JPH10507450A - エーテル脂質リポソームおよびそれらの治療用の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）を有するエーテル脂質を頭部基派生脂質と共に、また所望によりステロールおよび中性脂質と共にリポソーム中に導入する。このリポソームは例えば癌や炎症性病気および障害の治療のために、ヒトのような動物に対してエーテル脂質を投与するために用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】 エーテル脂質リポソームおよびそれらの治療用の使用 この発明はエーテル脂質リポソームおよびその治療用の用途、例えば癌の治療 に関するものである。 エーテル脂質は血小板活性化因子（ＰＡＦ；１−Ｏ−アルキル−２−アセチル −ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の合成類似体であり、このＰＡＦは炎症 、免疫応答、アレルギー反応および増殖のような種々の生理学的工程に関与する 作動体であると一般に考えられている。エーテル脂質類は動物における抗癌剤と して有効であることが知られており、広い範囲の癌細胞に選択毒性を示すと考え られている〔例えばＤｉｅｔｚｆｅｌｂｉｎｇｅｒ等（１９９３）；Ｚｅｉｓｉ ｇ等（１９９３）；Ｐｏｗｉｓ等（１９９０）；ＢｈａｔｉａおよびＨａｄｊｕ （１９９１）；Ｒｅｅｄ等（１９９１）；Ｗｏｒｋｍａｎ（１９９１）；Ｗｏｒ ｋｍａｎ等（１９９１）；ＢａｚｉｌｌおよびＤｅｘｔｅｒ（１９９０）；Ｂｅ ｒｄｅｌ（１９９０）；Ｃｏｕｓｅｌｌ等（１９９０）；Ｔｒｉｔｔｏｎおよび Ｈｉｃｋｍａｎ（１９９０）；Ｍｕｓｃｈｉｏｌ等（１９９０）；Ｌａｙｔｏｎ 等（１９８０）；Ｒｕｎｇｅ等（１９８０）；英国特許第１，５８３，６６１号 ；米国特許第３，７５２，８８６号を参照されたい〕。エーテル脂質類は転移お よび侵食性を抑えると共に細胞の分化を促進することも知られている。しかしな がら、本発明のリポソーム製剤の利点を有するリポソーム性エーテル脂質につい てはいずれの文献にも記載されていなかった。いくつかのエーテル脂質が現在臨 床的な試験研究の対象となっている。 エーテル脂質の毒性のメカニズムについては、完全に解明されている訳ではな いが、細胞膜における作用および細胞膜の分断にも関与していると考えられてい る。エーテル脂質類の選択毒性は細胞内の蓄積およびアルキル切断酵素の特定活 性（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ）に関与している可能性もあ る。エーテル脂質はホスファチジルコリン生成合成の他にホスファチジルイノシ トール ホスホリパーゼ Ｃとおよびプロテインキナーゼ Ｃ活性の選択的阻害剤 である可能性もある。 エーテル脂質類は、その抗癌活性に加えて溶血性でもあり、赤血球細胞を溶解 することもある。さらに、臨床試験の結果、エーテル脂質を投与することによっ て肝機能不全や胃腸機能障害をもたらすという知見も出ている。本発明者等はエ ーテル脂質のある種のリポソーム製剤がこの毒性を緩衝できることを見出したも のである。 発明の要旨 頭部基派生脂質（ｈｅａｄｇｒｏｕｐ−ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ ｌｉｐｉｄ ）およびエーテル脂質を有する脂質二重層（ｌｉｐｉｄ ｂｉｌａｙｅｒ）を有 するリポソームが本発明では提供されている。好ましくはこのリポソームは約２ ００ｎｍより小なる直径を、より好ましくは約５０ｎｍより大で約２００ｎｍよ り小なる直径を有している。 この頭部基派生脂質はホスファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸である ことが好ましい。カルボン酸としては例えばグルタール酸、セバチン酸、コハク 酸または酒石酸のようなものが挙げられ、中でもグルタール酸が好ましい。ホス ファチジルエタノールアミン（ＰＥ）としてはジパルミトイルホスファチジルエ タノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノー ルアミン（ＰＯＰＥ）またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（Ｄ ＯＰＥ）が好ましいものとして挙げられる。この頭部基派生脂質のより好ましい ものとして、ＤＯＰＥ−ＧＡが挙げられる。この頭部基派生脂質は循環機能促進 性脂質のものが挙げられるが、必ずしもこのような機能を有する必要はない。 本発明におけるエーテル脂質は次の化学式を有するものである。 式中、Ｒ₁はＹ₁Ｙ₂である。Ｙ₂はＣＨ₃またはＣＯ₂Ｈであり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1 （ＣＨ＝ＣＨ）_n2（ＣＨ₂）_n3（ＣＨ＝ＣＨ）_n4（ＣＨ₂）_n5（ＣＨ＝ＣＨ）_n6（ ＣＨ₂）_n7（ＣＨ＝ＣＨ）_n8（ＣＨ₂）_n9である。ｎ１は０または３〜２３の整数 であり、ｎ３は０または１〜２１の整数である。ｎ５は０または１〜１８の整数 であり、ｎ７は０または１〜１５の整数、ｎ９は０または１〜１２の整数であり 、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８は各々互いに独立して０または１である。ｎ１＋ ２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は３〜２３の整 数である。Ｙ₂は好ましくはＣＨ₃、そしてＲ₁は好ましくは（ＣＨ₂）_n1ＣＨ₃、 即ち飽和炭化水素である。好ましい飽和炭化水素としてはＲ₁が（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃ のものが挙げられる。 Ｚは好ましくはＯであるがＳであることもできる。Ｒ₂はまたＹ₁Ｙ₂であるこ とができ、Ｒ₁と同一でも異なってもよい。好ましいものとしてはＲ₂が（Ｃ（Ｘ₁ ）_n10（Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅のものである。Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅ は各々互いに独立して水素又はフッ素であるが、水素が好ましい。ｎ１０は０ 、１または２であり；ｎ１１は０、１または２であり；ｎ１２は０または１〜２ ３の整数であるが０が好ましい。ｎ１２が０の場合、Ｒ₂はＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅、Ｘ₃、 Ｘ₄であり、Ｘ₅は好ましくはＨでありＲ₂はＣＨ₃である。ｎ１２が０でないとき 、ｎ１０＋ｎ１１の和は２であり、ｎ１２は１が好ましく、Ｒ₂はＣＨ₂ＣＨ₃、 ＣＨ₂ＣＦ₃またはＣＦ₂ＣＦ₃であることが好ましい。 Ｒ₃は式Ｒ₅−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｒ₆で表わされ、Ｒ₅はＯ、ＳまたはＮＨである が、好ましくはＯであり、Ｒ₆はＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃（コリン）、ＣＨ₂ＣＨ₂ ＮＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＯＨ、またはＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ₇であ るがコリンが好ましい。したがって、Ｒ₃は好ましくは−Ｏ−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｃ Ｈ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃である。Ｒ₇はＹ₂ＣＨ₃またはＹ₂ＣＯ₂Ｈである。 以上からして、好ましいエーテル脂質は 即ち１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリ ン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃）である。 本発明のリポソームはホスファチジルコリン（ＰＣ）のような中性脂質を含有 することもできる。ＰＣは卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホ スファチジルコリン（ＤＯＰＣ）またはパルミトイルオレオイルホスファチジル コリン（ＰＯＰＣ）であることが好ましい。このＰＣはＤＯＰＣであることが好 ましい。本発明のリポソームはステロール、好ましくはコレステロールを含有す ることができる。また該リポソームは循環機能強化脂質を含有することもでき、 この脂質はホスファチジルエタノールアミン、およびジカルボン酸、ガングリオ サイドまたはポリエチレングリコールを含有することができる。 本発明の好ましい実施態様としては、本発明リポソームはエーテル脂質、頭部 基派生脂質、ステロールおよび中性脂質を含有する脂質二重層を有する。好まし いものは、エーテル脂質がＥＴ−１８−ＯＣＨ₃であり、頭部基派生脂質がホス ファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸、より好ましくはＤＯＰＥ−ＡＧで あり、ステロールはコレステロールであり、中性脂質はＰＣ、より好ましくはＤ ＯＰＣのものである。上記二重層は通常約１０モル％から約３０モル％、より好 ましくは約２０モル％のエーテル脂質；約５モル％から約２０モル％、より好ま しくは約１０モル％の頭部基派生脂質；約１０モル％から約５０モル％、より好 ましくは約３０モル％のステロールおよび約１０モル％から約５０モル％の、よ り好ましくは約４０モル％の中性脂質を含有している。