JPH10175994A - Ｄｎａ固定化複合体 - Google Patents
Ｄｎａ固定化複合体Info
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- JPH10175994A JPH10175994A JP34023796A JP34023796A JPH10175994A JP H10175994 A JPH10175994 A JP H10175994A JP 34023796 A JP34023796 A JP 34023796A JP 34023796 A JP34023796 A JP 34023796A JP H10175994 A JPH10175994 A JP H10175994A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 より安定にＤＮＡが保持され、新しい機能材
料創製に有用なＤＮＡ固定化複合体を提供する。 【解決手段】 ＤＮＡの固定化担体が無機質固体である
ＤＮＡ固体化複合体。
料創製に有用なＤＮＡ固定化複合体を提供する。 【解決手段】 ＤＮＡの固定化担体が無機質固体である
ＤＮＡ固体化複合体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、ＤＮＡ
（デオキシリボ核酸）固定化複合体に関するものであ
る。さらに詳しくは、この出願の発明は、細胞増殖抑制
剤、ＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）、クロマト
グラフィー担体等として有用な、ＤＮＡ分解酵素の活性
抑性、ＤＮＡ除放性、ＤＮＡ立体特異性の維持等の優れ
た特徴のあるＤＮＡ固定化複合体に関するものである。
（デオキシリボ核酸）固定化複合体に関するものであ
る。さらに詳しくは、この出願の発明は、細胞増殖抑制
剤、ＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）、クロマト
グラフィー担体等として有用な、ＤＮＡ分解酵素の活性
抑性、ＤＮＡ除放性、ＤＮＡ立体特異性の維持等の優れ
た特徴のあるＤＮＡ固定化複合体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術とその課題】従来より、ＤＮＡ（デオキシ
リボ核酸）は生体内で遺伝情報を担う役割を果してお
り、生命現象にとって最も重要な物質の一つであり、ま
た、他の物質と高度に特異的、選択的な相互作用を示す
働きがあることから機能性材料への展開が大いに期待さ
れているものでもある。
リボ核酸）は生体内で遺伝情報を担う役割を果してお
り、生命現象にとって最も重要な物質の一つであり、ま
た、他の物質と高度に特異的、選択的な相互作用を示す
働きがあることから機能性材料への展開が大いに期待さ
れているものでもある。
【０００３】しかしながら、ＤＮＡは水溶性のためにそ
の構造を安定に保つことが難しく、そのため今までその
利用もあまり進展しておらず、ＤＮＡを対象とした研究
ももっぱら遺伝子としての生化学や分子生物学的側面か
らのものに限られていた。このような状況において、こ
の出願の発明者らは、ＤＮＡの新しい応用を拓げるため
に、ＤＮＡを不溶化することを鋭意検討し、その結果と
して、ＤＮＡをアルギン酸とともに不溶化することがで
きることをすでに見出している。
の構造を安定に保つことが難しく、そのため今までその
利用もあまり進展しておらず、ＤＮＡを対象とした研究
ももっぱら遺伝子としての生化学や分子生物学的側面か
らのものに限られていた。このような状況において、こ
の出願の発明者らは、ＤＮＡの新しい応用を拓げるため
に、ＤＮＡを不溶化することを鋭意検討し、その結果と
して、ＤＮＡをアルギン酸とともに不溶化することがで
きることをすでに見出している。
【０００４】しかしながら、ＤＮＡの構造をより安定に
保ち、しかも汎用的な利用態様とするためにはこれまで
の検討では充分でないのが実情であった。そこで、この
出願の発明は、ＤＮＡを不溶化して固定化することによ
り期待される各種の機能性材料の創製を可能とするため
の、新しいＤＮＡ固定化複合体を提供することを目的と
している。
保ち、しかも汎用的な利用態様とするためにはこれまで
の検討では充分でないのが実情であった。そこで、この
出願の発明は、ＤＮＡを不溶化して固定化することによ
り期待される各種の機能性材料の創製を可能とするため
の、新しいＤＮＡ固定化複合体を提供することを目的と
している。
【０００５】
【課題を解決するための手段】この出願の発明は、上記
の課題を解決するものとして、ＤＮＡが固定化されてい
る複合体であって、ＤＮＡの固定化担体が無機質固体で
あることを特徴とするＤＮＡ固定化複合体（請求項１）
を提供する。また、この出願の発明は、その態様とし
て、無機質固体が、カルシウム含有物質であるＤＮＡ固
定化複合体（請求項２）、無機質固体が多孔質体である
ＤＮＡ固定化複合体（請求項３）、無機質固体が、繊維
またはその集合体であるＤＮＡ固定化複合体（請求項
４）、無機質固体がハイドロキシアパタイトまたはシリ
カゲルであるＤＮＡ固定化複合体（請求項５）等も提供
する。
の課題を解決するものとして、ＤＮＡが固定化されてい
る複合体であって、ＤＮＡの固定化担体が無機質固体で
あることを特徴とするＤＮＡ固定化複合体（請求項１）
を提供する。また、この出願の発明は、その態様とし
て、無機質固体が、カルシウム含有物質であるＤＮＡ固
定化複合体（請求項２）、無機質固体が多孔質体である
ＤＮＡ固定化複合体（請求項３）、無機質固体が、繊維
またはその集合体であるＤＮＡ固定化複合体（請求項
４）、無機質固体がハイドロキシアパタイトまたはシリ
カゲルであるＤＮＡ固定化複合体（請求項５）等も提供
する。
【０００６】そして、この出願の発明は、ＤＮＡが固定
