CN101583381B - Hsv-1和hsv-2疫苗和其使用方法 - Google Patents

Hsv-1和hsv-2疫苗和其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供向个体接种疫苗以对抗单纯疱疹病毒(HSV)感染和与其有关的病症和症状、和在个体中阻止下列病状、抑制下列病状、降低下列病状的发生率和阻抑下列病状的方法：HSV感染、神经元病毒扩散、带状疱疹样损伤形成、疱疹性眼睛疾病、疱疹介导的脑炎和生殖器溃疡疾病，所述方法包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，所述HSV突变体菌株在编码gE、g1、Us9或其它蛋白质的基因中含有失活突变。

Description

HSV-1和HSV-2疫苗和其使用方法
关于由联邦政府发起的研究或开发的声明
本文所述的本发明全部或部分由美国国家卫生研究所(National Institutes ofHealth)资助(批准号R01AI33063)。政府对本发明拥有一定的权利。
技术领域
本发明提供向个体接种疫苗以对抗单纯疱疹病毒(HSV)感染和与其有关的病症和症状、和在个体中阻止下列病状、抑制下列病状、降低下列病状的发生率和阻抑下列病状的方法：HSV感染、神经元病毒扩散、带状疱疹样损伤形成、疱疹性眼睛疾病、疱疹介导的脑炎和生殖器溃疡疾病，所述方法包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，所述HSV突变体菌株在编码gE、gI、Us9或其它蛋白质的基因中含有失活突变、任选地在编码gD的基因中含有失活突变。
背景技术
人类I型或II型单纯疱疹病毒(HSV)感染通常是通过密切接触获得并造成口腔和生殖器损伤。HSV-1通常导致口腔溃疡且HSV-2通常导致生殖器溃疡，但相反的情况也会发生。感染HSV-1或HSV-2的人将永远是此病毒的携带者。在最初感染后，损伤痊愈且HSV以休眠潜伏状态存在于感觉神经元中。HSV周期性地自潜伏受感染的神经元复活并导致在皮肤表面上形成新溃疡。新生婴儿和免疫抑制个体尤其易受HSV感染攻击，通常会导致弥散性感染并具有致命后果。眼睛HSV感染是此病毒的另一种严重后果，其是失明的最主要原因。此外，生殖器HSV感染使得HIV传播速率增加两倍。因此，迫切需要阻止HSV传播的疫苗。
发明内容
本发明提供向个体接种疫苗以对抗单纯疱疹病毒(HSV)感染和与其有关的病症和症状、和在个体中阻止下列病状、抑制下列病状、降低下列病状的发生率和阻抑下列病状的方法：HSV感染、神经元病毒扩散、带状疱疹样损伤形成、疱疹性眼睛疾病、疱疹介导的脑炎和生殖器溃疡疾病，所述方法包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，所述HSV突变体菌株在编码gE、gI、Us9或其它蛋白质的基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供在个体中治疗单纯疱疹病毒(HSV)感染、减少其发病、改善其症状、改善其继发性症状、降低其发生率、延长至其复发的潜伏期的方法，所述方法包含使所述个体与包含突变体单纯疱疹病毒疫苗菌株的组合物接触的步骤，其中所述突变体HSV疫苗菌株在Us8基因中包含失活突变。在一个实施例中，突变体HSV疫苗菌株是HSV-1菌株，而在另一实施例中，突变体HSV疫苗菌株是HSV-2菌株。在一个实施例中，HSV感染是HSV-1感染，而在另一实施例中，HSV感染是HSV-2感染。
在一个实施例中，突变体菌株在所述个体的皮肤组织中具有复制能力。在一个实施例中，所述突变体菌株的神经元病毒扩散被阻止。
在一个实施例中，所述突变体HSV疫苗菌株在Us7基因中、或在另一实施例中于Us9基因中、或在另一实施例中于Us7和Us9基因二者中进一步包含额外失活突变。在一个实施例中，所述突变体HSV疫苗菌株在编码病毒入侵不需要的膜蛋白质的基因中进一步包含额外失活突变，所述基因在一个实施例中是Us5，在另一实施例中是Us4，在另一实施例中是UL53，在另一实施例中是UL10，或在另一实施例中是Us5、Us4、UL53、和UL10的任何组合。在一个实施例中，所述突变体HSV疫苗菌株在编码病毒入侵所需要的膜蛋白质的基因中进一步包含额外失活突变，所述基因在一个实施例中是Us6。
在一个实施例中，HSV感染是生殖器HSV感染，而在另一实施例中，HSV感染是HSV脑炎，而在另一实施例中，HSV感染是眼睛疾病，而在另一实施例中，HSV感染是唇部HSV感染，而在另一实施例中，HSV感染是上述的任何组合。
在一个实施例中，个体已感染HSV，而在另一实施例中，个体具有感染HSV的风险，所述个体在一个实施例中是新生儿个体，在另一实施例中是免疫受损个体，在另一实施例中是老年个体，且在另一实施例中是免疫受损新生儿或免疫受损老年个体。
在一个实施例中，所述方法在个体中诱导抗HSV免疫应答，所述免疫应答在一个实施例中是抗HSV中和抗体应答。
在一个实施例中，接触步骤包含表皮注射，在另一实施例中包含肌内注射，在另一实施例中包含皮下注射，且在另一实施例中包含呼吸系统内粘膜注射。