最も好ましいのは、該二 重層が約２０モル％の「ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃」、約１０モル％のＤＯＰＥ−Ｇ Ａ、約３０モル％のコレステロールおよび約４０モル％のＤＯＰＣを含有してい るものである。 本発明のリポソームは更に生物活性剤を含有することができ、この生物活性剤 として好ましいものは抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、治療用脂質または造血性細 胞成長促進剤を挙げることができる。またリポソームは脱水することもできる。 本発明では、薬理学的に許容し得る担体および本発明のエーテル脂質リポソー ムを含有する薬学的組成物をも提供するものである。また本発明はエーテル脂質 を動物に投与する方法をも提供するものであり、この方法は薬理学的に許容し得 る担体と次のような化学式で表されるエーテル脂質および頭部基派生脂質を含有 する脂質二重層を有するリポソームとを含有する薬学的組成物を動物に投与する ものである： 動物としては人が好ましい。またリポソームは約２００ｎｍより小なる直径、よ り好ましくは約５０ｎｍより大で約２００ｎｍより小なる直径をもつものが好ま しい。 飽和炭化水素、最も好ましくは（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃がＯを介してエーテル脂質の １位に結合しているものが好ましい。Ｒ₂の好ましいものとしては（Ｃ（Ｘ₁）_{n1 0} （Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅が、より好ましいものとしてＣＨ₃が挙げられる。 第３位における極性基としてはホスホリルコリンが好ましい。以上からして、本 発明のエーテル脂質として好ましいものは１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチ ル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃）である。 頭部基派生脂質はＰＥ−ジカルボン酸であることが好ましく、より好ましいの はＤＯＰＥ−ＧＡである。この頭部基派生脂質は循環促進脂質であってもよい。 二重層はコレステロールおよびホスファチジルコリンを含有することが好ましく 、ホスファチジルコリンとしてＥＰＣ、ＰＯＰＣまたはＤＯＰＣがより好ましい 。 リポソームは循環促進脂質を含有してもよい。 本発明の特に好ましい態様として、リポソームが２０モル％のエーテル脂質、 好ましくはＥＴ−１８−ＯＣＨ₃、約１０モル％のＤＯＰＥ−ＧＡ、約３０モル ％のコレステロールおよび約４０モル％のＤＯＰＣを含有するものが挙げられる 。 本発明の方法は、癌、それらに限られることはないが例えば肺、脳、卵巣、結 腸もしくは乳房のカルチノーマ、白血病、骨髄膜、神経芽細胞腫、肉腫に侵され ている動物にエーテル脂質を投与するために用いることができる。このような方 法は一般的に、抗腫瘍有効量のエーテル脂質を含有するリポソームの一定量を動 物に投与するものである。このリポソーム性のエーテル脂質の抗腫瘍有効量は一 般に治療される動物の体重１ｋｇ当たりエーテル脂質約０．１ｍｇ〜約１，００ ０ｍｇである。リポソーム性エーテル脂質の抗腫瘍有効量の好ましい範囲は治療 される動物の体重１ｋｇ当たりエーテル脂質約１ｍｇ〜約５００ｍｇである。最 も好ましい範囲は治療される動物の体重１ｋｇ当たりエーテル脂質約２００ｍｇ である。抗腫瘍有効量のリポソーム性エーテル脂質は複数回にわたって投与する ことができる。リポソームエーテル脂質の複数回用の投与量は、各投与量が抗癌 有効量のエーテル脂質を含有するものであるが、それらを投与することができる 。癌の転移または侵入を、このエーテル脂質投与により抑制することができる。 本発明の方法はまた炎症性疾患、例えば関節炎症状、アレルギー性疾患または 喘息性疾患に悩む動物にエーテル脂質を投与するために用いることもできる。こ のような方法は一般的に抗炎症有効量のリポソーム性エーテル脂質を動物に投与 することを包含する。エーテル脂質の抗炎症有効量は一般に治療される動物の体 重１ｋｇ当たり該エーテル脂質約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇである。 本発明の方法はまた、投与されるエーテル脂質に加え生物活性剤を投与する場 合にも用いられる。この追加的に加えられる生物活性剤はリポソームと会合して いても会合していなくてもよく、それらに限定されることはないが、例えば抗菌 剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、治療用脂質または造血性細胞成長促進剤を挙げること ができる。 図面の簡単な説明 第１図 マウスにおける肺転移に対するリポソーム性エーテル脂質の効果を示す 。リポソーム製剤：ＥＰＣ／コレステロール／ＤＰＰＥ−ＧＡ／ＥＬ（４：３： １：２），投与量：２５ｍｇ／ｋｇ×５，ｘ−軸：緩衝液コントロール、リポソ ーム性コントロール（エーテル脂質なし）、遊離のエーテル脂質、リポソーム性 エーテル脂質，ｙ−軸：腫瘍小結節数（平均＋ＳＤ） 第２図 マウスにおける肺転移に対するリポソーム性エーテル脂質の効果を示す 。リポソーム製剤：ＤＯＰＣ／コレステロール／ＤＯＰＥ−ＧＡ／ＥＬ（４：３ ：１：２），投与量：５回注射，ｘ−軸：緩衝液コントロール、リポソーム性コ ントロール、遊離のエーテル脂質、リポソーム性エーテル脂質（体重１ｋｇにつ き２５ｍｇ投与）、リポソーム性エーテル脂質（体重１ｋｇにつき１００ｍｇ投 与），ｙ−軸：腫瘍小結節数（平均＋ＳＤ） 発明の詳細な説明 本発明では頭部基派生脂質およびエーテル脂質を含有する脂質二重層を有する リポソームを提供する。リポソームは、一つ又はそれ以上の二分子膜からなる自 己集合構造体であり、そのそれぞれが、内部水性容積を取り囲んでおり、相対す る２つの一分子層の両親媒性脂質分子を含有している。これらは、一つ又は二つ の非極性(疎水性)アシル鎖に共有結合で結合されている極性(親水性)ヘッドグル ープ領域を含んでいる。疎水性アシル鎖と水性溶媒との間のエネルギー的に好ま しくない接触によって、極性ヘッドグループが水性溶媒に向かって配向し、一方 、アシル鎖が二分子膜の内部に向かって配向するように、脂質分子が再配列され ると一般に考えられている。その結果、アシル鎖が水性媒体と接触するのを有効 に遮蔽されているエネルギー的に安定な脂質二分子膜構造が形成される。 リポソームは種々の方法で調製することができる（例えばＤｅａｍｅｒおよび Ｕｓｔｅｒ（１９８３）を参照されたい。）。マルチラメラ（ｍｕｌｔｉｌａｍ ｅｌｌａｒ）リポソーム（ＭＬＶ）をつくるためのＢａｎｇｈａｍの方法；これ らの方法としては例えば以下のようなものを含むがこれらに限定されることはな い。実質的に等しいラメラ間溶質分布を持つＭＬＶをつくるためのＬｅｎｋ等（ 米国特許第４，５２２，８０３号、同第５，０３０，４５３号及び同第５，１６ ９，６３７号）、Ｆｏｕｎｔａｉｎ等（米国特許第４，５８８，５７８号）及び Ｃｕｌｌｉｓ等（米国特許第４，９７５，２８２号）の方法及びオリゴラメラリ ポソームをつくるためのＰａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓらの逆相蒸発法（米国特 許第４，２３５，８７１号）である。ユニラメラ（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ）リ ポソームは、音波処理（Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ等（１９６８年）参照） 又は押出（Ｃｕｌｌｉｓ等、米国特許第５，００８，０５０号及びＬｏｕｇｈｒ ｅｙ等、米国特許第５，０５９，４２１号）により、ＭＬＶから製造できる。本 発明のエーテル脂質リポソームは上記の方法のいずれの方法でつくってもよい。 リポソームのサイズを減少させるために音波処理、ホモジナイズ、フレンチプ レス適用、磨砕および押出しのような種々の方法を用いることができ、これによ って大きなリポソームからより小さなリポソーム製造するものである。接線流濾 過（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆｌｏｗ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）（ＷＯ８９／００ ８８４６）もリポソームのサイズの一様化のために用いることができ、サイズの 不均一性が少なく、より均一に調製されたサイズ分布のリポソーム集団たるリポ ソームを製造することができる。本発明のリポソームはユニラメラまたはマルチ ラメラであることができ、直径は約２００ｎｍより小であるものが好ましく、約 ５０ｎｍより大で約２００ｎｍより小であるものが好ましい。 「頭部基派生」脂質が、エーテル脂質を有するリポソーム性脂質二重層中に存 在するとき、該エーテルの毒性をやわらげることができ、エーテル脂質の毒性を 減少させることができ、遊離の形態のエーテル脂質より一般に毒性が減少するも のである。頭部基派生脂質は一般的には１若しくはそれ以上の疎水性アシル基お よび化学基（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｉｅｔｙ）が結合している極性基を有する 両親媒性脂質である。このアシル鎖は通常４〜２４の炭素原子を有し飽和でも不 飽和でもよい。アシル鎖の好ましいものとしては二重層中に存在する他の脂質の 疎水性部と共存し得るパッキング構造を採るものを挙げることができ、このもの はエーテル脂質と反応して該エーテル脂質の二重層からの放出を妨げそれによっ てエーテル脂質の作用が和らげられる。