JPH09503385A

JPH09503385A - Ｈｓｖ−２ｕｌ２６遺伝子、カプシド蛋白、イムノアッセイおよびプロテアーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH09503385A
Application number: JP7507654A
Authority: JP
Inventors: ディレラ，アンソニー・ジー; デュブーク，クリスティーヌ・マリー
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1993-08-20
Filing date: 1994-08-19
Publication date: 1997-04-08
Also published as: EP0714399A1; WO1995006055A1; CA2169748A1; EP0714399A4; AU7568294A; MXPA94006367A; CN1133594A

Abstract

(57)【要約】成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼおよびその活性フラグメントを包含する本質的に純粋なＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子産物およびその活性フラグメントを開示する。成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白およびその機能的フラグメントを包含する本質的に純粋なＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子産物およびそのフラグメントを開示する。ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子および／またはＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子の全部もしくは一部からなる単離核酸分子を開示する。かかる核酸分子を含む発現ベクターおよび宿主細胞を開示する。ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を阻害する化合物の同定方法およびＨＳＶ−２ウイルス粒子のアッセンブリーを阻害する化合物の同定方法を開示する。合成ＨＳＶ−２基質を開示する。プロセッシングされたＨＳＶ−２プロテアーゼ基質に選択的に結合するが、プロセッシングされていない基質には結合しない抗体、またはプロセッシングされていない基質に選択的に結合するが、プロセッシングされた基質には結合しない抗体を開示する。ＨＳＶ−１ＤＮＡもしくは蛋白と、ＨＳＶ−２ＤＮＡもしくは蛋白とを識別するための方法ならびにキット、およびかかる方法ならびにキットに有用な試薬を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子、カプシド蛋白、イムノアッセイおよびプロテアーゼ阻害剤関連出願の相互参照本願は、１９９３年８月２０日出願の米国特許出願第０８／１１０,５２２号の一部継続出願であり、その全内容を本明細書に取り込む。発明の分野本発明は、ＨＳＶ−２ＵＬ−２６とＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子；特に、純粋なＨＳＶ−２ＵＬ２６とＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子産物；ＨＳＶ −２ＵＬ−２６とＨＳＶ−２ＵＬ２６.５のＤＮＡ配列ならびに遺伝子産物を用いる組成物およびその製造方法に関する。発明の背景ヘルペスウイルスは、線形２本鎖ゲノムを含んでいる２０面体外套のウイルス粒子からなる。現在、６種のヒト・ヘルペスウイルスが単離されており、無症状の感染から免疫が損傷した致命的な病状にいたる種々の病状の原因であることが知られている。ヒト・ヘルペスウイルスの１つであるＨＳＶ−２と命名された２型単純ヘルペスウイルスは、通常は、性的交渉により獲得され、性器ヘルペスを引き起こす。２次的な性器ヘルペスの再発頻度は１年に１回ないし６回の範囲である。性器のＨＳＶ−２感染は、米国において、１千万ないし６千万人において起こっていると評価されている。現在、ＨＳＶ−２感染に対して防御可能なワクチンはない。ＨＳＶ−２のゲノム構成に関しては少ししかわかっていない。それにもかかわらず、ＨＳＶ−２は主要な公衆の健康の問題を提起している。人は当該ウイルスに感染し続け、完全に満足のいく抗ウイルス剤またはワクチンは得られていない。抗ＨＳＶ−２剤を同定する方法が必要である。かかる方法において有用な試薬が必要である。ＨＳＶ−２蛋白の活性を変化させ、当該ウイルスの複製能および感染細胞における多数の感染性ウイルス粒子の生産に影響する化合物を同定する方法が必要である。ＨＳＶ−２感染を他のヘルペスウイルス感染から識別する方法およびキットが必要である。発明の概要本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ前駆体蛋白、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼならびにその活性フラグメント、ＨＳＶカプシド前駆体蛋白および成熟ＨＳＶ− ２カプシド蛋白を包含する、本質的に純粋なＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子産物およびそのフラグメントに関する。本発明は、ＨＳＶ−２カプシド前駆体蛋白および成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白を包含する、本質的に純粋なＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子産物およびそのフラグメントに関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼならびにその活性フラグメントをコードする単離核酸分子および前駆体もしくは成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白、調節領域、例えばプロモター領域をコードする核酸分子を包含する、ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子もしくはその一部からなる単離核酸分子、またはその機能的フラグメントに関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼならびにその活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列、および前駆体または成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白もしくはその機能的フラグメントをコードするヌクレオチド配列を包含する、ＨＳＶ −２ＵＬ２６遺伝子またはその一部からなる発現ベクターに関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼならびにその活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列、および前駆体または成熟ＨＳＶ−２カプシト蛋白もしくはその機能的フラクメントをコードするヌクレオチド配列を包含する、ＨＳＶ −２ＵＬ２６遺伝子またはその一部からなる発現ベクターを含んでいる宿主細胞に関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白、調節領域、例えばプロモーター領域もしくはその機能的フラグメントをコードする単離核酸分子、および前駆体または成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白もしくはその機能的フラグメントをコードするヌクレオチド配列を包含する、ＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子またはその一部からなる単離核酸分子に関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白ならびにその活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列、および前駆体または成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白もしくはその機能的フラグメントをコードするヌクレオチド配列を包含する、ＨＳＶ −２ＵＬ２６.５遺伝子またはその一部からなる発現ベクターに関する。本発明は、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白ならびにその活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列、および前駆体または成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白もしくはその機能的フラグメントをコードするヌクレオチド配列を包含する、ＨＳＶ −２ＵＬ２６.５遺伝子またはその一部からなる発現ベクターを含んでいる宿主細胞に関する。本発明は、試験化合物の存在下でＨＳＶ−２プロテアーゼもしくはその活性フラグメントをＨＳＶ−２プロテアーゼ基質と接触させ、基質の蛋白分解的開裂のレベルを検出し、次いで、そのレベルを試験化合物不存在下で得られるレベルと比較することからなる、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を阻害する化合物の同定方法に関する。本発明は、試験化合物の存在下でＨＳＶ−２カプシド蛋白を接触させ、カプシド−カプシド会合のレベルを検出し、次いで、そのレベルを試験化合物不存在下で得られるレベルと比較することからなる、ＨＳＶ−２ウイルス粒子のアッセンブリーを阻害する化合物の同定方法に関する。