JPS596883A - 人尿カリクレインの濃縮精製法 - Google Patents
人尿カリクレインの濃縮精製法Info
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- JPS596883A JPS596883A JP57113364A JP11336482A JPS596883A JP S596883 A JPS596883 A JP S596883A JP 57113364 A JP57113364 A JP 57113364A JP 11336482 A JP11336482 A JP 11336482A JP S596883 A JPS596883 A JP S596883A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6445—Kallikreins (3.4.21.34; 3.4.21.35)
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は人尿カリクレインｃ以下）ＩＵＫＮ、ｐ略称す
ることもある）を人尿より工業的規模で収率良く、高純
度に取得する方法に関するものである。
ることもある）を人尿より工業的規模で収率良く、高純
度に取得する方法に関するものである。
カリクレインは動物の生体内各部で生産される蛋白質分
解酵素で、血清中のキニノーゲンを分解してキニンを生
成せしめ、それを介して血圧降下、血流量増加等の作用
を有する。このものはこれまで禰乳動物、特に豚の膵臓
及び尿を原料として精製されてきた。しかしながら、従
来の異種動物を起源とするものは、非経口的に投与する
と異種蛋白による抗原抗体反応などの副作用が生じる可
能性がある。人尿を原料とするＨ Ｕ Ｋ Ｎは、同種
蛋白であるため、抗原抗体反応などの副作用はなく、た
とえＨＵＫＮ以外の夾雑蛋白を含んでいたとしても、人
体に対する副作用は極めて少ない。
解酵素で、血清中のキニノーゲンを分解してキニンを生
成せしめ、それを介して血圧降下、血流量増加等の作用
を有する。このものはこれまで禰乳動物、特に豚の膵臓
及び尿を原料として精製されてきた。しかしながら、従
来の異種動物を起源とするものは、非経口的に投与する
と異種蛋白による抗原抗体反応などの副作用が生じる可
能性がある。人尿を原料とするＨ Ｕ Ｋ Ｎは、同種
蛋白であるため、抗原抗体反応などの副作用はなく、た
とえＨＵＫＮ以外の夾雑蛋白を含んでいたとしても、人
体に対する副作用は極めて少ない。
ＨＵＫＮの人尿からの濃縮精製法としては、シリカゲル
を用いる方法（特公昭４．６−１９０６７ ）アルギニ
ン−セファロースを用いる方法（特開昭５５−９９１９
１）、第三級アミンを交換基とする高架橋度マクロポー
ラス型陰イオン交換樹脂を用いる方法（特開昭５Ｏ−５
５１５）等が知られている。
を用いる方法（特公昭４．６−１９０６７ ）アルギニ
ン−セファロースを用いる方法（特開昭５５−９９１９
１）、第三級アミンを交換基とする高架橋度マクロポー
ラス型陰イオン交換樹脂を用いる方法（特開昭５Ｏ−５
５１５）等が知られている。
しかし、これらの方法は精製度、回収率、経費および操
作簡便性の面で必ずしも満足のいくものとは言い難い。
作簡便性の面で必ずしも満足のいくものとは言い難い。
そこで本発明者らは、人尿を原料とし工業的規模で収率
良く、高純度なカリクレインの得られる精製法を鋭意研
究した。
良く、高純度なカリクレインの得られる精製法を鋭意研
究した。
本発明者らは、各種無機吸着剤、イオン交換体たん白凝
集剤等の材料について尿よりのＨＵＫＮの回収率、精製
倍率を次のよう【こ比較検討した。
集剤等の材料について尿よりのＨＵＫＮの回収率、精製
倍率を次のよう【こ比較検討した。
同一正常人尿を１ｊずつ番こ分割して試料とし、」１記
の各材料５りずつを用いて吸着、溶出して溶出液中のＨ
ＩＪ Ｋ Ｎ活性およびたん白質量を測定して回収率と
比活性を算出し次表の結果を得た。
の各材料５りずつを用いて吸着、溶出して溶出液中のＨ
ＩＪ Ｋ Ｎ活性およびたん白質量を測定して回収率と
