JPH09509418A

JPH09509418A - 受精能を変化させる方法

Info

Publication number: JPH09509418A
Application number: JP7521944A
Authority: JP
Inventors: アールモイル，ウィリアム
Original assignee: センシ − テスト
Priority date: 1994-02-18
Filing date: 1995-02-17
Publication date: 1997-09-22
Also published as: DE69535260T2; ES2251731T3; EP0839831B1; DE69534723T2; DE69535260D1; US7001597B1; EP1849802A2; DK0751782T3; CA2183564A1; ATE314392T1; ATE342061T1; EP0751782B1; DE69534723D1; JPH11263799A; AU1878795A; EP0751782A1; AU695111B2; PT751782E; EP0751782A4; WO1995022340A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、血中を循環するルトロピン（ＬＨ）活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性および／またはレベルを減少させることにより受精能を増強する方法に関する。本発明の分子は、ＬＨの生物学的活性を減少させる抗体あるいは他の結合剤である。さらに本発明は、所望する程度まで生物学的活性を減少させることができる、ＬＨおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を含む蛋白質の特異的部分に対する抗体を工夫するおよび／または選択するための新規な方法に関する。さらに本発明は、受精の刺激および阻害において使用する、および卵巣過敏症を制御する、単一サブユニット性腺刺激ホルモンの調製およびゴナドトロピンの拮抗剤に関する。好適具体例において、本発明は、黄体形成ホルモンに結合する結合剤の診療に効果的な量をほ乳類に投与することからなる、血中循環において黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させ、その結果濾胞刺激ホルモンの産生を刺激することにより哺乳動物において受精を刺激する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】受精能を変化させる方法発明の背景発明の技術分野本発明は、ルトロピン（ＬＨ）活性を有する循環する糖蛋白質ホルモンの活性および／またはレベルを減少させることによる受精能の増大方法に関するものである。本発明の分子は、ＬＨの生物学的活性を減少させる抗体または他の結合剤である。さらに本発明は、ＬＨおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を包含する蛋白の特定部分に対する抗体を開発および／または選択して、その生物学的活性を所望程度まで減少させることができる新規な方法にも関するものである。さらに本発明は、ＬＨ活性を有するホルモンの活性を減少させ、かつ／またはフォリトロピン活性を有するホルモンの活性を増大させる新規な糖蛋白質ホルモン作用剤および拮抗剤に関するものである。背景の説明発明の背景を説明すると共にその実用に関し一層詳細に説明すべくここに引用した開示を参考のためここに引用し、便利には以下の文中に数字で示し、それぞれ添付文献に分類する。糖蛋白質ホルモン群（１）は、下垂体前葉腺に存在してそこで作成される３種のα，βヘテロ二量体の糖蛋白質で構成される。これら糖蛋白質ホルモンは黄体形成ホルモン（ルトロピンもしくはＬＨとしても知られる）、濾胞刺激ホルモン（フォリトロピンもしくはＦＳＨ）および甲状腺刺激ホルモン（チロトロピンもしくはＴＳＨとしても知られる）である。人間からのホルモンはそれそれｈＬＨ、ｈＦＳＨおよびｈＴＳＨとして知られる。ある動物種類において、ＬＨと呼ばれる絨毛性ゴナドトロピンもしくはＣＧに構造上類似した糖蛋白質ホルモンは胎盤により作成されて循環系に放出される。人間において、この糖蛋白質ホルモンはｈＣＧと呼ばれる。霊長類において、これら全てのホルモンは著量に尿中に排泄物質としても見られる。下垂体前葉部からのＬＨおよびＦＳＨの分泌が著しく増大する閉経期の後、著量のＬＨおよびＦＳＨが尿中に見られる。閉経期の女性から得られる尿のゴナドトロピン抽出物はヒト閉経ゴナドトロピン（ｈＭＧ）と呼ばれる。ＬＨ受容体にはＬＨと同様に作用するがＦＳＨ受容体には極く僅かしか相互作用しないｈＣＧとは異なり、ｈＭＧはＬＨおよびＦＳＨの両受容体に対し相互作用する。ｈＭＧの二重活性はｈＬＨ、ｈＦＳＨおよびその代謝物の尿抽出物における存在に起因する。妊娠女性および閉経女性から得られる尿はゴナドトロピン活性の主たる原料であって、重要な産業上の用途を有する。たとえばＦＳＨ、ＬＨおよび幾つかの種において、ＣＧのようなゴナドトロピンが繁殖過程にて主たる役割を果たす一方（１〜６）、構造上関連したホルモン（すなわちＴＳＨ）は甲状腺機能に重要である（１）。ＬＨおよびＦＳＨの両者は思春期および正常な繁殖機能につき必須である。適する時点における充分量のＦＳＨ、ＬＨもしくはｈＣＧの欠如は不妊症または妊娠停止をもたらす。過剰量のこれらホルモンは尚早な思春期または生殖腺の過敏症をもたらし得る。男性において、ＦＳＨは精子形成の開始および維持に必須である（７、８）。ＦＳＨの免疫中和は精子形成の低下と受精能の喪失とをもたらす。女性において、ＦＳＨは排卵に際し女性生殖体の産生をもたらす濾胞の発達に必須である。多卵胞性卵巣病は女性における不妊症の一般的な原因であって、不完全な濾胞の発達を特徴とする症状である。受精能は一般にＦＳＨもしくはｈＭＧの投与により回復することができる。しばしば受精能は抗エストロゲン(すなわちＦＳＨ分泌に対するエストロゲンの陰性フイードバック作用を抑制する化合物)での処理によりＦＳＨレベルを上昇させて回復することもできる。男性においてはＬＨが思春期につき必要とされ、これが存在しないと性的特徴および成人の受精能を獲得することができない。ＬＨは主として睾丸におけるアンドロゲンの合成をもたらす。これらステロイドは精子形成に有利な影響を有し、以上に高レベルのアンドロゲンは開始された後の精子形成を維持することができる（９）。女性において、ＬＨは排卵および黄体の形成につき必須である。さらにＬＨは濾胞の発達に対しＦＳＨとの相乗作用を有し（４）、濾胞性アンドロケンの合成を促進することが周知されている。これらアンドロゲンはＦＳＨ刺激されたエストロゲン形成の先駆体として作用する。さらにＬＨは、特に顆粒膜細胞がＬＨ受容体を獲得した際の濾胞成熟の後期段階にて、顆粒膜細胞に対するＦＳＨの作用を開始させることもできる。栄養芽細胞により作成されたｈＣＧは、早期ヒト妊娠に際し黄体からのプロゲストロン分泌の維持につき重要である。これらホルモンの臨床的活性およびその使用についてはイエンおよびヤッフェによる文献（２）を含め幾つかの標準的刊行物に広く検討されている。ＦＳＨとＬＨとの作用における相違およびこれら２種のホルモン間における複雑な内分泌相互作用は、これらホルモンにより濾胞の発達およびエストラジオール合成につき相乗作用を生させる（４）。たとえば正常な卵巣エストロゲン生成はアンドロゲン生成に対するＬＨの作用およびアンドロゲンからエストラジオールへの変換に対するＦＳＨの作用に起因する。次いで、エストラジオールは下垂体からのＦＳＨ分泌を抑制することができる。正常な月経周期に際し、ＦＳＨレベルは濾胞が拡大して増加量のエストラジオールを分泌する際に低下する。エストラジオール量が濾胞期に際し充分量に達すると、これらは下垂体からのＬＨ分泌の増加を開始させて排卵をもたらしうる。ＬＨ／ＦＳＨ活性の比および血液におけるホルモンの絶対量が、たとえば月経周期および発情サイクルに際し適正個数の卵母細胞の排卵など繁殖機能につき重要である。ＬＨおよびＦＳＨの両者の分泌をステロイドホルモンにより抑制することができるが、ＦＳＨの分泌は一般にエストロゲンによる陰性フィードバック調整に対しＬＨの分泌よりも鋭敏である。実際に、多くの動物種類において高レベルのエストロゲンは、特にプロゲステロン量が低くなければＬＨの分泌を増加させうる。抗エストロゲン、すなわちＦＳＨ分泌に対するエストラジオールの正常な陰性フィードバック調節を破壊する化合物）を投与すれば、しばしばＦＳＨ放出を増大させると共に生殖体産生をも増大させる。臨床的に、抗エストロゲンは多卵胞性卵巣病を有する女性における排卵の確立を増大させるべく広く使用される。残念ながら、ＦＳＨ分泌に対するエストラジオールのマイナス作用は排卵の時点まで発生する濾胞の個数の調節につき部分的な原因となるので、正常なエストロゲン−ＦＳＨ陰性フィードバックループの破壊は不適正な個数の卵子を流出させうる。ＦＳＨ分泌の陰性フィードバック調整を除去することなくＦＳＨ分泌を増大させるメカニズムは、受精能を増大させる貴重な用途を有する。精製されたＦＳＨは、特にある種の内在性ＬＨも存在すれば、女性における濾胞の発達を刺激することができる。ＦＳＨ／ＬＨの比は、濾胞の発達が開始される月経周期の時点で最高となる。しかしながら、両ホルモンが受精能につき必須である。ＬＨの免疫中和は雄および雌における不妊症をもたらす（１０〜１２）。同様に、ＣＧ（すなわちＬＨ受容体を介し作用するホルモン）の免疫中和も霊長類にて受精能を阻止することが示された（１３〜１６）。ＬＨに対する抗体は、受精能を刺激することが従来示されていない。ｈＣＧに対するモノクローナル抗体（ｈＣＧ−ｍＡｂと称する）は、in vitro にて受容体に対するｈＣＧの結合を抑制することが示されている（１７）。エピトープの位置に応じ、ｈＣＧ−ｍＡｂはＬＨ受容体に対するｈＣＧの結合を抑制する異なる能力を有する。Ｂ１０５およびＢ１１０は、ホルモンがＬＨ受容体に結合する際に露出され続けるｈＣＧおよびＬＨにおけるエピトープを認識するモノクローナル抗体の例である。これらモノクローナル抗体とホルモンとの複合体は、遊離ホルモンよりも低い親和性を有するが、ＬＨ受容体に結合する。その結果、これら抗体はＬＨ受容体に対するホルモンの結合を抑制する。しかしながら、過剰の抗体の存在下で観察される最大の抑制程度は１００％未満であり、ＬＨ受容体に結合しないホルモンとの複合体を形成する抗体よりも低い。充分量のＢ１０５もしくはＢ１１０の存在下で、生物学的反応を誘発するのに必要なホルモンの量は増加する。すなわち、実際に分析にて全ての遊離ｈＣＧもしくはＬＨを結合するのに充分な大過剰の抗体でさえ、ホルモン−抗体複合体の濃度が閾値レベルを越えれば、いずれのホルモンに対する反応をも防止することができない。上記したよに、ＬＨの免疫中和は数年前に受精能を妨げることが示された。この現象は、これら試験に用いた抗血清がＬＨの生物学的活性を中和したために生ずる。しかしながら、適正な抗血清またはＢ１０５もしくはＢ１１０のような抗体を使用する場合はＬＨの生物学的活性が除去されない。寧ろ、これは所定量だけ減少する。このようになると、アンドロゲン合成が減少する。アンドロゲンはエストロゲンの先駆体であるため、エストロゲン合成も減少する。エストラジオールの低下は、ＬＨ分泌に対するよりもＦＳＨ分泌に対し大きい衝撃を与える。ＦＳＨ分泌が増大し、これはＦＳＨ／ＬＨの比を増大させると共に濾胞の発達を増大させる。雌において、このＦＳＨ／ＬＨの比は濾胞の発達の増加をもたらす。雄において、このＦＳＨ／ＬＨの比はセルトリ細胞機能の増大および精子形成の増加をもたらす。ＬＨレベルの減少に基づき受精能を増大させる手法は従来使用されていない。これは１部にはＬＨに対する抗体が受精能を抑制すると言う多くの報告に起因し、ＬＨ活性を減少させるが中和しない抗体を作成および選択する方法は従来未知であった。したがって、受精能に対するこの手法は成功を収めないと予想される。後記するように、受精能を増大させるこの手法は、主としてＬＨおよびＦＳＨをその下垂体から作成および放出する女性にて、現在の技術に関し幾つかの利点を有する。ＬＨレベルの減少は下垂体機能に対するエストラジオールとＦＳＨとの間の正常な内分泌フイードバック関係を破壊しないので、現存する技術よりも卵巣過敏症の誘発の機会はずっと少ない。このことは、高価かつ要求される患者の監視に関し要求が少ないことを意味する。さらに、受精能を誘発するには１回のみあるいは多くとも数回の処置しか必要でない。受精能を増大させる他の新規な方法は、月経周期の濾胞期に際しＬＨ拮抗剤を用いることである。数年間にわたり、糖蛋白質ホルモンにおけるオリゴ糖鎖がシグナル伝達を示す能力につき必須であることが知られている（１）。炭水化物残基を欠損する糖蛋白質ホルモンは、生物学的反応を示す能力を阻害した。これらアナログを使用して受容体に対するＬＨの結合を阻止することができる。これは循環ＬＨの能力を減少させることにより受精能を向上させる。脱グリコシル化されたゴナドトロピンは短い生物学的半減期を有することが判明しており、その初期の所定用途には有用でないと判明し、すなわち黄体プロゲステロン合成を減少させると共に流産させて受精能を抑制することが判明した。グリコシル化シグナル（すなわちアミノ酸配列：アスパラギン−Ｘ−スレオニンもしくはアスバラギン−Ｘ−セリン（ここでＸはプロリン以外の任意のアミノ酸である））を１部位から除去すると共にαおよびβ−サブユニットの他の部位にグリコシル化シグナルを形成させてホルモンの他の部分まで炭水化物残基を移動させることにより、充分長い半減期を有する減少した作用剤活性を有する有用なアナログを設計することができる。さらに、α およびβ−サブユニットが共有結合した単一鎖ゴナドトロピンを作成することにより、循環におけるホルモンの安定性を増大させることもできる。これは、ヘテロ二量体ゴナドトロピンの受容体結合活性および血漿半減期がいずれのサブユニットよりも大であるからである。共有結合は循環における２種のサブユニットの結合を防止する。受精能の刺激が不妊症カップルに受精能を回復させるのに重要であるが、受精能の抑制はしばしば家族設計の方法として望ましい。さらに、受精能の抑制は家畜の産業生産にも有用である。何故なら、これは去勢の必要性を排除しあるいは飼育場で飼育されるウシ群における発情を防止するからである。イヌおよびネコを含む他の動物における受精能の抑制も、これらを卵巣切除または去勢する代案として望ましい。ウマにおける受精能の抑制も、特に逆転させうれば去勢ウマにつき好ましい。上記したように、受精能はＬＨもしくはＦＳＨに対する中和抗体の投与により抑制することができる。さらに、これら抗体の生成を誘発させるワクチンを用いて抑制することもできる。妊娠を維持するｈＣＧの作用に基づき、ｈＣＧ分泌もしくは活性の低下をもたらす処置も不妊症を生ぜしめると予想される。女性においては、ｈＬＨもしくはｈＦＳＨでなくｈＣＧを抑制して受精能を抑制することが一層望ましい。これは、ｈＬＨもしくはｈＦＳＨを中和する処置が卵巣機能の停止をもたらすと共に閉経期に関連する諸問題の開始を促進するからである。ウシおよび他の家畜動物においては、ＬＨを抑制して思春期を防止しあるいは発情を抑えることが一層重要である。上記したように、絨毛性ゴナドトロピンに対する適正な抗体は霊長類および女性にて受精能を抑制することができ、ｈＣＧに対する抗体の発生は永年にわたり重要かつ有力な避妊法であると認識されている（１８）。ｈＣＧは多数のヒト癌により生成されると共にｈＣＧに対する抗体はこれら腫瘍を破壊しうるので、免疫処理はさらに癌療法もしくは予防に対し有益な作用をも有する（１９）。この種のｈＣＧに基づく避妊ワクチンをｈＣＧと他の糖蛋白質ホルモンとの相違を考慮して案出するため幾つかの試験がなされている（１４、１８）。残念ながら、ワクチンの開発は全ての糖蛋白質ホルモンの間の構造の相同性により妨げられている。好適免疫原は高い抗原性を有し、しかもたとえばヒトＦＳＨ、ＬＨもしくはＴＳＨのような他の糖蛋白質と交叉反応する抗体を誘発させてはならない。上記糖蛋白質ホルモン活性の知見に基づきＬＨ、ＦＳＨもしくはＴＳＨと相互作用する抗体を誘発したワクチンは、不妊症および／または甲状腺機能の阻止をもたらすであろう。残念ながら、ＬＨもしくはＦＳＨの中和は正常な月経周期の停止および女性における受精能に関連したエストロゲン産生の喪失をもたらす。卵巣機能の停止は、閉経期に伴う骨粗鬆症および他の諸問題の尚早な発生をもたらすと思われる。甲状腺機能の抑制は甲状腺機能低下をもたらす。ｈＣＧおよびｈＬＨの構造における類似性は、特に交叉反応性抗体を発生させない好適な免疫原の設計を困難にする。ｈＣＧβ−サブユニット特異的Ｃ−末端に対する抗体を作成すべく多くの努力がなされている。何故なら、この分子部分はｈＬＨに見られないからである（１）。しかしながら、この領域は殆ど抗原性はない。免疫原を開発する努力も用いられ、β−サブユニットから得られるペプチド（１４）、β− サブユニットと他の蛋白との結合体（２０）、またはｈＣＧβ−サブユニット結合体を含有するヘテロ二量体、並びにヒツジα−サブユニット（１８）も用いられている。残念ながら、これら免疫原の大部分は殆ど効果的でなく、より良好な免疫原がこの方法を実用的にすべく必要とされる。ｈＣＧに基づくワクチンを開発する困難性は、糖蛋白質ホルモンの構造を理解すれば了解することができる。糖蛋白質ホルモンは全て共通のα−サブユニットを有する。α−サブユニットの部分の構成は全てのホルモンにて相違すると共にモノクローナル抗体の選択により識別することができるが（２１）、α−サブユニットの部分は各糖蛋白質ホルモンにて同じ構成を有する。従って、α−サブユニットに対する多くの抗体はＬＨ、ＦＳＨ、ｈＣＧおよびＴＳＨを識別する。抗 −α−サブユニット抗体はしばしばホルモンの活性を阻害できるので（２２）、 α−サブユニットに対する反応を誘発した免疫原は望ましくない副作用を有すると思われる。したがって、避妊ワクチンを開発する殆どの対策はｈＣＧのホルモン特異性β−サブユニットに向けられる。ｈＣＧのβ−サブユニットはｈＬＨのβ−サブユニットに最も近縁である。完全ｈＣＧβ−サブユニットに向けられる多くの抗体はＬＨ β−サブユニットにも結合する。他のホルモンのβ−サブユニットはｈＣＧのβ−サブユニットとは相当に異なるが、全てのβ−サブユニットにおける幾つかの残基は同一であって、少ないながらある程度の抗−β−サブユニット抗体はこれらホルモンとも交叉反応する可能性がある。ｈＣＧ β−サブユニットのカルボキシ末端３１アミノ酸（ＣＴＰ）は、他の糖蛋白質ホルモンにおける残基には無関係である。理論的に、この領域に対する抗体は他のホルモンとの交叉反応を示すことができない。予想通り、この領域を免疫原として使用すれば、他の糖蛋白質ホルモンとは交叉反応しない抗体が発生する。残念ながら、合成ＣＴＰペプチドに対し産生される抗体はｈＣＧに対し高親和性を以て結合しない。これは、部分的にｈＣＧのこの領域が４個の有力なセリン結合グリコシル化部位を有すると共に高度にグリコシル化されるという観察に基づく。さらに、このｈＣＧの領域の殆どはＬＨ受容体との相互作用につき必須でない。したがって、ｈＣＧのＣＴＰに向けられる抗体はｈＣＧ受容体複合体に結合し、主として非中和性型である。その結果、これらはＬＨ受容体に対するｈＣＧの結合を防止するＢ１０１のような抗体と同様なｈＣＧ作用を抑制しない（２２）。さらに、ｈＣＧ β−サブユニットの他の部分に対する抗体を開発すべく努力がなされている。広く検討されている１つの領域は、システイン残基３８と５７との間に存在する領域である。蛋白質のこの部分は大きいループを形成することが知られ、研究が示した所ではこのループはステロイド産生を刺激することができる（２３、２４）。したがってこのループに対する抗体は中和性型であると予想される。実際に、Ｂ１０１（すなわち、このループ内の残基を識別することが示された抗体（２２、２５、２６））はｈＣＧ活性を中和することができる。このループ構造を用いることに伴う問題は、産生される抗体がしばしば低い親和性を有することである。さらにｈＣＧおよびｈＬＨはこの分子領域にて類似する（すなわち、相違する３個のアミノ酸しか存在しない）ので、このループでの免疫処理はｈＬＨに対する抗体の産生をもたらすと予想される。実際に、Ｂ１０１（すなわち、この分子領域に結合する抗体は）ｈＬＨにつき許容しえない高い親和性を有する。