好ましい極性基としてはエタノールアミ ンのようなものが挙げられ、化学基がそこへ結合することができる。適当な化学 基としては、ジカルボン酸、ガングリオサイド、ポリエチレングリコール、ポリ アルキルエーテルのようなものが挙げられ、特にジカルボン酸が好ましく、これ らは極性基に結合することができそれによって頭部基派生脂質を生ぜしめるもの である。エタノールアミンのような基への結合に適した化学基を選択する方法と しては、例えば派生脂質をｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ毒性テストに付 すといったよく知られた方法で行なうことができ、本発明の教示に従い当業者に よって容易に行なうことができるものである。化学基を極性基に結合させる方法 もまたよく知られており、当業者によって容易に行なうことができる。 好ましいアシル基は１６〜２０の炭素原子を有し、パルミチル鎖およびオレイ ル鎖であることもできる。より好ましいのは１若しくはそれ以上のアシル鎖が、 例えばオレイル鎖のように、不飽和のものである。好ましい極性基はエタノール アミンである。エタノールアミンに結合させる基の好ましいものはジカルボン酸 であり、それらは飽和でも不飽和でもよく、４〜２４の炭素原子を有するもので あり、例えばグルタール酸、セバチン酸、コハク酸および酒石酸のようなものが ある。グルタール酸がより好ましい。以上からして、好ましい頭部基派生脂質は ホスファチジルエタノールアミンジカルボン酸で、例えばジパルミトイルホスフ ァチジルエタノールアミン−グルタール酸（ＤＰＰＥ−ＧＡ）、パルミトイルオ レオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタール酸（ＰＯＰＥ−ＧＡ）お よびジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタール酸（ＤＯＰＥ− ＧＡ）のようなものが挙げられる。派生脂質としてはＤＯＰＥ−ＧＡが最も好ま しい。通常、この頭部基派生脂質は約５モル％〜約５０モル％のリポソーム脂質 二重層からなっている。 頭部基派生脂質の毒性緩和性能は、多くの既知のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ テスト法によって測定することができ、本発明の教示により当業者が容 易に行なうことができる。例えば、エーテル脂質に誘導された赤血球（ＲＢＣ） 溶血についてエーテル脂質とＲＢＣ懸濁液とを組合せ、この組合せたものをイン キュベートし、次いで分光計によりＲＢＣ溶解の割合を定量することによって測 定することができる。後出のデータによればＲＢＣ懸濁液の５％の溶血を誘導す る遊離のエーテルの濃度（ＨＩ₅）は５．２マイクロモルであり、一方頭部基派 生脂質を有する、リポソーム中のエーテル脂質のＨＩ₅値は８．９マイクロモル から１０６マイクロモルの範囲である。 更に、エーテル脂質のＬＤ₅₀は、例えばマウスのような適当なテスト動物の複 数の試料グループに、ある一定範囲のエーテル脂質を注入投与することによってｉｎ ｖｉｖｏ で測定することができる；各群における死んだ動物の数を測定し 、動物の５０％が死ぬようなエーテル脂質投与量が測定される。後出のデータに よれば、体重１ｋｇ当たり１００および１３０ｍｇのリポソーム性エーテル脂質 投与量では投与された動物のどれも致死に至らなかったのに対し、遊離のエーテ ル脂質を体重１ｋｇ当たり１００ｍｇ投与したものでは、テストした１群の５匹 中５匹が死亡した。遊離のエーテル脂質（ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃）のＬＤ₅₀は体 重１ｋｇ当たり約３２．２ｍｇのエーテル脂質であり、一方リポソーム性エーテ ル脂質のＬＤ₅₀は体重１ｋｇ当たり１３０ｍｇより大というものであった。 治療窓（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗｉｎｄｏｗ）「ＴＷ」とはＨＩ₅／ＧＩ₅₀ である（「ＧＩ₅₀」は剤にさらされた細胞集団において５０％の増殖阻害を誘導 する剤の投与量を示す）。一般的に生物活性剤のＴＷが１より小であるとき、一 般的には許容し得ない水準の溶血を起こさずに５０％の増殖抑制に到達すること はできない。通常ＴＷ値が高い程、試験されている剤の効果はより大である。頭 部基派生脂質を含有する二重層を有するエーテル脂質リポソームは１より大なる ＴＷを有している。頭部基派生脂質も含有しているリポソーム二重層中のエーテ ル脂質のＴＷは約１．５より大であることが好ましく、より好ましくは約２より 大きく、更に好ましくは約３より大というものである。 次表はＡ５４９およびＭＣＦ７ヒト癌細胞に関する、遊離およびリポソーム性 エーテル脂質のＴＷを示すものである。 ＴＷ 後出の実施例に記載されているデータはＥＬの溶血活性が頭部基派生脂質を有 するリポソームによる取り込みによって下降することを示している。５０％赤血 球溶血（ＨＩ₅₀）を誘導するエーテル脂質濃度は遊離ＥＬ １３μＭ；ＥＬ−Ｌ ｉｐ−１ ４３μＭ；ＥＬ−Ｌｉｐ−２＞１８０μＭである。Ａ５４９癌細胞の ５０％増殖抑制を誘導するエーテル脂質の濃度（ＧＩ₅₀）は同様であり、：遊離 ＥＬ １０．２１３μＭ；ＥＬ−Ｌｉｐ−１ １２．４μＭ；ＥＬ−Ｌｉｐ−２ １４．１μＭであった。更にマウスにおけるＬｅｖｉｓ肺癌に対する遊離ＥＬ およびＥＬ−Ｌｉｐ−１の抗転移性を比較した。ＥＬ−Ｌｉｐ−１は自然な（ｓ ｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ）肺転移を抑制することが見出され、一方遊離のＥＬは限 定された有効性を有するだけであった（コントロール：２８±４．９肺結節；遊 離ＥＬ：２７．５±５；ＥＬ−Ｌｉｐ−１８．１±６．５）。 頭部基派生脂質は循環強化脂質であることもでき、脂質毒性をやわらげるため の修飾が循環の促進にも向けられることになり；派生脂質は投与を受けた動物の 循環系からリポソームが排出されることを抑えることもできるものである。リポ ソームは一般に網状内皮系（ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｓｙｓ ｔｅｍ）（ＲＥＳ）によって動物の体から排出されると考えられている。ＲＥＳ 排出を回避することによって、リポソームの投与頻度を減らすことができるもの であり、リポソーム会合生物活性剤の血清における望ましい水準を得るために必 要とされる投与量が少量で済むということである。循環の強化により循環時間が 長くなることにより、ＲＥＳを持っていない組織へリポソームを送ることが出来 るようになる。リポソーム外表面は動物の循環系でオプソニン（ｏｐｓｏｎｉｎ ） のような血清蛋白質で被覆されると考えられている。 何らかの理論に束縛されるわけではないが、リポソームの外表面をそこへ結合 している血清蛋白の結合を抑制するように修飾することによってリポソームの排 出が抑制できると考えられる。有効な表面修飾は即ち、リポソームの外表面に変 更を加えてオプソニン化（ｏｐｓｏｎｉｚａｔｉｏｎ）とＲＥＳ取り込みを抑制 するものであるが、動物の循環系におけるリポソームの薬理動力学的行動が変更 されるように、血清蛋白質がリポソームに結合することを抑制する化学基を結合 することにより極性頭部基を派生させたリポソーム二重層中に導入することによ って有効な表面修飾がされると考えられている〔Ｂｌｕｍｅ等（１９９３）；Ｇ ａｂｉｚｏｎ等（１９９３）；Ｐａｒｋ等（１９９２）；Ｗｏｏｄｌｅ等 米国 特許第５，０１３，５５６号；米国特許第４，８３７，０２８号および１９９３ 年５月２１日出願の米国特許出願第０８／０６５，９２８号を参照されたい］。 エーテル脂質は次のような構造式を有している： 式中、Ｒ₁はＹ₁Ｙ₂であり、Ｙ₂はＣＨ₃またはＣＯ₂Ｈであり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1 （ＣＨ＝ＣＨ）_n2（ＣＨ₂）_n3（ＣＨ＝ＣＨ）_n4（ＣＨ₂）_n5（ＣＨ＝ＣＨ）_n6（ ＣＨ₂）_n7（ＣＨ＝ＣＨ）_n8（ＣＨ₂）_n9である。ｎ１は０または３〜２３の整数 であり、ｎ３は０または１〜２１の整数である。ｎ５は０または１〜１８の整数 であり、ｎ７は０または１〜１５の整数、ｎ９は０または１〜１２の整数であり 、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８は各々互いに独立して０または１である。ｎ１＋ ２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は３〜２３の整 数である。即ち、第１位の酸素原子を介して炭化水素がエーテル脂質のグリセロ ール骨格に結合している。該炭化水素は末端にＣＨ₃またはＣＯ₂Ｈ基を有する こともでき、この末端基はメチル基であることが好ましい。該炭化水素は飽和で あることが好ましく、即ち隣り合う炭素原子間に二重結合がないことが好ましく 、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８は０であり、Ｒ₁が（ＣＨ₂）_n1ＣＨ₃であること が好ましい。Ｒ₁が（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃であることがより好ましい。 一方、炭化水素は１もしくはそれ以上の二重結合を有することもでき、即ち不 飽和炭化水素であることもでき、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８の１若しくはそれ 以上が１であることもできる。