JP6055776B2 - 単純ヘルペスウイルス2型に対するワクチン:免疫応答を誘発する組成物及び方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2010年11月24日に出願された米国仮特許出願第61/417,089号明細書に対する優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する:
(項目1)
薬学的に許容可能な担体、配列番号136又はその免疫原性断片からなる第1のポリペプチド、並びに配列番号1、2、4、5、13、138及び139、又はその免疫原性断片の1つからなる第2のポリペプチドを含むワクチン製剤。
(項目2)
上記第2のポリペプチドが、配列番号4及び5、又はその免疫原性断片の1つからなる、項目1に記載のワクチン製剤。
(項目3)
配列番号2又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目2に記載のワクチン製剤。
(項目4)
配列番号13又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目2に記載のワクチン製剤。
(項目5)
配列番号138又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目2に記載のワクチン製剤。
(項目6)
配列番号139又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目2に記載のワクチン製剤。
(項目7)
配列番号2、13、138及び139、又はその免疫原性断片から選択される少なくとも2つのポリペプチドをさらに含む、項目2に記載のワクチン製剤。
(項目8)
配列番号2及び配列番号13、又はその免疫原性断片をさらに含む、項目7に記載のワクチン製剤。
(項目9)
上記第2のポリペプチドが、配列番号1、2、13、138及び139、又はその免疫原性断片の1つからなる項目1に記載のワクチン製剤。
(項目10)
配列番号4及び5、又はその免疫原性断片の1つからなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目9に記載のワクチン製剤。
(項目11)
上記第2のポリペプチドが、配列番号1若しくは4、又はその免疫原性断片の1つからなる項目1に記載のワクチン製剤。
(項目12)
上記第2のポリペプチドが、配列番号4又はその免疫原性断片からなる、項目1に記載のワクチン製剤。
(項目13)
薬学的に許容可能な担体、配列番号138及び139、又はその免疫原性断片の1つからなる第1のポリペプチド、並びに配列番号3、4、5及び136、又はその免疫原性断片の1つからなる第2のポリペプチドを含むワクチン製剤。
(項目14)
上記第2のポリペプチドが、配列番号3及び136、又はその免疫原性断片の1つからなる、項目13に記載のワクチン製剤。
(項目15)
配列番号4及び5、又はその免疫原性断片の1つからなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目13又は14に記載のワクチン製剤。
(項目16)
上記第2のポリペプチドが、配列番号4及び5、又はその免疫原性断片の1つからなる、項目13に記載のワクチン製剤。
(項目17)
配列番号3及び136、又はその免疫原性断片の1つからなる第3のポリペプチドをさらに含む、項目13又は16に記載のワクチン製剤。
(項目18)
キラヤ(Quillaja)サポニンの1つ以上の精製画分を含むアジュバントをさらに含む、項目1〜17のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目19)
薬学的に許容可能な担体及び配列番号136又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
(項目20)
上記断片が、少なくとも18アミノ酸残基がN末端から除去された配列番号19の切断された断片である、項目19に記載のワクチン製剤。
(項目21)
上記アミノ酸残基が、シグナル配列に対応する、項目20に記載のワクチン製剤。
(項目22)
薬学的に許容可能な担体及び配列番号138又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
(項目23)
上記断片が、残基391〜544からの少なくとも50残基が欠失しており、残基786〜821からの少なくとも25残基が欠失している配列番号1の切断された断片である、項目13に記載のワクチン製剤。
(項目24)
薬学的に許容可能な担体及び配列番号139又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
(項目25)
上記断片が、残基391〜508からの少なくとも25残基が欠失しており、残基786〜864からの少なくとも25残基が欠失している配列番号1の切断された断片である、項目15に記載のワクチン製剤。
(項目26)
少なくとも1つのポリペプチドが、免疫原性担体にコンジュゲートしている、項目1〜25のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目27)
薬学的に許容可能な担体及び配列番号1、3、5、38、若しくは138、又はその免疫原性断片を有するポリペプチドの少なくとも1つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含むワクチン製剤。
(項目28)
上記ヌクレオチド配列が、配列番号39、46、118、若しくは140、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも1つを含む、項目27に記載のワクチン製剤。
(項目29)
上記ヌクレオチド配列が、完全長ポリペプチドをコードする、項目27に記載のワクチン製剤。
(項目30)
上記核酸が、DNAである、項目27又は29に記載のワクチン製剤。
(項目31)
上記核酸が、プラスミドの一部である、項目27〜30のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目32)
アジュバントをさらに含む、項目1〜17及び19〜31のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目33)
上記アジュバントが、キラヤ(Quillaja)サポニンの1つ以上の精製画分である、項目32に記載のワクチン製剤。
(項目34)
上記アジュバントが、サポニン画分A及びサポニン画分Cを含む、項目18又は33に記載のワクチン製剤。
(項目35)
上記アジュバントが、コレステロール、ホスファチジルコリン、サポニン画分A及びサポニン画分Cを含む、項目34に記載のワクチン製剤。
(項目36)
上記アジュバントが、粒子の形態である、項目35に記載のワクチン製剤。
(項目37)
サポニン画分Aを含む粒子が、サポニン画分Cを実質的に含まず、サポニン画分Cを含む粒子が、サポニン画分Aを実質的に含まない、項目36に記載のワクチン製剤。
(項目38)
5〜200μgの各ポリペプチド及び5〜200μgの上記アジュバントを含む、項目18及び32〜37のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目39)
上記ポリペプチドが、タグをさらに含む融合タンパク質である、項目1〜26のいずれか一項に記載の製剤のワクチン。
(項目40)
対象におけるHSV−2による感染を阻害する、項目1〜39のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目41)
対象におけるHSV−2感染を治療する、項目1〜39のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目42)
対象におけるHSV−2の症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目1〜39のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目43)
ヘルペス性病変の数を低減する、項目42に記載のワクチン製剤。
(項目44)
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、項目42に記載のワクチン製剤。
(項目45)
1つ以上のHSV−2抗原に対するIgG力価を増加させる、項目42に記載のワクチン製剤。
(項目46)
1つ以上のHSV−2抗原に対するT細胞応答を増加させる、項目42に記載のワクチン製剤。
(項目47)
HSV−2感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、項目40に記載のワクチン製剤。
(項目48)
対象における3回以下の用量においてHSV−2の症状の発症を阻害し、又はHSV−2による感染を阻害する、項目1〜39のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
(項目49)