糖蛋白質ホルモンの三次構造を同定する最近の努力はモノクローナル抗体のパネルにおける結合部位の特性化に依存している（２６）。ｈＣＧの生物学的活性を抑制しあるいは生物学的活性を部分的にのみ中和する抗体が同定されている。本発明の実施例７に要約するように、これらおよび同様な抗体を使用して、後記実施例６および７に要約する陽性および陰性選択手法を用い、ｈＣＧを中和するがｈＬＨを中和しない能力を有する免疫原を開発することができる。これらホルモンは結晶化されておりかつ結晶構造は分子の特定部分に対する高い力価の免疫反応を与える免疫原の種類を決定するのに貴重であるが、結晶構造を解明する困難性はこの手法を排除している。すなわち、ｈＣＧ構造に関する現在の知識状態にて、最も効果的である免疫原の種類を予測すべく使用できる良好な方法は存在しない。受精能を増大させる他の有用な方法はＦＳＨ活性のレベルを増大させることである。これを達成する１つの方法は少量の長時間作用性フォリオトロピンを投与することである。これらは、フォリオトロピン活性を有する分子を長い血漿半減期を有する分子（すなわち免疫グロブリン）に結合させてあるいはフォリオトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロピンのアナログを作成して達成することができる（第１表および第２表）。単独であるいはＬＨに対する抗体および／またはＬＨ拮抗剤と組合せてこれらホルモンは多卵胞性卵巣病を有する女性にて濾胞の発達を容易化させる。図面の簡単な説明第１図は、ＬＨ受容体に対する放射能標識したｈＬＨの結合に対する抗体および抗血清の作用を示すグラフである。第２図は、in vitroにてステロイド産生を誘発するｈＬＨの能力に対する抗体および抗血清の作用を示すグラフである。第３図は、in vivoにてステロイド産生を誘発するｈＬＨの能力に対する抗体および抗血清の作用を示すグラフである。第４図は、鋳型／排除選択手法で使用できるベクターを示す。第５図は、ＬＨ、ｈＣＧもしくはＦＳＨに対する活性免疫処理に使用するための抗原性が増大した免疫原の種類を示す。第６図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃１およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第７図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃２およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第８図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃３およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第９図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃４およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第１０図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃５およびプラィマー（下線）をコードする配列を示す。第１１図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃６およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第１２図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃７およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第１３図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃８およびプライマー（下線）をコードする配列を示す。第１４図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃９およびカセット（下線）をコードする配列を示す。第１５図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃１０およびカセット（下線）をコードする配列を示す。第１６図はオリゴ糖シグナル配列を欠損するα−サブユニットをコードする領域の調製を示す。第１７図はａｓｎ−結合オリゴ糖シグナル配列を欠損するβ−サブユニットをコードする領域の調製を示す。第１８図は単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃１ａをコードする配列を示す。発明の要点本発明は、ルトロピン（ＬＨ）活性を有する循環する糖蛋白質ホルモンの活性および／またはレベルを減少させることによる受精能の増大方法に関する。本発明の分子は、ＬＨの生物学的活性を減少させる抗体または他の結合剤である。さらに本発明は、生物学的活性を所望する程度まで減少させ得るＬＨおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を含む蛋白の特定部分に対する抗体を工夫および／または選択するための新規な方法にも関する。さらに本発明は、受精能の刺激および抑制においての使用、および卵巣過敏症を制御に対する単一サブユニットゴナドトロピンおよびゴナドトロピン拮抗剤の調製に関するものである。１実施形態において本発明は、循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させ、これにより濾胞刺激ホルモンの産生を刺激することによる哺乳動物における受精能の刺激方法に関し、この方法は黄体形成ホルモンを結合する治療上有効量の結合剤を哺乳動物に投与することからなる。他の実施形態において本発明は、循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させるが排除しないことにより濾胞刺激ホルモンの産生を刺激する哺乳動物における受精能を刺激するためのワクチン接種法に関し、この方法は：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変位体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニットの突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ− サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが工程（ｅ）にて高親和性で黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核性細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｇ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより黄体形成ホルモンに対する抗体を発生させて、黄体形成ホルモン活性を減少させるが排除せずに濾胞刺激ホルモンの産生を刺激して哺乳動物における受精能を刺激する各工程からなる。さらに他の実施形態において本発明は、循環における絨毛性ゴナドトロピンホルモンの活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させることによる雌哺乳動物における不妊症を誘発させるためのワクチンの設計方法に関し、この方法は：（ａ）陽性鋳型として絨毛性ゴナドトロピンホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ −サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンとは相違するが絨毛性ゴナドトロピンホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性で結合する絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｈ）選択された絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｇ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｉ）工程（ｈ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより絨毛性ゴナドトロピンホルモンに対する抗体を発生させて、絨毛性ゴナドトロピンホルモン活性を減少させることにより雌哺乳動物における不妊性を誘発させる各工程からる。さらに他の実施形態において本発明は、循環における濾胞刺激ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることによるヒト男性における受精能を抑制するためのワクチンの設計方法に関するものであり、この方法は：（ａ）陽性鋳型として濾胞刺激ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）濾胞刺激ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｄ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）濾胞刺激ホルモンとは相違するが濾胞刺激ホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性で結合する濾胞刺激β−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核性もしくは真核性宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｈ）からの治療上有効量の蛋白をヒト男性に抗原として投与することにより免疫反応を生じさせて濾胞刺激ホルモンに対する抗体を発生させ、濾胞刺激ホルモン活性を減少させると共にヒト男性における受精能を抑制する各工程からなる。さらに他の実施形態において本発明は、循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させることによる非ヒト哺乳動物における受精能を抑制するためのワクチンの設計方法に関するものであり、この方法は：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変位により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが工程（ｅ）にて高親和性で黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体化β−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｇ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより黄体形成ホルモンに対する抗体を発生させ、黄体形成ホルモン活性を減少させると共に非ヒト哺乳動物における受精能を抑制する各工程からなる。好適実施形態において、ワクチンの設計方法は：（ｉ）工程（ａ）にて陰性鋳型として結合する結合剤をさらに供給し；（ｊ）工程（ｃ）に先立ち、工程（ｂ）からのホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ｉ）からの陰性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｋ）工程（ｃ）にて、工程（ｊ）からの陰性鋳型結合剤には結合しないホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングする各工程をさらに含む。発明の詳細な説明本発明は、ルトロピン（ＬＨ）活性を有する循環糖蛋白質ホルモンの活性および／またはレベルを減少させることによる受精能の増大方法に関するものである。本発明の分子は、ＬＨの生物学的活性を減少させる抗体または他の結合剤である。結合剤は、免疫処理に呼応して投与しあるいは生成させることができる。ルトロピン活性を有する分子は受精能につき必須であるため、その活性の阻止は受精能を増大させずに低下させると予想される。しかしながら、ルトロピンは一般に、フォリロピン（ＦＳＨ）すなわち受精能に重要な役割を果たすホルモンの分泌を減少さることができるステロイドの産生を増大させることが判明した。その結果、ルトロピンの活性低下はフォリトロピンのレベルおよび／またはフォリトロピン／ルトロピンの比率の増加をもたらす。ＬＨ活性が排除されずに減少させられる場合、ＦＳＨ活性および／またはＦＳＨ／ＬＨの比率の増加は人間および動物における生殖体の産生増加および受精能の上昇をもたらす。本発明はさらに、ＬＨおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を包含する蛋白質の特定部分に対する抗体を工夫および／または選択して生物学的活性を所望する程度まで減少させることができる新規な方法にも関するものである。選択されたゴナドトロピンの特異的部分に対する抗体および免疫原、たとえば構造が極めて類似する抗体および免疫原をどのように開発したかを示す実施例をここに示す。ある種のこれら抗体および免疫原は受精能を抑制する用途を有し、他の抗体および免疫原は受精能を増大させる用途を有する。さらに本発明は、ＬＨおよびＦＳＨ受容体に結合しうると共に投与の時点に応じ受精能増大もしくは受精能抑制の各作用を有する分子の製造に関するものである。これらの幾つかは、ＬＨ受容体に結合すると共にＬＨの作用を阻止する分子である。これらを濾胞期に投与すると、ＬＨ活性を抑制することによりアンドロゲンおよびエストロゲンの分泌を抑制する。その結果、ＦＳＨレベルが上昇すると共に受精能が増大する。これらを月経周期の黄体期に際し排卵後に投与すると、ｈＣＧの活性を抑制して妊娠を停止させる。他の分子はＦＳＨ受容体に結合すると共にＦＳＨ活性を有する。これらはＦＳＨの長時間作用性アナログであり、少量で投与すると濾胞成熟を刺激する。これらはエストロゲン合成を刺激するので、エストロゲンのレベルが上昇すると共に下垂体ＦＳＨレベルの分泌が低下する。制限量にて投与する限り、これらは卵巣過敏症を誘発しない。さらに、これらは雄における受精能の刺激に対し直接的作用を有する。さらに、本発明はＦＳＨ並びにＦＳＨおよびＬＨの両者の作用を抑制する能力を有する分子の作成に関するものである。これら分子は、にしばしばゴナドトロピン療法の結果として生じる過剰活性卵巣組織を有する女性を処置するの有用である。卵巣の刺激過剰は極めて致命的であり、これらアナログはＦＳＨ受容体に結合しあるいはＦＳＨおよびＬＨ受容体の両者に結合して、さらに卵巣発育を抑制する。本発明によれば、受動的または能動的な免疫処理を用いてルトロピンの活性を抑制する新規な方法により、人間および動物における受精能を向上させるための方法が提供される。従来の研究が示したところでは、ＬＨの作用の阻止は受精能の抑制をもたらす。ここで、適するＬＨ抗体を使用して受精能を回復もしくは刺激しうることが示される。この手法は刺激過剰の危険を減少させると共に、より正常な受精能の調節をより少ない監視にて可能にする。受精能を促進するのに必要とされる抗体もしくは抗血清を産生および試験するための幾つかの方法が提供される。ＦＳＨ／ＬＨの比率を変化させる他の方法、たとえばＦＳＨを投与しあるいは抗エストロゲンを与える方法も可能である。しかしながら、抗−ＬＨ抗体の使用に基づくここに記載した手法はこれら他の方法よりも重要な利点を有する。各抗体につき最大阻害の程度はin vitroでの試験により慎重に決定することができる。すなわち抗体の投与量とは無関係に、ＬＨ活性の抑制を抗体の適当な選択により所定レベル以下に防止することができる。たとえばＢ１０５は有効ｈＬＨレベルを約４倍減少させるのに対し、Ｂ１１０は有効ｈＬＨレベルを約２倍減少させる。ＬＨレベルの低下はＦＳＨレベルを上昇させることができる。ＦＳＨレベルが上昇すると、これらは濾胞の発達およびエストロゲンの産生をもたらす。これらレベルが適する濾胞の発達の特徴である生理学的濃度に達すると、これらは多量のＦＳＨの分泌を阻害する。従って、ここに記載した処理はＦＳＨもしくは抗エストロゲンを投与して受精能を刺激することに依存する現存の方法において欠如する自己調節の優れたな特徴を保持する。さらにＧｎＲＨ（ゴナドトロピン放出ホルモン）もしくはＧｎＲＨアナログを用いる排卵誘発とは異なり、抗−ＬＨ抗体に基づく方法はホルモンもしくはホルモンアナログの脈動注入を必要としない。この処置は、数日間にわたり１回または多くとも数回の処置という有力な利点を与える。これは、人間もしくは動物にて排卵の調節に特に重要である。人間において、この方法はしばしば不適当に高いＬＨレベルを特徴とする多卵胞性卵巣病の処置に最も適する。ＬＨレベルが減少するにつれ、ＦＳＨレベルが上昇すると共に濾胞の発達が生ずる。しかしながら濾胞の発達が生ずると、上昇したレベルのエストロゲンがさらにＦＳＨの分泌を阻止する。したがって、危険な潜在的結果を伴う多過ぎる濾胞の発生を促進する傾向が最小化される。さらに、ここには鋳型およびエクスクルージョン抗体の使用に基づく決定免疫原を産生させるための方法も提供される。これら抗体の使用は、蛋白の特定ドメインに対する特異的免疫反応を開発することを可能にする。この方法は、ここに例示するように受精能を誘発もしくは抑制する際に用途を有する。ｈＣＧに対する抗体は腫瘍成長を抑制しうるので、この方法はｈＣＧ分泌性腫瘍の発生もしくは進行を抑制するのに必要とされるワクチンを開発するにも有用である。さらに、この方法は特定免疫原を必要とする任意の系にも用途を有する。ｈＬＨもしくは他のＬＨを結合するという事実以外に、受精能の誘発に対し有用である抗体の構造に関し特異的なものは何もない。すなわち、ＬＨを結合する能力を保持する抗体の部分は同様な活性を有すると予想される。これらは、ｈＬＨもしくはＬＨに結合してその生物学的活性を減少させるＦａｂ断片、（Ｆａｂ ′）₂断片、単一鎖抗体または任意の分子を包含する。Ｆａｂ断片は、抗原結合部位を有すると共にパパイン消化により発生する抗体の一部分である。（Ｆａｂ ′）₂断片は、２個の抗原結合部位を有すると共にペプシン消化により発生する抗体の一部分である。好ましくは受精能を増大させる方法は哺乳動物の濾胞期に際し、より好ましくは月経周期の濾胞期に際し実施される。本発明にて調節すべき糖蛋白質ホルモンは、結合対照物間の反応における反応体である。結合対照物は、互いに特異的結合親和性を有する蛋白質である。１つの対照物は抗原およびハプテンよりなる群から選択される結合剤である。好適な結合剤は抗原である。他の結合相手は抗体および特異的結合性蛋白よりなる群から選択される結合剤である。好適結合剤は、抗体である。抗原は、抗体の産生を誘発すると共に検出可能な方法で誘発抗体と特異的に反応しうる物質である。抗原は可溶性物質（たとえば毒素および外来蛋白質）または粒状物質（たとえば細菌もしくは組織細胞）とすることができる。一般に抗原は高分子量物質、たとえば単一および結合蛋白質および炭水化物である。抗体は、リンパ組織にて合成を誘発する抗原またはこの抗原に近縁の抗原に対してのみ相互作用しうる特定アミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子である。免疫グロブリンは２個の軽鎖と２個の重鎖とで構成された蛋白質である。結合剤はたとえば膜未結合受容体蛋白質もしくは移動性蛋白質のような特異的結合蛋白質とすることもできる。受容体蛋白質は、たとえば抗体のような細胞に付着し続ける蛋白質および血清に放出されてその特異的結合親和性を保持する膜未結合蛋白質を包含する。移動性蛋白質は、生物系における細胞に出入すると共に表皮層を介して物質を移動させる蛋白質である。結合剤は天然源からの物質とすることができ、あるいは合成もしくは組換手段より作成された物質とすることもできる。好適実施形態において、結合剤は組換蛋白質および合成ペプチドよりなる群から選択された抗体である。本発明の化合物は、哺乳動物（たとえば動物もしくは人間）に対し所望の活性を与えるのに有効な量にて投与することができる。