比活性を算出し次表の結果を得た。
表中、盃］〜；３の吸着剤は和光紬薬（株〕製で、Ａｌ
は商品名ワコーゲルＣ−１００として市販され、扁２は
２００〜３００メツシユである。同席４・はブラウン社
（西独）製、Ａ５と蔦７はファルマシアＣジャパン）製
、Ａ６は三菱化成工業Ｃ株〕製、盃８は共和油脂工業、
０株）製で、商品名フローナック１寸として市販されて
いる。
は商品名ワコーゲルＣ−１００として市販され、扁２は
２００〜３００メツシユである。同席４・はブラウン社
（西独）製、Ａ５と蔦７はファルマシアＣジャパン）製
、Ａ６は三菱化成工業Ｃ株〕製、盃８は共和油脂工業、
０株）製で、商品名フローナック１寸として市販されて
いる。
上記結果より、キ１−リ゛ンは、ＨＵ Ｋ Ｎを選４Ｒ
（ＹＪに吸着し、回収率、精製倍率が優れていることを
見いだした。キトサンは、カニあるいはエビ等の甲設類
の皮殻から製したキチンを淵アルカリで加熱加水分解し
たもので［２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−クルコース
］■）の構造を有する多糖類で分子量は約２０力で、粒
度３，５ｍｍ以下の有効かつ無害な高分子凝集剤として
使用されている。
（ＹＪに吸着し、回収率、精製倍率が優れていることを
見いだした。キトサンは、カニあるいはエビ等の甲設類
の皮殻から製したキチンを淵アルカリで加熱加水分解し
たもので［２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−クルコース
］■）の構造を有する多糖類で分子量は約２０力で、粒
度３，５ｍｍ以下の有効かつ無害な高分子凝集剤として
使用されている。
本発明は上記の発見に基づくもので、人尿とキトサンを
：［）Ｈ４，，０〜７．０で接触させることにより尿中
のカリクレインを選択曲番こキトザンに吸着させ、次い
で吸着体よりアルカリ性溶液でカリクレインを溶出する
ことを特徴とするカリクレインの濃縮精製法である。
：［）Ｈ４，，０〜７．０で接触させることにより尿中
のカリクレインを選択曲番こキトザンに吸着させ、次い
で吸着体よりアルカリ性溶液でカリクレインを溶出する
ことを特徴とするカリクレインの濃縮精製法である。
キトサンと接触さぜる人尿のｐＨは４．０〜７．０１好
ましくは５．０に調整するのがよい。
ましくは５．０に調整するのがよい。
よい。
キトサンの使用量は一般に１〜］ｏｙ程度ソγトサンを
接触させることにより人尿中のＨＵＫＮは選択的にキト
サンに吸着される。
接触させることにより人尿中のＨＵＫＮは選択的にキト
サンに吸着される。
吸着は常温で行いうる。
吸着体を沖取し、水で充分洗浄したのち、アルカリ性溶
液でＨＵ Ｋ Ｎを溶出する。アルカリ性溶液のｐＨは
８．０〜］２０の範囲とするのが望ましく、そのような
溶液の好ましい例は、たとえば、ＩＮ−アンモニア水、
０．］〜０３Ｍトリス塩酸緩衝液、０．２１１１１Ｊス
喘酸Ｂ紗衝液などである。
液でＨＵ Ｋ Ｎを溶出する。アルカリ性溶液のｐＨは
８．０〜］２０の範囲とするのが望ましく、そのような
溶液の好ましい例は、たとえば、ＩＮ−アンモニア水、
０．］〜０３Ｍトリス塩酸緩衝液、０．２１１１１Ｊス
喘酸Ｂ紗衝液などである。
キトサンを吸着体として用いることによりＨＵＫＷを選
択的１こ吸着させることができるばかりでなく、吸着体
の分篩、洗浄、溶出を従来の方法におけるよりも短時間
に行うことができ、また尿の処理を大量に行なう場合に
は吸引濾過法、遠心分離法等の簡便な操作を適用できる
のできわめて有利である。
択的１こ吸着させることができるばかりでなく、吸着体
の分篩、洗浄、溶出を従来の方法におけるよりも短時間
に行うことができ、また尿の処理を大量に行なう場合に
は吸引濾過法、遠心分離法等の簡便な操作を適用できる
のできわめて有利である。
大尿中に万一混入するかも知れない肝炎ビールス等を不
活性化するためには、Ｔ（ＵＫＮを吸着したキトサンを
、たとえばｐＨ６，０の緩衝液中で６゜°Ｃ，Ｉｎ時間
以上加温したのち、吸着体がらＨＵＫＮを溶出してもよ
い。
活性化するためには、Ｔ（ＵＫＮを吸着したキトサンを
