JPH08510748A - リポソームが誘発する生理的副作用の低減 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 動物にリポソーム組成物を投与する方法がここに提供され、その方法は、生理活性剤に加えて、脂質と表面剤改質分子を含む脂質二分子膜を有する生理的副作用低減有効量のリポソームを含有するリポソーム組成物を動物に投与することを含むものである。リポソーム組成物を投与することによって、動物が被るおそれのある生理的副作用が、脂質の二分子膜内に表面剤改質分子を存在させることによって低減される。

Description

【発明の詳細な説明】 リポソームが誘発する生理的副作用の低減 本出願は、１９９３年５月２１日出願の米国特許出願番号第０６５，９２８号 の一部継続出願である。 本発明は、ヒトなどの哺乳動物を初めとする動物に、リポソーム組成物を投与 する際に、リポソーム誘発生理的副作用を低減する方法に関する。これらのリポ ソーム組成物は、生理活性剤をカプセル化するのに使用することができる。 リポソームは、取り込まれた水性容積を含む完全に閉鎖された脂質二分子膜（ lipid bilayer membrane）である。この二分子膜（bilayer）は、疎水性領域と 親水性領域を有する単分子膜（monolayer）からなる脂質分子で構成されている 。二分子膜の構造は、脂質単分子膜の疎水性（非極性）アシル鎖領域が二分子膜 の中心に向かって配向し、一方、親水性（極性）脂質ヘッドグループ（headgrou p）が水性相に向かって配向するようになっている。 リポソーム薬剤搬送系においては、薬剤のような生理活性剤は、リポソーム内 に取り込まれ、その後、治療しようとする患者に投与される（Rahman等、米国特 許第３，９９３，７５４号；Sears、米国特許第４，１４５，４１０号；Papahad jopoulos等、米国特許第４，２３５，８７１号；Schneider、米国特許第４，２ ２４，１７９号；及びFountain等、米国特許第４，５８８，５７８号等を参照さ れたい）。生理活性剤は、リポソームの脂質二分子膜内又はその水性区画（aque ous compartment）内に取り込まれることができる。生理活性剤、特 に治療薬又は診断薬をリポソーム組成物内にカプセル化することは、これらの薬 剤を体内の特定部位に搬送するための、十分に確立された方法である。 細網内皮系（ＲＥＳ）の食細胞により、リポソームを内在化することができる と考えられている。リポソームは、肝臓、腎臓、肺及び脾臓内の細網内皮組織に 造影剤を運ぶのに有用であると認められている。リポソームでカプセル化された ヨウ素標識化合物は、患者の循環系に注射されて、診断検査のために、ある特定 の器官を不透明にする（Schneider等、“注射可能な不透明化リポソーム組成物 ”、国際出願番号ＰＣＴ／ＥＰ８８／００４４７、１９８９年５月１０日公開、 国際公開番号ＷＯ８８／０９６１５を参照されたい）。 脂質エマルジョンの粒径が２〜３μｍと大きくなるにつれて、骨髄とは異なり 、肝臓及び脾臓内で、比較的大部分の粒子が食作用を受けることが認められてい る。しかし、ヨウ素標識脂質エマルジョンの注入の後で、生理的副作用が認めら れている。別の研究から、平均粒径が０．３ミクロンの硫黄コロイドを、副作用 を伴わずに使用できることがわかっている（Ivancev等、“肝臓に及ぼす静脈内 注射ヨウ素標識脂質エマルジョンの影響”、アクタ・ラジオロジカ（Acta Radio logica）30，291-298（1989）参照）。 リポソームの循環時間に対する有効性について、負帯電リン脂質誘導体に関し て研究が行われている（Park等“いくつかの負帯電リン脂質誘導体は生体内での リポソーム循環時間を長びかせる”、バイオヒミカ・エ・バイオフィジカ・アク タ（Biochimica et Biophysica Acta）1108（2），257-60（1992）参照）。 静脈内投与リポソームの血液循環時間を長びかせる方法としては、 両親媒性の脂質誘導体を、ポリアルキルエーテルと共に、リポソームに添加する 方法が挙げられる（Woodle等、米国特許第５，０１３，５５６号、“循環時間を 長びかせたリポソーム”、１９９１年５月７日発行、を参照されたい）。 発明の要旨 本発明は、生理活性剤と、表面改質剤およびアンカー（anchor）を含む表面剤 改質分子（surface agent-modified molecule）及び脂質を有する脂質二分子膜 とを含むリポソームの、生理的副作用低減有効量を含有するリポソーム組成物を 、動物に投与することからなる動物へのリポソーム組成物の投与方法を提供する 。本発明の方法で用いられるリポソームは、代表的には約２００ｎｍから約５０ ００ｎｍまで、より好ましくは約４００ｎｍから約５０００ｎｍまで、現在、最 も好ましくは約４００ｎｍから約１０００ｎｍまでの直径を有している。このよ うな直径を有するリポソームは、嵌合−融合（interdigitation-fusion）リポソ ーム（ＩＦＶ）が好ましいが、ラージユニラメラリポソーム（ＬＵＶ）やマルチ ラメラリポソーム（ＭＬＶ）であってもよい。二分子膜内の表面剤改質分子の濃 度は、通常は約２モル％以上、より好ましくは約５モル％以上、最も好ましくは 約１０モル％以上である。リポソームの生理的副作用低減有効量は、動物の体重 １ｋｇ当たりリポソーム約５０ｍｇが好ましい。 表面改質剤は、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ビメリン酸（bimelic ac id）、スベリン酸、酒石酸、粘液酸、テトラフルオロコハク酸、ヘキサフルオロ グルタル酸などのジカルボン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、グリコー ル酸、乳酸、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸、ヘプタフルオロ 酪酸などのモノカルボ ン酸、あるいはビス（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチルスルホン 、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート、２−イミノチオラン（ トラウト試薬（Traut's reagent））などのスルホ脂質が好ましい。特に好まし い表面改質剤は、グルタル酸である。アンカーは、リン脂質が好ましく、リン脂 質は、飽和アシル鎖を持っていることが好ましい。現在、好ましい飽和アシル鎖 は、パルミテート鎖である。ホスホ脂質アンカーは、ジパルミトイルホスファチ ジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）が好ましい。アンカーは、両親媒性蛋白質で あってもよい。表面改質剤は、アンカーの疎水性領域に結合していることが好ま しい。 表面改質分子は、スペーサー基を含むことができ、そのスペーサー基は、代表 的には、リン脂質アンカーのグリセロール骨格（backborn）及びリン脂質アンカ ーのホスフェート基に結合することができる一つ又はそれ以上の有機官能基を含 有する任意の有機物である。代表的には、官能基は、水酸基、チオール基、エポ キシド基又はアミン基であり、スペーサー基は、エチレングリコール又はポリエ チレングリコールが好ましい。 本発明方法に用いられるリポソームは、生理活性剤を含み、その生理活性剤は 、代表的には、造影剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、殺腫瘍剤、 代謝拮抗薬、炭水化物、ポリペプチド、ペプチド、蛋白質、トキシン、酵素、ホ ルモン、神経伝達物質、糖蛋白、リポ蛋白、免疫グロブリン、免疫調節剤、血管 拡張剤、染料、放射線標識剤、放射線不透性化合物、蛍光化合物、レセプター結 合分子、抗炎症剤、散瞳化合物、局所麻酔剤、麻酔剤、ビタミン、核酸、ポリヌ クレオチド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＭＲＩ、放射線又は水溶性ヨウ素 標識造影剤、それらの混合物及び薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの混合 物である。生理活性剤は、好ましくは、イオヘキソール、イオパミドール、イオ キソグレート、イオトロラン、イオバーソル、イオタラメート、ヨージミド、ヨ ージパミド、イオプロミド、メトリザミド、イオペントール、ヨージキサノール 、ディアトリゾエート、イオトロクス酸（iotroxic acid）、それらの混合物及 び薬理学的に許容され得る塩からなる群から選ばれた水溶性ヨウ素標識造影剤で ある。より好ましくは、水溶性ヨウ素標識造影剤は、イオトロランである。リポ ソーム組成物は、静脈内又は動脈内投与により投与されるのが好ましい。 本発明は、抗炎症剤と、生理活性剤と表面改質剤とアンカーを含む表面剤改質 分子及び脂質を有する脂質二分子膜とを含む生理的副作用低減有効量のリポソー ムを含有するリポソーム組成物とを、動物に投与することからなり、この際、該 抗炎症剤を、リポソーム組成物投与前に動物に投与する動物へのリポソーム組成 物の投与方法をも提供する。本発明の一実施態様においては、抗炎症剤は、ステ ロイドであり、本発明の他の実施態様においては、抗炎症剤は、非ステロイド系 抗炎症剤であり、好ましくは、インドメタシンである。抗炎症剤は、リポソーム 組成物の投与の早くても約３０分前に、動物に静脈内又は動脈内投与するのが好 ましい。 本発明は、リポソーム誘発生理的副作用を低減するための医薬組成物を製造す るために、生理活性剤と、表面改質剤とアンカーを含む表面剤改質分子及び脂質 を有する脂質二分子膜とを含む生理的副作用低減有効量のリポソームの使用を提 供する。このリポソームは、代表的には約２００ｎｍから約５０００ｎｍまで、 望ましくは約４００ｎｍ から約５０００ｎｍまで、より望ましくは約４００ｎｍから約１０００ｎｍまで の直径を有している。