准曲线。使用100ppm钠的稀释标准溶液完成质量控制。然后分析溶解在2体积％硝酸(10mL)中的颗粒样品(约15mg)，得到的强度低于约0.5ppm的钠的仪器检测限。这表明钠含量小于0.034wt％，且总盐含量(假设柠檬酸钠和氯化钠已被同等地移除)小于0.1wt％。
尺寸排阻色谱法(SEC)测量：将20μL样品注射液(1mg/mL)在Agilent AdvanceBioSEC(300mm×2.7um，
Figure BDA0003546294220001201
柱)上以在SEC缓冲液(25mM磷酸盐、250mM NaCl pH 6.8)中1mL/min的流速运行15分钟。使用以下参数通过自动积分进行峰分析：斜率灵敏度＝0.5，峰宽＝0，最小峰高(height reject)＝0，最小峰面积(area reject)＝0，肩偏，最小面积百分比(area percent reject)0，标准切线撇去模式，高级基线校正，前伸峰撇去高度比0，拖尾峰撇去高度比0，峰谷比0，撇去谷比0。
差示扫描荧光测定法(DSF)测量：使用QuantStudio 6Flex仪器评估配制之前和之后以及在40℃存储的各个时间点的蛋白质的解链温度。将透析后制备的五微升(5μL)样品(1mg/mL)一式四份装载到96孔热循环仪板上。向每个孔中添加12.5μL超纯去离子水和2.5μL
Figure BDA0003546294220001211
Orange染料(8x)。孵育5分钟后，将样品以0.05℃/s的攀升速率从25℃运行至99℃。使用玻尔兹曼拟合(Boltzmann fit)，使用Protein Thermal Shift软件(ThermoFisher，1.3版)计算解链温度。
圆二色性(CD)测量：使用Jasco J-815仪器评估配制之前和之后以及在40℃存储的各个时间点的蛋白质的二级结构(α螺旋和β折叠)的保留程度。将透析后制备的四百微升(400μL)样品(0.5mg/mL)装载到石英比色皿(1mm路径长度)中。在190-260nm范围内扫描样品。
稀缓冲液用作每个样品的空白扣除。使用以下仪器设定：
光度测定模式：CD、HT
测量范围：260-190nm
数据间距：0.5nm
灵敏度：标准
D.I.T.：4秒
带宽：1.00nm
启动模式：立即
扫描速度：100nm/min
快门控制：自动
基线校正：无
CD检测器：PMT
PMT电压：自动
阳离子交换色谱法(CIEX)测量：使用Agilent BioMAb NP5，4.6×250mm，PEEK离子交换柱，在加速存储条件下在第0天、第7天和第30天对每个样品进行电荷变体分析。在水中过夜透析后，以1mg/mL浓度制备样品。缓冲液A用以下制备：30mM磷酸盐，pH 6.3，和NaCl：0mM。缓冲液B用以下制备：缓冲液A：30mM磷酸盐，pH 6.3加NaCl：175mM。样品以梯度方式运行，以100％缓冲液A开始，经20分钟过程攀升至100％缓冲液B，此后将梯度设定为在接下来的1分钟内返回至100％缓冲液A和0％缓冲液B。在注射下一个样品之前，将系统在100％缓冲液A中再平衡10分钟。以手动撇去峰模式进行积分以反映以下方案中的Agilent数据：https://www.agilent.com/cs/library/applications/5991-5557EN.pdf。
流式细胞术：将100万个Raji细胞(100μL/孔)涂铺在96孔‘V形底’板中的每个孔中，并将10μL起始浓度为200μL的mAb、标记、颗粒或悬浮液添加到孔中。mAb标记、颗粒和悬浮液的稀释因子为3X。将板在4℃下孵育30分钟。将板以2000rpm离心5分钟，并用PBS洗涤3次。以1:200稀释度添加100μL的PE缀合的山羊抗人IgG作为二级抗体。将板以2000rpm离心5分钟，并用PBS洗涤3次。然后将细胞再悬浮于200μL冷PBS中，以在Life TechnologiesAttune NXT流式细胞仪上进行分析。
扫描电子显微镜法：用Hitachi TM3030Plus或TM1000桌面型显微镜收集选定样品的电子显微照片。将样品固定在导电胶带上，并在低真空防带电环境中进行检查，无需进行样品准备。
图像分析：基于(i)最小的颗粒重叠，(ii)颗粒与背景之间良好的对比度，和(iii)提供至少10个像素的颗粒占有率的分辨率，选择选定的显微镜图像用于进一步分析。这允许很容易地识别颗粒并减小基于分辨率的误差。应用二元阈值将颗粒与背景分离，并应用分水岭分割算法来确保单独的颗粒被分开测量。然后将ImageJ工具“Analyze Particles”应用于二元图像，参数如下：0.5与1.0之间的圆形度；5与无穷大平方微米之间的尺寸；在边缘上排除；填充孔。将所识别的颗粒的轮廓覆盖到原始图像上。然后弃去被错误识别的颗粒，例如被识别为单个颗粒的簇或轮廓与颗粒不匹配的颗粒。通过手动描绘颗粒的轮廓并使用ImageJ的测量工具来测量遗漏颗粒。
密度分析：通过用AccuPyc II 1340气体置换比重测定系统检查大约0.1g粉末来测定来自选定样品的颗粒的骨架密度。
水含量分析：通过将大约0.1g粉末放在具有卡尔费休滴定仪的真空烘箱中并加热样品来测定来自选定样品的颗粒中的残留水分。
ELISA测定：对选定样品使用ELISA测定，从而以变性敏感的方式检测人抗体。首先将人IgG在PBS中涂铺1小时，接着用洗涤缓冲液(PBS+0.05％吐温20)洗涤三次，持续4分钟，接着用在洗涤缓冲液中的2％BSA(Sigma)封闭45分钟，接着与稀(20μg/mL)蛋白A-HRP(Abcam)一起孵育45分钟，接着用洗涤缓冲液洗涤三次，持续3分钟，接着与TMB(Abcam)一起孵育10分钟，最后接着用STOP溶液(Abcam)淬灭反应。在Thermo Multiskan Spectrum上进行比色读出。
亚可见颗粒(SvP)分析：用Fluid Imaging Technologies FlowCam PV-100系统分析亚可见颗粒(SvP)。将用于分析的样品在无菌离心管中用过滤水(Milli-Q)复原至所关注的浓度。此后研究了三组样品。这些样品包括(i)用于复原的稀释液样品，(ii)用于颗粒形成过程的进料溶液的等分试样，即第一液体的样品，以及(iii)复原的物质。
加速存储：除非另外说明，否则选定样品在加速条件下进行存储，方式是通过在孵育箱或烘箱中将它们在高温(40℃)下保持限定的时间段。将样品保存在2mL或4mL的Wheaton玻璃小瓶中，并用石蜡膜密封。
氦离子显微镜法(HIM)：使用HIM仪器收集选定样品的离子显微照片。源能量、工作距离和孔口尺寸通常分别为29keV、9mm和10微米。对于选定样品，使用聚焦镓离子束来切割颗粒以分析内部结构。对倾斜的样品进行烧蚀，源电流、停留时间和切割间距分别为300pA、0.5-1μs和2-5nm。
X-射线光电子能谱法(XPS)：将少量粉末沉积到附着于一件硅晶片的烃带上，并轻轻按压以形成致密均匀的床层。通过轻轻敲击晶片件的边缘移除过量的松散粉末。在临分析前制备样本。使用单色Al KαX-射线(1486.6eV)，用Kratos Axis Ultra光谱仪进行XPS测量。对于每个样品，从测定表面元素组成的大约2mm×1mm(通能＝160ev；225W功率)的区域获取调查光谱。使用磁聚焦电子束作为泛电流(flood current)来实现电荷补偿。用于分析的标准光电子出射角为90°，给出的采样深度在5-8nm范围内。使用假设探测样品体积均匀的定量模型分析表面元素组成。
反相气相色谱法(IGC)：使用反相气相色谱法分析粉末样品。用200至300mg粉末样品填充圆柱形柱以构成固定相。在惰性气体吹扫之后，将一系列气体探针注射到柱上。测定每个探针的保留体积能够评价每个样品的表面能的色散和极性分量。
X-射线衍射(XRD)：将样品装入0.7mm直径的玻璃毛细管中。在装备有入射束聚焦镜和X’Celerator检测器的PANalytical Empyrean衍射仪上测量粉末图。使用Mo Ká辐射测量图(1-50°2θ，0.0167113°步长，4秒/步长，1/4°发散狭缝，0.02弧度索勒狭缝(Sollerslit))。如果静电效应(对于评价冻干对照的情况，这在研钵和研杵中研磨后发生)阻止将样品装入毛细管中，则在配备有LynxEye位置敏感检测器的Bruker D2 Phase衍射仪上由平板样本测量其粉末图。使用Cu Kα辐射从5-100°2θ以0.0202144°步长测量图，计数1.0秒/步长。采用标准仪器设置(30kV，10mA，0.6mm发散狭缝，2.5°索勒狭缝和3mm散射屏高度)。
微流颗粒筛分(MPS)：使用FlowCam PV-100进行用于粒度分析的流动成像显微镜法。为了研究粒度和颗粒的分散性，经由超声处理将5mg粉末分散在10mL无水异丙醇中。异丙醇连续相阻止颗粒溶解，即阻止复原。将0.3mL注射到细胞中，并采用0.15毫升/分钟的流速拍摄颗粒的图像。分析中报告了圆形度大于0.9的颗粒，并从分析中剔除了任何重像，得到在1至100μm范围内的颗粒的尺寸分布和分散度。
动态蒸气吸附(DVS)：使用动态水蒸气吸附分析粉末。将大约50mg粉末样品装载到仪器的微量天平盘中。将样品等温保持在22℃，并在整个测量过程中监测样品质量。在0％RH吹扫以移除表面水之后，样品室中的相对湿度(RH)以每小时4％RH的恒定速率攀升至90％RH。将样品在90％RH下保持一小时，然后作为阶跃变化，将RH降低至0％。将样品在0％RH下保持一小时，此后终止测量。
动态扫描量热法(DSC)：使用动态扫描量热法分析粉末样品。将质量为5至10mg的粉末样品装载到铝坩埚中并密闭密封。将坩埚装载到仪器中，并监测进入样品的热流，同时使温度以5℃/分钟的恒定速率从30℃攀升至250℃。
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)：将25μL体积的Raji细胞按12,500个细胞/孔涂铺在96孔板中，接着添加25μL起始浓度为2μg/mL的mab，并在其上进行3倍连续稀释。按75,000个细胞/孔添加每孔25μL体积的效应细胞，并将板在37℃孵育箱中孵育6小时。然后将板在室温下平衡15分钟。将30μL荧光素试剂添加到每个孔中。使用ThermoScientific Varioskan LUX光度计测量发光。
USP<790>：根据USP<790>标准，在大于2000lux的光照条件下，以白色和黑色为背景目视观察溶解颗粒的样品。背景选择哑光高密度聚乙烯板以减少眩光。用照度计(Dr.Meter，LX1330B)确认观察点的照度。将样品打旋，之后举到背景上并观察5秒钟。
实施例1.在目标尺寸和分散性范围内的Ab颗粒的产生
形成利妥昔单抗或人IgG颗粒并提供10mg的颗粒用于分析。基于粒度分析(FlowCamTM)报导平均粒度D10、D50和D90(加权计数)。颗粒具有以下特征：平均尺寸在4-25μm之间；D90<35μm；平均直径＝6.42μm；以及D10/D50/D90＝4.67/6.36/8.23μm。基于这些研究，颗粒满足所要求的标准。
实施例2.Ab颗粒的平均粒度的测定
获得每个批料的利妥昔单抗或人IgG颗粒的SEM。以1000X放大率拍摄图像。使用ImageJ分析进行图像处理和统计资料，加权计数。测得颗粒的平均粒度D10、D50和D90具有在5-25μm之间的平均粒度，并且D90<35μm。颗粒具有以下粒度统计资料：平均直径＝5.18μm；以及D10/D50/D90＝3.82/5.07/6.70μm。基于这些研究，颗粒满足所要求的标准。
实施例3.具有高浓度和低粘度的稳定的Ab颗粒组合物的产生
单位“mPa·s”和“cP”在本文中在最广泛的意义上可互换使用。
流变学：建立具有以下特征的利妥昔单抗或人IgG颗粒的悬浮液：蛋白质负荷>250mg/mL和表观粘度<20cP(mPa·s)。使用平行板流变仪或本领域中已知的其它方法测量粘度。在两种不同的载体中制备多种浓度的悬浮液。载体A被欧盟批准用于上市药物中。载体B还没有被批准用于任何上市药物中，但化学家族与载体A相同，具有较低的粘度和有利的毒性特征。在载体B中，在20cP(mPa·s)下，Ab浓度越过300mg/mL，满足标准。当考虑较低粘度的载体时，可实现甚至更高的浓度。
流变学(40℃下第0天、第7天、第30天)：随着时间的推移追踪颗粒悬浮液的粘度，以保证在7天和30天加速存储期间粘度变化不超过5％。在每个时间点，悬浮液的粘度<20cP(mPa·s)，蛋白质负荷>250mg/mL。基于280mg/mL蛋白质悬浮液的制备，满足浓度条件。立即测量第0天样品。根据以上概述的老化程序使第7天和第30天样品老化。在1000s-1的剪切速率下进行测量。在第0天，在16.87cP下测量悬浮液的粘度。在第7天，粘度降低至16.33cP。在第30天，与第0天相比，粘度增加29％，达到21.83cP，并且略微超过20cP的界限。然而，使用这样的小板(25mm)、小仪器间隙(150微米)和小样品体积，估计测量的误差可高达30％。
可注射性：测量将悬浮液注射通过针的力，并证实注射力保持低于30N。将280mg/mL蛋白质(400mg/mL颗粒)的利妥昔单抗或人IgG的悬浮液装载到具有27G针的注射器中。记录所得到的力，并对体积作图。为供参考，比较使用15mPa·s标准使装备有注射器针的空注射器致动的力，结果显示，注射力均低于30N。
卡尔费休滴定：使用卡尔费休滴定测定固体颗粒的水含量以界定颗粒的组分构成。测量颗粒的水含量，记录，并确定为1.89wt％。
密度：使用骨架密度分析测定固体颗粒的密度，测得为1.3g/cm3。因此，颗粒的高密度允许每个颗粒的剂量负荷最佳。
盐：测定固体颗粒的NaCl含量以界定颗粒的组分构成。测量盐含量，记录为<0.1wt％。
溶解：在第0天、第7天和第30天，记录每个制剂的溶解速率。在多个时间点记录溶解情况，证实颗粒在约20分钟内溶解，悬浮液在约60-80分钟内溶解。使颗粒和悬浮液溶于PBS中，达到10mg/mL的最终浓度，并在摇床上摇动。在第0天、第7天和第30天的颗粒溶解也存储在40℃下。
USP<790>：测定颗粒的溶解样品中可见颗粒的存在。使用USP<790>来确定是否存在“可见”范围(>100um)内的颗粒。使用溶解制剂的观察结果来评定可见颗粒的存在。在适当的光照下，以白色和黑色为背景简短观察(5秒钟)。观察到一些潜在的小颗粒，但很难肉眼看见，可能将它们分类为亚可见颗粒。考虑到这些颗粒可能被视为是亚可见的，如下所述使用其它的方法进一步研究。
亚可见颗粒分析：研究溶解颗粒中存在的亚可见微粒物质。在颗粒溶解之后进行亚可见颗粒分析。将这一数据与其它竞争的颗粒形成技术进行比较。通过颗粒分析仪分析SvP，其中颗粒计数针对对照样品中的背景信号进行调整。在样品中测量的亚可见颗粒计数低于任何其它的完善技术，包括标准冻干。
实施例4.通过结构测定法研究颗粒形成后蛋白质结构的变化和稳定性(40℃下第0天、第7天、第30天)
尺寸排阻色谱法(SEC)：目标是收集SEC数据，以评定经历加工和存储在40℃下30天的蛋白质单体的降解。基于FDA-标记、颗粒和悬浮液进行SEC。获得每个样品的单体、聚集体和片段数据。记录SEC数据，证明了经历加工和在40℃下存储后存储第0天、第7天和第30天的蛋白质单体具有优良的稳定性。与单体保存各>98％的颗粒和悬浮液制剂相比，FDA标记的30天样品的单体保存情况较差。由加工颗粒引起的聚集体小幅增加可以通过如下所述改良配制来解决。