、たとえばｐＨ６，０の緩衝液中で６゜°Ｃ，Ｉｎ時間
以上加温したのち、吸着体がらＨＵＫＮを溶出してもよ
い。
吸着剤としてイオン交換体や無機吸着剤を用いる場合、
溶出後の吸着剤を再生するためには酸および７ ＪＬ／
カリ溶液による洗浄や加熱による活性化等の工程を要
するが、本発明のキトサンを用いた場合は溶出後の吸着
を水洗するだけで再使用することができる。
溶出後の吸着剤を再生するためには酸および７ ＪＬ／
カリ溶液による洗浄や加熱による活性化等の工程を要
するが、本発明のキトサンを用いた場合は溶出後の吸着
を水洗するだけで再使用することができる。
以下の実施開−こより、本発明をさらに詳細番こ説明す
る。
る。
実施例１゜
健康な成人男子尿１０１に攪拌しながら２Ｎ−塩酸を加
え、１）Ｈ５，５１こ調整した。これにキトサン１００
ｙを加え、１時間攪拌してＨＵ Ｋ Ｎを吸着せしめた
後、渥過番こてＨＵＫＮ−吸着体を得た。
え、１）Ｈ５，５１こ調整した。これにキトサン１００
ｙを加え、１時間攪拌してＨＵ Ｋ Ｎを吸着せしめた
後、渥過番こてＨＵＫＮ−吸着体を得た。
次にその吸着体を純水にて十分洗浄した。そしてその吸
着体から１Ｎ−アンモニア水で溶出・濾過を行なってＨ
Ｕ Ｋ Ｎ−抽出液４００ ｍｅを得た。
着体から１Ｎ−アンモニア水で溶出・濾過を行なってＨ
Ｕ Ｋ Ｎ−抽出液４００ ｍｅを得た。
得られたＨＵＫＮの総活性は１３６８単位（回収率７２
ｑ６）、純度は蛋白質１ ｙＲｔ当り３４．単位であっ
た。
ｑ６）、純度は蛋白質１ ｙＲｔ当り３４．単位であっ
た。
実施例２゜
健康な成人男子尿１０１に攪拌しながら２Ｎ−塩酸を加
えＩ）Ｈ４・、５に調整する。これにキトサン５０ｙを
加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、濾過
にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にその吸着体を純水に
て十分洗浄した。そしてその吸着体から０．３ Ｍ −
） ！Ｊスス−酸緩衝液（ｐＨ１０，０）にて抽出し、
ＨＵＫＮ−抽出液３００ ｍｅを得た。
えＩ）Ｈ４・、５に調整する。これにキトサン５０ｙを
加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、濾過
にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にその吸着体を純水に
て十分洗浄した。そしてその吸着体から０．３ Ｍ −
） ！Ｊスス−酸緩衝液（ｐＨ１０，０）にて抽出し、
ＨＵＫＮ−抽出液３００ ｍｅを得た。
得られたＴ（ＵＫＮの総活性は１８５０単位（回収率７
１ ％ ）、純度は蛋白質１町・当り３３単位であった
。
１ ％ ）、純度は蛋白質１町・当り３３単位であった
。
実施例
健康な成人男子尿１０／に、攪拌しながら２Ｎ−塩酸を
加え、Ｉ）Ｈ６，５に調整する。これにキトサン１００
ｙを加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、
濾過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次に吸着体を純水に
て十分洗浄した。そしてその吸着体から０．１ Ｍ −
ト！Ｊスー塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）にて抽出した後、
濾過を行なってＨＵ Ｋ’Ｎ−抽出液４、ＯＯｍｅを得
た。
加え、Ｉ）Ｈ６，５に調整する。これにキトサン１００
ｙを加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、
濾過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次に吸着体を純水に
て十分洗浄した。そしてその吸着体から０．１ Ｍ −
ト！Ｊスー塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）にて抽出した後、