在一个实施例中，本发明提供在编码gE蛋白质的基因中包含第一失活突变且包含第二失活突变的经分离突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，编码gE蛋白质的基因是Us8基因。在另一实施例中，第二失活突变是在Us7基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在Us9基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在业内已知的任何其它HSV-1基因中。在另一实施例中，经分离突变体HSV-1菌株在编码gE蛋白质、gI蛋白质、和Us9蛋白质的基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供在编码gE蛋白质的基因中包含第一失活突变且包含一或多种额外失活突变的经分离突变体HSV-2菌株。在一个实施例中，编码gE蛋白质的基因是Us8基因。在一个实施例中，额外失活突变是在病毒入侵不需要的膜蛋白质中。在另一实施例中，额外失活突变是在Us7基因中。在另一实施例中，额外失活突变是在Us9基因中。在另一实施例中，额外失活突变是在Us5、Us4、UL53、UL10或其组合中。在一个实施例中，额外失活突变是在病毒入侵所需要的膜蛋白质中。在另一实施例中，额外失活突变是在Us6中。在另一实施例中，额外失活突变是在业内已知的任何其它HSV-2基因中。在另一实施例中，经分离突变体HSV-2菌株在编码gE蛋白质、gI蛋白质、和Us9蛋白质的基因中含有失活突变。
附图说明
图1.HSV在神经元中扩散。
图2.小鼠侧腹的典型HSV-1感染。
图3.小鼠侧腹/疫苗接种模型中的皮肤疾病谱。
图4.感染HSV-1(gE无效)疫苗或有毒HSV-1(拯救gE无效)后小鼠的存活。
图5.感染HSV-1(gE无效)疫苗或有毒HSV-1(拯救gE无效)后的原发性皮肤疾病。
图6.感染HSV-1(gE无效)疫苗或有毒HSV-1(拯救gE无效)后的继发性(带状疱疹样)皮肤疾病。
图7.在感染疫苗或有毒HSV-1后皮肤中的病毒滴度。
图8.在感染疫苗或野生型HSV-1后皮肤中的HSV检测。
图9.在感染疫苗或有毒HSV-1后背根神经节(DRG)中的病毒滴度。
图10.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击后接种疫苗或模拟接种疫苗小鼠的存活。
图11.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击的接种疫苗小鼠中的原发性皮肤疾病评分。
图12.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击的接种疫苗小鼠皮肤中的病毒滴度。
图13.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击的模拟接种疫苗或接种疫苗小鼠皮肤中的HSV检测。
图14.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击的接种疫苗小鼠中的继发性皮肤疾病。N＝3。
图15.用105pfu WT HSV-1(NS)攻击的模拟接种疫苗或接种疫苗小鼠的神经节病毒滴度。N＝3。
图16.疫苗保护神经节免于潜伏感染。
图17.接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗105pfu HSV-2(2.12)侧腹攻击的交叉保护。“Mock Vac”表示模拟接种疫苗；“DgE Vac”表示接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗。误差棒代表平均值的标准误差(“SEM”)。
图18.接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗5×105pfu HSV-1(KOS)侧腹攻击后潜伏的保护。误差棒代表SEM。
图19.接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗105pfu HSV-1(NS)阴道攻击后死亡、明显疾病和大量病毒复制的保护。A.上图-存活曲线；下图-借助阴道擦拭物评价的病毒滴度。B.攻击后第8天小鼠的照片。误差棒：SEM。
图20.通过不同途径(“Ep.Scar.”：表皮划痕；“SubQ”：皮下；IM：肌内)接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗105pfu HSV-1(NS)侧腹攻击的保护。“DgEVac”表示HSV-1ΔgE；误差棒代表SEM。
图21.通过不同途径接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗在小鼠中诱导中和抗体应答。所述百分比是与来自模拟接种疫苗小鼠的血清进行比较。n＝3(表皮划痕与皮下)，n＝2(肌内)，一式两份实施分析。误差棒代表SEM。