配制：设计另一种制剂，它具有较低的聚山梨醇酯、组氨酸和较高的盐含量，目标是减少颗粒加工步骤之后聚集体初始的小幅增加。通过降低聚山梨醇酯80的量并再引入一小部分因脱盐而被去除的盐，略微改变制剂，从而减少物质的初始分解。数据表明，经历加工的聚集体和单体变化的差异几乎不可测量，证明了经历加工的聚集体的累积较低(约0.1％)。
扫描荧光测定法(DSF)：目标是产生与FDA-标记制剂相比，在40℃下存储30天之后解链温度变化<2℃的蛋白质颗粒和悬浮液制剂。在40℃下存储后第0天、第7天和第30天，对FDA-标记、颗粒和悬浮液进行DSF。数据显示，观察到所有样品的解链温度的变化均小于1℃。多达2℃的变化一般都被公认为微不足道的。
圆二色性(CD)：目标是证实经历加工和存储后蛋白质颗粒制剂的二级结构被保存下来。成功的标准是与FDA-标记CD数据显著重叠，并报告每个样品的β-折叠百分比。证实所有时间点的数据与报告的β折叠显著重叠。时间第30天突出显示了由在217nm下观察到的谷表示的β折叠结构的相似性。获得CD数据，并进行比较，以证明测试的所有样品间所有时间点的显著重叠以及β折叠百分比。
阳离子交换色谱法(CIEX)：收集CIEX数据，以评定经历加工和在40℃下存储30天后电荷变体物质的分布和它们的变化。对FDA-标记、颗粒和悬浮液进行CIEX。获得每个样品的酸性、主要和碱性物质数据，并进行分析。选定CIEX数据点突出显示了标记制剂经历酸性变化，相比之下老化30天后固体颗粒缺乏这类变化。颗粒类似于未加工材料，而标记制剂经历降解。按照提议，记录CIEX数据，证明了经历加工和在40℃下存储后存储第0天、第7天和第30天的电荷变体具有优良的稳定性。与颗粒和悬浮液制剂相比，由于变体发生酸性变化，FDA-标记30天样品的电荷变体分布保存得极差。
蛋白质的聚集、片段化和电荷变体的变化：一般地，除非另外说明，否则使用尺寸排阻色谱法(HPLC-SEC)收集聚集和片段化数据。除非另外说明，否则使用强阳离子交换色谱法(CIEX)收集电荷变体物质的分布和它们的变化。
实施例5.通过体外功能测定法研究颗粒形成后的Ab活性和稳定性(40℃下第0天、第7天、第30天)
流式细胞术：目标是产生与FDA-标记制剂相比，在40℃下存储30天之后结合活性保存>95％的颗粒和悬浮液制剂。在40℃下存储后第0天、第7天和第30天，对FDA-标记、颗粒和悬浮液进行流式细胞术。每个数据点以平均值和表示标准差的误差线一式三份产生。所有样品均证明，在每个时间点都没有观察到样品间的显著差异，结合活性保存>95％。
抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：目标是产生与FDA-标记制剂相比，在40℃下存储30天之后ADCC活性保存>95％的蛋白质颗粒和悬浮液制剂。在40℃下存储后第0天、第7天和第30天，对FDA-标记、颗粒和悬浮液进行ADCC。每个数据点以平均值和表示标准差的误差线一式三份产生。第0天，与FDA-标记相比，蛋白质颗粒和悬浮液存在略低的信号，这一点符合由初始加工引起的蛋白质单体轻微损失。在30天的过程中，更稳定的固体制剂(颗粒和悬浮液)能够保存它们的功能，这一点与单体和电荷变体与FDA-标记制剂相比更好地保存是一致的，并使得颗粒和悬浮液制剂优于FDA-标记制剂。
实施例6.可注射性
将平均滑动力对最多650mg/mL的颗粒悬浮液浓度作图。针对固体和球状颗粒的浓缩悬浮液，使用Krieger-Dogherty模型拟合数据。20N(牛顿)被视作典型滑动力极限的参考。
27规格UTW针：使用油性载体作为液相，建立浓度在0至650mg/mL范围内的蛋白质颗粒悬浮液。用吸移管将1mL悬浮液填充在1mL长的ISO标准可预灌封注射器。将27规格UTW13mm(半英寸)针(Japan Bio Products)连接于注射器。在施加压缩前，将每个注射器的气泡推出，并手动震荡10秒。使用质构仪(Mark-10 ESM303)以189.4mm/min的速率向注射器柱塞施加稳定的压缩，该速率与0.1mL/s的体积射出速率相关。确定每种悬浮液浓度的滑动力。
30规格UTW针：使用15％PEG作为水性载体和作为液相，建立300mg/mL的蛋白质颗粒悬浮液。用吸移管将0.25mL悬浮液填充在1mL鲁尔锁(luer-lock)注射器(BD)。将30规格UTW 13mm(半英寸)针(Japan Bio Products)连接于注射器。在施加压缩前，将每个注射器的气泡推出，并手动震荡10秒。将测力传感器(Honeywell FSS1500NST)放在线性致动器上，并且该系统以111mm/min的速率向注射器柱塞施加稳定的压缩，该速率与0.033mL/s的体积射出速率相关。确定每种悬浮液浓度的滑动力。在这种情况下确定滑动力为11.5N。
悬浮液注射力和粘度：准备Mark-10测量以0.1mL/s推动1mL长的注射器的力。通过震荡30秒钟，使悬浮液再分散于小瓶中。检查小瓶的任何颗粒块或非分散体。移开盖子，并使用吸移管将1mL悬浮液装载到1mL长的注射器中。添加West NovaPure塞子并将空气从注射器中推出。将27g UTW针(Japan BioProducts)添加到注射器的鲁尔锁中。将注射器装载到Mark-10中，并测量力转换特征。还使用空白注射器以测量空白力。一般地，使用板锥几何法测量粘度。锥是25mm，并具有3度的角度。测量以950 1/s进行。
实施例A：用1mL悬浮液填充1mL长的注射器(内径6.35mm)，该悬浮液以油酸乙酯为载体并且蛋白质(Ab)颗粒负荷为642mg/mL，并且粘度为约94mPa·s。用涂有含氟聚合物的塞子(West Novapure)塞住注射器。将27g×13mm UTW针(Japan BioProducts)连接到注射器的鲁尔锁中。使用Mark-10施加0.1mL/sec的流速并测量力特征。滑动力是22.69N。
实施例7.药物动力学(PK)：与IV剂量相比两种皮下制剂具有类似的生物利用率
配制：研究范围涉及四个具有以下制剂的群组：1)IV Ab水性：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80；2)SC Ab水性：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80；3)SC Ab颗粒组合物：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒组合物，然后悬浮在油酸乙酯(非水载体媒介物)中。悬浮液的浓度是20mg/mL；以及4)SC悬浮液媒介物：油酸乙酯(非水载体媒介物)。
动物：将雌性野生型史泊格多利白化大鼠(Charles River Lab)圈养在Tufts大学比较医学部门(Tufts CMS)的动物机构。所述动物的所有使用，遵照国家研究委员会的《实验动物管理与使用指南》进行并按照实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准的详细书面方案进行。
给药、研究设计和分析：使用100μL Hamilton玻璃注射器用27规格针实现所有颗粒组合物的注射。使用300μL胰岛素注射器用钉入型30规格针实现所有水性和非水媒介物的注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使颗粒在注射器中彻底再悬浮。在装载悬浮液后，在即将注射动物时将每个注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤，这可防止因沉降而导致任何剂量损失，从而确保了剂量准确性。史泊格多利大鼠用于这项研究。使用以下研究设计：1)IV Ab水性：剂量＝10mg/kg；体积＝100μL；n＝4；2)SC Ab水性：剂量＝10mg/kg；体积＝100μL；n＝5；3)SC Ab颗粒组合物：剂量＝10mg/kg；体积＝100μL；n＝5；4)SC悬浮液媒介物：体积＝100μL；n＝3。在0小时、3小时、6小时、9小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、9天、12天、(14天、16天、19天、21天和23天：这些时间点低于利用的测定的检测极限)收集血浆样品。在所有的数据点通过尾静脉放血从每只大鼠收集血液于EDTA毛细管(紫色)中。使用ELISA将从血液获得的血浆稀释到10,000倍。使用抗人IgG ELISA测定法，通过第三方合同研究组织(Ray Biotech：
Figure BDA0003546294220001331
人IgGELISA试剂盒)评定血浆样品。
实施例8.功效：皮下配制在异种移植模型中显示类似的功效
配制：研究范围涉及三个具有以下制剂的群组：1)未处理：没有药物或注射安慰剂；2)SC Ab水性：2mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、0.4mg/mL组氨酸、0.1mg/mL海藻糖、0.07mg/mL氯化钠和0.06mg/mL聚山梨醇酯80；和3)SC Ab颗粒组合物：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯(非水载体媒介物)中。制造的悬浮液的浓度是20mg/mL。
动物：将CR雌性CB.17SCID小鼠(Charles River Labs)圈养在Charles RiverLabs的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经Charles River Labs的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
细胞培养：将DOHH2人B细胞淋巴瘤细胞(DSMZ)维持在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素G/链霉素的洛斯维·帕克纪念研究所(RPMI)培养基中。
肿瘤异种移植模型：收集70％汇合度的DOHH2人B细胞淋巴瘤细胞，并皮下(SC)施用于雌性CB.17SCID小鼠的腰窝中。以每只小鼠0.1mL的细胞注射体积注射0％Matrigel中1×107DOHH-2肿瘤细胞。在开始处理前，当肿瘤到达80-120mm3的平均尺寸时，进行成对匹配。
给药、研究设计和分析：使用100μL Hamilton玻璃注射器用27规格针实现所有颗粒组合物的注射，并使用300μL胰岛素注射器用钉入型30规格针进行所有水性注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使颗粒在注射器中彻底再悬浮。在装载悬浮液后，在即将注射动物时将每个注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤。这可防止因沉降而导致任何剂量损失，从而确保了剂量准确性。具有DOHH2细胞异种移植模型的Fox Chase SCID小鼠(Charles River Labs)用于这项研究。使用以下研究设计：1)未处理：n＝12；2)SC Ab水性：剂量＝10mg/kg；体积＝100μL；给药频率：每周2次，n＝12；和3)SC Ab组合物：剂量＝10mg/kg；体积＝10μL；给药频率：每周2次，n＝12。使用卡尺测量肿瘤体积并且两周测量一次。使用下式计算肿瘤体积：V(mm3)＝(L×W2)/2。
实施例9.生物分布：制剂显示从SC注射部位完全吸收并且生物分布与标准水性mAb相比类似
设计：为了这项研究，从CRL购买史泊格多利大鼠。研究范围涉及4个群组，即利妥昔单抗水性IV注射、利妥昔单抗水性SC注射、利妥昔单抗组合物SC注射和媒介物对照SC注射。研究是单剂量研究，其中向动物给与大约100μL 10mg/kg药物，或在媒介物对照的情况下只给与媒介物。在每次注射的情况下注射体积根据体重进行调整。在以下时间点收集血浆样品并分析：0小时、3小时、6小时、9小时、1天、2天、3天、5天、6天、7天、9天、12天、14天、16天、19天、21天和23天。使用人IgG ELISA试剂盒(
Figure BDA0003546294220001342
人IgG ELISA试剂盒)分析来自血浆样品的蛋白质的生物利用率。
给药和再悬浮：使用300μL胰岛素注射器进行所有水性和媒介物注射，而使用100μL Hamilton气密注射器用27规格超薄壁(UTW)针进行所有悬浮液注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使颗粒在注射器中彻底再悬浮。所述方案涉及装载注射器，并在即将注射动物时将注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤。这确保了剂量准确性并防止因沉降而导致任何剂量损失。
血浆收集和加工：在所有的数据点通过尾静脉放血从每只大鼠收集血液。使用ELISA将从血液获得的血浆稀释到10,000倍。通过Raybiotech使用
Figure BDA0003546294220001341
人IgG ELISA试剂盒进行夹心式ELISA。
结果：获得的数据显示颗粒组合物具有与皮下递送的水性利妥昔单抗几乎相同的生物利用率(在误差限度内)。与水性利妥昔单抗IV臂相比，研究的两个皮下臂的生物利用率为约40％，类似于先前研究的发现并如文献中所指示。23天研究直到第12天的数据表明，在第12天后药物的血浆浓度低于测定的检测极限。还发现来自媒介物对照的信号低于测定的检测极限，因此被认为是背景噪声。这些研究已经显示在啮齿类动物的两个物种中的PK特征，表明了通过SC注射递送的颗粒组合物在减少肿瘤方面与同样通过SC注射递送的水性利妥昔单抗制剂相比具有类似的作用。
实施例10.安全性和毒性：在来自所有组的动物间的单剂量小鼠病变发现表明没有毒性或病变
配制：这项研究的范围涉及两个具有以下制剂的群组：1)SC高浓度人mAb水性：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80。然后将水性制剂浓缩成141.54mg/mL，以形成制剂的高浓度型式。2)SC Ab组合物：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯(非水载体媒介物)中。悬浮液的浓度是300.88mg/mL。
动物：将雄性(阉割)尤卡坦猪(S&S Farms,Constantine,MI)圈养在CBSET公司的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经CBSET公司的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
给药、研究设计和分析：使用与27规格针一起使用的塑料BD鲁尔锁注射器进行所有的注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使蛋白质颗粒在注射器中彻底再悬浮。在装载悬浮液后，在即将注射动物时将每个注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤。这可防止因沉降而导致任何剂量损失，从而确保了剂量准确性。尤卡坦(雄性)猪用于这项研究。使用以下研究设计：1)SC高浓度mAb水性：剂量＝10mg/kg；n＝1；和2)SC Ab水性：剂量＝6mg/kg和14mg/kg；n＝2。在0小时、2小时、4小时、8小时、12小时、1天、3天、5天、7天、10天、14天和18天收集血浆样品。在所有的数据点从每只猪收集血液于EDTA毛细管中。使用ELISA将从血液获得的血浆稀释到10,000倍。使用抗人IgGELISA测定法，通过第三方合同研究组织(Ray Biotech：