対象におけるHSV−2感染を阻害する方法であって、有効量の項目1〜39のいずれか一項に記載のワクチン製剤を投与することを含む方法。
(項目50)
3回用量レジメン後に対象におけるHSV−2感染を阻害する、項目49に記載の方法。
(項目51)
上記対象が、ヒトである、項目49に記載の方法。
(項目52)
上記対象が、事前にHSV−2により感染していない、項目49に記載の方法。
(項目53)
対象におけるHSV−2感染を治療する方法であって、有効量の項目1〜25のいずれか一項に記載のワクチン製剤を投与することを含む方法。
(項目54)
HSV−2症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目53に記載の方法。
(項目55)
ヘルペス性病変の数を低減する、項目54に記載の方法。
(項目56)
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、項目55に記載の方法。
(項目57)
1つ以上のHSV−2抗原に対するIgG力価を増加させる、項目53又は54に記載の方法。
(項目58)
1つ以上のHSV−2抗原に対するT細胞応答を増加させる、項目53又は54に記載の方法。
(項目59)
HSV−2感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、項目53又は54に記載の方法。
(項目60)
3回用量レジメン後に対象におけるHSV−2症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目53又は54に記載の方法。
(項目61)
上記対象が、ヒトである、項目53に記載の方法。
(項目62)
上記対象が、事前にHSV−2により感染していない、項目53に記載の方法。
表1及び/又は表2に示される免疫原性ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、医薬組成物において使用することができる。本発明は、免疫原性ポリペプチド又はこれらの免疫原性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを薬学的担体と一緒に含有する医薬組成物を提供する。HSV−2からの抗原は、HSV−2に曝露された又は感染した患者からの免疫細胞をスクリーニングすることにより同定することができる。簡単に述べると、HSV−2抗原のライブラリーを細菌により発現させ、APCと混合した。次いで、APCが、HSV−2由来ポリペプチドをプロセシングして、HSV−2に曝露された又は感染したヒト患者から単離されたリンパ球に提示した。患者は、いくつかの集団:(1)HSV−2に曝露されたが感染について血清反応陰性、(2)HSV−2に感染したが無症状、(3)HSV−2に感染し、低頻度の発症を罹患する、(4)HSV−2に感染し、高頻度の発症を罹患する、(5)未感作及び(6)HSV−2について血清反応陰性(HSV−2−)であるが、HSV−1について血清反応陽性(HSV−1+)、に属した。各集団からのリンパ球応答を、HSV−2由来ポリペプチドに対する反応性について比較し、スクリーニングにより、ある患者集団において他の患者集団と比較して高頻度で反応性リンパ球を誘導する抗原を検出した。感染したが無症状である患者及び曝露されたが血清反応陰性である患者は、高頻度の発症を罹患する患者が活性化しない防御免疫応答を活性化することができ;特に、曝露されたが血清反応陰性である患者は、HSV−2感染に対する殺菌免疫を開始したと推測される。ポリペプチドの固有の組が、これらの患者集団からのリンパ球を活性化すると考えられる。したがって、本発明は、感染したが無症状である患者又は曝露されたが血清反応陰性である患者のリンパ球を活性化する特定のHSV−2ポリペプチドの組成物、又はHSV−2による感染を阻害若しくは妨げるこれらのポリペプチドの組み合わせも企図する。
ある実施形態において、1つ以上、例えば、2、3、4つまたはそれを超える数の免疫原性断片又はその変異体が、混合物において提供される。例えば、ワクチン製剤は、配列番号1〜26、136、138又は139のいずれか1つ以上を含み得る。
RS1は、基本転写機構の特定の成分と相互作用し、その成分をウイルスプロモーターに動員し、転写開始のために形成を安定させ得る転写トランス活性化因子であるICP4をコードする。ICP4は、トランス活性化/リン酸化(配列番号1のアミノ酸残基150〜200にほぼ及ぶ)、DNA結合(配列番号1の残基380〜540にほぼ及ぶ)、核局在(配列番号1の残基630〜730にほぼ及ぶ)、及び後期調節性トランス活性化(配列番号1の残基1220〜1319にほぼ及ぶ)の区別されるドメインを含有する。RS1のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)でのRS1の検索により見出すことができる。
RS1.2は、ICP4.2と示されるICP4の391のアミノ酸断片をコードする。RS1.2のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)でのRS1の検索により見出すことができる。
GLAHVAAAV (配列番号47)
FISGSVARA (配列番号48)
QYALITRLL (配列番号49)
RYDRAQKGF (配列番号50)
GYAMAAGRF (配列番号51)
PPHADAPRL (配列番号52)
KPAAAAAPL (配列番号53)
SEAAVAAV (配列番号54)
FGWGLAHV (配列番号55)
YALITRLLY (配列番号56)
ALPRSPRLL (配列番号57)
DLLFQNQSL (配列番号58)
ADLLFQNQS (配列番号59)
ARNSSSFIS (配列番号60)
QACFRISGA (配列番号61)
FVRDALVLM (配列番号62)
FDGDLAAVP (配列番号63)
GLGDSRPGL (配列番号64)
WAPELGDAA (配列番号65)
ECLAACRGI (配列番号66)
RAWLRELRF (配列番号67)
UL1は、ウイルス及び細胞膜の融合に要求され、ウイルスの宿主細胞への侵入を可能にするヘテロ二量体糖タンパク質である糖タンパク質L−2(gL2)をコードする。UL1のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(ww.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)での検索により見出すことができる。
AYLVNPFLF (配列番号100)
PFLFAAGFL (配列番号101)
TEYVLRSVI (配列番号102)
GSQATEYVL (配列番号103)
RIDGIFLRY (配列番号104)
FLEDLSHSV (配列番号105)
YVLRSVIAK (配列番号106)
YVLRSVIAK (配列番号107)
AYLVNPFLF (配列番号108)
ETTTRRALY (配列番号109)
RIDGIFLRY (配列番号110)
YLVNPFLFA (配列番号111)
FVCLFGLVV (配列番号112)
LYKEIRDAL (配列番号113)
GLDTFLWDR (配列番号114)
RVSPTRGRR (配列番号115)
YVLRSVIAK (配列番号115)
GLDTFLWDR (配列番号116)
DILRVPCMR (配列番号117)
DRHAQRAYL (配列番号118)
US6は、宿主細胞侵入受容体に結合して、ウイルスと宿主膜との融合を引き起こし得るエンベロープ糖タンパク質であるエンベロープ糖タンパク質D−2(gD2)をコードする。gD2タンパク質は、成熟タンパク質から開裂されたシグナルドメイン(アミノ酸残基1〜25)、及び膜貫通ドメイン(アミノ酸残基340〜363にほぼ及ぶ)を含む、いくつかの区別されるドメインを有する。US6のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)での検索により見出すことができる。
ALAGSTLAV (配列番号68)
LLEDPAGTV (配列番号69)
VIGGIAFWV (配列番号70)
TVYYAVLER (配列番号71)
KYALADPSL (配列番号72)
AFETAGTYL (配列番号73)
APSNPGLII (配列番号74)
IPITVYYAV (配列番号75)
APPSHQPLF (配列番号76)
FLMHAPAFE (配列番号77)
FSAVSEDNL (配列番号78)
VYYAVLER (配列番号79)
IGMLPRFI (配列番号80)
YTECPYNKS (配列番号81)
FLMHAPAFE (配列番号82)
NLGFLMHAP (配列番号83)
VIGGIAFWV (配列番号84)
GIAFWVRRR (配列番号85)
SEDNLGFLM (配列番号86)
RTQPRWSYY (配列番号87)
IAFWVRRRA (配列番号88)
LVIGGIAFW (配列番号89)
FWVRRRAQM (配列番号90)
PYTSTLLPP (配列番号91)
VGTAALLVV (配列番号92)
TAALLVVAV (配列番号93)
TSTLLPPEL (配列番号94)
GTVSSQIPP (配列番号95)
TAGTYLRLV (配列番号96)