この不飽和炭化水素が１個の二重結合を有すると きｎ２は１であり、ｎ４、ｎ６およびｎ８は各々０でありＹ₁は（ＣＨ₂）_n1ＣＨ ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n3、ｎ１は０または１〜２１の整数であり、ｎ３も０または１ 〜２１の整数であり、ｎ１またはｎ３の少なくとも１つは０ではない。炭化水素 基が２個の二重結合を有するときｎ２およびｎ４は各々１であり、ｎ６およびｎ ８は各々０であり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n3ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂ ）_n5である。ｎ１およびｎ５は各々０または１〜１８の整数であり、ｎ３は１〜 １６の整数である。炭化水素基が３個の二重結合を有するとき、ｎ２、ｎ４およ びｎ６は各々１であり、ｎ８は０であり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂ ）_n3ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n5ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n7であり、ｎ１およびｎ７は各 々独立して０または１〜１５の整数であり、ｎ３およびｎ５は各々１〜１５の整 数である。不飽和炭化水素基が４個の二重結合を有するとき、ｎ２、ｎ４、ｎ６ およびｎ８は１でありＹ₁は（ＣＨ₂）_n1ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n3ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ Ｈ₂）_n5ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n7ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ₂）_n9である。ｎ１およびｎ９ は各々独立して０または１〜１２の整数であり、ｎ３、ｎ５およびｎ７は各々独 立して１〜１２の整数である。 ＺはＯであることが好ましいが、Ｓであってもよい。Ｒ₂はまたＹ₁Ｙ₂である ことができ、Ｒ₁と同一でもよいし異なってもよい。好ましいものはＲ₂が（Ｃ（ Ｘ₁）_n10（Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅のものである。Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄および Ｘ₅は各々互いに独立して水素又はフッ素であるが、水素が好ましい。ｎ１０は ０、１または２であり；ｎ１１は０、１または２であり；ｎ１２は０または１〜 ２３の整数であるが０が好ましい。ｎ１２が０の場合、Ｒ₂はＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅、Ｘ₃ 、Ｘ₄であり、Ｘ₅は好ましくはＨでありＲ₂はＣＨ₃である。ｎ１２が０でない とき、ｎ１０＋ｎ１１の和は２であり、ｎ１２は１が好ましく、Ｒ₂はＣＨ₂ＣＨ₃ 、ＣＨ₂ＣＦ₃またはＣＦ₂ＣＦ₃であることが好ましい。 Ｒ₃は式Ｒ₅−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｒ₆で表わされ、Ｒ₅はＯ、ＳまたはＮＨである が、好ましくはＯであり、Ｒ₆はＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃（コリン）、ＣＨ₂ＣＨ₂ ＮＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＯＨ、またはＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ₇であ るがコリンが好ましい。したがって、Ｒ₃は好ましくは−Ｏ−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｃ Ｈ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃である。Ｒ₇はＹ₂ＣＨ₃またはＹ₂ＣＯ₂Ｈである。 以上からして、好ましいエーテル脂質は 即ち１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリ ン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃）である。 本発明のリポソームは更に追加の脂質を含有することができ、頭部基派生脂質 及びエーテル脂質に加えて１又はそれ以上の脂質を含有することができる。追加 の脂質は、脂質二重層の他の成分とアシル鎖のパッキング形態を形成する互換性 能力によって選択され、上記のパッキング形態は脂質成分が緊密にパックされ該 二重層から脂質が放出されることを抑制するものである。互換性のあるパッキン グ形態に寄与する脂質に基因する因子は当業者によく知られている所である。こ の因子としては、頭部基サイズおよび電荷の他にアシル鎖の長さ及び不飽和度等 があるが、これらに限られることはない。したがって、追加される脂質の好適な ものは本発明の教示により当業者によって容易に選択することができる。 追加の脂質としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、卵ホスファチジルコリ ン（ＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およ びジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）のような中性脂質を包含する 。 好ましいＰＣは１または２個のアシル鎖を有するものであり、例えば２個の不飽 和鎖を有するＤＯＰＣがある。本発明のリポソームの二重層はステロールを含有 することが出来る。ステロールは一般的に脂質二重層の流動性に影響を与える〔 例えばＬｅｗｉｓおよびＭｃＥｌｈａｎｅｙ（１９９２）およびＤａｒｎｅｌｌ 等（１９８６）を参照されたい〕。即ち、まわりを囲んでいる炭化水素鎖とのス テロールの相互作用は一般に二分子膜からこれらの鎖が排出されることを抑制し ている。本発明の二分子膜のステロール成分はコレステロールが好ましいが、必 ずしもそれに限られることはない。ステロールは硫酸コレステロールスルフェー トでもよいしコレステロールヘミサクシネートでもよい。リポソームは循環促進 脂質を、頭部基派生脂質の他に有していても良い。 本発明のリポソームはエーテル脂質、頭部基派生脂質、ステロールおよび中性 脂質を含有する二重層を有することが好ましい。エーテル脂質がＥＴ−１８−Ｏ ＣＨ₃、頭部基派生脂質がＰＥ−ジカルボン酸、ステロールがコレステロールそ して中性脂質がＰＣであるものが好ましい。最も好ましいのは、ＰＥ−ジカルボ ン酸がＤＯＰＥ−ＧＡでありＰＣがＤＯＰＣであるものである。通常、二重層は 約１０〜約３０モル％のエーテル脂質、約５〜約２０モル％の頭部基派生脂質、 約１０〜約５０モル％のステロールおよび約１０〜約５０モル％の中性脂質を含 有している。本発明の特に好ましい実施形態では、この二重層は約２０モル％の ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃、約１０モル％のＤＯＰＥ−ＧＡ、約３０モル％のコレス テロールおよび約４０モル％のＤＯＰＣを含有している。 本発明では、リポソームはエーテル脂質の他に生物活性剤を含有することがで きる。「生物活性剤」は動物、好ましくは人間、に投与できるものであればどの ような化合物でも組成物でもかまわない。このような剤は動物の体内で生物活性 を有することが出来る；また動物体内において診断薬として用いられるものでも よい。生物活性剤として治療剤や造影剤も含まれる。リポソームと会合すること のできる生物活性剤はａｃｙｃｌｏｖｉｒ、ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅおよびインタ ーフェロンのような抗ウィルス剤；アミノグリコシド、セファロスポリンおよび テトラサイクリンのような抗菌剤；葉酸およびプリンおよびピリミジン誘導体の ような抗代謝剤；アントラサイクリン抗生物質および植物アルカロイドのような 抗腫瘍剤；コレステロールのようなステロール類；炭化水素類例えば糖およびで ん粉；アミノ酸、ペプチド、細胞受容体蛋白質、イムノグロブリン、酵素、ホル モン、神経伝達物質およびグリコプロテインのような蛋白質；染料；放射性同位 元素および放射性同位元素標識化合物、放射線不透性化合物；蛍光化合物；散瞳 性化合物；気管支拡張剤；局所麻酔剤等がある。リポソームに取り込んだ生物活 性製剤はその生物活性剤の治療指数を、例えばその剤の毒性を緩和させることに より増大させることができる。リポソームは生物活性剤が動物の体外へ排出され る割合を減少させることが出来る。従って生物活性剤のリポソーム製剤は所定の 効果を得るために投与する剤の量を少なくすることが出来る。本発明のリポソー ムに追加することのできる生物活性剤の好ましいものとしては、抗菌剤、抗炎症 剤および抗腫瘍剤、またはセラミドのような治療脂質が挙げられる。中でも好ま しいのは抗腫瘍剤である。 リポソームには、リポソームを調製するために使用される脂質中または水性相 中に剤を溶解することにより１もしくはそれ以上の剤を装填することができる。 イオン化し得る生物活性剤は、まずリポソームを形成し、例えばｐＨ勾配によっ て最外部のリポソーム二重層を貫通して電気化学的ポテンシャルをつくり、次い で該イオン化し得る剤をリポソームの外部の水性媒体中に加えることによってリ ポソームに装填することができる（Ｂａｌｌｙ等、米国特許第５，０７７，０５ ６号およびＷＯ８６／０１１０２を参照されたい）。 