このリポソームは、ラージユニラメラリポソーム又は嵌合 −融合リポソームであるが、水性区画内に取り込まれた溶質を含み、各水性区画 内のその溶質の濃度が実質的に等しいマルチラメラリポソームのような、マルチ ラメラリポソームであってもよい。 二分子膜内の表面剤改質分子の濃度は、代表的には約２モル％以上、好ましく は約５モル％以上、より好ましくは約１０モル％以上である。表面改質剤は、コ ハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ビメリン酸、スベリン酸、酒石酸、粘液酸、 テトラフルオロコハク酸、ヘキサフルオログルタル酸などのジカルボン酸である ことが好ましい。現在、最も好ましくは、表面改質剤は、ジカルボン酸のグルタ ル酸である。しかし、表面改質剤は、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、グリ コール酸、乳酸、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸、ヘプタフル オロ酪酸などのモノカルボン酸、あるいはビス（スクシンイミドオキシカルボニ ルオキシ）エチルスルホン、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテー ト、２−イミノチオラン（トラウト試薬（Traut's reagent））などのスルホ脂 質であることもできる。 アンカーは、リン脂質が好ましく、パルミテート鎖などの飽和アシル鎖を持つ リン脂質がより好ましい。現在、好ましい本発明の特定の実施態様においては、 リン脂質アンカーはジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ ）である。しかし、アンカーは、両親媒性蛋白質であることもできる。 表面剤改質分子は、リン脂質アンカーとスペーサー基を含むことができ、その スペーサー基は、リン脂質アンカーのグリセロール骨格及 びリン脂質アンカーのホスフェート基に結合することができる一つ又はそれ以上 の有機官能基を含有している。代表的には、官能基は、水酸基、チオール基、エ ポキシド基又はアミン基である。スペーサー基は、エチレングリコール又はポリ エチレングリコールが好ましい。 リポソームに含まれる生理活性剤としては、造影剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、 抗真菌剤、駆虫剤、殺腫瘍剤、代謝拮抗薬、炭水化物、ポリペプチド、ペプチド 、蛋白質、トキシン、酵素、ホルモン、神経伝達物質、糖蛋白、リポ蛋白、免疫 グロブリン、免疫調節剤、血管拡張剤、染料、放射線標識、放射線不透性化合物 、蛍光化合物、レセプター結合分子、抗炎症剤、散瞳化合物、局所麻酔剤、麻酔 剤、ビタミン、核酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＭＲＩ 、放射線又は水溶性ヨウ素標識造影剤が挙げられ、それらの混合物及び薬理学的 に許容され得る塩も含むが、これらに限定されるものではない。現在、好ましい 生理活性剤は、イオヘキソール、イオパミドール、イオキソグレート、イオトロ ラン、イオバーソル、イオタラメート、ヨージミド、ヨージパミド、イオプロミ ド、メトリザミド、イオペントール、ヨージキサノール、ディアトリゾエート、 イオトロクス酸などの水溶性放射線造影剤であり、それらの混合物及び薬理学的 に許容され得る塩も含む。水溶性放射線造影剤は、イオトロランであることが好 ましい。 リポソームの生理的副作用低減有効量は、動物の体重１ｋｇ当たりリポソーム 約５０ｍｇが好ましい。 抗炎症剤に関連したリポソーム誘発生理的副作用を低減するための医薬組成物 を製造するために、生理活性剤と脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜 とを含む生理的副作用低減有効量のリポソーム の使用も、ここで提供され、このとき抗炎症剤はリポソームにカプセル化されて いない。この抗炎症剤は、ステロイド、あるいはインドメタシンなどの非ステロ イド系抗炎症剤であることができる。 また、生理活性剤と、脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを含む リポソームの生理的副作用低減有効量を含有するリポソーム組成物が、リポソー ム誘発生理的副作用を低減するのに適応した組成物として、ここに提供される。 図面の簡単な説明 図１ ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−グルタル酸（ＤＰＰＥ −ＧＡ） 図２ ＤＳＰＣ又はＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ嵌合−融合リポソーム（ＩＦＶ） の注射後のラット血漿中におけるリポソーム量率を示す。 黒四角：ＤＳＰＣ ＩＦＶ；黒丸：ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ（１０モル％） ＩＦＶ；ｘ軸：時間（Hrs）；ｙ軸：血漿中に残留する量率（％） 図３ ＤＳＰＣ又はＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡマルチラメラリポソーム（ＭＬＶ ）の注射後のラット血漿中におけるリポソーム量率を示す。 黒四角：ＤＳＰＣＭＬＶ；黒丸：ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ（１０モル％）Ｍ ＬＶ；ｘ軸：時間（Hrs）；ｙ軸：血漿中に残留する量率（％） 図４ 押出法により製造されたＤＳＰＣ又はＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡユニラメ ラリポソーム（ＬＵＶＥＴ）の注射後のラット血漿中におけるリポソーム量率を 示す。 黒四角：ＤＳＰＣ ＬＵＶＥＴ；黒丸：ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ（１０モル ％）ＬＵＶＥＴ；ｘ軸：時間（Hrs）；ｙ軸：血漿中に残 留する量率（％） 図５ イオトロラン含有ＤＳＰＣ及びＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶの容積 重量（volμme-weighted）直径 黒四角：ＤＳＰＣ ＩＦＶ；黒丸：ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶ（５モ ル％ＤＰＰＥ−ＧＡ）；黒三角：ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶ（１０モル ％ＤＰＰＥ−ＧＡ）；太い垂直線は、マルバーンカットオフ（Malvern cutoff） を示す。；ｘ軸：容積重量直径（ミクロン）；ｙ軸：分布率 図６ ＤＳＰＣ及びＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶにより引き起こされる血 圧変化 記録（上から下へ）：１０モル％ＤＰＰＥ−ＧＡ；５モル％ＤＰＰＥ−ＧＡ； ２モル％ＤＰＰＥ−ＧＡ；０モル％ＤＰＰＥ−ＧＡ；ｘ軸：時間（分）；ｙ軸： 平均動脈血圧（ｍｍＨｇ） 図７ ＤＳＰＣ／Ｎ−グルタリル−ＤＰＰＥリポソームの平均直径の関数として の正規化（normalized）ＡＵＣ（曲線下方領域） ｘ軸：リポソーム直径；ｙ軸：正規化ＡＵＣ 図８ ラットへのＤＰＰＥ−ＦＧＡ含有ＩＦリポソーム注入中の平均血圧 データは、動物＃１についてのものを示す。；ｘ軸：注入後の時間（分）；ｙ 軸：血圧（ｍｍＨｇ） 図９ ＤＰＰＥ−ＦＧＡＩＦ注入中の平均血圧；データは、動物＃２についての ものを示す。 図１０ ＤＳＰＣ（４．５）ＩＦリポソーム注入中の平均血圧 データは、動物番号３についてのものを示す。 図１１ ＤＳＰＣ（４．５）ＩＦリポソーム注入中の平均血圧 データは、動物番号４についてのものを示す。 図１２ ＤＳＰＣ（４．５）ＩＦリポソーム注入中の平均血圧 データは、動物番号５についてのものを示す。 図１３ 種々のリポソームタイプへのＤＰＰＥ−ＧＡ導入の効果 ｘ軸：時間（分）；ｙ軸：（血漿中の量％）；黒四角：ＤＳＰＣ ＬＵＶＥＴ ；黒丸：ＤＳＰＣ−ＤＰＰＥ／ＧＡ ＬＵＶＥＴ；黒三角：ＤＳＰＣ ＩＦ；黒 菱形：ＤＳＰＣ−ＤＰＰＥ／ＧＳＩＦ；白四角：ＤＳＰＣマルチラメラリポソー ム（ＭＬＶ）；白丸：ＤＳＰＣ−ＤＰＰＥ／ＧＡ ＭＬＶ 図１４ イオトロラン含有ＤＰＰＥ−ＧＡＩＦのマルバーン（Malvern）粒径分 布分析 ｘ軸：サンプル貯蔵条件；ｙ軸：Ｂｉｎのリポソーム％；ｚ軸：リポソーム直 径（ミクロン）；データは、ロット＃１についてのものを示す。 図１５ イオトロラン含有ＤＰＰＥ−ＧＡＩＦのマルバーン粒径分布分析 ｘ軸：サンプル貯蔵条件；ｙ軸：Ｂｉｎのリポソーム％；ｚ軸：リポソーム直 径（ミクロン）；データは、ロット＃２についてのものを示す。 図１６ ＤＰＰＥ−ＧＡ、イオトロラン含有ＩＦリポソームを用いたウサギ肝臓 のＣＴ画像検討 ｘ軸：注射後の時間（分）；ｙ軸：濃度（ΔＨＵ） 発明の詳細な説明 本発明は、生理活性剤と、脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを 含むリポソームを、生理的副作用低減有効量含有するリポソーム組成物を、動物 に投与することからなる動物へのリポソーム組成物の投与方法を提供する。動物 での生理的副作用は、いくつかのリポソーム組成物を動物に投与することと関連 している。このような動物は、ヒトなどの哺乳動物が好ましいが、リポソームを 投与することができる他の動物であってもよい。“生理的副作用”という用語は 、無気力、チアノーゼ性歯肉膜（cyanotic gingival membranes）、悪心、嘔吐 、排便、下痢、体温上昇、発熱、悪寒、ふるえ、傾眠、下背痛、消化器系障害、 呼吸困難、好中球減少、血小板減少などの血液反応、一過性低血圧、血管拡張、 一過性心臓変化などの心臓血管反応を含むが、これらに限定されるものではない 。 