GVTVDSIGM (配列番号97)
AFWVRRRAQ (配列番号98)
RVYHIQPSL (配列番号99)
RS1.5は、ICP4.5と示されるICP4の残基775〜1318に対応する544のアミノ酸断片をコードする。RS1.5のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)でのRS1の検索により見出すことができる。
RS1.9は、ICP4.9と示されるICP4の残基391〜544及び残基786〜821の二重内部欠失を担持するICP4の1130のアミノ酸断片をコードする。RS1.10は、ICP4.10と示されるICP4の残基391〜508及び残基786〜821の二重内部欠失を担持するICP4の1166のアミノ酸断片をコードする。RS1.9及びRS1.10のDNA及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス2型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Entrez Gene(www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のNCBI NIHのウェブサイト上)でのRS1の検索により見出すことができる。
典型的には、本明細書に記載のワクチン製剤又は医薬組成物中に存在するポリペプチドは、単独で、又は変異体として免疫原性であり、この変異体は、別のポリペプチドに融合したポリペプチド、又はアジュバントと混合された若しくは複合体形成したポリペプチドを含む。変異体は、本明細書に記載のとおり、配列同一性が100%未満の配列も含む。加えて、適切な免疫原性を有する断片、前駆体、及び類似体を使用することができる。
ある実施形態において、ワクチン及び医薬組成物は、上記のポリペプチド及び核酸の1つ以上並びに以下の1つ以上:アジュバント、安定剤、緩衝剤、界面活性剤、制御放出成分、塩、保存剤、及び前記抗原に特異的な抗体を含む。
本明細書に記載のワクチン製剤及び医薬組成物はそれぞれ、アジュバントを含み得る。アジュバントは、その主な作用機序に基づいて2つのクラス:ワクチン送達系及び免疫賦活性アジュバント(例えば、Singh et al.,Curr.HIV Res.,1:309−20,2003を参照されたい)に大きく分けられる。ワクチン送達系は、粒子状製剤、例えば、エマルジョン、マイクロ粒子、例えば粒子及び/又はマトリックスであり得る免疫刺激複合体(ISCOM)、及びリポソームの場合が多い。対照的に、免疫賦活性アジュバントは、病原体に由来することもあり、先天性免疫系の細胞を活性化させる病原体関連分子パターン(PAMP)、例えば、リポ多糖(LPS)、モノホスホリルリピッド(MPL)、又はCpG含有DNAを表し得る。
上記の抗原及びアジュバントに加えて、ワクチン製剤又は医薬組成物は、1つ以上の追加の成分を含み得る。
ある態様において、ワクチンは、本明細書に開示される核酸の1つ以上を含む。核酸ワクチンが患者に投与されると、対応する遺伝子産物(例えば、所望の抗原)が患者の体内で産生される。一部の実施形態において、最適化された組換えポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンベクターを哺乳動物(ヒトを含む)に送達して、治療又は予防免疫応答を誘導することができる。核酸は、例えば、DNA、RNA、又は合成核酸であり得る。核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得る。
本明細書に記載のワクチンは、HSV−1及び特にHSV−2を含むヘルペスの予防及び/又は治療処置に使用することができる。ワクチン接種を受ける対象は、男性又は女性であり得、子供又は成人であり得る。一部の実施形態において、治療される対象はヒトである。他の実施形態において、対象は、非ヒト動物である。
予防的実施形態において、HSV−2ワクチンを、HSV−2の確立に対する保護に役立ち得る免疫応答を誘導するために対象に投与する。
治療的適用において、本発明のポリペプチド又は核酸を含むワクチンを、HSV−2に罹患している患者に患者の治療に十分な量投与することができる。患者の治療は、この場合、感染した個体におけるHSV−2の症状を遅延させる、又は軽減することを指し得る。一部の実施形態において、患者の治療は、病変の期間を低減すること、病変の数を低減すること、エピソード当たりの症状の期間を低減すること、及び/又はそうでなければエピソード当たりの発症における症状の強さを低減することを指す。ある実施形態において、ワクチンは、軽度の症状の期間又は重症度を低減し;一部の実施形態において、ワクチンは、重度の症状の期間又は重症度を低減する。一部の実施形態において、ワクチンは、ウイルス排出を低減し、これによりワクチン接種された患者からのHSV−2の伝染性を低減する。ある実施形態において、上記の低減は、少なくとも25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、又はさらには90%である。ある実施形態において、上記の低減は、症状、ウイルス排出、及び/又は将来的発症の完全な停止を含む(例えば、知覚神経節中の潜伏を確立するウイルスの能力を阻害することにより)。
本明細書に開示されるワクチンによるワクチン接種の効力を多数の手法で決定することができる。
HSV感染に対する防御
本開示の医薬組成物は、HSV−2に対して免疫応答を誘発するように設計される。本明細書に記載の組成物は、これらの組成物が投与される対象において、先天性免疫応答、抗体応答若しくは細胞性免疫応答、又はこれらの応答の組み合わせを刺激し得る。一部の実施形態において、本組成物は、免疫細胞、例えば好中球、マクロファージ、及びNK細胞を、感染の末梢部位又は知覚神経節において刺激する。本組成物は、マクロファージによる浸潤;好中球による抗ウイルス化合物、例えば一酸化窒素、TNF−α、インターフェロン(IFN)、及びインターロイキン12(IL−12)の産生;並びに/又はIFN−γを産生するためのNK細胞の刺激を刺激し得る。IL−2、IFN−α及びIFN−βの産生は、本組成物のポリペプチドにより引き起こすこともでき、感染の制御を支援すると考えられる。
本出願は、患者におけるHSV−2の検出のための、とりわけ迅速、安価、高感度な特殊な方法を提供する。これに関連して、病院及び医師が、HSV−2に感染している、又は感染のリスクのある患者を検査及び治療することが有用なはずである。本明細書において使用される「患者」は、HSV−2に感染しているか、又はHSV−2感染に罹患する可能性を有する個体(例えば、ヒト)を指す。
本質的にあらゆる個体は、HSV−2による感染のあるリスクを有する。しかしながら、ある下位集団は感染リスクが増加している。一部の実施形態において、HSV−2についての組成物を受ける患者は、免疫不全である。
投与量及びタイミング
各ワクチン用量における抗原の量は、単回投与で、又は複数回投与にわたり上記の予防又は治療応答を誘導する有効量として選択される。好ましくは、この用量は、典型的なワクチン接種において有意な有害副作用を有さない。このような量は、どの特異的抗原が用いられるかに応じて変動する。一般に、用量は、1〜1000μg、一部の場合において、2〜100μg、例えば、4〜40μgのタンパク質を含むことが予想される。あるいは、用量は、10〜6000μg、一部の場合において、20〜4000μg、例えば30〜4000μgの核酸を含む。特定のワクチンの最適量は、抗体力価、T細胞の活性化レベル、及び対象における他の応答の観察を含む標準的試験により確定することができる。一部の実施形態において、送達すべき抗原の適切量は、対象の年齢、体重、及び健康状態(例えば、免疫不全状態)に依存する。アジュバントは、存在する場合、典型的には、用量当たり1μg〜250μg、例えば、50〜150μg、75〜125μg又は100μgの量で存在する。
本明細書におけるワクチン製剤及び医薬組成物は、個体への投与、典型的には、全身投与(例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、経皮、真皮下、頭蓋内、鼻腔内、経粘膜、経肛門、経膣、経口、舌下、バッカル経路、若しくはそれらを吸引させることができる)により送達することができ、又はそれらを局所適用により投与することができる。
ワクチン製剤は、ヒト患者への投与に好適であり得、ワクチン調製物は、USFDAのガイドラインに適合し得る。一部の実施形態において、ワクチン製剤は、非ヒト動物への投与に好適である。一部の実施形態において、ワクチンは、エンドトキシンもエキソトキシンも実質的に含まない。エンドトキシンには、パイロジェン、例えばリポ多糖(LPS)分子が含まれる。ワクチンは、不活性なタンパク質断片も実質的に含み得ない。一部の実施形態において、ワクチンは、工業用水、水道水、又は蒸留水よりも低いレベルのパイロジェンを有する。他のワクチン成分を、当該技術分野において公知の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、限外ろ過、又は蒸留を使用して精製することができる。他の実施形態において、パイロジェンは、患者に投与する前に不活化又は破壊することができる。ワクチンの原料、例えば、水、緩衝剤、塩及び他の化学物質を、スクリーニング及びパイロジェン除去することもできる。ワクチン中のすべての材料を滅菌し、ワクチンの各ロットを滅菌性について試験することができる。したがって、ある実施形態において、ワクチン中のエンドトキシンのレベルが、USFDAにより設定されたレベル、例えば、くも膜下注射組成物については製品1kg当たり0.2エンドトキシン(EU)、非くも膜下注射組成物については製品1kg当たり5EU、滅菌水については1mL当たり0.25〜0.5EU未満になる。