化合物の活性および所望する治療効果の程度は変化するので、用いる化合物の投与レベルも変化する。実際の投与量は、患者の体重および特定患者の個々の過敏性など一般的に認められた因子によって判定される。すなわち、特定患者（男性）に対する単位投与量は体重１ｋｇ当り約０．１μｇ程度の低い程度で変化することができ、これは医者が所望する効果につき測定することができる。測定に好適な最小投与量は体重１ｋｇ当り１μｇである。以下、実施例により本発明をさらに説明するが、これらは本発明の範囲を決して限定するものでない。実施例および明細書における部数および％は特記しない限り全て最終組成物の重量による。実施例黄体形成ホルモンおよびヒト絨毛性ゴナドトロピンの生物学的活性を減少させてその生物学的活性を所望程度まで減少させる結合剤実施例１受精能を誘発する抗−ＬＨ抗体の使用ある種の抗−ホルモン抗体はホルモンが受容体に結合しないよう阻害し、または代謝を増大させてホルモンの生物学的活性を抑制するので、これらは循環における活性ホルモンのレベルを減少させるのに有用である。ＬＨに対する抗体は、循環における生物学的活性なＦＳＨとＬＨとの比を増大させることができる。これは部分的に、これらがＬＨの活性を減少させるからである。さらに、ＬＨはエストロゲンまで変換しうるステロイド物質の合成を刺激するホルモンであるため（４）、ＬＨ活性の低下はエストロゲンの低下を伴う。エストロゲンのレベルの低下はＦＳＨ分泌の抑制を減少させると共にＦＳＨのレベルを上昇させる。その結果、女性において濾胞の発達が増大する。男性の場合、精子形成が開始される。必ずしも全ての抗体が非中和的にＬＨレベルを減少させる能力を有するとは限らない。ＬＨの作用を中和する抗体は、制限的（すなわち抗体の全投与量が循環ＬＨの全量より少ない）で投与しなければ受精能を完全に削減する。受精能を向上させるためには非中和性工程が好適である。何故なら、これらはＬＨの全量を越えて投与できるからである。すなわち大部分のＬＨは抗体に結合しうるが、ＬＨ活性は減少するが中和されない。濾胞の発達につき充分量より多いＬＨが存在するので、ＬＨ活性における部分的低下は濾胞の発達を阻害しない。さらに、濾胞がその発生を増大する際に作成されるエストロゲンの増加はＦＳＨ分泌の正常なフィードバック調節に類似して卵巣刺激過剰を防止する。１０μｇ〜１０ｍｇの高親和性抗体（すなわちＫａ＞５×１０⁷Ｍ^-1）の投与は、多卵胞性卵巣病を有する女性にて受精能を誘発するのに充分である。適する抗体の同定および特徴化については実施例２に示す。実施例２最良ＬＨ抗体の同定および選択ＬＨ活性を抑制する抗体の全てが不妊症の処置に同等に有用であるとは限らない。たとえば、高過剰濃度の抗体(たとえばｈＣＧおよびＬＨに結合するＢ１０１)（ただし低い親和性を有する）は、ホルモンがＬＨ受容体に結合するのを防止することができる（２２）。過剰に存在する場合、受容体に対するＬＨもしくはｈＣＧの結合を防止する抗体はホルモンの生物学的活性を「中和」する。ＬＨの中和に続いてアンドロゲンおよびエストロゲンのレベルの低下とＦＳＨレベルの上昇とが生じると（ＬＨが受精能に必要とされるため）、受精能に必要とされる最小レベル以下のＬＨ活性の低下は過剰の抗体が存在する限り受精能を抑制する。実際に、中和抗体または中和抗体の産生を誘発する抗原は、動物にて受精能を抑制することが示されている（１０）。制限量の中和抗体を投与してＬＨ濃度を所定レベルまで減少させ、あるいは抗−イデオタイプ抗体を投与することにより中和抗体の抑制作用を逆転させることができる。しかしながら、個人間の変動により、ほぼ完全なＬＨ活性の抑制が所望されなければあるいはＦＳＨおよび／または生殖機能の測定(たとえば血漿ステロイドのレベルの測定)を行わなければ、所望の作用を得るのにどの程度の量の抗体が必要されるかを判定するのは困難である。これらは可能であるが、これら測定を行う必要性は、ＬＨ活性を完全に中和して受精能を開始させる抗体の使用の魅力を減少させる。さらに、中和性抗体を投与して、ＦＳＨレベルが上昇するまでＬＨの作用を一時的に防止することもできる。次いで過剰の中和性抗体を、抗−イデオタイプ抗体の投与により抗−ＬＨ抗体を中和して受精能を回復させまたはＬＨもしくはＣＧを用いて抗体の作用を解消することにより、またはＬＨの中間周期急増の作用を可能にするために充分減少する量の抗体を用いることにより除去することができる。しかしながら、この手法は下記するように非中和抗体の使用よりも複雑である。好適抗体はＬＨの活性を抑制するが、循環に存在する全ＬＨを結合するのに充分な濃度で投与してもその作用を完全には阻害しない。これら抗体は一般に遊離ホルモン、並びにホルモン−受容体複合体に結合することができる。これらは、受容体に対するホルモンの親和性を低下させ、結合ホルモンの活性を減少させ、かつ／またはホルモン除去を増大させることによりホルモン作用を抑制する。この種の抗体の例はＢ１０５およびＢ１１０を包含する。これら抗体はホルモンの生物学的活性を異なる程度まで減少させ（１７）、コロンビア大学、ニューヨーク、ＮＹまたはＵＭＤＮＪ−ロバート・ウッド・ジョンソン・メジカル・スクール、ピスカタウェイ、ＮＪから購入することができる。他の市販の抗体は５１８Ｂ７（ジャネット・ローザ博士、カリフォルニア大学、デービス、ＣＡから入手できる）およびＺＭＣＧ７（ピアス・ケミカル・カンパニー社、３７４７ノース・メリジアン・ロード、ロックフォード、ＩＬから入手できる）を包含する。これら抗体とｈＣＧとの複合体は受容体に結合しうるので、抑制の程度は大過剰の抗体の存在下でも制限される。抑制の程度は、in vivoにて使用する前に簡単なi n vitro分析にて判定することができる。たとえば大過剰のＢ１１０はｈＣＧの活性を僅か約半分だけ減少させるのに対し、大過剰のＢ１０５はｈＣＧの活性を約３／４減少させることが示された。これら各抗体はｈＬＨに結合すると共に、ｈＬＨ活性に対し同じ作用を有すると予想される。ｈＬＨに対し作成されたモノクローナル抗体のパネルからの適する抗体の同定は次のように行うことができる。これら抗体は、ｈＬＨ、ｈＣＧ、他の動物のＬＨ、またはＬＨ、ｈＣＧ断片、部分的もしくは完全に脱グリコシル化されたＬＨ、もしくは所望する動物のＬＨに免疫反応を誘発できるｈＣＧアナログをマウスに免疫接種する標準的方法（２２、２７〜３２）により得ることができる。これら抗体は人工抗体の選択により得ることもできる（３３〜３６）。この同じ手法を用いて、ほぼ全ての他の動物からＬＨに対する抗体を同定することができる。さらに、同様な特徴を有する抗血清を同定するために使用するこもできる。これら抗血清はＬＨもしくはｈＣＧアナログに対応するよう作成することができ、または望ましくない抗体成分の免疫吸着または除去によって得ることもできる。所望する抑制特性を有する抗体は、ＬＨ受容体に対するＬＨの結合を阻害する能力を測定して同定することができる。この種の分析は受容体結合を測定する当業者により行うことができ、以下の実施例はどのようにｈＬＨに対する抗体を選択するかを示す。明かに、これは抗体を入手しうる任意のＬＨの動物種類に適用することもできる。ｈＬＨは囓歯類ＬＨ受容体に良好に結合するので、この分析にはヒトＬＨ受容体を使用する必要もないが、ヒトＬＨ受容体も可能である。簡単な第１工程は、ラットの卵巣黄体ＬＨ受容体に対する放射能標識ｈＬＨの結合に対する抗体の作用を監視することである。放射能標識ｈＬＨは、１０μｇのｈＬＨを５００μＣｉのＮａ¹²⁵Ｉと共に、１．５μｇのイオドーケン(ピアス・ケミカル・カンパニー社)で被覆された小ガラス管にて４℃で３０秒間にわたり温置して作成することができる。¹²⁵Ｉ−ｈＬＨおよび朱反応の¹²⁵Ｉをゲル濾過によって分離する。これら受容体は、ＰＭＳＧもしくはウマＣＧとしても知られる妊娠雌ウマ血清ゴナドトロピン（シグマ・ケミカル・カンパニー社、セントルイス、ＭＯから入手）の５０ＩＵを２３〜２６日令である雌スプラグ・ドーリー種ラットに投与して作成することができる。ＰＭＳＧは濾胞の発達を刺激する。約５６〜６５時間後、動物には２５ＩＵのｈＣＧ（これもシグマ・ケミカル・カンパニー社から入手）を投与して黄体の形成を生じさせる。高度に黄体化された卵巣を１週間後に摘出し、４０ｍＭのトリス（ｐＨ７．４）と５ｍＭのＭｇＣｌ₂ とを含有する緩衝液にてホモゲナイズする。ホモゲナイズ物の粗製核および膜分画を１０００×ｇにて４℃での２０分間にわたるホモケナイズ物の遠心分離により回収する。これをトリス−ＭｇＣｌ₂緩衝液に懸濁させると共に１０００×ｇで４℃にて２０分間にわたり再沈降させることにより１回洗浄する。最終ペレット（「卵巣ホモゲナイズ沈殿物」と称する）を、ホモゲナイズの開始時点で存在する各卵巣当り２ｍｌの容量を用いトリス− ＭｇＣｌ₂緩衝液に再懸濁させる。卵巣の１／２０にほぼ等しい量（すなわち緩衝液１００μｌ中に約５ｍｇの物質）の卵巣ホモゲナイズ沈殿物を、約１〜２ｎｇの放射性ヨウ素化されたｈＬＨ（すなわち約１００，０００ｃｐｍ）と種々異なる量の抗体（すなわち１ｐｇ〜１０μｇの範囲もしくはそれ以上）とを含有するチューブに添加する。放射能標識ＬＨが受容体に結合するのに充分な時間（すなわち３７℃にて３０〜６０分間または室温にて１晩）にわたりチューブを温置した後、結合受容体および遊離放射能標識を０．９％ＮａＣｌ溶液で２ｍｌまで反応混合物を希釈すると共に混合物を遠心分離し、次いで上澄液を吸引して分離させる。ラット卵巣ＬＨ受容体に結合した放射能標識ｈＬＨの量をγカウンターにおける沈殿物の分析により測定する。第１図に示した阻害の型を観察する。ある種の抗体は放射能標識ｈＬＨの結合を大過剰の未標識ｈＬＨもしくはｈＣＧと同程度まで完全に阻害するのに対し、他の抗体は結合を阻害せず、または放射能標識ｈＬＨに対し大過剰のモル濃度で存在する場合にも結合を強化することができる。これら抗体の両者は、ｈＬＨ結合を中間レベルまで抑制するような抗体よりも望ましくない（第１図参照）。すなわち、大抵の有用な抗体は放射能標識ＬＨの結合を阻害するが、大過剰の未標識ＬＨと同程度ではない。大過剰の未標識ＬＨと同程度まで放射能標識ＬＨの結合を抑制する抗体も有用であるが、in v ivoで使用する場合にこの抗体がＬＨ活性を阻害し過ぎないことを確認するよう一層の注意が必要とされる。高過ぎるＬＨ活性がＬＨ上昇で中和されれば、不妊が生ずる。ＬＨ活性を減少させる所望の能力を有する抗体を同定する他の有用な方法は、 in vitro試験を行い、抗体がステロイド生合成に対するｈＬＨの作用を阻害するかどうかを判定することである。この分析において、雄の囓歯類の睾丸を用いることができる。ｈＬＨを用いる典型例を第２図に示す。粗製ラット・ライディッヒ細胞懸濁液を引用文献（３７）に記載されたようにコラゼナーゼを用いて作成し、これら細胞を変化量のＬＨおよび試験すべき抗体と共に培養する。３７℃にて約２〜４時間の後、チューブにおけるテストステロン含有量を放射性免疫分析により測定する。増加濃度のｈＬＨをライディッヒ細胞と共に培養すると、これらはテストステロンの生産増加をもたらし、１〜１０ｐＭのｈＬＨ濃度がステロイド産生を最大レベルの約５０％上昇させるのに充分となる典型的な投与量反応曲線をもたらす(第２図、曲線Ａ参照)。ほとんどの有用な抗体は、ＬＨ誘発ステロイド生成を抑制する能力により同定される。種々異なるモノクローナル抗体をホルモンが細胞に添加される前にＬＨに添加すれば、あるものはテストステロン生成を刺激するＬＨの能力を減少させることが判明する。ほとんどの有用な抑制抗体は投与量反応曲線をより低い感度まで移動させる（第２図、曲線ＢおよびＣ参照）。移動の程度はまず最初に抗体の濃度に依存するが、大過剰の抗体（すなわち使用するｈＬＨの最大量よりも１００倍大）はＬＨ誘発テストステロン生成を抑制しない。最も有用でない抗体は、この抗体が１００倍モル過剰で存在する場合にテストステロン生成の刺激を抑制する（第２図、曲線Ｄ参照）。この種類の分析は、ＬＨ受容体に対する結合を減少させることによりＬＨ活性を阻害する抗体を検出し、さらに結合したＬＨの活性を阻害する抗体をも検出する。有用な抗体の例は上記Ｂ１０５、Ｂ１１０、５１８Ｂ７およびＺＭＣＧ７を包含する。これらは、女性にて反復使用する前に下記するように改良する必要がある。抗体もしくは抗血清が選択されて上記基準（第１図および第２図に示す）を満たすことが判明した後、これらをin vivoにてＬＨの作用を阻害する能力につき試験すべきである。雄ラットに大過剰の抗体（すなわち１００μｇもしくはそれ以上）を投与する。２０分間の後、何匹かのラットを抗体を含まない溶液のみで処理し（対照）、他のラットには抗体を使用すべき動物からのものと構造的に類似しまたは同一であるｈＬＨもしくはＬＨを投与する。１時間の後、血漿テストステロンのレベルをラジオイムノ分析により測定する。典型例を第３図に示す。ほとんどの有用な抗体もしくは抗血清はｈＬＨの効能を減少させるが、投与するＬＨの全量を越えて存在する場合は活性を抑制しない。この分析は、受容体に結合するＬＨを阻害し、結合するＬＨの活性を阻害し、かつ／またはＬＨ除去を増加させることによりホルモン活性を減少させる抗体を検出する。in vivoにおける阻害の原因とは無関係に、ほとんどの有用な抗体もしくは、抗血清はこれらが循環するＬＨが過剰量で存在する場合には、ＬＨの高レベルの活性を抑制しない。これは、抗体を投与した後の放射性ヨウ素化ｈＬＨを結合する血清の能力を測定して監視することができる。血清試料（０．０１〜１μｌ）を、０．９％のＮａＣｌと１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンと０．０２Ｍの燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）とを含有する溶液で２５μｌまで希釈する。これに２５μＬの放射性ヨウ素化されたＬＨ（約１ｎｇを含有する約５０ｎＣｉ）を添加する。得られた溶液を３７℃にて３０分間培養する。上記５０μｌのＮａＣｌ−アルブミン溶液中に２μｇのＩｇＧを含有するヤギ−抗マウス免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）溶液（カッペル社、オルガノン・テクニア・コーポレーション、ウエスト・チェスター、ＰＡから入手）を添加し、得られた溶液を３７℃にて９０分間または４℃にて１晩培養する。この溶液に、水で再構成した１００μｌの１％ＩｇＧｓｏｒｂ（ザ・エンザイム・センター・インコーポレーション、３６フランクリン・ストリート、マルデン、ＭＡから入手）を添加する。この懸濁液を２２℃にて３０分間混合し、次いで３ｍｌのＮａＣｌ−アルブミン溶液を添加して希釈し、氷冷する。混合物を２０００×ｇにて４℃で１０分間、遠心分離する。上澄液を吸引し、沈降物における放射能をγカウンターで測定する。陰性対照としては、活性的もしくは不活的に免疫化していない動物の血清を用いる。陽性対照としては、最初に動物に注射された０．１〜１ｎｇの抗体を使用する。陰性対照からの沈殿物で測定された放射能を陽性対照における放射能および試験される血清試料の沈降物における放射能から引算する。陽性対照および血清試料につき得られた数値を比較して、ＬＨを越えて抗体を含有する血清は陽性対照としての放射性ヨウ素化ＬＨの少なくとも１〜１０％を免疫沈降させることができる。ヒトにおけるｈＬＨに対する抗体の投与は循環するＬＨの有効濃度を減少させる。最大の減少程度は、ＬＨにおける抗体の結合部位の位置に依存する。ＬＨ活性の低下は卵巣ホルモンおよび睾丸ホルモンの分泌を低下させることによりＦＳＨのフイードバック抑制を減少させる。その結果、ＦＳＨレベルが上昇し、受精能が増大する。他の動物からのＬＨと交叉反応するｈＬＨに対する抗体、または他の動物からのＬＨに結合する能力につき選択されてホルモン活性を減少させるが除去しない抗体は他の動物においても同様な作用を示す。ひとにおいて使用するのに最も適する抗体は、ヒト免疫グロブリンに類似すると共にそれ自身では抗原性はなく、またはヒトに注射した場合にのみ、弱抗原性になるようなフレームおよび不変領域を有する。適する抗体は、マウスのモノクローナル抗体の「人体に適用」（すなわち、マウスのフレームおよび不変領域をヒト免疫グロブリンに見られる同様な配列で置換する）ことにより調製することができる。これを達成する方法は当業界で周知されている（３８〜４０）。適する抗体を作成する他の方法は、たとえばカニクイザルのような霊長類の免疫化（４１）に続く単一リンパ球の分離およびクローン化（４２）を包含する。これら霊長類における免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンと同様なフレーム領域を有する。これら動物から作成されたモノクローナル抗体は、人間に使用できる抗体の良好な開始点として作用する。実施例３所望の抗体を得ると共に選択する代案方法ｈＬＨ活性を部分阻害できる多くの抗体は、プラスチック表面または他の表面に吸着されたｈＬＨもしくは他のＬＨ分子に結合する傾向を有する。したがって、所望する抗体のスクリーニングはしばしば、プラスチック微小測定板に吸着されたｈＬＨもしくは他のＬＨあるいはＬＨ受容体複合体に結合したＬＨに結合する抗体の能力を関して容易化される。プラスチック表面に吸着されたｈＬＨに結合する抗体のスクリーニングは次のように行うことができる。プラスチック微小測定板の穴部を、０もしくは１μｇのｈＬＨを０．９％ＮａＣｌ−０．０２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中に含有する５０μｌの溶液で被覆する。これは、ｈＬＨを微小測定板の表面に吸着させることができる。３７℃にて１時間の後、溶液を除去すると共に２００μｇのウシ血清アルブミンを含有する２００ μｌの０．９％ＮａＣｌ−０．０２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）で３７℃にて１時間より長く置換する。これは大部分の残留吸着部位を埋める。アルブミン溶液を排除し、¹²⁵Ｉで標識された５０，０００〜１００，０００ｄｐｍの試験モノクローナル抗体を含有する５０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ−０．０２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｏＨ７．２）で置換する。モノクローナル抗体の標識は、ＬＨにつき上記したようなイオドーゲンまたは他の酸化剤を用い（２２、４３）、１０μｇの抗体と５００μＣｉのＮａ ¹²⁵Ｉとを使用して行われ、ただし反応時間を１〜５分間まで延長させる。３７℃にて１時間の後、液体を除去し、微小測定板の表面に付着した放射能をγカウンターで測定する。ｈＬＨ活性を阻害するのに有用である高い能力を有する抗体は、ｈＬＨで被覆されてないウェルに対するよりも多量にｈＬＨで被覆されたウェルに結合することが判明した。この分析は他の種類の抗体をも検出し、陽性抗体の他のスクリーニングについては下記に要約するようにあるいは実施例２におけるように行われる。ＬＨ−受容体複合体に対する結合は抗体がＬＨ活性の部分的中和に有用であることを保証しないが、多くの好適抗体はＬＨ−受容体複合体に結合する。したがって、最初にＬＨ−受容体複合体に結合する能力を測定することにより、所望の抗体につきスクリーニングすることができる。この分析は上記（４４）のＢｉｏ −ＩＲＭＡと実質的に同じであり、順次にあるいは同時的に行うことができる。同時的Ｂｉｏ−ＩＲＭＡにおいては、０．０２５μＣｉ〜０．１μＣｉの放射性ヨウ素化された試験抗体（すなわち上記のように作成）をラット卵巣ホモゲナイズ物（すなわち上記のように作成）に添加すると共に０ｎｇ、０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ、１．０ｎｇ、１０ｎｇ、１００ｎｇおよび１０００ｎｇを含む増加量のＬＨを添加する。３７℃にて１時間の後、ホモケナイズ物の膜部分を１０００ ×ｇでの１０〜２０分間にわたる遠心分離により沈殿させ、上澄液を吸引すると共にペレットにおける放射能をγカウンターで測定する。ＬＨ受容体複合体に結合する抗体は、分析ブランク（すなわちＬＨを添加せず）よりも高いＬＨ濃度の少なくとも１つと共に培養された膜に対する結合能力の増大により検出される。順次のＢｉｏ−ＩＲＭＡにおいては膜を先ず最初にＬＨと共に３７℃にて１時間培養し、上記したように遠心分離および吸引により洗浄し、次いで５０，０００〜１００，０００ｄｐｍの放射性ヨウ素化された抗体と共に培養する。