化されている複合体であって、ＤＮＡの固定化担体が有
機質固体であることを特徴とするＤＮＡ固定化複合体
（請求項６）と、以上のいずれかの複合体において、Ｄ
ＮＡとともに多糖類またはその誘導体、もしくは蛋白質
が含まれているＤＮＡ固定化複合体（請求項７）をはじ
め、その態様としての、アルギン酸が含まれているＤＮ
Ａ固定化複合体（請求項８）や、カルシウム化合物また
はカルシウムイオンが含まれているＤＮＡ固定化複合体
（請求項９）をも提供する。
化されている複合体であって、ＤＮＡの固定化担体が有
機質固体であることを特徴とするＤＮＡ固定化複合体
（請求項６）と、以上のいずれかの複合体において、Ｄ
ＮＡとともに多糖類またはその誘導体、もしくは蛋白質
が含まれているＤＮＡ固定化複合体（請求項７）をはじ
め、その態様としての、アルギン酸が含まれているＤＮ
Ａ固定化複合体（請求項８）や、カルシウム化合物また
はカルシウムイオンが含まれているＤＮＡ固定化複合体
（請求項９）をも提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】この出願の発明は以上のとおりの
特徴を有するものであるが、さらに詳しく説明すると、
固定化担体が無機質固体であるものは、この無機質固体
はその形状において粉体、バルク、フィルム状、板状、
管状、繊維状体、それらの集合体、それらからなる多孔
体等の適宜なものであってよく、その組成についても、
酸化物、複合酸化物、炭化物、ハロゲン化物、硝酸塩、
リン酸塩、硫酸塩等の適宜なものでよい。たとえばその
組成については、ハイドロキシアパタイト等のリン酸塩
やカルシウム塩、シリカゲル、その他のケイ酸塩や、ガ
ラスウール、ロックウール、それらの織布や不織布等々
であってよい。
特徴を有するものであるが、さらに詳しく説明すると、
固定化担体が無機質固体であるものは、この無機質固体
はその形状において粉体、バルク、フィルム状、板状、
管状、繊維状体、それらの集合体、それらからなる多孔
体等の適宜なものであってよく、その組成についても、
酸化物、複合酸化物、炭化物、ハロゲン化物、硝酸塩、
リン酸塩、硫酸塩等の適宜なものでよい。たとえばその
組成については、ハイドロキシアパタイト等のリン酸塩
やカルシウム塩、シリカゲル、その他のケイ酸塩や、ガ
ラスウール、ロックウール、それらの織布や不織布等々
であってよい。
【０００８】この発明の無機質固体には、無機質物質と
有機物との複合体も包含される。それらは混合物、錯化
合物、複化合物等の任意であってよい。固定化担体とし
ては有機質の固体、たとえば粉体、バルク、フィルム、
板、管状体や不織布等でもよい。いずれの場合にも、こ
の出願の発明の固定化複合体には、ＤＮＡとともに、多
糖類またはその誘導体、あるいはコラーゲン等の蛋白質
が含まれるものが例示される。なかでも、ＤＮＡとアル
ギン酸との複合体がより具体的なものとして示される。
有機物との複合体も包含される。それらは混合物、錯化
合物、複化合物等の任意であってよい。固定化担体とし
ては有機質の固体、たとえば粉体、バルク、フィルム、
板、管状体や不織布等でもよい。いずれの場合にも、こ
の出願の発明の固定化複合体には、ＤＮＡとともに、多
糖類またはその誘導体、あるいはコラーゲン等の蛋白質
が含まれるものが例示される。なかでも、ＤＮＡとアル
ギン酸との複合体がより具体的なものとして示される。
【０００９】ＤＮＡ固定化複合体には、カルシウム化合
物またはカルシウムイオンが含まれることが有効でもあ
る。固定化による安定化が促進される。カルシウムは、
前記無機質担体としてのハイドロキシアパタイトのよう
に、担体そのものに含有されていてもよい。ＤＮＡのア
ルカリ金属塩とアルギン酸のアルカリ金属塩との混合物
は２価の金属化合物の存在、たとえばカルシウムイオン
の存在によってよりすみやかにゲル化することがこの発
明の発明者らにより見出されているが、このゲル体では
実用的にもＤＮＡの安定固定は不充分である。これに対
してこの出願の発明によって、固定化安定性に優れ、取
扱い性にも優れたＤＮＡ複合体が提供されることにな
る。
物またはカルシウムイオンが含まれることが有効でもあ
る。固定化による安定化が促進される。カルシウムは、
前記無機質担体としてのハイドロキシアパタイトのよう
に、担体そのものに含有されていてもよい。ＤＮＡのア
ルカリ金属塩とアルギン酸のアルカリ金属塩との混合物
は２価の金属化合物の存在、たとえばカルシウムイオン
の存在によってよりすみやかにゲル化することがこの発
明の発明者らにより見出されているが、このゲル体では
実用的にもＤＮＡの安定固定は不充分である。これに対
してこの出願の発明によって、固定化安定性に優れ、取
扱い性にも優れたＤＮＡ複合体が提供されることにな
る。
【００１０】この出願の発明により提供されるＤＮＡ固
定化複合体には各種のＤＮＡ（デオキシリボ核酸）がそ
の対象とされ、ＤＮＡ分解酵素の活性抑性、ＤＮＡ除放
性、ＤＮＡ立体特異性の維持等の優れた特徴が発現され
ることになる。このため、細胞増殖抑制剤、ＤＤＳ（ド
ラッグデリバリーシステム）、クロマトグラフィー担体
等として有用なものとなる。たとえば具体的にも、変異
原物質の除去にも有効に利用されることになる。
定化複合体には各種のＤＮＡ（デオキシリボ核酸）がそ
の対象とされ、ＤＮＡ分解酵素の活性抑性、ＤＮＡ除放
性、ＤＮＡ立体特異性の維持等の優れた特徴が発現され
ることになる。このため、細胞増殖抑制剤、ＤＤＳ（ド
ラッグデリバリーシステム）、クロマトグラフィー担体
等として有用なものとなる。たとえば具体的にも、変異
原物質の除去にも有効に利用されることになる。
【００１１】そこで以下実施例を示し、さらに詳しくこ
の発明の実施の形態について説明する。なお、以下の実
施例中の説明並びに図面において用いている略符号は、
