JPH10503496A

JPH10503496A - 二重被覆を有する鉄含有ナノ粒子および診断と治療におけるそれらの利用

Info

Publication number: JPH10503496A
Application number: JP8506079A
Authority: JP
Inventors: クレッセ，マイク; プフェッフェラー，デトレフ; ラバクツェク，リーディガー; バグナー，スザンヌ; エベルト，ボルフガンク; エルステ，フォルカー; ゼムラー，ボルフハルト; タウピッツ，マティアス; ガイダ，ヨセフ; ヘルマン，アンヤ; ユクル，モニカ; スビデルスキー，ウード
Priority date: 1994-08-04
Filing date: 1995-07-10
Publication date: 1998-03-31
Also published as: KR100278513B1; US20020141943A1; DE4428851C2; IL114713A; AU2921095A; US6576221B1; NO970468L; EP0773796A1; AU703042B2; WO1996004017A1; CN1103604C; NO970468D0; HUT77993A; ZA956005B; CA2195318A1; US6048515A; NO314785B1; CN1155844A; KR970704476A; CA2195318C

Abstract

(57)【要約】本発明は、モジュール構造を有する鉄含有ナノ粒子、それらの製造、並びに診断および治療目的でのそれらの用途に関する。本発明のナノ粒子は、それらが鉄含有コア、一次被膜（合成ポリマー）および二次被膜（ターゲットポリマー）、並びに所望により、薬剤補助剤、薬剤および／または吸着媒介物質／促進物質から成ることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】二重被覆を有する鉄含有ナノ粒子および診断と治療におけるそれらの利用本発明は、モジュール構造を有する鉄含有ナノ粒子、それらの製造、並びに診断および治療目的でのそれらの用途に関する。低い磁場の強さでも最大の磁化（高い飽和磁化）を示すが、熱エネルギーが自然に磁化したWeiss領域の永久整列を妨害するため外部の磁場を取り去った後に保磁性を示さない物質は、超常磁性物質と呼ばれる。この範疇には、非経口ＭＲ造影剤として開発された鉄含有結晶が含まれる。前記物質の特性は、プロトン緩和時間に対する強い影響と、この診断方法における造影剤としての優れた効力である。医療診断法では、超常磁性物質の調査の焦点を、磁鉄鉱または磁赤鉄鉱に見られるような種類の「磁鉄鉱様」結晶構造を有する酸化鉄（スピネル、逆スピネル）に置いていた。ＭＲ造影剤として使用することができる超常磁性酸化鉄は、それらが近接領域のプロトン緩和に強く影響を及ぼし（高緩和能）、そしてそれらが「磁鉄鉱様」結晶構造を有する粒子であるという点で類似した性質を有する。超常磁性を有する鉄含有結晶（酸化鉄）の製造方法は多数記載されている。それらの方法は様々な観点に従って分類することができる。超常磁性結晶を製造するための２つの基本的方法は次の点で識別することができる：高温での半融とその後の機械的粉砕、または溶液中での湿式化学合成。今まで、湿式合成により製造したそれらの粒子だけが医療用途について研究されており、一方で酸化鉄の製造のための半融方法は工学的（音響キャリヤー、ペイント用顔料およびトナー）および生物工学的用途、例えば磁気分離方法〔Schostek S，Beer A ，DE 3,729,697 A1；Borelli NF，Luderer AA，Panzarino JN，US 4,323,056; O samu I，Takeshi H，Toshihiro M 他; JP 60,260,463 A2〕について記載されている。湿式化学合成は亜範疇に分類することができる。最初に鉄含有コア（酸化鉄）を製造し、物理的および本草医学的（galenic）品質を保証するためにそれに安定剤を添加する「ツーポット合成」がある。イオン交換体を使った鉄コアの製造は「ツーポット合成」の変形である。「シングルポット合成」では、鉄塩の核形成と沈澱の間に既にコアを被覆している安定剤の存在下で酸化鉄を製造し、それによってナノ結晶の凝集と沈降を防止する。含まれる工程に従って「ツーポット」法と「シングルポット」法を区別すること以外に、使用する溶剤の種類、すなわち水性法〔Hasegawa M，Hokukoku S，US 4,101,435; Fuji Rebio K.K.，JP 59,195,161〕と非水性法〔Porath J，Mats L ，EP 179,039 A2；Shigeo A，Mikio K，Toshikatzu M，J．Mater．Chem．2(3)27 7-280，1992；Norio H，Saturo O，JP 05,026,879 A2〕に基づいた別の区別方法がある。非水性溶剤を使って「ツーポット」法で製造した粒子は主に工学において使用される。ヒト診断法において造影剤として使われる磁性酸化鉄は、医学的および毒物学的理由により水性分散剤を必要とする。非水性溶剤中で製造したが製造後に水性媒体中に分散させた時に安定であることができるそれらの粒子は、この分類の中の特別な位置を占める。そのような粒子は現在、一般に、生体外診断、例えば磁気分離工学〔Chagnon MS，Groman EV，Josephson L他，US4,554,088〕において使われているが、生体内診断についても提案されている〔Pilgrimm H，US 5,160,725〕。「ツーポット」法で製造された粒子は、1980年代中期までの初期実験検査において主に使われたが、酸化鉄を使う現在の試験は「シングルポット合成」により製造された材料についてだけ記載されている。「シングルポット」法は、物理的および化学的品質並びに製剤的／本草医学的安定性の観点からそれらが「ツーポット」法により製造されたものよりも優れているために、ヒト診断用の鉄含有酸化物の製造に一般に受け入れられている。「シングルポット」法に従って水性媒体中で製造された粒子の製剤的に安定な懸濁液／溶液は、異なるサイズの酸化鉄に細分割することができる。マイクロメーター領域の粒子には生物工学的応用が提案され〔Schroder U，Mosbach K，WO 83/01738またはSchroder U，WO 83/03426〕、それらの応用は生体内診断と療法にも言及された〔Widder KJ，Senyei AE，US 4,247,406 またはJacobsen T，Kl aveness J，WO 85/04330〕。しかしながら、医療診断におけるアプローチでは、現在記載されている主流はナノメートル領域の粒子である。この領域は好ましい用法に従って「大型」（全径が約＞50nm）と「小型」（全径が約＜50nm）粒子に細分割される。このサイズの粒子は肝臓と脾臓のマクロファージにより迅速に且つほぼ完全に取り込まれるので、それらの臓器のＭＲ診断が主な応用分野である〔Kresse M，Pfefferer D，Lawaczeck R，EP 516,252 A2またはGroman EV，Jose phson L，US 4,770,183〕。更に、臨床上の高体温において強化剤（reinforcing substances）としての用途が提案された〔Hasegawa M，Hirose K，Hokukoku S ，他WO 92/33586 A1およびGordon RT，US 4.731,239〕。医療用途に現在提案されている粒子のほとんど全てが、安定剤としてのデキストランの存在下で製造された酸化鉄である〔Bacic G,Niesmann MR，Magin RL他，SMRM - Book of abstracts 328，1987 ; Ohgushi M，Nagayama K，Wada A他，J．Magnetic Resonance 29，599-601，19 78; Pouliquen D，Le Jeune JJ，Perdrisot R他，Magnetic Resonance Imaging 9，275-283，1991またはFerrucci JTおよびStark DD，AJR 155，311-325，1990 〕が、他の多糖、例えばアラビノガラクタン〔Josephson L，Groman EV，Menz E 他，Magnetic Resonance Imaging 8，616-637，1990〕、デンプン〔Fahlvik AK ，Holtz E，Schroder U他，Invest．Radiol．25，793-797，1990〕、グリコサミノグリカン〔Pfefferer D，SchimpfkyC，Lawaczeck R，SMRM - Book of abstrac ts 773，1993〕またはタンパク質〔Widder DJ，Grief WL，Widder KJ他，AJR 14 8，399-404，1987〕の使用も記載されている。鉄塩を含むものなどの合成のための正確な条件、温度、被覆用ポリマー（安定剤）、滴定速度、アルカリの選択、精製等は、生成物の化学的および物理的性質に影響を及ぼし、従ってそれらの製剤的および本草医学的品質並びに医学的価値に影響を及ぼす。特別な用途での効果的使用に至るまでの開発の重要な段階は、WeisslederとPa pisovにより行われた〔Weissleder R，Papisov MI，Reviews of Magnetic Reson ance in Medicine 4，1-20，1992〕。彼らは磁性酸化鉄の「標的指向性(targeta bility)」が粒度に反比例することを示すことができた。この点での問題は、粒度が小さくなると効力（ＭＲ効果）が減少することである。何ら分別段階を使わない特に小さな磁性酸化鉄の製造が最近記載されている〔Hasegawa M，Ito Y，Y amada H他，JP 4,227,792〕。MION_Sと呼ばれる特に小さな粒子についての「機能撮像」実験が報告された。前記粒子のデキストラン被膜（磁気標識）を過ヨウ素酸塩を使って酸化し、次いで特定の分子（抗ミオシン；ポリクローナル抗体）とカップリングさせた〔Weissleder R，Lee AS，Khaw BA他，Radio-logy 182 ，381-385，1992またはWeissleder R，Lee AS，Fishman A他，Radiology 181，2 45-249，1991〕。 Menz他〔Menz ET，Rothenberg JM，Groman EV他，WO 90/01295〕は、生理学的エフェクター細胞を有するポリマー（アラビノガラクタン）により大きなナノメートル粒子を被覆するという特別な方針をとり、そして過ヨウ素酸塩を使ってデキストラン安定化粒子を酸化し次いでそれらを還元アミノ化によりトランスフェリンとカップリングさせるGordonの方法〔Gordon RT，US 4,735,796〕によく似た受容体依存性エンドサイトーシスを介した特異的取り込み機構を主張している。肝臓と脾臓のＭＲ診断法において造影剤として使われる「大型」超常磁性酸化鉄の製造は発達状態であり、前記剤の診断上の利益は証明されている。それらの酸化鉄の幾つかは臨床用に開発中である〔AMI-25; Advanced Magnetics Inc.，C ambridge，Mass.，USA; 第III／IV相；およびSHU 555A; Schering AG Berlin，G ermany;第II相〕。ＭＲリンパ管造影法またはＭＲ血管造影法のような特別な（肝臓外）アプローチにとって酸化鉄の流体力学的直径が重要であることは知られており、現在調査中である。他の点は同一である粒子では直径が小さくなればなるほど血中半減期が増加するであろう。小型の酸化鉄を製造する合成の変法は文献から既知である。超常磁性酸化鉄を基にした特異的造影剤の開発において遭遇する重要な問題は、ターゲティング目的で鉄含有コアを製造するのに最も適する安定剤は非常に限定されるので、同時に生じる物理的および化学的パラメーターの不利益を受け入れる必要なしにターゲティング性質、即ち標的組織中への蓄積と分布を改善することが今まで不可能であったことである。加えて、前記物質が合成後にターゲティング性質（生物活性）を保持していなければならない時はいつも、重要で且つ高度に特異的な分子（タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、更には大部分のオリゴ糖および多糖）の全グループが製造段階において安定剤として使用できるわけではないということで、合成中の反応条件（酸性〜アルカリ性ｐＨ、温度、鉄塩を含む酸化還元反応）は可能な安定剤の選択肢を減らす。今までに使われている（化学的に）「不感受性の」ポリマー、主にデキストランから、合成条件下で様々な制御不可能な反応が起こること、例えば酸性領域のｐＨ値での脱重合（例えば、酸加水分解により工業的品質の低分子量デキストランが生成する）およびアルカリ性領域（沈澱段階）での（グリコ）ポリマーの完全な破壊を引き起こし得る様々な他の反応が起こることが知られている。ショ糖／糖化学および要求される反応条件を考慮に入れると、最新の「デキストラン磁鉄鉱」は、安定化のためにデキストランが使用されたが合成後にデキストランが全く残らないため、少しもデキストラン磁鉄鉱でないと考えることができる。製剤および認可の観点からこれを見ると、安定剤が被膜を形成し、かくして生物学的作用を大部分決定するので、これは重要な成分が未知であるかまたは断言されていないことを意味する。それから生じる別の実際問題は、表面それ自体が未知であると将来の開発の間に表面特性を最適化できないことである。最もよく研究されているＭＲリンパ管造影法のような特別な応用を使うと、一方では、安定剤としてデキストラン（小型酸化鉄の製造に使われる他のポリマーについては今まで何も発表されていない）を使った現状の粒子の粒度最適化はリンパ系組織中への粒子の相当な蓄積を促進するので利用可能性を改善するけれども、他方では、リンパ節全体におけるそれの分布は臨床応用に充分なほど均一ではないことを証明することができる〔Taupitz，M他，SMRM - Book ofabstracts 500，New York，USA，1993〕。この強いけれども不均一な蓄積は、流体力学的直径の繰り返し最適化による更なる改善を非常にやりにくくする。標的器官の小さなサイズは特異的な診断剤を開発するのに重要な問題である。例えば、リンパ節の総重量は体重の１％未満を構成する。従って、診断剤は標的組織において相当な蓄積力を有していなければならず（特異性）、且つ低濃度で強いコントラスト増強効果を促進しなければならない。