本発明は、化学合成手段または組み換え法により製造され、ＵＬ２６遺伝子産物のフラグメントもしくは全体に基づいているＨＳＶ−２プロテアーゼ基質に関する。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼによりプロセッシングされた基質に選択的に結合するがプロセッシングされていない基質には結合しない、あるいはプロセッシングされていない基質に選択的に結合するがプロセッシングされた基質には結合しない抗体に関する。本発明は、ＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するプライマーを用いるＤＮＡのＰＣＲ増幅、および／またはＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するプライマーを用いるＤＮＡのＰＣＲ増幅からなる、ＨＳＶ−１とＨＳＶ−２との間を識別する方法に関する。本発明は、ＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅しないＰＣＲプライマーおよびＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅しないＰＣＲプライマーに関する。本発明は、ＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅しないＰＣＲプライマー、および正の対照ならびにプライマーによりＨＳＶ−１が増幅されたかどうかを決定するためのサイズマーカーの入った容器、および／またはＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅しないＰＣＲプライマーおよび正の対照ならびにプライマーによりＨＳＶ−２が増幅されたかどうかを決定するためのサイズマーカーの入った容器よりなる、ＨＳＶ−１とＨＳＶ− ２との間を識別するためのキットに関する。本発明は、ＨＳＶ−１蛋白に選択的に結合するがＨＳＶ−２蛋白には結合しない抗体を用いるイムノアッセイ、および／またはＨＳＶ−２蛋白に選択的に結合するがＨＳＶ−１蛋白には結合しない抗体を用いるイムノアッセイからなる、ＨＳＶ−１蛋白とＨＳＶ−２蛋白との間の識別方法に関する。本発明は、ＨＳＶ−１に選択的に結合するがＨＳＶ−２には結合しない抗体、またはＨＳＶ−２に選択的に結合するがＨＳＶ−１には結合しない抗体に関する。本発明は、ＨＳＶ−１蛋白とＨＳＶ−１蛋白との間を識別するためのキットに関する。該キットは、一連の容器を密閉空間中に受け取るために仕切りのついたキャリヤーからなるものであり、選択的にＨＳＶ−１蛋白に結合するがＨＳＶ− ２蛋白には結合しない抗体と抗体がＨＳＶ−１蛋白に結合するかどうかを検出する手段とか入った第１の容器、および／または選択的にＨＳＶ−２蛋白に結合するがＨＳＶ−１蛋白には結合しない抗体と抗体がＨＳＶ−２蛋白に結合するかどうかを検出する手段とが入った第２の容器よりなるものである。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼプロモーターおよび／またはエンハンサーエレメント、ならびにそれらの使用に関する。本発明は、ＨＳＶ−２カプシド蛋白プロモーターおよび／またはエンハンサーエレメント、ならびにそれらの使用に関する。図面の簡単な説明図１はＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子を示す。シンボル＜＞はＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子産物の境界を示す。推定上の終止コドンに下線を付してある。シンボル[[ ]]はＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子産物の境界を示す。シンボル［］は２つの主要な蛋白分解部位の境界を示す。切断される結合を*により示す。シンボル｜｜はＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子のプロモーター領域を示し、推定上の「ＴＡＴＡボックス」に下線を付してある。図２はＨＳＶ−２ＵＬ２６.５プロモーターで調節された場合のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）の発現を示す。発明の詳細な説明本明細書の用語ＵＬ２６遺伝子は、ＨＳＶ−２プロテアーゼおよびＨＳＶ−２カプシド蛋白の一形態をコードするヌクレオチド配列からなるＤＮＡ分子をいう。ＵＬ２６遺伝子は配列番号：１に開示されている。ＵＬ２６のコーディング領域は、配列番号：１のヌクレオチド５３４〜２４４７からなる。発現される場合、ＵＬ２６遺伝子は、配列番号：１および配列番号：２に開示した６３８個のアミノ酸の活性プロテアーゼ前駆体をコードする。本明細書の用語「活性プロテアーゼ前駆体」は、プロセッシングされていないＵＬ２６翻訳産物をいう。活性プロテアーゼ前駆体は活性ＨＳＶ−２プロテアーゼである。生産される場合、活性プロテアーゼ前駆体は、アミノ酸残基２４７と２４８の間の内部プロテアーゼ開裂部位において自己開裂を起こす。アミノ末端の２４７個のアミノ酸部分はプロテアーゼ活性を保有している。本明細書の用語「成熟プロテアーゼ」は、活性プロテアーゼ前駆体の自己開裂により生じるアミノ末端の２４７個のアミノ酸の蛋白をいう。成熟プロテアーゼのアミノ酸配列を、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸１〜２４７として示す。本明細書の用語「ＨＳＶ−２プロテアーゼ」は、活性プロテアーゼ前駆体、成熟プロテアーゼもしくはその活性フラグメントなる用語と互いに置き換えていう。本明細書の用語「ＵＬ２６.５」遺伝子は、ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列からなるＤＮＡ分子をいう。ＵＬ２６.５遺伝子は、別々に転写されるＵＬ２６遺伝子の内部配列である。ＵＬ２６.５遺伝子を配列番号：１に開示し、それはヌクレオチド１４６１〜２４４７のコーディング領域を含む。発現される場合、ＵＬ２６.５遺伝子は、アミノ酸３１０〜６３８として配列番号：１および配列番号：２に開示した３２９個のアミノ酸のカプシド前駆体をコードしている。本明細書の用語「カプシド前駆体」は、プロセッシングされていないＵＬ２６ .５翻訳産物をいう。本発明の遺伝子産物の機能に関するいかなる特別な機械的理論にも拘束されることを望まないが、部分的にはＨＳＶ−１に関する文献に基づくと、カプシド前駆体は、生産された後、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸残基６１３と６１４の間の内部プロテアーゼ開裂部位においてＨＳＶ− ２プロテアーゼにより開裂される。３０４個のアミノ酸の部分は、ウイルスのアッセンブリーおよびウイルスＤＮＡのパッケージングに用いられるカプシド蛋白である。成熟カプシド中へのウイルスＤＮＡのパッケージングを可能にするのは、ＵＬ２６.５のＣ末端のプロセッシングである本明細書の用語「成熟カプシド蛋白」は、ＨＳＶ−２プロテアーゼによるカプシド前駆体の開裂によって生成する３０４個のアミノ酸の蛋白をいう。本明細書の用語「ＨＳＶ−２カプシド蛋白」は、カプシド前駆体および成熟カプシド蛋白と互いに置き換えて用いる。本明細書の用語「機能的フラグメント」は、特定の遺伝子または遺伝子産物を修飾するために用いる場合には、全長の遺伝子または遺伝子産物にかかわる生物学的機能のすべてを実質的に保有している遺伝子または遺伝子産物の全長より小さい部分を意味する。特定の遺伝子または遺伝子産物のフラグメントが機能的フラグメントであるかどうを決定するためには、よく知られたヌクレオチド分解法または蛋白分解法によりフラグメントを得て、かくして得られたフラグメントを記載された生物学的機能に関して試験するだけである。本発明は、実質的に純粋なＨＳＶ−２プロテアーゼ、ＨＳＶ−２プロテアーゼを用いた組成物ならびにその製造方法、ＨＳＶ−２プロテアーゼをコードする核酸分子、およびＨＳＶ−２プロテアーゼをコードする核酸分子の製造方法ならびに使用方法に関する。本発明は、実質的に純粋なＨＳＶ−２カプシド蛋白、ＨＳＶ−２カプシド蛋白を用いた組成物ならびにその製造方法、ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードする核酸分子、およびＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードする核酸分子の製造方法ならびに使用方法に関する。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼにより開裂される基質、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を阻害する化合物の同定方法、ＨＳＶ−２カプシドのアッセンブリーを阻害する化合物の同定方法、ＨＳＶ− １ＤＮＡを含む試料とＨＳＶ−２ＤＮＡを含む試料とを識別する方法、ＨＳＶ−１蛋白を含む試料とＨＳＶ−２蛋白を含む試料とを識別する方法、およびかかる方法を実施するためのオリゴヌクレオチドならびに抗体を含む試薬に関する。本発明のいくつかの具体例は、ＨＳＶ−２プロテアーゼの活性を阻害、さもなくば変化させる化合物の同定方法を提供する。よって、ＨＳＶ−２プロテアーゼの活性がウイルスの生活環に必須のものであるため、本発明は、抗ＨＳＶ−２剤として有用な化合物の同定方法を提供する。本発明によれば、試験化合物の存在下でＨＳＶ−２プロテアーゼはＨＳＶ−２プロテアーゼ基質（基質）と接触させられて、試験化合物が蛋白分解活性に影響するか否かが決定される。試験化合物存在下での蛋白分解活性と試験化合物不存在下で得られるであろう蛋白分解活性を比較することにより、ＨＳＶ−２プロテアーゼに対する試験化合物の影響を決定することができる。蛋白分解活性は、ＨＳＶ−２プロテアーゼが酵素的に基質を生成物に変換する能力、すなわち、単一の基質ペプチド分子を２個またはそれ以上の分子（蛋白分解生成物）に開裂する能力をいう。