３７℃にてさらに１時間培養した後、結合抗体分画および遊離抗体分画を上記したように遠心分離および吸引により分離すると共にペレットをγカウンターで計測する。ほとんどの有用な抗体はＬＨ−受容体複合体に結合する。しかしながら、この手順は唯一の有用なスクリーニング法であって、抗体の一層決定的な試験は実施例２に記載したテストストロン産生に基づくようなin vitroの生物学的分析の使用を含む。ＬＨを含有する膜表面またはＬＨとＬＨ受容体との複合体に結合する最も有用な抗体の特徴は、サルもしくはマウスの免疫化後における設計手順を用いたリンパ球の分離を容易化させることもできる。この手順にて、リンパ球をヒト血清アルブミンまたは非特異的結合を防止する他の蛋白質で被覆されたプラスチック表面に添加し、その場合これらを１ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミンを０．９％ＮａＣｌ−０．０２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中に含有する溶液に３７℃ にて１時間より長くさらす。これら膜表面に結合しないリンパ球を、ｈＬＨにさらし、次いで上記したようにヒト血清アルブミンにさらして被覆された膜表面に添加する。ｈＬＨの使用量は、充分な材料がプラスチックに吸着される限り臨界的でない。これは、２０〜５０μｇのｈＬＨ／ｍｌを用いて達成することができる。しかしながら、それより少量および多量も可能である。ＬＨで被覆された表面に付着するリンパ球を選択し、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを作成し（３０）、エプスタイン・バールもしくは他のウィルスで形質転換させ、ラムダファージにてクローニングし（３６）、あるいは単一細胞をポリラーゼ連鎖反応クローニングに対して選択する（４２）。産生された抗体を実施例２に要約したようにスクリーニングする。これら手法は、望ましい抗体の比率を増大させる。ＬＨを部分阻害できる多くの抗体は、ＬＨ受容体に結合したＬＨへの結合の能力に基づく方法によっても選択することができる。ｈＬＨによるマウスもしくはサルの免疫化に続き、脾細胞および他のリンパ球を分離すると共にＬＨ受容体を発現する真核細胞単一層に積層する。これら細胞単一層は、当業界で標準的な方法（４８、４９）によりラット（４５）、ヒト（４６）、ブタ（４７）または他のＬＨ受容体ｃＤＮＡを発現しうる発現ベクターで細胞を遺伝子導入して作成することができる。単一層に付着するリンパ球は廃棄する。単一層に付着しないリンパ球を、ｈＬＨもしくは他のＬＨを含有するＬＨ受容体を発現する細胞の同様な単一層に添加する。これらは、１００ｎｇのｈＬＨまたは他のＬＨを単一層に４℃で１晩添加すると共に結合しなかったホルモンを洗浄除去して作成することができる。これら細胞に付着するリンパ球を選択すると共に、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを作成し（３０）、エプスタイン・バールもしくは他のウィルスで形質転換させ、あるいはポリメラーゼ連鎖反応クローニングを行う（４２）。生成された抗体を実施例２に要約したようにスクリーニングにかける。これら手法は、望ましい抗体の比率をも増大させる。この受容体に基づく手法はＬＨで被覆されたプラスチック表面におけるリンパ球のスクリーニングに基づく手法よりも面倒であるが、有用な抗体の一層高い比率をもたらす。実施例４多卵胞性卵巣症候群を処置するための抗体の使用多卵胞性卵巣症候群（ＰＣＯ）は不完全な濾胞の発達および女性の正常に排卵不能を特徴とする。その卵巣は多くの小さい末成熟濾胞を含有するが、臨床的処置無しには排卵の点までほとんど進行しない。これら女性はしばしば、正常サイクルの受精可能な女性と対比し増大したアンドロゲンとＬＨ／ＦＳＨの高い比とを有する。ＰＣＯを有する女性にて排卵を誘発するには２つの主たる方法がある。これらは濾胞の発達を促進するためのＦＳＨの投与または下垂体後葉部からのＦＳＨの分泌を促進する抗−エストロゲンの投与を包含する。両処置は排卵を誘発させうるが、これらは多重排卵を誘発する危険もある。何故なら、これらはＦＳＨ分泌を調節する正常な陰性エストロゲンのフィードバックループを迂回するからである。その結果、これら薬剤で処置された女性は一般に過敏症、すなわち処置の致命的副作用を防止すべく慎重に監視される。ＦＳＨ分泌における一時的かつ自律性上昇をもたらすＬＨに対する非中和性抗体を１０μｇ〜１０ｍｇ投与すれば、ゴナドトロピンでの処置よりも低い刺激過剰の危険性にて排卵を誘発する。この作用は抗体が体謝されあるいは循環から除去されてその効果が投与の１〜２週間以内に喪失するので一時的である。この処置は、ＦＳＨ分泌に対するエストラジオールの陰性フィードバック作用が除去されないので自律的である。したがって、ＦＳＨレベルが上昇すると共に濾胞の発達を刺激する場合、エストラジオール分泌が上昇してＦＳＨ分泌の上昇をさらに阻害する。実施例５排卵誘発の１回もしくは２回の投与処置誘発１回あるいは二回のみの処方を含むＰＣＯの女性における排卵を誘発するために使用できる良好な方法は存在しない。この症候群のほとんどの処方はＦＳＨ、ＦＳＨ＋ＬＨまたはｈＣＧ、ｈＭＧ、抗エストロゲン、ＧｎＲＨまたはこれら薬剤の各種の組合せによる多重処置を必要とする。ある種の手法はＧｎＲＨ拮抗剤をも用いてＬＨおよびＦＳＨの両者の循環レベルを減少させることにより、排卵を外来性ホルモンでの処置にり誘発する。ここに説明した種類の好適抗体を高濃度で１回投与すれば排卵を誘発することができる。これは抗体を大過剰で安全に投与できるからであり、抗体は長い血漿半減期を有するので抗体はＦＳＨレベルを数日間にわたり増大させるのに有効であり続ける。ＦＳＨ分泌に対するエストラジオールの天然フィードバック作用のため、ＦＳＨ分泌は濾胞の発達により濾胞で産生されたエストロゲンにより調節される。優性な濾胞が選択されてエストラジオールのレベルが増大した時点で、抗体の殆どは循環から除去されている。抗体は、幾つかの理由の１つもしくはそれ以上により排卵に必要とされるＬＨ上昇の作用を抑制しない。第１に、ＬＨ放出量は排卵に必要な量を越える。第２に、抗体はＬＨの活性を減少させるに過ぎず、これを中和しない。第３に、ＬＨ上昇の時点で抗体の多くは循環から除去されるであろう。従って、抗体での処方に続き、濾胞の発達および排卵が生じる。実施例６適する抑制性抗血清を誘発する抗原実施例１に示した適する抗体の投与を用いて受精能を増大させることができる。しかしながら、これは「不活的」免疫化であるため、抗体のレベルを数日間もしくは数週間以上にわたり高く保つには抗体の反復投与を必要とする。短期間の上昇（たとえば数日間）で女性における排卵を誘発するのに充分であり、あるいは１周期または数周期にて動物における排卵の回数を増大させるのに充分である。ＬＨの活性を部分的に阻害することにより受精能をより長期間または数周期にわたり増大させることが望ましければ、ＬＨに対する抗体の活発な生成を引き起こす免疫反応を誘発させるのが有用である。最も有用な抗体を得るには、ある程度のＬＨ活性を保持するＬＨと複合体を生成するＢ１０５、Ｂ１１０または他の抗体により認識されるものと同様なＬＨ分子の一部分に対し反応を誘発できる免疫原を設計することが必要である。最も適する免疫原はＬＨβ−サブユニットから得られる。何故なら、このサブユニットはＬＨに対し特異的であるからである。α−サブユニットはＬＨ、ＴＳＨおよびＦＳＨに共通である。その構成はホルモンにて若干相違すると思われ（２１）、従ってα−サブユニットに対する有用な抗体も作成することができる。しかしながら、α−サブユニットに対する抗体は３種全てのホルモンの作用を阻害する能力を有する。免疫反応がｈＦＳＨに向けられれば、これは受精能を増大させず、しかも不妊性をもたらし得る。ｈＬＨに対し女性を活発に免疫化して受精能を増大させることが望ましければ、ｈＣＧに対する抗体の誘発を抑制するように注意を払わねばならない。ｈＣＧに対する抗体は、受精能を低下させる能力を有する（下記参照）。これは一般に、上記の受動的免疫処理に伴う問題でない。何故なら、ＬＨに対する投与抗体は一般にｈＣＧが受精能につき必要とされる時点に先立ち循環から除去されるからである。ＬＨ活性を中和しないＬＨの一部分に対する抗体の生成を誘発できる抗原（すなわち所望の免疫反応）は、ＬＨβ−サブユニットの部分から得られる配列を有する。しばしば、これはＬＨがＬＨ受容体に結合した後に露出され続けるβ−サブユニットの領域である。最も抗原性のある免疫原になるためには、免疫原は免疫すべきヒトまたは動物に対し異質である配列を含有しなければならない。ＬＨ β−サブユニットの全体を用いて免疫処理すれば、ＬＨ活性を完全に抑制する抗体の産生を得ることができる。高力価の中和性抗体は、不妊症をもたらし、または例えば尚早な閉経を誘発したり睾丸の寸法もしくは機能の喪失をもたらすような他のマイナスの結果を示すかもしれない。免疫原に伴わせるべきＬＨβ−サブユニット残基の最良の選択は、ホルモンがＬＨ受容体に結合する際に露出され続けるものである。これらはホルモンの７４〜７７残基に近い部分、すなわちｈＬＨもしくはｈＣＧβ−サブユニットおよびｈＬＨ−もしくはｈＣＧ−受容体複合体に結合する抗体により認識されるホルモンの領域を包含する（２６、５０）。免疫化において使用してはならないβ−サブユニットの領域は、残基８９〜９２および４７〜５１に近い配列を包含する。これらは、活性を中和する抗体に関する結合部位の位置である。最小合成抗原の設計は、ＬＨがＬＨ受容体に結合する際に露出されるｈＬＨβ −サブユニットの残基を包含する。これらの幾種かはＰｒｏ７３−Ａｒｇ７４− Ｇｌｙ７５−Ｖａｌ７６−Ａｓｐ７７−Ｐｒｏ７８−Ｖａｌ７９−Ｖａｌ８０− Ｓｅｒ８１を包含する。これら配列を有する合成ペプチドを大型キャリヤ分子に結合させると共に当業界で周知された方法（１４〜１６、５１〜５３）を用いて免疫化に使用することができる。産生された非中和抗体はｈＬＨと結合して、その生物学的活性を阻害する。しばしば、高力価免疫反応を示す小型のペプチド抗原の能力は低い。以下の説明は、ホルモンがＬＨ受容体に結合する際に露出され続けるｈＬＨの領域に対する抗体を産生する場合、一層効果的である抗原をどのように作成するかを例示する。同様な手法を用いて、他の脊椎動物ＬＨを包含する任意の蛋白質につき免疫原を設計することもできる。最も良好な免疫原は、動物に存在する蛋白質とは実質的に相違するが免疫反応を所望するエピトープの三次構造を保持するものであることが周知されている。適する免疫原は、たとえばｉ）Ｂ１０５および／またはｈＬＨの作用を部分抑制する他の抗体に結合する能力を保持し、ｉｉ）ＬＨ活性を中和する抗体に結合する能力を喪失し、かつｉｉｉ）抗原性を有する、ｈＬＨβ−サブユニットを改良して作成することができる。さらに、適する免疫原は、ＬＨβ−サブユニット以外の蛋白質から出発すると共にＢ１０５および／またはｈＬＨの作用を部分抑制する他の抗体に結合する能力を獲得するよう改良して設計することもできる。ｈＬＨの作用を部分阻害する抗体を「鋳型」抗体と称し、これらを用いて所望エピトープの保持を監視しあるいは積極的に選択する。鋳型抗体の好適例は実施例２に要約したように受精能を増大させるのに有効であることか判明したものである。「排除」抗体と称する他の抗体を使用して、望ましくないエピトープを含有する抗原アナログに対し選択することもできる。「排除」抗体の例は、ｈＬＨの生物学的活性を完全中和しかつ／またはこれがその受容体に結合しないよう抑制するものである。鋳型および排除抗体に基づく陽性／陰性の選択手法を用い抗原を構築するには、「Ａ」および「Ｂ」と称する全体的に異なる２つの手法が存在する。手法「Ａ」においては、ＬＨβ−サブユニットから出発し、ランダム突然変異を用いて「鋳型」抗体により識別されるエピトープ外部の分子領域の置換を行う。産生される新たな分子を発現させ（下記参照）、その鋳型抗体に結合する能力を監視する。鋳型抗体に結合し続けると共に分子の他の領域に突然変異を有するものは、分子の他の部分における第２回の突然変異に用いられる。この過程を、抗体結合部位に含まれるもの（たとえばＢ１０５）を除き蛋白質の全領域が改良されるまで継続する。最終アナログは鋳型抗体に結合するが、排除抗体には結合しない。この方法の変法においては、鋳型抗体に結合するホルモンキメラから出発する。この種のキメラは、鋳型抗体に結合しないことあるいはｈＬＨに対する中和性免疫反応を誘発することが知られた異なる動物種類のＬＨから出発して作成することができる。この種の免疫原の例はヒトＬＨおよびウシＬＨのβ−サブユニットのキメラである。これらは、プロリン４７をアルギニン(すなわちこの位置にてヒトＬＨβ −サブユニットに見られる残基)で置換して改良されたウシＬＨβ−サブユニットを包含する。ｈＬＨの残基は、ＬＨの異なる種類の相同性領域につき置換して、鋳型抗体のための結合部位を形成する。相同性領域は、ｈＬＨの配列と他のＬＨとをその高度に保存されたシステイン残基(ピアス・アンド・パーソンズ（１）により示される)の位置により整列させて同定される。手法「Ｂ」においては、糖蛋白質ホルモンβ−サブユニットの構造には関連しないあるいは極く僅か類似するフレーム分子を使用する。これは、たとえば免疫グロブリン腕または４個のヘリックス束の蛋白質中の螺旋間に存在するループ構造を有する任意の蛋白質を包含する。残基６５〜８５間のｈＬＨの配列は、標準的な突然変異導入手法によりループの１つにつき置換される。この蛋白質を適するＥ．ｃｏｌｉ発現ベクター(たとえばノバゲン社から入手できるＴ７ベクターの１種)にて作成する場合、これをｈＬＨ受容体複合体に結合するモノクローナル抗体に対し結合する能力につき試験することができる。エピトープを形成する残基の１部のみが発現する蛋白質に存在するので、その親和性は抗体に対するｈＬＨの親和性よりも低い。手法「Ａ」もしくは「Ｂ」にて作成された蛋白の選択性および親和性を向上させるには、細菌発現系またはバクテリオファージ発現系のいずれかを使用することができる（３４、３６、５５〜５８）。いずれの場合も、突然変異アナログのライブラリーを作成すると共にＢ１０５、Ｂ１１０または実施例２にて有用であると判明した他の同様な鋳型抗体につき最高の親和性を有する突然変異体を選択する。さらに、実施例２では有用でないと判明した中和抗体もしくは抗血清を用いて陰性の選択を用いることもできる。これは、ワクチンで使用する場合、所望しない抗体を生ずる抗原の能力を最小化させる。以下の説明はファージ表示に基づく選択法にも適用されるが、ほぼ全ての発現系に対しライブラリーを作成およびスクリーニングする当業者により容易に適合させることができる。選択に推奨される１つの系は蛋白質ブロッティングに基づく系である（５９）。数種の異なるファージ表示系も使用することができる。１つはｐｈＧＨ−Ｍ１３ｇＩＩＩに類似するベクター(すなわちｐＸ−Ｍ１３ｇＩＩＩ) を使用する（３４）。上記手法「Ａ」を使用する場合、ｐＡ−Ｍ１３ｇＩＩＩと称するこの新規なベクターはｈＬＨβ−サブユニットまたはｈＬＨ−ＬＨβ−サブユニットキメラのいずれかを、ｐｈＧＨ−Ｍ１３ｇＩＩＩの成長ホルモンをコードする配列の位置に有する（第４図）。上記手法「Ｂ」を使用する場合、ｐｈＧＨ−Ｍ１３ｇＩＩＩの成長ホルモンをコードする配列は残基７４に近いｈＬＨ β−サブユニットをコードする配列を含む以外は、ｈＬＨβ−サブユニットに無関係な分子をコードする遺伝子で置換してｐＢ−Ｍ１３ｇＩＩＩと称する新規なベクターを得る。「Ｂ」配列をコードするベクターの領域をコードする配列は、カセットまたは他の種類の突然変異を可能にしてランダム配列を導入できる制限部位をも有する。ランダム配列がｐＡ−Ｍ１３ｇＩＩＩもしくはｐＢ−Ｍ１３ｇＩＩＩベクターのコード化領域に導入されると共に、これらベクターを用いてＥ．ｃｏｌｉを形質転換させると突然変異種のライブラリーが形成される。これら突然変異蛋白質は、ヘルパーファージＭ１３ＫＯ７をＥ．ｃｏｌｉに添加することにより遺伝子ＩＩＩ融合蛋白としてＭ１３ファージミド粒子の表面にて発現することができる。これらファージミド粒子は、抗体に対する改良蛋白質「Ａ」もしくは「Ｂ」の親和性に比例して抗体に結合する。鋳型抗体に結合するファージミド粒子を選択するための１つの便利な方法は固相分析手法を用いることである。この分析においては、鋳型抗体を用いて文献（２２）に記載されたように表面を被覆し、次いでファージミド粒子を含有する溶液を添加する。表面に結合しないファージミド粒子を捨てることができる。表面における抗体に結合するような粒子を低いｐＨ緩衝液（すなわちｐＨ３）の添加により抗体から除去すると共に、Ｅ．ｃｏｌｉを再形質転換させるべく使用することができる。陰性選択が望ましければ、表面における鋳型抗体の代わりに排除抗体を用いることもできる。この場合、表面に付着する粒子を捨てる。この過程を数回反復し、次いで「Ａ」および「Ｂ」蛋白に関する数種の遺伝子のコード化領域をＤＮＡ配列決定にかける。このようにして、鋳型抗体結合につき臨界的である配列を同定することができる。さらに、排除抗体を使用すれば、望ましくないエピトープに対し選択することもできる。さらに、所望の抗体結合領域の構成に対し殆どまたは全く作用を示さない分子の他の部分にて置換を同定することもできる。これら配列によりコードされた分子を使用して動物またはヒトを免疫化する場合、これらはｈＬＨと交叉反応する抗体の形成を示す。これら抗体は、ｈＬＨがその受容体に結合した後に露出されることが知られた分子の部分を識別するので、これらはｈＬＨの作用を阻害できるが、その生物学的活性を完全には抑制しない。ある場合は、鋳型抗体および排除抗体を用いることができない。これらの場合は、鋳型抗血清および排除抗血清を作成して次の手法により抗体の代わりに使用することができる。ラットの卵巣黄体は、雌ラットをＰＭＳＧおよびｈＣＧにより上記したように処理して作成される。これら黄体をｈＬＨと共に培養して、膜におけるＬＨ受容体に対しホルモンが結合することを可能にする。次いで膜を洗浄して遊離するｈＬＨを除去し、膜を抗血清と共に培養する。膜のＬＨ受容体に結合したｈＬＨに結合する抗体を、次いで膜の洗浄により抗血清の残部から分離する。これら抗体は５未満のｐＨにおける膜の処理により放出される。この処理は抗体とｈＬＨとの両者を受容体から放出させる。これら抗体をゲル濾過または他の方法によりｈＬＨから分離し、次いで鋳型として使用することができる。鋳型抗体が欠失した血清に残留する抗体を排除抗体として使用することができる。実施例７ｈＣＧを中和する抗体を誘発する抗原の開発好適な受精抑制の免疫原は、ｈＬＨではなくｈＣＧに対する抗体の産生を誘発すると考えられる。これは、異る抗体を使用して実施例６記載の鋳型／排除方法を用いることができる。Ｂ１０７およびＢ１０９を含む鋳型抗体は、コロンビア大学から入手できる。これら抗体は、高親和性でｈＣＧに結合し、遊離ｈＣＧβ −サブユニットまたはｈＬＨに対し低い親和性を有している。ｈＣＧのヘテロ二量体（例えば、分子の生物学的活性化形態）に対し特異的であり、循環中のｈＣＧの殆どの他の不活性化形態には結合せず、抗体により中和されるという理由から、高親和性(Ｋａ＞５×１０⁷Ｍ^-1)でそれら抗体により認識され得る免疫原は、ｈＣＧに対する抗体の中和の形成を誘発する。この免疫原に好適に維持されるべきβ−サブユニットの蛋白質は、４３〜５３および９１〜９２残基を含有する。さらに、他の有用な鋳型抗体は、ＨＣＺ１０７およびＨＣＯ５１４であり、ハイブリテック、サンディエゴ、ＣＡから入手可能である。これら抗体は、ｈＣＧおよびその遊離β− サブユニットの両方に高親和性で結合し、ホルモンの活性を中和するが、さらにｈＬＨに対して低い親和性を有している。ｈＣＧとのＨＣＺ１０７の相互作用に対する重要な残基は、１１４残基の付近が含まれ、ｈＣＧとのＨＣＯ５１４の相互作用に対する重要な残基は、７７残基の付近が含まれる。実施例８免疫学的活性の増強ＬＨまたは絨毛性ゴナドトロピンに対する免疫化の活性化において、１つは部位−決定自己免疫反応を引き起こすことである。従って、抗原性の高い蛋白質を用いることが不可欠である。可能な限り外来性の免疫原を作る実施例６記載の鋳型／排除の手法を用いることにより可能となる。さらに、免疫系を使用して相互作用し得る機会を増加する多価の蛋白質を作ることが所望される。