Figure BDA0003546294220001361
人IgG ELISA试剂盒)评定血浆样品。
实施例11.免疫原性
配制：研究范围涉及四个具有以下制剂的群组：1)SC mAb水性：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80；2)SC mAb组合物：20mg/mL利妥昔单抗(抗CD-20抗体)、4mg/mL组氨酸、1mg/mL海藻糖、0.7mg/mL氯化钠和0.6mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯(非水载体媒介物)中；和3)SC悬浮液媒介物：油酸乙酯安慰剂。
动物：将雌性野生型Balb/c小鼠(Charles River Labs)圈养在Tufts大学比较医学部门(Tufts CMS)的动物机构。正式地审查所有的动物程序，并经Tufts CMS的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
给药、研究设计和分析：使用100μL Hamilton玻璃注射器用27规格针实现所有颗粒组合物的注射。使用300μL胰岛素注射器用钉入型30规格针实现所有水性和非水媒介物的注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使颗粒在注射器中彻底再悬浮。在装载悬浮液后，在即将注射动物时将每个注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤。这可防止因沉降而导致任何剂量损失，从而确保了剂量准确性。10周龄Balb/c雌性小鼠(Charles River Lab)用于这项研究。使用以下研究设计：1)SC mAb水性：剂量＝10mg/kg；体积＝100μL；n＝4,2)SC mAb组合物：剂量＝10mg/kg；体积＝10μL；n＝4；3)SC悬浮液媒介物：体积＝10μL；n＝2。在第0天、第7天、第14天、第18天和第42天收集血浆样品。在所有的数据点通过面静脉放血从每只小鼠收集血液于EDTA毛细管中。将从血液获得的血浆稀释到2,500倍，以使用Meso Scale
Figure BDA0003546294220001371
电化学发光(MSD-ECL)平台进行分析。用同等浓度(0.5μg/ml)的SULFO-TAG和生物素化利妥昔单抗制成主混合物，在测定稀释剂(含0.02％吐温20的PBS中的1％MSD封闭剂A)中稀释。通过以1000ng/mL、333ng/mL、111ng/mL、37ng/mL、12ng/mL、4ng/mL、1ng/mL和0ng/mL连续稀释小鼠抗利妥昔单抗抗体(GenScript A01970-40)来制成ADA标准曲线。首先，将50μL主混合物添加到圆底96孔聚丙烯板的每个孔中。然后，将25μLADA标准或4％血浆样品添加到每个孔中。将板密封并在4℃下在中度震荡下孵育过夜。将150μL封闭溶液(PBST中3％w/v MSD封闭剂A)添加到96孔链霉亲和素板(MSD L55SA)的每个孔中。将板密封并在室温下在中度震荡下孵育至少30分钟，然后用200μLPBST洗涤。将50μL溶液从聚丙烯板的每个孔转移到链霉亲和素板。然后将板密封并在室温下在400-700rpm震荡下孵育1小时，接着用200μL PBST洗涤3次。将150μL 2X读板缓冲液添加到每个孔中。使用MSD QUICKPLEX仪器分析板。
实施例12.混浊度
注射在患者中的治疗性生物制剂组合物应基本上不含可见颗粒，应由有限数目的尺寸超过10微米的不溶蛋白质颗粒组成。在本公开中，预想将呈非水悬浮液的蛋白质微球注射到人类患者中。在注射到体内后，优化的制剂将引起治疗性生物制剂在与患者体内的生物流体接触后完全溶解。为了模拟这种溶解行为，通常利用混浊度测定法。简单地说，由治疗性生物制剂和其它组分组成的蛋白质微球暴露于有限量的水，从而在溶解后获得最终浓度为50mg/mL的治疗性生物制剂。将所得到的溶液转移到可为UV透射的比色皿中。然后，使用UV/Vis分光光度计，使用405nm入射光，测量50mg/mL浓度的溶解的治疗性的吸光度。在溶解之后颗粒中不溶聚集体的存在引起蛋白质制剂的混浊度与在加工前类似组合物的单体形式相比增加。
为了确定将使混浊度因加工而发生的变化最少的配制条件，开发一种按比例缩小的模型，例如管中颗粒(PIT)法。这一按比例缩小的模型能够以工艺规模模拟蛋白质聚集，同时对材料的需求少20倍，时间需求少100倍。这样增加的生产量能够快速而且大范围地筛选配制条件，包括溶液pH值、缓冲物质、表面活性剂、糖、盐、氨基酸、碳水化合物等，使加工期间的混浊度变化低。使用定制的I-最优实验设计(DoE)经验模型进一步优化所筛选的显示最有希望的作用的配制参数，如以下实施例中所指示，以所关注的多种蛋白质重量负荷产生几种最优制剂。
实施例A：开发一种由固相中70wt％治疗性生物负荷和30wt％赋形剂组成的组合物。由45mg/mL Ab、13.8mg/mL盐酸精氨酸、1.2mg/mL羟丙基β-环糊精和0.01wt％PS 80组成的组合物在溶解之后混浊度发生0.000单位变化，可溶性聚集体发生0.0％变化。因此，Ab分子在经历将单体形式转化成固体颗粒形式所需的加工步骤后完全不会发生不可逆的聚集。
实施例B：开发一种由固相中具有80wt％治疗性生物负荷和20wt％赋形剂的蛋白质颗粒组成的组合物。由51mg/mL Ab、9.0mg/mL盐酸精氨酸和0.01wt％PS 80组成的组合物在溶解之后混浊度发生0.014单位变化，可溶性聚集体发生0.8％变化。
实施例C：开发一种由固相中具有85wt％治疗性生物负荷和15wt％赋形剂的蛋白质颗粒组成的组合物。由54mg/mL Ab、6.0mg/mL盐酸精氨酸和0.01wt％PS 80组成的组合物在溶解之后混浊度发生0.034单位变化，可溶性聚集体发生1.5％变化。
实施例D：还使用二喹啉甲酸作为检测试剂来测量混浊度。
实施例13.透明质酸酶的施用允许增加通过皮下注射器注射施用的组合物的体积和流体分散
配制：研究的范围涉及具有两组注射部位的一种动物，制剂如下：第1组注射部位)SC Ab组合物：45.5mg/mL人免疫球蛋白G、1.5mg/mL mg/mL组氨酸、19.5mg/mL L-精氨酸HCL和0.5mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯中。悬浮液的浓度是30mg/mL蛋白质；和第2组注射部位)SC Ab组合物在预先注射透明质酸酶之后施用：i)8.5mg/mlNaCl、10mM柠檬酸-柠檬酸钠、0.9mg/ml EDTA-2Na、0.3mg/ml CaCl2 pH 5.2中150U透明质酸酶(Creative Biomart)；ii)SC Ab组合物：45.5mg/mL人免疫球蛋白G、1.5mg/mL mg/mL组氨酸、19.5mg/mL L-精氨酸HCL和0.5mg/mL聚山梨醇酯80，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯中。悬浮液的浓度是30mg/mL蛋白质。
动物：小型猪是一种临床前模型，由于它与人皮肤在解剖学上相似并且在临床上可转化，所以它适合于评估生物治疗剂的皮下(SC)施用条件(Mahj等人,Exp Toxicol Path57:341-5,2006)。将月龄>3的雄性(阉割)格丁根小型猪(Gottingen Miniature Pig)(家猪(Sus scrofa domestica)，Charles River Laboratories)圈养在Charles RiverLaboratories公司的动物机构，并准备用于研究。正式地审查所有的动物程序，并经Charles River Laboratories公司的实验动物照护与使用委员会(IACUC)批准。
给药、研究设计和分析：使用与27规格针一起使用的3mL塑料BD鲁尔锁注射器进行多种体积的所有注射。在给与悬浮液的情况下执行涡旋方案以使颗粒在注射器中彻底再悬浮。在装载悬浮液后，在即将注射动物时将每个注射器涡旋5秒，每个中针先面朝上，接着针面朝下，最终是水平位置的涡旋步骤。这可防止因沉降而导致任何剂量损失，从而确保剂量准确性。格丁根(雄性)猪用于这项研究。在第一组注射部位中，根据以上详述的程序制备的含有30mg/mL人免疫球蛋白类型G的Ab的组合物经皮下施用于被麻醉的格丁根小型猪的腹部，直到在给药期间遇到任何抗性和可能已经施用额外的体积时。平均体积是1.4mL，平均注射速率是0.025mL/sec。研究终点包括注射体积的测量和注射部位的质量评定。在第二组注射部位中，被麻醉的格丁根小型猪预先注射1mL 2000U/mL透明质酸酶，透明质酸酶施用于被麻醉的格丁根小型猪的腹部。在约5-10分钟时间段后，根据以上详述的程序制备的含有30mg/mL人免疫球蛋白类型G的Ab的组合物经皮下施用于被麻醉的格丁根小型猪的腹部，直到在给药期间遇到任何抗性和可能已经施用额外的体积时。平均体积是2.2mL，平均注射速率是0.045mL/sec。研究终点包括Ab注射组合物的注射体积的测量和注射速率和注射部位的质量评定。所有注射都使用相同的注射力进行。
结果：这项研究的目标是确定当作为单次剂量皮下给与小型猪时可给与的最大可行体积。实验表明，皮下施用的Ab颗粒组合物的注射体积可通过预先注射透明质酸酶来增加，如通过处理部位处所形成的皮肤气泡的外观以及注射的时间和体积所确定，这些注射透明质酸酶的位点显示Ab颗粒组合物的注射速率提高。
实施例14.无针喷射注射
配制：使平均尺寸为约30μm的人IgG颗粒悬浮在玉米油中。测量颗粒的质量并与适当体积的玉米油混合，产生125mg/mL和200mg/mL所需浓度的蛋白质。125mg/mL：颗粒重量(g)0.5；玉米油体积(mL)，最多4mL。200mg/mL：颗粒重量(g)0.97；玉米油体积(mL)，最多5mL。
研究设计和分析：对孔径为约250μm的无针喷射注射装置(PharmaJet,Cambridge,MA)进行校准，以玉米油制剂递送颗粒。将无针喷射注射装置装载好并准备注射。将两种浓度(125mg/mL和200mg/mL)的制剂注射到凝胶中，凝胶用于模拟皮下和肌内组织深度，并显示注射深度和形状的可重复性。首先，将两种制剂注射到具有已知的注射特征的凝胶中。然后，将含有蓝色染料的盐水溶液注射到凝胶中，这提供了皮下和肌内组织深度的校准。结果显示，玉米油中每种浓度的颗粒的注射匹配凝胶中蓝色染料盐水注射的注射深度特征和形状。这些发现证明了颗粒制剂与无针喷射注射装置兼容使用。
实施例15.颗粒和悬浮液质量研究
设计：在5℃、25℃和40℃下在三个月的过程中评定蛋白质颗粒悬浮液的稳定性，以测定与蛋白质液体原料药(LDS)相比颗粒制剂的稳定性。
制剂：组合物：300-400mg/mL蛋白质、按质量计67-77％蛋白质、21.55-15.05mg/mL赋形剂，配制成颗粒，然后悬浮在油酸乙酯中。
通过切向流过滤(TFF)进行缓冲液更换：通过渗滤所需的缓冲液混合物来制备蛋白质进料溶液。使用装备有中空纤维过滤器组件(MiniKros Sampler)的KrosFlow KR2iTFF系统(Repligen)进行进料制备。针对每种制剂，使用适当的缓冲液进行多次渗滤体积更换。
SEM成像：使用扫描电子显微镜(Hitachi，TM-1000)使颗粒成像。将颗粒样品安放到粘合台上以供分析。使用15kV的加速电压，在变化的放大率下捕获图像。
卡尔费休库仑法：通过使用装备有860KF Thermoprep烘箱的MetroOhm(899库仑计)进行卡尔费休分析来测试水分含量。在烘箱中将颗粒加热到165℃，并用库伦法测定释放的水。
颗粒溶解：将水添加到干燥颗粒样品以产生最终的蛋白质浓度。将样品放在旋转混合器上60RPM下一段时间。通过从样品取出等分试样并在280nm下测量吸光度(使用消光系数E1％＝1.69L·g-1·cm-1)来记录终末溶解浓度。
混浊度：将复原的颗粒溶液的等分试样转移到1cm路径长度的比色皿中。使用NanoDropTMOne UV-VIS分光光度计(Thermo Scientific)记录405nm下的吸光度。
尺寸排阻色谱法(SEC)测量：在Tosoh TSKgel SuperSW mAb HTP(4.6mm ID×15cmL)柱上，使用由100mM磷酸二氢钠和200mM-精氨酸单盐酸盐pH 6.5组成的流动相，以约0.35mL/min的流速运行样品注射液，持续10分钟。手动检查峰以确保准确鉴定，并通过自动积分，使用本领域中已知的参数进行分析。
强阳离子交换色谱法(SCEX)：在MAbPacTMSCX-10RS分析柱(2.1mm ID×15cm L，5μm柱)上，使用梯度方法，以0.4mL/min的流速运行溶于milli Q水中的样品注射液，总运行时间持续40分钟，所述梯度方法以100％流动相pH梯度缓冲液A开始，到100％流动相pH梯度缓冲液B，然后是洗涤和再平衡。手动检查峰以确保准确鉴定，并通过自动积分，使用本领域中已知的参数进行分析。
疏水相互作用色谱法(HIC)：在MAbPacTMHIC-20HPLC柱(5μm，4.6mm ID×25cm L柱)上，使用梯度方法，以1mL/min的流速，运行溶于稀释剂中的样品的注射液，总运行时间持续60分钟，所述稀释剂由750mM硫酸铵、50mM磷酸二氢钠二水合物pH 6.0(1mg/mL)组成，所述梯度方法始于50％流动相A(由2M硫酸铵、50mM磷酸二氢钠二水合物构成，pH 6.0)，至100％流动相B(由50mM磷酸二氢钠构成，pH 6.0)，然后是使用50％流动相A洗涤和再平衡。手动检查峰以确保准确鉴定，并通过自动积分，使用本领域中已知的参数进行分析。
粒子筛选(激光衍射)：经由激光衍射，使用Horiba LA-960S，进行粒度分析。使干燥颗粒悬浮在异丙醇中，浓度大约为0.1mg/mL。在颗粒测量仪内对颗粒悬浮液进行超声处理，以确保均质性，然后通过Horiba粒度分析仪进行循环和搅动。使用异丙醇的流动相进行粒度分析，并计算体积平均粒度分布。
微流成像：进行流动成像显微镜法(FlowCam，Fluid Imaging Technologies)，以定量蛋白质LDS和颗粒制剂中的亚可见微粒。首先使用上述颗粒溶解法使颗粒再溶解，并用超纯水稀释到1mg/mL。对于分析，以0.15mL/min的流速引入水性样品。记录所得到的颗粒计数并根据每毫克蛋白质来报告。