各々、次のものを示している。 ＤＮＡ：デオキシリボ核酸 ＡＬ：アルギン酸 ＨＡ：ハイドロキシアパタイト Ｓ：シリカゲル ＣＡ：カルシウム ａｂｓ：吸収 Ｄ.Ｗ.：脱イオン水 また、実施例においては、「ひも状ＤＮＡ：ユーキファ
インズ株式会社」：サケ白子由来高分子量二本鎖ＤＮＡ
を使用している。このものは、分子量数千〜数千万（５
００万前後が多い）であることを電気泳動により確認し
ている。
の発明の実施の形態について説明する。なお、以下の実
施例中の説明並びに図面において用いている略符号は、
各々、次のものを示している。 ＤＮＡ：デオキシリボ核酸 ＡＬ：アルギン酸 ＨＡ：ハイドロキシアパタイト Ｓ：シリカゲル ＣＡ：カルシウム ａｂｓ：吸収 Ｄ.Ｗ.：脱イオン水 また、実施例においては、「ひも状ＤＮＡ：ユーキファ
インズ株式会社」：サケ白子由来高分子量二本鎖ＤＮＡ
を使用している。このものは、分子量数千〜数千万（５
００万前後が多い）であることを電気泳動により確認し
ている。
【００１２】もちろん、この発明が対象とするＤＮＡは
このものに限られることは全くない。
このものに限られることは全くない。
【００１３】
【実施例】実施例１ 固体のＤＮＡとＡＬ（アルギン酸）粉末を残基比１：４
の割合で混合し、全体で０．５（ｗ／ｖ）％になるよう
に脱イオン水（Ｄ．Ｗ．）に溶解した。組織培養用Ｄｉ
ｓｈにこの残基比１：４のＤＮＡ−ＡＬ溶液をそれぞれ
２ｍｌずつ分注し、さらに滅菌したＨＡ（ハイドロキシ
アパタイト）（株式会社サンギ製：ＦＫＩ）粉末を１０
ｍｇずつ添加し懸濁させた。これらをそれぞれ１時間、
２４時間および４８時間静置した後で２ｍｌの１％Ｃａ
Ｃｌ2 水溶液を添加し１時間ゲル化させた。ＤＮＡの定
量を、ゲル化後の上澄について、培地およびＤ．Ｗ．を
添加し１時間後の上澄について、培地およびＤ．Ｗ．を
交換し２４時間後の上澄について、再度交換し２４時間
後の上澄および最終的に１ｍＭ ＥＤＴＡ／ Phosphate
−Buffred Saline Ｃａ2+，Ｍｇ2+ free（以下ＰＢＳ
（−）と略記）溶液を用いてゲルを溶解した後に５回行
なった。これらの残基比１：４のＤＮＡ−ＡＬゲルおよ
びＨＡを含んだゲルから培地およびＤ．Ｗ．へ溶出した
ＤＮＡを測定した。
の割合で混合し、全体で０．５（ｗ／ｖ）％になるよう
に脱イオン水（Ｄ．Ｗ．）に溶解した。組織培養用Ｄｉ
ｓｈにこの残基比１：４のＤＮＡ−ＡＬ溶液をそれぞれ
２ｍｌずつ分注し、さらに滅菌したＨＡ（ハイドロキシ
アパタイト）（株式会社サンギ製：ＦＫＩ）粉末を１０
ｍｇずつ添加し懸濁させた。これらをそれぞれ１時間、
２４時間および４８時間静置した後で２ｍｌの１％Ｃａ
Ｃｌ2 水溶液を添加し１時間ゲル化させた。ＤＮＡの定
量を、ゲル化後の上澄について、培地およびＤ．Ｗ．を
添加し１時間後の上澄について、培地およびＤ．Ｗ．を
交換し２４時間後の上澄について、再度交換し２４時間
後の上澄および最終的に１ｍＭ ＥＤＴＡ／ Phosphate
−Buffred Saline Ｃａ2+，Ｍｇ2+ free（以下ＰＢＳ
（−）と略記）溶液を用いてゲルを溶解した後に５回行
なった。これらの残基比１：４のＤＮＡ−ＡＬゲルおよ
びＨＡを含んだゲルから培地およびＤ．Ｗ．へ溶出した
ＤＮＡを測定した。
【００１４】なお、培地は市販のα−ＭＥＭ粉末より定
法に従って調製し、それに５％になるようにNEWBORN CA
LF SERUM（以下ＮＣＳと略記）を添加して血清培地とし
た。図１は、溶出したＤＮＡ量を示したものであり、図
中の表示は次の場合を示している。 ＤＮＡ−ＡＬ−：ＤＮＡとＡＬの溶液をゲル化させた場
合。
法に従って調製し、それに５％になるようにNEWBORN CA
LF SERUM（以下ＮＣＳと略記）を添加して血清培地とし
た。図１は、溶出したＤＮＡ量を示したものであり、図
中の表示は次の場合を示している。 ＤＮＡ−ＡＬ−：ＤＮＡとＡＬの溶液をゲル化させた場
合。
【００１５】ＤＮＡ−ＡＬ−ＨＡ：ＤＮＡとＡＬの溶液
にＨＡ粉末を添加し、１時間静置した後にゲル化させた
場合。 ＤＮＡ−ＡＬ−ＨＡ（２４）：ＤＮＡとＡＬの溶液にＨ
Ａ粉末を添加し、２４時間静置した後にゲル化させた場
合。 ＤＮＡ−ＡＬ−ＨＡ（４８）：ＤＮＡとＡＬの溶液にＨ
Ａ粉末を添加し、４８時間静置した後にゲル化させた場
合。
にＨＡ粉末を添加し、１時間静置した後にゲル化させた
場合。 ＤＮＡ−ＡＬ−ＨＡ（２４）：ＤＮＡとＡＬの溶液にＨ
Ａ粉末を添加し、２４時間静置した後にゲル化させた場
合。 ＤＮＡ−ＡＬ−ＨＡ（４８）：ＤＮＡとＡＬの溶液にＨ
Ａ粉末を添加し、４８時間静置した後にゲル化させた場
合。
【００１６】検出された総ＤＮＡ量はゲル化前のＤＮＡ
量に比べてＨＡを加えたものについては少なかったこと
から、ＡＬゲル中に固定化されるＤＮＡ量がＨＡ添加に
よる複合体において増加したものと推察される。このこ
とはＤＮＡ−ＡＬ溶液にＨＡを長時間懸濁させた複合体
試料ほど検出量が少ないことからも確認される。さらに
１２０時間後の固定化複合体としてのゲルをＥＤＴＡ溶
液を用いて溶解し、その溶液についてのＤＮＡ濃度も測
定した。それより求めたゲル中およびＨＡに吸着したＤ
ＮＡ量について図２および図３に示したように、ゲル中
にＨＡが存在した場合、ＨＡ自体に吸着するのみではな
くゲル中に存在するＤＮＡ量も増加することが判明し
た。以上の結果から、ＤＮＡ−ＡＬゲルにＨＡを添加す
ることによりゲル中に固定化されたＤＮＡがより安定に
存在することがわかる。これらの原因として、ＨＡ中の
Ｃａイオンおよびリン酸基がＡＬゲル中に存在するＤＮ
Ａの保持に効果を与え、またゲル中に存在するＤＮＡに
対するＤＮａｓｅの活性が抑制されたことが考えられ
る。
量に比べてＨＡを加えたものについては少なかったこと
から、ＡＬゲル中に固定化されるＤＮＡ量がＨＡ添加に
よる複合体において増加したものと推察される。このこ