本発明の方法で用いられるリポソームは、好ましくは約２００ｎｍから約５０ ００ｎｍまで、より好ましくは約４００ｎｍから約１０００ｎｍまでの直径を有 している。動物に投与される場合、リポソームが大きいと、同じ組成を有してい るがサイズが小さいリポソームよりも、動物の循環系から速く取り除かれる傾向 があることが知られている。リポソーム表面に対するある種の改質をすることに よって、リポソームが動物の循環系内に残留する時間を長びかせることができる ことも知られている。しかし、本発明の方法で用いられるもののようなサイズ（ 直径）のリポソームが、同様なサイズの改質されていない（表面剤改質分子非含 有）リポソームに匹敵する速度で、動物の循環系から取り除かれ、肝臓内に同程 度に蓄積される傾向があるが、同様なサイズの改質されていないリポソームに比 較して、本発明のリポソ ームを投与すると、動物が受ける副作用を低減することができるということは、 これまで知られていない。 本発明の方法で用いられるリポソームは、嵌合−融合リポソーム（ＩＦＶ）が 好ましいが、ラージユニラメラリポソーム（ＬＵＶ）やマルチラメラリポソーム （ＭＬＶ）であってもよい。ＭＬＶは、その水性区画内に取り込まれた溶質を含 み、ＭＬＶの各水性区画の溶質濃度が実質的に等しいもの、即ち実質的に等しい ラメラ間溶質分布を有しているＭＬＶが好ましい。二分子膜内の表面剤改質分子 の濃度は、代表的には約２モル％以上、より好ましくは約５モル％以上、最も好 ましくは約１０モル％以上であり、モル％は、二分子膜内の表面剤改質分子のモ ル数を二分子膜内に存在する化合物の全モル数で割ったものとして計算される。 本発明の手法に従って、リポソーム中に表面剤改質分子を導入すると、いくつ かのリポソーム組成物を動物に投与することに伴う生理的副作用が顕著に低減す ることが見出された。より大きいリポソームの高カプセル化能、より大きいリポ ソームの短い生体内循環時間、放射線造影剤を含み動物体内の器官を対象とする リポソームの画像効率、大きいリポソームの生体分布（biodistribution）及び 動物肝臓内へのそれらの蓄積に著しい影響を及ぼすことなく、また、嵌合−融合 リポソームの調製方法を著しく妨害することなく、表面剤改質分子をリポソーム 内に導入できることも見出された。 本発明のリポソーム組成物は、“表面改質リポソーム組成物”、即ち生理活性 剤と、脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを含むリポソームを含有 するリポソーム組成物である。“表面剤改質分子”という用語は、ここでは、表 面改質剤とアンカーを含む分子を意 味するものとして用いられる。ここで用いられる“表面改質剤”は、アンカーの 親水性部分と一端で共有結合により結合することができる任意の有機化合物又は 物質である。ここで用いられる“アンカー”は、脂質二分子膜に安定に挿入され るのに十分な疎水性を有し、表面改質剤で改質するのに適した親水性部分、例え ば、水酸基、アミン基又はチオール基を含む親水性部分をも含んでいる任意の分 子である。表面改質剤は、アンカーの親水性部分と結合し、リポソームの外側の 媒体と相互に作用しない。 表面剤改質分子は、アンカーを、溶媒、例えばクロロホルム、塩化メチレン、 アセトニトリル、酢酸エチル、メタノールなどに溶解し、塩基、例えばトリエチ ルアミン、ジメチルアミノピリジン、ピリジンなどを加えた後、表面改質剤を添 加することにより調製される。次いで、混合物を、撹拌しながら室温で、あるい は加熱して反応させる。撹拌又は加熱の時間は、使用される特定の表面改質剤に よって変わるものであり、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）のような手段によ り、当業者が容易に決定できる。ＴＬＣ又は他の公知の方法によって決定できる ように、反応が完了したら、真空下にて、回転蒸発器で加熱することにより、溶 剤を除去する。ゲル濾過、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換樹脂ある いは当業者に知られている任意の手段によって、生成物を取り除く。次いで、生 成物を凍結乾燥する。これは、表面改質分子を調製する一つの方法であり、本発 明の教示を得た当業者が、他の方法を用いることもできる。 表面改質剤は、好ましくは、ジカルボン酸、例えばコハク酸、グルタル酸、ア ジピン酸、ビメリン酸、スベリン酸、酒石酸、粘液酸、テトラフルオロコハク酸 若しくはヘキサフルオログルタル酸、モノカル ボン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、グリコール酸、乳酸、トリ フルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸若しくはヘプタフルオロ酪酸、又は スルホ脂質、例えばビス（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチルスル ホン、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート若しくは２−イミノ チオラン（トラウト試薬）である。表面改質剤は、グルタル酸が好ましく（図１ 参照）、アンカーの親水性部分に共有結合によって、例えばホスファチジルエタ ノールアミン基の一級アミン、例えばジパルミトイルホスファチジルエタノール アミン（ＤＰＰＥ）にアミド結合によって、結合していることが好ましい。従っ て、本発明の好ましい実施態様においては、表面剤改質分子は、ＤＰＰＥに結合 したグルタル酸（ＤＰＰＥ−ＧＡ）からなる。しかし、本発明は、ＤＰＰＥ−Ｇ Ａを使用することに限定されるものではなく、表面改質剤とアンカーを任意に組 み合わせて、実施することができる。 アンカーとしては、脂質二分子膜に安定に挿入されるのに十分な疎水性及び表 面改質剤に結合するのに適した親水性部分を有する任意の分子を用いることがで きる。アンカーの疎水性部分は、一つ又はそれ以上の脂肪酸鎖を含み、アンカー が両親媒性脂質であることが好ましい。このような脂質としては、リン脂質、糖 脂質、スフィンゴミエリンを初めとするスフィンゴ脂質、ジアシルアンモニウム 両親媒性物質（diacylammoniμｍ amphiphile）、ジアシルグリセロール、グリ コスフィンゴ脂質、セレブロシド、スルファチド、セラミド、ポリヘキソシド、 ガングリオシド、ステロール等が挙げられるが、これらに限定されるものではな い。アンカーは、リン脂質、即ち、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタ ノールアミン、ホスファチジルグリセ ロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンなどの、一つ又は 二つのアシル鎖とホスフェート含有グリセロールバックボーンを有する両親媒性 脂質が好ましく、現在、好ましいリン脂質は、ホスファチジルエタノールアミン である。リン脂質は、飽和アシル鎖を有していることが好ましく、このアシル鎖 は、パルミテート鎖が好ましい。本発明の好ましい実施態様において、リン脂質 アンカーは、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）であ る。アンカーは、両親媒性蛋白質又はペプチドであってもよい。表面改質剤は、 アンカーの親水性領域に結合しているのが好ましい。 表面改質分子は、スペーサー基を含むことができ、その基は、代表的には、ア ンカーの疎水性部分、例えばリン脂質アンカーのグリセロール骨格及びリン脂質 アンカーのホスフェート基、に共有結合で結合することができる一つ又はそれ以 上の有機官能基を含有する任意の有機物質又は部分である。この官能基は、代表 的には、水酸基、チオール基、エポキシド基又はアミン基である。好ましくは、 官能基は、水酸基であり、スペーサー基は、エチレングリコール又はポリエチレ ングリコールであり、分子量を変えたものであってもよい。 スペーサー基含有表面剤改質分子の合成は、当業者に知られている手段によっ て、スペーサー基を保護剤、例えばメトキシ−トリフェニルメチル、アセチル又 はトリフェニルメチルクロライド（トリチルクロライド）等、と反応させること により達成される。次いで、活性化剤、例えばｐ−ニトロベンゼンスルホネート 、ｐ−トルエンスルホネート、ベンゼンスルホネート、メタンスルホネート、ト リフルオロメタンスルホネート等、を用いて、リン脂質アンカーを活性化する。 次いで、保護されたスペーサー基と活性化されたリン脂質アンカーを、 当業者に知られている手段によって反応させる。 例えば、（ポリ）エチレングリコールともいわれるポリ（オキシエチレン）を 用いて、スペーサー基を導入する。有機溶剤中、好ましくは、トリエチルアミン などの塩基の存在下で、エチレングリコールを１当量のトリフェニルメチルクロ ライド（トリチルクロライド）と反応させることにより、ポリエチレングリコー ルの二つの水酸基のうちの一つを保護して、モノトリチル化エチレングリコール を得る。次いで、良好な離脱基により、好ましくはｐ−ニトロベンゼンスルホニ ルクロライドを用いて、１，２−ジパルミトイルグリセロールを活性化し、１， ２−ジパルミトイル−３−ｐ−ニトロベンゼンスルホネートを得る。次いで、こ れをモノトリチル化エチレングリコールと反応させた後、穏やかな酸性条件下で トリチル基を除去する。その結果、１，２−ジパルミトイル−３−（オキシエチ レン）グリセロールが形成される。２−クロロ−２−オキソ−ジオキシホスホラ ンとトリメチルアミンをそれぞれ用いて、この化合物に２段階操作を行い、コリ ン基を導入し、生成物を作る。 本発明の方法に用いられるリポソームは、生理活性剤、即ちヒトを初めとする 動物に何らかの生物活性を有する化合物又は組成物を含む。生理活性剤という用 語は、伝統的な医薬及び関連生理活性組成物を含むものである。