本発明のリポソームはその内容成分の実質的部分がリポソーム中に保持される ような程度に脱水、貯蔵し、次いで再構築することができる。リポソームの脱水 に際しては一般に親水性乾燥保護剤を必要とする(米国特許第４，２２９，６３ ０号および４，８８０，６３５号を参照されたい)。この親水性化合物はリポソ ーム中の脂質の再配置を防ぐものと一般に考えられており、それによって乾燥の 間およびリポソームの再構築のための再水和の間の、サイズおよび内容物の保持 が計られる。このような乾燥保護剤に必要な特性はそれらが強力な水素結合受容 体であること、そしてリポソーム二重層成分の分子間空間を保持するような立体 化学的特性を有していることである。サッカライド糖類、好ましくはモノおよび ジサッカライドが好適なリポソーム乾燥保護剤である。一方、リポソーム製剤が 脱水の前に凍結されず、脱水後該製剤内に十分な水が残っているのであればこの 乾燥保護剤は省くこともできる。 本発明ではまた、薬理学的に許容し得る担体と本発明のリポソームを含有する 薬理学的組成物をも提供するものである。ここでいう「薬理学的に許容し得る担 体」は、人間を含む動物に、リポソーム性生物活性剤製剤を含有したリポソーム と脂質を投与する際に使用されるものである。薬理学的に許容し得る担体は当業 者によく知られている因子にしたがって次のようなことを考慮に入れ製剤化され るが、これらの因子だけに限定されることはない；使用される特定のリポソーム 性生物活性剤、その濃度、安定性および意図された生物的利用性；リポソーム組 成物が投与される病気、障害または症状；投与対象の種類、年齢、大きさおよび 一般的な状態；該組成物の意図された投与経路、例えば経鼻、経口、眼、局所的 、経皮、経膣、皮下、乳房内、腹腔内、静注または筋肉内といったものが挙げら れる（例えばＮａｉｒｎ（１９８５）を参照されたい）。非経口的な生物活性剤 投与においても最も普通に用いられる薬理学的に許容し得る担体は例えばＤ５Ｗ 等の、５重量／容量％のデキストロースおよび生理的食塩水を含有する水溶液等 が挙げられる。薬理学的に許容し得る担体は更に追加のものを含有することがで き、例えば活性成分の安定性を強化するような、防腐剤、抗酸化剤がある。 本発明では更にエーテル脂質を動物に投与する方法を提供するものであり、薬 理学的に許容し得る担体および頭部基派生脂質およびエーテル脂質を含有する脂 質二重層を有するリポソームを含有する薬理学的組成物を動物に投与するもので ある。このエーテル脂質は次のような化学式で表される： 上記動物としては人間が好ましく、エーテル脂質は静注されることが好ましい 。 リポソームの直径は約２００ｎｍより小なることが好ましく、約５０ｎｍより大 きく約２００ｎｍより小であることがより好ましい。 頭部基派生脂質はホスファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸であること が好ましく、この酸としてはグルタル酸が、またＰＥはＤＰＰＥ、ＰＯＰＥまた はＤＯＰＥであることが好ましい。より好ましいのは、頭部基派生脂質がＤＯＰ Ｅ−ＧＡであるものである。頭部基の修飾された脂質は循環促進脂質であること も出来る。 飽和炭化水素、より好ましくはＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₇−がＯを介してエーテル脂質 の１位に結合し；メチル基がＯを介して２位に結合し；そして３位における極性 基がホスホリルコリンであるものが好ましい。したがって好ましいエーテル脂質 は１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−３−ｓｎ−グリセロホスホコリン（ “ＥＴ−１８−ＯＣＨ₃”）である。リポソームの脂質二重層はまたステロール 、より好ましくはコレステロール、およびＰＣ、好ましくはＤＯＰＣのような中 性脂質を含有するものが好ましい。この二重層は循環促進脂質を含有することも 出来る。 本発明の方法で使用されるリポソームはＥＴ−１８−ＯＣＨ₃、ＤＯＰＥ−Ｇ Ａ、コレステロールおよびＤＯＰＣを含有する脂質二重層を有することが好まし い。より好ましくは、該二重層は約４０％モルのＤＯＰＣ、約３０モル％のコレ ステロール、約１０モル％のＤＯＰＥ−ＧＡおよび約２０モル％のエーテル脂質 を含有している。 エーテル脂質は癌細胞に選択的に細胞毒性があると一般に考えられている。し たがって本発明の方法は、癌、それらに限られることはないが例えば肺、脳、卵 巣、結腸もしくは乳房のカルチノーマ、白血病、骨髄膜、神経芽細胞腫、肉腫に 侵されている動物を治療するのに用いることが出来る。一般には、リポソーム性 エーテル脂質は、遊離で、即ち非リポソーム性エーテル脂質として癌を治療する ことができる。しかしながら、エーテル脂質をリポソーム中に取り込むことによ り、その治療指数を高めることができ、それによってリポソーム性エーテル脂質 をより有効的な治療薬とすることができる。抗腫瘍有効量の本発明のリポソーム 性エーテル脂質を動物に投与することによって本発明の方法を行うことができる 。 リポソーム性エーテル脂質を投与することによって癌性細胞の転移または組織へ の侵食を抑制することが出来る。 本発明における「抗癌有効量」のリポソーム性エーテル脂質は、該リポソーム 性エーテル脂質が投与されている動物における１またはそれ以上の癌を抑制、改 善、減少または発生（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ）、成長、転移または侵食を 抑える量をいう。抗癌有効量は一般に多くの因子例えば投与対象の年齢、大きさ および全体的な状態、治療される癌の種類および投与径路を考慮して選択され、 多くの手段、例えば良く知られており、本発明の教示を受けた当業者により容易 に行なえる投与量を変更しての試験等の方法によってその量を決定する。本発明 の抗腫瘍有効量のリポソーム性エーテル脂質は、遊離の非リポソーム性エーテル 脂質を用いた場合とほぼ同量であり、治療される動物の体重１ｋｇ当り約０．１ ｍｇ〜約１，０００ｍｇのエーテル脂質を用いることができる。エーテル脂質の 抗腫瘍有効量の好ましい範囲は体重１ｋｇ当り約１ｍｇ〜約５００ｍｇのエーテ ル脂質である。リポソーム性エーテル脂質の抗癌有効量のより好ましい範囲は約 ５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇである。 本発明方法は炎症性障害に罹った動物にエーテル脂質を投与するために用いる こともできる。本発明方法で治療し得る炎症性障害としては、痛風、リウマチ性 関節炎、原組織性関節炎（ｆｉｌａｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）およびｌｙｍｅ 病のような関節炎症状；喘息性障害；アレルギー反応のようなものが挙げられる が、これらに限定されることはない。抗炎症有効量のエーテル脂質を動物に投与 することによってこのような障害を治療することが出来る。 炎症は障害を受けた血管壁およびそれを取り巻く組織における障害に対する細 胞性および組織性反応である〔例えばＳｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉ ｃｔｉｏｎａｒｙ（図付）（１９８２）を参照されたい〕。上記のような刺激に 対する炎症性応答としては局部的な応答およびその結果生ずる傷を受けた部分の 形態的変化、崩壊、除去および修復機構の活性化といったものが挙げられる。即 ち炎症は動物が自らを治療する工程の一部であるということができる。しかしな がら、炎症は異常な生理的刺激に応答して生じることも有り、それによって体に 異常を来すことにもなる。例えば関節は痛風、リウマチ性関節炎、原組織性関節 炎（ｆｉｌａｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）およびｌｙｍｅ病のような関節炎症状 で炎症を起こす、例えばＳｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａ ｒｙ（図付）（１９８２）、前出、第１２３〜１２４頁を参照されたい。これら の状態は細胞の血管外遊出、細胞が循環系から炎症部位へ出て行くという特徴を 有している。このような血管外遊出を抑制できる剤、いいかえれば異常な生理的 刺激に対する炎症性応答を抑制できる剤は炎症を和らげるために使用することが できる。 リポソーム性エーテル脂質の「抗炎症有効量」としては、異常な生理的刺激に 対する応答であって、傷に対する応答における体の正常な修復過程の一部ではな い炎症のような異常な炎症に特徴づけられる症状に罹っている動物における炎症 性の応答または反応を和らげ、抑制または防ぐのに有効なエーテル脂質の如何な る量でもよい。エーテル脂質の抗炎症性有効量は一般に治療される動物の体重１ ｋｇ当り約０．１ｍｇから約１００ｍｇである。 本発明の方法は動物に追加的な生物活性剤を投与すること、即ち投与されるエ ーテル脂質に更に生物的に活性な剤を投与することも含むものである。この追加 的な生物的活性剤、例えば抗菌剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、治療脂質また造血細胞 成長促進剤はリポソームと会合していてもよいし、会合していなくてもよい。生 物学的に活性な剤のリポソームとの「会合」とは、該リポソームの水性分画また は脂質二重層中への該剤の取り込みを指し、例えば該剤と二重層の内部または外 部モノレイヤーの表面との複合体の形成による結合を示す。リポソームと会合す る追加の生物活性剤はアントラサイクリン系抗生物質、抗代謝剤またはビンカア ルカロイドのような抗腫瘍剤が好ましい。