ウイルスの生活環において、かかる蛋白分解的開裂により、プロテアーゼ前駆体は成熟プロテアーゼにプロセッシングされ、カプシド前駆体は成熟カプシドにプロセッシングされる。この変換はウイルス粒子のアッセンブリーおよびウイルスＤＮＡのパッケージングに必要である。蛋白分解活性のレベルを当業者によく知られた種々の手段により決定することができる。本質的には、プロセッシングされていない基質を蛋白分解産物から識別するための手段が提供される。よって、基質、ＨＳＶ−２プロテアーゼおよび試験化合物を接触させた後、プロッセシングされていない基質の残存量、プロッセシングされていない基質の消失量、あるいは生成した蛋白分解産物量を調べることにより、蛋白分解活性のレベルを観察することができる。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を変化させる化合物を同定するためのアッセイにおいて有用である本質的に純粋なＨＳＶ−２プロテアーゼを提供する。本発明は本質的に純粋なＨＳＶ−２プロテアーゼの製造方法を提供する。ＨＳＶ−２のアミノ酸配列を配列番号：１および配列番号：２に開示する。上記のように、６３８個のアミノ酸の活性プロテアーゼ前駆体を配列番号：１および配列番号：２に開示する。活性プロテアーゼ前駆体は、アミノ酸２４７と２４８との間の内部蛋白開裂部位における自己開裂によりプロセッシングされて成熟プロテアーゼと呼ばれる２４７個のアミノ酸の蛋白を生じる活性ＨＳＶ−２プロテアーゼである。精製活性プロテアーゼ前駆体、成熟プロテアーゼおよびその活性フラグメントを、常用されるペプチド合成法により、あるいは配列番号：１において提供される情報を用いる組み換えＤＮＡ法を用いることにより製造することができる。標準的方法および容易に利用できる出発材料を用いて、当業者はＨＳＶ− ２プロテアーゼを製造することができる。さらにそのうえ、標準的方法および容易に利用できる出発材料を用いて、当業者は、活性プロテアーゼ前駆体または成熟プロテアーゼのフラグメントおよび／もしくは誘導体が活性フラグメントであるかどうかを決定することができる。蛋白またはペプチドが特異的な基質を開裂しうるか否かを決定するためのアッセイを本明細書に開示する。ＨＳＶ−２プロテアーゼフラグメントが蛋白分解活性を有するかどうかを決定するためには、当業者は、試験化合物を用いずに、配列番号：２と同じプロテアーゼのかわりにプロテアーゼのフラグメントまたは誘導体を用いて本明細書記載のプロテアーゼ活性のアッセイを行うのである。フラグメントまたは誘導体が基質を開裂すれば、それは活性があり、すなわち、フラグメントまたは誘導体は蛋白分解活性を有する。よって、当業者は、プロテアーゼのフラグメントまたは誘導体が活性フラグメントまたは誘導体であるかどうかを、日常的に決定することができる。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列およびＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列に関する。ＨＳＶ−２プロテアーゼおよびＨＳＶ−２カプシド蛋白の前駆体形態をコードするヌクレオチド配列を含んでいるＵＬ２６遺伝子を配列番号：１に開示する。ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列を含んでいるＵＬ２６.５遺伝子も配列番号：１に開示する。当業者は、標準的方法および容易に利用できる出発材料を用いて、配列番号：１をはじめとする本明細書開示の情報を用いてＨＳＶ−２プロテアーゼをコードする核酸分子またはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードする核酸分子を得ることもしくは合成することが可能である。さらに、標準的方法、容易に利用できる出発材料および配列番号：１をはじめとする本明細書開示の情報を用いて、当業者は、活性前駆体、成熟プロテアーゼもしくはＨＳＶ−２プロテアーゼフラグメントを包含する本質的に純粋なＨＳＶ−２プロテアーゼを製造することができる。同様に、標準的方法、容易に利用できる出発材料および配列番号：１をはじめとする本明細書開示の情報を用いて、当業者は、カプシド前駆体、成熟カプシドもしくはアッセンブリー機能を発揮しうるＨＳＶ−２カプシドフラグメントを包含する本質的に純粋なＨＳＶ−２カプシド蛋白を製造することができる。当業者は、標準的方法、容易に利用できる出発材料および配列番号：１をはじめとする本明細書開示の情報を用い、発現系に使用される宿主細胞における最適な蛋白生産を提供するコドンを用いてＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ −２カプシド蛋白をコードする核酸分子を得ることまたは合成することができる。当業者は、ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードする核酸分子を、種々の方法を用いる過度の実験をすることなく得ることができる。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を用いてプライマーを設計し、ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列の多数のコピーを得るために用いることができる。活性プロテアーゼ前駆体をコードする全ヌクレオチド配列を、ウイルスＤＮＡを増幅することにより、日常的に得ることができる。同様に、成熟プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列を、ウイルスＤＮＡを増幅することにより、日常的に得ることができる。同様に、活性ＨＳＶ−２プロテアーゼフラグメントをコードするヌクレオチド配列を、ウイルスＤＮＡを増幅することにより、日常的に得ることができる。同様の方法で、カプシド前駆体、成熟カプシドもしくはその機能的フラグメントをコードする全ヌクレオチド配列を、ウイルスＤＮＡを増幅することにより、日常的に得ることができる。別法として、制限酵素を用いて、活性プロテアーゼ前駆体、成熟プロテアーゼもしくはその活性フラグメントを包含するＨＳＶ−２プロテアーゼ、またはカプシド前駆体、成熟カプシドもしくはその機能的フラグメントを包含するＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするＤＮＡを、ベクター中に組み込まれたウイルスＤＮＡから得て、開示ヌクレオチド配列から設計されたプローブを用いるハイブリダイゼーションにより同定してもよい。さらに、ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードする核酸分子を、当業者によく知られた方法を用いて合成してもよい。ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ− ２カプシド蛋白をコードするコドンを選択して、ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白の組み換え法による生産のために選択された宿主における蛋白生産を最適化してもよい。ＨＳＶ−２ゲノムはＧ＋Ｃヌクレオチドが非常に豊富である。このことは、ＨＳＶ−２プロテアーゼをコードするＵＬ２６遺伝子に関して特に真実である。かかるＣ＋Ｇが多いという特性は、使用コドンが多いことおよびフレームシフト変異の機会が多いということにより、イー・コリ（ E.coli）における遺伝子の過剰発現における問題を提起する。イー・コリにおけるＵＬ２６の発現を改善するための努力において、イー・コリにおける発現には好ましいがプロテアーゼの元のアミノ酸配列を保有しているコドンを提供するために、ＵＬ２６遺伝子ならびにそのフラグメントを変化させた。好ましい使用コドンに関する文献は、ワダ（Wada）ら，（１９９２年）「コドン・ユーシジ・タビュレイテッド・フロム・ザ・ジンバンク・ジェネティック・シークエンス・データ（Codon Usage Tabulated from the GenBank Genetic Sequence Data）」，ヌクレイック・アシッド・リサーチ（Nucleic Acid Research），第２０巻（補），２１１１〜２１１８頁であり、参照により本明細書に取り入れる。使用コドンの最適化はよく知られており、選択された宿主中で改善されたレベルの効率で発現される本発明核酸分子の設計に用いることができる。当業者は、よく知られた方法を用いて、よく知られた発現系に使用するための市販発現ベクターのごときベクター中にかかるＤＮＡ分子を挿入することができる。例えば、ｐＳＥ４２０（ウィスコンシン州マジソンのノバジェン（Novagen ）社製）またはｐＥＴ−１６（ｂ）（カリフォルニア州サン・ディエゴのインビトロジェン（Invitrogen）社製）のごとき市販プラスミドを、イー・コリ中でのＨＳＶ−２プロテアーゼの生産に用いてもよい。例えば、市販プラスミドｐＹＥＳ２（カリフォルニア州サン・ディエゴのインビトロジェン（Invitrogen）社製）を、酵母サッカロミセス（Saccharomyces）株における生産に使用してもよい。例えば、市販のＭＡＸＢＡＣ（登録商標）完全バキュロウイルス発現系（カリフォルニア州サン・ディエゴのインビトロジェン（Invitrogen）社製）を、昆虫細胞における生産に用いてもよい。例えば、市販プラスミドｐｃＤＮＡＩ（カリフォルニア州サン・ディエゴのインビトロジェン（Invitrogen）社製）を、チャイニーズハムスター卵巣細胞のごとき哺乳動物細胞における生産に用いてもよい。当業者は、これらの市販発現ベクターおよび系またはその他のものを用い、日常的方法および容易に使用できる出発材料を用いてＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白を得ることができる（例えば、サムブルック（Sambro ok）ら,モレキュラー・クローニング・ア・ラボラトリー・マニュアル（Molecul ar Cloning a Laboratory Manual）第２版,コールド・スプリング・ハーバー・プレス（Cold Spring Harbor Press）（１９８９年）参照、これを参照により本明細書に取り入れる）。