本明細書に記載のHSV−2ワクチンは、様々な技術を使用して生産することができる。例えば、ポリペプチドを、組換えDNA技術を使用して好適な宿主細胞中で産生させることができる。好適な宿主細胞は、細菌、酵母、哺乳動物、又は他の種類の細胞であり得る。宿主細胞は、関連ポリペプチド遺伝子の1つの外因性コピーを発現するように改変することができる。典型的には、遺伝子は、適切な調節配列、例えば強いプロモーター及びポリアデニル化配列に作動可能に連結される。一部の実施形態において、プロモーターは、誘導性又は抑制性である。他の調節配列は、ポリペプチドをどのように精製したいかに応じて、目的のポリペプチドの分泌若しくは排出又は細胞質若しくは膜中での目的のポリペプチドの保持を提供し得る。遺伝子は、染色体外プラスミド上に存在し得、又は宿主ゲノム中に統合することができる。当業者は、天然配列と100%同一の核酸を使用する必要はないことを認識する。むしろ、これらの配列に対していくぶんの改変は認容され、望ましいことがある。例えば、核酸を変更して、コードされたポリペプチドが同一のままであるように遺伝子コードの縮重を利用することができる。一部の実施形態において、遺伝子は、特定の宿主中での発現を改善するためにコドン最適化される。核酸は、例えば、PCR又は化学合成により生成することができる。
HSV−2抗原の同定
HSV−2ポリペプチドのライブラリー(HSV−2G株、ロット番号7C0013、Advanced Biotechnologies Inc,Maryland)を用意し、ヒトドナーからの末梢血単核細胞(PBMC)によりスクリーニングした。簡単に述べると、HSVポリペプチドのライブラリーを細菌により発現させ、APCと混合した。次いで、APCが、HSV−2に感染したヒト患者から単離されたリンパ球にHSV由来ペプチドを提示した。患者は、下記のとおり、いくつかの集団に属した。各集団からのリンパ球応答を、発現された各タンパク質に対する反応性について比較し、スクリーニングにより、他の患者集団と比較してある患者集団において高頻度で反応性リンパ球を誘導する抗原を検出した。感染したが無症状の患者及び曝露されたが血清反応陰性の患者は、高頻度の発症を罹患する患者が活性化しない防御免疫応答を活性化することができ;特に、曝露されたが血清反応陰性の患者は、HSV−2感染に対して殺菌免疫を開始したと推測される。ポリペプチドの固有の組が、これらの患者集団からのリンパ球を活性化すると考えられる。
リンパ球を、いくつかの集団:感染したが無症状(n=40)、曝露されたが血清反応陰性(n=40)、1年当たり4回以上の発症を罹患する高頻度再発者(n=43)、1年当たり4回未満の発症を罹患する低頻度再発者(n=19)、未感作(n=10)、及びHSV−2−/HSV−1+(n=10)に属する患者から単離した。表3は、再発者コホート(高頻度及び低頻度再発者の組み合わせ)と比較した、曝露された患者コホートにおけるUL10、UL19、UL40、US4、US6、RS1(RS1.1、RS1.2、RS1.3)、UL36(UL36.3、UL36.4、UL36.5)、UL32、及びRL2によりコードされる13のHSV−2抗原についての頻度分析を示す。
リンパ球を、いくつかの集団:感染したが無症状(n=40)、曝露されたが血清反応陰性(n=40)、1年に4回以上の発症を罹患する高頻度再発者(n=43)、1年に4回未満の発症を罹患する低頻度再発者(n=19)、未感作(n=10)、及びHSV−2−/HSV−1+(n=10)に属する患者から単離した。
リンパ球を、いくつかの集団:感染したが無症状(n=40)、曝露されたが血清反応陰性(n=40)、1年当たり4回以上の発症を罹患する高頻度再発者(n=43)、1年当たり4回未満の発症を罹患する低頻度再発者(n=19)、未感作(n=10)、及びHSV−2−/HSV−1+(n=10)に属する患者から単離した。
インビボデータ:タンパク質抗原免疫化
モルモット治療ワクチン接種プロトコル[プロトコルA]
雌Hartleyモルモットを、5×105pfuにおいてHSV−2株MSにより膣内誘発して生殖管感染を確立した。動物を、感染後第1日目に膣スワブにより感染をモニタリングし、感染後3から14日目に急性疾患についてモニタリングした。14日目に、原発性疾患の消散後、動物を12の群に無作為化し、抗原(15μg用量における各HSV−2ポリペプチド)とアジュバント(50μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの91:9の混合物)により皮下免疫化した。各群は、感染後14、21、及び35日目に合計3回のワクチン接種を受けた。生殖器スワブをワクチン接種期間中に回収してウイルス排出をモニタリングし、毎日観察を記録した。症状を、重症度に基づいた0〜4のスコア:0=無症状;1=赤み又は腫れ;2=少数の小水疱;3=いくつかの大水疱;4=浸軟を伴ういくつかの大水疱、でスコアを付けた。加えて、症状が上記のスコア間の重症度の中間の病変を有する動物には、0.5、1.5、2.5、又は3.5のスコアを付けた。
例示的試験の結果を以下の表6〜表10に示す。中和抗体力価を、各群の12〜20匹の動物のうちの4匹の平均を使用して、感染後41日目及び第3の免疫化の7日後に決定した。平均再発病変スコア及び平均病変日数をそれぞれ、感染後15日目から63日目又は70日目に決定した。病変スコアは、15日目から60日目の各群についての合計病変を表し、次いで平均を計算した。平均病変日数は、免疫化又は非免疫化動物にヘルペス性病変が現れるまでの感染後の平均日数を表す。膣スワブ試料を、感染後20〜63日目の間の12日間にすべての動物から回収し、量的リアルタイムPCRによるウイルス排出力価についてのアッセイまで−80℃において保存した。
0日目及び9日目に、6〜8週齢の雌C57BL/6マウスを、抗原(HSV−2ポリペプチド)とアジュバント(12μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの82:18の混合物)により皮下免疫化した。11日目に、発情周期をデポ・プロベラ(Depo Provera)により同期させ、次いで16日目に、マウスに、麻酔下でLD50の10倍量のHSV−2株333を膣内付着を介して誘発した。すべての動物を、罹患率(臨床スコア)及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、膣スワブを感染後17日目から28日目の間に回収した。臨床スコアを、以下のスケール:0=無症状、1=膣紅斑、2=膣紅斑及び浮腫、3=膣ヘルペス性病変、4=片側性麻痺又は重度の陰部潰瘍、及び5=両側性麻痺又は死亡、を使用して記録した。
実験群において、0日目及び9日目に、マウスを、5μg又は10μgの抗原とアジュバント(12μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの82:18の混合物)により皮下免疫化した。対照動物は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)のみ又はアジュバントのみを受けた。
実験群において、0日目及び21日目にC57BL/6マウスを、5μg又は10μgの抗原とアジュバント(24μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの91:9の混合物)により皮下免疫化した。対照マウスはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)のみ、又はアジュバントのみを受けた。動物に、最後の免疫化から7日後に104PFUのHSV−2株333を膣内誘発した。一部の場合において、未誘発動物のサブセットを免疫原性実験についての誘発の日に安楽死させてワクチンに対するT細胞及び抗体応答をモニタリングする。すべての誘発した動物を、罹患率(臨床スコア)及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、ウイルス排出評価のための膣スワブを上記のとおり感染後17から28日目の間に回収した。臨床スコアを記録し、マウスの実験群及び対照群にわたり比較する。