とはＤＮＡ−ＡＬ溶液にＨＡを長時間懸濁させた複合体
試料ほど検出量が少ないことからも確認される。さらに
１２０時間後の固定化複合体としてのゲルをＥＤＴＡ溶
液を用いて溶解し、その溶液についてのＤＮＡ濃度も測
定した。それより求めたゲル中およびＨＡに吸着したＤ
ＮＡ量について図２および図３に示したように、ゲル中
にＨＡが存在した場合、ＨＡ自体に吸着するのみではな
くゲル中に存在するＤＮＡ量も増加することが判明し
た。以上の結果から、ＤＮＡ−ＡＬゲルにＨＡを添加す
ることによりゲル中に固定化されたＤＮＡがより安定に
存在することがわかる。これらの原因として、ＨＡ中の
Ｃａイオンおよびリン酸基がＡＬゲル中に存在するＤＮ
Ａの保持に効果を与え、またゲル中に存在するＤＮＡに
対するＤＮａｓｅの活性が抑制されたことが考えられ
る。
【００１７】以上のことから、ＤＮＡの放出量はＡＬの
量とＣａイオン量さらに共存させるＨＡによりコントロ
ールされることが示された。そして、このゲル中に固定
化したＤＮＡは培地の添加により徐々に培地中に放出さ
れることから、ＤＮＡを薬効成分とするドラッグデリバ
リーシステムが成立すると考えられる。実施例２ ＤＮＡ（５０ｍｇ）およびＤＮＡ−アルギン酸（５０ｍ
ｇ，６６ｍｇ；残基比約１：２）をそれぞれ１０ｍｌの
脱イオン水に溶解し、一晩冷所に放置し安定化させた。
これらの水溶液に４．００ｇのシリカゲル（Wakogel Ｃ
−３００、カラムクロマト用）を混入し攪拌する。一晩
冷所に放置後、減圧したデシケーター内で風乾させた。
これら風乾させたＤＮＡ固定化複合体をそれぞれ、ＤＮ
Ａ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−Ｓ試料とした。またこれと
は別に同様の方法で各試料を作成し、それぞれ１０％
（ｗ／ｗ）ＣａＣｌ2 水溶液を１０ｍｌずつ加えて風乾
させたＤＮＡ固定化複合体をそれぞれＤＮＡ−ＣＡ−Ｓ
およびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓ試料とした。
量とＣａイオン量さらに共存させるＨＡによりコントロ
ールされることが示された。そして、このゲル中に固定
化したＤＮＡは培地の添加により徐々に培地中に放出さ
れることから、ＤＮＡを薬効成分とするドラッグデリバ
リーシステムが成立すると考えられる。実施例２ ＤＮＡ（５０ｍｇ）およびＤＮＡ−アルギン酸（５０ｍ
ｇ，６６ｍｇ；残基比約１：２）をそれぞれ１０ｍｌの
脱イオン水に溶解し、一晩冷所に放置し安定化させた。
これらの水溶液に４．００ｇのシリカゲル（Wakogel Ｃ
−３００、カラムクロマト用）を混入し攪拌する。一晩
冷所に放置後、減圧したデシケーター内で風乾させた。
これら風乾させたＤＮＡ固定化複合体をそれぞれ、ＤＮ
Ａ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−Ｓ試料とした。またこれと
は別に同様の方法で各試料を作成し、それぞれ１０％
（ｗ／ｗ）ＣａＣｌ2 水溶液を１０ｍｌずつ加えて風乾
させたＤＮＡ固定化複合体をそれぞれＤＮＡ−ＣＡ−Ｓ
およびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓ試料とした。
【００１８】ＤＮＡ−Ｓ，ＤＮＡ−ＡＬ−Ｓ，ＤＮＡ−
ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓをそれぞれ２０
ｍｇずつとり、１０ｍｌの脱イオン水に懸濁させた。１
時間放置後それぞれの上澄をとりＵＶスペクトル分析器
を用い、２００ｎｍから３４０ｎｍまでの紫外部吸光ス
ペクトルを測定し、ＤＮＡの溶出の程度を比較した。ま
た、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓの
一部に脱イオン水を加え攪拌静置し、上澄をデカンテー
ションにて捨て、再度脱イオン水を加えた。この操作を
数回繰返し上澄についてもＵＶスペクトルを測定し、２
６０ｎｍ付近にピークが見られなくなるまで続けた。そ
の後風乾し、２０ｍｇをとって１０ｍｌの脱イオン水に
懸濁した。これらを８０℃で２０分間加熱した。放冷後
の各試料の上澄を同様に紫外部の吸光度を測定した。
ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓをそれぞれ２０
ｍｇずつとり、１０ｍｌの脱イオン水に懸濁させた。１
時間放置後それぞれの上澄をとりＵＶスペクトル分析器
を用い、２００ｎｍから３４０ｎｍまでの紫外部吸光ス
ペクトルを測定し、ＤＮＡの溶出の程度を比較した。ま
た、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓの
一部に脱イオン水を加え攪拌静置し、上澄をデカンテー
ションにて捨て、再度脱イオン水を加えた。この操作を
数回繰返し上澄についてもＵＶスペクトルを測定し、２
６０ｎｍ付近にピークが見られなくなるまで続けた。そ
の後風乾し、２０ｍｇをとって１０ｍｌの脱イオン水に
懸濁した。これらを８０℃で２０分間加熱した。放冷後
の各試料の上澄を同様に紫外部の吸光度を測定した。
【００１９】さらに、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−
ＡＬ−ＣＡ−Ｓを水洗しＤＮＡの溶出の見られなくなっ
たものとシリカゲルだけのものをそれぞれ１００ｍｇず
つとり、１０ｍｌの脱イオン水にそれぞれ混入した。こ
れらの懸濁液にエチジウムブロミド（ＥＢ）をそれぞれ
１０ｍｇずつ添加し攪拌して溶解させ放置した。ＤＮＡ
−Ｓ，ＤＮＡ−ＡＬ−Ｓ，ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮ
Ａ−ＡＬ−ＣＡ−ＳのＵＶスペクトル測定結果を図４お
よび図５にそれぞれ示した。図５のように、カルシウム