生理活性剤とし ては、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、殺腫瘍剤、代謝拮抗薬、炭水 化物、ポリペプチド、ペプチド、蛋白質、トキシン、酵素、ホルモン、神経伝達 物質、糖蛋白、リポ蛋白、免疫グロブリン、免疫調節剤、血管拡張剤、染料、放 射線標識剤、放射線不透性化合物、蛍光化合物、多糖類、細胞レセプター結合分 子、抗炎症剤、散瞳化合物、局所麻酔剤、麻酔剤、抗緑内障薬、 ビタミン、核酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＭＲＩ、放 射線造影剤、及びイオヘキソール、イオパミドール、イオキソグレート、イオト ロラン、イオバーソル、イオタラメート、ヨージミド、ヨージパミド、イオプロ ミド、メトリザミド、イオペントール、ヨージキサノール、ディアトリゾエート 、イオトロクス酸、それらの混合物及び薬理学的に許容され得る塩を初めとする 水溶性ヨウ素標識造影剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。よ り好ましくは、水溶性ヨウ素標識造影剤は、イオトロランである。リポソーム組 成物は、静脈内又は動脈内投与により投与されるのが好ましい。 本発明の方法に用いられる脂質二分子膜は、表面剤改質分子に加えて、“脂質 ”を含んでおり、この脂質としては、合成又は天然リン脂質、糖脂質、グリセロ リン脂質、コリングリセロリン脂質、エタノールアミングリセロリン脂質、セリ ングリセロリン脂質、イノシトールグリセロリン脂質、ホスファチジルグリセロ ール、グリコグリセロ脂質、硫酸グリコグリセロ脂質、スフィンゴ脂質、スフィ ンゴミエリン、ジアシルアンモニウム両親媒性物質、ジアシルグリセロール、グ リコスフィンゴ脂質、セレブロシド、スルファチド、セラミド、ポリヘキソシド 、ガングリオシド、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、 ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホス ファチジルイノシトール、カルジオリピンなどの単独又は組み合わせが挙げられ るが、これらに限定されるものではない。リン脂質は、合成でも、卵や大豆など の天然源由来のものでもよい。有用な合成リン脂質は、ジミリストイルホスファ チジルコリン及びジミリストイルホスファチジルグリセロールである。ジス テアリルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリ ストイルホスファチジルコリン及びジアラキドノイルホスファチジルコリンも使 用できる。リポソームは、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、コ レステロールのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−コレステロール）など のステロイド成分を含むこともできる。これらのリポソームは、コレステロール ヘミスクシネートなどのステロールの有機酸誘導体を含んでもよい。トコフェロ ールの有機酸誘導体は、α−トコフェロールヘミスクシネートのようなリポソー ム形成性成分として用いてもよい。コレステロールヘミスクシネート（ＣＨＳ） などのステロールの有機酸誘導体とトコフェロールヘミスクシネート（ＴＨＳ） などのトコフェロールの有機酸誘導体の両者、さらにはそれらのトリス塩形態を 含むリポソームは、一般に、これらのステロールを含むリポソームを製造する公 知の方法によって調製すればよい。特に、Janoff等、米国特許第４，７２１，６ １２号、１９８８年１月２６日発行、名称“ステロイドのリポソーム”及びJano ff等、米国特許第４，８６１，５８０号、１９８９年８月２９日発行、米国特許 第５，０４１，２７８号、１９９１年８月２０日発行、ＰＣＴ公開番号８７／０ ２２１９、１９８７年４月２３日公開、名称“アルファトコフェロールを基体と した小胞”、及びMayhew等、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８５／００９６８、１９８５年 ３月１４日公開の方法を参照のこと。これらの開示の内容は、ここに参照のため に記載されている。ステロール含有リポソームを調製する方法は、水性区画を取 り込む完全に閉鎖された脂質二分子膜を形成するのに十分な量の、閉鎖された二 分子膜を形成することができる塩形態のステロール有機酸誘導体を、緩衝水溶液 に添加することを含むものである。マルチラ メラ小胞の懸濁液は、混合物を振とうすることにより形成される。緩衝水溶液が 、その塩の対イオンをも溶液で含んでいると、小胞の形成が促進される。 リポソームを調製するには、現在、種々の方法を利用することができ、どの方 法も、本発明の実施に有用であろう。それらの方法として、マルチラメラ小胞（ ＭＬＶ）を形成するManghamの方法（J．Mol．Biol．13，235-252（1965）参照） が挙げられる。この方法では、先ず、脂質の有機溶剤溶液を形成し、次いで、溶 剤を蒸発させ、乾燥脂質を反応容器の内壁に残し、そこへ水溶液を加える。脂質 膜の水和によって、ＭＬＶが形成される。 マルチラメラリポソームは、実質的に等しいラメラ間溶質分布を有しているで あろう。このようなＭＬＶの調製法は、リポソームは、Lenk等、米国特許第４， ５２２，８０３号及び５，０３０，４５３号並びにFountain等、米国特許第４， ５８８，７０８号に記載されている。Lenk等は、取り込まれるべき物質の水溶液 を、小胞形成に用いられる脂質の有機溶液と混合することを含む方法を述べてい る。次いで、有機溶剤を蒸発させる間に、水性相を乳化させる。Fountainの方法 では、先ず、単相を形成するのに十分な量の少なくとも一つの両親媒性脂質と水 性成分の溶液を形成する。次いで、有機溶剤を蒸発させ、第二の水性成分を撹拌 しながら添加して、リポソームを形成する。 この類のマルチラメラ小胞は、Lenk等の米国特許第４，５２２，８０３号に記 載されているように、安定プルリラメラ小胞（ＳＰＬＶ）と呼ぶことができ、Le nk等の米国特許第５，０３０，４５３号、１９９１年７月９日発行、に記載され ているように、単相性リポソーム と呼ぶことができる。また、Fountain等の米国特許第４，５８８，５７９号のＳ ＰＬＶ及びリポソームを少なくとも１回の凍結解凍サイクルに付した凍結解凍マ ルチラメラリポソーム（ＦＡＴＭＬＶ）（この方法は、Cullis等、米国特許第４ ，９７５，２８２号、１９９０年１２月４日発行、及びＰＣＴ公開番号８７／０ ００４３、１９８７年１月１５日公開、名称“取り込み効率が改善されたマルチ ラメラリポソーム”に記載されている）が挙げられる。これらの開示の内容は、 ここに参照のために記載されている。 音波処理したスモールユニラメラ小胞の調製法については、Papahadjopoulos 等（Biochim．Biophys．Acta.，135，624-638（1968））により記載されており 、ここに参照のために記載されている。ラージユニラメラ小胞は、押出装置を用 い、ここに参照のために記載されているCullis等、米国特許第５，００８，０５ ０号、１９９１年４月１６日発行、及びＰＣＴ公開番号ＷＯ８６／００２３８、 １９８６年１月１６日公開、名称“ユニラメラ小胞を製造する押出技術”に記載 されている方法により製造することができる。この技術により作られた小胞は、 ＬＵＶＥＴと呼ばれ、加圧下で、膜フィルターから押し出される。小胞は、２０ ０ｎｍフィルターからの押出技術により作られてもよく、このような小胞は、Ｖ ＥＴ₂₀₀として知られている。これらの小胞は、押出技術の前に、少なくとも１ 回の凍結解凍サイクルに付されてもよい。この方法は、Mayer等（Biochim．Biop hys．Acta.，817，193-196（1985））、表題“凍結解凍マルチラメラ小胞で観察 される溶質分布と取り込み効率”に記載されている。エネルギーを懸濁液に適用 すると、例えば音波処理やフレンチプレスセル（French press cell）又は適当 な孔径の多孔フィルターから小胞を押し出すことに より、マルチラメラステロール小胞が、ユニラメラ小胞に変わるであろう。 ユニラメラリポソームは、凍結解凍技術の後、一つ又はそれ以上のポリカーボ ネートフィルターから押し出すことによって形成されてもよい。所定サイズのリ ポソームは、加圧下で、リポソーム懸濁液を酸化アルミニウム多孔フィルムに１ 回又はそれ以上通すことによって形成されてもよい（Coe等、“リポソーム押出 法”、米国特許出願番号第７７１，２６７号、１９９０年１０月５日出願の米国 特許出願番号第５９３，２００号の一部継続出願）。一方、注入、逆相蒸発又は 湿潤剤希釈法により、ＬＵＶを形成することができる（Deamer及びUster，“リ ポソームの調製：方法と原料”、リポソーム、２７〜５１頁、Marcel Decker，I nc.，New York（1983）及びPapahadjopoulos等、米国特許第４，２３５，８７１ 号を参照されたい）。 嵌合−融合リポソーム（ＩＦＶ）及びゲルは、本発明の実施に有用であり、Bo ni等、１９９２年１０月１４日出願の米国特許出願番号第０７／９６１，２７７ により開示されている方法により作ることができ、これを参照されたい。ＩＦＶ は、水性溶剤中の溶質をサイズを揃えた（sized）リポソームと混合し、サイズ を揃えたリポソームを融解させる水性溶剤に誘発物質を添加することにより形成 される。次いで、脂質の相転移温度よりも高い温度でインキュベートして、ＩＦ Ｖを製造する。 本発明の方法に用いられるリポソームは、脱水することができる。リポソーム の脱水によって、長期間にわたり小胞を貯蔵することが可能となる。脱水された リポソームは、必要とされるままの規準で再構成することができる。リポソーム は、標準凍結乾燥装置又はその同等 装置を用いて、凍結により脱水することができる。凍結乾燥は、Schneider等（ 米国特許第４，２２９，３６０号）及びJanoff等（米国特許第４，８８０，６３ ５号）に記載の方法に従って、一つ又はそれ以上の保護糖類をリポソーム製剤に 混合した後、行うのが好ましい。