かくして、所望蛋白を原核細胞および真核細胞の両方において製造することができ、プロセッシングされた形態の蛋白の範疇を得ることができる。所望宿主に適する発現系の構築の詳細は当業者に知られている。簡単に説明すると、蛋白の組み換え法による生産のためには、ポリペプチドをコードするＤＮＡを選択発現ベクター中に安定に連結する。該ＤＮＡは、その宿主細胞における発現に必要なすべての調節エレメントに作動可能に連結される。当業者は、よく知られた方法を用いて、ポリペプチドの組み換え法による生産のための発現ベクターを調製することができる。ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするＤＮＡを含んでいる発現ベクターを用いて、適合する宿主を形質転換またはトランスフェクションし、次いで、これを培養し、外来遺伝子の発現が起こる条件下に維持する。かくして得られた本発明蛋白を、適当かつ当業者に知られたようにして細胞を溶解することにより、あるいは培地から回収する。当業者は、よく知られた方法を用いて、かかる発現系を用いて得られた蛋白を単離することができる。本発明の１の具体例において、以下のように蛋白を生産し、精製してもよい。ＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列からなるＤＮＡ分子であって、蛋白の末端部分において多数のヒスチジン残基をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を得る。このＤＮＡ分子を発現ベクター中に組み込み、適当な宿主中に導入する。ＤＮＡが発現され、末端ヒスチジン残基（本明細書ではヒスチジンタグまたはＨｉｓ−ｔａｇという）を含む蛋白が生産される。細胞を集め、氷上のｐＨ８.５のリン酸緩衝化セイライン中に維持する。次いで、細胞を超音波処理により溶解させる。超音波処理した細胞材料を３００００ｘｇで遠心分離する。次いで、上清を０.２ミクロンのフィルターで濾過する。濾過された上清を金属キレート樹脂（例えば、ニトリロトリ酢酸ニッケル樹脂はかかる目的に有用なかかる多くの樹脂の１つである）とともに２時間室温でインキュベーションし、その後、遠心分離により樹脂を非結合物質から分離する。次いで、樹脂をカラムに詰め、５０ｍＭイミダゾールで洗浄して非特異的結合蛋白を除去する。次いで、１５０ｍＭイミダゾール緩衝液を用いてＨｉｓ−ｔａｇを付けた蛋白をＮｉカラムから溶離する。カラムからの溶出液を、リン酸緩衝化セイライン中のファルマシア（Pharmacia）のスーパーデックス７５（Superdex75）サイズ決定カラムを用いるカラムクロマトグラフィーによりさらに精製する。ヒスチジンタグを発現された蛋白から除去できるようにするために、ヒスチジンタグと元のＨＳＶ−２プロテアーゼとの間に特異的開裂部位を有するようにＤＮＡ分子を加工してもよい。ヒスチジンタグの除去を以下のように行ってもよい：ヒスチジンタグがＨＳＶ−２プロテアーゼのアミノ末端にある場合には、(アスパラギン酸)₄リジン配列をヒスチジンタグの後ろ、ＨＳＶ−２配列の前に来るように加工することができる。エンテロキナーゼは、(アスパラギン酸)₄リジン配列の後ろを特異的に開裂し、それにより元のＨＳＶ−２プロテアーゼが生成する。組み換え法によるこれらの蛋白の生産の他に、自動ペプチド合成装置を用いてＨＳＶ−２プロテアーゼまたはＨＳＶ−２カプシド蛋白を得てもよい。かかる方法は当業者によく知られている。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ開裂活性に対する、合成基質を含めた本質的に純粋な基質を提供する。ＨＳＶ−２プロテアーゼ基質は、ＨＳＶ−２プロテアーゼにより媒介される蛋白分解によって少なくとも２個の別々のペプチドに開裂されうるペプチドである。いくつかの具体例において、開裂および未開裂基質の間のサイズの相違を用いて、プロテアーゼが活性か否かを調べることができる。いくつかの具体例において、本発明基質を標識して検出されうるようにする。いくつかの具体例において、基質を固相に固定する。本発明のいくつかの具体例において、基質または蛋白分解産物のいずれかが、一方にはあって他方にはない生物学的もしくは化学的活性を有し、一方と他方を識別することができる。生物学的活性の例は、酵素活性および特異的抗体に結合する能力である。本来の開裂部位として同定されている２個のアミノ酸配列がＵＬ２６に含まれている。第１の配列はＬＱＡＳ（配列番号：３）であり、ＨＳＶ−２プロテアーゼはＡとＳとの間でペプチドを開裂する。第２の配列はＶＮＡＳ（配列番号：４）であり、ＨＳＶ−２プロテアーゼはＡとＳとの間でペプチドを開裂する。これら２つの開裂部位を有する天然もしくは合成基質を得ることができる。したがって、本発明基質は、式Ｒ₁−配列番号：３−Ｒ₂ または式Ｒ₁−配列番号：４−Ｒ₂ ［式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して水素または１個もしくはそれ以上のアミノ酸を意味する］のいずれかを有する。いくつかの具体例において、基質は２つのプロテアーゼ開裂部位（１つは配列番号：３からなり、もう１つは配列番号：４からなる）を有するＵＬ２６遺伝子産物である。いくつかの具体例において、基質は配列番号：４からなるプロテラーゼ開裂部位を有するＵＬ２６.５遺伝子産物である。いくつかの具体例において、好ましくは、Ｒ₁は１〜２０個のアミノ酸、より好ましくは１〜１０個、最も好ましくは３、４、５、６、７、８または９個のアミノ酸である。いくつかの具体例において、好ましくは、Ｒ₂は１〜２０個のアミノ酸、より好ましくは１〜１０個、最も好ましくは３、４、５、６、７、８または９個のアミノ酸である。当業者は、上記の式に従って容易に基質を設計することができる。基質として以下のペプチドを設計した。１.内部開裂部位配列番号：３（ＬＱＡ*Ｓ）を含むペプチド：２.内部開裂部位配列番号：４（ＶＮＡ*Ｓ）を含むペプチド：アステリスク（*）は、ＨＳＶ−２プロテアーゼによる開裂が起こった場合に切断される結合を示す。ＵＬ２６またはＵＬ２６.５蛋白産物の蛋白分解的開裂から基質を得てもよい。開裂部位を含むＵＬ２６またはＵＬ２６.５遺伝子もしくはそのフラグメントの発現により、それらを組み換え法を用いて得てもよく、あるいはメリフィールド合成（Merrifield synthesis）のごとき当業者にく知られた標準的なペプチド合成法を用いる合成有機化学的手段により作成してもよい。当業者は、ＨＳＶ−２プロテアーゼおよび基質を用いるアッセイを容易に設計して、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を変化させる化合物を同定することができる。本明細書の用語「試験アッセイ」は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ、基質および試験化合物からなる混合物を包含するアッセイをいい、用語「対照アッセイ」は、試験化合物不含でＨＳＶ−２プロテアーゼおよび基質からなる混合物を包含するアッセイをいう。試験化合物がＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を変化させるか否かを決定するためには、試験アッセイにおけるＨＳＶ−２プロテアーゼ活性のレベルを、対照アッセイにおけるＨＳＶ−２プロテアーゼ活性のレベルと比較してもよい。本発明のいくつかの具体例において、開裂基質と未開裂基質とのサイズの相違を用いて、試験化合物存在下において基質がＨＳＶ−２プロテアーゼと接触した際に開裂されたか否かを決定する。いくつかの具体例において、ＨＰＬＣアッセイが行われる。リン酸緩衝化セイライン中で、プロテアーゼ含有試料を、基質、例えばＨＴＹＬＱＡＳＥＫＦＫＭＷＧＡＥ（配列番号：１４）と３７℃で４時間インキュベーションし、その後、トリフルオロ酢酸で反応を停止する。次いで、反応物をＨＰＬＣカラムに供し、ペプチド開裂産物により活性を明らかにする。本発明のいくつかの具体例において、イムノアッセイを用いて、試験化合物存在下において基質がＨＳＶ−２プロテアーゼと接触した際に開裂されたか否かを決定する。いくつかの具体例において、未開裂基質に特異的に結合するがＨＳＶ −２プロテアーゼ開裂生成物には結合しない抗体が提供される。本明細書においてはかかる抗体を「基質特異的抗体」という。いくつかの具体例において、ＨＳＶ−２プロテアーゼ開裂生成物に特異的に結合するが未開裂基質には結合しない抗体が提供される。本明細書においてはかかる抗体を「生成物特異的抗体」という。生成物または基質のいずれかと反応するが両方ともには反応しない抗体（すなわち、ひとまとめにして基質特異的抗体および生成物特異的抗体という）を、本明細書においては「非交差反応抗体」という。いくつかの具体例において、抗体を固相に固定する。いくつかの具体例において抗体を標識する。例えば、ＨＳＶ−２プロテアーゼ、基質および試験化合物を含む混合物を、試験化合物が反応に影響しないならば蛋白分解反応が起こるに十分な時間、適当な条件下に維持する。内部表面に結合した非交差反応抗体を有する容器に該混合物を添加する。非交差反応抗体が基質特異的抗体である場合、混合物中に残存しているすべての未開裂基質は抗体に結合するであろう。基質が標識されている場合、容器を濯ぎ、存在する標識量を検出することができる。したがって、ＨＳＶ− ２プロテアーゼ活性のレベルが決定される。非交差反応抗体が生成物特異的抗体である場合、混合物のすべてのＨＳＶ−２プロテアーゼ生成物は抗体に結合するであろう。生成物として遊離する部分において基質が標識されている場合、容器を濯ぎ、存在する標識量を検出することができる。従って、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性のレベルが決定される。