会合していない生物活性剤はリポソー ム投与と同時または異なった時間に投与することができる。会合していない生物 活性剤の好ましいものとしてはエリスロポエチンまたはインターロイキン３（Ｔ Ｌ−３）のような赤血球増殖促進剤および顆粒球マクロファージコロニー刺激因 子（ＧＭ−ＣＳＦ）のようなものが挙げられる。 この発明は次の実施例により、より理解が深まるであろう。しかしながら、こ れらの実施例は、本発明の特許請求の範囲で定義された本発明をより判り易く説 明するためのもので、本発明を限定するものではない。 実施例 実施例１ 製造 化合物：エーテル脂質（ＥＬ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジステ アロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルエ タノールアミン−グルタール酸（ＤＰＰＥ−ＧＡ）、パルミトイルオレオイルホ スファチジルエタノールアミン−グルタール酸（ＰＯＰＥ−ＧＡ）およびジオレ オイルホスファチジルエタノールアミン−グルタール酸（ＤＯＰＥ−ＧＡ）をＡ ｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（バーミンガム、アラバマ）から入手した 。コレステロール（Ｃｈｏｌ）はＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｍｐａｎｙ Ｕ．Ｓ．Ａ．から購入した。Ｄｕｌｂｅｃｃｏのホスフェート緩衝食塩水（Ｄ −ＰＢＳ）はＧｉｂｃｏ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ． （Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ニューヨーク、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から購入した。他 の剤はすべて最高純度のものを使用した。 リポソーム：“空の”リポソームは溶媒蒸発法により製造した。ＥＬを含有す るリポソームは、まずＥＬをクロロホルム中に溶解し、次いで種々のモル比での ＥＰＣ／Ｃｈｏｌ、ＤＯＰＣ／ＣｈｏｌまたはＤＳＰＣ／Ｃｈｏｌ中に、クロロ ホルム−メタノール（２：１ｖ／ｖ）中の１０モル％のＤＰＰＥ−ＧＡ、ＰＯＰ Ｅ−ＧＡまたはＤＯＰＥ−ＧＡの存在下あるいは不存在下混合した。ここで用い た有機溶媒をロータリーエバポレーターを用いて真空下除去し、次いで得られた 乾燥薄膜をＤＰＢＳ緩衝溶液で水和した。得られた生成物を、押出機（Ｌｉｐｅ ｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒｅｎｅ Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、カナダ）を用い０．１ μｍの二重に重ねたＮｕｃｌｅｏｐａｒｅフィルターを１０回通して押出しを行 なった。リポソームのサイズは、Ｎｉｃｏｐ Ｍｏｄｅｌ ３７０ Ｓｕｂｍｉｃ ｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅｒの光散乱により測定した。全実施例にわた ってリポソームは９６〜１２６ｎｍの平均直径を有していた。実施例２ 赤血球細胞（ＲＢＣ）溶血測定 赤血球細胞（ＲＢＣ）の４％懸濁液０．５ｍｌをＰＢＳ中で３回洗浄したもの を種々の濃度の（連続的に希釈されている）「空の」リポソームと共にインキュ ベートした。このリポソーム類としては即ち、上述のようにして製造された、エ ーテル脂質もしくは他の生物活性剤を有さないリポソーム、遊離の（非リポソー ム性）エーテル脂質またはリポソーム性エーテル脂質である。これらの試料は３ ７℃の攪拌機で２０時間渦巻き攪拌し、次いで３，０００ｒｐｍで１０分間遠心 分離を行なった。得られた０．２ｍｌの上清を１ｍｌとなるまで水で希釈し、試 料中の溶血のパーセンテージを５５０ｎｍにおけるスペクトロ光学法（ｓｐｅｃ ｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）で定量した。水によ る同数のＲＢＣの低張溶解によるヘモグロビンの溶出を１００％ポジティブコン トロールとした；ＰＢＳをネガティブコントロールとした。この製剤中に用いら れたエーテル脂質は１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ− ３−ホスホコリン（ＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃）である。 上記の試験結果を以下の表１に示す。表中、第１欄は溶血活性を試験した製剤 の成分を示し、真中の欄は各々の成分のモル比を示し、第３の欄は５％の溶血が 観察される脂質濃度（ＨＩ₅）（マイクロモル）を示す。 実施例３ Ｉｎ ＶｉｔｒｏでのＭｕｒｉｎｅ癌細胞増殖抑制に関する研究 遊離、リポソーム性ＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃または空の（ＥＬのない）リポソ ームによる種々の癌細胞の増殖のｉｎ ｖｉｔｒｏでの各々の抑制についてスル ホロダミンＢ（ＳＲＢ）測定によって観察した。簡単に説明すると、１ウエル当 り５，０００のＬｅｖｉｓ肺癌（ＬＬＣ）、Ｐ３８８またはＰ３８８−アドリア マイシン耐性（ＡＤＲ）細胞を１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０媒体 中の９６ウエル平底マイクロ滴定プレートに各々別個に置き、５％ＣＯ₂の湿気 を帯びた空気中で３７℃に保った。２４時間後、細胞を種々の濃度の空のリポソ ーム（ＥＬのない）、ＤＰＢＳ、遊離のエーテル脂質またはリポソーム性エーテ ル脂質に触れさせ、３７℃で更に４８時間培養した。ＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃の 種々の製剤で処理した細胞を５０μｌの冷５０％（ｗｔ／ｖｏｌ）トリクロロ酢 酸（ＴＣＡ）を添加して固定し、４℃で１時間インキュベートした。プレートを 脱イオン水で５回洗浄し、一晩放置して空気乾燥した。１００μｌのＳＲＢ（１ ％酢酸中の０．４％ ｗｔ／ｖｏｌ）を添加し、室温で１０〜１５分間インキュ ベートした。結合されていないＳＲＢを１％の酢酸で５回洗浄することにより除 去した。プレートを空気乾燥し、結合ＳＲＢをＴｒｉｓバッファーで溶解し、５ ５１ｎｍにおいて光学濃度を読み取り、式５０×［（Ｔ−ＴＯ）／（Ｃ−ＴＯ） ］＝５０ にしたがって５０％増殖抑制（ＧＩ₅₀）を計算した。式中コントロー ルの光学濃度が（Ｃ）であり、試験された光学濃度は（Ｔ）、時間ゼロにおける 光学濃度が（ＴＯ）である。 ５０％の増殖抑制（ＧＩ₅₀）を獲得したエーテル脂質の濃度を関する結果を表 ２（下記）に示す。第１欄は試験された製剤の組成を、第２欄は各々の製剤組成 のモル比を示す。第３、４および第５欄は各々ＬＬＣ、Ｐ３８８およびＰ３８８ −ＡＤＲ培養物についてのＧＩ₅₀データに関するものである。これらの製剤にお いて使用されたエーテル脂質は１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ− グリセロ−３−ホスホコリンであった。 実施例４ ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒト癌細胞増殖抑制に関する研究 ヒトＡ５４９肺癌、ＭＣＦ７およびＭＣＦ７／ＡＤＲ細胞をプレート上に撒き （１ウエルにつき５，０００細胞）、そして２４時間のインキュベーション後、 遊離またはリポソームに取り込んだ種々の濃度のエーテル脂質に７２時間さらし た。増殖抑制はＳＲＢ法により測定した。エーテル脂質を有さないコントロール のリポソームによるインキュベーションでは６０μＭまでの脂質濃度では増殖抑 制を生じなかった。結果を表３に、５０％増殖抑制（ＧＩ₅₀）を獲得したエーテ ル脂質の濃度として示した。表中、第１欄は試験された製剤の組成を示し、第２ 欄は製剤成分のモル比を示し、第３、４、５欄は各々Ａ５４９、ＭＣＦ７および ＭＣＦ７／ＡＤＲ培養の結果を示すものである。上記製剤において用いられてい るエーテル脂質は１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ−３ −ホスホコリンである。 実施例５ Ｉｎ Ｖｉｖｏ毒性研究 雌Ｃ５７／ＢＬ６マウスの複数の群（５匹／群、重量：２０〜２２ｇｍ）に種 々の投与量でＰＢＳに溶解した遊離（１２．５〜２００ｍｇ／ｋｇ）およびリポ ソームエーテル脂質（１２．５〜２００ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈より注射した。別 の群のマウスにエタノールを注射した。これらのマウスの注射直後の急性毒性に ついて観察した結果を表４に示す。 実施例６ ｉｎ ｖｉｖｏでの効能に関する研究 Ｌｅｖｉｓ肺癌細胞（ＬＬＣ）をＡＴＣＣから入手し、ＲＰＭＩ媒体中に保持 した。雌のＣ５７／ＢＬ６マウス（体重１８〜２２ｇ）の４群（１０匹／群）に 、０日目に尾部静脈から０．２ｍｌの殺菌ＰＢＳ中にＬＬＣを２×１０⁵細胞を 懸濁した液を注射した。癌細胞注射後１、３、５、７、９の各日数後に、第１と 第２群には２５ｍｇ／ｋｇの遊離ＥＬまたはリポソーム性ＥＬを尾部静脈から与 えた。第３と第４群にはＥＬのないリポソームまたは０．２ｍｌのＰＢＳを同量 の脂質を投与するように投与した。ｉｎ ｖｉｖｏにおける遊離およびリポソー ム性ＥＬの抗転移活性は、マウスの実験群の肺に存在する腫瘍結節の数を基にし て計算した。結果を図１および２に示す。