超常磁性酸化鉄は現在ＭＲにおいて最強のコントラストを有する物質の群を表すので、それらの粒子は特殊な用途に特に適すると思われる。しかしながら、前記物質の特性を引き起こす酸化鉄の結晶コアは、粒度が生物学的性質に重要な影響を与えるため、問題がある。より小さな粒度は標的指向性を改善するが、粒度と磁気モーメントの相互依存のために造影剤の効力が減少し、その結果、（物理的な）コントラスト効果と（生物学的な）標的指向性との間で妥協点を見つけなければならない。概して、鉄含有コアは高い効能を得るためにはできるだけ大きくあるべきであり、その一方で全径は小さく維持するべきである。本発明が扱う課題は、最適な形態の特異的なナノ粒子を使って物理的および化学的必要条件を釣り合わせた鉄含有ナノ粒子を提供することである。驚くべきことに、本発明のナノ粒子の標的指向性は、現状の酸化鉄粒子のものよりも優れている。かつてない「標的指向性」の造影剤および／または治療剤／支持体系は、ナノ粒子の改善された標的指向性と物理的性質を組み合わせることにより製造することができる。ナノ粒子は、鉄含有コア（物理的作用；コントラスト）を標的成分（生物学的作用）と組み合わせた時に最大の融通性（適応性）を保証する個々のブロック（モジュール設計）から製造される。このモジュール構造は、用意することができる成分（鉄含有コア）と非常に感受性である場合があるターゲティング（標的指向）用分子からの完全なナノ粒子の「適時（just-in-time）」集成を可能にするという点で有利である。臨床放射線薬学から知られている低温キットとのこれの類似性は、例えば、標的分子（例えば自己抗体）としての個々の患者の血清成分の使用も容易にする。本発明のナノ粒子は、それらの強い着色のために視覚的に検出することができ、これは、例えば、それらを手術において可視標識物質として使用する時に望ましい。更に、本明細書中に記載されるナノ粒子は、治療用途、例えば活性物質の磁気連鎖放出と併せて標的容積を越える外部磁石を使った磁気ターゲティングにも適当である。ナノ粒子は、例えば、腫瘍中に蓄積することができ、従って局所高体温において特異的な強化剤として使用することができる。本発明のナノ粒子は、鉄含有コア、最適にサイジングしたナノ粒子を招く一次被膜（合成ポリマー）、および二次被膜（ターゲットポリマー）、並びに所望により、薬剤補助剤、薬剤および／または吸着媒介物質／促進物質から成る。鉄含有コアは、粒子、コロイドまたは結晶の形を有することができる。ナノ粒子は、一次被膜としてコアを被覆しそして物理的および／または薬学的／本草医学的品質の制御のために製造中に必要とされる、コアの製造からの合成ポリマーを含有する。合成ポリマー対鉄の比は、脱着工程によって所望の値に調整される。特別な診断法に使うために、ナノ粒子の表面を表し且つコアと一次被膜の基本構造単位を包むターゲットポリマーが吸着される。吸着を改善するために一次被膜と二次被膜の間に吸着媒介物質／促進物質が存在してもよい。ナノ粒子の他の成分は薬剤補助剤または薬剤であることができる。図１は本発明のナノ粒子の構造の断面図を示す。溶液中での前記基本構造単位（鉄含有コア＋一次被膜）の流体力学的直径は10 0nm未満、好ましくは50nm未満であり、且つ鉄含有コアの直径の５倍以下である。本発明のナノ粒子は、それらが安定なコロイド状ゾルの形で利用可能であり、その形態は好ましいが、それらは薬品に一般的である溶剤（電解質溶液、血漿増量剤、グルコース溶液、生理的食塩水など）を使って再び容易に溶液に戻すことができる凍結乾燥粉末として製剤化することもできること、または基本構造単位並びにターゲティング成分および任意の補助剤が別々の溶液または凍結乾燥物であり、任意の所望の時点でそれらを混合して投与用の溶液を得ることができること、により更に特徴づけられる。鉄含有コアは鉄（II）または鉄（III）イオンのものよりも大きい磁気モーメントを有する。鉄含有コアは、それの磁気的性質（磁性）のために、該物質をＭＲ断層撮影法において造影剤として使うと、コントラスト増強作用を促進する。鉄含有コアは、最適なコントラスト描出を達成するために超常磁性であるかまたは少なくとも超常磁性部分を含むべきである。これは、この種の磁性は固体状態でのみ生じるので、該コアが結晶かまたは多原子複合体（「粒子」）のいずれかでなければならないことを意味する。本発明の鉄含有コアは、磁鉄鉱もしくは磁赤鉄鉱から成るかまたは磁鉄鉱もしくは磁赤鉄鉱を含有することができる。コア中に含まれる鉄の25重量％までを他の金属イオンにより置換することができる。前記非鉄金属イオンは、常磁性、反磁性または両方の混合物である。本発明のナノ粒子は、鉄含有コアが電子顕微鏡検査によって測定した時30nm未満、好ましくは15nm未満の直径を有し、鉄含有コアの少なくとも90％が0.7×平均〜1.3×平均の範囲内である粒度分布を有する最低50の金属原子を含有することにより更に特徴づけられる。ナノ粒子は、存在する金属イオンの総重量の0.01〜１倍の量の合成ポリマーを含有する。好ましい量は総重量の0.25〜0.75倍である。単量体もしくは重量体物質、またはそれらの物質もしくは誘導体の混合物、または官能基を含んで成る誘導体、または更に置換されており且つ100,000Da未満の分子量を有する誘導体、が合成ポリマーとして使われる。好ましい物質は10,0 00または5000Da未満の分子量を有する。デキストラン誘導体またはデキストランおよび／またはデキストラン誘導体の混合物が合成ポリマーとしての使用に特に好ましい。合成ポリマーはそれの分子中に１個もしくは数個の酸基、または好ましくはＮ，Ｓ，ＰもしくはＯ原子を含有する数個の官能基を含有することができる。ターゲットポリマーおよび合成ポリマーとして使われる物質または物質の混合物は同一であっても異なってもよく、ターゲットポリマーは、合成反応や合成中の合成ポリマーの副反応に暴露されなかったのでそれの生理的状態を保持している。鉄含有コアおよび一次被膜の親物質（出発原料）はナノ粒子の物理学的性質を決定し、一方でターゲットポリマーは前記ナノ粒子の生物学的性質を決定する。ナノ粒子中に含まれるターゲットポリマーの重量は、存在する金属イオンの重量の0.5倍〜50倍、好ましくは１〜25倍である。本発明のナノ粒子は、含まれる金属イオンの総重量より少ないかまたはそれに等しい量で吸着媒介物質／促進物質を含むことができる。それらの吸着媒介物質／促進物質は、鉄含有コア／（残余の）合成ポリマーから成る基本構造単位によるターゲットポリマーの吸着を強化するかまたは可能にする。好ましい吸着媒介物質／促進物質は、次の構造：RRTVKHHVN，RRSRHHもしくはR SKRGR〔アミノ酸の一文字記号〕またはそれらの部分構造を有するペプチドである。ナノ粒子の全構成成分を包含する流体力学的直径は、鉄含有コアの直径の10倍以下であり、そして基本構造単位の直径よりも最大で20％だけ大きい。本発明のナノ粒子は、いつでも配合することができる基本構造単位、ターゲットポリマー、薬剤および吸着媒介物質といった個々のモジュールから構成される。ナノ粒子調製物は、ナノメートル領域の安定化された鉄含有粒子の低粘度の水性コロイド溶液または懸濁液である。ナノ粒子溶液は大きな凝集物を全く含まず、静脈内に投与することができ、これは国際薬局方に記載された非経口投与用の粒度条件を満たす。一般に、基本構造単位は熱処理によって滅菌することができる。最終ナノ粒子の「滅菌」方法は、二次被膜の安定性に依存するが、どんな場合でも無菌製造が保証される。該粒子のサイズが小さいため、濾過滅菌が常に可能である。実質的に無菌の投与用溶液を保証する別の方法は、使用の直前に感受性ターゲットポリマーを滅菌可能な基本構造単位と配合する方法である。ナノ粒子は十分に耐容性であり、そして例えばＭＲ造影剤として使用する時、診断量と致死量の間に非常に好ましい安全限界を有する。診断量は、特定の用途に応じて、５μモル〜200μモル（鉄）／kg体重であり、一方でおよその致死量は20ミリモル〜50ミリモル／kg体重である（マウスの場合）。該物質は完全に生物分解性である。鉄含有コアが溶解されて、鉄が生物学的鉄プールの中に取り込まれる。合成用およびターゲットポリマーとして使われる分子は、一般に分解性の基本単位（糖、アミノ酸）に異化され得る。ナノ粒子溶液は非常に安定である；それらの調製後に物理的パラメーター（粒度、磁性）に検出可能な変化は全く見られない。該溶液は、無菌条件下でそれらを製造すると長期間保存することができる；例えば、凝集または沈降といった不安定性は12カ月以内には見られなかった。該溶液または懸濁液は、鉄含有結晶の強い着色のために赤褐色〜黒色を呈する。この特徴的な着色は目視検出のために利用することができ、そのため前記物質を外科医学における標識として利用することができる。ナノ粒子は、ＭＲ断層撮影法において造影剤として使用する場合、超常磁性であるかまたは超常磁性部分を含有する。該粒子は低磁場の強さでも高い飽和磁化を示し、外部磁石を取り去った後に全く保磁性を示さない。ナノ粒子は溶液（懸濁液）として製剤され、更なる準備をせずに適用することができる。ナノ粒子溶液は通常の薬用溶剤、例えば生理的食塩水、電解質溶液またはグルコース溶液と相溶性であるため、所望である時には該粒子を希釈することができ、そして特別な用途のために注射または注入することができる。貯蔵の観点からみて、溶液を製剤する代わりとなるのは凍結乾燥物である。基本構造単位を凍結乾燥しそして溶解されたターゲットポリマー中に後で再懸濁するか、または基本構造単位とナノ粒子を吸着後に凍結乾燥しそして使用前に生理的食塩水もしくは注射用滅菌水中に再溶解させるかいずれかである。前記物質を貯蔵しておく別の方法は、基本構造単位とターゲットポリマーを別々の溶液中に貯蔵し、そして使用前にそれらを混合する方法である。粒子状またはコロイド状鉄含有コアは、単分子的に溶解された鉄前駆体から、シングルポット合成後に、それらのｐＨ値を変化させ、それらを安定剤物質（合成ポリマー）の存在下で沈澱させることにより製造される。合成ポリマーは製造中に結晶コアを分離するので、粒度を調節するのに使うことができる。合成ポリマーは、結晶コアのだけでなくナノ粒子全体の物理的および薬学的／本草医学的性質の原因となる。凝集が起こらないような程度にコアが分離される（立体安定化）ので、合成ポリマーは安定な溶液（懸濁液）を促進する。鉄含有コア粒子が得られる時、合成ポリマーは脱着により合成ポリマー：鉄の所定の比に調整される。鉄コアおよび一次被膜として鉄含有コアを包みそれを安定化する合成ポリマー残渣の溶液（懸濁液）は、モジュール設計の基本構造単位を表す。この基本構造単位は高い物理的および生薬学的性質により特徴づけられる。第二の重要な成分は、合成後に基本構造単位により吸着されそして二次被膜としてコアと一次被膜を包むターゲットポリマーである。二次被膜はナノ粒子の表面であり、生体内作用を決定する。基本構造単位とターゲットポリマーはいつでも混合することができ、「適時」製造も可能にする。合成ポリマー残渣とターゲットポリマーとの吸着工程は、中間段階：吸着媒介物質／促進物質の添加により、改善または促進することができる。吸着媒介物質／促進物質はターゲットポリマーと共に混合物に添加することもできる。同様な方法で、薬剤補助剤または薬剤を任意に添加することができる。本発明の製造方法により、初めて最適な方法で特異的ナノ粒子の物理的および生物学的条件を満たすことが可能になったことから、本発明の特別な利点は明白である。最も適切な物理的性質を有する合成ポリマーは、ナノ粒子の所望の生物学的標的指向性(targetabitity)により何ら制限されることなく、粒子のモジュール構造のための合成、即ち基本構造単位（鉄含有コア＋一次被膜）とターゲットポリマー（二次被膜）の別々の製造のために選択することができる。よって、最初は、ナノ粒子の物理的および薬剤的品質並びにそれらの所望の生物学的効果に関して妥協してはならない。ターゲットポリマーは破壊性の合成条件に暴露されない。これにより、一次被膜として除外されるような多数の物質がターゲティングに使用できるようになる。同様に、適当な反応条件を必要とし且つリガンドの完全性を減らすであろう合成後の化学反応を行う必要が全くない。例えば、過ヨウ素酸酸化とその後の還元アミノ化の場合のようなジスルフィド結合を含むタンパク質を巻き込む酸化還元反応がなく、生物活性が維持される。別の重要な利点は、過ヨウ素酸塩のような反応溶液を分離しなくてもよいため、基本構造単位／ターゲットポリマーの精製の必要がないということである。当該方法は、使用直前のナノ粒子の「適時」製造を含む、即時製造を可能にする。これは、例えば、「個別の」造影剤（例えば自己抗体）の場合、またはターゲットポリマーが短期間だけ溶液中で安定である場合、必要とされるかまたは望ましいかもしれない。本発明の方法は、ナノ粒子の「表面」を別々に修飾／最適化することができるので更なる最適化に有利であり、そしてＮＭＲやＩＲ分光法といった進歩的な分析方法を使って分析を行うことができる。それらの方法は粒状コアが存在する場合には適用することができない。限定された方法で表面が製造されそして適切に分析することができると、表面特性の体系的最適化が可能になるけれども、一方で、粒子が全体として処理される各々の現状の製造方法では、表面は未知であり且つ試行錯誤によってしか最適化することができない。従ってナノ粒子は数段階で製造する。鉄含有コアは、一般に「シングルポット」法、即ち、安定剤（合成ポリマー）の存在下で製造する。安定剤（合成ポリマー）を水に溶かし、そして単分子の鉄化合物と混合する。ｐＨ値を増加させることによって鉄塩を好ましい酸化物に変換する。あるいは、安定剤溶液をアルカリ性にし、次いで鉄塩と混合することができる。この混合物を還流させながら加熱し次いで中和するか、あるいはその逆でもよい。粗製物質を精製し、過剰のまたはしっかりと吸着／結合されていない合成ポリマーを、脱着工程によって的確な鉄対安定剤重量比に調整する。酸化鉄コアと（残余の）合成ポリマーから成る、この精製され脱着された基礎物質は、（モジュール構造を有する）ナノ粒子の基本構造単位を表す。所望により熱による滅菌を行ってもよい。所望により吸着媒介物質／促進物質の中間吸着または同時吸着を伴って、必要な時にまたはストックの維持のために、選択されたターゲットポリマーを基本構造単位に吸着させる。所望により他の成分、例えば薬剤補助剤または薬剤を添加してもよい。一般的な製造方法の概要は図２に与えられる。合成は下記に記載の鉄含有コアの「シングルポット」法に従って常に安定剤の存在下で行われることに注目のこと。化学量論量の鉄（II）塩と鉄（III）塩を、鉄含有コアを製造するための前駆体として混合する。