濾過を行なってＨＵ Ｋ’Ｎ−抽出液４、ＯＯｍｅを得
た。
得られたカリクレインの総活性は１２２５単位（回収率
７２％）、純度は蛋白質１ｒＩｕ／当り２７単位であっ
た。
７２％）、純度は蛋白質１ｒＩｕ／当り２７単位であっ
た。
実施例４・
健康な成人男子尿１． （］ ｆｌｉこ攪拌しながら２
Ｎ−塩酸を加えてｐＨ５，５に調整した。これにキトサ
ン５０ｆｌを加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せし
めた後、濾過（こてＨＵ Ｋ Ｎ−吸着体を得１こ〇次
ｌこその吸着体を０．１５Ｍ−塩化ナトリウムを含む０
．０５Ｍ−リン酸緩衝液（１）Ｈ６，０）で充分洗浄、
濾過しだ後同じ後刷液３００ ｍｅを加えて６０°Ｃ１
１０時間加温した。濾過にて吸着体を分離し、その吸着
体から１，５Ｎアンモニア水で溶出・濾過を行ってＨＵ
ＫＮ−抽出液４・５０ ｍｅを得た。
Ｎ−塩酸を加えてｐＨ５，５に調整した。これにキトサ
ン５０ｆｌを加えて１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せし
めた後、濾過（こてＨＵ Ｋ Ｎ−吸着体を得１こ〇次
ｌこその吸着体を０．１５Ｍ−塩化ナトリウムを含む０
．０５Ｍ−リン酸緩衝液（１）Ｈ６，０）で充分洗浄、
濾過しだ後同じ後刷液３００ ｍｅを加えて６０°Ｃ１
１０時間加温した。濾過にて吸着体を分離し、その吸着
体から１，５Ｎアンモニア水で溶出・濾過を行ってＨＵ
ＫＮ−抽出液４・５０ ｍｅを得た。
得られたＨ Ｕ Ｋ Ｎの総活性は１０８５単位（回収
率６５係）純度は蛋白質ｌ ｒａｆ当り３７単位であっ
た０ 実施例５゜ 健康な成人男子尿１０１に、２Ｎ−塩酸を攪拌しながら
加えて１）Ｈ５，０に調整する。これにキトサン１００
ｙを加え、１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、
沖過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にこの吸着体を純
水にて十分洗浄した。そしてその吸着体にＩＮ−アンモ
ニア水を加えて抽出後、沖過を行な−）てＨＵＫ、Ｎ−
抽出液４！ ００ ｍｅを得た。
率６５係）純度は蛋白質ｌ ｒａｆ当り３７単位であっ
た０ 実施例５゜ 健康な成人男子尿１０１に、２Ｎ−塩酸を攪拌しながら
加えて１）Ｈ５，０に調整する。これにキトサン１００
ｙを加え、１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着せしめた後、
沖過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にこの吸着体を純
水にて十分洗浄した。そしてその吸着体にＩＮ−アンモ
ニア水を加えて抽出後、沖過を行な−）てＨＵＫ、Ｎ−
抽出液４！ ００ ｍｅを得た。
得られたＨ ＩＴ Ｋ、 Ｈの総活性は］ ２６０単位
（回収率７■係）、純度は蛋白質］ワ・当たり３３単位
であった。
（回収率７■係）、純度は蛋白質］ワ・当たり３３単位
であった。
次に、そのＨＵＫ、Ｎ−抽出液を０．０５Ｍ−リン酸緩
衝液に対して透析し、同じＭ滴液で緩衝化しりＤＥＡＥ
−ＣｅｌｌｌｌｉｊＯｓｅ 力７ム（直径３σ。
衝液に対して透析し、同じＭ滴液で緩衝化しりＤＥＡＥ
−ＣｅｌｌｌｌｉｊＯｓｅ 力７ム（直径３σ。
高さ２０ｃｍ）に吸着させ、同じ緩衝液で洗浄した後０
．４． Ｍの塩化すトリウムを含む０．０５ Ｍ−リン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて溶出し、ＨＵＫＮ−溶液５
１ｍｅを得た。
．４． Ｍの塩化すトリウムを含む０．０５ Ｍ−リン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて溶出し、ＨＵＫＮ−溶液５
１ｍｅを得た。
得られたＨ Ｕ Ｋ Ｎの総活性は１０７０単位（回収
率７１％）、純度は蛋白質１ｒｎ１当たり３１０単位で
あった。。
率７１％）、純度は蛋白質１ｒｎ１当たり３１０単位で
あった。。
実施例６゜