250〜350グラム(体重)の雌Hartleyモルモットに、0日目及び14〜21日目に、15μgの抗原とアジュバント(50μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの91:9の混合物)により皮下免疫化した。ブースト2〜3週間後に足指爪クリップにより血清を回収し、次いでモルモットを、膣内付着を介して5×105PFUのHSV−2株MSにより誘発した。膣スワブ試料を、30及び32日目にすべての動物から回収し、定量リアルタイムPCRによるウイルス力価についてのアッセイまで−80℃において保存した。モルモットは、毎日(1〜14日目)評価し、原発性性器皮膚疾患を、1〜4の病変重症度スコアスケールを使用して定量した。数字スコアを、以下のとおり特定の疾患徴候に割り当てた:0、無疾患;1、赤み又は腫れ;2、少数の小水疱;3、いくつかの大水疱;4、浸軟を伴ういくつかの大水疱。試験の最後において、モルモットを安楽死させ、後根神経節(DRG)を摘出し、それらを定量リアルタイムPCR分析のために処理するまで−80℃において保存した。
マウスを、生理食塩水中の5μgの抗原とアジュバント(12μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCが82:18の混合物)を100μlにより、首筋に注射して皮下免疫化した。マウスは、1又は2回、7日間隔で注射を受けた。注射の免疫原性の分析を、最後の注射から7日後に行った。
免疫原性アッセイIは、ICP4.2を用いた1回及び2回の注射レジメンの両方についてロバストな免疫原性応答を示した。1回の注射レジメンについて、200000個のT細胞当たりのIFN−γスポットの数は、CD4+及びCD8+細胞のそれぞれで8及び101であった。2回の注射レジメンについて、スポットの数はそれぞれ50及び70であった。対照的に、15未満のスポットが、培地又はアジュバント単独についてCD4+又はCD8+細胞中で観察された。
免疫原性アッセイIの例示的結果を、図1A及びBに示す。ロバストなCD4+及びCD8+T細胞応答が、完全長gD2及びgD2ΔTMRの両方について得られた。対照的に、膜貫通ドメインのすぐ上流で切断されたgD2抗原(図1に306tとして示される)による免疫化は、有意に低減した応答をもたらした。
HSV−2orfeomeライブラリーからの組換え大腸菌(E.coli)を、gL2又はICP4タンパク質の断片(ICP4.2、並びにRS1.1、RS1.3.1及びRS1.3.2によりコードされるポリペプチド)を発現するように誘導した。タンパク質は、細菌細胞内で保持される。次いで、細菌をPFAにより固定し、PBSにより広範囲に洗浄し、免疫化に使用するまで−80℃において保存した。
マウスを、gL2並びにRS1.3.1及びRS1.3.2によりコードされるICP4断片の全配列に及ぶプールされた重複ペプチド(OLP)2μg/マウスにより免疫化した。OLPは、1マウス当たり100μlの総容量にTiterMaxアジュバント(Alexis Biochemical)中で製剤化し、アジュバントは、皮下用量の1/3を占めた。マウスを、0日目に免疫化し、6日目にブーストし、脾臓及び血液を11日目に回収した。単一の細胞懸濁液を脾臓から調製し、赤血球を溶解させた。次いで、脾細胞懸濁液を半分に分割した。初めの半分を、APC、CD4+及びCD8+T細胞に分け;IFN−γELISPOTプレートの1ウェル当たり200000個のT細胞を播種し、100000個のAPC並びに免疫化に対応するOLPプール、無関連ペプチド、陽性及び陰性対照により刺激した。細胞を、プレート中で一晩インキュベートし、その後にプレートを発色させ、ウェルごとにスポットをカウントした。各脾細胞懸濁液の残りの半分を、分けられていない脾細胞(400000個/ウェル)として行い、ペプチドによりパルスし、上記のとおりアッセイした。
例示的試験1.C57BL/6マウスにおけるgD2ΔTMR及びgD2ΔTMRとICP4の免疫原性
精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化してタンパク質抗原に対するCD4+及びCD8+T細胞応答を作製する能力を評価した。簡単に述べると、抗原単独(gD2ΔTMR(5μg))又は抗原の組み合わせ(gD2ΔTMR及びICP4.2(10μg))をアジュバント(12μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの82:18の混合物)と混合し、9日間隔で2回、マウスに皮下投与した。第2の免疫化から7日後に、マウスを安楽死させ、エクスビボIFN−γELISPOTアッセイのために脾臓を摘出した。CD4+及びCD8+T細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、96ウェルプレート中のIFN−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。APCは、特異的又は非特異的精製タンパク質(上記)によりパルスし、x線照射器により照射した未感作脾細胞であった。T細胞及びAPCの共培養から18時間後、捕捉されたIFNγをビオチン化二次IFN−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び3−アミノ−9−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり3匹のマウスの、2×105個のT細胞当たりのIFN−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。図3は、各群当たり3匹のマウスの、2×105個のCD4+又はCD8+T細胞当たりのIFN−γスポット形成単位の数±標準偏差を示す。図3A及びBに示すとおり、CD4+T細胞又はCD8+T細胞当たりのIFN−γスポット形成単位の数は、gD2ΔTMR抗原単独と比較して、ICP4.2と組み合わせたgD2ΔTMR抗原により免疫化されたマウスにおいて増加する。
gD2との組み合わせにおけるICP4.2タンパク質とアジュバントによる免疫化後に防御免疫を引き起こす能力を、致死HSV−2誘発マウスモデルにおいて評価した。簡単に述べると、1群当たり8匹のC57BL/6マウスを、gD2(2μg)若しくはICP4.2(10μg)とアジュバントにより個々に、又は両方の抗原の組み合わせとアジュバントにより免疫化した。製剤を、9日間隔で2回、首筋に皮下投与した。ウイルス感染の5日前に発情周期をデポ・プロベラにより同期させ、二次免疫化の7日後に動物を、LD50の20倍量のHSV−2株333により膣内誘発した。疾患症状を、感染後にスコアを付け、生存動物をモニタリングした。疾患の重症度のスコアは、以下のとおりであった:0=無症状、1=赤み、2=赤み及び腫れ、3=ヘルペス性病変、4=重度の潰瘍又は片側性麻痺、並びに5=両側性麻痺又は死亡。
マウスをgD2ΔTMRとICP4.2抗原の組み合わせにより免疫化し、上記のとおり誘発した。抗原の組み合わせとアジュバントにより免疫化されたマウスは、アジュバントとともにgD2ΔTMRを受けた動物と比較して、ウイルス誘発から10日後の平均疾患スコアが低いことを示した。
抗原とアジュバントによる治療免疫化後の感染モルモットにおけるHSV−2再活性化に影響を及ぼす能力を評価した。簡単に述べると、雌Hartleyモルモットを、5×105pfuのHSV−2株MSにより膣内感染させ、原発性疾患について14日間モニタリングし、次いで免疫化群(N=15)に無作為化した。動物を、抗原(15μg)とアジュバント(50μg)又はアジュバント単独、又はビヒクル対照により感染後14、21、及び35日目の3回皮下免疫化し、局所疾患の重症度について毎日スコアを付けた。スコア付けの体系は、以下のとおりであった:0=無症状、1=赤み、2=単一の病変、3=大きい病変又は融合病変、4=重度の潰瘍又は片側性麻痺、及び5=両側性麻痺又は死亡。
抗原とアジュバントによる治療免疫化後の感染モルモットにおけるHSV−2再活性化に影響を及ぼす能力を評価した。雌Hartleyモルモットに、5×105pfuのHSV−2株MSにより膣内チャレンジして生殖管感染を確立した。動物を、感染後1日目に膣スワブにより感染についてモニタリングし、感染後3から14日目に急性疾患についてモニタリングした。14日目、原発性疾患の消散後、動物を12の群に無作為化し、抗原(15μg用量における各HSV−2ポリペプチド)とアジュバント(50μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの91:9の混合物)により皮下免疫化した。各群は、感染後14、21、及び35日目に合計3回のワクチン接種を受けた。生殖器スワブをワクチン接種期間中に回収してウイルス排出をモニタリングし、毎日観察を記録した。症状を、重症度に基づいた0から4のスケールに基づきスコア付けした:0=無症状;1=赤み又は腫れ;2=少数の小水疱;3=いくつかの大水疱;4=浸軟を伴ういくつかの大水疱。加えて、症状が上記のスコア間の重症度の中間の病変を有する動物には、0.5、1.5、2.5、又は3.5のスコアを付けた。表17は、モルモットが急性疾患から回復した後の各週についての平均再発病変スコアとしてデータを示す。gD2ΔTMR及びICP4.2抗原の組み合わせにより治療されたモルモットは、アジュバントとともに個々の抗原を受けた動物と比較して、最後の免疫化後の平均病変スコアの低減を示した。