イオンが存在した場合、図４の、カルシウムイオンが存
在しない場合よりもＤＮＡが相対的にかなり吸着される
ことがわかる。これは、ＤＮＡ及びシリカゲルの負の極
性を持つ部位がカルシウムイオンによって何らかの形で
架橋を形成したものと推定することができる。しかしな
がら、これとは別に、物理的な作用によってＤＮＡがシ
リカゲル表面に吸着されたことも十分に考えられる。こ
こで興味深いことにＤＮＡ−ＳとＤＮＡ−ＡＬ−Ｓとで
は明かに後者のものからより多くのＤＮＡの溶出が認め
られるのに対し、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ
−ＣＡ−Ｓではわずかながらに前者のものからの溶出の
程度が大きいことが判明した。これは、ＤＮＡとＤＮＡ
アルギン酸の複合体では、ＤＮＡだけのものがシリカゲ
ルへの物理化学的な吸着が強い一方で、これらの系にカ
ルシウムイオンが存在すると吸着の強さも強固になり、
その程度もＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ
−Ｓで逆転するところから、吸着の様式も変化するもの
と考えられる。
ＡＬ−ＣＡ−Ｓを水洗しＤＮＡの溶出の見られなくなっ
たものとシリカゲルだけのものをそれぞれ１００ｍｇず
つとり、１０ｍｌの脱イオン水にそれぞれ混入した。こ
れらの懸濁液にエチジウムブロミド（ＥＢ）をそれぞれ
１０ｍｇずつ添加し攪拌して溶解させ放置した。ＤＮＡ
−Ｓ，ＤＮＡ−ＡＬ−Ｓ，ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮ
Ａ−ＡＬ−ＣＡ−ＳのＵＶスペクトル測定結果を図４お
よび図５にそれぞれ示した。図５のように、カルシウム
イオンが存在した場合、図４の、カルシウムイオンが存
在しない場合よりもＤＮＡが相対的にかなり吸着される
ことがわかる。これは、ＤＮＡ及びシリカゲルの負の極
性を持つ部位がカルシウムイオンによって何らかの形で
架橋を形成したものと推定することができる。しかしな
がら、これとは別に、物理的な作用によってＤＮＡがシ
リカゲル表面に吸着されたことも十分に考えられる。こ
こで興味深いことにＤＮＡ−ＳとＤＮＡ−ＡＬ−Ｓとで
は明かに後者のものからより多くのＤＮＡの溶出が認め
られるのに対し、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ
−ＣＡ−Ｓではわずかながらに前者のものからの溶出の
程度が大きいことが判明した。これは、ＤＮＡとＤＮＡ
アルギン酸の複合体では、ＤＮＡだけのものがシリカゲ
ルへの物理化学的な吸着が強い一方で、これらの系にカ
ルシウムイオンが存在すると吸着の強さも強固になり、
その程度もＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ
−Ｓで逆転するところから、吸着の様式も変化するもの
と考えられる。
【００２０】なお、水洗したＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤ
ＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓ水溶液の加熱処理のＵＶスペクト
ルの測定結果を図６に示した。いちどＤＮＡの溶出が見
られなくなった試料について加熱処理を行うことで再び
ＤＮＡの溶出が確認されたことから、熱変性ＤＮＡの溶
出であるにせよ、そのことからシリカゲルにＤＮＡが吸
着結合していたことが確認される。
ＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−Ｓ水溶液の加熱処理のＵＶスペクト
ルの測定結果を図６に示した。いちどＤＮＡの溶出が見
られなくなった試料について加熱処理を行うことで再び
ＤＮＡの溶出が確認されたことから、熱変性ＤＮＡの溶
出であるにせよ、そのことからシリカゲルにＤＮＡが吸
着結合していたことが確認される。
【００２１】また、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳおよびＤＮＡ−Ａ
Ｌ−ＣＡ−Ｓ試料懸濁液およびシリカゲル懸濁液につい
てＥＢの吸着を観察したところ、ＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡＳ
＞＞ＤＮＡ−ＣＡ−Ｓ＞Ｓであった。ＤＮＡ−ＡＬ−Ｃ
Ａ−ＳとＤＮＡ−ＣＡ−Ｓとの間にはかなりの色の変化
の差があることから、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳにはＤＮＡが二
重らせん構造をとらずに吸着し、ＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−
Ｓには立体構造を保持したままで吸着したものと考える
ことができる。
Ｌ−ＣＡ−Ｓ試料懸濁液およびシリカゲル懸濁液につい
てＥＢの吸着を観察したところ、ＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡＳ
＞＞ＤＮＡ−ＣＡ−Ｓ＞Ｓであった。ＤＮＡ−ＡＬ−Ｃ
Ａ−ＳとＤＮＡ−ＣＡ−Ｓとの間にはかなりの色の変化
の差があることから、ＤＮＡ−ＣＡ−ＳにはＤＮＡが二
重らせん構造をとらずに吸着し、ＤＮＡ−ＡＬ−ＣＡ−
Ｓには立体構造を保持したままで吸着したものと考える
ことができる。
【００２２】以上のことから、ＤＮＡ吸着シリカゲルを
各種クロマトグラフィーの担体として使用し、ＤＮＡの
立体特異性を生かした各方面での画期的な分離精製が期
待できる。実施例３ ＤＮＡ−Ｎａ（５４．５ｍｇ）とアルギン酸−Ｎａ（６
６．３ｍｇ）を混合し、５，１０，１５，２０，４０ｍ
ｌの脱イオン水で１日−２日冷蔵庫で溶解させたのち、
それぞれシリカゲル（クロマト用）を４，７，１０，１