凍結をせずに脱水を行い、十分な水がリポソー ム製剤中に残り、脱水−再水和の工程を通じて大部分のリポソーム二分子膜の完 全性が保持される場合は、保護糖類を省略することができる。 親水性生理活性剤は、脂質を添加する水性媒体に生理活性剤を溶解することに よって、リポソームに取り込ませることができる。生理活性剤の一部は、得られ たリポソームに、リポソームが形成されるにつれてカプセル化されるであろう。 一方、リポソームを先ず調製し、次いで、Bally等、“リポソームへの抗腫瘍剤 のカプセル化”、米国特許第５，０７７，０５６号、ＰＣＴ出願番号８５／０１ ５０１、公開番号ＷＯ８６／０１１０２、１９８６年２月２７日公開；Mayer等 、“リポソームカプセル化抗腫瘍剤の高薬剤：脂質製剤”、ＰＣＴ出願番号８８ ／００６４６、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０６４４２、１９８８年９月７日公開 ；及びMadden等、“プロトン勾配によるリポソーム内への薬剤の蓄積”、ＰＣＴ 公開番号ＷＯ９０／１４１０５、１９９０年１１月２９日公開、ＰＣＴ出願ＷＯ ９０／０２７３６、１９９０年５月１５日出願、の方法に従い、リポソーム二分 子膜を横切って電位差を作ることにより、イオン化し得る生理活性剤を装填する 。これらの技術により、イオン化し得る生理活性剤をリポソームに装填すること で、そうでない場合に中性ｐＨにおける水溶液への薬剤溶解度から予想されるよ りもかなり高い内部濃度及び／又は受動的な取り込み技術によって得ることがで きるよりも高い濃度が達成される。 本発明の方法は、上記製造及び装填技術のどれを用いて実施してもよく、また 、現在知られているか、あるいは今後開発される、リポソームを作り、それに薬 剤を装填する他の任意の方法を用いて実施してもよい。 本発明の表面剤改質分子をリポソーム組成物に混合しても、リポソームの生体 内循環時間は、大きく変わることはない。図２及び３に示すように、ＤＳＰＣ− ＩＦＶと１０モル％の表面剤改質分子ＤＰＰＥ−ＧＡを含むＤＳＰＣ−ＭＬＶの 両者についての注射後の時間の関数としてのラット血漿中に残存する脂質剤の平 均パーセントは、ＤＳＰＣ ＩＦＶ及び表面剤改質分子を含まないＤＳＰＣ Ｍ ＬＶについてのものと同じままであった。しかし、図４に示すように、０．２ミ クロンのフィルターを通してサイズを揃え、１０モル％の表面剤改質分子を含む ＤＳＰＣリポソームは、表面剤改質分子を含まないこれらの小胞体とは反対に、 長い循環時間を示した。 表面剤改質分子を混合しても、高捕捉容積リポソーム（high captured volume liposome）、例えば、嵌合−融合リポソームを調製する方法の効率は妨げられ ない。放射線造影剤イオトロランを、表面剤改質分子ＤＰＰＥ−ＧＡを含むＤＳ ＰＣ ＩＦＶにカプセル化した。１０モル％及び５モル％の表面剤改質分子ＤＰ ＰＥ−ＧＡを含むＤＳＰＣ−ＩＦＶを、放射線造影剤イオトロランの存在下で、 ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＳＵＶから調製した。表面剤改質分子が存在しても 、イオトロランの有効なカプセル化は妨げられなかった。表１に示すように、Ｄ ＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶで得られた脂質に対するヨウ素の比は、表面剤 改質分子を含まないＤＳＰＣ ＩＦＶの値と同程度であった。ＤＰＰＥ−ＧＡを 混合すると、図５に示すように、イオ トロランＤＳＰＣＩＦＶの平均容積重量直径（average volume-weighted diamet er）が低下した。 これらのイオトロラン含有ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶは、ラットの肝 臓及び脾臓に造影剤を搬送するのに有効であった。表２は、５モル％及び１０モ ル％の表面剤改質分子ＤＰＰＥ−ＧＡでのイオトロラン含有ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ −ＧＡ ＩＦＶを投与したラットについて、ハウンスフィールド単位（Hounsfie ld Unit）（ＨＵ）増加値を示す。このデータから、表面剤改質分子を添加する ことによって、一過性低血圧などの生理的副作用を低減するように改質されたイ オトロランＤＳＰＣ ＩＦＶが、目的とする器官へ造影剤を搬送するのに有効で あることがわかる。更に、表２に示すように、表面剤改質分子を混合しても、カ プセル化された放射線造影剤の画像効力には影響がなかった。 本発明のリポソーム組成物の投与の様式によって、化合物が搬送される器官の 部位及び細胞が決まるであろう。本発明のリポソーム組成物は、単独で投与して もよく、また、目的とする投与経路及び標準製薬プラクティスに関して選択され た薬理学的に許容され得る担体と混合して投与してもよい。非経口投与、即ち、 静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下又は乳房内経路での注射については、リポソーム 組成物の無菌溶液を調製する。静脈内用途に関しては、製剤を等張性にするよう に、溶質の全濃度を調節してもよい。その他の使用法は、製剤の特性に応じて、 当業者が想像できるものであろう。適当な薬理学的に許容されうる担体としては 、水、塩溶液、アルコール、アラビアゴム、ベンジルアルコール、ゼラチン、ラ クトース、アミロース又は澱粉などの炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タ ルク、珪酸、ヒドロキシメチ ルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられるが、これらに限定されるも のではない。医薬組成物を殺菌し、所望であれば、生理活性剤又は本発明の成分 と有害な反応を行わない助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、浸透 圧に影響を与える塩、緩衝液、着色、着香、芳香物質などを混合することができ る。 本発明のリポソーム組成物は、当該技術ですでに用いられている任意の方法で 投与すればよく、皮下、筋肉内、眼窩内、嚢内、脊髄内、茎部内（intrastemall y）、静脈内、動脈内、髄腔内等の非経口、経口及び局所が挙げられるが、これ らに限定されるものではない。 本発明の組成物は、単位用量当たり治療有効量の生理活性剤を薬理学的に許容 されうる担体内に含む単位用量の形に調剤される。それらは、治療有効量の生理 活性剤を含む製剤とも混合される。治療有効とは、所望の生物学的結果を達成す るのに十分な生理活性剤を意味するものとする。 特定の場合における生理活性剤の実際の好ましい量は、利用される特定の組成 物、調合された特定の組成物、適用の様式及び治療される特定の位置及び器官に よって変わるであろうということは、理解されるであろう。所定のホストへの投 与量は、通常の考慮を払って、例えば、対象組成物と既知の剤の活性較差（diff erential activity）を通常に比較することにより、例えば、適当な通常の薬理 学的プロトコルにより、決定することができる。ヒトを初めとする動物への投与 については、処方する医者が、所定のヒト対象者への生理活性剤の適当な投与量 を最終的に決定するであろう。そして、これは、使用される剤の薬物動力学に加 えて、個人の年齢、体重及び反応によって変わるものと予測することができる。 また、患者の病状の性質及び重さ等又 は薬理学的状態も、投与計画に影響を与えるであろう。使用される表面剤改質分 子含有リポソームの量、即ち投与量は、“生理的副作用低減有効量”、即ち、リ ポソームを投与した動物が体験する生理的副作用を低減するのに有効な量となる であろう。リポソームの脂質二分子膜中の表面剤改質分子の濃度にも依存するこ とができる。通常は、本発明の方法で用いられるときのリポソームの生理的副作 用低減有効量は、動物の体重１ｋｇ当たりリポソーム約５０ｍｇであるが、必要 に応じ、これより高くすることも低くすることもできる。 本発明は、抗炎症剤と、生理活性剤と表面改質剤とアンカーを含む表面剤改質 分子及び脂質を有する脂質二分子膜とを含む生理的副作用低減有効量のリポソー ムを含有するリポソーム組成物とを、動物に投与することからなり、抗炎症剤が 、リポソーム組成物投与前に動物に投与される動物へのリポソーム組成物の投与 方法をも提供する。抗炎症剤は、毎日、皮下、静脈内投与や連続静脈内投与を初 めとする公知の任意の方法で投与することができるが、静脈内投与により投与す るのが好ましい。抗炎症剤は、薬理学的に許容されうる担体や希釈剤と共に投与 してもよい。本発明の一実施態様においては、抗炎症剤は、ステロイドであり、 本発明の他の実施態様においては、抗炎症剤は、非ステロイド系抗炎症剤である 。非ステロイド系抗炎症剤は、インドメタシンが好ましい。抗炎症剤は、リポソ ーム組成物の投与の高々約３０分前に、動物に静脈内又は動脈内投与するのが好 ましい。 本発明は、リポソーム誘発生理的副作用を低減するための医薬組成物を製造す るために、生理活性剤と表面改質剤とアンカーを含む表面剤改質分子及び脂質を 有する脂質二分子膜とを含む生理的副作用低減有効量のリポソームの使用を提供 する。このリポソームは、代表的に は約２００ｎｍから約５０００ｎｍまで、望ましくは約４００ｎｍから約５００ ０ｎｍまで、より望ましくは約４００ｎｍから約１０００ｎｍまでの直径を有し ている。このリポソームは、ラージユニラメラリポソーム又は嵌合−融合リポソ ームが好ましいが、水性区画内に取り込まれた溶質を含み、各水性区画内のその 溶質の濃度が実質的に等しいマルチラメラリポソームのような、マルチラメラリ ポソームであってもよい。 二分子膜内の表面剤改質分子の濃度は、通常は約２モル％以上、好ましくは約 ５モル％以上、より好ましくは約１０モル％以上である。