精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化して、タンパク質抗原に対する両方の抗体応答並びにCD4+及びCD8+T細胞応答を作製する能力を評価した。簡単に述べると、抗原単独又は抗原の組み合わせをアジュバント(ISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びCの91:9の混合物)と混合し、21日間隔で2回、マウスに皮下投与した。第2の免疫化から7日後、マウスを安楽死させた。血液を回収して上記のダイレクトタンパク質ELISAアッセイにより抗原特異的抗体力価を測定し、エクスビボIFN−γELISPOTアッセイのために脾臓を摘出した。CD4+及びCD8+T細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、96ウェルプレート中のIFN−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。APCは、特異的又は非特異的精製抗原(上記)によりパルスし、x線照射器により照射した未感作脾細胞であった。T細胞及びAPCの共培養から18時間後、捕捉されたIFN−γをビオチン化二次IFN−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び3−アミノ−9−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり3匹のマウスの、2×105個のT細胞当たりのIFN−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。
例示的試験6に記載のとおり、精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化してタンパク質抗原に対する両方の抗体応答並びにCD4+及びCD8+T細胞応答を作製する能力を評価したが、APCを示された精製タンパク質、又は示されたタンパク質を及ぶ重複ペプチドのプールによりパルスした。マウスは、2つの異なる用量におけるgL2s v.2、ICP4.5、2つの異なる用量におけるICP4.9、ICP4.2、又はICP4.5、ICP4.9、及びICP4.2の組み合わせとgL2s v.2を受けた。
インビボデータ:タンパク質抗原とDNA、及びDNAのみを用いたマウス予防ワクチン接種試験
例示的試験1及び2。gL2s v.2タンパク質、pUs6 DNA(gD2をコード)、及びpUL1 DNA(gL2をコード)による免疫化とgL2s v.2タンパク質ブーストは、C57BL/6マウスにおける疾患症状及び死亡率を低減した
これらの試験において、0及び21日目C57BL/6マウスの群を10μgのgL2s v.2タンパク質とアジュバント(24μg用量のISCOMマトリックスとキラヤ(Quillaja)サポニンマトリックスA及びマトリックスCの91:9の混合物)、又はアジュバントとしての50μgのマウスIL−12をコードするDNAプラスミド(pIL−12)と組み合わせた100μgのgD2をコードするDNAプラスミド(pUs6)により筋肉内免疫化した。別の群は、0日目に、プライム免疫化として100μgのgL2をコードするDNAプラスミド(pUL1)及び50μgのpIL−12を受け、21日目にブーストのために10μgのgL2s v.2タンパク質とISCOMアジュバントを受けた。対照動物は、50μgのpIL−12又はISCOMアジュバントのみを受けた。動物を、最後の免疫化から7日後に104PFUのHSV−2株333により膣内誘発した。一部の場合において、未誘発動物のサブセットを免疫原性実験のための誘発の日に安楽死させてワクチンに対するT細胞及び抗体応答をモニタリングした(以下の例示的試験3及び4に記載のとおり)。すべての誘発したマウスを、罹患率(臨床スコア)及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、上記のとおりウイルス排出評価のために膣スワブを上記感染後1から10日目の間に回収した。臨床スコアを記録し、マウスの実験群及び対照群にわたり比較した。
C57BL/6マウスを、上記の例示的試験1及び2に記載のとおり、gD2、ICP4又はgL2をコードするプラスミドDNAにより、IL−12又はgL2s v.2タンパク質をコードするプラスミドDNAとともに、ISCOMを用いて又は用いずに免疫化した。2つの群を、gL2をコードするプラスミドDNA及びIL12をコードするプラスミドDNAによりプライミングし、gL2s v.2タンパク質によりブーストした。加えて、マウスを、gL2s v.2タンパク質及びICP4プラスミドDNAの組み合わせによりIL12プラスミドとともに免疫化した。最後の免疫化から7日後、血液を回収して下記のダイレクトタンパク質ELISAアッセイにより抗原特異的抗体力価を測定し、エクスビボIFN−γELISPOTアッセイのために脾臓を摘出した。CD4+及びCD8+T細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、96ウェルプレート中のIFN−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。APCは、示されたタンパク質に及ぶ重複ペプチドのプールによりパルスし、x線照射器により照射した未感作脾細胞であった。T細胞及びAPCの共培養から18時間後、捕捉されたIFN−γをビオチン化二次IFN−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び3−アミノ−9−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり3匹のマウスの、2×105個のT細胞当たりのIFN−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。
C57BL/6マウスを、上記の例示的試験1及び2において上記のとおり、gL2s v.2タンパク質とアジュバント;pUL1 DNA(gL2をコード);pUL1 DNA(gL2をコード)とgL2s v.2タンパク質とアジュバントブースト;pRS1 DNA(ICP4をコード);pRS1 DNA(ICP4をコード)とpUL1 DNA(gL2をコード);及びpUs6 DNA(gD2をコード)により免疫化した。最後の免疫化から7日後、上記の例示的試験3に記載のとおりエクスビボIFN−γELISPOTアッセイのために脾臓を摘出した。
C57BL/6マウスを、上記の例示的試験1及び2に記載のとおり、ICP4、ICP4.9、gG2をコードするプラスミドDNA又は空のプラスミドにより、マウスIL−12をコードするプラスミドとの組み合わせにおいて免疫化した。次いで、マウスを3つの群に分割した。第1の群のマウスを、それらをプライミングした同一の手法で21日目にブーストした。第2の群のマウスを、21日目にICP4.2タンパク質とISCOMアジュバントによりブーストした。第3の群のマウスを、それらをプライミングした同一の手法で21及び35日目にブーストした。最後の免疫化から7日後、上記例示的試験3に記載のとおりエクスビボIFN−γELISPOTアッセイのために脾臓を摘出した。
配列番号1=ICP4
配列番号2=構築物RS1.2によりコードされるICP内部断片(ICP4.2)
配列番号3=細胞質性gL2
配列番号4=構築物US6ΔTMRによりコードされるgD2内部欠失dD2ΔTMR
配列番号5=US6によりコードされるgD2についての予測配列
配列番号6=RL1によりコードされるICP34.5
配列番号7=RL2によりコードされるICP0
配列番号8=構築物RS1.1によりコードされるICP4内部断片(#1〜400)
配列番号9=構築物RS1.3.1によりコードされるICP4内部断片(#750〜1024)
配列番号10=構築物RS1.3.2によりコードされるICP4内部断片(#1008〜1319)
配列番号11=構築物RS1.3によりコードされるICP4内部断片(#750〜1319)
配列番号12=構築物RS1.4によりコードされるICP4内部断片(#341〜883)
配列番号13=構築物RS1.5によりコードされるICP4内部断片(#775〜1318)
配列番号14=構築物RS1.6によりコードされるICP4内部断片(#210〜1318)
配列番号15=構築物RS1.7によりコードされるICP4内部断片(#391〜544の欠失)
配列番号16=構築物RS1.8によりコードされるICP4内部断片(#786〜868の欠失)
配列番号17=UL2によるウラシルDNAグリコシラーゼについての予測配列
配列番号18=UL11によりコードされるテグメントタンパク質についての予測配列
配列番号19=構築物UL1s v.1によりコードされるgL2分泌v.1
配列番号20=構築物UL19aによりコードされるVP5についての予測配列
配列番号21=構築物UL19ΔTEVによりコードされるVP5
配列番号22=UL36によりコードされるICP1/2についての予測配列
配列番号23=構築物UL36.3.4.1によりコードされるICP1/2内部断片
配列番号24=構築物UL36.4.2.5によりコードされるICP1/2内部断片
配列番号25=UL40によりコードされるレダクターゼについての予測配列