生成する結晶の質は使用する塩により影響を受ける；文献によれば、塩酸の塩、即ち塩化第一鉄と第二鉄が主に使われている。しかし一般的には、硫酸塩や硝酸塩を含む強酸の塩はいずれも使うことができる。それらの塩を使う時は、鉄（II）塩が酸化に対して非常に敏感であるため、正確な化学量論を保証することは難しい。酸化にあまり敏感でないモール塩のようなより複雑な塩を使用することがここでは有利である。驚くべきことに、有機アニオンが安定剤または補助的安定剤として働くので、無機塩よりも有機塩の方が優れていることがわかった。グルコン酸鉄（II）またはクエン酸鉄（III）が特に適当であるとわかった。しかし、他の有機アニオン、例えばフマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩またはサリチル酸塩も使うことができる。鉄（III）塩のみを当てにした合成変法は、非常に酸化に敏感な鉄（II）塩に頼る必要なしに製造を容易にし、且つ「外来イオン」の数を減らす。この合成変法は、鉄（III）塩のみから出発し、それから計算量の還元剤によってのみ反応中に鉄（II）塩がその場で生成される。一般に、化学量論的に正確に鉄（III）を還元する全ての還元剤を使うことができるけれども、ヒドロキシルアミンが好ましい。というのは、反応したヒドロキシルアミンは定量的に笑気ガスになり、よって容易に且つ完全に反応混合物から除去されるからである。 4 Fe³⁺ ＋ 2 NH₂OH -----＞ 4 Fe²⁺ ＋ N₂O ＋ 4 H⁺ ＋ H₂O 以前に記載された方法の欠点は、鉄塩の化学を注意深く考察すれば明らかになる。化学量論的組成の鉄（II）と鉄（III）を、限定された構造を有する結晶に変換することが、沈澱段階の目標である。ｐＨ値を増加させることにより、それぞれの酸化物が形成される。しかし、鉄（III）イオン〔pK_LFe(OH)₃約37¹⁾〕（¹ ⁾ pK_L値は濃度に依存する。このデータは10^-2モル／ｌの溶液に対するものである）は約２のｐＨ値で発泡しながら可溶性水酸化物を形成し、一方で鉄（II）イオン〔pK_LFe(OH)₂約13.5〕はｐＨ＝８で水酸化物として沈澱し始めると考えるならば、所望の結晶の直接形成がほとんど不可能に思われ、また反応経路が水酸化物の逐次反応を含まなければならないということが明らかになる。しかしながら、適当な錯生成剤を使って互いに対する鉄化合物の沈澱点を移動し、それによって同時沈澱および酸化鉄結晶中の様々な格子部位への挿入を達成することは可能である。使用する鉄化合物の沈澱点は、適当な錯生成剤を選択することにより広範囲に渡り調節することができる。表１に記載の「古典的な」物質の他に、上記有機アニオンを錯生成剤として使ってもよい。どんな形でも望ましい方法で、鉄（II）および鉄（III）イオンの錯塩、有機アニオン塩および無機塩を組み合わせてもよい。表１に列挙したキレート化剤は、単に適当な化合物の範囲を示すものであって、それらの物質のみに限定されると解釈すべきではない。合成の変法では、最初に水酸化鉄（II）と水酸化鉄（III）を別々に製造する。驚くべきことに、別々に製造された水酸化物溶液を混合することにより、酸化鉄結晶が好結果に生成する。混合した溶液を加熱すると転移と結晶化が促進される。沈澱は鉄含有コアの製造の重要な段階である。ｐＨ値を増加させることにより、低分子量鉄化合物から粒状鉄化合物が形成される；コロイド状水酸化鉄が粒子形成中の任意の中間生成物であることがある。溶解させた酸性鉄前駆体のｐＨ値を上昇させることができるいずれの物質もｐＨを増加させるのに適当である。水酸化ナトリウム溶液の他に、好ましくは、気体状もしくは塩としてのアンモニア、またはアルカリ性アミンと揮発性緩衝液を使ってｐＨ値を増加させる。驚くべきことに、沈澱に使われる塩基は、「生物学的」作用が例えば体内器官の至る所での該粒子の分布の相違として目に見えるようになるというような意味で、総合特性に影響を及ぼすことがわかる。アルカリ性物質の濃度は0.1〜10Ｎであるだろう。約１〜４Ｎの濃縮溶液が好ましい。何故なら、ｐＨの増加が急速に起こると小さいコアサイズを有する粒子が優先的に形成するからである。塩基は30分以内、好ましくは30秒以内で添加される。０〜120℃の温度領域で鉄化合物を粒子上に沈澱させ、50〜80℃が好ましい領域である。概して、酸化鉄が直接形成される時には温度は低く、形成が中間段階として水酸化物を含む時には高いだろう。沈澱後に生成物を中和し、次いで、特に中間生成物として水酸化物が生成する時には、粗製物質を還流させる。この時の加熱時間は０分〜24時間であり、好ましくは30分〜１時間である。中和と還流は逆の順序で実施してもよい。外科学における目視検出のための造影剤としてそれを使う場合には、該物質の内部着色が望ましい。ＭＲ断層撮影法への応用は、ナノ粒子の磁気的性質（磁性）により決定される高い有効性を要求する。ナノ粒子をＭＲ造影剤として使う時、酸化鉄の磁鉄鉱および磁赤鉄鉱が特に適当であると思われる。何故なら、それらは臨床ＭＲ断層撮影法に適用される磁場の強さにおいて高い飽和磁化を示すからである。特別な磁性は粒状鉄コアの結晶構造によって決定される。しかし、驚くべきことに、まだ磁鉄鉱様結晶構造を保ったまま、この結晶コアに外来イオンを挿入することができる。非含鉄金属イオンによるこのドーピングは、一般に２つの方法で行うことができる。一方では、鉄（II）および／または鉄（III）イオンをそれらの格子点のところで別の常磁性金属イオンにより置換し、他方で、反磁性イオンを置換用に使うことができる。より良く理解するためには、鉄（III）イオンは平行／反平行の格子点を占め、その結果それらの個々の磁気ベクターは中和されるので、磁鉄鉱結晶中の磁化は鉄（II）イオンのみから生じるということを心に止めておくべきである。磁化の正味の量は、鉄よりも高い磁気モーメントを有するイオンを使うことにより、または常磁性もしくは反磁性金属イオンを使って鉄（III）イオンの平行／反平行格子位置の占有の均衡を変えることにより、増加させることができる。置換がガドリニウムのような高い磁気モーメントを有する常磁性金属を含む場合、置換される鉄に比較した時の磁気モーメントの差に等しい増加を得ることができる。鉄（III）が反磁性金属により置換される場合、鉄（III）イオンの均消モーメントはもはや全モーメントに寄与することができない。変形として、反磁性および常磁性金属イオンを一緒に磁鉄鉱様結晶格子中に挿入することができる。非鉄イオンによるドーピングは、合成中の低分子量鉄含有親化合物の部分的置換により行われる。鉄含有コアを製造するための一般的方法は、磁鉄鉱様結晶格子を合成することである。このためには鉄（II）イオンと鉄（III）イオンが１：１〜１：20の比で使われる。合成は１：２の正確な化学量論比を使って最も容易に達成される。鉄（II）対鉄（III）の比は還元剤を使って合成中も維持することができる。鉄（II）と鉄（III）イオンは全イオン含量（重量）の25％の当量まで別の金属イオンにより置換することができる。ガドリニウムやマンガンのような常磁性イオンの他に、リチウム、マグネシウムもしくはカルシウムのような反磁性イオン、または常磁性イオンと反磁性イオンの混合物を使ってもよい。磁鉄鉱または磁赤鉄鉱様構造が好ましい結晶構造である。このいわゆるスピネルまたは逆スピネル結晶は、例えば最初に水酸化物が製造されるか、または例えば酸化によって磁鉄鉱から磁赤鉄鉱へというように磁鉄鉱結晶が別の結晶に変換される場合には、二次生成物として形成させることができる。ＭＲＴ用の造影剤として使われるナノ粒子の特殊な性質は、「超常磁性」を必要とする。超常磁性は固体物質においてのみ生じる。従ってもう１つの必要条件は、結晶が固体の性質を有すること、即ち、それらが粒状結晶かまたは少なくとも多原子クラスターであることである。最少鉄含有量は結晶あたり50個の鉄原子（または金属原子）であろう。鉄含有コアのサイズは合成中の変更により広範囲（１〜約30nm）に渡り調節することができるが、15nm未満の直径を有し且つ0.7×平均値＜平均値＜1.3×平均値（平均値は電子顕微鏡検査を使って決定された平均直径である）の範囲内に粒子の最低90％を有する小さいコアの合成が好ましい。本発明の方法の特別な利点の１つは、それが合成ポリマーの選択に大きな融通性を与えることである。低分子量物質も低分子量物質と高分子量物質の混合物も両方とも鉄含有コアの製造に使用できるので、用語「ポリマー」は文字通りに解釈してはならない。特に好ましいのは、分子中に負電荷担体を含有する低分子量物質と高分子量物質の使用である。次の物質が好ましい：カルボキシレートまたは類似体、ホスフェート（または別のＰ含有基）およびスルフェート（または別のＳ含有基）。それらの誘導体は、単純に１個の官能基を有するかまたは数個の官能基を含むことができる。これの基礎となる理論は、鉄含有コアの表面に対する親和性が正電荷の酸化鉄表面と合成ポリマー中の負電荷との相互作用のためであるとする。合成ポリマーが複数のそれらの基を含む場合には、相互作用は特に明確である（「多面結合」）。適当な物質は多数あるので、それらを全てここに列挙することはできない。合成中の安定化に特に適当である幾つかの物質のクラスは、低分子量物質、例えばカルボキシポリアルコール、ポリカルボキシポリアルコール、ポリカルボキシアルコール、カルボキシアルコール、アルコール、単糖、オリゴ糖、および合成ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよび混合物（ブロックポリマーおよびコポリマー）、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリ乳酸（ポリラクチドおよびポリラクチドグリシド）、並びに天然のまたは特には部分合成のまたは化学的および／または酵素的に修飾された天然のポリマー、例えばデキストランおよびその誘導体、アラビン酸、グルコサミノグリカンおよび合成類似体、デンプンおよびその誘導体、並びにゼラチン誘導体である。負電荷担体を含む低分子量のデキストラン誘導体を使うことが特に好ましい。（モノ）カルボキシデキストランをここで一例として挙げることができ、それの製造は例えばBremner他〔Bremner I,Cox JSG，Moss GF，Carbohydrate Research 11，77-84，1969〕中に記載されている。別の好ましい例はポリカルボキシデキストランの使用であり、それは６−ブロモヘキサン酸とデキストランのヒドロキシ基の間のエーテル結合により製造される。〔Noguchi，A.，Takahashi，T.，Ya maguchi，T.，Kitamura，Y.，Takakura，T.，Hashida，M.，Sezaki，H.，Biocon jugate Chemistry 3，132-137，1992 〕。ポリカルボキシデキストランは、それの多数の負電荷のために、「多面結合（multi-side attachment）」を通して酸化鉄の表面と相互作用する。製造中の安定化のために要求される合成ポリマーの量は、バッチ中に含まれる金属イオンの総重量の0.5〜20倍である。反応混合物中のそれの全比率は、重合性合成ポリマーを使った時に混合物の粘性がまだバッチの徹底的混合を許容するように選択される（＜50％ g/V）。使用される合成ポリマーの重量は、好ましくは金属イオンの総重量を３〜５倍上回るだろう。粗製物質を製造した後、脱着方法によってバッチ中の合成ポリマー成分が減らされる。クロマトグラフィー法、磁気分離方法、透析、遠心もしくは限外濾過、または他の適当な方法を脱着に使うことができる。脱着は増加させた温度で前記脱着方法の１つと組み合わせて実施することができる。脱着の程度に影響を及ぼす別の方法は、緩衝液または界面活性剤のような脱着剤の使用である。粗製物質を脱着させた後、安定な、物理的に最適な溶液／懸濁液が得られ、これは特異的ナノ粒子の製造のための基本構造単位を表す。基本構造単位は鉄含有コアと（残留）合成ポリマーから成る。残留合成ポリマーの量は、脱着方法により調整される比率に依存して、0.01〜１である。0.25〜0.75の範囲が好ましい。何故なら、この範囲内で基本構造単位の安定性と吸着力との最良の折衷が得られるからである。基本構造単位の全径（流体力学的直径）は、使用する合成ポリマーと鉄含有コアの大きさに依存し、従って100nmより小さく、好ましくは50nmより小さい。コア直径の５倍より大きくない全径を有する基本構造単位を製造することが好ましい。基本構造単位とターゲットポリマーを混合して最終ナノ粒子を製造する。吸着されたターゲットポリマーは合成ポリマー／鉄含有コア単位の周りに二次被膜を形成し、かくして、該粒子の粒状性質の他に主として生体内作用を決定づける該組織の表面となる。この製造方法の特別な利点は、基本構造単位により吸着させることができる事実上全ての物質が、ナノ粒子の生物学的作用を制御するために使用できることである。ターゲットポリマーは合成時の緊張に暴露されないので、敏感な物質や今まで使うことができなかった物質が生物学的作用を制御するための補助分子として働くことができる。適当なターゲットポリマーの例は以下のものである：天然のオリゴ糖および多糖、例えば100,000Da未満の分子量を有するデキストラン、様々なデキストランの混合物、様々な起源のデキストラン、特に精製されたデキストラン（ＦＰ＝発熱物質不含有品質）、フコイダン、アラビノガラクタン、コンドロイチンおよびそれの硫酸エステル、デルマタン、ヘパリン、ヘパリチン、ヒアルロン酸、ケラタン、ポリガラクツロン酸、ポリグルクロン酸、ポリマンヌロン酸、イヌリン、ポリラクトース、ポリラクトサミン、ポリイノシン酸、ポリスクロース、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、グルカン、ニゲラン、プルラン、イリシン、アスパラゴシン、シニストリン、トリシチン、クリテシン、グラミニン、シトシン、リケニン、イソリケナン、ガラクタン、ガラクトカロロース、ルテオース、マンナン、マンノカロロース、プスツラン、ラミナリン、キサンテン、キシランおよびコポリマー、アラボキシラン、アラビノガラクタン、アラバン、レバン（フルクトサン）、テイキン酸、血液型多糖、グアラン、カルビン、アルファルファ、グルコマンナン、ガラクトグルコマンナン、ホスホマンナン、フカン、ペクチン、シクロデキストリン、アルギン酸、トラガカントおよび他のガム、キチン、キトサン、寒天、フルセララン、カラゲーン、セルロース、セルロン酸またはアラビン酸。その上、化学的および／または酵素的に製造された上記物質の誘導体および高分子化合物からの低分子量分解生成物が挙げられる。