表面改質剤は、コハク 酸、グルタル酸、アジピン酸、ビメリン酸、スベリン酸、酒石酸、粘液酸、テト ラフルオロコハク酸、ヘキサフルオログルタル酸などのジカルボン酸であること が好ましい。現在、最も好ましくは、表面改質剤は、ジカルボン酸のグルタル酸 である。しかし、表面改質剤は、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、グリコー ル酸、乳酸、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸、ヘプタフルオロ 酪酸などのモノカルボン酸、あるいはビス（スクシンイミドオキシカルボニルオ キシ）エチルスルホン、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート、 ２−イミノチオラン（トラウト試薬）などのスルホ脂質であることもできる。 アンカーは、リン脂質が好ましく、パルミテート鎖などの飽和アシル鎖を持つ リン脂質がより好ましい。現在、好ましい本発明の特定の実施態様においては、 リン脂質アンカーはジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ ）である。しかし、アンカーは、両親媒性蛋白質であることもできる。 表面剤改質分子は、リン脂質アンカーとスペーサー基を含むことが でき、そのスペーサー基は、リン脂質アンカーのグリセロール骨格及びリン脂質 アンカーのホスフェート基に結合することができる一つ又はそれ以上の有機官能 基を含有している。代表的には、官能基は、水酸基、チオール基、エポキシド基 又はアミン基である。スペーサー基は、エチレングリコール又はポリエチレング リコールが好ましい。 リポソームに含まれる生理活性剤は、造影剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌 剤、駆虫剤、殺腫瘍剤、代謝拮抗薬、炭水化物、ポリペプチド、ペプチド、蛋白 質、トキシン、酵素、ホルモン、神経伝達物質、糖蛋白、リポ蛋白、免疫グロブ リン、免疫調節剤、血管拡張剤、染料、放射線標識剤、放射線不透性化合物、蛍 光化合物、レセプター結合分子、抗炎症剤、散瞳化合物、局所麻酔剤、麻酔剤、 ビタミン、核酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＭＲＩ、放 射線又は水溶性ヨウ素標識造影剤であることができ、それらの混合物及び薬理学 的に許容され得る塩も含むが、これらに限定されるものではない。現在、好まし い生理活性剤は、イオヘキソール、イオパミドール、イオキソグレート、イオト ロラン、イオバーソル、イオタラメート、ヨージミド、ヨージパミド、イオプロ ミド、メトリザミド、イオペントール、ヨージキサノール、ディアトリゾエート 、イオトロクス酸などの水溶性放射線造影剤であり、それらの混合物及び薬理学 的に許容され得る塩も含む。水溶性放射線造影剤は、イオトロランであることが 好ましい。 リポソームの生理的副作用低減有効量は、動物の体重１ｋｇ当たりリポソーム 約５０ｍｇが好ましい。 抗炎症剤に関連したリポソーム誘発生理的副作用を低減するための医薬組成物 を製造するために、生理活性剤と脂質及び表面剤改質分子 を有する脂質二分子膜とを含むリポソームの生理的副作用低減有効量使用するこ とも、ここで提供され、このとき、抗炎症剤はリポソーム内にカプセル化されて いない。この抗炎症剤は、ステロイド、あるいはインドメタシンなどの非ステロ イド系抗炎症剤であることができる。 また、生理活性剤と、脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを含む リポソームの生理的副作用低減有効量を含有するリポソーム組成物が、リポソー ム誘発生理的副作用を低減するのに適応した組成物を製造するために、ここに提 供される。 本発明は、以下の実施例から更によく理解されるであろう。しかし、これらの 実施例が、後に続く請求範囲に規定されたような本発明を単に説明するだけのも のであることは、当業者が容易に理解するところであろう。 実施例 実施例１ 表面改質剤ＤＰＰＥ−グルタル酸の調製 無水クロロホルム（１２５ｍｌ）中に６９２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のジパルミト イル ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）（Avanti，Alabaster，Alabama）を 懸濁させた液を、透明な溶液になるまで５０〜５５℃で加熱した（１５〜２０分 ）。この溶液を室温まで冷却した後、１９０μｌ（１．４ｍｍｏｌ）のトリエチ ルアミン（Fluka Chemicals，Ronkonkama，New York）及び１３７ｍｇ（１．２ ｍｍｏｌ）の無水グルタル酸（Fluka Chemicals，Ronkonkama，New York）を加 え、得られた溶液を室温で３時間攪拌した。この反応混合物の薄層クロマトグラ フィ（ＴＬＣ）をシリカ板上でチェックして、反応の進行を評価した。３時間後 、ＴＬＣから、すべてのＤＰＰＥが反応したことが わかった。 この時点で、真空下、ロータリエバポレータで加熱することによって、反応混 合物からクロロホルムを除去した。残余物を、シリカゲル（１１０℃で少なくと も６時間加熱することにより活性化）上でクロマトグラフィにかけた。溶離シス テムは、クロロホルム：メタノール：水（６５：２５：４）であった。カラム分 画中のリン脂質の存在は、ＴＬＣ板をまずヨウ素蒸気にさらし、次いでリン脂質 で青色を呈するモリブデン酸スプレーを噴霧することによって確認した。カラム からの各分画は、リン脂質の存在についてＴＬＣによって分析した。生成物を含 む分画をプールし、真空下で溶媒を除去した。生成物を凍結乾燥し、最終的には 真空炉内で、６０℃で６時間加熱し、白色結晶物を得た。収量は６６０ｍｇ（８ ２％）であった。 生成物ＤＰＰＥ−グルタル酸は、溶離システムがクロロホルム：メタノール： 水（６５：２５：４）であるＴＬＣにおいて単一のスポットを示し、ＮＭＲ及び ＩＲにより確認された。実施例２ ０、２、５及び１０モル％のＤＰＰＥ−ＧＡを含むＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶの調製 それぞれの粉末状の脂質をクロロホルム中に溶かすことによって、ＤＳＰＣ（ ２０ｍｇ／ｍｌ）及びＤＰＰＥ−ＧＡ（５ｍｇ／ｍｌ）の各原液を生成した。Ｄ ＳＰＣはPrinceton Lipids，Princeton，New Yorkから購入した。ＤＰＰＥ−Ｇ Ａは、実施例１で概略を示した方法により調製した。４つのＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ −ＧＡサンプルは、２つのクロロホルム原液を、別々の４個の丸底フラスコ中で 混合することによって調製した。各サンプルの総脂質含有量は１８０μＭであっ た。各脂質の総量及び各サンプルの原液添加量を以下の表に示す。 ロートバック（rotovac）を用いて、ロータリエバポレータでクロロホルムを 除去した。脂質を、薄いフィルム状になるまで乾燥した。サンプルを、一晩ポン プで真空に引いて、残っているクロロホルムを除去した。ＤＳＰＣサンプル（Ｂ Ｐ１）をＤＳＰＣの転移温度（Ｔｍ）以上で、注射用０．９％食塩水１０ｍｌで 水和させた。その他の３つのサンプルをＤＳＰＣのＴｍ以上で、注射用０．９％ 食塩水６ｍｌで水和させた。その結果、総脂質濃度は、４つのサンプル全てにお いて３０μＭ／ｍｌとなった。調製のこの時点で、リポソームはＭＬＶであった 。調製の残りについては、４つのサンプル全てを同一の方法で処理した。 ＤＳＰＣのＴｍ以上で、ブランソン（Branson）プローブ音波処理装置モデル ４５０（Branson，Danbury，Conn.）を使用してサンプルを音波処理し、ＳＵＶ を形成した。リポソームサンプルは、視覚的に透明になるまで音波処理を行った 。音波処理段階で生じる金属片を除去す るために、テーブル型遠心分離機を用いて低速（２ＫＲＰＭ）遠心分離を行った 。各サンプルのｐＨを、０．１ＮのＮａＯＨ及びｐＨ試験紙で調節して、ｐＨを ６．５から７．０の範囲とした。 サンプルの温度を室温に達するようにした。エタノール濃度を３．０Ｍにする のに十分なエタノール、即ち１０ｍｌのサンプル、６ｍｌのサンプルについて、 それぞれ２．１２ｍｌ及び１．２７ｍｌを各サンプルに加えた。サンプルを蓋で シールし、渦巻攪拌して、エタノールをサンプルに均一に混合させた。サンプル を、室温で２０分間培養した。室温で２０分間培養後、サンプルを７０℃の水浴 に移し、そこで蓋をしっかり締めて１０分間、その後、蓋を緩めて７０℃で４０ 分間培養した。 サンプルを７０℃の水浴に入れたまま、サンプルにＮ₂気流を緩やかに流して 泡立たせることにより、５分間スパージを行った。スパージ段階の後、サンプル ＢＰ１（０％ＤＰＰＥ−ＧＡ）及びＢＰＧ４（２％ＤＰＰＥ−ＧＡ）を３０ｍｌ のコレックス（Corex）ガラス遠心分離管に移した。ベックマン（Beckman）Ｊ− ２遠心分離機（Beckman，Palo Alto，Calif.）を用いて、１０分間９ＫＲＰＭで 遠心分離することによって、サンプルを３回洗浄した。５％及び１０％のＤＰＰ Ｅ−ＧＡリポソーム（サンプルＢＰＧ２及びＢＰＧ３）は、低速ベックマンＪ− ２遠心分離機を用いて、９ＫＲＰＭで遠心分離してもペレットにならなかった。 従って、これらの２つのサンプルをベックマン（Beckman）Ｌ５−５０ＥＳＷ２ ７ローター（Beckman，Palo Alto，Calif.）を用いて、２５ＫＲＰＭで１５分間 超遠心分離を行うことにより３回洗浄した。サンプルを注射用０．９％食塩水（ ＢＰ１に対しては１０ｍｌその他の全てに対しては６．０ｍｌ）に再懸濁した。 ｐＨを再 チェックして、６．５から７．０の範囲内にあることを確認した。リン酸塩測定 を行って、脂質濃度を求めた。それぞれのサンプルについてのリン酸塩濃度がわ かれば、サンプルの動物への注射の準備は整ったことになる。