结果：与蛋白质液体原料药(LDS)一起，评估干燥颗粒和颗粒悬浮液的稳定性。在5℃、25℃和40℃下追踪稳定性，其中在第7天、第14天、第28天、第60天和第90天收集数据。在每个时间和温度下测量颗粒稳定性、蛋白质稳定性和悬浮液。如通过单体特征(SEC)、电荷变体特征的维持(CEX)、同种型/假定氧化(HIC)和胶体稳定性(混浊度和亚可见颗粒)所测量的，对颗粒和颗粒悬浮液的分析证实了蛋白质品质保持恒定。在每种情况下，针对颗粒和颗粒悬浮液测量蛋白质进料溶液。在5℃、25℃和40℃下呈干粉和颗粒悬浮液存储的颗粒显示光滑的球形形态。在这些温度下三个月的过程中，没有观察到颗粒形态或粒度分布的变化。所有的存储温度和时间长度下，颗粒的水分含量均保持恒定。在5℃、25℃和40℃下，通过SEC测量蛋白质聚集体的分析，长达90天。颗粒和颗粒悬浮液的聚集速率证明，与蛋白质LDS相比稳定性提高了。在5℃、25℃和40℃下，通过SCEX测量蛋白质的电荷变体特征，长达90天。没有观察到颗粒和颗粒悬浮液的明显变化，这证明与蛋白质LDS相比在40℃下稳定性提高了。使用HIC测量蛋白质的潜在氧化。在5℃、25℃和40℃下，通过HIC测量蛋白质的假定整体氧化程度，长达90天。没有观察到明显的变化，这表明了颗粒和颗粒悬浮液在25℃和40℃下对于氧化应激的稳定性与蛋白质LDS在相同温度和时间下相比提高了。为了进一步探测再溶解的颗粒的蛋白质品质，在多种温度下存储后分析可见和亚可见微粒。在溶解后，在40℃下存储长达90天，蛋白质溶液基本上不含可见微粒和亚可见微粒。在所有的存储时间和温度下蛋白质浓度、粘度和注射力都没有发生显著的变化。浓度分析表明在所有的存储时间和温度下蛋白质浓度都没有变化。同样在所有的存储时间和温度下粘度都没有发生显著的变化。在所有的存储时间和温度下注射力都没有发生显著的变化。
实施例16.粘度的测定
通用方案：将25mm 3°锥体(CP25-3，Anton Paar)装载到流变仪(Anton Paar模块化紧凑型流变仪(MCR)系列92)上。将板温热到25℃。将悬浮液涡旋直到视觉上是均匀的。将250uL吸移到底板上并在9501/s的剪切速率下测量样品。
实施例17.蛋白质含量的测定
通过涡旋使悬浮液再分散，在超纯水中稀释到2.5％(v/v)，并在60RPM下震荡30分钟；使对应的干粉样品在超纯水中溶解到5％(w/v)，并在60RPM下震荡30分钟。在一式三份测定蛋白质浓度之后(从悬浮液的底层或水层)，通过将平均再溶解的蛋白质颗粒的浓度和再溶解体积的乘积除以微粒质量来计算颗粒中的蛋白质的质量％。然后，悬浮液的平均浓度(通过水性/制剂载体液体稀释因子校正)除以颗粒中的该蛋白质质量％，以计算悬浮颗粒的理论质量。
实施例18.聚集、片段化和电荷变体的变化的测定
SEC：将干粉样品在超纯水中溶解到5％(w/v)并在60RPM下震荡。在一式三份测定蛋白质浓度之后，将样品用PBS稀释到1mg/mL，并通过注射器过滤到HPLC小瓶中。使样品在载体液体中再悬浮并立即将每个样品在500RPM下离心，所得到的载体液体上清液被吸出(和丢弃)，不会干扰沉降颗粒。在将水添加到颗粒和混合之后，将样品在60RPM下震荡。在初始蛋白质浓度测定(从底层或水层)后，将每个样品用PBS稀释，并一式三份地测量蛋白质浓度(从底层或水层)。然后将每个样品用PBS稀释，并通过注射器过滤到HPLC小瓶中，其中针在过滤前丢弃(以防载体液体转移)。使用Agilent 1260Infinity II Bio-inert LC系统和TSKgel SuperSW HTP柱(4μm，4.6mmID×150mmL柱)分析所有样品，所述柱用200mM精氨酸-HCl、100mM磷酸钠pH 6.5平衡。将自动取样器和柱室分别维持在4℃和20℃下，并在280nm下监测UV吸光度。运行时间是10分钟。报告积分高分子量(聚集体)、单体和低分子量峰的面积％。
SCEX：将干粉样品在超纯水中溶解到5％(w/v)并在60RPM下震荡。在一式三份测定蛋白质浓度之后，将样品用超纯水稀释并通过注射器过滤到HPLC小瓶中。使样品在载体液体中再悬浮并立即将每个样品在500RPM下离心，所得到的载体液体上清液被吸出(和丢弃)，不会干扰沉降颗粒。在将水添加到颗粒和混合之后，将样品在60RPM下震荡。在初始蛋白质浓度测定(从底层或水层)后，将每个样品用超纯水稀释，并一式三份地测量蛋白质浓度(从底层或水层)。然后将每个样品用超纯水稀释，并通过注射器过滤到HPLC小瓶中，其中针在过滤前丢弃(以防载体液体转移)。使用Agilent 1260Infinity II Bio-inert LC系统和Thermo Scientific MAbPacTMSCX-10RS柱(5μm，2.1mmID×150mmL)分析所有样品，柱用100％流动相A(Thermo Scientific 1X CX-1pH梯度缓冲液A)平衡。梯度是0-20％流动相B(Thermo Scientific 1X CX-1pH梯度缓冲液B)。将自动取样器和柱室分别维持在4℃和30℃下，并在280nm下监测UV吸光度。报告积分酸性、中性(主要)和碱性峰的面积％。
以引用的方式并入
本文中提到的所有公布和专利都以引用的方式整体并入本文中，引用程度如同特定且个别地指示每个个别的公布或专利以引用的方式并入一般。万一发生矛盾，本申请，包括本文中的任何定义，将为准。
等效物
虽然已经论述了本公开内容的特定方面和实施方案，但以上说明书是说明性的，而非限制性的。本领域的技术人员在回顾本说明书和以下权利要求书后将显而易见本公开的许多变化。本公开的整个范围以及等效物和本说明书的整个范围与这类变化形式一起应由权利要求书决定。

Claims (329)

1.一种治疗有需要的受试者的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学上有效量的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是癌症。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述癌症是胃肠道肿瘤(结肠癌、直肠癌、结直肠癌、结直肠癌症、结直肠腺瘤、遗传性非息肉病1型、遗传性非息肉病2型、遗传性非息肉病3型、遗传性非息肉病6型；结直肠癌症、遗传性非息肉病7型、小肠和/或大肠癌、食管癌、食管癌胼胝症、胃癌、胰腺癌、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜癌、隆凸性皮肤纤维肉瘤、胆囊癌、胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肾癌(2型或1型韦尔姆斯氏瘤)、肝癌(肝母细胞瘤、肝细胞癌、肝细胞癌症)、膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤、生殖细胞肿瘤、滋养细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、卵巢未成熟畸胎瘤、子宫、卵巢上皮、骶尾瘤、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤、成人上皮肿瘤、卵巢癌、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤、宫颈癌、子宫颈癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、鼻咽、乳腺癌(乳腺导管癌、浸润性导管内乳腺癌、散发性乳腺癌、乳腺癌易感性、4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺-卵巢癌)、鳞状细胞癌(头颈部)、神经原发性肿瘤、星形细胞瘤、神经节母细胞瘤、神经母细胞瘤、淋巴瘤(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、CD20阳性非霍奇金淋巴瘤、复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、胸腺淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM))、胶质瘤、腺癌、肾上腺瘤、遗传性肾上腺皮质癌、脑恶性病(肿瘤)、多种其它癌瘤(支气管源性大细胞癌、导管癌、恶性腹水、艾氏腹水、表皮样癌、大细胞癌、路易士肺(Lewis lung)癌、髓样癌、粘液表皮样癌、燕麦细胞癌、小细胞癌、梭形细胞癌、棘细胞癌、移行细胞癌、未分化癌、癌肉瘤、绒毛膜癌、囊腺癌)、成室管膜细胞瘤、上皮瘤、红白血病(弗里德氏、淋巴母细胞)、纤维肉瘤、巨细胞瘤、神经胶质肿瘤、胶质母细胞瘤(多形性、星形细胞瘤)、胶质瘤肝癌、异源杂交瘤、异源骨髓瘤、组织细胞瘤、杂交瘤(B细胞)、肾上腺样瘤、胰岛瘤、胰岛肿瘤、角化病、成平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、白血病(急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性淋巴母细胞性前B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性成巨核细胞性白血病、单核细胞性白血病、急性髓性白血病、急性髓系白血病、急性髓系白血病伴嗜酸性粒细胞增多症、B细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、慢性白血病、B细胞白血病、嗜酸性粒细胞白血病、弗里德氏白血病、粒细胞性或髓细胞性白血病、毛细胞白血病、淋巴细胞白血病、成巨核细胞性、单核细胞性、单核细胞-巨噬细胞、成髓细胞性白血病、髓系白血病、骨髓单核细胞性白血病、浆细胞白血病、前B细胞白血病、渐进性慢性淋巴细胞白血病、早幼粒细胞白血病、亚急性白血病、T细胞白血病、淋巴样肿瘤、髓系恶性肿瘤倾向、急性非淋巴细胞白血病)、淋巴肉瘤、黑色素瘤、乳腺肿瘤、肥大细胞瘤、成神经管细胞瘤、间皮瘤、转移性肿瘤、单核细胞瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓瘤、肾母细胞瘤、神经组织胶质肿瘤、神经组织神经元肿瘤、神经鞘瘤、神经母细胞瘤、少突胶质瘤、骨软骨瘤、骨性骨髓瘤、骨肉瘤(尤文氏骨肉瘤)、骨质疏松症、骨转移、乳头状瘤、移行细胞、嗜铬细胞瘤、垂体瘤(浸润性)、浆细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤(尤文氏肉瘤、组织细胞肉瘤、詹森肉瘤、骨原性肉瘤、网状细胞肉瘤)、神经鞘瘤、皮下肿瘤、畸胎癌(多能)、畸胎瘤、睾丸肿瘤、胸腺瘤和毛发上皮瘤、胃癌、纤维肉瘤、多形性胶质母细胞瘤；多发性血管球瘤、李法美尼综合征、脂肪肉瘤、林奇癌家族综合征II、男性生殖细胞肿瘤、肥大细胞白血病、甲状腺髓样癌、多发性脑膜瘤、内分泌肿瘤粘液肉瘤、家族非嗜铬性副神经节瘤、毛母质瘤、乳头状、家族性和散发性、家族性横纹肌样肿瘤易感综合征、横纹肌样肿瘤、软组织肉瘤或图尔古特综合征伴胶质母细胞瘤。
4.如权利要求2所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)、CD20阳性非霍奇金淋巴瘤、复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、渐进性慢性淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种治疗剂。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种药学上可接受的细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙或它们的组合。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是炎性疾病或疾患。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述炎性疾病或疾患是关节病、眼科疾病、视网膜疾病、牛皮癣、克罗恩病、肠易激综合征、斯耶格伦氏病、组织移植排斥反应、哮喘、系统性红斑狼疮、肾小球性肾炎、皮肤肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎、古德帕斯彻氏综合征、动脉粥样硬化、慢性特发性血小板减少性紫癜、艾迪生病、帕金森氏病、阿尔茨海默病、糖尿病、败血性休克、重症肌无力、盆腔炎症性疾病、炎症性肠病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎或多囊肾病。
10.如权利要求8所述的方法，其中所述炎性疾病或疾患是关节疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、神经病理性疼痛、伤害感受性疼痛、剧痛、慢性疼痛、炎性痛、手术痛、手术后疼痛、内脏疼痛、偶发性疼痛、爆发性疼痛、心因性疼痛、牛皮癣、克罗恩病、肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD)、斯耶格伦氏病、组织移植排斥反应、哮喘、系统性红斑狼疮、肾小球性肾炎、皮肤肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎、古德帕斯彻氏综合征、动脉粥样硬化、慢性特发性血小板减少性紫癜、艾迪生病、帕金森氏病、阿尔茨海默病、糖尿病、败血性休克、重症肌无力、盆腔炎症性疾病、炎症性肠病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎或多囊肾病。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是免疫性疾病。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述免疫性疾病是自身免疫性疾病。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化、硬皮病、I型糖尿病、类风湿性关节炎、甲状腺炎、系统性红斑狼疮(SLE)、雷诺综合征、斯耶格伦氏综合征、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性心肌炎、炎症性肠病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、系统性狼疮、视神经脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、膜性肾病、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、重症肌无力、溃疡性结肠炎、克罗恩病、多发性关节炎、移植物抗宿主反应、幼年起病型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、恶性贫血、慢性活动性(狼疮状)肝炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎或神经性皮肤炎。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是肾病。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述肾病是抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关血管炎(AAV)、特发性膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)、狼疮肾炎、系统性红斑狼疮(SLE)、微小病变(MCD)、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、抗体介导的肾移植排斥反应、膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、抗类固醇性肾病综合征、血管炎、IgA肾炎、糖尿病性肾病、慢性肾病、返流性肾病、肾小球性肾炎、肾小球肾病、多囊肾病或作为使ABO-/人白细胞抗原(HLA)不相容的肾移植能够进行的脱敏方案的一部分。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述肾病是膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)、膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)病原、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、膜性肾病(MN)、重度膜性肾病(MN)、抗类固醇性肾病综合征、血管炎或它们的组合。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含以下中的至少一种：类固醇、苯海拉明、扑热息痛、血压药物、免疫抑制剂或它们的组合。