所望により、それらの物質または誘導体は、任意の他の物質により置換することができる。ポリアミノおよび擬似ポリアミノ酸も適する。合成オリゴマーおよびポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンエーテル、ポリアネトールスルホン酸、ポリエチレンイミン、ポリマレイミド、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルピロリドン、ポリ硫酸ビニル、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリラクチド、ポリラクチドグリセリド。単糖〜オリゴ糖および関連物質、例えばアルド−およびケトトリオースからアルド−およびケトヘプトース、ケトオクトースおよびケトノナノース、無水糖、主鎖中に５または６個の炭素原子を含むモノカルボン酸および誘導体、シクリット（環式糖）、アミノおよびジアミノ糖、デオキシ糖、アミノデオキシ糖およびアミノ糖カルボン酸、アミノシクリット、モノマー〜オリゴマーのリン含有誘導体。抗腫瘍性（高等植物、真菌、地衣および細菌）を有するモノマーもしくはオリゴマー炭水化物または誘導体、例えばリポ多糖、または次の構造を１個もしくは複数個含むモノマーもしくはオリゴマー炭水化物または誘導体：β−２，６−フルクタン、β−１，３−グルカン、マンノグルカン、マンナン、グルコマンナン、β−１，３／１，６−グルカン、β−１，６−グルカン、β−１，３／１，４ −グルカン、アラビノキシラン、ヘミセルロース、β−１，４−キシラン、アラビノグルカン、アラビノガラクタン、アラビノフコグルカン、α−１，６／１，３−グルカン、α−１，５−アラビナン、α−１，６−グルカン、β−２，１／２，６−フルクタン、β− ２，１−フルクタン。抗腫瘍性多糖の効果のための重要な前提条件は、水への溶解度であり、これは６位での分岐によるβ−１，３／１，６−グルカンで保証される。水に不溶である多糖の溶解度は、親水基および十分に水和した基を導入することにより改善することができる。アミノ、アセチル、カルボキシメチルまたは硫酸基、特にメチルおよびエチルを置換基として使うことができる。界面活性剤、例えばニオテンシド(niotensides)、アルキルグルコシド、グルカミド、アルキルマルトシド、単分散および多分散ポリオキシエチレン、第四級アンモニウム塩、胆汁酸、アルキルスルフェート、ベタイン、CHAP誘導体。例として、および多数の制御オプションを例示しそれによってモジュール構造の利点を説明するために、生体内作用（特異性）を調節する分子は、細胞断片、細胞、細菌断片、レクチン、ホルモンおよび媒介物質、タンパク質およびネオタンパク質、ペプチドおよびポリペプチド、抗体、抗体断片またはインテグリン（ ELAM，LECAM，VCAM等）もしくは受容体特異的物質（例えば、Lewis-X，Sialyl-L ewis-X等）の「分子認識単位」の群、または多数の血液／血漿／血清成分およびオプソニン、オリゴヌクレオチドおよび合成オリゴヌクレオチド、ＤＮＡおよびＲＮＡまたはそれらの誘導体、断片、類似体（ＰＮＡ）および同族体の群、リポ多糖、リポタンパク、グリセロールエステル、コレステロールおよびエステルの群、または代謝産物および抗代謝産物、細胞増殖抑制剤、薬用物質、薬用物質、化学療法剤および細胞増殖抑制物質の接合体の群からの物質であることができる。上記物質に加えてまたは上記物質の代わりに、化学的および／または酵素的に製造された誘導体または分解生成物をターゲットポリマーとして使うこともできる。誘導体または「未変性の」ターゲットポリマーは追加の官能基を含んでもよい。それらの官能基はもとのターゲティング用分子の一端もしくは両端または他のいずれかの位置に置くことができる。官能基は同一であるかまたは異なる基の組合せであることができる。誘導体それ自体並びに官能基の中で特に好ましいのは、Ｎ，Ｓ，ＯもしくはＰ原子を含むもの、酸もしくは類似体、ヒドロキシ、エーテルまたはエステル基である。ナノ粒子の正確な組成は適応の必要条件に依存する。ターゲットポリマーは個々の物質であるかまたはターゲットポリマーの任意の組合せ、例えば合成と非合成、低分子量と高分子量、誘導体と非誘導体の組合せであることができる。製造の１つの変形は、合成ポリマーおよびターゲットポリマーとして同一のポリマーを使用することである。合成後に存在する合成ポリマーは、既に記載したように、もはや合成に使ったポリマーと同一でないだろうから、これはターゲットポリマーが合成に使ったポリマーと同じであることを意味する。ターゲットポリマーは言及した合成ポリマーと同じであるけれども、それは合成中に起こる厳しい苛酷な条件に暴露されなかったので、それの「生理的」状態を維持している。最終的なナノ粒子溶液中のターゲットポリマーの量は、広範囲に渡り異なることができる。一般に、それらは含まれる金属イオンの総重量の0.5〜50倍に及ぶことができる。しかしながら、その重量の１〜約25倍が好ましい量である。吸着媒介物質／促進物質は、鉄含有コアの表面または鉄含有コアと一次被膜の表面によるターゲットポリマーまたはターゲットポリマーの混合物の吸着を改善または促進するあらゆる物質である。一般に、吸着媒介物質／促進物質は二価性を有していなければならない：即ち、１つの分子部分が基本構造単位に対する親和性を有する一方で、もう１つの分子部分（これは最初の機能部分と同じであってもよい）がターゲティング分子に対する親和性を生じる。適当な物質は、２つの官能基を有する物質、または疎水性と親水性の分子部分を有する物質である。鉄コアに対してまたは鉄コア＋一次被膜に対して親和性を有するペプチドは好ましい吸着媒介物質／促進物質である。そのようなペプチドは、最新の生化学法を使ってペプチドライブラリーから選択することができる。好ましいのは、分子中にRRTVKHHVNもしくはRRSRHHもしくはRSKRGR配列またはそれの一部分を含むペプチドである〔アミノ酸の一文字記号；例えばStryer，Biochemistry，Free man and Corp.，New York，1988を参照のこと〕。吸着媒介物質／促進物質としてペプチドを使う別の利点は、親和性に必要でない分子部分を所望により１または複数のターゲットポリマーと共有結合させることができることである。これは、ターゲットポリマーへの親和性を随意的性質にする。吸着媒介物質に要求される量は、使用する物質（吸着媒介の強さ）および１または複数のターゲットポリマーの性質に依存する；総量はコア中に含まれる金属イオンの総重量より少ないかまたはそれに等しい。ナノ粒子溶液中に含めることができる薬剤添加剤または補助剤は、それらの機能に従って次の５種類に分けることができる：保存剤、ｐＨ安定剤、酸化防止剤、等張化添加剤、解膠剤および可溶化剤。他の補助剤、例えば糖溶液、血漿増量剤、電解質溶液、生理的食塩水または注射用蒸留水、並びに非経口投与用の油状「溶剤」も、医学的に許容される溶剤である。ナノ粒子溶液中に含めることができる薬剤または薬物の例は、次のような群に分けることができる：抗アレルギー剤、抗アナフィラキシーまたは予防剤、血管拡張剤または血管収縮剤、血流に作用する物質、ナノ粒子の薬物動態学に作用する物質、鉄バランスを変える物質、酵素誘導物質または酵素阻害剤の群からの物質、または一般的な媒介物質および媒介抑制物質。治療用の薬用物質の中で特に着目されるのは、細胞増殖抑制剤、化学療法剤、ホルモンおよび抗糖尿病剤である。薬剤および薬物は、任意成分としてナノ粒子溶液に添加することができ、またはターゲットポリマーに結合させることができ、次いでポリマーと薬用物質の接合体をターゲットポリマーとして使うことができる。ナノ粒子の「生理学的」分布は、血流、リンパ流およびリンパ産生などといった「生理学的」要因に影響を及ぼす薬剤によってのみ変更できるわけではない。生体内分布は単純な物理療法手段によって変更することもできる。散歩するかまたはエルゴメーターを練習することにより直接「施行する」ことができる運動、およびそれの相対物としての、例えば入院患者および／または麻酔の適用などに見られるような静止は、完全に異なる分布の様子とパターンをもたらす。更に、赤外光の簡易使用、または全身もしくは部分入浴によって達成することができる熱処置（heat input）もここで言及しておくべきである。補助的腫瘍治療を目的とした熱処置のために多くの診療所で使われているような高体温設備は特に好ましい。意図的な局所加熱は、付随する物理療法手段の「選択性」を向上させる。モジュール製法設計に大きな融通性があることは、ターゲットポリマー、吸着媒介物質、薬剤補助剤および薬剤の自由な組合せ、並びに物理療法と併用した様々なナノ粒子組成物の適用を可能にする。ナノ粒子または溶液は多数の異なる成分から構成することが可能なため、特定の用途に依存する正確な組成については一般的な記述しかできない。全ての添加剤を含むナノ粒子の全径（動的レーザー光散乱、ＤＬＳにより測定）は鉄含有コアの直径（透過型電子顕微鏡検査、ＴＥＭを使って測定）の10倍以下である。基本構造単位（コア＋一次被膜）の直径がターゲットポリマーまたはターゲットポリマーの組合せ＋任意の補助剤によって少しだけ増加されるのが好ましい。ＤＬＳにより測定された直径は、基本構造単位の直径を最大で20％だけ上回ることができる。高い生物学的特異性と高い物理的性質（粒度、磁性）を必要とする用途に適当である今までにない融通性と品質を有するナノ粒子は、基本構造単位の最適な物理的性質を多数の可能なターゲットポリマーと組み合わせることにより、製造することができる。モジュール設計と多数の組合せにより、広範囲の可能性ある用途が生まれる。ナノ粒子は、高い物理的性質とターゲットポリマー（二次被膜）の柔軟な調整（モジュール設計）による優れた標的指向性とを合わせ持つので、それらは多数の特殊な適用、例えば静脈または局所的投与後のＭＲリンパ管造影法、腫瘍の視覚化、機能または機能不全の視覚化、プラーク（アテローム硬化症の画像診断）、血栓および血管閉塞の視覚化、ＭＲ血管造影法、灌流の画像診断、梗塞の視覚化、内皮損傷の視覚化、受容体の画像診断、血液脳関門の視覚化などに、並びに鑑別診断、特に腫瘍／過形成組織からの転移を区別するために、利用することができる。該粒子は、それらの並外れた製造融通性のため、大部分の多様な試験管内診断法にも適当である。例えば、それらはＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）の磁気分離検査法において使われる特異的担体として利用することができる。血液からの特定の因子の選択的枯渇（血液の生体外解毒）は、試験管内法と治療法の組合せである。本発明のナノ粒子は固有の内部着色を示す。リンパ節中に特に高い濃度を生じるターゲットポリマーと組み合わせると、それらの粒子はリンパ節染色のための手術中（intraoperative）の標識物質として非常に適する。リンパ節はしばしば腫瘍と一緒に手術により除去されるので、ナノ粒子の事前投与は、手術する外科医がそれらの節をずっと容易に同定できるようにする。ナノ粒子はこの目的で特に広い時間枠を有するので、手術の約60分前から24時間以上前まで適用することができる。リンパ節の視覚化の他に、腫瘍内適用または腫瘍周囲への適用は腫瘍周囲の染色を促進し、それが周辺組織と腫瘍の区別を改善する。その上、腫瘍領域中の粒子は、腫瘍細胞が転移によって広がるであろう同一リンパ管によって運び去られる。かくして、該粒子は転移の広がりに好まれるリンパ管またはリンパ節を染色する。静脈内に投与される造影剤としてのそれらの利用に加えて、該粒子は局所的に適用することができる。局所適用は限定された領域だけが視覚化さればよく、また、局所投与は身体の停止を伴うことなく標的領域中の造影剤の高濃度を促進するので、例えば乳癌の場合に有利であるかもしれない。あるリンパ節の周りの間隙組織への意図的な間接適用は、静脈内投与による結果が疑惑を生んだ診断を裏付けるために必要とされることがある。ナノ粒子の別の応用分野は、磁化または磁場／束密度を測定する高感度測定方法（SQUID）に基づいた生体内診断における強化剤としてのそれらの利用である。この分野における高感度測定方法の開発は、シンチグラフィーにおいて使われる放射性物質と同様な磁性粒子を、機能不全および病変の診断に使うことができるように、磁性粒子の生体内追跡を容易にした。該粒子は、治療学の分野において薬用物質のための賦形剤として利用することができる。ナノ粒子の特異性が作用部位への薬用物質の輸送に使われる。薬用物質は、鉄含有コアに混和させるかまたは合成ポリマーおよび／またはターゲットポリマーに化学的に結合させることができる。ポリマーと薬用物質の接合体の吸着、または吸着媒介物質／促進物質への薬用物質の結合は、別の方法と見なすことができる。例えば、酸化鉄表面に対して高い親和性を示す特定のペプチド配列を製造することができる。可能な適用は、例えば、ＲＥＳ細胞中に存続する微生物に関係する多くの病気に対して、治療上必要とされるような食細胞中への低分子量化学療法剤の高濃度蓄積である。どんな治療アプローチでも、外部磁場を使ってナノ粒子と薬用物質の系をそれらの標的領域に選択的に蓄積させることができる。非常に特別な問題を処理するためには、標的領域、例えば腫瘍領域における局所制御のために小さな磁石を埋め込むことも随意である。特定の組織に薬用物質を意図的に輸送するための賦形剤としてナノ粒子を使うこと以外に、活性物質の改変された放出によって特徴づけられる薬剤の形態（剤形）を製造することができる。活性物質の放出は、生物学的に分解性の接合体を使って、または異なる生物分解性を有するナノ粒子の種々の成分の中に薬用物質を挿入することにより、制御することができる。可能な適用は、ホルモンを投与するための貯蔵所としてのナノ粒子の使用である。ナノ粒子の磁性が外側から操作することもできる「磁気スイッチ」によって薬用物質の放出を誘導しそして制御するという、新規治療方法においてナノ粒子を使用することも考えられる。重要な応用分野は、膵性糖尿病の治療における抗糖尿病剤の制御放出のための治療方法の開発である。ナノ粒子による作用部位への直接輸送に適当な薬用物質は、まず第一に、化学療法剤と細胞増殖抑制剤である。また、抗微生物療法はしばしば作用部位への薬用物質の意図的な輸送を必要とする（例えば、マクロファージ中に存続する微生物により生じる結核）。ナノ粒子の磁性による放出に適当である薬用物質は、特に、抗微生物剤、ホルモン、抗糖尿病剤、細胞増殖抑制剤、および化学療法剤である。ナノ粒子は、それらの間接療法利用に加えて薬用物質それ自体として、例えば高体温もしくはMossbauer核吸収療法において、またはホウ素もしくはガドリニウムが適切に添加されるならば、中性子捕獲療法において、吸収剤として使用することができる。