健康な成人男子尿１０／に、２Ｎ−塩酸を攪拌しながら
加えてｐＨ５，０１こ調整する。これにキトサン１００
ｆｌを加えて、１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着ぜしめ
た後、沖過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にこの吸着
体を純水にて十分に洗浄した。
加えてｐＨ５，０１こ調整する。これにキトサン１００
ｆｌを加えて、１時間攪拌してＨＵＫＮを吸着ぜしめ
た後、沖過にてＨＵＫＮ−吸着体を得た。次にこの吸着
体を純水にて十分に洗浄した。
そしてその吸着体に０．２ Ｍ −１−ＩＪスス−酸緩
衝液（ｐＨ０，０）を加えて抽出し、沖過によってＨＵ
ＫＮ−抽出液８００ ｍｅを得た。
衝液（ｐＨ０，０）を加えて抽出し、沖過によってＨＵ
ＫＮ−抽出液８００ ｍｅを得た。
得られたＨ Ｕ Ｋ Ｎの総活性は１３８５単位（回収
率７１％）、純度は蛋白質、ｔｒｎｔ当たり３２単位で
あった。
率７１％）、純度は蛋白質、ｔｒｎｔ当たり３２単位で
あった。
次（ここのＨＵＫＮ−抽出液に硫酸アンモニウム２００
りを加え、生じた沈殿を遠心分離により得る。この沈殿
を０．１ Ｍ −！Ｊン酸緩衝液（］）Ｈ７，５）２５
ｍｅに溶解し、同じ緩衝液で緩衝化した５ｅｐｈａｄｅ
ｘ Ｇ−１００カラム（直径２．６ ａｍ 。
りを加え、生じた沈殿を遠心分離により得る。この沈殿
を０．１ Ｍ −！Ｊン酸緩衝液（］）Ｈ７，５）２５
ｍｅに溶解し、同じ緩衝液で緩衝化した５ｅｐｈａｄｅ
ｘ Ｇ−１００カラム（直径２．６ ａｍ 。
高さ１．００−）を通過させること【こよりＨＵＫＮ−
溶液を得た。
溶液を得た。
得られたＨＵＫＮの総活性は１．０９０単位（回収率５
６％）純度は蛋白質１ツ当たり２９０単位であった。
６％）純度は蛋白質１ツ当たり２９０単位であった。
実施例７゜
健康な成人男子尿２０１に、２Ｎ−塩酸を加えてｐＨ５
，ｆｌに調整し、キトサン２００！／を加えて１時間攪
拌してＨＵＫＮを吸着ぜしめた後、ｖ５過【こてＨＵＫ
Ｎ−吸着体を得た。さらにその吸着体を純水にて十分洗
浄した。次にその吸着体に０．２Ｍ−トリス−塩酸緩衝
液（ｐＨ９，０）を加えて抽出し、濾過によってＨＵＫ
Ｎ−抽出液８００ｍｅを得た。
，ｆｌに調整し、キトサン２００！／を加えて１時間攪
拌してＨＵＫＮを吸着ぜしめた後、ｖ５過【こてＨＵＫ
Ｎ−吸着体を得た。さらにその吸着体を純水にて十分洗
浄した。次にその吸着体に０．２Ｍ−トリス−塩酸緩衝
液（ｐＨ９，０）を加えて抽出し、濾過によってＨＵＫ
Ｎ−抽出液８００ｍｅを得た。
得られたＨＵＫＮの総活性は２８５６単位（回収率６８
％）、純度は蛋白質１■当たり３３単位であった。
％）、純度は蛋白質１■当たり３３単位であった。
次にその抽出液を０．５Ｍの塩化ナトリウノ・を含む０
．１Ｍ−炭酸水素す） ＩＪウムＭ衝液ｐＴ−［９，０
に対して透析し、同じ緩衝液で緩衝化したアプロチニン
−セファロースカラム（ＩｌｉｌＬ径２． Ｏｃｙｎ
、高す２０宜）に吸着させ、０．５Ｍの塩化ナトリウム
を含む０、１ Ｍ−酢酸緩衝液（ｐＨ３，５）にて溶出
してＨＵＫＮ−溶液２０ｍｅを得た。
．１Ｍ−炭酸水素す） ＩＪウムＭ衝液ｐＴ−［９，０
に対して透析し、同じ緩衝液で緩衝化したアプロチニン
−セファロースカラム（ＩｌｉｌＬ径２． Ｏｃｙｎ
、高す２０宜）に吸着させ、０．５Ｍの塩化ナトリウム
を含む０、１ Ｍ−酢酸緩衝液（ｐＨ３，５）にて溶出
してＨＵＫＮ−溶液２０ｍｅを得た。
得られたＨＵＫＮの総活性は２１４．２単位（回収率５
１ ％ ）、純度は蛋白質１町・当たり８４０単位であ
った。
１ ％ ）、純度は蛋白質１町・当たり８４０単位であ
った。
なお実施例１〜７１こおけるＨ Ｕ Ｋ Ｎの単位は、
本発明者らが人尿から抽出精製した）Ｉ Ｕ Ｋ Ｗを
血管拡張測定法（：ｆｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｊ、
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒ５’−５８１２０１，ｌ ９６５