５ｇ加え攪拌、一日冷蔵庫で放置したのちデシケータ中
で乾燥し１０％ＣａＣｌ2 溶液中で凝固させた。そのの
ち脱イオン水でＤＮＡが溶出してこなくなるまで洗浄
し、デシケータ中で乾燥し、ＤＮＡ固定化複合体を調製
した（４８mesh以下を集める）。
各種クロマトグラフィーの担体として使用し、ＤＮＡの
立体特異性を生かした各方面での画期的な分離精製が期
待できる。実施例３ ＤＮＡ−Ｎａ（５４．５ｍｇ）とアルギン酸−Ｎａ（６
６．３ｍｇ）を混合し、５，１０，１５，２０，４０ｍ
ｌの脱イオン水で１日−２日冷蔵庫で溶解させたのち、
それぞれシリカゲル（クロマト用）を４，７，１０，１
５ｇ加え攪拌、一日冷蔵庫で放置したのちデシケータ中
で乾燥し１０％ＣａＣｌ2 溶液中で凝固させた。そのの
ち脱イオン水でＤＮＡが溶出してこなくなるまで洗浄
し、デシケータ中で乾燥し、ＤＮＡ固定化複合体を調製
した（４８mesh以下を集める）。
【００２３】シリカゲルに吸着されたＤＮＡの量は、
０．１Ｎ−ＮａＯＨ溶液中でＤＮＡを溶解させてＤＮＡ
の２６０ｎｍの吸収を測定して判定した。その結果、前
記複合体における吸着ＤＮＡ量は、次の表１のとおりで
あった。
０．１Ｎ−ＮａＯＨ溶液中でＤＮＡを溶解させてＤＮＡ
の２６０ｎｍの吸収を測定して判定した。その結果、前
記複合体における吸着ＤＮＡ量は、次の表１のとおりで
あった。
【００２４】
【表１】
【００２５】続いて、表１に示したＤＮＡ吸着量１．０
００ｍｇ／１ｇ−シリカゲルの複合体を試料に用いてＤ
ＮＡの溶出試験を行った。溶出は、試料１ｇ（シリカゲ
ルＤＮＡ−アルギン酸複合体）／２０ｍｌ（溶液）の条
件において行った。図７は、ｐＨと塩濃度の、ＤＮＡシ
リカゲル複合体からのＤＮＡ溶出割合（％）との関係を
示したものであり、図８は、塩濃度を変化させた場合の
溶出割合（％）を示したものである。
００ｍｇ／１ｇ−シリカゲルの複合体を試料に用いてＤ
ＮＡの溶出試験を行った。溶出は、試料１ｇ（シリカゲ
ルＤＮＡ−アルギン酸複合体）／２０ｍｌ（溶液）の条
件において行った。図７は、ｐＨと塩濃度の、ＤＮＡシ
リカゲル複合体からのＤＮＡ溶出割合（％）との関係を
示したものであり、図８は、塩濃度を変化させた場合の
溶出割合（％）を示したものである。
【００２６】これらの結果は、ｐＨ条件や塩濃度によっ
て複合体からのＤＮＡ溶出量が制御されることを示して
いる。図中の符号は次のものを示している。 Ａ：０．０３Ｍ酢酸バッファー ｐＨ５．０，５００ｍＭ ＮａＣｌ Ｂ：１０ｍＭ Tris−ＨＣｌ ｐＨ７．５，５００ｍＭ ＮａＣｌ Ｃ：０．０３Ｍ酢酸バッファー ｐＨ５．０，１００ｍＭ ＨＣｌ Ｄ：１０ｍＭ Tris−ＨＣｌ ｐＨ７．４，１００ｍＭ ＮａＣｌ Ｅ：水 Ｆ：５００ｍＭ ＮａＣｌ（５ｍＭ Tris−ＨＣｌ，ｐ
Ｈ７．４） Ｇ：１００ｍＭ ＮａＣｌ（同上） Ｈ：０ｍＭ ＮａＣｌ（同上）実施例４ ＤＮＡ−Ｎａ １３５．５ｍｇを脱イオン水 ５０ｍｌ
と混合し、ＤＮＡ−Ｎａ溶液を調製した。このものをＤ
ＮＡ−Ｎａ濃度１の溶液と規定し、同様にして、ＤＮＡ
−Ｎａ濃度が１／１０、１／５、２／５、３／５、４／
５の溶液も各々調製した。
て複合体からのＤＮＡ溶出量が制御されることを示して
いる。図中の符号は次のものを示している。 Ａ：０．０３Ｍ酢酸バッファー ｐＨ５．０，５００ｍＭ ＮａＣｌ Ｂ：１０ｍＭ Tris−ＨＣｌ ｐＨ７．５，５００ｍＭ ＮａＣｌ Ｃ：０．０３Ｍ酢酸バッファー ｐＨ５．０，１００ｍＭ ＨＣｌ Ｄ：１０ｍＭ Tris−ＨＣｌ ｐＨ７．４，１００ｍＭ ＮａＣｌ Ｅ：水 Ｆ：５００ｍＭ ＮａＣｌ（５ｍＭ Tris−ＨＣｌ，ｐ
Ｈ７．４） Ｇ：１００ｍＭ ＮａＣｌ（同上） Ｈ：０ｍＭ ＮａＣｌ（同上）実施例４ ＤＮＡ−Ｎａ １３５．５ｍｇを脱イオン水 ５０ｍｌ
と混合し、ＤＮＡ−Ｎａ溶液を調製した。このものをＤ
ＮＡ−Ｎａ濃度１の溶液と規定し、同様にして、ＤＮＡ
−Ｎａ濃度が１／１０、１／５、２／５、３／５、４／
５の溶液も各々調製した。
【００２７】ガラスフィルター（Filter Paper：Advant
ec TOYO, ＧＡ１００，SIZE ２５ｍｍ）を、これら各
々の濃度のＤＮＡ−Ｎａ溶液に浸し、風乾した後に、２
６０ｎｍのＵＶ吸収スペクトルを測定して吸収が見られ
なくなるまで水洗いし、次いで風乾した。得られたＤＮ
Ａ固定化複合体について、そのＤＮＡ含有量を、各々の
試料を１０ｍｌ脱イオン水に浸し、８０〜９０℃の湯に
３０分間浸し、その後ＵＶ吸収スペクトルを測定するこ
とで判定した。
ec TOYO, ＧＡ１００，SIZE ２５ｍｍ）を、これら各
々の濃度のＤＮＡ−Ｎａ溶液に浸し、風乾した後に、２
６０ｎｍのＵＶ吸収スペクトルを測定して吸収が見られ
なくなるまで水洗いし、次いで風乾した。得られたＤＮ
Ａ固定化複合体について、そのＤＮＡ含有量を、各々の
試料を１０ｍｌ脱イオン水に浸し、８０〜９０℃の湯に
３０分間浸し、その後ＵＶ吸収スペクトルを測定するこ
とで判定した。
【００２８】ＤＮＡ １μｇ／ｍｌ、２６０ｎｍでａｂ
ｓが約０．０２を基準にしてＤＮＡ含有量を求めた。そ
の結果を次の表２に示した。
ｓが約０．０２を基準にしてＤＮＡ含有量を求めた。そ
の結果を次の表２に示した。
【００２９】
【表２】
【００３０】一方、前記のガラスフィルターを、ＤＮＡ
−Ｎａ溶液に浸した後にＣａＣｌ2水溶液に２〜３分浸
し、風乾し、２６０ｎｍのＵＶ吸収スペクトルの測定で
吸収が見られなくなるまで水洗いし、その後風乾するこ
とにより得たＤＮＡ固定化複合体についても前記と同様
にしてＤＮＡ含有量を判定した。その結果を表３に示し
た。
−Ｎａ溶液に浸した後にＣａＣｌ2水溶液に２〜３分浸
し、風乾し、２６０ｎｍのＵＶ吸収スペクトルの測定で
吸収が見られなくなるまで水洗いし、その後風乾するこ
とにより得たＤＮＡ固定化複合体についても前記と同様