別の適用は、それらのコア中かまたは同位体を有する適当な分子を吸着する基本構造単位により、ナノ粒子に放射性元素が添加される医用放射線療法である。放射線療法におけるナノ粒子の好ましい適用は、例えば、ナノ粒子が放射性⁵⁵ Fe同位体からの「自己輻射体（オートラジエーター）」を含むもの、またはナノ粒子が外部「活性化」により放射性同位体となるように誘導することができる同位体を含むものである。例えば、前記コアは中性子により外部活性化される¹⁵⁷Gdを含むことができる。放射線療法におけるナノ粒子の別の適用は、それらのコア、合成ポリマーもしくはターゲットポリマーまたは吸着媒介物質が¹²³Ｉまたは¹²⁵Ｉのような自己輻射体を含むように変更することができるという事実からくる。あるいは、ナノ粒子は外部衝撃により放射性同位体に変換される同位体を含んでもよい。一例は、ヨウ素を使ったターゲットポリマーの標識とＸ線照射を使ったヨウ素−Ｋ吸収端の外部活性化である。本発明のナノ粒子は、管腔から細菌、ウイルス、内毒素および外毒素を除去するためにも用いることができ、不活性化はナノ粒子それ自体との相互作用によるか、または接合体／吸着体を同定するためのＲＥＳとの相互作用とその後の細胞内不活性化によりもたらされる。本発明を次の実施例と添付図面の図１〜35に基づいて更に詳細に説明することにする。図１：鉄含有コア、一次被膜（合成ポリマー）および二次被膜（ターゲットポリマー）を有するナノ粒子の断面構造。図２：本発明のナノ粒子の合成を示す概略図。図３：モノカルボキシデキストランおよびそれの親化合物であるデキストラン４のFTIRスペクトル。図４：ポリカルボキシデキストランおよびそれの親化合物であるデキストランＴ10と６−ブロモヘキサン酸のFTIRスペクトル。図５：ラットのアガロース包埋リンパ節のＭＲ断層Ｘ線写真。図６：ラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度の量的評価（図５から）。図７：ラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度の量的評価（図５から）。図８：プロトン密度強調スピンエコー系列（SE 2000/15）でのウサギの骨盤領域の造影前および後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。図９：プロトン密度強調スピンエコー系列（SE 2000/15）でのウサギの骨盤領域の造影前および後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。図10：24 h p.i．のウサギの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図11：Ｔ２^*強調グラジエントエコー系列（GE 135/15/15°）でのウサギの骨盤領域の造影前および後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。図12：Ｔ２^*強調グラジエントエコー系列（GE 135/15/15°）でのウサギの骨盤領域の造影前および後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。図13：修飾されたバッチ対元の物質の、24 h p.i．のウサギの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での信号強度。図14：ウサギのアガロース包埋リンパ節の生体外ＭＲ断層Ｘ線写真（GE系列）。図15：24 h p.i．のウサギの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。図16：ナノ粒子の注入の24時間後に適用した用量の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図17：ナノ粒子の注入の24時間後のラットの様々なリンパ節における用量の関数としてのGE 135/15/15°での相対信号強度。図18：（基準物質）適用後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図19：特異的ナノ粒子の適用後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図20：（基準物質）適用後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。図21：特異的ナノ粒子の適用後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。図22：熱の適用により引き起こされるリンパ節中への蓄積の効果。図23：実施例Ｄ２に記載の特異的ナノ粒子のボーラス注射（用量：20μモルの Fe／kg）後のＴ１強調ＳＥ系列（TR: 200ms，TE: 10ms）を使ったラット腹部の横断像動態検査。図24：実施例Ｄ２に記載の特異的ナノ粒子と実施例Ｃ２に記載の非特異的基準物質についての静脈血管と肝臓実質中のSE TR/TE 200ms/10msでの相対信号強度の比較。図25：実施例Ｄ２に記載の特異的ナノ粒子と基準物質Ｃ２についての3D FLASH 断層Ｘ線写真（TR: 40ms，TE: 6ms，FA: 60°）の結腸ＭＩＰ（最大値投影法）。図26：リンパ節の可視検出のための「内部（intraoperative）」標識物質としての本発明のナノ粒子（概略図）。図27：リンパ節の可視検出のための「内部（intraoperative）」標識物質としての本発明のナノ粒子（詳細図）。図28：ウサギにおける転移性リンパ節の目視検出によるリンパ節の転移の証明。図29：非特異的基準物質（トランスフェリンを含まないナノ粒子）と比較した特異的ナノ粒子（トランスフェリンを有する）の細胞断層Ｘ線写真。図30：修飾物質Ｄ７（用量：200μモルのFe／kg；注入の５ｈ後に動脈切除）を使ったウサギの大動脈のアテローム硬化斑の生体外ＭＲ断層Ｘ線写真。図31：プルシアンブルー染色を使ったウサギの大動脈のアテローム硬化膜における鉄の組織学的検出。図32：ワタナベウサギの大動脈中に蓄積された実施例Ｅ６に記載のナノ粒子の組織化学的検出（プルシアンブルー染色）。図33：実施例Ｄ２に記載のナノ粒子（200μモルのFe／kg）のボーラス注射後の腫瘍の信号の動きの横断Ｔ１強調スピンエコー動態検査（TR: 300ms，TE: 15m s）。図34：腫瘍中の相対信号強度（蓄積）の曲線。図35：実施例Ｄ２に記載のナノ粒子（200μモルのFe／kg）の適用後の時間依存性横断プロトン密度強調（SE 2000/15）断層Ｘ線写真。実施例製造および適用例Ａ：合成ポリマーの製造Ａ１（モノ）カルボキシデキストラン（ＣＤｘ）の合成 100gのデキストラン４（Serva，ドイツ）を500mlの水に溶かし、60℃に加熱する。攪拌しながら、約55mlの約10Ｎの水酸化ナトリウム溶液を加える。この溶液を５時間の反応時間の後にpH8に（部分）中和する。次いで褐色溶液を混合床イオン交換体（Amberlite IRA-400とIR-120）上で精製する。酸性性質を有する画分をプールし、40℃においてロータリーエバポレーター中で減圧濃縮する。次いでそれらを凍結乾燥する。修飾デキストラン（＝カルボキシデキストラン）のFTIRスペクトル（臭化カリウム法）は図３に示される。Ａ２ポリカルボキシデキストラン（Ｐ−ＣＤｘ）の合成 250mlの二口フラスコに10gのデキストランＴ10（Pharmacia，ドイツ）を秤量し、100mlの4N NaOHと混合する。そのフラスコの一方の口に還流冷却器を取りつけ、溶液を約80℃に加熱する。一定に攪拌しながら（磁気攪拌機）、もう一方の口から30gの６−ブロモヘキサン酸（Aldrich，ドイツ）を添加する。物質を添加した後に口に栓をし、反応混合物を更に３時間攪拌する。反応後、バッチをヒュームフードの下で6N HClを使って中和し、次いでロータリーフィルムエバポレーター（60℃，真空）を使った予備濃縮により減量する。エタノールを使った沈澱により、変換しなかった反応体の分離または修飾カルボキシデキストランの浄化を実施する。白色沈澱を洗浄し、再蒸留水中に再溶解し、そして最後に0.22μm のフィルター（Schleicher and Schull，ドイツ）を通して濾過し、凍結乾燥する。ポリカルボキシデキストランのFTIRスペクトルは図４に示される（添付書類を参照のこと）。Ｂ：粗製物質の製造Ｂ１アンモニアガスを使ったＣＤｘからの製造約2,000Daの分子量を有する5.0ｇのモノカルボキシデキストラン（ＣＤｘ，実施例Ａ１）を17.5mlの再蒸留水に溶かす。この溶液を窒素の吹き込みにより脱気する。１モルの塩化鉄（III）六水和物溶液6.7mlを試験管中に調製し、窒素を使って脱気する。648mgの塩化鉄（II）四水和物を鉄（III）溶液に加え、窒素流の中で溶解させる。ポリマー溶液を約75℃に加熱し、そこに前記鉄溶液を添加する（窒素ガスに暴露しながら）。徹底的に攪拌しながら、ガスボンベからのアンモニアの急速導入により、加熱した反応混合物をアルカリ性に調整する。次いで反応液を約１時間還流させる。次いで変換しなかったアンモニアを蒸発させるために開放したフラスコ中でそれを更に10分間加熱する。冷却した後、2500gで30分間遠心し、ロータリーエバポレーターを使って濾液を蒸発させて約７mlに濃縮する；ｐＨ値をチェックし、必要ならば中和する。濃度を測定した後、溶液を再蒸留水により約１モルの鉄濃度に調整し、次いで0.22μmフィルターを使って濾過する。該溶液をオートクレーブ中で滅菌することができる（方法Ａ121）。注釈１〜３：血中半減期の測定・血液からのクリアランスの半減期ヘパリン加食塩水（0.2ml）を充填した長さ50.5cmのカテーテルを、エーテル麻酔した実験動物（ラット、約200ｇ）の総頸動脈に挿入し、心臓の方に約1.5cm 押し進める。カテーテルの自由端を外に引き出し、ヒストアクリレートで固定する。術後約１時間目に尾静脈を通して試験物質をi.v.投与する（約１ml／分）。動物が目覚めた時、予測した排除速度に従って様々な時点で血液試料を採取する。試験の終わりに、大静脈からの出血によりエーテル麻酔下で動物を殺す。・Ｔ₁およびＴ₂効果の半減期血液試料を2900rpm（1000g）で15分間遠心する。上澄液0.250mlを抜き取る。この試料を再蒸留水で2.0mlに増やし、次いで混合物を40℃でサーモスタット（自動温度調節）する。 pc120緩和測定器（Bruker，ドイツ）を使ってＴ₁およびＴ₂緩和時間を測定することにより、血液濃度の減少を測定する。測定は180°−90°−IR（反転回復）系列（Ｔ₁）またはCPMG系列（Ｔ₂）のいずれかを使って行った。結果を薬物動態二区画モデルに基づいて分析する。Ｔ₁およびＴ₂時間の逆数（緩和速度）−ブランク読みの形での時間に対して濃度をプロットすることにより、TOPFIT薬物動態コンピュータープログラムを使ってデータを計算する。TOPFIT はまず、「濃度」と時間の浮遊点表記法からの線形回帰により直線の傾きを算出し、次いで得られた値から有効半減期を算出する。・鉄分に関する半減期緩和時間の測定に使った溶液800μｌをピペットで取り出し、濃硝酸で溶解させ、再蒸留水を使って10.0mlに増やす。次いで原子吸光分析（ＡＥＳ）を使って鉄分を定量する。その結果を血液濃度に換算し、そして希釈率を考慮に入れながら、TOPFITを使った濃度−時間図により分析する。Ｂ２ NaOHとクエン酸鉄（III）とグルコン酸鉄（II）を使ったＰ−ＣＤｘの製造約12,000Daの分子量を有する5.0gのポリカルボキシデキストラン（実施例Ａ２）を17.5mlの再蒸留水に溶かす。この溶液を窒素の吹き込みにより脱気する。試験管に１モルのクエン酸鉄（III）一水和物溶液6.7mlを調製し、窒素を使って脱気する。この鉄（III）溶液に1.635gのグルコン酸鉄（II）三水和物を添加し、窒素流の中で溶解させる。前記ポリマー溶液を約75℃に加熱し、そこに前記鉄溶液を加える（窒素ガスに暴露しながら）。徹底的に攪拌しながら、加熱した反応混合物に約12mlの３Ｎ水酸化ナトリウム溶液を30秒以内で添加する。次いで約６Ｎの塩酸を使って反応液を中和し、約１時間還流させる。次いで変換しなかったアンモニアを蒸発させるために開放したフラスコ中でそれを更に10分間加熱する。冷却した後、2500gで30分間遠心し、ロータリーエバポレーターを使って濾液を蒸発させて約７mlに濃縮する；ｐＨ値をチェックし、必要ならば中和する。濃度を測定した後、再蒸留水により溶液を約１モルの鉄濃度に調整し、次いで0.22μmフィルターを使って濾過する。該溶液をオートクレーブ中で滅菌することができる（方法Ａ121）。Ｂ３鉄（III）ＮＴＡと水酸化アンモニウムとＣＤｘからの製造約2,000Daの分子量を有する5.0gのモノカルボキシデキストラン（ＣＤｘ，実施例Ａ１）を35mlの再蒸留水に溶かす。この溶液を窒素の吹き込みにより脱気する。加熱しながら且つ徹底的に攪拌しながら、ｐＨ値が11になるまで反応混合物に濃水酸化アンモニウム溶液（32％）を添加する。試験管中に１モルの鉄（III）溶液6.85mlを調製し、等モル量のＮＴＡと混合し、そして窒素を使って脱気する。この鉄（III）溶液に667mgの塩化鉄（II）四水和物を添加し、窒素流の中で溶解させる。この鉄溶液をアルカリ性ポリマー溶液に20秒以内で添加する。次いで約６Ｎの塩酸を使って反応液を中和し、約１時間還流させる。冷却した後、2500gで30分間遠心し、ロータリーエバポレーターを使って濾液を蒸発させて約６mlに濃縮し、pH値を測定する。濃度を測定した後、再蒸留水を使って該溶液を約１モルの鉄濃度に調整し、次いで0.22μmフィルターを使って濾過する。該溶液をオートクレーブ中で滅菌することができる（方法Ａ121）。Ｂ４鉄（III）と還元剤水酸化ナトリウムを使ったＰ−ＣＤｘからの製造約12,000Daの分子量を有する5.0gのポリカルボキシデキストラン（実施例Ａ２）を17.5mlの再蒸留水に溶かす。この溶液を窒素の吹き込みにより脱気する。このポリマー溶液に１モルの塩化鉄（ III）六水和物溶液10mlを添加し、次いで窒素を使った脱気を続ける。ポリマー溶液を約75℃に加熱し、窒素ガス下で113.6mgのヒドロキシルアミンHClを添加する。徹底的に攪拌しながら、加熱した反応混合物に約12mlの３Ｎ水酸化ナトリウム溶液を30秒以内で添加する。次いで約６Ｎの塩酸を使って反応液を中和し、約１時間還流させる。冷却した後、2500gで30分間遠心し、ロータリーエバポレーターを使って濾液を蒸発させて約７mlに濃縮し、ｐＨ値を確認する。