）により単位を決定し、これを標準品として螢光合成基
質法（ＪＯｕｒｎａｌ、ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｙ ８２．１４＋９５＋１、９ ’／ ７ ）により
測定した。蛋白質量はＬｏｗｒｙ−ＦＯｌｌｎ 法を用
いて牛血清アルブミンを標準にして測定しＴこ。
本発明者らが人尿から抽出精製した）Ｉ Ｕ Ｋ Ｗを
血管拡張測定法（：ｆｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｊ、
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒ５’−５８１２０１，ｌ ９６５
）により単位を決定し、これを標準品として螢光合成基
質法（ＪＯｕｒｎａｌ、ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｙ ８２．１４＋９５＋１、９ ’／ ７ ）により
測定した。蛋白質量はＬｏｗｒｙ−ＦＯｌｌｎ 法を用
いて牛血清アルブミンを標準にして測定しＴこ。
出 願 人 日本ケミカルリサーチ株式会社（自発）
手続？１１１正姻 １、事件の表示 昭和５７年特許願第１１３３６４号２
、発明の名称 人尿カリクレインの濃縮精製法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 兵庫県神戸市東灘区御影本町３丁目４番２０丹 名称 日本ケミカルリサーチ株式会社 代表者 芦１）信 ４、代理人 補正の内容 明細書第５頁第４行目「甲殻類」を「甲殻類」に訂正し
、同頁下から４行「一般に」の次に「尿１ｐ当り」を挿
入する。
手続？１１１正姻 １、事件の表示 昭和５７年特許願第１１３３６４号２
、発明の名称 人尿カリクレインの濃縮精製法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 兵庫県神戸市東灘区御影本町３丁目４番２０丹 名称 日本ケミカルリサーチ株式会社 代表者 芦１）信 ４、代理人 補正の内容 明細書第５頁第４行目「甲殻類」を「甲殻類」に訂正し
、同頁下から４行「一般に」の次に「尿１ｐ当り」を挿
入する。
同第６頁第６行［，０，２トリス塩酸Ｂ緩衡液」を削除
する。
する。
同第１０頁下から５行「７１％」を「６０％」に訂正し
、第１２頁下から２行１５１％）」の次に ［、］を挿
入する。 以上
、第１２頁下から２行１５１％）」の次に ［、］を挿
入する。 以上
Claims (1)
- 人尿とキトサンをｐＨ４，０〜７．０で接触させること
により尿中のカリクレインを選択的にキトサンに吸着さ
せ、次いで吸着体よりアルカリ性溶液でカリクレインを
溶出することを特徴とするカリクレインの濃縮精製法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57113364A JPS596883A (ja) | 1982-06-30 | 1982-06-30 | 人尿カリクレインの濃縮精製法 |
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| EP83303662A EP0098123B1 (en) | 1982-06-30 | 1983-06-24 | A process for concentrating and purifying human urinary kallikrein |
| US06/509,030 US4510248A (en) | 1982-06-30 | 1983-06-29 | Process for concentrating and purifying human urinary kallikrein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57113364A JPS596883A (ja) | 1982-06-30 | 1982-06-30 | 人尿カリクレインの濃縮精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS596883A true JPS596883A (ja) | 1984-01-13 |