18.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是皮肤疾病或疾患。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述皮肤疾病或疾患是接触性皮炎、湿疹、荨麻疹、红斑痤疮、皮肤中的疤痕性牛皮癣病变、牛皮癣、异位性皮炎、接触性过敏反应、粉刺、皮肤肌炎、寻常白斑病、寻常性鱼鳞癣、光过敏、婴儿血管瘤、寻常疣、牛皮癣、神经纤维瘤、大疱性表皮松解、异位性湿疹、食物过敏、肉芽肿性多血管炎(韦格纳肉芽肿)、皮肤血管炎(急性出血性水肿、亨诺-许兰紫癜、过敏性血管炎)、原发性水疱病、皮肤肌炎、异位性皮炎(湿疹)、红斑狼疮或与针对表皮和真皮表皮交界中的多种结构支撑蛋白的自身抗体有关的原发性水疱病(自身免疫性大疱病)、寻常天疱疮和抗治疗性情况(落叶状天疱疮、与CD20+淋巴瘤相关的副肿瘤性天疱疮、大疱性类天疱疮、后天性大疱性表皮松解、粘膜类天疱疮)、难治性皮肤红斑狼疮、血栓性血小板减少性紫癜或它们的组合。
20.如权利要求18所述的方法，其中所述皮肤疾病或疾患是肉芽肿性多血管炎(韦格纳肉芽肿)、皮肤血管炎(急性出血性水肿、亨诺-许兰紫癜、过敏性血管炎)、原发性水疱病、皮肤肌炎、异位性皮炎(湿疹)、红斑狼疮或与针对表皮和真皮表皮交界中的多种结构支撑蛋白的自身抗体有关的原发性水疱病(自身免疫性大疱病)、寻常天疱疮和抗治疗性情况(落叶状天疱疮、与CD20+淋巴瘤相关的副肿瘤性天疱疮、大疱性类天疱疮、后天性大疱性表皮松解、粘膜类天疱疮)、难治性皮肤红斑狼疮、血栓性血小板减少性紫癜或它们的组合。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含非类固醇类消炎药(NSAID)。
22.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病或疾患是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含第5型C-C趋化因子受体(CCR5)抑制剂、第4型C-X-X趋化因子受体(CXCR4)抑制剂、CD4抑制剂、gp120抑制剂、gp41抑制剂、消炎药、PD-1抑制剂、I型干扰素、IL6、环加氧酶-2抑制剂、过氧化物酶体增殖物激活受体-c(PPAR-c)激动剂、甲氨蝶呤、美沙拉嗪、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷酸逆转录酶抑制剂(NNRTI)、整合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂和非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂(PI)、融合进入抑制剂、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、长寿蛋白抑制剂、NF-κB诱导剂、组蛋白甲基转移酶(HMT)抑制剂、促细胞凋亡和细胞分化分子、CD4 T细胞疫苗或它们的组合。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
29.如权利要求1所述的方法，其中所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
30.如权利要求1所述的方法，其中所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
32.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
34.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
35.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
36.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
37.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
38.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
39.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
40.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
41.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
42.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
43.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
44.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
45.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.10至约1.00的圆形度。
46.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.80至约1.00的圆形度。
47.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.85至约1.00的圆形度。
48.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.90至约1.00的圆形度。
49.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.95至约1.00的圆形度。
50.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约0.98至约1.00的圆形度。
51.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约1.00的圆形度。
52.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计少于约7％的残留水分。
53.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计少于约5％的残留水分。
54.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计少于约3％的残留水分。
55.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计少于约1％的残留水分。
56.如权利要求52所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计约7％至约1％的残留水分。
57.如权利要求52所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计约5％至约1％的残留水分。
58.如权利要求52所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计约3％至约1％的残留水分。
59.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约50％的内部空隙空间。
60.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约25％的内部空隙空间。
61.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约10％的内部空隙空间。
62.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约5％的内部空隙空间。
63.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约3％的内部空隙空间。
64.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有少于约1％的内部空隙空间。
65.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
66.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL的密度。
67.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约1300mg/mL至约1500mg/mL的密度。
68.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有约1320mg/mL至约1500mg/mL的密度。
69.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约60％的治疗性生物制剂。
70.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约70％的治疗性生物制剂。
71.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约80％的治疗性生物制剂。
72.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约90％的治疗性生物制剂。
73.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约95％的治疗性生物制剂。
74.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约98％的治疗性生物制剂。
75.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒具有按重量计大于约99％的治疗性生物制剂。
76.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、止痛剂或它们的组合。
77.如权利要求76所述的方法，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。
78.如权利要求76所述的方法，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。
79.如权利要求76所述的方法，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。
80.如权利要求76所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTMN-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。
81.如权利要求76所述的方法，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。
82.如权利要求76所述的方法，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯、单油酸脱水山梨糖醇酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。
83.如权利要求76所述的方法，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。
84.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约20mg/mL至约650mg/mL。
85.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约100mg/mL至约500mg/mL。
86.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约200mg/mL至约400mg/mL。
87.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约300mg/mL至约400mg/mL。
88.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约350mg/mL至约400mg/mL。
89.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
90.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
91.如权利要求90所述的方法，其中所述抗体是人抗体。
92.如权利要求91所述的方法，其中所述人抗体是IgG抗体。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
94.如权利要求90-93中任一项所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
95.如权利要求90-94中任一项所述的方法，其中所述抗体是抗CD20抗体。
96.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述液体载体是非水的或水性的。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述非水液体载体是有机溶剂或离子液体。