濃度を測定した後、再蒸留水を使って該溶液を約１モルの鉄濃度に調整し、次いで0.22μm フィルターを使って濾過する。該溶液をオートクレーブ中で滅菌することができる（方法Ａ121）。Ｂ５デキストラン４とデキストラン15の混合物を使った製造それぞれ約4,000-6,000Daと15,000-20,000Daの分子量を有するデキストラン４とデキストラン15（共にServa，ドイツ）の１：１混合物5.0gを20mlの再蒸留水に溶かす。３Ｎ水酸化ナトリウム溶液を使って無色ポリマー溶液を約12のｐＨ値に調整し、１時間還流し、そして約６Ｎの塩酸を使って中和する。生成した黒っぽい赤褐色溶液を窒素の吹き込みにより脱気する。試験管中に１モルの塩化鉄（III）六水和物溶液6.7ml を調製し、次いで窒素を使って脱気する。この鉄（III）溶液に648mgの塩化鉄（ II）四水和物を加え、窒素流の中で溶解させる。前記ポリマー溶液を約75℃に加熱し、そこに鉄溶液を加える（窒素ガスに暴露しながら）。徹底的に攪拌しながら、加熱した反応混合物に約11.5mlの３Ｎ水酸化ナトリウム溶液を30秒以内で添加する。次いで反応液を約１時間還流させる。冷却した後、2500gで30分間遠心し、ロータリーエバポレーターを使って濾液を蒸発させて約８mlに濃縮し、ｐＨ値を確認する。濃度を測定した後、再蒸留水を使って該溶液を約１モルの鉄濃度に調整し、次いで0.22μmフィルターを使って濾過する。方法Ａ121に従って該溶液をオートクレーブ中で滅菌することができる。Ｃ：基準物質の製造Ｃ１：水に対する透析実施例Ｂ１の溶液５mlをVisking透析チューブ（Serva，ドイツ）に詰め、そして１ｌの新鮮な再蒸留水に対して各回６時間ずつ５回透析する。保持物を再蒸留水での希釈により200ミリモル／ｌの鉄濃度に調整し、５mlずつ0.22μmフィルター（酢酸セルロース、“Rotrand”，Schleicher & Schull社製，ドイツ）を通して無菌の10mlバイアル中に充填する。この脱着溶液はオートクレーブ滅菌することができる。Ｃ２：20mMクエン酸ナトリウムに対する透析実施例Ｂ１の溶液５mlをVisking透析チューブに詰め、そして１ｌの新鮮な乳酸ナトリウム溶液（20ミリモル／ｌ，pH7）に対して各回６時間ずつ５回透析する。１ｌの新鮮な再蒸留水に対して各回５時間ずつ２回透析を繰り返す。保持物を再蒸留水での希釈により200ミリモル／ｌの鉄濃度に調整し、５mlずつ0.22μm フィルターを通して無菌の10mlバイアル中に充填する。Ｃ３：Amiconを使った限外濾過実施例Ｂ１の溶液５mlを調製用限外濾過装置（Centriprep 100，カットオフ10 0kDa，Amicon社製，ドイツ）にピペットで取り、再蒸留水で15ml標線まで増量し、そして1000gで１時間限外濾過する。次いで濾液を捨て、保持物の中身を新鮮な再蒸留水で15ml標線まで増量し、再度限外濾過する。この手順を２回繰り返す。保持物を再蒸留水での希釈により200ミリモル／ｌの鉄濃度に調整し、５mlずつ0.22μmフィルター（酢酸セルロース）を通して無菌の10mlバイアル中に充填する。Ｃ４：クロマトグラフィー分離実施例Ｂ１の溶液５mlをS400HR Sephacrylカラム（100×５cm）上の10mlのSuperloop（Pharmacia社製）に充填し、そして300ml／時の流速で50m M クエン酸／250mMマンニットを使って溶出させる。450ml〜840mlの画分を収集し、60℃でロータリーエバポレーターを使って約50mlに減圧濃縮する。この濃縮物を再蒸留水に対して６時間ずつ３回透析し、ロータリーエバポレーター中で再び濃縮し、そして鉄分の測定後、200ミリモル／ｌの鉄濃度に調整する。この溶液を５mlずつ0.22μmの酢酸セルロースフィルターを通して無菌の10mlバイアル中に充填する。この脱着溶液はオートクレーブ滅菌することができる。磁性とサイズパラメーターに関する物理化学データは、親化合物（実施例Ｂ１）の値と一致する。Ｄ：適用溶液Ｄ１：デキストランＴ10 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのデキストランＴ10 33.6mgを6.0mlの蒸留水に溶かし、この溶液5.0ml を無菌条件下でフィルター（0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷鉄重量の商は１である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝28mg）。この調製物は、静脈内ＭＲリンパ管造影法における適用に直ちに使用できる10 0ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｄ２：デキストランＦＰ１：２溶液からの製造 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのデキストランＦＰ１ 302.4mgを6.0mlの蒸留水に溶かし、この溶液5.0mlを無菌条件下でフィルター（ 0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷鉄重量の商は５である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝252mg）。この調製物は、静脈内ＭＲリンパ管造影法における適用に直ちに使用できる10 0ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｄ３：凍結乾燥物としてのデキストランＦＰ１ 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのデキストランＦＰ１ 302.4mgを6.0mlの蒸留水に溶かし、この溶液5.0mlを無菌条件下でフィルター（ 0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷鉄重量の商は５である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝252mg）。この溶液を注入瓶の中で凍結乾燥し、瓶に蓋をする。適用溶液は10mlの生理的食塩水を加えることによって調製される。この瓶は、静脈内ＭＲリンパ管造影法における適用に直ちに使用できる100ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｄ４：デキストランＦＰ１５mlの注入瓶にターゲットポリマーとしてのデキストランＦＰ１を252mg秤量し、200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を添加し、そして瓶に蓋をする。注入瓶を反転させることによりデキストランＦＰ１を溶解させる。ポリマー重量÷鉄重量の商は５である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝252mg）。この調製物は、静脈内ＭＲリンパ管造影法における適用に直ちに使用できる20 0ミリモル（鉄）溶液５mlを含む。Ｄ５：ラミナリン 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのラミナリン33.6mgを 6.0mlの蒸留水に溶かし、この溶液5.0mlを無菌条件下でフィルター（0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷鉄重量の商は１である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝28mg）。この調製物は、静脈内ＭＲリンパ管造影法における適用に直ちに使用できる10 0ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｄ６：トランスフェリン 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのヒトFe₂トランスフェリン33.6mgを6.0mlの蒸留水に溶かし、この溶液の5.0mlを無菌条件下でフィルター（0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷ 鉄重量の商は１である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝28mg）。この調製物は、増殖している細胞（腫瘍）を視覚化するための特異的造影剤としての適用に適する100ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｄ７：エンドセリン作用剤 200ミリモルFe／ｌの濃度の実施例Ｃ１の溶液5.0ml（全鉄分56mgに相当する）を10mlバイアル中に調製する。ターゲットポリマーとしてのエンドセリン受容体特異的ヘプタペプチド〔cys-his-leu-asp-ile-ile-trp〕33.6mgを6.0mlの再蒸留水に溶かし、それの5.0mlを無菌条件下でフィルター（0.22μｍ）付の注射器を使って前記酸化鉄溶液に加える。ポリマー重量÷鉄重量の商は１である（残留合成ポリマー＝28mg＋ターゲットポリマー＝28mg）。この調製物は、ＭＲプラーク画像診断（アテローム硬化症画像診断）における適用に適する100ミリモル（鉄）溶液10mlを含む。Ｅ：適用適用例Ｅ１・ラットにおけるＭＲリンパ管造影法目的：ラットの様々なリンパ節／リンパ節群における親化合物（合成ポリマー＝標的用ポリマー）と脱着−吸着法に従って製造した修飾物質（合成ポリマー≠標的用ポリマー）との相対信号強度の比較。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ５）；比較＝実施例Ｃ１の基本構造単位（＝ターゲットポリマーを含まないＤ５）用量：100μモルFe／kg体重時：24 h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：装置：Siemens Magnetom 1.5 T MR 先端コイルを有する全身用ＭＲスキャナーＭＲパラメーター：撮像視野（ＦＯＶ）＝150mm、マトリックス＝256×256；スライス厚＝３mm；切断方向＝正面系列１：ＴＲ＝2000msおよびＴＥ＝15msでのプロトン密度強調スピンエコー系列（ＳＥ）系列２：ＴＲ＝135msおよびＴＥ＝15ms，ＦＡ＝15°でのＴ２強調グラジエントエコー系列（ＧＥ）生体外モデル：・ラットとウサギのリンパ節中への蓄積生体外寒天ファントムを使って様々なリンパ節／リンパ節群中への物質の蓄積および分布を調べた。この生体外モデルは、様々な中枢および末梢のリンパ節またはリンパ節群への蓄積を小型の実験動物（マウス、ラット、ウサギ）についても評価することができるという利点を有する。それは分布の均一性についての結論を引き出すことも可能にし；信号の減衰も定量することができる。ナノ粒子溶液を尾静脈（マウス、ラット）または耳静脈（ウサギ）から実験動物に（ボーラス）注射する。24時間後に動物を犠牲にし、様々なリンパ節またはリンパ節群（膝窩、腸骨、腋窩、下顎骨、鼠径リンパ節）を調製する。次いでリンパ節を寒天ファントム中に置き、ＭＲ測定を行うまで冷凍保存する（最大２４時間）。・生体外寒天ファントムの製造 10gの微生物学用寒天を、ＭＲ断層Ｘ線写真の均一な信号バックグラウンドのために0.5mlのマグネビスト（0.5モル／ｌのガドリニウムDTPAジメグルミン）が添加されている500mlの再蒸留水に懸濁する。この懸濁液を煮沸し、80℃まで冷却し、そしてこの温度を維持する。寒天溶液の約半分をプラスチック皿に注ぎ、 0.5〜１cmの厚さを有する層を作る。この溶液を放冷した後、寒天層の上に標本を並べ（体の左／右半分に従って、または上から下への「生理学的順序」で）、少量の寒天溶液（パスツールピペット）を使って固定する。最後に、寒天溶液の第２層を組織試料の上に注ぐ。24時間以内にファントムを測定し、測定を行うまでは冷凍保存しておく。ナノ粒子を注射しなかった動物を参照のために一緒に調査しそして同様に組織を調製するか、またはそれぞれのファントムを製造する。目視検査の他に、個々の組織における相対信号の減衰を次の式に従って量化する：測定後、寒天溶液から組織試料を注意深く取り出し、濃塩酸中で分解し、そしてICP AES（ＩＣＰ原子吸光分析）を使ってそれらの鉄分を定量する。ナノ粒子を適用せずに普通に処理した対照動物からブランク値（造影剤なし）を決定し、試料の鉄分を測定する時にそれを考慮に入れる。結果：図５：ラットのアガロース包埋リンパ節のＭＲ断層Ｘ線写真。切除は基準物質（実施例Ｃ２，左側）または実施例Ｄ２の修飾物質（右側）；各場合、100μモルのFe／kgの用量の投与後24時間目に行った。図６：修飾電荷物質対元の物質：磁鉄鉱（100μモルのFe／ｌ）の投与後24時間目のラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度の定量的評価（図５から）。図７：修飾電荷物質対元の物質：磁鉄鉱（100μモルのFe／ｌ）の投与後24時間目のラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度の定量的評価（図５から）。特異的ナノ粒子の相対的リンパ節信号強度（図６＝ＳＥ；図７＝ＧＥ）を使った干渉分析は、修飾物質が元の物質よりもリンパ節中に均一に蓄積されることを明白に証明する。デキストランＦＰ１の二次被膜を有する修飾物質によって引き起こされる下顎骨、腋窩、腸骨および膝窩リンパ節のリンパ節信号低下並びにリンパ節群全てに及ぶ平均的蓄積は、未修飾の元の物質のものとは有意に異なる（ｔ検定、ｐ＜0.05）（図６および７）。特異的ナノ粒子の優越性は、図５の個々のリンパ節の「黒色化」を見れば印象的に証明される。検査した全てのリンパ節の全体にわたる均一な分布が特に顕著である。適用例Ｅ２・ウサギにおけるＭＲリンパ管造影法目的：ウサギの様々なリンパ節／リンパ節群における親化合物（合成ポリマー＝標的用ポリマー）と脱着−吸着法に従って製造した修飾物質（合成ポリマー≠標的用ポリマー）との相対信号強度の比較。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）；比較＝実施例Ｃ２の基本構造単位（＝ターゲットポリマーを含まないＤ２）用量：150μモルFe／kg体重時：24 h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：ＭＲ断層撮影法（ＳＥおよびＧＥ法）（適用例Ｅ１を参照のこと）生体内モデル：誘発リンパ節増殖症を有するウサギ生体外モデル：アガロースファントム結果：図８：プロトン密度強調スピンエコー系列（SE 2000/15）におけるウサギの骨盤領域の造影前および造影後のＭＲ断層Ｘ線写真。