にしてＤＮＡ含有量を判定した。その結果を表３に示し
た。
【００３１】
【表３】
【００３２】なお、温度差によるＤＮＡ固定化含有量の
変化を見るため、前記のＤＮＡ濃度４／５の複合体を１
０ｍｌの脱イオン水に浸し、各種温度で攪拌し、時間毎
にＵＶ吸収スペクトルを判定した。その結果を（２６０
ｎｍ−３２０ｎｍ）のａｂｓの差として示したものが表
４である。この表４からは、一般に温度が上昇するとａ
ｂｓが上昇、つまりＤＮＡの離脱が多くなり、また、３
０℃をピークに温度が上昇するとａｂｓが減少している
ことがわかる。
変化を見るため、前記のＤＮＡ濃度４／５の複合体を１
０ｍｌの脱イオン水に浸し、各種温度で攪拌し、時間毎
にＵＶ吸収スペクトルを判定した。その結果を（２６０
ｎｍ−３２０ｎｍ）のａｂｓの差として示したものが表
４である。この表４からは、一般に温度が上昇するとａ
ｂｓが上昇、つまりＤＮＡの離脱が多くなり、また、３
０℃をピークに温度が上昇するとａｂｓが減少している
ことがわかる。
【００３３】
【表４】
【００３４】実施例５ ＤＮＡ−Ｎａ ２７２．７ｍｇ、アルギン酸Ｎａ ３３
０．９ｍｇおよび脱イオン水 １００ｍｌとを混合し、
ＤＮＡアルギン酸溶液を調製した。このものを濃度１の
溶液とし、同様にして、濃度１／１０、１／５、２／
５、３／５、４／５の溶液も各々調製した。
０．９ｍｇおよび脱イオン水 １００ｍｌとを混合し、
ＤＮＡアルギン酸溶液を調製した。このものを濃度１の
溶液とし、同様にして、濃度１／１０、１／５、２／
５、３／５、４／５の溶液も各々調製した。
【００３５】実施例４で用いたガラスフィルターを、こ
れら各々の濃度の溶液に浸し、ＣａＣｌ2 水溶液に浸
し、風乾し、実施例４と同様に水洗いの後に風乾してＤ
ＮＡ固定化複合体を得た。これらの複合体を２％（２ｇ
／１００ｍｌ）のＥＤＴＡ溶液１０ｍｌに浸し、１日放
置した後にＵＶ吸収スペクトルを測定して実施例４と同
様にして複合体におけるＤＮＡ含有量を判定した。その
結果を表５に示した。
れら各々の濃度の溶液に浸し、ＣａＣｌ2 水溶液に浸
し、風乾し、実施例４と同様に水洗いの後に風乾してＤ
ＮＡ固定化複合体を得た。これらの複合体を２％（２ｇ
／１００ｍｌ）のＥＤＴＡ溶液１０ｍｌに浸し、１日放
置した後にＵＶ吸収スペクトルを測定して実施例４と同
様にして複合体におけるＤＮＡ含有量を判定した。その
結果を表５に示した。
【００３６】
【表５】
【００３７】実施例６ 目付（１ｍ2 当りの重量）６０ｇ／ｍ2 のエジプト綿か
らなるセルロース不織布（２×２ｃｍ）を用い、実施例
４および５と同様の方法によって、濃度が、１、１／１
０、２／５、３／５、４／５の、ＤＮＡ溶液、ＤＮＡ＋
ＣａＣｌ2 およびＤＮＡアルギン酸からのＤＮＡ固定化
複合体を調製した。
らなるセルロース不織布（２×２ｃｍ）を用い、実施例
４および５と同様の方法によって、濃度が、１、１／１
０、２／５、３／５、４／５の、ＤＮＡ溶液、ＤＮＡ＋
ＣａＣｌ2 およびＤＮＡアルギン酸からのＤＮＡ固定化
複合体を調製した。
【００３８】そして、実施例４および５と同様にして、
これら複合体におけるＤＮＡ含有量（μｇ／１０ｍｌ）
を測定した。その結果を示したものが表６である。
これら複合体におけるＤＮＡ含有量（μｇ／１０ｍｌ）
を測定した。その結果を示したものが表６である。
【００３９】
【表６】
【００４０】不織布の場合、製作が容易であって、通気
性もあり、たとえばＤＤＳ等に利用する場合には、傷口
に貼る際において、貼り心地がよいとか、化膿によるよ
けいな体液を浸出させることが可能である等の応用面で
の効果も大きい。実施例７ 実施例５と同様にして調製したＤＮＡ・アルギン酸−ガ
ラスフィルター固定化複合体の濃度３／２０のものを用
い、エチジウムブロミドの吸着について評価した。
性もあり、たとえばＤＤＳ等に利用する場合には、傷口
に貼る際において、貼り心地がよいとか、化膿によるよ
けいな体液を浸出させることが可能である等の応用面で
の効果も大きい。実施例７ 実施例５と同様にして調製したＤＮＡ・アルギン酸−ガ
ラスフィルター固定化複合体の濃度３／２０のものを用
い、エチジウムブロミドの吸着について評価した。
【００４１】エチジウムブロミド２０μＭの場合、可視
光線吸収スペクトル４８０ｎｍで吸収（ａｂｓ）０．１
１１のレベルにあるが、このエチジウムブロミド水溶液
５ｍｌを吸引濾過した後の吸収スペクトルをみると、ほ
とんどのエチジウムブロミドが複合体に吸着されている
ことが確認された。また、実施例６により調製した濃度
１／５のＤＮＡセルロース複合体を用いて、アクリジン
オレンジ水溶液（５０μＭ、可視光線スペクトル４９
１．０ｎｍ、吸収１．５４２ａｂｓ）の吸着についても
評価したところ、ほとんどのアクリジンオレンジが前記
複合体に吸着されることが確認された。一方、濃度１の
場合の複合体ではあまり吸着しないことも確認された。
光線吸収スペクトル４８０ｎｍで吸収（ａｂｓ）０．１
１１のレベルにあるが、このエチジウムブロミド水溶液
５ｍｌを吸引濾過した後の吸収スペクトルをみると、ほ
とんどのエチジウムブロミドが複合体に吸着されている
ことが確認された。また、実施例６により調製した濃度
１／５のＤＮＡセルロース複合体を用いて、アクリジン
オレンジ水溶液（５０μＭ、可視光線スペクトル４９
１．０ｎｍ、吸収１．５４２ａｂｓ）の吸着についても
評価したところ、ほとんどのアクリジンオレンジが前記
複合体に吸着されることが確認された。一方、濃度１の
場合の複合体ではあまり吸着しないことも確認された。
【００４２】以上のことからは、ＤＮＡ固定化複合体に
おいては、その構成と、ＤＮＡ濃度とによって、各種の
変異原物質の吸着をコントロールすることができ、この
点でクロマトグラフィー担体としての有効性が確認され
た。
おいては、その構成と、ＤＮＡ濃度とによって、各種の
変異原物質の吸着をコントロールすることができ、この