配列番号26=US12によりコードされるICP47
配列番号27=UL10によりコードされるgM2
配列番号28=UL15によりコードされる開裂/パッケージングタンパク質についての予測配列
配列番号29=UL26.5によりコードされるICP35についての予測配列
配列番号30=UL30によりコードされるポリメラーゼについての予測配列
配列番号31=UL5によりコードされるヘリカーゼ/プライマーゼ複合体についての予測配列
配列番号32=UL8によりコードされるヘリカーゼ/プライマーゼ複合体についての予測配列
配列番号33=UL15.5によりコードされる未知タンパク質についての予測配列
配列番号34=UL32によりコードされるパッケージングタンパク質についての予測配列
配列番号35=構築物UL36.4.2によりコードされるICP1/2断片についての予測配列
配列番号36=UL54によりコードされるICP27についての予測配列
配列番号37=UL49.5によりコードされるウイルス粒子タンパク質
配列番号38=US4によりコードされるgG2
配列番号39=RS1
配列番号40=構築物US6ΔTMR
配列番号41=RL1
配列番号42=RL2
配列番号43=構築物UL36.3.4.1
配列番号44=構築物UL36.4.2.5
配列番号45=US12
配列番号46=US4
配列番号117=構築物RS1.2
配列番号118=UL1
配列番号119=構築物UL1s
配列番号120=構築物UL19ΔTEV
配列番号121=構築物RS1.1
配列番号122=構築物RS1.3.1
配列番号123=構築物RS1.3.2
配列番号124=構築物RS1.3
配列番号125=構築物RS1.4
配列番号126=構築物RS1.5
配列番号127=構築物RS1.6
配列番号128=構築物RS1.7
配列番号129=構築物RS1.8
配列番号130=Hisタグ
HHHHHH
配列番号131=タグ
MSYYHHHHHH
配列番号132=分泌シグナル
配列番号133=UL49.5
配列番号134=UL10
配列番号135=UL2によりコードされるウラシルDNAグリコシラーゼ
配列番号136=構築物UL1s v.2によりコードされるgL2分泌v.2
配列番号137=UL1s v.2
配列番号138=構築物RS1.9によりコードされるICP4内部断片(#391−544及び#786−821の欠失)
配列番号139=構築物RS1.10によりコードされるICP4内部断片(#391−508及び#786−821の欠失)
配列番号140=構築物RS1.9
配列番号141=構築物RS1.10
当業者は、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、又はルーチン程度の実験を用いて確認することができるであろう。本発明の範囲は上記の説明に限定されることは意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載されるとおりである。
当業者は、上記が単に本発明の特定の好ましい実施形態を表すに過ぎないことを容易に理解するであろう。以下の特許請求の範囲に記載されるとおりの本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、上記に記載される手順及び組成物に様々な変更及び改良を加えることができる。
Claims (59)
- 薬学的に許容可能な担体、配列番号136に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、または、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸もしくはその両方が欠失している配列番号136のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第1のポリペプチド、並びに配列番号4、13、138及び139のいずれか1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号4、13、138及び139のいずれか1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第2のポリペプチドを含むワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体、配列番号136のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第1のポリペプチド、並びに配列番号2に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号2のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第2のポリペプチドを含むワクチン製剤。
- 前記第2のポリペプチドが、配列番号4に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号4のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項1に記載のワクチン製剤。
- 配列番号2に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項3に記載のワクチン製剤。
- 配列番号13に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項2または3に記載のワクチン製剤。
- 配列番号138に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項2または3に記載のワクチン製剤。
- 配列番号139に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項2または3に記載のワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体、配列番号136に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号136のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第1のポリペプチドを含み、配列番号2、13、138及び139のいずれか2つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号2、13、138及び139のいずれか2つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる少なくとも2つの追加のポリペプチドをさらに含む、ワクチン製剤。
- 前記少なくとも2つの追加のポリペプチドが、配列番号2及び配列番号13に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなる、請求項8に記載のワクチン製剤。
- 前記第2のポリペプチドが、配列番号13、138及び139のいずれか1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなる請求項1に記載のワクチン製剤。
- 配列番号4及び5のいずれか1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号4及び5のいずれか1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項10に記載のワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体、配列番号138及び139のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号138及び139のうちの1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第1のポリペプチド、並びに配列番号3、4、5及び136のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片の1つからなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号3、4、5及び136のうちの1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第2のポリペプチドを含むワクチン製剤。
- 前記第2のポリペプチドが、配列番号3及び136のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項12に記載のワクチン製剤。
- 配列番号4及び5のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号4及び5のうちの1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項12又は13に記載のワクチン製剤。