〔左：造影前；右：特異的物質Ｄ２（150μモルFe／kg）〕。図９：プロトン密度強調スピンエコー系列（SE 2000/15）におけるウサギの骨盤領域の造影前および造影後のＭＲ断層Ｘ線写真。〔左：造影前；右：親化合物Ｃ２（150μモルFe／kg）〕。図10：特異的ナノ粒子対非特異的ナノ粒子： 24 h p.i．（150μモルのFe／kg，ｎ＝３）のウサギの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。（図８と９に従った定量的評価）。図11：Ｔ２^*強調グラジエントエコー系列（GE 135/15/15°）におけるウサギの骨盤領域の造影前および造影後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。〔左：造影前；右：特異的物質Ｄ２（150μモルFe／kg）〕。図12：Ｔ２^*強調グラジエントエコー系列（GE 135/15/15°）におけるウサギの骨盤領域の造影前および造影後の正面ＭＲ断層Ｘ線写真。〔左：造影前；右：親化合物Ｃ２（150μモルFe／kg）〕。図13：特異的ナノ粒子対非特異的ナノ粒子：24 h p.i．（150μモルのFe／kg ，ｎ＝３）のウサギの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。（図11と12に従った定量的評価）。図14：ウサギのアガロース包埋リンパ節の生体外ＭＲ断層Ｘ線写真（ＧＥ系列）；用量：150μモルのFe/kg；左：非特異的基準粒子；右：特異的ナノ粒子。図15：特異的ナノ粒子対非特異的ナノ粒子： 24 h p.i．（150μモルのFe／kg，ｎ＝３）のウサギの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。特異的ナノ粒子のリンパ節相対信号強度（図８，９＝ＳＥ；図11，12＝ＧＥ）を使った干渉分析は、修飾された物質が元の物質よりもリンパ節中に均一に蓄積されることを明白に証明する。ＦＰ１で修飾されたナノ粒子によって引き起こされる腸骨下部、腸骨、膝窩リンパ節のリンパ節信号低下（ＧＥ系列）並びに全リンパ節群の全体に渡る平均的蓄積は、未修飾の基準粒子のものとは有意に異なる（図13）（ペアｔ検定、ｐ＜0.05）。より均一なリンパ節間信号干渉はアガロース包埋リンパ節のＭＲ断層撮影像（図14）において明らかに見ることができる。ラットを使って観察することができたものと同様に、基準物質は強い信号低下を示すが、しかしそれは腸間膜リンパ節に限定されている。適用例Ｅ３・ラットのリンパ節への蓄積の用量依存性目的：投与量の関数としての様々なリンパ節／リンパ節群における親化合物（合成ポリマー＝標的用ポリマー）と脱着−吸着法に従って製造した修飾物質（合成ポリマー≠標的用ポリマー）との相対信号強度の比較。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）；比較＝実施例Ｃ２の基本構造単位（＝ターゲットポリマーを含まないＤ２）用量：50〜200μモルFe／kg体重（用量あたりｎ＝３）時：24 h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：ＭＲ断層撮影法（ＳＥおよびＧＥ法）（適用例Ｅ１を参照のこと）生体外モデル：アガロースファントム結果：図16：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子対非特異的粒子：粒子の静注後24時間目のラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での投与量の関数としての相対信号強度。図17：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子対非特異的粒子：造影剤の注射後24時間目のラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での投与量の関数としての相対信号強度。驚くべきことに、腸間膜と鼠径のリンパ節を除く全てのリンパ節について、実施例Ｄ２に従って修飾された親化合物により、半分の用量で〔200μモルFe／kg （Ｃ２）に対して100μモルFe／kg（Ｄ２）〕改善された信号低下（ｐ＜0.05）が観察される。それらの明らかな差は、全リンパ節部位についての平均信号干渉を調べてみても明らかである（表11を参照のこと）。適用例Ｅ４・ラットのリンパ節への蓄積の時間依存性目的：投与後の時間の関数としての様々なリンパ節／リンパ節群における親化合物（合成ポリマー＝標的用ポリマー）と脱着−吸着法に従って製造した修飾物質（合成ポリマー≠標的用ポリマー）との相対信号強度の比較。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）；比較＝実施例Ｃ２の基本構造単位（＝ターゲットポリマーを含まないＤ２）用量：200μモルFe／kg体重（ｎ＝３／時点）時：４〜168 h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：ＭＲ断層撮影法（ＳＥおよびＧＥ法）（適用例Ｅ１を参照のこと）生体外モデル：アガロースファントム（適用例Ｅ１を参照のこと）結果：図18：実施例Ｃ２の基準物質：投与後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図19：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子：投与後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるSE 2000/15での相対信号強度。図20：実施例Ｃ２の基準物質：投与後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。図21：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子：投与後の時間の関数としてのラットの様々なリンパ節におけるGE 135/15/15°での相対信号強度。該物質の静注後のリンパ節の信号低下についての時間依存性ＭＲ断層撮影研究は、非特異的親物質が実施例Ｄ２の特異的修飾物質よりも乏しいリンパ節中の信号低下を引き起こすことを明らかに示す。適用例Ｅ５・物理療法的手段：温度との組合せ目的：温熱浴により調節される体温の関数としての様々なリンパ節／リンパ節群における相対信号強度の比較。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）用量：100μモルFe／kg体重（ｎ＝７／グループ）時：24 h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：ＭＲ断層撮影法（ＳＥおよびＧＥ法）高体温モデル：・熱の適用様々なリンパ節群への造影剤の蓄積に対する熱の影響を調べるために、ラットを３〜４時間麻酔し、次いで部分的に２時間湯浴中に入れた。ラットの体の左側を加熱板の上に置き、体の右側を加熱していない同じ高さの合成断熱板の上に置いた。この配置は、ラットの体の左側と右側で水温の差を生じさせた。ラットの左肩の下の水温は最初41.0〜41.5℃であり、30分後に41.5〜42.0℃の一定値に達した。ラットの右肩の下の水温は最初は37.0〜37.5℃であり、30分後に37.5〜38 .0℃の一定値に達した。水浴中で30分間の後、ラットに100μモルFe／kg体重の用量のナノ粒子を（ボーラス）静注した。更に1.5時間一定温度で水浴中に維持した後、ラットをカゴに戻し、注射後24時間目にリンパ節を調製し、ＭＲ断層撮影法を使って検査した。結果：図22：意図的な熱の適用により生じるリンパ節中への蓄積に対する影響。膝窩リンパ節は左側の造影前の写真中の明るい箇所であると推測することだけはできる。右側の写真は熱処置の影響をはっきりと証明する。麻酔ラットの左側は断熱性合成板の上に置かれ且つ正常体温を有したが、右側は湯浴中で41.5〜42℃に熱せられた。「低温」側は殆どまたは全く蓄積を示さないが、熱処置した側はナノ粒子の高く且つ均一なリンパ節内蓄積を示す。（実施例Ｄ２のナノ粒子；100μ モル／kg体重；24 h p.i．；GE 135/15/15）生体内断層Ｘ線写真（図22）は熱処置の効果を明らかに示す。ラットの体の熱処置しなかった低温の左側は膝窩リンパ節中に全く目に見える蓄積を示さないが、一方で熱処置した右側は検査した膝窩リンパ節中に大きく且つ均一な信号低下（蓄積）を示す。特に明白に加熱の効果を証明するためにラットを麻酔しそして温熱浴に入れた。麻酔は抹消筋肉の運動の停止を引き起こし、リンパ液の流れを減少させ、そして血管透過性を低下させる。結果として、加熱なしではナノ粒子の蓄積は事実上全く検出することができない。適用例Ｅ６・ＭＲ血管造影法物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）動物：ラット（適用例Ｅ１参照）用量：20μモルFe／kg i.v．時：0-2 h p.i．ＭＲ法：装置：Siemens Magnetom 1.5 T MR 先端コイルを有する全身用断層Ｘ線撮影器ＭＲパラメーター：Ｔ１強調ＳＥ系列（TR: 200ms，TE: 10ms），FOV 170mm，マトリックス256×256，SD： 3mmを使った横断像動態検査； 3D FLASH CTR: 40(60)ms，TE: 6ms，FA:60 (40)°〕または3D FISP系列〔TR: 40ms，T E: 7ms，FA: 35°〕，FOV 240mm，マトリックス256×256，SD: 17mmからの冠動脈ＭＩＰＭＲ評価：血管（大静脈）、肝臓、脂肪および筋肉の中の着目の利用者指定領域の信号強度。信号強度はバックグラウンドに対して標準化される。結果：図23：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子のボーラス注射（用量：20μモルのFe／kg ）後のＴ１強調ＳＥ系列(TR: 200ms，TE: 10ms)を使ったラット腹部の横断像動態検査；肝臓内血管および大静脈における明白な信号増強（注射後１分）。図24：実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子と実施例Ｃ２の非特異的基準物質（用量： 20μモルのFe／kg）についての静脈血管および肝臓実質におけるSE TR/TE 200ms /10msでの相対信号強度の比較。図25：3D FLASH断層Ｘ線写真（TR: 40ms，TE: 6ms，FA 60°）の冠動脈ＭＩＰ（最大値投影法）；実施例Ｄ２の特異的ナノ粒子（左）と基準物質Ｃ２（右）の比較；用量：20μモルのFe／kg。図23と25は、実施例Ｃ２に記載の元の物質と比較した特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２に記載）の利点を明らかに示す。大静脈または肝臓実質における信号の時間経過を要約したグラフ（図24）は、ＭＲ血管造影法における造影剤としての特異的ナノ粒子の優れた性質を証明する。増強は基準物質を使った時の３倍であり、高輝度効果は長く持続し且つ非常に一定である（診断時間窓＞６０分）。適用例Ｅ７・健康なラットと腫瘍を有するラットにおけるリンパ節の造影目的：外科医学において標識物質として使われる本発明のナノ粒子の適切性の証明。動物：ラット、SPF Han-Wistar；約150ｇ；および移植したVX2腫瘍（Deutsches Krebsforschungszentrum， Heidelbergの腫瘍バンク）を有するロシアウサギ（Chbb: HM，Thomae GmbH）；約2.6kg。腫瘍は3×10⁶の生存腫瘍細胞を尾側方大腿筋肉内に注入することにより移植した。用量：ラット：500μモルのFe/kgの静注ウサギ：20μモル／足の組織内投与時：ラット：1，4および24 h p.i．ウサギ：12 h p.i．結果：図26：リンパ節の目視検出のための内部（“intraoperative”）標識物質としての本発明のナノ粒子（概略図）。図27：リンパ節の目視検出のための内部（“intraoperative”）標識物質としての本発明のナノ粒子（詳細図）。図28：ウサギの転移性リンパ節の目視検出によるリンパ節中の転移の証明。転移はリンパ節中の明るい凹所として同定することができ、他の部分は黒色で示される。ラットの画像（図26と27）は、多数の最も多様なリンパ節／リンパ節群がナノ粒子溶液の１回の静注により染色できることを示す。リンパ節は周辺組織から明らかに識別でき、よって必要であれば手術による除去のために容易に検出することができる。 VX2腫瘍を有するウサギの研究は、支流領域のリンパ節が本発明のナノ粒子により均一に染色され、そして黒く染色される正常なリンパ節の中の明るい凹所として小さな転移でも識別できることを証明する（図28）。適用例Ｅ８・ナノ粒子の特異性を証明するための細胞実験目的：トランスフェリンの二次被膜（ターゲットポリマー）を有するナノ粒子の特異的細胞取り込み（受容体依存性エンドサイトーシス）の証明。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ６）比較：実施例Ｃ１の基準物質（トランスフェリンなしのＤ６）濃度：0.5ミリモルのFe／ｌ培地時：37℃、５％CO₂／95％空気中での18時間インキュベーション細胞培養：・ヒトミエローマ細胞による取り込みヒトミエローマ細胞（ATCC CRL 9068；細胞系NCI 929）を少なくとも１×10⁶ 細胞／mlの濃度で、10％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）と0.05ミリモル／ｌの２−メルカプトエタノールを含むRPMI 1640中で培養する（37℃，５％二酸化炭素；225cm² の培養フラスコ）。細胞が約1.5×10⁶細胞／mlの濃度に達したら、それらを遠心分離し、新鮮な培地中に再懸濁する。次いで細胞を0.5ミリモル／ｌ（鉄に関して計算した値）の濃度のナノ粒子と共に18時間インキュベートする。細胞をペレット化し、ＰＢＳ中で２回洗浄する。次いでアリコートにして細胞数を測定する（Neubauer計数器）。濃硝酸500μｌ／過酸化水素100μｌ中で加熱することにより細胞ペレットを溶解させ、そして5.0mlの容量に増量する。