ＩＣＰ３５抗体（メリーランド州コロンビア、ギルフォード・ロード９１０８のリバーズ・パーク（Rivers Park）社製,カタログ番号：１３−１１８−１００）を用いて開裂された基質を検出してもよい。かかる抗体は、ＨＳＶ−２プロテアーゼにより蛋白分解的にプロセッシングされた後のカプシド蛋白に特異的であり、これにのみ結合する製品である。別法として、標識基質を使用するかわりに、例示したイムノアッセイを、結合抗原複合体に特異的な抗体が検出されるサンドイッチアッセイに改変してもよい。かかる抗体を、本明細書では「複合体特異的抗体」という。容器を再度濯ぎ、存在するすべての複合体に複合体特異的抗体が結合するに十分な時間置く。複合体特異的抗体のレベルを調べると、該レベルはＨＳＶ−２活性を示す。イムノアッセイのいくつかの具体例において、反応混合物中に未標識基質を用いる。非交差反応抗体からなる容器に反応混合物を添加し、基質または生成物のいずれかに非交差反応抗体が結合するに十分な時間置いた後、標識基質または標識生成物のいずれかをそれぞれ添加すると、基質または反応混合物由来の生成物に結合していないすべての非交差反応抗体に結合する。標識基質または標識生成物の量を調べると、蛋白分解的開裂のレベルが示される。いくつかの具体例において、基質が標識され、基質が蛋白分解生成物に変換される際に標識が遊離される。ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性示す標識の遊離の検出を、よく知られた種々の方法により行うことができる。いくつかの具体例において、標識基質が固相に固定される。ＨＳＶ−２プロテアーゼによる開裂が起こると、非結合生成物となる基質の部分に結合した標識が遊離する。反応の前後において存在する標識のレベルを比較することにより、どれくらい多くの標識が遊離されたかが示され、よって、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性のレベルが示される。別法として、固相から遊離された標識量を検出ことによりＨＳＶ−２プロテアーゼ活性のレベルが示される。別の具体例においては、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を検出する方法は、基質が切断される結合に隣接した蛍光標識を有している蛍光遊離アッセイを包含する。かかる状況においては、標識は未開裂基質中には検出されない。しかしながら、ＨＳＶ−２プロテアーゼにより基質が開裂部位において開裂される場合、蛍光基が露出し、蛍光が検出可能となる。よって、試験化合物の存在下で基質をＨＳＶ−２プロテアーゼに接触させた後、検出可能な蛍光を測定することにより蛋白分解活性を測定することができる。別の具体例において、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性測定方法は、放射標識に近接した場合に励起されシンチレーションにより検出可能となる固相ビーズに放射標識基質が結合しているシンチレーション近接アッセイを包含する。基質が開裂された場合、放射標識はもはやビーズに近接しておらず、ビーズは励起されず、シンチレーションにより検出されない。よって、試験化合物の存在下で結合基質をＨＳＶ−２プロテアーゼに接触させた後にシンチレーションによるビーズの励起を測定することにより、蛋白分解活性のレベルを測定することができる。これらの具体例の他に、当業者は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ開裂もしくはその欠損を検出するための種々の手段を用いるＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を変化させる化合物を同定する他の方法を工夫するために、よく知られた方法を適用することができる。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を変化させる化合物を同定するためのキットに関する。かかるキットは、ＨＳＶ−２プロテアーゼ、基質、および所望により、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性の検出あるいは未開裂基質と生成物とを識別するための抗体もしくは他の試薬の入った別々の容器を含んでいる。基質または抗体を容器の内部表面に固定してもよい。基質または抗体を標識してもよい。さらに本発明のいくつかの具体例は、ＨＳＶ−２カプシドのアッセンブリーを阻害するかさもなくば変化させる化合物を同定する、多量体化アッセイを用いる方法を提供する。カプシドのアッセンブリーはウイルス複製および感染性に必要であるため、本発明は、抗ＨＳＶ−２剤として有用な化合物の同定方法を提供する。本発明によれば、酵母のＧＡＬ４ＤＮＡ結合蛋白をコードする配列に結合したＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子もしくはその一部を含む配列、または酵母のＧＡＬ４活性化蛋白をコードする配列に結合したＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子もしくはその一部を含む配列のいずれかからなるキメラ遺伝子が提供される。ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするキメラ遺伝子の一部が成熟カプシドをコードするのが好ましいが、カプシド前駆体蛋白も有用に使用できる。キメラ遺伝子をサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）のプラスミド中に挿入し、そのプラスミドを、完全なＧＡＬ４応答性ｌａｃＺインジケーター遺伝子を含むエス・セレビシエ（S.cerevisiae）中に導入する。プラスミド上のキメラ遺伝子が発現される場合、融合蛋白が生産される。ＨＳＶ−２カプシド蛋白からなる融合蛋白の一部は、選択された条件下で互いに結合し、そのことによりＤＮＡ結合ドメインを一緒にし、ＧＡＬ４のドメインを活性化するであろう。近接している２個のＧＡＬ４ドメインはＧＡＬ４応答性ｌａｃＺインジケーター遺伝子と相互作用する場合、適当な条件下でインジケーター遺伝子が発現され、検出可能な青色が観察される。融合蛋白が結合を妨げられる場合、２個のＧＡＬ４ドメインは互いに近接して存在せず、インジケーター遺伝子は活性化されないであろう。よって、観察すべき青色は存在しないであろう。よって、この酵母系は、ウイルス粒子のアッセンブリーの間に起こるＨＳＶ− ２カプシド蛋白の相互作用に関する迅速かつ特異的なアッセイを提供する。ＨＳＶ−２カプシド蛋白の相互作用を妨害または阻害する化合物の存在下においては、キメラ遺伝子の発現により生産される融合蛋白におけるＧＡＬ４ドメインは結合せず、それゆえ、酵母系のｌａｃＺ遺伝子を活性化しないであろう。したがって、ＨＳＶ−２カプシドのアッセンブリーを阻害するため抗ウイルス特性を有する形質転換酵母中のｌａｃＺ遺伝子の活性化がないことにより、化合物を同定してもよい。本発明のいくつかの具体例は、ＨＳＶ−１ＤＮＡ含有試料とＨＳＶ−２ＤＮＡ含有試料、あるいはＨＳＶ−１蛋白含有試料とＨＳＶ−２蛋白含有試料とを識別する方法を提供する。したがって、本発明は、個体がＨＳＶ−１および／またはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを診断する方法を提供する。ＨＳＶ− １感染がＨＳＶ−２感染から識別されうる状況において、個体がＨＳＶ−１および／またはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを診断する方法が開示される。本発明のいくつかの態様によれば、ＨＳＶ−１ＤＮＡ含有試料とＨＳＶ−２ＤＮＡ含有試料を識別するためにＰＣＲ法が用いられる。かかる方法は、ＨＳＶ −１感染とＨＳＶ−２感染とを識別する手段を提供し、個体が感染しているＨＳＶ感染のタイプの診断を可能にする。ＨＳＶ−１ＤＮＡの増幅を提供するがＨＳＶ−２ＤＮＡの増幅を提供しない、および／またはＨＳＶ−２ＤＮＡの増幅を提供するがＨＳＶ−１ＤＮＡの増幅を提供しない特異的プライマーが設計される。したがって、細胞、血清または組織試料のごとき個体から採取された生物学的試料、特に、水泡もしくはウイルス流出の他の証拠が観察される部位において採取された生物学的試料に関してかかるプライマーを用いる増幅法を行うことにより、試料中のＤＮＡがＨＳＶ−１もしくはＨＳＶ−２由来であるか否かを決定することができ、それゆえ、試料が採取された個体がＨＳＶ−１もしくはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを決定することができる。ＨＳＶ−２プロテアーゼおよびＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするＵＬ２６遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号：１に開示する。ＨＳＶ−１プロテアーゼおよびＨＳＶ−１カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列を配列番号：１６に開示する。ＨＳＶ−２配列を増幅するがＨＳＶ−１配列を増幅しないＰＣＲプライマーのセットを設計する。かくして、増幅されたＤＮＡは、ＨＳＶ−２が存在することを示す。同様に、ＨＳＶ−１配列を増幅するがＨＳＶ−２配列を増幅しないＰＣＲプライマーのセットを設計する。かくして、増幅されたＤＮＡは、ＨＳＶ−１が存在することを示す。両方のセットのプライマーが提供され、同じ試料由来の材料についての別々の増幅プロトコールに用いられてさらなる対照が提供されることが好ましい。他のさらなる対照は、増幅されるＤＮＡ配列を含む正の対照および／またはプライマーによっては増幅され得ない負の対照を包含する。増幅プロトコール完了後、材料を電気泳動ゲルに流すことにより、増幅されたＤＮＡを検出することができる。増幅産物について予想される長さのＤＮＡ分子を、サイズマーカーとして提供してもよい。