多価の蛋白質を作る１つの良好な方法は、Ｃ−末端またはＮ−末端のどちらかに他の分子と多重螺旋を形成するα−ヘリックスの形成させると考えられる残基を添加することである。多重螺旋を形成するペプチド配列の設計の法則は、公知のことである（６０，６１）。さらに、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン蛋白質、ラミニン、ＧＣＮ４または任意の幾つかの他の蛋白質中に見出されているような多重螺旋を形成することが知られている蛋白質から自然に生じる配列を使用することもできる。Ｃ−末端またはＮ−末端にコラーゲン見出されているのと類似する３重ヘリックスの形成を生じさせる残基を添加することもできる。これら３重ヘリックスは、抗原の３個またはそれ以上の分子と結合させることを可能にする。免疫原の抗原性を増加させるための他の方法として、免疫原の末端同士を供役させることによるポリ蛋白質の作成を伴うものもまた使用することができる。図５に概略を示しように、この方法の使用によりユニットの反復の任意の数を有する蛋白質を設計することは可能である。ＬＨ活性の非−中和阻害を与える好適な抗体は、通常遊離β−サブユニットおよびそのヘテロ二量体とよく相互作用する。従って、これら抗体の形成を誘発する免疫原の調製において、遊離β−サブユニットを用いて開始するのが通常便利である。これに対し、ｈＣＧ活性の中和阻害を与える多くの好適な抗体は、遊離β− サブユニットよりα，β−ヘテロ二量体とよく結合する。これら抗体形成の誘発は、ｈＣＧβ−サブユニットの１〜１１４残基からなるペプチドのＣ−末端とグリシンおよびセリンの６回反復単位を構成する柔軟性蛋白質リンカーのＮ−末端とを供役させることにより調製する融合蛋白質である免疫原と始めるのがしばしば有用である。この融合蛋白質のＣ−末端は、ウシα−サブユニットの１〜９６残基のＮ−末端と供役させる。これは、ｈＣＧにおいて見出されるβ−サブユニットの残基の全体的構成を有する単一の蛋白質を提供し、かつ直接免疫化に使用でき、または実施例６における開始化合物として使用することができる。抗原の投薬は、当業者に公知の任意の方法において実施することができる。投薬は、注射、アジュバンド中における注射および抗原のウイルスとの供役を伴うのもである。実施例９ｈＣＧ効果の逆転妊娠を誘発するためにｈＣＧを用いる女性への接種は、次の幾つかの所望する特徴を有する、１）抗体は受精を生じさせることのみに機能する、２）処方は長期にわたる（多数の月経周期に対して生じる）および３）女性は、ピルを接種する必要がなくあるいは着床する。さらに、接種は子宮による胎児の排除を妨げることが知られているプロゲスチンを用いることにより可逆性である。プロゲスチンには、ジドロゲステロンのような多くのプロゲステロンの化合物が含まれる（６２）。この化合物は、ソルベイ、ファルマシティカル、９０１ソーヤロード、マリエッタ、ジョージア州から商業的に入手可能であり、免疫分析においてプロゲステロンと交叉反応しない所望される特徴を有している。従って、ジドロゲステロンの処方は、プロゲステロンのレベルの正確な測定を妨げない。ｈＣＧに対し活性的に免疫化した女性は、正常な月経周期を有し続け、月経周期の中間点中、期待される時間に排卵される。受精を伴う本方法において、排卵される時を知ることが所望される。ところが、月経周期の１８日目において排卵されることだけが予想することができる。排卵時において、プロゲステロンは、ＬＨの影響下において黄体において産生される。プロゲステロンは、排卵と相関しかつ排卵を監視する方法として知られている基礎体温の上昇を引き起こす。ＬＨの上昇を監視する他の方法は、測定排卵検出キットのうちの１つを用いて尿中のＬＨを測定することである。２０日目以後、妊娠し始めることが所望される女性は、ジドロゲステロン（１日に３〜６ｍｇを３回）および０．６２５〜１．２５ｍｇのプレマリン（アイルストリミテッド、ニューヨーク、ＮＹ）を投与し始める。この投与量は、接種の結果として中和されなければ、ｈＣＧにより引き起こされる黄体のプロゲステロンを模倣するのに充分である。ジドロゲステロンの投与は、６週間生理を阻害し続ける。そのときにジドロゲステロン治療が終了する。血清中のプロゲステロンのレベルが低ければ、妊娠は起きず、生理が続いて起こり、かつ妊娠においてもう１回試みることができる。血清中のプロゲステロンのレベルが高ければ、プロゲステロンのレベルは妊娠およびプロゲステロンの胎盤における産生により高いのである。ジドロゲステロンの終了は、妊娠を中絶させないと考えられる。血清中のプロゲステロンのレベルもまた、標準的ラジオイムノ分析技術を用いて監視することができる。実施例１０ＦＳＨを用いた接種による男性の受精能の抑制ＦＳＨの免疫中和は、サルにおいて受精を阻害することが示され、ヒトにおいて受精を阻害することが期待されている（８）。ＦＳＨのβ−サブユニットが高く保存されている特徴により、任意の種において使用するＦＳＨに対し、高い力価を有する中和抗体の誘発を可能にする高特異性ｈＦＳＨを開発することは非常に困難である。ｈＣＧに対する抗体の開発に関して記載した方法は、ｈＦＳＨに対する抗体の開発に適用することができる。従って、ｈＦＳＨのβ−サブユニットの１〜１１１残基をｈＣＧのβ−サブユニットの１〜１１４または１〜１１７に置換する分子を用いて開始する。鋳型抗体として、１つはＦＳＧ７６１（ハイブリテック）を使用することができる。中和抗体を所望することにより、好適開始分子はグリシン−セリンリンカーを介してｈＦＳＨのβ−サブユニットと供約するウシα−サブにユニットポリペプチドもまた含有し得る。ヒトにおいてこのワクチンの使用は受精を妨げることができる。実施例１１ｈＣＧに対する本発明の試験的手法の詳細１．１つは、モノクローナル抗体の作成またはそれらの購入のいずれかにより中和抗体を得る。１つは、ｈＣＧに対するウサギまたは他の動物の免疫化により中和抗血清を得る。ｈＬＨに対する抗体あるいは抗血清を得ることも有用である。２．これら抗体あるいは抗血清は、ｈＣＧのβ−サブユニットの突然変異体のライブラリーのスクリーニングに陽性および陰性鋳型として使用する。これらのライブラリーは、ｈＣＧ分子の特定領域においてｈＣＧのβ−サブユニットのランダム突然変異導入により作成することができる。Ｃ−末端を欠損したあるいは、中和しない免疫原に対し選択を無効にする分子の一部に関して異なる配列を有するｈＣＧβ−サブユニットを使用するのが好適であることに注目する。１つの便利な方法は、後にも示すファージ表示技術の使用を伴う。しかしながらファージ表示は、作業する技術に対し必須ではない。３．突然変異体は、陽性選択抗体に最初に結合させることができる。本実施例、即ちｈＣＧのワクチンの開発は、ＬＨに構造的に一致する突然変異体を取り除くＬＨに対する抗体またはＬＨに対する抗血清に結合することを伴う。４．陰性選択抗体に結合しない突然変異体は、陽性選択抗体、即ちｈＣＧの免疫化により作成される抗体に結合させることができる。陽性選択方法中、遊離ｈＣＧβ−サブユニットを、遊離サブユニットに結合する抗体を排除するためおよび二量体特異的なこれら抗体の選択方法を制限するために添加する。陽性選択抗体に結合しない突然変異体は、廃棄する。ファージ発現蛋白質の場合には、ファージは陽性選択抗体から溶出し、Ｅ．ｃｏｌｉの感染に使用する。５．本方法は、ｈＬＨに結合し得る潜在的免疫原を削除し、さらにｈＣＧ抗体に対し低親和性を有する免疫原を排除するために数回繰り返す。免疫原をコードするＤＮＡ配列を、配列決定する。ｈＣＧとは最も異なるがｈＣＧ特異的抗体または抗血清と高親和性で結合する可能性が残る免疫原は、さらに使用する。６．必要であれば、潜在的免疫原とｈＣＧとの違いの数を増加させるために２回の突然変異導入を実施する。目標は、ｈＬＨとは異なりかつ可能な限りｈＣＧとは異なるが高力価中和抗体の誘発を可能にするｈＣＧの構造の重要な形態を残す免疫原を工夫することである。これらは、ｈＬＨのβ−サブユニットとはほとんど異なるＣ−末端とは別のβ−サブユニットの領域を含む。７．主要な特異的抗原決定因子を選択すると、免疫原は多価として作られる。これを達成する幾つかの方法がある。その１つは、決定因子を自身多価であるまたは多量体形態（例えば、免疫グロブリン）である蛋白質と融合させることである。もう１つは、残基を多重螺旋形態および会合を促進する蛋白質と融合させることである。可能な点で、それらは免疫反応を誘発することが知られている自然の蛋白質に由来する。８．Ａ．受精を妨げることを所望するのであれば、そのままのｈＣＧ分子に対し高い力価を獲得することが必須である。これは、ｈＣＧとα−サブユニットに類似する分子との結合にも必要であるかもしれない。他の哺乳動物の糖蛋白質のα −サブユニットは、開始物資として適合する。８．Ｂ．開始点においても適合する分子は、単一ポリペプチドである所望し得る特徴を有し、かつヘテロ二量体の特徴を残すものである。この場合において、α −サブユニットに由来する分子の部分においてもまた突然変異させることが望ましい。８．Ｃ．免疫原は、Ｅ．ｃｏｌｉ、酵母または哺乳動物細胞において発現させるような任意の便利な方法を用いて製造することができる。免疫原をグリコシル化する必要はない。免疫原は、ウイルスのコート中に組込むこともできる。８．Ｄ．ｈＣＧβ−サブユニットと開始するために必要ではなく、任意の蛋白質と開始することができる。所望する蛋白質を選択する鋳型手法を用いることが重要である。例えば、４個のヘリックスの束を用いて開始し、かつｈＣＧのβ−サブユニットの３８〜５７残基および９１〜９２残基に隣接する部分のアミノ酸配列を組込むこともできる。ｈＣＧ−特異的抗体に対する抗イデオタイプモノクローナル抗体を伴う、免疫グロブリンを用いて開始することもできる。図１は、放射線標識したｈＬＨのＬＨ受容体への結合における抗体および抗血清の影響を説明するグラフである。図１は、ｈＬＨのＬＨ受容体への結合における３種の異なったタイプの抗体または抗血清の影響を説明する。抗体“Ａ”は、ホルモンの受容体への結合において殆どあるいは全く効果を有していない。in v ivo でその主要潜在的な阻害の影響は、ホルモンの代謝によるものである。抗体 “Ｂ”は、ホルモンの受容体への結合を部分的に阻害する能力を有している。従って、この抗体は、in vivo では阻害するが、ＬＨに関しこの抗体を大過剰量使用しても、示すように４０％未満までその活性を減少させることはできない。ＬＨの活性を阻害する異なる能力を有する異なる抗体（例えば、Ｂ１０５およびＢ１１０）を製造できることを記す。抗体“Ｂ”は、in vivo において最も有用である抗体の一般的タイプの例である。高濃度においてｈＬＨの活性を抑制することから、抗体“Ｃ”は、中和抗体である。その潜在的ＬＨ活性の抑制により、この抗体の過剰量は、受精を阻害する。図２は、in vitro においてステロイド産生を誘導するｈＬＨの活性において抗体および抗血清の影響を説明するグラフである。図２は、ラット精巣Ｌｅｙｄｉｇ細胞懸濁液からテストステロンの合成(つまりステロイド産生)を誘導するＬＨの能力において、３種の抗体の効果を示す。曲線“Ａ”は、抗体の不存在下においてのステロイド産生を誘導するｈＬＨの能力を示す。曲線“Ｂ”は、ｈＬＨ活性を約３倍減少させる得る定量以上の過剰量の抗体存在下においてのステロイド産生を誘導するｈＬＨの能力を示す。曲線“Ｃ”は、、ｈＬＨ活性を約２０倍減少させる得る定量以上の過剰量の抗体存在下においてのステロイド産生を誘導するｈＬＨの能力を示す。曲線“Ｄ”は、、ｈＬＨ活性を中和し得る定量以上の過剰量の抗体存在下においてのステロイド産生を誘導するｈＬＨの能力を示す。 in vivo において “Ｂ“および／または“Ｃ”抗体の使用の決定は、ＬＨ／ＦＳＨとの比率および所望するＬＨ活性を抑制するその程度に依存する。ｈＬＨのレベルが高くかつ最も減少させる必要がある場合には、抗体“Ｃ”を使用するのが好適である。ｈＬＨ／ｈＦＳＨの比率が殆ど上昇しない場合には、抗体“Ｂ”が好適である。非常に高い投与量においての抗体“Ｄ”の使用は、不妊を生じさせる。多くの有用な抗体は精巣細胞と同様に卵巣細胞においてｈＬＨまたは他のＬＨの活性を減少させる能力を有することが見出されることが予測される。図３は、in vivoにおいてステロイド産生を誘導するｈＬＨの能力において抗体および抗血清の影響を説明するグラフである。図３は、抗体の定量以上の量は、投与されるｈＬＨの異なる量に先立ち投与される場合に、雄におけるテストステロンの形成における３種の異なる抗体の効果を示す。説明する全ての実施例において、抗体の量は、モル濃度に基づいてｈＬＨの濃度より非常に多量が投与される。同様な効果は、雌におけるステロイド産生における抗体に対して期待される。曲線“Ａ”は、抗体不存在下でのステロイド産生におけるｈＬＨの効果を示す。曲線“Ｂ”は、最大４０％までのｈＬＨ活性を阻害し得る定量以上の量の抗体の効果を示す。曲線“Ｃ”は、最大９５％までのｈＬＨ活性を阻害し得る定量以上の量の抗体の効果を示す。曲線“Ｄ”は、抗体を中和する定量以上の量の抗体の効果を示す。図４は、鋳型／排除選択手法において使用できるベクターを示す。これらベクターは、バス等（３４）の記載のように設計において類似し、ヒト成長ホルモンをコードする配列をｈＬＨのα−サブユニットまたはホー等（６３）により記載されたＳＯＥ方法のように当業界において標準であるポリメラーゼ連鎖反応を用いて作成したｈＬＨのキメラをコードする配列で置換することによって作成される。ｈＣＧおよびｂｈＦＳＨに対する免疫原の産生のための同様なベクターは、ヒト成長ホルモンをコードする配列をｈＣＧのβ−サブユニットの１〜１１４残基をコードする配列、ｈＦＳＨのβ−サブユニットの１〜１１１残基、ウシα− サブユニットをコードする配列の５′に会合するグリシン−セリン−グリシン− セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン− セリン−のアミノ酸をコードする配列を５′に会合するｈＣＧのβ−サブユニットの１〜１１４残基をコードする配列またはウシα−サブユニットをコードする配列の５′に会合したグリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン− セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−のアミノ酸をコードする配列を５′に会合するｈＦＳＨのβ−サブユニットの１〜１１１残基をコードする配列で置換することによって作成される。この図において、“lac p”はlacプロモータを表し、stIIはリーダー配列を表し、“hLHベータ”はヒトＬＨβ−サブユニットのコドン１〜コドン１１４をコードする配列を表し、“M13geneIII”はstII およびヒトＬＨβのコドンのように同じ読み枠におけるM13蛋白質の１９８〜４１０コドンの配列をコードする配列を表す。“Amp耐性”は、β−ラクタマーゼ酵素をコードするｐＢＲ３２２に由来する遺伝子であり、“322ori”はｐＢＲ３２２の複製起点であり、“fl ori”はM13の複製起点である。突然変異は、このベクターの“hLHベータ”の部分において作成される。さらに、“hLH ベータ” のコドンは本明細書に記載する他の蛋白質のコドンと置換することができる。図５は、ＬＨ、ｈＣＧまたはＦＳＨに対する活性的な免疫化に使用される抗原性を増加させる免疫原のタイプを示す。これらの幾つかは、多重螺旋（パネルＡ）の形態として知られている７回反復を有する。他は、３重ヘリックス（パネルＢ）の形態として知られている単一反復を有する。これらは多量体であるために、抗原性の増強を与える。多量体免疫原の作成の他の方法は、免疫グロブリン（パネルＤ）のＣ−末端（パネルＣ）あるいはＮ−末端（パネルＮ）との融合蛋白質の調製を伴う。ウシα−サブユニット、ｈＣＧのβ−サブユニットおよびｈＦＳＨの融合蛋白質を構成する単一鎖の免疫原は、ヒトにおいて増強した抗原性を有する。挿絵Ａ：２個以上の７回反復のコドンは、コドン１１４とｌｈまたはβサブニットのアナログの終止コドンとの間のフレーム中に挿入される。７回反復の設計は、引用文献６０に記載のものと類似する。各々の反復は、下記する特徴を有する“Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ”のために標識した７アミノ酸を含有する。アミノ酸ａおよびｄは、疎水性アミノ酸、つまりロイシン、イソロイシンまたはバリンである。アミノ酸ＥおよびＧは、電荷のあるアミノ酸である。アミノ酸Ｅは、ホモ二量体を形成するためにアミノ酸Ｇとは逆の電荷を有する。従って、Ｅがグルタミン酸であれば、Ｇはリジンである。アミノ酸“Ｂ，Ｃ，Ｆ”は、ヘリックスの形成を支持するほぼ任意のタイプとすることができる。従って、これらは、プロリンまたはグリシンをほとんど含有しない。挿絵Ｂ：６回以上の３アミノ酸反復のコドンは、コドン１１４とβ−サブユニットの間のフレーム中に挿入される。これら３アミノ酸は、グリシン、Ｘ、Ｙのアミノ酸をコードし、ＸおよびＹは３重ヘリックスを形成するコラーゲンの配列の一部分として知られている任意のアミノ酸である。挿絵Ｃ：ＩｇＧ重鎖のコドンは、β−サブユニットのコドン１の５′に即座に挿入される。これらの遺伝子が、ラムダまたはカッパＩｇＧ軽鎖と共に発現する場合には、そのＣ−末端において２つのβ−サブユニットを含有するＩｇＧの産生が引き起こされる。挿絵Ｄ：可変および第１不変領域を欠損するＩｇＧ重鎖のコドンは、β−サブユニットのコドン１１４と終止コドンとの間のフレーム中に挿入される。挿絵Ｅ：グリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−グリシン −セリン−グリシン−セリン−グリシン−セリン−のようなグリシン−セリン反復配列（つまり、ＧＳ反復）のコドンは、β−サブユニットのアナログのコドン１１４と終止コドンとの間のフレーム中に挿入される。このアナログの最後のコドンは１２６になる。次に、ウシあるいは他のα−サブユニットのコドン１〜９６またはヒトのα−サブユニットのコドン１〜９６は、ポリ−グリシン−セリン尾部を含有するβ−サブユニット構成物のコドン１２６と終止コドンとの間のフレーム中に挿入される。これは、糖蛋白質ホルモンのヘテロ二量体の構造を運搬する、単一サブユニットのゴナドトロピンを形成する。挿絵Ｆ：ヒト、ウシ、他の脊椎動物またはそのアナログ配列のα−サブユニットのコドンは、遺伝子を調製しかつ発現する標準的組換えＤＮＡ技術においていずれの当業者に公知の方法を用いて、７回反復（つまり、７回反復＃１）中の位置ＥおよびＧにおける陽電荷アミノ酸のみを含有する７回反復をコードする遺伝子の最後のコドンと終止コドンとの間に添加される。この遺伝子が、細菌、酵母、他の真核細胞または組織中で発現される場合には、アミノ末端に陽電荷７回反復、カルボキシ末端にα−サブユニットまたはα−サブユニットのアナログを有する蛋白質が産生される。位置ＥおよびＧにおける陰電荷アミノ酸をコードする７回反復（つまり、７回反復＃２）のコドンは、β−サブユニットのアナログの最後のコドンと終止コドンとの問に添加される。この遺伝子が、細菌、酵母、他の真核細胞または組織中で発現される場合には、アミノ末端にβ−サブユニットまたはそのアナログ、カルボキシ末端には陰電荷７回反復を有する蛋白質が産生される。挿絵Ｇ：これは、挿絵Ｆに記載の形態を有する蛋白質が混合される場合に形成されるヘテロ二量体を示す。７回反復＃１および７回反復＃２の配列は、ヘテロ二量体の形成の促進およびヘテロ二量体の削減を選択する。挿絵Ｈ：多量体は、α−とβ−サブユニットおよび７回反復の組合せにより挿絵ＦおよびＧの化合物が混合される場合に形成される。挿絵Ａ〜Ｈにおいて、“ Ｎ-”および“Ｃ-”は、蛋白質のアミノ末端およびカルボキシ末端を参照する。 “i”は、数回反復し得る単一の単位を示す。ここに説明する７回反復は同一であるが、同一の反復の使用は必須ではないことをさらに注目する。ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し得る非同一反復を含有する蛋白質は、非常に多数存在する（６０）。ルトロビンおよび／またはフォリトロビン活性を有する単一鎖ゴナドトロビン実施例１２ルトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロビン（図６参照）であるアナログ＃１の調製およびその使用（表１参照）表１に列記したアナログ＃１をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、あるいはｈＣＧのβ−サブユニットおよびヒトα−サブユニットをコードする配列を用いて開始することで調製することができる。