98.如权利要求97所述的方法，其中所述有机溶剂包含苯甲酸苄酯、椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、玉米油、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯、二甲基乙酰胺、二甲基异山梨醇酯、二甲亚砜、糖呋喃醇、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁子香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、简单醇类(例如乙醇、辛醇、己醇、癸醇、丙醇、丁醇)、γ-丁内酯、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酸、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨醇酯、乙醇胺、丙酸、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯、丙酮缩甘油、异山梨醇二甲醚、甲酸乙酯、乙酸乙基己酯或它们的组合。
99.如权利要求97所述的方法，其中所述有机溶剂是油酸乙酯、甘油三酯、月桂酸乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、癸酸乙酯、琥珀酸二乙酯、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯或它们的组合。
100.如权利要求97所述的方法，其中所述有机溶剂是油酸乙酯或甘油三酯。
101.如权利要求97所述的方法，其中所述离子液体包含吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍、卤化物、硫酸盐、磺酸盐、碳酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、PF6-、BF4-、三氟甲磺酸盐、全氟丁基磺酸盐、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸盐、七氟丁酸盐、卤代铝酸盐或它们的组合。
102.如权利要求96所述的方法，其中所述水性液体载体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、5％右旋糖或缓冲液。
103.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非水或水性液体载体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、止痛剂或它们的组合。
104.如权利要求103所述的方法，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。
105.如权利要求103所述的方法，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。
106.如权利要求103所述的方法，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。
107.如权利要求103所述的方法，其中所述螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸或喷替酸。
108.如权利要求103所述的方法，其中所述矿物质是钙、锌或二氧化钛。
109.如权利要求103所述的方法，其中所述聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或它们的组合。
110.如权利要求103所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTM N-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。
111.如权利要求103所述的方法，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精、乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸或它们的组合。
112.如权利要求103所述的方法，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯、单油酸脱水山梨糖醇酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。
113.如权利要求103所述的方法，其中所述杀菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、氯化苄乙氧铵、戊二醛、β-丙内酯或它们的组合。
114.如权利要求103所述的方法，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。
115.如权利要求103所述的方法，其中所述抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或它们的组合。
116.如权利要求103所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或它们的组合。
117.如权利要求103所述的方法，其中所述防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。
118.如权利要求103所述的方法，其中所述尼泊金酯是对羟基苯甲酸酯。
119.如权利要求103所述的方法，其中所述杀细菌剂是氯化苯甲烃铵。
120.如权利要求103所述的方法，其中所述止痛剂是扑热息痛或利多卡因。
121.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或它们的组合。
122.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约200mPa·s。
123.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约150mPa·s。
124.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约100mPa·s。
125.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约80mPa·s。
126.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约50mPa·s。
127.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约40mPa·s。
128.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约30mPa·s。
129.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约20mPa·s。
130.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约10mPa·s。
131.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约5mPa·s。
132.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约3mPa·s。
133.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的粘度小于约2.5mPa·s。
134.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后基本上不含可见颗粒(VP)。
135.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约100,000,000个/mL。
136.如权利要求135所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约6000个/mL。
137.如权利要求135所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约25μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约600个/mL。
138.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后基本上不含不溶性亚可见颗粒(SvP)。
139.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后的混浊度与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
140.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在水性液体中溶解后基本上不混浊。
141.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
142.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的免疫原性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
143.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物基本上无免疫原性。
144.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的毒性与包含单体治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
145.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的毒性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比降低。
146.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物基本上无毒。
147.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物的所述治疗性生物制剂的稳定性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比提高。
148.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物稳定至少一个月。
149.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物稳定至少两个月。
150.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物稳定至少三个月。
151.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在40℃下稳定至少三个月。
152.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂。
153.如权利要求152所述的方法，其中所述透明质酸降解剂是透明质酸酶。
154.如权利要求153所述的方法，其中所述透明质酸酶是可溶性的中性活性透明质酸酶。
155.如权利要求153或154所述的方法，其中所述透明质酸酶是哺乳动物透明质酸酶。
156.如权利要求155所述的方法，其中所述哺乳动物透明质酸酶是人透明质酸酶。
157.如权利要求156所述的方法，其中所述人透明质酸酶是重组人透明质酸酶(rHuPH20)。
158.如权利要求152-157中任一项所述的方法，其中所述透明质酸降解剂与所述组合物同时、依序或间歇施用。
159.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物通过肠胃外、皮下、经口、表皮、皮内、肌内、动脉间、腹膜内或静脉内注射施用。
160.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下注射施用。
161.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物通过注射器注射或无针注射施用。
162.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物通过注射器注射施用。
163.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物从预灌封注射器中分配。
164.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物从25规格至33规格针中分配。
165.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物从27规格至30规格针中分配。
166.如权利要求165所述的方法，其中所述组合物从27规格针中分配。
167.如权利要求165所述的方法，其中所述组合物从30规格针中分配。
168.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物使用约2N至约40N的注射力进行分配。
169.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述注射力是约2N至约30N。
170.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述注射力是约2N至约25N。
171.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述注射力是约2N至约20N。
172.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述注射力是约2N至约15N。
173.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中当所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度增加时所述注射力以比所述组合物的粘度低的速率增加。
174.如权利要求161所述的方法，其中所述组合物通过无针注射施用。
175.如权利要求174所述的方法，其中所述无针注射是液体喷射注射。
176.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约20.0mL。
177.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约10.0mL。
178.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约5.0mL。
179.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约2.5mL。
180.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约2.0mL。