次いで原子吸光分析（ＡＥＳ，検出限界0.1ppm）を使って鉄濃度を決定する。結果：図29：非特異的基準物質（トランスフェリンなしのナノ粒子）と比較した特異的ナノ粒子（トランスフェリンを有するナノ粒子）の細胞断層Ｘ線写真。NCI細胞（ヒトミエローマ細胞系）は、基準粒子のほぼ２倍多くの特異的粒子を蓄積する。本発明の特異的ナノ粒子は明らかにNCI 929ミエローマ細胞によってより多量に取り込まれる。本発明の特異的ナノ粒子設計の利点は、ターゲットポリマーを含まないナノ粒子が50％少ない数しか取り込まれないという事実によって証明される。適用例Ｅ８・ワタナベウサギにおけるアテローム硬化症の画像診断（斑の視覚化）目的：脱着−吸着法に従って斑に対して親和性を有するペプチド（二次被膜，ターゲットポリマー）が塗布されたナノ粒子を使ったウサギのアテローム硬化斑の視覚化。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ７）用量：200μモルFe／kg体重時：５ h p.i．（p.i.＝注射後）ＭＲ法：装置：Siemens Magnetom 1.5 T MR 先端コイルを有する全身断層Ｘ線撮影器ＭＲパラメーター：撮像視野(FOV)＝150mm，マトリックス 256×256, スライス厚＝３mm 切断方向＝正面系列１：プロトン密度強調スピンエコー系列（ＳＥ） TR＝2000ms，TE＝15ms 系列２：Ｔ２強調グラジエントエコー系列（ＧＥ） TR＝135ms，TE＝15ms，FA＝15° 生体外モデル：アガロースファントム（適用例Ｅ１を参照のこと）大動脈を切除し、注意深く切開し、そして未結合のナノ粒子または取り込まれなかったそれらのナノ粒子を除去するために冷ＰＢＳ溶液で洗浄した。次いで大動脈を二等分し、アガロースファントムに注入し、そしてＭＲ断層撮影法を使って検査した。組織学：プルシアンブルー染色結果：図30：修飾物質Ｄ７（用量200μモルのFe／kg；注射後５時間目に動脈切除）を使ったウサギの大動脈のアテローム硬化斑の生体外ＭＲ断層Ｘ線写真。左：プロトン密度強調スピンエコー系列；右：Ｔ２^*強調グラジエントエコー系列。図31：プルシアンブルー染色を使ったウサギの大動脈のアテローム硬化膜中の鉄の組織学的検出。ＭＲ断層Ｘ線写真（GE 135/15/15°）との比較は、組織学的に検出された鉄が、特異的ナノ粒子の蓄積のために画像中に明白な信号低下を示す部位に存在することを示す。大動脈は実施例Ｄ７の特異的ナノ粒子の200μモルFe／kgの静脈内投与後５時間目に切除した。図32：ワタナベウサギの大動脈中に蓄積した実施例Ｅ６のナノ粒子の組織化学的検出（プルシアンブルー染色）。図面の上部は寒天上に調製した大動脈の概略図を示し、下部は鉄染色（青い顆粒）と特に広範囲に広げられた大動脈弓中の目視検出可能な斑との良好な相関関係を証明する。調製した大動脈のＭＲ断層Ｘ線写真（「生体外断層Ｘ線写真」）は、暗い点（信号低下）として斑点を描出する。プルシアンブルー染色（鉄）を使った組織学的証明は、検出された鉄が、ＭＲ断層Ｘ線写真（GE 135/15/15°）と比較すると、画像がナノ粒子蓄積のために明らかに低下した信号を示す部位に位置することを示す。ＭＲ断層Ｘ線写真の結果は、明らかに目に見える斑と一致する。最も広大な斑は大動脈弓中に存在し、それはＭＲ断層Ｘ線写真と組織学的検査によって確認される。ＭＲ断層Ｘ線写真と組織学的写真の両方において、より小さな斑も十分検出可能である。適用例Ｅ10 ・腫瘍を有するマウスにおける腫瘍中への蓄積の研究目的：ナノ粒子が腫瘍中に蓄積することができるという証拠を提供することが目的であった。試験は一方で、該粒子が化学療法剤のための適当な賦形剤であることを示し、そして他方では、化学療法剤がそれらの所望の作用部位（即ち腫瘍）に到達したかどうかを調べるのにナノ粒子が役立ち得ることを示す予定であり、そのため、この試験は診断適用と治療適用の組合せである。物質：特異的ナノ粒子（実施例Ｄ２）動物：移植した腫瘍を有するSwissヌードマウス(ｎ＝５／用量 )(LS 174T，s.c．：実験の10日前に適用) 麻酔：Rompun/Ketavet(1:1)，約0.5ml／kg体重i.m. 用量：200μモルFe／kg 時：投与後0〜120分および12または24時間目ＭＲ法：装置：Siemens Magnetom 1.5 T MR 先端コイルを有する全身断層Ｘ線撮影器ＭＲパラメーター：撮像視野(FOV)＝150mm，マトリックス256 ×256, スライス厚＝3mm 切断方向＝正面系列１：プロトン密度強調スピンエコー系列（ＳＥ） TR＝2000ms，TE＝15ms 系列２：動態検査：ＳＥ系列 TR／TE＝300ms／15ms ＭＲ評価：腫瘍、筋肉、脂肪およびバックグラウンド中の着目の利用者指定領域の信号強度。様々な組織中の相対信号強度を標準化し、脂肪中の信号強度を参照する。結果：図33：実施例Ｄ２のナノ粒子のボーラス注射（200μモルFe／ kg）後の腫瘍の信号の動態の横断Ｔ１強調スピンエコー動態検査（TR＝300ms，T E＝15ms）。断層Ｘ線写真は、空間的要件の境界が次第に明白になると共に腫瘍中の信号増強（蓄積）のゆっくりした時間依存性の増加を示す。図34：腫瘍の相対信号強度（蓄積）の曲線。200μモル／kg体重の用量についての信号の時間経過は、腫瘍では時間と共に増加する強い増強（蓄積の増加）を表す（SE 2000/15）。図35：実施例Ｄ２のナノ粒子（200μモルFe／kg）の投与後の時間依存性横断プロトン密度強調（SE 2000/15）断層Ｘ線写真。時間に伴う信号増強の直線的増加と関連した腫瘍中のナノ粒子の蓄積の増加は、Ｔ１強調およびプロトン密度強調スピンエコー配列（図33，35）において見られた。注射後135分までに35〜40％の増強が観察され、これは健全な組織からの腫瘍の明白な区別を可能にし、且つナノ粒子の蓄積を確証する。ここで行った観察と違って、灌流によってのみ引き起こされる腫瘍中の増強は最大30分後（p.i. ）には完全に消失してしまうだろうことが血管造影検査でわかった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者プフェッフェラー，デトレフドイツ連邦共和国，デー−13505 ベルリン，ユールシュトラーセ７ (72)発明者ラバクツェク，リーディガードイツ連邦共和国，デー−13503 ベルリン，ベイシュラクシュトラーセ８ツェー (72)発明者バグナー，スザンヌドイツ連邦共和国，デー−10781 ベルリン，ビンターフェルトシュトラーセ 83 (72)発明者エベルト，ボルフガンクドイツ連邦共和国，デー−12203 ベルリン，ホルテンジーンシュトラーセ 64 (72)発明者エルステ，フォルカードイツ連邦共和国，デー−10405 ベルリン，リケシュトラーセ 40 (72)発明者ゼムラー，ボルフハルトドイツ連邦共和国，デー−16548 グリーニッケ，ロサ−ルクセンブルク−シュトラーセ 16 (72)発明者タウピッツ，マティアスドイツ連邦共和国，デー−10781 ベルリン，ビンターフェルトシュトラーセ 83 (72)発明者ガイダ，ヨセフドイツ連邦共和国，デー−13347 ベルリン，ホッホステーターシュトラーセ６ (72)発明者ヘルマン，アンヤドイツ連邦共和国，デー−13583 ベルリン，アンデルカッペ 69ベー (72)発明者ユクル，モニカドイツ連邦共和国，デー−12203 ベルリン，ホルテンジーンシュトラーセ 64 (72)発明者スビデルスキー，ウードドイツ連邦共和国，デー−12053 ベルリン，マインツァーシュトラーセ 20

Claims

【特許請求の範囲】１．鉄含有コア、一次被膜（合成ポリマー）および二次被膜（ターゲットポリマー）、並びに所望により、薬剤補助剤、薬剤および／または吸着媒介物質／促進物質から成ることを特徴とするナノ粒子。２．鉄含有コアと一次被膜の基本構造単位の流体力学的直径が溶液中で100nm 未満であり且つ前記鉄含有コアの直径の５倍より大きくないことを特徴とする、請求項１に記載のナノ粒子。３．前記鉄含有コアが磁鉄鉱および／または磁赤鉄鉱から成るか、またはそれらの２つの化合物のうちの少なくとも１つを含有することを特徴とする、請求項１または２に記載のナノ粒子。４．前記鉄含有コア中の鉄の25重量％までが別の金属イオンにより置換されていることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のナノ粒子。５．非鉄金属イオンが常磁性、反磁性、または常磁性と反磁性金属イオンの混合物であることを特徴とする、請求項４に記載のナノ粒子。６．前記鉄含有コアが電子顕微鏡検査を使って測定すると30nm未満の直径を有し、そして前記コアが最低50の金属イオンを含み、そして前記鉄含有コアの少なくとも90％が0.7×平均〜1.3×平均の範囲にあるような粒度分布であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載のナノ粒子。７．前記ナノ粒子が存在する金属イオンの総数の0.01倍〜１倍の量（w/w）で合成ポリマーを含有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載のナノ粒子。８．前記合成ポリマーが単量体もしくは多量体物質であるか、あるいはそれらの物質もしくは誘導体の、または官能基を有する誘導体の、または付加的に置換された誘導体の混合物であり、そしてそれが100,000Da未満の分子量を有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載のナノ粒子。９．前記合成ポリマーがデキストランもしくはそれの誘導体またはデキストランおよび／またはデキストラン誘導体の混合物であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載のナノ粒子。 10．前記合成ポリマーがそれの分子中に１個もしくは数個の酸基、またはＮ，Ｓ，ＰもしくはＯ原子を含む数個の官能基を含んで成ることを特徴とする、請求項８または９に記載のナノ粒子。 11．前記ターゲットポリマーと前記合成ポリマーが同一のまたは異なる物質もしくは物質の混合物であることを特徴とする、請求項１〜10のいずれか一項に記載のナノ粒子。 12．前記ナノ粒子中に含まれる前記ターゲットポリマーの重量が、存在する金属イオンの重量の0.5倍〜50倍(w/w)であることを特徴とする、請求項１〜11のいずれか一項に記載のナノ粒子。 13．前記ナノ粒子が、含まれる金属イオンの総重量より少ないかまたは等しい量で吸着媒介物質／促進物質を含有することを特徴とする、請求項１〜12のいずれか一項に記載のナノ粒子。 14．前記ナノ粒子が吸着媒介物質／促進物質としてペプチドを含有することを特徴とする、請求項13に記載のナノ粒子。 15．全成分の流体力学的直径がそれらの鉄含有コアの直径の10倍以下であり、且つそれらの基本構造単位の直径より最大で20％大きいことを特徴とする、請求項１〜14のいずれか一項に記載のナノ粒子。 16．前記ナノ粒子が、いつでも配合することができる基本構造単位、ターゲットポリマー、薬剤および吸着媒介物質のような個々のモジュールから成ることを特徴とする、請求項１〜15のいずれか一項に記載のナノ粒子。 17．請求項１に記載のナノ粒子の製造方法であって、第一段階において合成ポリマーの存在下での塩基処理により鉄含有コアを製造し、第二段階において脱着によって鉄対合成ポリマーの比を変更し、第三段階においてターゲットポリマーを吸着させ、そして所望により、吸着媒介物質／促進物質、製剤補助剤および／または薬剤を添加することを特徴とする方法。 18．前記鉄含有コアを製造するのに、二価の鉄対三価の鉄の比が１：１〜１： 20となるように鉄（II）塩と鉄（III）塩の混合物を使用することを特徴とする、請求項17に記載の方法。 19．前記鉄含有コアを製造するのに鉄（III）塩混合物と一緒に還元剤を使用し、その場合、１：１〜１：20の鉄（II）対鉄（III）の比を生じる還元剤の量を選択することを特徴とする、請求項17または18に記載の方法方法。 20．使用する鉄化合物が無機および有機塩並びにそれらの錯体の任意の混合物を表すことを特徴とする、請求項17〜19のいずれか一項に記載の方法。 21．前記鉄含有コアが別々に製造された水酸化鉄（II）溶液と水酸化鉄（III ）溶液を混合することにより製造されることを特徴とする、請求項17〜20のいずれか一項に記載の方法。 22．使用する金属イオンの25重量％までが非鉄イオンであることを特徴とする、請求項17〜21のいずれか一項に記載の方法。 23．前記非鉄金属イオンが常磁性金属イオン、反磁性金属イオン、または常磁性金属イオンと反磁性金属イオンの混合物であることを特徴とする、請求項22に記載の方法。 24．沈澱によって生じる結晶を互いから分離する合成ポリマーとして物質または物質の組合せを使用し、反応混合物中の前記合成ポリマーの量が、含まれる金属イオンの重量を0.5〜20倍上回るが反応混合物の50％(g/v)を越えないことを特徴とする、請求項17〜23のいずれか一項に記載の方法。 25．鉄化合物を沈澱させるために迅速に添加される0.1〜10Nの塩基を使用することを特徴とする、請求項17〜24のいずれか一項に記載の方法。 26．鉄化合物を沈澱させるためにアンモニアガスもしくは塩、アミンもしくはアミン誘導体または揮発性緩衝液を使用することを特徴とする、請求項25に記載の方法。 27．０℃〜120℃の温度領域で前記基本構造単位を合成することを特徴とする、請求項17〜26のいずれか一項に記載の方法。 28．鉄対合成ポリマーの比が１：0.01〜１：１(w/w)に設定されることを特徴とする、請求項17〜27のいずれか一項に記載の方法。 29．添加されるターゲットポリマーの量が、存在する金属イオン対ターゲットポリマーの比が１：0.5〜１：50になるように選択されることを特徴とする、請求項17〜28のいずれか一項に記載の方法。 30．前記ナノ粒子が安定なコロイド状ゾルまたは凍結乾燥形態でありそして単純な溶剤を使って溶液に戻すことができるか、または基本構造単位、ターゲット成分および任意の補助剤が別々の溶液もしくは凍結乾燥物として入手可能であり、それらを特定の時期に混合して投与用溶液を作製することができることを特徴とする、請求項17〜29のいずれか一項に記載の方法。 31．前記ナノ粒子の個々のモジュールがいつでも配合することができることを特徴とする、請求項17〜30のいずれか一項に記載の方法。 32．診断法における造影剤として、手術のような医学における可視標識物質として、活性物質のための賦形剤としてまたは治療目的の活性物質としての、ナノ粒子の利用。