これらは、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーからクローニングすることができる。ヒトα−サブユニットに由来する単一ペプチドをコードする配列は削除され、その蛋白質をコードする配列はＳＯＥ技術を用いて下記するようにしてスプライスされる：5′-ATGAAATCGACGGAATCAGACTCGAGCCAAGGATGGAGATGTTCCAGGGGCTGCT-3′ の配列を有するプライマー＃１（１００ｎｇ）および3′-GGGAGCCTGTGGGGCTAGGA GGGGGTTCCTAGGCCATCGCCTGACCATGC-5′の配列を有するプライマー＃２（１００ｎｇ）を鋳型として供給したｈＣＧのβ−サブユニットｃＤＮＡ（１μｇ）と混合し、９４℃（３０秒），５０℃（６０秒），７２℃（６０秒）の２５回の温度サイクルでストラタジーン、ラジョラ、ＣＡから購入のＰftポリメラーゼ、デオキシヌクレオチド三リン酸および引用文献（６３）に記載するようにＰＣＲ緩衝液を用いてＰＣＲを実施した。5′-GGATCCGGTAGCGGATCTGGTAGCGCTCCTGATGTGCAGGAT TGCCCA-3′の配列を有するプライマー＃３（１００ｎｇ）および3′-ACGTCATGAA CAATAATAGTGTTTAGAATTCCATGGCCTAGGTAGAGTTCGATTAGGCCT-5′の配列を有するプライマー＃４（１００ｎｇ）を鋳型として供給したｈＣＧのα−サブユニットｃＤＮＡ（１μｇ）と混合し、９４℃（３０秒），５０℃（６０秒），７２℃（６０秒）の２５回の温度サイクルでストラタジーン、ラジョラ、ＣＡから購入のＰft ポリメラーゼ、デオキシヌクレオチド三リン酸および引用文献（６３）に記載するようにＰＣＲ緩衝液を用いてＰＣＲを実施した。これら２つのＰＣＲ反応は、クローニングに適合する形態において所望の構成物を与える３回目（最後）のＰＣＲ反応に対して中間鋳型として供給する産生物を与える。最後のＰＣＲ反応は、最初の２つのＰＣＲ反応の産生物１μｇを5′-ATGAAATCGACGGAATCAGACTCGAGCC AAGG-3′の配列を有するプライマー＃５および3′-ATTCCATGGCCTAGGTAGAGTTCGAT TAGGCCT-5′の配列を有するプライマー＃６と混合し、９４℃（３０秒），５０ ℃（６０秒），７２℃（６０秒）の２５回の温度サイクルでストラタジーン、ラジョラ、ＣＡから購入のＰftポリメラーゼ、デオキシヌクレオチド三リン酸および引用文献（６３）に記載するようにＰＣＲ緩衝液を用いてＰＣＲを実施した。最終的ＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBglIIを用いて消化し、アナログ１を直接合成するベクターを作成するためにXholおよびBglIIを用いて消化しpSVL （ファルマシア、ピスカタウェイ、ＮＪから得た発現ベクター）中に連結した。XhoI部位は再度作成され、 BglIIおよびBamHI部位は削除される。図６にて説明する所望するアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のコードする領域（例えば、XbaIとKpnIとの間の領域、図６参照）の配列を決定する。これは、ＰＣＲおよび他のＤＮＡ操作の結果発生する誤りの可能性を削除するために行い、所望する配列が得られたことを確信するための標準的予防策である。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMFQGLLLLLLLSMGGTWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待され得る。このベクターは、引用文献（６４）の記載のようにＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られた蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），ＨＣＺ１０７（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、実施例１１において略述した要点の鋳型手法を用いた避妊用ワクチンにおいて、その使用の良好な出発点となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃１として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとApaI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１３ルトロビン活性を有する単一鎖ゴナドトロビンであるアナログ＃２の調製およびその使用（図７参照）表１に列記したアナログ＃２をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、あるいはプライマー＃１と＃７および鋳型として実施例１２および図６に記載する発現構成物を使用してＰＣＲにより調製することができる。プライマー＃７の配列は、3′-TGGTGGGGAACTGGACACTACTGGGCGC CCCTAGGCCATCG-5′である。最終的ＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBglIIを用いて消化し、XhoIおよびBglIIを用いて実施例１２に記載の発現構成物を消化することで得られるＤＮＡの大きな断片と連結した。図７に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが得られていることが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとKpnIとの間をコードする領域の配列を決定する。これは、クローニングの人為的要因が変化させた領域中に存在していないことの保証となる。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMFQGLLLLLLLSMGGTWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待され得る。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られた蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１８（ピアスから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、実施例１１において略述した鋳型手法を用いた避妊用ワクチンにおいて、その使用の良好な出発点となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃２として示し、 GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素SstIIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとSstII/Eco4 7III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにSstII/ Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１４フォリトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロピンであるアナログ＃３の調製および使用、（図８参照）表１に列記したアナログ＃３をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃１と＃７をプライマー＃８と＃９に置換しかつｈＣＧのβ−サブユニットのｃＤＮＡの代わりに鋳型としてｈＬＨのβ−サブユニットのｃＤＮＡを用いたことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。ｈＬＨのβ− サブユニットｃＤＮＡは、ヒト胎盤ｃＤＮＡをスクリーニングすることにより得ることができる。プライマー＃８の配列は、5′-ATGAAATCGACGGAATCAGACTCGAGCC AAGGAATGGAGATGCTCCAGGGGCTGCT-3′であり、プライマー＃９の配列は、3′-GTGG GGAACTGGACACTGGTGGGGGTTCCTAGGCCATCGCCTAGACCATCG-5′である。最終的ＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングした。図８に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＬＨのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMLQGLLLLLLLSMGGAWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られた蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、前述した鋳型手法を用いて、受精を促進または阻害するために設計したワクチンにおいて、その使用の良好な出発点となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃３として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素BamHIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamHI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにBamHI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１５フォリトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロピンであるアナログ＃４の調製およびその使用（図９参照）表１に列記したアナログ＃４をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃１と＃７をプライマー＃１０と＃１１に置換しかつｈＣＧのβ−サブユニットのｃＤＮＡの代わりに鋳型としてｈＦＳＨのβ−サブユニットのｃＤＮＡを用いたことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。ｈＦＳＨのβ−サブユニットｃＤＮＡは、ヒト胎盤ｃＤＮＡをスクリーニングすることにより得ることができる。プライマー＃１０の配列は、5′-ATGAAATCGACGGA ATCAGACTCGAGCCAAGGATGAAGACACTCCAGTTTTTCTTCC-3′であり、プライマー＃９の配列は、3′-GACGAGGAAACCACTTTACTTTCTTCCTAGGCCATCGCCTAGACCA-5′である。最終的のＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングした。図９に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＦＳＨのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMKTLQFFFLFCCWKAICCのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：ＺＭＦＳＩ（ピアスから入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＧ７６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＲ０９３．３（ハイブリテクから入手），ＦＳＨ１０７（ハイブリテクから入手），ＦＳＢ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＭ２１０（ハイブリテクから入手）およびＦＳＭ２６８（ハイブリテクから入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。このアナログは、ＦＳＨに対する抗体を誘発する免疫原を選択するための有用な出発化合物となり、かつ避妊ワクチンの一部となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃４として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco4 7IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとApaI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ −７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１６ｈＦＳＨよりｈＣＧに構造的に類似するＦＳＨ活性を有する単一鎖性腺刺激ホルモンであるアナログ＃５の調製およびその使用（図１０参照）表１に列記したアナログ＃５をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃７をプライマー＃１２に置換したことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。プライマー＃１２の配列は、3′-CGACAGTCGACAGT TACACGTGAGACGCTGTCGCTGTCGTGACTAACATGACACGCTCCGGACCCCGGGTCGATGACGAGGAAACC ACTTTACTTTCTTCCTAGGCCATCG-5′である。最終的のＰＣＲ産生物は、制限酵素Xho IおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングする。図１０に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBa mHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ −サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMLQGLLLLLLLSMGGAWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１８（ピアスから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。このアナログは、表１にアナログ＃５として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamH I/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるために ApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１７ｈＦＳＨよりｈＣＧに構造的に類似するＦＳＨおよびＬＨ活性を有する単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃６の調製およびその使用（図１１参照）表１に列記したアナログ＃６をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃７をプライマー＃１３に置換したことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。プライマー＃１３の配列は、3′-ACGGCGGCGTCGTG GTGACTGACGTGACACGCTCCGGACCCCGGGTCGATGACGAGGAAACCACTTTACTTTCTTCCTAGGCCATC G-5′である。最終的のＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングする。図１１に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるME MLQGLLLLLLLSMGGAWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ− ７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１８（ピアスから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、表１にアナログ＃６として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamHI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１８ｈＦＳＨよりｈＣＧに構造的に類似するＦＳＨおよびＬＨ活性を有する単一鎖ゴナドトロピンであるアナログ＃７の調製およびその使用表１に列記したアナログ＃７をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃７をプライマー＃１４に置換したことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。プライマー＃１４の配列は、3′-ACGGCGGCGTCGTG GTGACTGACGTGACACGCTCCGGACCCCGGGTCGATGACGAGGAAACCACTTCCTAGGCCATCG-5′である。最終的のＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングする。図１２に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMLQGLLLL LLLSMGGAWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１８（ピアスから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、かつ哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、表１にアナログ＃７として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamHI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例１９ｈＦＳＨよりｈＣＧに構造的に類似するＦＳＨおよびＬＨ活性を有する単一鎖ゴナドトロピンアナログ＃８の調製およびその使用（図１３を参照）表１に列記したアナログ＃８をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはプライマー＃７をプライマー＃１５に置換したことを除いて実施例１３においてアナログ＃２に関して記載する方法において調製することができる。プライマー＃１５の配列は、3′-ACGGCGGCGTCGTG GTGACTGACGTGACACGCTCCGGACCCCGGGTCGATGACGCTACTGGGCGCCCCTAGGCCATCG-5′である。最終的のＰＣＲ産生物は、制限酵素XhoIおよびBamHIを用いて消化し、実施例１２に記載に記載するように作成した発現ベクターのXhoI/BamHI部位にサブクローニングする。図１３に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のXbaIとBamH Iとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＣＧのβ− サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMEMLQGLLLLLLLSMGGAWAのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、培地中に放出されるこの蛋白質は、放射線標識したｈＣＧのｈＣＧに対するモノクローナル抗体または抗血清への結合を阻害する能力が試験される。ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：Ｂ１０１（コロンビア大学から入手），Ｂ１０５（コロンビア大学から入手），Ｂ１０７（コロンビア大学から入手），Ｂ１０９（コロンビア大学から入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），またはＨＣＯ５１４（ハイブリテクから入手），ＺＭＣＧ１８（ピアスから入手），ＺＭＣＧ１３（ピアスから入手），ＺＭＣＧ７（ピアスから入手）または５１８Ｂ７（デビスのカルフォルニア大学のジャネットローザ博士から入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン −エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、かつ哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、黄体濾胞にある受容体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する。モイル等（３７）により記載されたのと同様に実施するライディッヒ細胞分析においてテストステロンの形成が刺激され、および雌の動物において排卵が刺激されかつ雄の動物においてテストステロンの形成が刺激されることが期待される。このアナログは、表１にアナログ＃８として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamH I/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例２０フォリトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロピンであるアナログ＃９の調製およびその使用（図１４を参照）表１に列記したアナログ＃９をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはアナログ＃４を発現するために用いた実施例１５に記載した構成物を制限酵素ApaIおよびBamHIを使用して消化することにより調製できる。小断片を図１４に記載した配列を与える合成ＤＮＡのカセットで置換する。図１４に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のApaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＦＳＨのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMKTLQFFF LFCCWKAICCのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：ＺＭＦＳ１（ピアスから入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＧ７６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＲ０９３．３（ハイブリテクから入手），ＦＳＨ１０７（ハイブリテクから入手），ＦＳＢ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＭ２１０（ハイブリテクから入手）およびＦＳＭ２６８（ハイブリテクから入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等 (６５)により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。このアナログは、ＦＳＨに対する抗体を誘発する免疫原を選択するための有用な出発化合物となり、かつ避妊ワクチンの一部となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃９として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンとBamHI/Eco4 7III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/E co47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例２１フォリトロピン活性を有する単一鎖ゴナドトロピンであるアナログ＃１０の調製およびその使用（図１５を参照）表１に列記したアナログ＃１０をコードする配列は、引用文献（５４）に記載の阻害連結手法を用いて合成できる、またはアナログ＃４を発現するために用いた実施例１５に記載した構成物を制限酵素ApaIおよびBamHIを使用して消化することにより調製できる。小断片を図１５に記載した配列を与える合成ＤＮＡのカセットで置換する。図１５に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするものが見出されるまで、幾つかの構成物のApaIとBamHIとの間をコードする領域の配列を決定する。発現した蛋白質は、ｈＦＳＨのβ−サブユニット中に見出されるシグナル配列の部分でありかつ蛋白質合成の際に細胞により取り除かれるMKTLQF FFLFCCWKAICCのアミノ酸残基を欠損していることが期待される。このベクターは、ＣＯＳ−７細胞中で発現し、ＣＯＳ−７細胞により作られる蛋白質は、下記する１種または２種以上の抗体に対する結合において放射線標識したｈＣＧと競合する：ＺＭＦＳＩ（ピアスから入手），Ａ２０１（コロンビア大学から入手），ＨＣＵ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＧ７６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＲ０９３．３（ハイブリテクから入手），ＦＳＨ１０７（ハイブリテクから入手），ＦＳＢ０６１（ハイブリテクから入手），ＦＳＭ２１０（ハイブリテクから入手）およびＦＳＭ２６８（ハイブリテクから入手）。培地中に放出された蛋白質は、キャンベル、ジーン−エマーグおよびモイル（６４）に記載されたように、ウシ精巣の受容体に対する結合においてｈＦＳＨと競合する。スカフ等（６５）により記載されたのと同様に実施する顆粒膜細胞分析においてエストラジオールの形成が刺激され、哺乳動物の雌および雄において濾胞の発達および精子形成が刺激されることが期待される。このアナログは、ＦＳＨに対する抗体を誘発する免疫原を選択するための有用な出発化合物となり、かつ避妊ワクチンの一部となることがさらに期待される。このアナログは、表１にアナログ＃１０として示し、GSGSGSGSのリンカー配列を有する。このリンカーは、発現ベクターをエンドヌクレアーゼ制限酵素ApaIおよびEco47IIIで消化し、短い断片を捨て、合成２重鎖ＤＮＡのカセットを標準方法によってグリシンまたはセリンのコドンあるいは他のアミノ酸のコドンの任意の数を含有する所望するアミノ酸コドンと BamHI/Eco47III部位中に連結し、所望する突然変異が作られたことを確かめるためにApaI/Eco47IIIの間を配列決定し、ＣＯＳ−７細胞中で蛋白質を発現させることによって改良することができる。これは単一鎖ゴナドトロピン活性を最適化するために為される。この蛋白質は、単量体として機能するまたは活性ホモ二量体を形成するために結合することが期待される。さらに、この蛋白質の数コピーは多量体を形成するために結合することが期待される。実施例２２グリコシル化部位を欠損するα−サブユニットのアナログの調製（図１６を参照）アナログ１〜１０は、アスパラギン−Ｘ−スレオニン／セリン(Ｘ：プロリンを除く任意のアミノ酸)のアミノ酸配列のコドンの４つのセットを有しているという理由から、４箇所のアスパラギン結合オリゴ糖を含有することが期待される。アスパラギン結合オリゴ糖の除去は、特にα−サブユニットで、ホルモンの効果を減少させることが知れている。アスパラギン結合オリゴ糖シグナルは、ここに記載するようにＰＣＲを用いて単一鎖ゴナドトロピンのα−サブユニットの部分から除去することができる。アナログ１を発現させることができ、かつ実施例１２および図６に記載したベクターとのＰＣＲ反応に、5′-TGCTTCTCTAGAGCATATCCCACT CCACTAAGGTCCAAGAAGACGATGTTGGTCCAAAAGCAAGTCACCT-3′の配列を有するプライマー＃１６および3′-CAAAGTTTCACCTCGTTGTGTGCCGCACGGTGACGTCATGAACAATAATAGTGT TTAGAATTCCATGGCCATG-5′の配列を有するプライマー＃１７を用いる。実施例１２に記載する条件において２５サイクル後、ＰＣＲ産生物およびベクターをXbaI およびKpnIを用いて消化した。ベクターの消化により生じる小さな断片を捨て、消化したＰＣＲ産生物をベクター中のこの場所に連結する。これは、２箇所のアスパラギン結合オリゴ糖シグナルのみを含有するが、ｈＣＧに結合する抗体および抗血清に対する親和性を有することが期待されるアナログである、アナログ１１をコードする発現ベクターを生成する。ラット黄体濾胞由来の細胞膜に対する結合においてｈＣＧと競合するその能力によって示されるように、ＬＨ受容体に対し、親和性を残していることが期待される。しかし、特に環状ＡＭＰを誘発する能力を試験する（３７）場合に、シグナル伝達を誘導する能力が減少することが期待される。発現ベクターをBamHIおよびKpnIを用いて消化し、小さな断片を捨て、アナログ１１の消化により得られる小さなBamHI/KpnI断片を連結することによって、オリゴ糖をα−サブユニットに由来する蛋白質の部分から除去して、アナログ２〜１０の類似誘導体を作成することができる。従って、アナログ２はアナログ１２に、アナログ３はアナログ１３に、アナログ４はアナログ１４に、アナログ５はアナログ１５に、アナログ６はアナログ１６に、アナログ７はアナログ１７に、アナログ８はアナログ１８に、アナログ９はアナログ１９に、およびアナログ１０はアナログ２０になる。合成するプライマー１６および１７の配列を変更し、かつここに略述する下記の手順によって簡単に、α−サブユニットに由来する単一鎖ゴナドトロピンの部分における２箇所のオリゴ糖シグナルのうち１箇所のみを除去することができることをさらに注目する。これらのアナログのいずれも、それらの前駆体のように、同一の抗体および受容体に対する結合性を示す。これらアナログは効率が減少しており、その結果、シグナル伝達を阻害する。アナログ１１、１２および１３は、ＬＨの活性を減らすので、月経周期の濾胞期のごく初期において投与される場合には受精を刺激する。それらアナログは、ｈＣＧの活性を減らすので、期待される生理の時期近くに投与される場合には受精を抑制する。実施例２３グリコシル化部位を欠損するアナログ１ａの調製（図１７および１８を参照）ゴナドトロピンの効果は、炭水化物のその含有量に比例し、アナログ１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および２０では効果がより低く、全てのオリゴ糖鎖を削除することでさらに効果を減少させることができる。アスパラギン結合オリゴ糖鎖は、第１反応においてプライマー＃１および＃１８を、第２反応においてプライマー＃２および＃１９を用いるＰＣＲＳＯＥ（６３）を行うことによってアナログ１１から削除することができる。アナログ１１のためのベクターを双方の反応において鋳型として供給する。プライマー＃１８の配列は5′-CGGGGTAGGTTCGGTGGGACCGACACCTCTTCCTCCCGACGGGG-3′であり、プライマー＃１９の配列は3′-GTGGAGAAGGAGGGCTGCCCCGTGTGCATCACCGTCAACACCACCATC-5′ である。９４℃（３０秒）、５５℃（６０秒）および７２℃（６０秒）の２５回の温度サイクルの後、各々のＰＣＲ反応液の１μｌをプライマー＃５および追加のプライマー＃２、新しい緩衝液、酵素およびデオキシヌクレオチド三燐酸と混合する。追加の２５回のサイクルの後に反応産生物をXhoIおよびBamHIを用いて消化し、アナログ１１をコードするベクターのXhoI/BamHI部位間に見出される元のＤＮＡと置換した。アナログＩａは、ベクターをXhoIおよびBamHIを用いて消化し、小さな断片を捨て、ＰＣＲ産生物を消化しXhoI/BamHI断片と連結することで達成される。図１８において略述し、アナログ１ａと名付けたアナログが得られるまで、幾つかのクローンをＤＮＡの配列決定を行った。これをＣＯＳ−７細胞中で発現させた場合には、作られるこの蛋白質は、アナログ１のように同一の抗体および抗血清によって認識されると考えられる。アナログ１ａは、さらにルトロピン受容体に結合するが、ｈＣＧに対する効果は減少していると考えられる。月経周期の濾胞期のごく初期において投与される場合には、アナログ１ａはアンドロゲン合成を減少させる。この結果、エストラジオールの合成が減少し、ＦＳＨのレベルが上昇しかつ受精が刺激される。アナログ１ａは、濾胞の未成熟黄体形成を阻害するのにさらに有用である。アナログは、ｈＣＧの活性を減らすために、黄体期中の生理がおよそ期待される時期に投与される場合には、アナログ１ａはｈＣＧの作用を阻害し、生理の促進剤および受精の抑制剤として供給される。アナログ１ａは、前述した鋳型手法を用いるワクチンを設計するための良好な開始化合物として供給されると考えられる。実施例２４アスパラギン結合オリゴ糖を欠損した他のゴナドトロピンの調製アナログ２ａ、５ａ、６ａ、７ａおよび８ａは、アナログ１ａおよびアナログ１２、１５、１６および１７から容易に調製される。アナログ１ａをKpnIおよび MstIIを用いて消化し、小さな断片を捨て、大きな断片を、アナログ１２、１５、１６および１７をコードするベクターのKpnI/MstIIによる消化により調製した小さな断片と別々に連結する。アナログ２ａ、５ａ、６ａ、７ａおよび８ａは、各々アナログ２、５、６、７および８と同一の抗体および受容体に結合すると考えれれる。しかし、シグナル伝達を誘発する能力は減少し、その結果、阻害剤として供給される。アナログ２ａは、ホルモンのＬＨ受容体への結合の阻害において主に有効である。投与する時期に依存して、アナログ２ａは受精を誘発し（月経周期の初期に投与された場合）、あるいは受精を阻害する（着床の時期近くまたは期待される生理の時期に投与された場合）。これに関連して、アナログ１ａおよび２ａは、同様な活性を有する。アナログ５ａは、ホルモンのＦＳＨ受容体への結合の阻害において主に有効である。アナログ５ａは、卵巣亢進刺激の抑制に有用である。アナログ６ａ、７ａおよび８ａは、ＬＨ受容体およびＦＳＨ受容体への結合の阻害剤であると考えられる。これらは、卵巣亢進刺激の抑制および未成熟黄体化の抑制に有用である。アナログ３ａおよび４ａをコードするベクターは、アナログ１３および１４を鋳型として、ＳＯＥＰＣＲ（６３）によって作成することができる。プライマーの設計の手法は、アナログ１ａを発現するベクターの改良に用いたプライマーの調製に関して記載したのと同様である。アナログ３ａおよび４ａがＣＯＳ−７細胞中で発現される場合には、生成される蛋白質は、各々アナログ３および４と同じ抗体および抗血清によって認識される。アナログ３ａは、ＬＨ受容体に結合するホルモンの活性の阻害に有用であり、濾胞期において初期に投与される場合、受精を誘発する。アナログ４ａは、ＦＳＨ活性の阻害に有用である。アナログ３ａは、鋳型手法およびＬＨの活性を部分的に中和できる抗体を用いて受精を増加させるために使用するワクチンの設計のための開始物質として有用である。アナログ３ａは、さらに鋳型手法およびＬＨ活性を中和できる抗体を用いて受精を抑制させるワクチンの設計のための開始物質として有用である。アナログ４ａは、鋳型手法を用いて前述した抗ＦＳＨワクチンの設計のための開始物質としてさらに有用である。アナログ９ａおよび１０ａをコードするベクターは、アナログ４ａをコードするベクターから調製することができる。アナログ４ａをコードするベクターをBa IIおよびKpnIを用いて消化し、小さな断片を捨てる。その大きな断片と、アナログ１９および２０をコードするベクターのBaII/KpnIによる消化により調製した小さな断片とを別々に連結し、アナログ９ａおよび１０ａをコードするベクターを作成する。アナログ９ａおよび１０ａをＣＯＳ−７細胞中で発現させた場合、アナログ９ａおよび１０ａは、アナログ９および１０のと同様な抗体およびＦＳＨ受容体に対する結合特性を有すると考えられる。アナログ９ａおよび１０ａは、効率がさらに低く、ＦＳＨの活性を阻害する。従って、それらは、卵巣の過刺激を減少させるのに有用であり、さらに鋳型手法を用いた抗ＦＳＨワクチンの設計のための開始物質として有用である。実施例２５ゴナドトロピン中にグリコシル化部位を導入する典型的方法オリゴ糖残基が循環中のホルモンの安定性に良好な影響を与えることから、蛋白質に余分なオリゴ糖鎖を添加することはしばしば有用である。オリゴ糖の添加は、所望しない抗体または受容体との相互作用を抑制するために使用することができる。受容体と相互作用しない蛋白質の表面は、ホルモンの機能を刺激するために使用されるオリゴ糖鎖を添加するための有用な場所である。これは、単一鎖の糖蛋白質ホルモンの活性の調節またはα、β−ヘテロ二量体の糖蛋白質ホルモンの活性の調節において有益な効果を持たせることができる。例えば、７１残基にアスパラギン結合オリゴ糖の生成を生じさせるためにＦＳＨβ−サブユニットの７１〜７３残基にグリコシル化シグナルを添加すると、より高い活性を有するホルモンが得られる。逆に、蛋白質のこの領域において他のグルコシル化部位の後にグルコシル化残基を添加すると、その阻害活性が増強される。突然変異導入を実施する方法は、当業界においては標準であり、合成オリゴヌクレオチド連結阻害によるコードする配列の合成からＳＯＥＰＣＲ（６３）にまで及ぶ。ＳＯＥＰＣＲによる突然変異導入の幾つかの例は既に記述している。実施例２６ヒトのサブユニット由来配列とは別の配列の使用アナログ１〜２０、アナログ１ｂ〜１０ｂ、特にアナログ１ａ〜１０ａは、鋳型指示ワクチンの設計のための有用な開始化合物として供給される。ヒトにおいて使用されるホルモン特異的ワクチンの開発のために、ヒトのα−サブユニットの代わりにヒトとは別のα−サブユニットを用いて表１に列記するものに類似するアナログを作成することが有用である。これは、ウシのα−サブユニットは、表１に列記するアナログよりもヒトのホルモンとはさらに異なる蛋白質を与えるとの理由による。単一鎖糖蛋白質のホルモンを設計するための手順は、既に説明しているヒトα−サブユニットの配列をヒトとは別のα−サブユニットをコードする配列に置換すること以外は、実施例１２〜２１に列記したことに同様である。同様にして、グルコシル化シグナルを、アスパラギン、セリンまたはスレオニンのコドンを変える、あるいはアスパラギンとセリンまたはスレオニンの間にプロリンを挿入することにより、除去することができる。さらに、免疫原を設計する鋳型手法を用いる場合、ほとんど親和性を有していないヒトではない分子を用いて開始することが好ましく、陽性選択において用いる鋳型に対して幾らか親和性があるならば、選択性を生じる残基を導入することが好ましい。これらのアナログは、実施例１２〜２５および表１に示すヒトＦＳＨ、ＬＨおよびｈＣＧの配列の代わりに、ヒトではない別の起源由来のＦＳＨ、ＬＨまたはＴＳＨのβ−サブユニットの配列で置換することによって調製することができる。本発明の化合物は、ほ乳類、即ち動物またはヒトに対して、所望する治療効果を提供するための有効量にて投与することができる。化合物の活性および所望する治療の効果の程度が変化することにより、使用する化合物の投与量のレベルもまた変化させることができる。投与される実質的投与量は、患者の体重および特別な患者の個体過敏症のような、一般的に認識される要因によってもまた決定される。この出願の全体にわたり、多くの刊行物を引用した。これらの刊行物における開示は、この技術の状況をより完全に記載するために引用文献として組み込むものである。このように記載されている本発明は、多くの方法において変化させることができることは明らかである。そのような変化は、本発明の意図および範囲から逸脱するものと見なされるべきのもではなく、すべてのそのような改良は下記する特許請求の範囲に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 ＡＥＪ 9637−4ＢＣ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ 8615−4ＣＣ０７Ｈ 21/04 ＢＣ１２Ｐ 21/02 9356−4ＨＣ０７Ｋ 14/59 // Ａ６１Ｋ 38/24 9356−4Ｈ 16/26 Ｃ０７Ｈ 21/04 9356−4Ｈ 19/00 Ｃ０７Ｋ 14/59 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＥＸ 16/26 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 19/00 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/38 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims

【特許請求の範囲】１．循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させると共に、これにより濾胞刺激ホルモンの生成を刺激することによる哺乳動物における受精能の刺激方法において、黄体形成ホルモンを結合する治療上有効量の結合剤を哺乳動物に投与することを特徴とする受精能の刺激方法。２．哺乳動物が雌である請求の範囲第１項に記載の方法。３．哺乳動物がヒトであり、黄体形成ホルモンがヒト黄体形成ホルモンである請求の範囲第１項に記載の方法。４．黄体形成ホルモンが黄体形成ホルモン受容体に結合する場合、露出され続ける位置にて、結合剤が黄体形成ホルモンのβ−サブユニットにおけるエピトープに結合する請求の範囲第１項に記載の方法。５．結合剤が、黄体形成ホルモンのβ−サブユニットにおける位置７０〜８０の間にて残基の１つに結合する請求の範囲第４項に記載の方法。６．結合剤が、黄体形成ホルモンのβ−サブユニットにおける位置７４〜７７の間にて残基の１つに結合する請求の範囲第５項に記載の方法。７．結合剤が抗体である請求の範囲第１項に記載の方法。８．抗体が非中和抗体であり、黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させるが除去しないことをさらに含む請求の範囲第７項に記載の方法。９．非中和抗体がＢ１０５である請求の範囲第８項に記載の方法。１０．非中和抗体がＢ１１０である請求の範囲第８項に記載の方法。１１．ヒト女性における排卵を調節することからなる請求の範囲第１項に記載の方法。１２．循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させるが排除せず、これにより濾胞刺激ホルモンの産生を刺激することにより哺乳動物における受精能を刺激するワクチン接種において：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変位体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ− サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが、工程（ｅ）にて高親和性を以て黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｇ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより黄体形成ホルモンに対する抗体を発生させて黄体形成ホルモン活性を減少させるが除去せずに濾胞刺激ホルモンの生成を刺激して哺乳動物における受精能を刺激することを特徴とするワクチン接種法。１３．工程（ａ）における陽性鋳型が黄体形成ホルモンα−サブユニットおよびβ−サブユニット突然変異体からなる請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．陽性鋳型をＢ１０５、Ｂ１１０、５１８Ｂ７およびＺＭＣＧ７よりなる群から選択する請求の範囲第１３項に記載の方法。１５．（ｉ）工程（ａ）にて、陰性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｊ）工程（ｃ）に先立ち、工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ｉ）からの陰性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｋ）工程（ｃ）にて、工程（ｊ）からの陰性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングする各工程をさらに含む請求の範囲第１２項に記載の方法。１６．工程（ｉ）における陰性鋳型をＢ１０７、Ｂ１０９およびα−サブユニットに対する抗血清よりなる群から選択する請求の範囲第１５項に記載の方法。１７．循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させるが除去せず、これにより濾胞刺激ホルモンの産生を刺激することにより哺乳動物における受精能を刺激するワクチン接種法において：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変位体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ− サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが工程（ｅ）にて高親和性を以て黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）工程（ｆ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異蛋白をコードする治療上有効量のＤＮＡ配列を哺乳動物に投与して抗原の発現を生じさせ、これにより黄体形成ホルモンに対する抗体を発生する免疫反応を生じさせて黄体形成ホルモン活性を減少させるが除去せずに濾胞刺激ホルモンの生成を刺激して哺乳動物におけるに受精能を刺激することを特徴とするワクチン接種法。１８．循環における絨毛性ゴナドトロピンホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることにより雌の哺乳動物における不妊性を誘発するワクチンを設計するに際し：（ａ）陽性鋳型として絨毛性ゴナドトロピンホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ −サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンとは相違するが絨毛性ゴナドトロピンホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性を以て結合する絨毛性ゴナドトロピンβ −サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｈ）選択された絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白を工程（ｇ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｉ）工程（ｈ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより絨毛性ゴナドトロピンホルモンに対する抗体を発生させて絨毛性ゴナドトロピンホルモン活性を減少させることにより雌哺乳動物における不妊性を誘発させることを特徴とするワクチンの設計法。１９．工程（ｂ）における保存物を単一鎖ゴナドトロピンから作成する請求の範囲第１８項に記載の方法。２０．単一鎖ゴナドトロピンがＮ−末端における絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットとＣ−末端における脊椎動物α−サブユニットと絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットを脊椎動物α−サブユニットに結合させる１〜１６個のアミノ酸残基を有するリンカーとからなる請求の範囲第１９項に記載の方法。２１．単一鎖ゴナドトロピンがＮ−末端における脊椎動物α−サブユニットとＣ−末端における絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットと絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットを脊椎動物α−サブユニットに結合させる１〜１６個のアミノ酸残基を有するリンカーとからなる請求の範囲第１９項に記載の方法。２２．循環における絨毛性ゴナドトロピン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を除去する請求の範囲第１８項に記載の方法。２３．結合剤が中和抗体である請求の範囲第１８項に記載の方法。２４．中和抗体をＢ１０９、Ｂ１０７、ＨＣＺ１０７およびＨＣＯ５１４よりなる群から選択する請求の範囲第２３項に記載の方法。２５．（ｉ）工程（ａ）にて、陰性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤をさらに供給し；（ｊ）工程（ｃ）に先立ち、工程（ｂ）からの絨毛性ゴナドトロピンホルモン β−サブユニット突然変異体を工程（ｉ）からの陰性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｋ）工程（ｃ）にて、工程（ｊ）からの陰性鋳型結合剤に結合しない絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングする各工程をさらに含む請求の範囲第１８項に記載の方法。２６．陰性鋳型を黄体形成ホルモンに対するポリクローナル抗血清よりなる群から選択する請求の範囲第２５項に記載の方法。２７．循環における絨毛性ゴナドトロピンホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることにより雌哺乳動物における不妊性を誘発するワクチンを設計するに際し：（ａ）陽性鋳型として絨毛性ゴナドトロピンホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ −サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）における陽性鋳型結合剤に結合しない絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における絨毛性ゴナドトロピンホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）絨毛性ゴナドトロピンホルモンとは相違するが絨毛性ゴナドトロピンホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性を以て結合する絨毛性ゴナドトロピンβ −サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）工程（ｆ）からの絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニット突然変異蛋白質をコードする治療上有効量のＤＮＡ配列を哺乳動物に投与して抗原の発現を生じさせることにより絨毛性ゴナドトロピンホルモンに対する抗体を発生する免疫反応を生じさせて、絨毛性ゴナドトロピンホルモン活性を減少させることにより雌哺乳動物における不妊性を誘発させることを特徴とするワクチンの設計方法。２８．循環における濾胞刺激ホルモン活性を有する糖蛋白質ホルモンの活性を減少させることによりヒト男性おける受精能を抑制するためのワクチンを設計するに際し；（ａ）陽性鋳型として濾胞刺激ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）濾胞刺激ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｄ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）濾胞刺激ホルモンとは相違するが濾胞刺激ホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性を以て結合する濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白質を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｈ）からの治療上有効量の蛋白をヒト男性に抗原として投与して免疫反応を生じさせることにより、濾胞刺激ホルモンに対する抗体を発生させて濾胞刺激ホルモン活性を減少させると共にヒト男性における受精能を抑制することを特徴とするワクチンの設計方法。２９．循環における濾胞刺激活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を除去する請求の範囲第２８項に記載の方法。３０．結合剤が中和抗体である請求の範囲第２８項に記載の方法。３１．中和抗体がＦＳＧ７６１である請求の範囲第３０項に記載の方法。３２．（ｉ）工程（ａ）にて、陰性鋳型としてα−サブユニットを結合する結合剤をさらに供給し；（ｊ）工程（ｃ）に先立ち、工程（ｂ）からの濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ｉ）からの陰性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｋ）工程（ｃ）にて、工程（ｊ）からの陰性鋳型結合剤に結合しない濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングする各工程をさらに含む請求の範囲第２８項に記載の方法。３３．循環における濾胞刺激ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることによりヒト男性おける受精能を抑制するためのワクチンを設計するに際し；（ａ）陽性鋳型として濾胞刺激ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）濾胞刺激ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変異により得られた濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における濾胞刺激ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）濾胞刺激ホルモンとは相違するが濾胞刺激ホルモン結合剤に工程（ｅ）にて高親和性を以て結合する濾胞刺激β−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）工程（ｆ）からの濾胞刺激β−サブユニット突然変異蛋白をコードする治療上有効量のＤＮＡ配列を哺乳動物に投与して抗原の発現を生じさせることにより濾胞刺激ホルモンに対する抗体を発生する免疫反応を生じさせて、濾胞刺激ホルモン活性を減少させると共にヒト男性における受精能を抑制することを特徴とするワクチンの設計方法。３４．循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることにより非ヒト哺乳動物における受精能を抑制するためのワクチンを設計するに際し：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変位により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが工程（ｅ）にて高親和性を以て黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体化β−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）選択された黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体の蛋白を工程（ｆ）におけるＤＮＡ配列から原核細胞もしくは真核細胞宿主にて発現させ；（ｈ）工程（ｇ）からの治療上有効量の蛋白質を哺乳動物に抗原として投与して、黄体形成ホルモンに対する抗体を発生する免疫反応を生じさせることにより、黄体形成ホルモン活性を減少させると共に非ヒト哺乳動物における受精能を抑制することを特徴とするワクチンの設計方法。３５．循環における黄体化活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を除去する請求の範囲第３４項に記載の方法。３６．結合剤が中和抗体である請求の範囲第３４項に記載の方法。３７．（ｉ）工程（ａ）にて、陰性鋳型としてα−サブユニットを結合する結合剤をさらに供給し；（ｊ）工程（ｃ）に先立ち、工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ｉ）からの陰性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｋ）工程（ｃ）にて、工程（ｊ）からの陰性鋳型結合剤には結合しない黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）から陽性鋳型結合剤でスクリーニングする各工程をさらに含む請求の範囲第３４項に記載の方法。３８．循環における黄体形成ホルモン活性を有する糖蛋白質質ホルモンの活性を減少させることにより非ヒト哺乳動物における受精能を抑制するためのワクチンを設計するに際し：（ａ）陽性鋳型として黄体形成ホルモンを結合する結合剤を供給し；（ｂ）黄体形成ホルモンβ−サブユニットのランダム突然変位により得られた黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体のライブラリーを供給し；（ｃ）工程（ｂ）からの黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を工程（ａ）からの陽性鋳型結合剤でスクリーニングし；（ｄ）工程（ｃ）にて陽性鋳型結合剤に結合しない黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体を捨て；（ｅ）工程（ｄ）における黄体形成ホルモンβ−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を決定し；（ｆ）黄体形成ホルモンとは相違するが工程（ｅ）にて高親和性を以て黄体形成ホルモン結合剤に結合する黄体化β−サブユニット突然変異体をコードするＤＮＡ配列を選択し；（ｇ）工程（ｆ）からの黄体化β−サブユニット突然変異蛋白をコードする治療上有効量のＤＮＡ配列を哺乳動物に投与して抗原の発現を生じさせることにより黄体形成ホルモンに対する抗体を発生する免疫反応を生じさせて、黄体形成ホルモン活性を減少させると共にヒト男性における受精能を抑制することを特徴とするワクチンの設計方法。３９．Ｎ−末端における絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットとＣ−末端における脊椎動物α−サブユニットと絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットを脊椎動物α−サブユニットに結合させる１〜１６個のアミノ酸残基を有するリンカーとからなる単一鎖ゴナドトロピン。４０．Ｎ−末端における脊椎動物α−サブユニットとＣ−末端における絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットと絨毛性ゴナドトロピンβ−サブユニットを脊椎動物α−サブユニットに結合させる１〜１６個のアミノ酸残基を有するリンカーとからなる単一鎖ゴナドトロピン。