さらに本発明は、試料がＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２由来のＤＮＡを含むかどうかを識別するキットに関する。該キットは、ＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅しないプライマーの入った容器、またはＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅しないプライマーの入った容器を包含する。所望により、キットが、同じ試料の別々の部分を用いる別々の増幅工程を行うために別々の容器中に両セットのプライマーを含んでいてもよい。キットが、所望により、別々の容器中に正および／または負の対照を含んでいてもよい。キットが、所望により、サイズマーカーとして役立つＤＮＡ分子を別々の容器中に含んでいてもよい。ＤＮＡ分子が、プライマーを用いて増幅される予想される長さのＤＮＡ分子であってもよい。本発明のいくつかの具体例によれば、ＨＳＶ−１蛋白含有試料とＨＳＶ−２蛋白含有試料とを識別するためにイムノアッセイが用いられる。イムノアッセイを用いてＨＳＶ−１感染とＨＳＶ−２感染とを識別し、個体が感染しているＨＳＶ感染のタイプを診断する。かかるイムノアッセイは、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ− ２のＵＬ２６遺伝子産物間の相違、あるいはＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２のＵＬ２６.５遺伝子産物間の相違に基づいている。イムノアッセイは、ＨＳＶ−１ならびにＨＳＶ−２のプロテアーゼおよび／またはカプシド蛋白の相違に基づく。ＨＳＶ−１抗原上のエピトープには選択的に結合するがＨＳＶ−２抗原上のエピトープには結合しない特異的抗体、またはＨＳＶ−２抗原上のエピトープには選択的に結合するがＨＳＶ−１抗原上のエピトープには結合しない特異的抗体が提供される。例えば、ＨＳＶ−１プロテアーゼに選択的に結合するがＨＳＶ−２プロテアーゼには結合しない特異的抗体、またはＨＳＶ−２プロテアーゼに選択的に結合するがＨＳＶ−１プロテアーゼには結合しない特異的抗体が提供される。同様に、ＨＳＶ−１カプシドに選択的に結合するがＨＳＶ−２カプシドには結合しない特異的抗体、またはＨＳＶ−２カプシドに選択的に結合するがＨＳＶ−１カプシドには結合しない特異的抗体が提供される。したがって、細胞、血清または組織試料のごとき個体から採取された生物学的試料、特に、水泡もしくはウイルス流出の他の証拠が観察される部位において採取された生物学的試料に関して特異的抗体を用いる抗体結合アッセイを行うことにより、ＨＳＶ−１特異的抗体またはＨＳＶ−２特異的抗体が試料中の蛋白と結合するか否かを決定することができ、それゆえ、試料が採取された個体がＨＳＶ −１および／またはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを決定することができる。ＨＳＶ−２活性プロテアーゼ前駆体のアミノ酸配列は、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸１〜６３８の間である。ＨＳＶ−２成熟プロテアーゼのアミノ酸配列は、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸１〜２４７の間である。ＨＳＶ−２カプシド前駆体のアミノ酸配列は、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸３１０〜６３８の間である。ＨＳＶ−２成熟カプシドのアミノ酸配列は、配列番号：１および配列番号：２のアミノ酸３１０〜６１３の間である。ＨＳＶ−１プロテアーゼおよびカプシドのアミノ酸配列を、配列番号：１７に開示する。ＨＳＶ−１活性プロテアーゼ前駆体は、配列番号：１７のアミノ酸１〜６３５の間である。ＨＳＶ−１成熟プロテアーゼのアミノ酸配列は配列番号：１７の１〜２４７の間である。ＨＳＶ−１カプシド前駆体のアミノ酸配列は配列番号：１７のアミノ酸３０７〜６３５の間である。ＨＳＶ−１成熟カプシドのアミノ酸配列は配列番号：１７のアミノ酸３０７〜６１０の間である。ＨＳＶ−２プロテアーゼに特異的に結合するがＨＳＶ−１プロテアーゼには結合しない抗体が、常用される方法および広く入手可能な材料を用いて、当業者により生産されてもよい。同様に、ＨＳＶ−２カプシドに特異的に結合するがＨＳＶ−１カプシドには結合しない抗体が、常用される方法および広く入手可能な材料を用いて、当業者により生産されてもよい。ＨＶＳ−１とＨＳＶ−２とを識別することのできるイムノアッセイにおいて、これらのＨＳＶ−２特異的抗体のいすれかを用いてＨＳＶ−２を検出する。同様に、ＨＳＶ−１プロテアーゼに特異的に結合するがＨＳＶ−２プロテアーゼには結合しない抗体が、常用される方法および広く入手可能な材料を用いて、当業者により生産されてもよい。同様に、ＨＳＶ−１カプシドに特異的に結合するがＨＳＶ−２カプシドには結合しない抗体が、常用される方法および広く入手可能な材料を用いて、当業者により生産されてもよい。ＨＶＳ−１とＨＳＶ−２とを識別することのできるイムノアッセイにおいて、これらのＨＳＶ−１特異的抗体を用いて、ＨＳＶ−１を検出する。同じ試料由来の材料を用いて両方のイムノアッセイ行ってさらなる対照を提供することが好ましい。他のさらなる対照は、イムノアッセイに使用される抗体に結合するペプチドを包含する正の対照および／またはイムノアッセイに使用される抗体の結合しないペプチドを包含する負の対照を包含する。抗体を標識してもよい。別法として、ＨＳＶ特異的抗体に特異的に結合する抗体を用いてもよい。当業者は、本明細書に示した情報を用いて、必要なすべての試薬を用いてイムノアッセイを容易に行うことができる。セロテック（Serotech）によりAntibody 45KDとして製造され、カタログ番号ＭＣＡ４０６としてバイオプロダクツ・フォー・サイエンス・インコーポレイテッド（Bioproducts for Science Inc.）（インディアナ州インディアナポリス，Ｐ.Ｏ.ボックス２９１７６）から市販されているＨＳＶ−１プロテアーゼ抗体を、ＨＳＶ−２とＨＳＶ−１とを識別するためのイムノアッセイに用いることができる。セロテックの抗体はＨＳＶ−１の前駆体もしくは成熟カプシド蛋白に結合するが、ＨＳＶ−２の前駆体もしくは成熟カプシド蛋白には結合しない。したがって、セロテックの抗体を用いるイムノアッセイを行って、試料がＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２を含有するかどうかを決定することができ、かくして、試料を採取した個体がＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを決定することができる。さらに本発明は、個体がＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２に感染しているかどうかを診断するためのキットに関する。本発明キットは、ＨＳＶ−１プロテアーゼに結合するがＨＳＶ−２プロテアーゼには結合しない抗体の入った容器、および／またはＨＳＶ−２プロテアーゼに結合するがＨＳＶ−１プロテアーゼには結合しない抗体の入った容器よりなっていてもよい。キットが、別々の容器中の両方のタイプの抗体からなっているのが好ましい。キットに使用する抗体を標識してもよい。キットは、該抗体を用いるイムノアッセイを行うためのすべての他の試薬および材料を含んでいる。所望により、キットが、別々の容器中に正の対照および／または負の対照を含んでいてもよい。所望により、キットが、例えば、抗ＨＳＶプロテアーゼ抗体に特異的に結合する第２の抗体のような抗体検出手段を含んでいてもよい。本発明キットは、ＨＳＶ−１カプシドに結合するがＨＳＶ −２カプシドには結合しない抗体の入った容器、および／またはＨＳＶ−２カプシドに結合するがＨＳＶ−１カプシドには結合しない抗体の入った容器よりなっていてもよい。キットが、別々の容器中の両方のタイプの抗体からなっているのが好ましい。キットに使用する抗体を標識してもよい。キットは、該抗体を用いるイムノアッセイを行うためのすべての他の試薬および材料を含んでいる。所望により、キットが、別々の容器中に正の対照および／または負の対照を含んでいてもよい。所望により、キットが、例えば、抗ＨＳＶカプシド抗体に特異的に結合する第２の抗体のような抗体検出手段を含んでいてもよい。キットがセロテックの抗体を含んでいてもよい。本発明の別の態様は、ＨＳＶ−２プロテアーゼのプロモーターおよび／またはエンハンサーエレメントならびにそれらの使用に関する。ＨＳＶ−２プロテアーゼのプロモーターを合成または単離し、ＨＳＶ−２プロテアーゼ以外の蛋白をコードするコーディング配列に結合させてもよい。したがって、本発明は、ＨＳＶ −２プロテアーゼ以外の蛋白をコードするヌクレオチド配列に作動可能に結合した配列番号：１のヌクレオチド１〜５３４間のヌクレオチド配列の少なくとも一部からなる組み換えＤＮＡ分子に関する。本発明は、ＨＳＶ−２プロテアーゼ以外の蛋白をコードするヌクレオチド配列に作動可能に結合した配列番号：１のヌクレオチド１〜５３４間のヌクレオチド配列の少なくとも一部からなる組み換えＤＮＡ分子含む細胞に関する。本発明の別の態様は、ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子（配列番号：１）およびその遺伝子の上流ならびに下流の配列を有するバクテリオファージラムダのクローンを用いる。したがって、結合された配列を用いてＵＬ２６プロモーター調節領域および／またはエンハンサー領域についてスクリーニングすることができる。本発明の別の態様は、ＨＳＶ−２カプシド蛋白プロモーターおよびその使用に関する。ＨＳＶ−２カプシド蛋白プロモーターは配列番号：１のヌクレオチド１４６１の上流に位置している。それを合成または単離して、ＨＳＶ−２カプシド蛋白以外の蛋白をコードするコーディング配列の結合させてもよい。