| JPH0147997B2 JPH0147997B2 (ja) | 1989-10-17 |
Family
ID=14610402
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57113364A Granted JPS596883A (ja) | 1982-06-30 | 1982-06-30 | 人尿カリクレインの濃縮精製法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS596883A (ja) |
| DE (1) | DE3376018D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4746611A (en) * | 1985-01-10 | 1988-05-24 | Agency Of Industrial Science & Technology | Process for recovering cellulases |
| KR890701731A (ko) * | 1987-06-30 | 1989-12-21 | 로버트 디. 웨이스트 | 칼리크레인의 제조방법 |
| EP0546533A2 (en) * | 1991-12-10 | 1993-06-16 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. | Medical use of kininogenase |
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Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| DE3103257A1 (de) * | 1981-01-31 | 1982-08-26 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Verfahren zur herstellung des hochreinen enzyms kallikrein aus schweinepankreas-extrakten |
| JPS5838151B2 (ja) * | 1981-07-03 | 1983-08-20 | 衛 杉浦 | カリクレインの精製法 |
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1982
- 1982-06-30 JP JP57113364A patent/JPS596883A/ja active Granted
-
1983
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- 1983-06-24 EP EP83303662A patent/EP0098123B1/en not_active Expired
- 1983-06-29 US US06/509,030 patent/US4510248A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4780209A (en) * | 1984-06-06 | 1988-10-25 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0098123A2 (en) | 1984-01-11 |
| JPH0147997B2 (ja) | 1989-10-17 |
| US4510248A (en) | 1985-04-09 |
| DE3376018D1 (en) | 1988-04-21 |
| EP0098123B1 (en) | 1988-03-16 |
| EP0098123A3 (en) | 1985-06-19 |
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