点でクロマトグラフィー担体としての有効性が確認され
た。
【００４３】
【発明の効果】以上詳しく説明したように、この出願の
発明のＤＮＡ固定化複合体によって、ＤＮＡのより安定
した固定が可能とされ、各種の機能材料、たとえば徐放
性ＤＮＡ、ＤＮＡ立体特異性の維持等の特徴を生かして
のＤＤＳやクロマトグラフィー担体、細胞増殖抑制剤等
の新しい創製が可能とされる。
発明のＤＮＡ固定化複合体によって、ＤＮＡのより安定
した固定が可能とされ、各種の機能材料、たとえば徐放
性ＤＮＡ、ＤＮＡ立体特異性の維持等の特徴を生かして
のＤＤＳやクロマトグラフィー担体、細胞増殖抑制剤等
の新しい創製が可能とされる。
【図１】この発明のＤＮＡ固定化複合体としてハイドロ
キシアパタイトを用いた場合の安定したＤＮＡ固定化能
の評価として、培地へのＤＮＡ溶出の割合を示した図で
ある。
キシアパタイトを用いた場合の安定したＤＮＡ固定化能
の評価として、培地へのＤＮＡ溶出の割合を示した図で
ある。
【図２】図１の複合体についてゲル中に吸着保持された
ＤＮＡ量の割合を、ＥＤＴＡ溶液による溶解の結果とし
て示した図である。
ＤＮＡ量の割合を、ＥＤＴＡ溶液による溶解の結果とし
て示した図である。
【図３】図２に対応して、ハイドロキシアパタイトに吸
着保持されたＤＮＡ量の割合を示した図である。
着保持されたＤＮＡ量の割合を示した図である。
【図４】（ａ）（ｂ）は、各々、ＤＮＡ−シリカゲル、
およびＤＮＡ−アルギン酸−シリカゲル複合体における
ＤＮＡの吸着保持性能を示したＵＶ吸収スペクトル図で
ある。
およびＤＮＡ−アルギン酸−シリカゲル複合体における
ＤＮＡの吸着保持性能を示したＵＶ吸収スペクトル図で
ある。
【図５】（ａ）（ｂ）は、各々、ＤＮＡ−カルシウム−
シリカゲルおよびＤＮＡ−アルギン酸−カルシウム−シ
リカゲル複合体におけるＤＮＡ吸着保持性能を示したＵ
Ｖ吸収スペクトル図である。
シリカゲルおよびＤＮＡ−アルギン酸−カルシウム−シ
リカゲル複合体におけるＤＮＡ吸着保持性能を示したＵ
Ｖ吸収スペクトル図である。
【図６】（ａ）（ｂ）は、各々、ＤＮＡ−カルシウム−
シリカゲル、ＤＮＡ−アルギン酸−カルシウム−シリカ
ゲル複合体の水洗加熱処理後のＤＮＡ吸着保持性能を示
したＵＶ吸収スペクトル図である。
シリカゲル、ＤＮＡ−アルギン酸−カルシウム−シリカ
ゲル複合体の水洗加熱処理後のＤＮＡ吸着保持性能を示
したＵＶ吸収スペクトル図である。
【図７】ｐＨおよび塩濃度と、ＤＮＡ溶出割合（％）と
の関係を示した図である。
の関係を示した図である。
【図８】塩濃度と溶出割合（％）との関係を示した図で
ある。
ある。
Claims (9)
- 【請求項１】 ＤＮＡが固定化されている複合体であっ
て、ＤＮＡの固定化担体が無機質固体であることを特徴
とするＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項２】 無機質固体が、カルシウム含有物質であ
る請求項１のＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項３】 無機質固体が多孔質体である請求項１の
ＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項４】 無機質固体が、繊維またはその集合体で
ある請求項１のＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項５】 無機質固体がハイドロキシアパタイトま
たはシリカゲルである請求項１のＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項６】 ＤＮＡが固定化されている複合体であっ
て、ＤＮＡの固定化担体が有機質固体であることを特徴
とするＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項７】 請求項１ないし６のいずれかの複合体に
おいて、ＤＮＡとともに多糖類またはその誘導体、もし
くは蛋白質が含まれているＤＮＡ固定化複合体。 - 【請求項８】 アルギン酸が含まれている請求項７のＤ
ＮＡ固定化複合体。 - 【請求項９】 請求項１ないし８のいずれかの複合体に
おいて、カルシウム化合物またはカルシウムイオンが含
まれているＤＮＡ固定化複合体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34023796A JP3217286B2 (ja) | 1996-12-19 | 1996-12-19 | Ｄｎａ固定化複合体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34023796A JP3217286B2 (ja) | 1996-12-19 | 1996-12-19 | Ｄｎａ固定化複合体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10175994A true JPH10175994A (ja) | 1998-06-30 |
| JP3217286B2 JP3217286B2 (ja) | 2001-10-09 |
Family
ID=18335022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34023796A Expired - Fee Related JP3217286B2 (ja) | 1996-12-19 | 1996-12-19 | Ｄｎａ固定化複合体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3217286B2 (ja) |
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