181.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约1.5mL。
182.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约1.0mL。
183.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物少于约0.5mL。
184.如权利要求1-175中任一项所述的方法，其中有待施用的所述组合物是约1.5mL至约2.0mL。
185.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在向所述受试者施用后不到约5小时内溶解。
186.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在向所述受试者施用后不到约1小时内溶解。
187.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在向所述受试者施用后不到约20分钟内溶解。
188.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在向所述受试者施用后不到约10分钟内溶解。
189.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物在施用之后立即溶解。
190.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物以一个或多个剂量施用。
191.如权利要求190所述的方法，其中所述组合物以单个剂量施用。
192.如权利要求190所述的方法，其中所述组合物以多个剂量施用。
193.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
194.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
195.一种药学上有效的组合物，所述组合物包含：
悬浮在低粘度的药学上可接受的液体载体中的多个颗粒，每个颗粒包含至少一种治疗性生物制剂或其盐；
其中
所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂或其盐的聚集；并且
所述组合物中的所述治疗性生物制剂或其盐的浓度是约20mg/mL至约700mg/mL。
196.如权利要求195所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
197.如权利要求195或196所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的聚集。
198.如权利要求195-197中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
199.如权利要求195-198中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
200.如权利要求195-199中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何聚集。
201.如权利要求195所述的组合物，其中所述颗粒具有约3％至约1％的所述治疗性生物制剂的聚集。
202.如权利要求195所述的组合物，其中所述颗粒具有约1％至约0.5％的所述治疗性生物制剂的聚集。
203.如权利要求195-202中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂的片段化。
204.如权利要求195-203中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的片段化。
205.如权利要求195-204中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的片段化。
206.如权利要求195-205中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的片段化。
207.如权利要求195-206中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的任何片段化。
208.如权利要求195-207中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约50％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
209.如权利要求195-208中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约30％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
210.如权利要求195-209中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约25％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
211.如权利要求195-210中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约15％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
212.如权利要求195-211中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约10％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
213.如权利要求195-212中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约5％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
214.如权利要求195-213中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约3％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
215.如权利要求195-214中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约1％的所述治疗性生物制剂的电荷变体的变化。
216.如权利要求195-215中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有所述治疗性生物制剂的电荷变体的任何变化。
217.如权利要求195-216中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.10至约1.00的圆形度。
218.如权利要求195-217中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.80至约1.00的圆形度。
219.如权利要求195-218中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.85至约1.00的圆形度。
220.如权利要求195-219中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.90至约1.00的圆形度。
221.如权利要求195-220中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.95至约1.00的圆形度。
222.如权利要求195-221中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约0.98至约1.00的圆形度。
223.如权利要求195-222中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1.00的圆形度。
224.如权利要求195-223中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计少于约7％的残留水分。
225.如权利要求195-224中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计少于约5％的残留水分。
226.如权利要求195-225中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计少于约3％的残留水分。
227.如权利要求195-226中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计少于约1％的残留水分。
228.如权利要求195-223中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约7％至约1％的残留水分。
229.如权利要求195-223中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约5％至约1％的残留水分。
230.如权利要求195-223中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计约3％至约1％的残留水分。
231.如权利要求195-230中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约50％的内部空隙空间。
232.如权利要求195-231中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约25％的内部空隙空间。
233.如权利要求195-232中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约10％的内部空隙空间。
234.如权利要求195-233中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约5％的内部空隙空间。
235.如权利要求195-234中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约3％的内部空隙空间。
236.如权利要求195-235中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有少于约1％的内部空隙空间。
237.如权利要求195-236中任一项所述的组合物，其中所述颗粒基本上没有任何内部空隙空间。
238.如权利要求195-237中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1000mg/mL至约1500mg/mL的密度。
239.如权利要求195-238中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1300mg/mL至约1500mg/mL的密度。
240.如权利要求195-239中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有约1320mg/mL至约1500mg/mL的密度。
241.如权利要求195-240中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计大于约60％的治疗性生物制剂。
242.如权利要求195-241中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计大于约70％的治疗性生物制剂。
243.如权利要求195-242中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计大于约80％的治疗性生物制剂。
244.如权利要求195-243中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计大于约90％的治疗性生物制剂。
245.如权利要求195-244中任一项所述的组合物，其中所述颗粒具有按重量计大于约95％的治疗性生物制剂。
246.如权利要求195-245中任一项所述的组合物，其中所述颗粒按重量计具有大于约98％的治疗性生物制剂。
247.如权利要求195-246中任一项所述的组合物，其中所述颗粒按重量计具有大于约99％的治疗性生物制剂。
248.如权利要求195-247中任一项所述的组合物，其中所述颗粒还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、尼泊金酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、止痛剂或它们的组合。
249.如权利要求248所述的组合物，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。
250.如权利要求248所述的组合物，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。
251.如权利要求248所述的组合物，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。
252.如权利要求248所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTM N-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。
253.如权利要求248所述的组合物，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精或它们的组合。
254.如权利要求248所述的组合物，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯、单油酸脱水山梨糖醇酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。
255.如权利要求248所述的组合物，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。
256.如权利要求195-255中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约20mg/mL至约650mg/mL。
257.如权利要求195-256中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约100mg/mL至约500mg/mL。
258.如权利要求195-257中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约200mg/mL至约400mg/mL。