したがって、本発明は、ＨＳＶ−２カプシト蛋白以外の蛋白をコードするヌクレオチド配列に作動可能に結合した配列番号：１のヌクレオチド１４６１の上流のヌクレオチド配列の少なくとも一部からなる組み換えＤＮＡ分子に関する。本発明は、ＨＳＶ−２カプシド蛋白以外の蛋白をコードするヌクレオチド配列に作動可能に結合した配列番号：１のヌクレオチド１４６１の上流のヌクレオチド配列の少なくとも一部を含む細胞に関する。例えば、ヌクレオチド１１９１から１４６１まで（配列番号：１）をクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子に連結すると、ＶＥＲＯ細胞中にトランスフェクションされた場合、有意なプロモーター活性を有することが見いだされた。実施例実施例１ヘルペスウイルスのウイルス粒子の成熟に必須の蛋白分解活性は、ＨＳＶ−２によるものと特徴付けられている。ＨＳＶ−２ＵＬ２６とも呼ばれるＨＳＶ− ２プロテアーゼは分子量（見かけの）約６７,０２８Ｄａを有し、ｐＩ＝６.９４である。分子生物学的方法を用いて、合理的な設計およびスクリーニングによりＨＳＶ−２活性阻害剤を同定するインビトロアッセイにＨＳＶ−２プロテアーゼを用いて感染細胞における抗ウイルス活性に関してこれらの阻害剤を試験することができる。スタートコドン、全読み取り枠、ストップコドンおよび２２塩基対の３'−非翻訳配列を含むＮｃｏＩ−ＥｃｏＲＩフラグメント（１９３８塩基対）としてＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子をクローン化した。全長のＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子がｐ０ＴＳ−２０７ベクターのバクテリオファージラムダ由来の強力かつ緊密に調節されたＰ_Lプロモーターの下流に挿入されているｐＯＴＳベクター系を用いて、全長のＨＳＶ−２ＵＬ２６がイー・コリで発現された。発現している遺伝子がプロテアーゼのように毒性の可能性がある場合に、プロモーターの緊密な調節が必要である。Ｔ７プロモーターを含んでいる緊密に調節された発現ベクターｐＥＴ−１６（ｂ）（ウィスコンシン州マジソンのノバージェン(Novagen) 社製）を用いて、ＨＳＶ−２ＵＬ２６１次翻訳産物由来の自己蛋白分解生成物の１つに対応している２７ＫＤのプロテアーゼドメインがイー・コリにおいて生産された。ＨＳＶ−２ＵＬ２６スタートコドンの前に６個のヒスチジンコドンおよび( アスパラギン酸)₄リジンコドンを含むように各構築物を設計して、ニッケルカラムでの蛋白の精製用に、発現蛋白が開裂可能なヒスチジンタグをそのＮ末端に有するようにした。他のキレートカラムを用いてもよい。イミダゾールを添加することによりＨｉｓ−タグの付いた蛋白をカラムから溶出する。別法として、ｐＨ変化のごとき他の手段によって溶出してもよい。蛋白精製に有用なカラムおよび方法のプロトコールを、キアジェン（Qiagen）のごとき市販元から得てもよい。Ｐ_Lプロモーターベクターに関しては、発現およびプロセッシング／精製に関する研究のために、組み換え構築物をイー・コリＡＲ１２０（ナリジキシン酸誘導可能株）およびイー・コリＡＲ５８（熱誘導可能株）中に導入する。Ｔ７プロモーターベクターに関しては、組み換え構築物をＩＰＴＧ誘導可能株であるイー・コリＢＬ２１中に導入する。ニッケルキレートカラムによるクロマトグラフィーによって蛋白を容易に精製することができる。ｐ２７プロテアーゼフラグメントは、ＵＬ２６.５のコーディング領域の大部分からなる構築物から最後の２５個のアミノ酸を除去する能力により示されるような活性がある。実施例２高発現されるイー・コリ遺伝子の特徴を有するがｐ２７プロテアーゼのアミノ酸配列をやはり維持しているコドンを含むようにｐ２７プロテアーゼ遺伝子を合成した。合成された遺伝子を、発現ベクターｐＥＴ−１６（ｂ）中の緊密に調節されたＴ７プロモーターの下流に置いた。ＩＰＴＧ（１ｍＭ）による誘導後、２７ｋＤａの蛋白ドメインがイー・コリにおいて大いに発現された。実施例３上記ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子（ＮｃｏＩ−ＥｃｏＲＩフラグメント）およびｐ２７プロテアーゼを、昆虫細胞発現ベクターｐＶＬ１３９２中にクローン化する。次いで、スポドプテラ・フルギペドラ（Spodoptera frugipedra）由来の細胞中に組み換え構築物を導入する。次いで、プロテアーゼ活性分析および引きつづき行う蛋白生産のスケールアップのために高力価のウイルスのストック物を調製する。実施例４アッセイの特異性を保証する、最小量の同一性を共有するＨＳＶ−１ＵＬ２６遺伝子およびHＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子のＤＮＡ領域に対してオリゴヌクレオチドＰＣＲプライマーを設計した。配列番号：１および配列番号：１６のそれぞれ開示された２個のＤＮＡ配列を比較するコンピューター分析により、かかる領域を容易に可視化することができる。２つの相同配列間の最小の同一性を有する領域はＵＬ２６.５ドメイン、すなわち、カプシドをコードする遺伝子の一部の中に存在する。以下に、使用プライマーの配列が示され、エンクローズされたコンピューター分析で行われたヌクレオチド配列の比較において示されたヌクレオチド数に基づいてプライマー位置が与えられる。以下に示すように、分析を改良するために異なるサイズのＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２特異的生成物を得るように系を設計することは有用である。５'−ＰＣＲプライマー（センス鎖配列）：３'−ＰＣＲプライマー（アンチセンス鎖配列）：これらのプライマーのセットを用いた場合に予想されるＰＣＲ生成物のサイズ：ＨＳＶ−１：６９６塩基対ＨＳＶ−２：１０７３塩基対ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２ＤＮＡのいずれかを含んでいる可能性のある試料について、ＨＳＶ−１のアッセイには配列番号：１８および配列番号：２０を用いて、ＨＳＶ−２のアッセイには配列番号：１９および配列番号：２１を用いて、別々に行うＰＣＲ増幅プロトコールを行う。ＨＳＶ−１のアッセイにおいて６９６塩基対のＤＮＡフラグメントが生じる場合には、試料中のＨＳＶ−１ＤＮＡの存在が示される。６９６塩基対のフラグメントの存在を検出するためには、増幅生成物は電気泳動マトリックス中を移動させられる。約６９６塩基対のＤＮＡサイズマーカーを同時にマトリックス中に流す。１０７３塩基対のＤＮＡフラグメントがＨＳＶ−２ノアッセイにおいて生じるならば、ＨＳＶ−２ＤＮＡの存在が示される。１０７３塩基対のフラグメントの存在を検出するために、増幅生成物は電気泳動マトリックス中を移動させられる。約１０７３塩基対のＤＮＡサイズマーカーを同時にマトリックス中に流す。ＨＳＶ−１のアッセイにおいては配列番号：１８および配列番号：２０からなる容器よりなるキットが提供される。ＨＳＶ−２のアッセイにおいては配列番号：１９および配列番号：２１の入った容器よりなるキットが提供される。ＨＳＶ −１のアッセイにおいては配列番号：１８および配列番号：２０の入った容器、およびＨＳＶ−２のアッセイにおいては配列番号：１９および配列番号：２１の入った容器の両方の容器よりなるキットが提供される。サイズマーカーＤＮＡを所望により提供してもよい。いくつかのキットにおいては、６９６塩基対のサイズマーカーが提供される。いくつかのキットにおいては、１０７３塩基対のサイズマーカーが提供される。実施例５プロモーター活性の試験を行うために、ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子中に含まれる推定上のＨＳＶ−２ＵＬ２６.５プロモーター領域をクローン化した。分析された２５６塩基対の領域は、配列番号：１のヌクレオチド１１９１から１４４７までの間であった。配列番号：１のヌクレオチド１１９１から１２０９までのセンス鎖プライマー（５'−ＡＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＣＧＴＧＡＣＣ−３'）および配列番号：１のヌクレオチド１４４７から１４２９までの間のアンチセンス鎖プライマー（５'−ＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣ−３'）を用いるポリメラーゼ連鎖反応により、そのＤＮＡフラグメントをクローン化した。２５６塩基対のＰＣＲフラグメントを、市販ベクターｐＣＡＴＢＡｓｉｃ（プロメガ（ Promega）社製）中のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）リポーター遺伝子の上流にクローン化することにより、プロモーター活性を試験する。次いで、得られた構築物を適当な哺乳動物細胞、例えば、Ｖｅｒｏ細胞中に導入して、ＣＡＴ活性のレベルを分析することによりプロモーター活性を試験することができる。該細胞系は内在性ＣＡＴ活性を欠いており、そのため、かかる細胞系にプロモーター構築物を導入した後、ＣＡＴ活性のレベルはＨＳＶ −２ＵＬ２６.５プロモーター活性の直接的な測定値である。Ｖｅｒｏ細胞を、ゲンタマイシン（１０μｇ／ｍｌ）を含有するＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ中で増殖させた。標準的方法を用いて、１５マイクログラムのＨＳＶ −２ＵＬ２６.５／ｐＣＡＴ構築物を、５００万個のＶｅｒｏ細胞中にエレクトロポーレーションした。エレクトロポーレーション４８時間後、１００マイクロリットルの０.２５ＭＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８.０）中に細胞を収穫した。繰り返し凍結−融解により細胞を溶解し、１５０００ｒｐｍで遠心分離し、上清を新しい試験管に移した。Bio-Rad Protein Assay Dye Kit（カタログ番号５００ −０００６）を用いて全蛋白濃度を決定した。