- 前記第2のポリペプチドが、配列番号4及び5のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号4及び5のうちの1つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項12に記載のワクチン製剤。
- 配列番号3及び136のうちの1つに対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第3のポリペプチドをさらに含む、請求項12又は15に記載のワクチン製剤。
- キラヤ(Quillaja)サポニンの1つ以上の精製画分を含むアジュバントをさらに含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 前記断片が、18〜20アミノ酸残基がN末端から除去された配列番号136のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項1に記載のワクチン製剤。
- 前記18〜20のアミノ酸残基が、シグナル配列に対応する、請求項18に記載のワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体及び配列番号138に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号138のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
- 前記断片が、残基391〜544からの少なくとも50残基が欠失しており、残基786〜821からの少なくとも25残基が欠失している配列番号1のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項12に記載のワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体及び配列番号139に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号139のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
- 前記断片が、残基391〜508からの少なくとも25残基が欠失しており、残基786〜864からの少なくとも25残基が欠失している配列番号1のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項14に記載のワクチン製剤。
- 少なくとも1つのポリペプチドが、免疫原性担体にコンジュゲートしている、請求項1〜23のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 薬学的に許容可能な担体及び配列番号138に対して少なくとも98%の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片を有するか、或いは、N末端から1〜20アミノ酸、C末端から1〜20アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号138のアミノ酸配列又はその免疫原性断片を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含むワクチン製剤。
- 前記ヌクレオチド配列が、配列番号140、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片を含む、請求項25に記載のワクチン製剤。
- 前記核酸が、DNAである、請求項25に記載のワクチン製剤。
- 前記核酸が、プラスミドの一部である、請求項25〜27のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- アジュバントをさらに含む、請求項1〜16及び20〜28のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 前記アジュバントが、キラヤ(Quillaja)サポニンの1つ以上の精製画分である、請求項29に記載のワクチン製剤。
- 前記アジュバントが、サポニン画分A及びサポニン画分Cを含む、請求項17又は30に記載のワクチン製剤。
- 前記アジュバントが、コレステロール、ホスファチジルコリン、サポニン画分A及びサポニン画分Cを含む、請求項31に記載のワクチン製剤。
- 前記アジュバントが、粒子の形態である、請求項32に記載のワクチン製剤。
- サポニン画分Aを含む粒子が、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%又は1%未満のサポニン画分Cを含み、サポニン画分Cを含む粒子が、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%又は1%未満のサポニン画分Aを含む、請求項33に記載のワクチン製剤。
- 5〜200μgの各ポリペプチド及び5〜200μgの前記アジュバントを含む、請求項17及び29〜34のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 前記ポリペプチドが、タグをさらに含む融合タンパク質である、請求項1〜24のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1による感染を阻害する、請求項1〜36のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染を治療する、請求項1〜36のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1の症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項1〜36のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- ヘルペス性病変の数を低減する、請求項39に記載のワクチン製剤。
- 対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、請求項39に記載のワクチン製剤。
- 1つ以上のHSV−2抗原に対するIgG力価を増加させる、請求項39に記載のワクチン製剤。
- 1つ以上のHSV−2抗原に対するT細胞応答を増加させる、請求項39に記載のワクチン製剤。
- HSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、請求項37に記載のワクチン製剤。
- 対象における3回以下の用量においてHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1の症状の発症を阻害し、又はHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1による感染を阻害する、請求項1〜36のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
- 対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染を阻害するための組成物であって、有効量の請求項1〜36のいずれか一項に記載のワクチン製剤を含む、組成物。
- 3回用量レジメン後に対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染を阻害する、請求項46に記載の組成物。
- 前記対象が、ヒトである、請求項46に記載の組成物。
- 前記対象が、事前にHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1により感染していない、請求項46に記載の組成物。
- 対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染を治療するための組成物であって、有効量の請求項1〜23のいずれか一項に記載のワクチン製剤を含む、組成物。
- HSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項50に記載の組成物。
- ヘルペス性病変の数を低減する、請求項51に記載の組成物。
- 対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、請求項52に記載の組成物。
- 1つ以上のHSV−2抗原に対するIgG力価を増加させる、請求項50又は51に記載の組成物。
- 1つ以上のHSV−2抗原に対するT細胞応答を増加させる、請求項50又は51に記載の組成物。
- HSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、請求項50又は51に記載の組成物。
- 3回用量レジメン後に対象におけるHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項50又は51に記載の組成物。
- 前記対象が、ヒトである、請求項50に記載の組成物。
- 前記対象が、事前にHSV−2、HSV−1、又は、HSV−2及びHSV−1により感染していない、請求項50に記載の組成物。
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