明細書中で挙げている文献 米国特許 ４，１５９，９８８、４，１６３，７４８、４，２３５，８７１、４，３８ ２，０３５、４，５２２，８０３、４，５８８，５７８、４，７３４，２２５、 ４，８０４，７８９、４，８３７，０２８、４，９２０，０１６、４，９７５， ２８２、５，００８，０５０、５，０１３，５６６、５，０３０，４５３、５， ０５９，４２１、５，０７７，０５６、５，１６９，６３７、３，７５２，８８ ６外国特許 ＷＯ８９／００８８４６、１，５８３，６６１、４，１３２，３４５その他 Ｂａｚｉｌｌ ａｎｄ Ｄｅｘｔｅｒ，キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒ ｅｓ．）５０：７５０５（１９９０） Ｂｅｒｄｅｌ，Ｂｒ．ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）６４ ：２０８（１９９１） Ｂｅｒｄｅｌ，オンコロジー（Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ）１３：２４５（１９９０） Ｂｈａｔｉａ ａｎｄ Ｈａｄｊｕ，リピッズ（Ｌｉｐｉｄｓ）２６（１２）：１ ４２４（１９９１） Ｂｌｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，バイオヒミカ・バイオフィジカ・エ・アクタ（Ｂｉｏｃ ｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．）Ｕ１１４９Ｕ：１８０（１９９３） Ｄａｒｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．モレキュラー セル バイオロジー（Ｍｏｌｅｃｕｌ ａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ），Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎ Ａｍｅｒｉｃａ ｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｉｎｃ．（１９８６），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．５７３−５７ ５ Ｄｅａｍｅｒ ａｎｄ Ｕｓｔｅｒ，「リポソーム：メソッズ・アンド・メカニズ ム」（“Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ”），ｉｎ：Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（Ｍ．Ｏｓｔｒｏ，ｅｄ ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８３）， ｐｐ．２７−５２ Ｄｉｅｔｚｆｅｌｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅ ｒ Ｒｅｓ．）５３：３７４７ ９１９９３） Ｇａｂｉｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，ファーマクロジカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍ．Ｒ ｅｓ．）１０（５）：７０３ ９１９９３） Ｌａｙｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ヨーロッピアン・ジャーナル・オブ・キャンサー（ Ｅｕｅ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）１６：６４（１９８０） Ｌｅｗｉｓ ａｎｄ ＭｃＥｌｈａｎｅｙ，メソモルフィック・フェーズ・ビヘビ ア・オブ・リピド・バイレイヤズ（“Ｔｈｅ Ｍｅｓｏｍｏｒｐｈｉｃ Ｐｈａｓ ｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｌｉｐｉｄ Ｂｉｌａｙｅｒｓ”），ｉｎ Ｔｈｅ Ｓ ｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ （Ｐ．Ｙｅ ａｇｌｅ，ｅｄ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９２），Ｂｏｃａ Ｒ ａｔｏｎ，Ｆｌ．，ｐｐ．７３−１５５，ａｔ ｐｐ．１２３−１２６ Ｍｕｓｃｈｉｏｌ ｅｔ ａｌ．，リピッズ（Ｌｉｐｉｄｓ）２２（１１）：９３ ０（１９８７） Ｎａｉｒｎ，ｉｎ：Ｒｅｍｉｎａｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ ｃｉｅｎｃｅ （Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．） Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，（１９８５）， ｐｐ．１４９２−１５１７ Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，バイオヒミカ・バイオフィジカ・エ・ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．）１３５：６２４（１ ９ ６８） Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，バイオヒミカ・バイオフィジカ・エ・アクタ（Ｂｉｏｃｈ ｉｍ．ＢｉｏＰｈｙｓ．Ａｃｔａ．）１１０８：２５７（１９９２） Ｐｏｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）５ ２ ：２８３５（１９９２） Ｐｏｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）５ ０ ：２２０３（１９９０） Ｒｅｅｄ ｅｔ ａｌ．，ライフ・サイエンス、４９：１２２１（１９９１） Ｒｕｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＵＣＬ．６４（６）：１３０１（１９８０）Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（ｉｌｌｕｓｔｒａ ｔｅｄ） （２４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｖ．Ｂａｓｍａｊｉａｎ ｅｔ ａｌ ．，ｅｄｓ．），Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒ ｅ，ＭＤ（１９８２），ＰＰ．７０７−７０８ Ｔｒｉｔｔｏｎ ａｎｄ Ｈｉｃｋｍａｎ，キャンサー・セルズ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ）２（４）：９５（１９９０） Ｗｏｒｋｍａｎ，キャンサー・セルズ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ）３（８）： ３１５（１９９１） Ｗｏｒｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，バイオケミカル・ファーマコロジー（Ｂｉｏｃｈ ｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）４１（２）：３１９（１９９１） Ｚｅｉｓｉｇ ｅｔ ａｌ．，アンチ−キャンサー・ドラッグ（Ａｎｔｉ−Ｃａｎ ｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ）４：５７（１９９３）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジャノフ，アンドリュー，エス アメリカ合衆国 ペンシルヴァニア州 19067 ヤードレイ カウンテスドライヴ 560 (72)発明者 アーマド，イムラン アメリカ合衆国 ニュージャージー州 08536 プレインスボロ フォックスラン ドライヴ 2408 (72)発明者 バーティア，シュレシュ，ケイ インド国 ニューデリー 110019 アラカ ナダ タラアパートメント エフ13

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．エーテル脂質および頭部基派生脂質を含有する脂質二重層を有するリポソー ムであって、該エーテル脂質が化学式： で表わされるものであり、 式中、Ｒ₁はＹ₁Ｙ₂であり、Ｙ₂はＣＨ₃またはＣＯ₂Ｈであり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1 （ＣＨ＝ＣＨ）_n2（ＣＨ₂）_n3（ＣＨ＝ＣＨ）_n4（ＣＨ₂）_n5（ＣＨ＝ＣＨ）_n6（ ＣＨ₂）_n7（ＣＨ＝ＣＨ）_n8（ＣＨ₂）_n9であり、ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は３〜２３の整数であり、ｎ１は０また は３〜２３の整数であり、ｎ３は０または１〜２１の整数である。ｎ５は０また は１〜１８の整数であり、ｎ７は０または０〜１５の整数、ｎ９は０または１〜 １２の整数であり、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８は各々互いに独立して０または １である； ＺはＯまたはＳであり； Ｒ₂はＹ₁Ｙ₂または（Ｃ（Ｘ₁）_n10（Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅であり；Ｘ₁、Ｘ₂ 、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅は各々互いに独立して水素又はフッ素であり、ｎ１０は０ 、１または２であり、ｎ１１は０、１または２であり、ｎ１２は０または１〜２ ３の整数であり、ｎ１２が０でないとき、ｎ１０＋ｎ１１の和は２であり； Ｒ₃は式Ｒ₅−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｒ₆で表わされ、Ｒ₅はＯ、ＳまたはＮＨであり、 Ｒ₆はＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＯＨ 、またはＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ₇であり、Ｒ₇はＹ₂ＣＨ₃またはＹ₂ＣＯ₂Ｈで ある。 ２．リポソームが約２００ｎｍより短い径を有する請求項１記載のリポソーム。 ３．リポソームが約５０ｎｍより長く約２００ｎｍより短い径を有する請求項２ 記載のリポソーム。 ４．Ｙ₂がＣＨ₃である請求項１記載のリポソーム。 ５．Ｒ₁が（ＣＨ₂）_n1ＣＨ₃である請求項４記載のリポソーム。 ６．Ｒ₁が（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃である請求項５記載のリポソーム。 ７．ＺがＯである請求項１記載のリポソーム。 ８．Ｒ₂が（Ｃ（Ｘ₁）_n10（Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅である請求項１記載のリ ポソーム。 ９．ｎ１２がゼロである請求項８記載のリポソーム。 １０．Ｒ₂がＣＨ₃である請求項９記載のリポソーム。 １１．ｎ１２が１である請求項８記載のリポソーム。 １２．Ｒ₂がＣＨ₂ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＦ₃またはＣＦ₂ＣＦ₃である請求項１１記載の リポソーム。 １３．Ｒ₃がＯ−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｒ₆である請求項１記載のリポソーム。 １４．Ｒ₃が−Ｏ−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃である請求項１３記 載のリポソーム。 １５．エーテル脂質が である請求項１記載のリポソーム。 １６．頭部基派生脂質がホスファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸である 請求項１記載のリポソーム。 １７．ホスファチジルエタノールアミンがジパルミトイルホスファチジルエタノ ールアミン、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミンまたはジ オレオイルホスファチジルエタノールアミンである請求項１６記載のリポソーム 。 １８．ホスファチジルエタノールアミンがジオレオイルホスファチジルエタノー ルアミンである請求項１７記載のリポソーム。 １９．ジカルボン酸がグルタール酸、セバチン酸、コハク酸または酒石酸である 請求項１６記載のリポソーム。 ２０．ジカルボン酸がグルタール酸である請求項１９記載のリポソーム。 ２１．ホスファチジルエタノールアミンジカルボン酸がジオレオイルホスファチ ジルエタノールアミン−グルタール酸である請求項１６記載のリポソーム。 ２２．頭部基派生脂質が循環促進脂質である請求項１記載のリポソーム。 ２３．二重層がステロールを含有する請求項１記載のリポソーム。 ２４．ステロールがコレステロールである請求項２３記載のリポソーム。 ２５．二重層が中性脂質を含有する請求項１記載のリポソーム。 ２６．中性脂質がホスファチジルコリンである請求項２５記載のリポソーム。 ２７．ホスファチジルコリンが卵ホスファチジルコリン、パルミトイルオレオイ ルホスファチジルコリンまたはジオレオイルホスファチジルコリンである請求項 ２６記載のリポソーム。 ２８．ホスファチジルコリンがジオレオイルホスファチジルコリンである請求項 ２７記載のリポソーム。 ２９．循環促進脂質を含有する請求項１記載のリポソーム。 ３０．ステロールおよび中性脂質を更に含有する請求項１記載のリポソーム。 ３１．エーテル脂質が である請求項３０記載のリポソーム。 ３２．頭部基派生脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタ ール酸である請求項３０記載のリポソーム。 ３３．ステロールがコレステロールである請求項３０記載のリポソーム。 ３４．中性脂質がジオレオイルホスファチジルコリンである請求項３０記載のリ ポソーム。 ３５．二重層が約２０モル％のエーテル脂質、約１０モル％のジオレオイルホス ファチジルエタノールアミン−グルタール酸、約３０モル％のコレステロールお よび約４０モル％のジオレオイルホスファチジルコリンを含有する請求項３０記 載のリポソーム。 ３６．生物活性剤を更に含有する請求項１記載のリポソーム。 ３７．薬理学的に許容し得る担体および請求項１記載のリポソームを含有する薬 学的組成物。 ３８．薬理学的に許容し得る担体および頭部基派生脂質およびエーテル脂質を含 有する脂質二重層を有するリポソームを含有する薬理学的組成物を動物に投与す ることからなる、エーテル脂質の動物への投与方法であって、エーテル脂質は化 学式： で表わされるものであり、 式中、Ｒ₁はＹ₁Ｙ₂であり、Ｙ₂はＣＨ₃またはＣＯ₂Ｈであり、Ｙ₁は（ＣＨ₂）_n1 （ＣＨ＝ＣＨ）_n2（ＣＨ₂）_n3（ＣＨ＝ＣＨ）_n4（ＣＨ₂）_n5（ＣＨ＝ＣＨ）_n6（ ＣＨ₂）_n7（ＣＨ＝ＣＨ）_n8（ＣＨ₂）_n9であり、ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は３〜２３の整数であり、ｎ１は０また は３〜２３の整数であり、ｎ３は０または１〜２１の整数である。ｎ５は０また は１〜１８の整数であり、ｎ７は０または０〜１５の整数、ｎ９は０または１〜 １２の整数であり、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８は各々互いに独立して０または １である； ＺはＯまたはＳであり； Ｒ₂はＹ₁Ｙ₂または（Ｃ（Ｘ₁）_n10（Ｘ₂）_n11）_n12ＣＸ₃Ｘ₄Ｘ₅であり；Ｘ₁、Ｘ₂ 、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅は各々互いに独立して水素又はフッ素であり、ｎ１０は０ 、１または２であり、ｎ１１は０、１または２であり、ｎ１２は０または１〜２ ３の整数であり、ｎ１２が０でないとき、ｎ１０＋ｎ１１の和は２であり； Ｒ₃は式Ｒ₅−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−Ｒ₆で表わされ、Ｒ₅はＯ、ＳまたはＮＨであり、 Ｒ₆はＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＯＨ 、またはＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ₇であり、Ｒ₇はＹ₂ＣＨ₃またはＹ₂ＣＯ₂Ｈで ある、 ものである。 ３９．動物がヒトである請求項３８記載の方法。 ４０．動物が癌に侵されており、抗癌有効量のエーテル脂質が投与されるもので ある請求項３８記載の方法。 ４１．癌が肺、脳、結腸、卵巣または乳房の癌である請求項４０記載の方法。 ４２．抗癌有効量のリポソーム性エーテル脂質が、該薬理学的組成物を投与され る動物の体重１ｋｇ当り約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇのエーテル脂質である 請求項４０記載の方法。 ４３．動物が炎症性障害に罹っており、抗炎症有効量のエーテル脂質を動物に投 与する請求項３８記載の方法。 ４４．炎症性障害が、関節炎症状、喘息性障害またはアレルギー反応である請求 項４３記載の方法。 ４５．エーテル脂質の抗炎症有効量が薬理学的組成物を投与される動物の体重１ ｋｇ当り約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇである請求項４３記載の方法。 ４６．動物に生物活性剤を更に投与することを包含する請求項３８記載の方法。 ４７．更に追加される生物活性剤が抗腫瘍剤、抗菌剤、抗炎症剤、治療用脂質ま たは造血細胞増殖促進剤である請求項３８記載の方法。 ４８．リポソームが約５０ｎｍより長く約２００ｎｍより短い径を有するもので ある請求項３８記載の方法。 ４９．Ｒ₁が（ＣＨ₂）₁₇ＣＨ₃である請求項３８記載の方法。 ５０．Ｒ₂がＣＨ₃である請求項３８記載の方法。 ５１．Ｒ₃が−Ｏ−Ｐ（Ｏ）₂−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₃である請求項３８記 載の方法。 ５２．エーテル脂質が である請求項３８記載の方法。 ５３．頭部基派生脂質がホスファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸である 請求項３８記載の方法。 ５４．ホスファチジルエタノールアミンジカルボン酸がジオレオイルホスファチ ジルエタノールアミン−グルタール酸である請求項５３記載の方法。 ５５．二重層がステロールおよび中性脂質を更に含有する請求項３８記載の方法 。 ５６．頭部基派生脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタ ール酸であり、ステロールがコレステロールであり、中性脂質がジオレオイルホ スファチジルコリンであり、エーテル脂質が である請求項５５記載の方法。 ５７．二重層が約２０モル％のエーテル脂質、約１０モル％のジオレオイルホス ファチジルエタノールアミン−グルタール酸、約３０モル％のコレステロールお よび約４０モル％のジオレオイルホスファチジルコリンを含有する、請求項５６ 記載の方法。 ５８．リポソームが循環促進脂質を含有する請求項３８記載の方法。