５マイクロリットルのＤ−スレオ [ジクロロアセチル−１−¹⁴Ｃ］クロラムフェニコール（アマシャム（Amersham ）社製,５６ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）および５マイクロリットルのｎ−ブチラールＣｏＡ（５ｍｇ／ｍｌ）を細胞抽出上清の一部に添加して最終体積１００マイクロリットルとして、酢酸エチル抽出、次いで、薄層クロマトグラフィーによりＣＡＴ活性のアッセイを行った。上記構築物以外に、２５６塩基対のＨＳＶ−２ＵＬ２６.５フラグメントも、ＳＶ４０エンハンサーエレメントを含んでいるpCAT EnhancerベクターのＣＡＴリポーター遺伝子の上流に組み込んだ。上記と同じ方法により、この構築物についても、Ｖｅｒｏ細胞におけるＣＡＴ活性について試験した。対照ベクターであるｐＣＡＴ対照（ＳＶ４０プロモーターおよびエンハンサーを含む）をＨＳＶ−２ＵＬ２６.５プロモーター強度の比較として使用した。図２は、４つの実験の結果をまとめたものである。第１の柱は負の対照であり、プロモーターおよびエンハンサー転写対照エレメントの不存在下でのＣＡＴ発現を示す。第２の柱は正の対照であり、ＳＶ４０プロモーターおよびＳＶ４０エンハンサーエレメントを用いてＣＡＴ遺伝子発現を行うものである。第３の柱はＵＬ２６.５プロモーターのみにより行われるＣＡＴ遺伝子発現を示し、第４の柱はＵＬ２６.５プロモーターがＳＶ４０エンハンサーエレメントとともに用いられる場合のＣＡＴ遺伝子発現を示す。基底ＵＬ２６.５発現レベル（第３の柱）が確立されると、ヌクレオチド１１９１の下流から元に戻ってヌクレオチド１までの都合のよい長さのフラグメントを単離し、プロモーター領域に関して作動可能な方向で該フラグメントを基底発現構築物中に導入し、基底レベル以上にＣＡＴ発現を増強するそれらの能力を試験することのみにより、図１中の遺伝子配列のさらなるフラグメントを用いてＵＬ２６.５エンハンサーエレメントを同定することができる。本明細書記載のプロモーターは、異種遺伝子に作動可能に結合された場合、異種遺伝子発現の調節に有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｑ 1/68 9453−4ＢＣ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/70 9453−4Ｂ 1/70 Ｇ０１Ｎ 33/53 0276−2ＪＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/569 0276−2Ｊ 33/569 Ｊ // Ａ６１Ｋ 38/43 ＡＤＹ 9284−4ＣＡ６１Ｋ 39/395 Ｄ 39/395 8517−4ＨＣ０７Ｋ 16/08 Ｃ０７Ｋ 16/08 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/465 ＡＤＹ (Ｃ１２Ｎ 9/64 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ (72)発明者デュブーク，クリスティーヌ・マリーアメリカ合衆国ペンシルベニア州19087、ウェイン、プー・ロード667番

Claims

【特許請求の範囲】１．ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子によりコードされる本質的に純粋な蛋白およびその機能的フラグメント。２．ＨＳＶ−２プロテアーゼ前駆体蛋白、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼおよび該成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼの機能的フラグメントからなる群より選択される請求項１の本質的に純粋な蛋白。３．成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼである請求項１の本質的に純粋な蛋白。４．ＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子によりコードされる本質的に純粋な蛋白またはそのフラグメント。５．ＨＳＶ−２カプシド前駆体蛋白、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白およびその機能的フラグメントからなる群より選択される請求項４記載の本質的に純粋な蛋白。６．成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白である請求項１の蛋白。７．ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子またはその機能的フラグメントからなる単離核酸分子。８．配列番号：１のヌクレオチド配列またはその機能的フラグメントからなる請求項７の単離核酸分子。９．成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列からなる請求項７の単離核酸分子。１０．ＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子またはその機能的フラグメントからなる請求項７の単離核酸分子。１１．成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列からなる請求項１０の単離核酸分子。１２．ＨＳＶ−２ＵＬ２６.５プロモーターからなる請求項１０の単離核酸分子。１３．ＨＳＶ−２ＵＬ２６遺伝子またはその機能的フラグメントからなる発現ベクター。１４．該ＵＬ２６遺伝子が配列番号：１に開示されている請求項１３の発現ベクター。１５．該ＵＬ２６遺伝子の該フラグメントが、成熟ＨＳＶ−２プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列、ＨＳＶ−２ＵＬ２６.５遺伝子をコードするヌクレオチド配列、成熟ＨＳＶ−２カプシド蛋白をコードするヌクレオチド配列およびＨＳＶ−２ＵＬ２６.５プロモーターからなる群より選択される請求項１３の発現ベクター。１６．請求項１３の発現ベクターでで形質転換された宿主細胞であって、該ＵＬ２６.５遺伝子またはその機能的フラグメントを発現しうる宿主細胞。１７．以下の工程ａ）〜ｃ）：ａ）試験化合物の存在下においてＨＳＶ−２プロテアーゼまたはその機能的フラグメントをＨＳＶ−２プロテアーゼ基質と接触させ、ｂ）該基質に対する蛋白分解的開裂のレベルを検出し、次いで、ｃ）そのレベルを、試験化合物の不存在下においてＨＳＶ−２プロテアーゼまたはその機能的フラグメントをＨＳＶ−２プロテアーゼ基質と接触させた場合の蛋白分解活性のレベルと比較するからなる、ＨＳＶ−２プロテアーゼ活性を阻害する化合物を同定する方法。１８．以下の工程ａ）〜ｃ）：ａ）試験化合物の存在下においてＨＳＶ−２カプシド蛋白の少なくとも一部からなる２種またはそれ以上の蛋白を接触させ、ｂ）カプシド−カプシド会合のレベルを検出し、次いで、ｃ）該カプシド−カプシド会合のレベルを、試験化合物の不存在下においてＨＳＶ−２カプシド蛋白の少なくとも一部からなる２種またはそれ以上の蛋白を接触させた場合のカプシド−カプシド会合のレベルと比較するからなる、ＨＳＶ−２ウイルス粒子のアッセンブリーを阻害する化合物を同定する方法。１９．式Ｒ₁−配列番号：３−Ｒ₂またはＲ₁−配列番号：４−Ｒ₂を有する合成ＨＳＶ−２プロテアーゼ基質。２０．配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号: ７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号: １２、配列番号：１３、配列番号：１４および配列番号：１５からなる群より選択される請求項１９の合成ＨＳＶ−２プロテアーゼ基質。２１．プロセッシングされていないＨＳＶ−２プロテアーゼに選択的に結合する抗体であって、プロセッシングされたＨＳＶ−２基質に結合しえない抗体。２２．以下の工程ａ）、ｂ）：ａ）ＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅しないプライマーを用いて試料中のＤＮＡを増幅し、さらに／あるいはＨＳＶ−２ＤＮＡを増幅するがＨＳＶ−１ＤＮＡを増幅しないプライマーを用いて試料中のＤＮＡを増幅し、次いで、ｂ）増幅されたＤＮＡの存在を検出するからなる、ＨＳＶ−１ＤＮＡとＨＳＶ−２ＤＮＡとを識別する方法。２３．ＨＳＶ−１ＤＮＡの増幅に使用することができるがＨＳＶ−２ＤＮＡの増幅には使用することができないヌクレオチド配列からなるか、またはＨＳＶ−２ＤＮＡの増幅に使用することができるがＨＳＶ−１ＤＮＡの増幅には使用することができないヌクレオチド配列からなるＰＣＲプライマーのセット。２４．請求項２３のプライマーのセットの入った容器およびＤＮＡサイズマーカー分子の入った容器よりなる、ＨＳＶ−１ＤＮＡとＨＳＶ−２ＤＮＡとを識別するためのキット。２５．以下の工程ａ）、ｂ）：ａ）選択的にＨＳＶ−１蛋白に結合しうるがＨＳＶ−２蛋白には結合しえない抗体を用いてイムノアッセイを行い、さらに／あるいは選択的にＨＳＶ−２蛋白に結合しうるがＨＳＶ−１蛋白には結合しえない抗体を用いてイムノアッセイを行い、次いで、ｂ）結合抗体の存在を検出するからなる、ＨＳＶ−１蛋白とＨＳＶ−２蛋白とを識別する方法。２６．選択的にＨＳＶ−２蛋白に結合しうるがＨＳＶ−１蛋白には結合しえない抗体および選択的にＨＳＶ−１蛋白に結合しうるがＨＳＶ−２蛋白には結合しえない抗体。２７．請求項２６の抗体の入った容器、および／または選択的にＨＳＶ−１蛋白に結合しうるがＨＳＶ−２蛋白には結合しえない抗体もしくは／ならびに選択的にＨＳＶ−２蛋白に結合しうるがＨＳＶ−１蛋白には結合しえない抗体の入った容器よりなる、ＨＳＶ−１蛋白とＨＳＶ−２蛋白とを識別するためのキット。２８．請求項１７の方法により同定されるＨＳＶ−２プロテアーゼ阻害化合物。２９．請求項１８の方法により同定されるＨＳＶ−２ウイルス粒子のアッセンブリーを阻害する化合物。