259.如权利要求195-258中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约300mg/mL至约400mg/mL。
260.如权利要求195-259中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述治疗性生物制剂的浓度是约350mg/mL至约400mg/mL。
261.如权利要求195-260中任一项所述的组合物，其中所述治疗性生物制剂具有每单位约0.5至约1.0的活性。
262.如权利要求195-261中任一项所述的组合物，其中所述治疗性生物制剂是抗体。
263.如权利要求262所述的组合物，其中所述抗体是人抗体。
264.如权利要求263所述的组合物，其中所述人抗体是IgG抗体。
265.如权利要求264所述的组合物，其中所述IgG抗体是IgG1抗体。
266.如权利要求262-265中任一项所述的组合物，其中所述抗体是单克隆抗体。
267.如权利要求262-266中任一项所述的组合物，其中所述抗体是抗CD20抗体。
268.如权利要求195-267中任一项所述的组合物，其中所述液体载体是非水的或水性的。
269.如权利要求268所述的组合物，其中所述非水液体载体是有机溶剂或离子液体。
270.如权利要求269所述的组合物，其中所述有机溶剂包含苯甲酸苄酯、椰子油、棉籽油、鱼油、葡萄籽油、榛子油、氢化植物油、橄榄油、棕榈籽油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、葵花油、核桃油、玉米油、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯、二甲基乙酰胺、二甲基异山梨醇酯、二甲亚砜、糖呋喃醇、二甘醇二甲醚、甲基叔丁基醚、N-甲基吡咯烷酮、全氟萘烷、聚乙二醇、2-吡咯烷酮、四氢糠醇、甘油三酯、分馏植物脂肪酸C8和C10的甘油三酯、饱和植物脂肪酸C8和C10的丙二醇二酯、油酸乙酯、癸酸乙酯、己二酸二丁酯、脂肪酸酯、己酸、辛酸、三醋精、二乙二醇单醚、γ-丁内酯、丁子香酚、丁香花蕾油、柠檬醛、柠檬烯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、简单醇类(例如乙醇、辛醇、己醇、癸醇、丙醇、丁醇)、γ-丁内酯、生育酚、八氟丙烷、(全氟己基)辛烷、n-乙酰色氨酸、月桂酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酸、己二酸二甲酯、辛二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、琥珀酸二乙酯、聚山梨醇酯、乙醇胺、丙酸、柠檬醛、苯甲醚、茴香脑、苯甲醛、芳樟醇、己内酯、苯酚、硫代甘油、二甲基乙酰胺、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯、丙酮缩甘油、异山梨醇二甲醚、甲酸乙酯、乙酸乙基己酯或它们的组合。
271.如权利要求269所述的组合物，其中所述有机溶剂是油酸乙酯、甘油三酯、月桂酸乙酯、澳洲坚果油酸乙酯、癸酸乙酯、琥珀酸二乙酯、二乙二醇单乙醚、碳酸丙烯酯或它们的组合。
272.如权利要求269所述的组合物，其中所述有机溶剂是油酸乙酯或甘油三酯。
273.如权利要求269所述的组合物，其中所述离子液体包含吡啶鎓、哒嗪鎓、嘧啶鎓、吡嗪鎓、咪唑鎓、吡唑鎓、噻唑鎓、噁唑鎓、三唑鎓、铵、锍、卤化物、硫酸盐、磺酸盐、碳酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、PF6-、BF4-、三氟甲磺酸盐、全氟丁基磺酸盐、双(三氟甲磺酰基)酰胺、三氟乙酸盐、七氟丁酸盐、卤代铝酸盐或它们的组合。
274.如权利要求268所述的组合物，其中所述水性液体载体是水、0.9％盐水、乳酸林格氏溶液、5％右旋糖或缓冲液。
275.如权利要求195-274中任一项所述的组合物，其中所述非水或水性液体载体还包含碳水化合物、pH调节剂、盐、螯合剂、矿物质、聚合物、表面活性剂、蛋白质稳定剂、乳化剂、杀菌剂、氨基酸、抗氧化剂、蛋白质、有机溶剂、对羟基苯甲酸酯、杀细菌剂、杀真菌剂、维生素、防腐剂、营养培养基、止痛剂或它们的组合。
276.如权利要求275所述的组合物，其中所述碳水化合物是葡聚糖、海藻糖、蔗糖、琼脂糖、甘露糖醇、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖或它们的组合。
277.如权利要求所述275的组合物，其中所述pH调节剂是乙酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、碳酸氢盐、氢氧化铝、磷酸、盐酸、DL-乳酸/乙醇酸、磷酸乙醇胺、缓血酸胺、咪唑、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸一钠、氢氧化钠、氢氧化钾或它们的组合。
278.如权利要求275所述的组合物，其中所述盐是氯化钠、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、氯化亚锡、硫酸镁、葡庚糖酸钠、高锝酸钠、盐酸胍、氢氧化钾、氯化镁、硝酸钾或它们的组合。
279.如权利要求275所述的组合物，其中所述螯合剂是依地酸二钠、乙二胺四乙酸或喷替酸。
280.如权利要求275所述的组合物，其中所述矿物质是钙、锌或二氧化钛。
281.如权利要求275所述的组合物，其中所述聚合物是丙二醇、葡萄糖星形聚合物、硅酮聚合物、聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚乳酸、聚己内酯(PCL)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚蔗糖、葡聚糖或它们的组合。
282.如权利要求275所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯、硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、TRITONTM N-101、甘油、聚氧乙烯蓖麻油、多库酯、硬脂酸钠、癸基葡糖苷、壬苯醇醚-9、十六烷基三甲基溴化铵、Aerosol-OT(双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠)、卵磷脂、脱水山梨糖醇酯或它们的组合。
283.如权利要求275所述的组合物，其中所述蛋白质稳定剂是海藻糖、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚(乙烯基)聚合物、聚酯、聚醛、叔聚合物、聚氨基酸、羟乙基淀粉、N-甲基-2-吡咯烷酮、山梨糖醇、蔗糖、甘露糖醇、环糊精、羟丙基β-环糊精、磺丁基醚β-环糊精、乙酰色氨酸酯、辛酸酯、N-乙酰色氨酸或它们的组合。
284.如权利要求275所述的组合物，其中所述乳化剂是聚山梨醇酯、单油酸脱水山梨糖醇酯、乙醇胺、聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、卡波姆1342、玉米油-甘油一酯-甘油二酯-甘油三酯、聚氧乙烯油酸甘油酯、泊洛沙姆或它们的组合。
285.如权利要求275所述的组合物，其中所述杀菌剂是苯酚、间甲酚、苄醇、2-苯氧基乙醇、氯丁醇、新霉素、氯化苄乙氧铵、戊二醛、β-丙内酯或它们的组合。
286.如权利要求275所述的组合物，其中所述氨基酸是丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、吡咯赖氨酸、丝氨酸、硒代半胱氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸或它们的组合。
287.如权利要求275所述的组合物，其中所述抗氧化剂是谷胱甘肽、抗坏血酸、半胱氨酸、N-乙酰基-L-色氨酸酯、生育酚、组氨酸、甲硫氨酸或它们的组合。
288.如权利要求275所述的组合物，其中所述有机溶剂是二甲亚砜、N-甲基-2-吡咯烷酮或它们的组合。
289.如权利要求275所述的组合物，其中所述防腐剂是羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞、尼泊金酯、甲醛、蓖麻油或它们的组合。
290.如权利要求275所述的组合物，其中所述尼泊金酯是对羟基苯甲酸酯。
291.如权利要求275所述的组合物，其中所述杀细菌剂是氯化苯甲烃铵。
292.如权利要求275所述的组合物，其中所述止痛剂是扑热息痛或利多卡因。
293.如权利要求195-292中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种药学上可接受细胞毒性剂或细胞生长抑制剂、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙、治疗剂、非类固醇类消炎药(NSAID)、药学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂、载体或它们的组合。
294.如权利要求195-293中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约200mPa·s。
295.如权利要求195-294中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约150mPa·s。
296.如权利要求195-295中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约100mPa·s。
297.如权利要求195-296中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约80mPa·s。
298.如权利要求195-297中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约50mPa·s。
299.如权利要求195-298中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约40mPa·s。
300.如权利要求195-299中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约30mPa·s。
301.如权利要求195-300中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约20mPa·s。
302.如权利要求195-301中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约10mPa·s。
303.如权利要求195-302中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约5mPa·s。
304.如权利要求195-303中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约3mPa·s。
305.如权利要求195-304中任一项所述的组合物，其中所述组合物的粘度小于约2.5mPa·s。
306.如权利要求195-305中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后基本上不含可见颗粒(VP)。
307.如权利要求195-306中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约100,000,000个/mL。
308.如权利要求307所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约10μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约6000个/mL。
309.如权利要求307所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后所具有的特征尺寸超过约25μm的不溶性亚可见颗粒(SvP)的浓度为约0个/mL至约600个/mL。
310.如权利要求195-309中任一项所述的组合物，其中所述组合物在溶解于水性液体时基本上不含不溶性亚可见颗粒(SvP)。
311.如权利要求195-310中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后的混浊度与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
312.如权利要求195-311中任一项所述的组合物，其中所述组合物在水性液体中溶解后基本上不混浊。
313.如权利要求195-312中任一项所述的组合物，其中所述水性液体是水、水性缓冲液或生理相关的水性液体。
314.如权利要求195-313中任一项所述的组合物，其中所述组合物的免疫原性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
315.如权利要求195-314中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上无免疫原性。
316.如权利要求195-315中任一项所述的组合物，其中所述组合物的毒性与包含单体治疗性生物制剂的水性组合物相比基本上相似。
317.如权利要求195-316中任一项所述的组合物，其中所述组合物的毒性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比降低。
318.如权利要求195-317中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上无毒。
319.如权利要求195-318中任一项所述的组合物，其中所述组合物的所述治疗性生物制剂的稳定性与包含呈单体形式的所述治疗性生物制剂的水性组合物相比提高。
320.如权利要求195-319中任一项所述的组合物，其中所述组合物稳定至少一个月。
321.如权利要求195-320中任一项所述的组合物，其中所述组合物稳定至少两个月。
322.如权利要求195-321中任一项所述的组合物，其中所述组合物稳定至少三个月。
323.如权利要求195-322中任一项所述的组合物，其中所述组合物在40℃下稳定至少三个月。
324.如权利要求195-323中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含药学上有效量的至少一种透明质酸降解剂。
325.如权利要求324所述的组合物，其中所述透明质酸降解剂是透明质酸酶。
326.如权利要求325所述的组合物，其中所述透明质酸酶是可溶性的中性活性透明质酸酶。
327.如权利要求325或326所述的组合物，其中所述透明质酸酶是哺乳动物透明质酸酶。
328.如权利要求327所述的组合物，其中所述哺乳动物透明质酸酶是人透明质酸酶。
329.如权利要求328所述的组合物，其中所述人透明质酸酶是重组人透明质酸酶(rHuPH20)。
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