実施例３ ラットにおけるＤＳＰＣ ＩＦＶ誘発血圧反応：ＤＰＰＥ−ＧＡ混合の効果 ５０ｍｇ／ＫｇのＤＳＰＣ ＩＦＶを静脈注射をすると、ラットに急激な血圧 低下が生ずる。ＤＳＰＣ ＩＦＶにリン脂質ジカルボン酸誘導体ＤＰＰＥ−ＧＡ （３）を混合すると、この血圧低下が著しく減少することが判明した。本実施例 において、我々は、これらのラットの血圧測定についての我々の実験方法と結果 を示す。 血圧実験の３日前に、カニューレを自然発症高血圧ラットの大動脈及び頚静脈 に挿入した。ラットは、３５０グラムから４００グラムの範囲のものであった。 カニューレは、保護用金属鎖を通して、首の後から体外に出した。ヘパリンを加 えた食塩水を、毎日カニューレに流して、詰まりを防止した。 リポソーム注射の前に、大動脈のカニューレをウインストン（Winston）電子 圧変換器（Winston Electronics，Millbrae，Calif.）に接続して、平均大動脈 圧（ＭＡＰ）を監視して、頚静脈のカニューレをハーバードアパラタス（Harvar d Apparatus）注入ポンプ（Harvard，South Natic，Mass.）に設置されたＩＦＶ サンプルが入っている３ｍｌ注射器に接続した。リポソーム注射前に、ラットの ＭＡＰを数分間監視した。 頚静脈へのＩＦＶの注入は、注入ポンプをまわすことにより、時間 ゼロから開始した。各動物への総脂質投与及び投与速度は、それぞれ５０ｍｇ／ Ｋｇ及び４ｍｇ／Ｋｇ／分であった。サンプルの脂質濃度は、代表的には、１０ 〜１５ｍｇ／ｍｌの範囲であった。代表的な注射は、約１〜２ｍｌのＩＦＶサン プルを１２分間にわたって行うものであった。圧変換器によって、ＭＡＰを３０ 秒毎に記録した。 表３に示されるように、食塩水の注入（１２分間にわたって１．５ｍｌ）では 、ＭＡＰの低下を誘発しなかった。これに対して、ＤＳＰＣ ＩＦＶの注入では 、（５０〜６０分にわたって続いたＭＡＰの大きな低下を誘発した、図６。ＤＳ ＰＣ ＩＦＶの平均最大ＭＡＰ低下は、５６＋／−５．０％であった、表３。Ｄ ＳＰＣＩＦＶ誘発ＭＡＰ低下は、ＩＦＶ製剤がＤＰＰＥ−ＧＡを含んでいるとき に、著しく減少した。ＩＦＶのＤＰＰＥ−ＧＡ含有量が増加すると、効果が著し く増大した。これを図６に示す。その結果を表３に示す。 図６は、実施例２で調製したＤＰＰＥ−ＧＡを１０、５、２および０モルパー セント含むＤＳＰＣ ＩＦＶ製剤の静脈注射に対する代表的なラット血圧応答を 示す。表３は、１０％ＤＰＰＥ−ＧＡ ＩＦＶに対する平均動脈圧低下が８．３ ＋／−２．１％であったことを示す。表２におけるデータは、リン脂質ジカルボ ン酸誘導体が、ＤＳＰＣ ＩＦＶによって生ずる血圧低下を減少させることを明 白に示している。実施例４ ＤＳＰＣ ＩＦＶの静脈注射による血圧低下を減少させるためのインドメタシン の投与 実施例２によって調製されたＤＳＰＣ ＩＦＶ／０％ＧＡ（５０ｍｇ／ｋｇ） を自然発症高血圧ウイスターラットに静脈注射すると、急 激な一時的血圧低下を引き起こす。 ＤＳＰＣ ＩＦＶ注射に応じる血圧低下は、通常は、注射後約４分〜６分して 始まった。最初の血圧の３０〜４０％の低下は、代表的には、３分〜４分の期間 にわたって起こった。代表的には、ＤＳＰＣ注射後２０分〜２５分して、血圧は 回復し始めた。３０分から４０分後でも、血圧の回復は完全ではなかった。 ＤＳＰＣ ＩＦＶ注射の１５分前かもしくは３０分前に、抗炎症剤インドメタ シン（５ｍｇ／ｋｇ）を静脈注射し、有意差のある血圧応答が生じた。初期のわ ずかな低下の後、血圧は３０分〜４０分以内に最初の血圧に急速に回復した。実施例５ 平均リポソーム直径の関数としてのＤＳＰＣ／Ｎ−グルタリル−ＤＰＰＥリポソ ームの正規化ＡＵＣ リポソームを以下の孔径、５０、８０、２００、４００、６００、及び８００ ｎｍ、を有するポリカーボネートフィルターを通して押し出すことにより、ＬＵ ＶＥＴ（押出技術により調製したＬＵＶ）を調製した。ＩＦＶは、嵌合−融合技 術により調製された。ＬＵＶＥＴ及びＩＦＶの平均直径は、準弾性光散乱及び凍 結−割断電子顕微鏡検査により測定した。リポソームを、他の血漿成分と交換不 可能な₃Ｈ−コレステロールヘキサデシルエーテルで放射線標識した。Sprague-D awleyラットに、外側尾静脈から静脈内ボラースにより５０ｍｇ／ｋｇのリポソ ームを投与した。各リポソームサイズ製剤について、４〜１１匹のラットを使用 した。血液サンプルは、眼窩後放血（retro-orbital bleeding）により、注射後 ０．５、３．５、６．５及び２４時間目に取り出した。血液をテーブル型遠心分 離機で回転させて、赤血球 を除去した。血漿中の放射線標識の量は、シンチレーション計数によって求めた 。血漿中の残存投与量パーセントは、体重１００グラム当り３．０８ｍｌの血漿 の値を使用して計算した。 時間の関数としての血漿中の残存投与量パーセントは、各リポソームサイズに ついてプロットされた。各リポソームサイズについての曲線の下の面積（ＡＵＣ ）を、台形積分法で計算した。各リポソーム製剤の表面積重量平均直径（surfac e area-weighted average diameter）に対して、各リポソームサイズについての ＡＵＣをプロットすることによって図を作成した。 図７は、表面積重量平均直径の関数としてプロットしたＤＳＰＣ ＩＦＶ及び ＬＵＶＥＴの正規化ＡＵＣを示す。ＡＵＣは、ＩＦＶ及びＬＵＶＥＴの循環形の 台形積分法により計算し、２００ｎｍ孔径ＬＵＶＥＴのＡＵＣに正規化された。 点は、ＤＳＰＣＩＦＶ及びＬＵＶＥＴの正規化ＡＵＣである（ＤＳＰＣのＴｍよ りも高い温度での準弾性光散乱によって測定すると、解離した２００ｎｍ孔径の ＤＳＰＣ ＬＵＶＥＴの表面積重量直径は、１９７±９３ｎｍであった。しかし 、ＤＳＰＣ ＬＵＶＥＴの集合により、血漿中の実際の粒径は、著しく大きくな っているかもしれない。実施例６ フッ素化グルタル酸誘導体を含有するＩＦリポソーム合成 Ｎ−フルオログルタリル−ＤＰＰＥ 乾燥酢酸エチル（１００ｍｌ）にＤＰＰＥ（１ｍｍｏｌ）を懸濁させたものを ８０℃まで加熱して、ＤＰＰＥを溶解した。トリエチルアミン（４ｍｍｏｌ）、 次いで無水ヘキサフルオログルタル酸（３ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えた後、８ ０〜８５℃で６時間加熱した。得ら れた粗物質を、クロロホルム：メタノール（１：１）のヤファデックスＬＨ−２ ０を用いてゲル濾過を行なった後、クロロホルム：メタノール：水（６５：２５ ：４）のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、５４％の収率で、白色結 晶物としてＮ−フルオログルタリル−ＤＰＰＥを得た。この生成物は、ＩＲ及び ＮＭＲにより確認された。Ｎ−フルオロスクシニル−ＤＰＰＥ 無水ヘキサフルオログルタル酸の代わりに、無水テトラフルオロコハク酸を使 用した以外は、同一の反応条件を用いた。生成した化合物は、４４％の収率で得 られ、薄層クロマトグラフィーにおいて単一のスポットを示し、ＩＲ及びＮＭＲ により確認された。Ｎ−フルオロブチリル−ＤＰＰＥ この化合物は、上述の条件で、ＤＰＰＥを無水ヘプタフルオロ酪酸と反応させ て調製した。生成した化合物は、ＴＬＣにおいて単一のスポットを呈し、ＮＭＲ により確認され、６０％の収率で得られた。血圧スクリーニング 雄のSprague-Dawleyラット（Charles River）にペントバルビタールナトリウ ムで腹腔内麻酔をかけ、外科的方法により、腹大動脈及び外頚静脈にカニューレ を挿入した。動脈のカニューレは一回洗浄し、２単位のヘパリンで開存保持した 。ウインストンエレクトロニクス（Winston Electronics）モデルＶＴ−１５血 圧モニターシステムを動脈のカニューレに接続することにより、血圧を監視した 。ＤＰＰＥ−ＦＧＡ ＩＦリポソーム（ジパルミトイルホスファチジルエタノー ルアミン／フルオログルタル酸を含む嵌合−融合リポソーム）の注入前に数分間 、ベースライン血圧を取った。４つのサンプルの平均として、 ベースライン血圧を求めた。ハーバードポンプ（Harvard Pump）２２、注入ポン プ、を使用して、４ｍｇ／ｋｇ／分の割合で、５０ｍｇ／ｋｇの脂質を頚動脈か ら動物に投与した。注入後、動物を約１５分間監視し、回復段階を観察した。Ｉ Ｆの注入前、注入中、注入後、ＶＴ−１５で、血圧を３０秒毎に監視した。ベー スライン血圧（ベースラインＢＰ）からの減少率は、〔（ベースラインＢＰ−最 大低下ＢＰ）／ベースラインＢＰ〕×１００により計算した。ＤＰＰＥ−ＦＧＡ ＩＦリポソームは、第１被験動物では、ベースラインから１２％の血圧減少を 引き起こし、第２被験動物では、１．３％の増加を引き起こした（平均減少は、 ５．３＋／−９．２４％）。データを以下の表に示す。 これらの動物のそれぞれについてのリポソーム注入中の血圧を、図８〜１２に 示す（ラット１〜５それぞれについて）。実施例７ イオトロラン、ＤＰＰＥ−ＧＡ含有ＩＦリポソームの調製及び使用 ＤＳＰＣ（９２０ｍｇ）又はＤＰＰＥ−ＧＡとＤＳＰＣ（８２８ｍｇのＤＳＰ Ｃ、９２ｍｇのＤＰＰＥ−ＧＡ）含むスモールユニラメラリポソーム（ＳＵＶ） を、それぞれ、約４０ｍｇ／ｍｌの脂質濃度、脂質の転移温度（ＤＳＰＣでは５ ４℃、リポソームは６５〜７０℃で調製された）より約１０℃高い温度で、ｄＨ₂ Ｏ又は食塩水中で調製した。脂質又は脂質混合物を塩化メチルに溶かし、乾燥 させて薄層フィルムにした。約６５℃で約３０分加熱しながら、乾燥脂質を２３ ｍｌのｄＨ₂Ｏ中に再懸濁して、ＤＳＰＣリポソームを調製した（ＳＵＶ調製に プローブ音波処理を用いる場合は、加熱工程は省略できる）。６５℃で、乾燥脂 質を食塩水に再懸濁して、ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡリポソームを調製した。 ４６ｍｇのイオトロラン（ヨウ素３００ｍｇ／ｍｌ）、１６．３ｍｌのエタノ ール及び６．７ｍｌのｄＨ₂Ｏを混合することにより、イオトロラン懸濁液を調 製した。この場合、エタノールの前に、蒸留水をイオトロランに加え、絶えず混 合しながら、エタノールをゆっくり加えた。 １６．５ｍｌのイオトロラン懸濁液を４つのスクリュートップ（screw top） チューブに分注し、５．５ｍｌのＳＵＶ懸濁液を加えた。得られたゲルを激しく 混合し、室温で少なくとも１時間インキュベートした。ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−Ｇ Ａリポソームを３０℃で２４時間インキュベートした。この後、チューブを６５ 〜７０℃で１時間インキュベートした。次いで、各チューブを１５分間渦巻攪拌 した。 次いで、約１１１〜１３分間、６５〜７０℃に維持しながら、各サ ンプルを混合し、窒素流でスパージした。その後、サンプルを２５０ｍｌエレン マイヤーフラスコにプールし、室温まで冷却して、表面に白い泡を有する透明溶 液を製造した。十分な量の、下記緩衝液を調製物に加えて、容積を２００ｍｌと し、混合して不透明なＩＦ含有懸濁液を得た。２．４ｍｇ／ｍｌトリス塩基、０ ．１ｍｇ／ｍｌ Ｎａ／Ｃａ ＥＤＴＡ、０．９％ＮａＣｌ（ｐＨ７＝７．４） 。 この懸濁液を、５０ｍｌ遠心分離瓶にて、約３２００ｇで少なくとも約５分間 遠心分離した。必要に応じて、遠心分離を繰り返し（例えば３回）、取り込まれ なかったイオトロランを除去した。次いで、製剤の脂質及びイオトロラン含有量 を測定し、電子顕微鏡検査、マルバーン粒径分布分析、捕捉容積及びラメラ性に より確認し、使用するまで室温で貯蔵した。 血漿中に残存している注射されたリポソーム（２００ｎｍ押出小胞）のパーセ ントは、ＤＰＰＥ−ＧＡ有りと無しの種々の製剤について、時間の関数として図 １３に示される。 表４（下記参照）は、種々のロットのＤＳＰＣ、ＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ（ ５ｍｏｌｅ％）及びＤＳＰＣ／ＤＰＰＥ−ＧＡ（１０ｍｏｌｅ％）ＩＦリポソー ムを使用したラットにおけるＣＴスキャンの結果を示している。 図１４及び１５は、これらのロットのうちの２つについてのマルバーン粒径分 布データを示している。下記の表は、ロットのうちの幾つかのものについての製 剤概要（formulation summary）を示す。 下記の表は、種々のロットのＤＰＰＥ−ＧＡ、イオトロラン含有ＩＦについて 、種々の時間貯蔵した安定性サンプルから、２５０ｍｇ／ｋｇのヨウ素を投与し たラットにおけるｐＨ、上澄み中のヨウ素％、リソホスファチジルコリン％及び ＣＴ結果を示している。いずれのサンプルにおいても、色及び外観の変化は認め られなかった。 実施例８ ＤＰＰＥ−ＧＡ、イオトロラン含有ＩＦリポソームを使用したウサギにおけるＣ Ｔ画像の検討 ＤＰＰＥ−ＧＡ、イオトロラン含有ＩＦリポソームを上述したように調製した 。このリポソームは、１００．５ｍｇ／ｍｌのヨウ素、１６．３ｍｇ／ｍｌの脂 質（６．２のヨウ素：脂質比）を含有し、密度が１．０９ｇ／ｍｌ、捕捉容積が １８．６（マイクロリットル／マイクロモル脂質）であり、直径は５ミクロン未 満であった。体重が、４．５〜５．８ｋｇの雌のウサギに、かかるリポソームを 、（投与量当たり１匹の）体重１ｋｇ当たり１００および２５０ｍｇのヨウ素と なるように、５０ｍｇｌ／分×体重ｋｇの速度で投与し、キシラジン／ケタミン により麻酔をかけた。 リポソームの静脈内投与の前及び投与後の様々な時間において、肝臓、脾臓、 大動脈及び腎臓（皮質）の濃度を（ハウンスフィールド単位−ＨＵで）測定した 。ウサギをリポソーム投与の４時間後に犠牲にした。肝臓、脾臓、腎臓、肺及び 血液中のヨウ素の濃度を測定した。結果を図１６に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＦＩ，ＪＰ，Ｋ Ｒ，ＮＯ，ＮＺ (72)発明者 バトラ，スレッシュ，ケイ アメリカ合衆国 ニュージャージー州 08536，プレインスボロ，タモローンドラ イヴ 8601 (72)発明者 ミンシェイ，シャルマ，アール アメリカ合衆国 ニュージャージー州 08852，モンマウスジャンクション，ベイ ベリーコート 4031 (72)発明者 ジャノフ，アンドリュー，エス アメリカ合衆国 ペンシルヴァニア州 19067，ヤードレイ，サウスクレッセント ブールヴァード 1807

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．生理活性剤と、表面改質剤とアンカーとを含む表面剤で改質された分子及び 脂質を有する脂質二分子膜とを含むリポソームの生理的副作用低減有効量をリポ ソームが誘発する生理的副作用を低減するための医薬組成物の製造のための使用 。 ２．リポソームが、２００ｎｍから５０００ｎｍまでの直径を有している請求の 範囲１の使用。 ３．リポソームが、４００ｎｍから５０００ｎｍまでの直径を有している請求の 範囲２の使用。 ４．リポソームが、４００ｎｍから１０００ｎｍまでの直径を有している請求の 範囲３の使用。 ５．ユニラメラリポソームが、ラージユニラメラリポソームである請求の範囲１ の使用。 ６．リポソームが、嵌合−融合リポソームである請求の範囲１の使用。 ７．リポソームが、マルチラメラリポソームである請求の範囲１の方法。 ８．マルチラメラリポソームが、その水性区画に取り込まれた溶質を含み、各水 性区画内の溶質の濃度が実質的に等しい請求の範囲７のリポソーム。 ９．二分子膜内の表面剤改質分子の濃度が、２モル％以上である請求の範囲１の 使用。 １０．表面剤改質分子の濃度が、５モル％以上である請求の範囲９の使用。 １１．表面剤改質分子の濃度が、１０モル％以上である請求の範囲１ ０の使用。 １２．表面改質剤が、ジカルボン酸である請求の範囲１の使用。 １３．ジカルボン酸が、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ビメリン酸、スベ リン酸、酒石酸、粘液酸、テトラフルオロコハク酸又はヘキサフルオログルタル 酸である請求の範囲１２の使用。 １４．表面改質剤が、モノカルボン酸である請求の範囲１の使用。 １５．モノカルボン酸が、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、グリコール酸、 乳酸、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸又はヘプタフルオロ酪酸 である請求の範囲１４の使用。 １６．表面改質剤が、スルホ脂質である請求の範囲１の使用。 １７．スルホ脂質が、ビス（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチルス ルホン、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート又は２−イミノチ オラン（トラウト試薬）である請求の範囲１６の使用。 １８．表面改質剤が、グルタル酸である請求の範囲１の使用。 １９．アンカーが、リン脂質である請求の範囲１の使用。 ２０．リン脂質が、飽和アシル鎖を有している請求の範囲１９の使用。 ２１．飽和アシル鎖が、パルミテート鎖である請求の範囲２０の使用。 ２２．リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ ）である請求の範囲１９の使用。 ２３．アンカーが、両親媒性蛋白質である請求の範囲１の使用。 ２４．表面剤改質分子が、リン脂質アンカーとスペーサー基を含み、そのスペー サー基が、リン脂質アンカーのグリセロール骨格及びリン脂質アンカーのホスフ ェート基に結合することができる一つ又はそれ以上の有機官能基を含む請求の範 囲１の使用。 ２５．官能基が、水酸基、チオール基、エポキシド基又はアミン基である請求の 範囲２４の使用。 ２６．スペーサー基が、エチレングリコール又はポリエチレングリコールである 請求の範囲２４の使用。 ２７．生理活性剤が、造影剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、殺腫 瘍剤、代謝拮抗薬、炭水化物、ポリペプチド、ペプチド、蛋白質、トキシン、酵 素、ホルモン、神経伝達物質、糖蛋白、リポ蛋白、免疫グロブリン、免疫調節剤 、血管拡張剤、染料、放射線標識剤、放射線不透性化合物、蛍光化合物、レセプ ター結合分子、抗炎症剤、散瞳化合物、局所麻酔剤、麻酔剤、ビタミン、核酸、 ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＭＲＩ、放射線又は水溶性ヨ ウ素標識造影剤、それらの混合物及び薬理学的に許容され得る塩、又はそれらの 混合物である請求の範囲１の使用。 ２８．水溶性ヨウ素標識造影剤が、イオヘキソール、イオパミドール、イオキソ グレート、イオトロラン、イオバーソル、イオタラメート、ヨージミド、ヨージ パミド、イオプロミド、メトリザミド、イオペントール、ヨージキサノール、デ ィアトリゾエート、イオトロクス酸、それらの混合物及び薬理学的に許容され得 る塩からなる群から選ばれる請求の範囲２７の使用。 ２９．水溶性ヨウ素標識造影剤が、イオトロランである請求の範囲２８の使用。 ３０．リポソームの生理的副作用低減有効量が、動物の体重１ｋｇ当たりリポソ ーム５０ｍｇである請求の範囲１の使用。 ３１．抗炎症剤に関連したリポソーム誘発生理的副作用を低減するための医薬組 成物を製造するために、生理活性剤としての抗炎症剤と脂 質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを含むリポソームを生理的副作用 低減有効量の使用において、該抗炎症剤がリポソーム中にカプセル化されていな いもの。 ３２．抗炎症剤が、ステロイドである請求の範囲３１の使用。 ３３．抗炎症剤が、非ステロイド系抗炎症剤である請求の範囲３１の使用。 ３４．非ステロイド系抗炎症剤が、インドメタシンである請求の範囲３３の使用 。 ３５．生理活性剤と、脂質及び表面剤改質分子を有する脂質二分子膜とを含むリ ポソームの生理的副作用低減有効量を含有する、リボソーム誘発生理的副作用を 低減するのに適応した組成のリポソーム組成物。