图22.接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗105pfu HSV-1(NS、F或17)侧腹攻击的保护。误差棒代表SEM。
图23.接种5×105pfu HSV-1ΔgE疫苗对小鼠对抗105-7pfu HSV-1(NS)侧腹攻击的保护。误差棒代表SEM。
图24.A.HSV-1(NS)gE(SEQ ID NO：2)与HSV-2(HG52)gE(SEQ ID NO：6)的比对。B.产生gE-2缺失的策略。
图25.Us区域的额外缺失。绘示HSV-2基因组(155kb总基因组大小)Us区段内4.5kb区域的示意图。图中标出与HSV-1ΔgE疫苗菌株中缺失的区域等效的区域和提议的额外缺失区域。
图26.A.在受感染细胞的提取物中实施蛋白质印迹法以检测gD(Us6)和gI(Us7)。B.KOS-gDA3C病毒在活体外的稳定性。KOS或KOS-gDA3C的经PCR扩增gD基因片段的Sspl消化。C.KOS-gDA3C突变体病毒在活体内的稳定性。将自KOS-gDA3C感染小鼠的DRG获得的经PCR扩增gD片段用Sspl切割或不切割。
图27.KOS、rKOS-gDA3C和KOS-gDA3C病毒至(A)非洲绿猴肾细胞(Vero)、(B)B78-H1、(C)A10或(D)C10细胞的入侵。结果为分别以一式三份实施的三种单独感染的平均值+SE。
图28.在A10(A、C)或C10(B、D)细胞中实施的KOS、rKOS-gDA3C和KOS-gDA3C的单步骤(A、B)和多步骤(C、D)生长曲线。结果为三种单独感染的平均值+SE。
图29.鼠科动物侧腹模型中的疾病。在接种5×105PFU KOS、rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C的小鼠中接种位点(A)和带状疱疹样位点(B)的疾病评分。误差棒代表SE。C.感染KOS、rKOS-gDA3C、或KOS-gDA3C后10天拍的小鼠侧腹的照片。
图30.DRG中的病毒滴度和基因组拷贝数。将DRG自感染KOS、rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C的小鼠中解剖下来并分析其病毒滴度(A)或病毒基因组拷贝数(B)。结果代表平均值+SE。
图31.先前感染KOS-gDA3C可对抗WT HSV-1攻击。结果代表感染后3-7天接种位点(A)和带状疱疹样位点(B)的平均疾病评分+SE。DRG病毒滴度(C)和基因组拷贝数(D)是在用NS攻击后5天测量。结果代表平均值+SE。
图32.KOS-gDA3C感染的小鼠模型。KOS感染上皮细胞(E)并在接种位点处引起疾病。病毒扩散到DRG中的神经元(N)中、复制并扩散到邻近神经元中且随后传播回皮肤中的上皮细胞中导致带状疱疹样疾病。KOS-gDA3C的入侵受损且感染较少上皮细胞，此导致DRG中较少神经元受感染。入侵缺陷也使DRG中受感染的邻近神经元减少并导致减少的带状疱疹样疾病。
具体实施方式
本发明提供向个体接种疫苗以对抗单纯疱疹病毒(HSV)感染和与其有关的病症和症状、和在个体中阻止下列病状、抑制下列病状、降低下列病状的发生率和阻抑下列病状的方法：HSV感染、神经元病毒扩散、带状疱疹样损伤形成、疱疹性眼睛疾病、疱疹介导的脑炎和生殖器溃疡疾病，所述方法包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，所述HSV突变体菌株在编码gE、gI、Us9、其它蛋白质或其组合的基因中含有失活突变。在另一实施例中，HSV突变体菌株在编码gE的基因中包含失活突变，其在一个实施例中是gE无效突变。在另一实施例中，本发明提供包含HSV突变体菌株的医药组合物，所述HSV突变体菌株在编码gE的基因中包含失活突变，其在一个实施例中是gE无效突变。在另一实施例中，本发明提供包含HSV突变体菌株的医药组合物，所述HSV突变体菌株在编码gE、gI、Us9、其它蛋白质或其组合的基因中包含失活突变。
在一个实施例中，本发明提供向个体接种疫苗以对抗HSV感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供阻止个体中HSV-1感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供阻止个体中HSV-2感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供阻止个体中原发性HSV感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，本发明提供阻止个体中原发性HSV-1感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，本发明提供阻止个体中原发性HSV-2感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，术语“阻止HSV感染”和“阻止原发性HSV感染”是指传染性病毒的滴度降低90％。在另一实施例中，滴度降低50％。在另一实施例中，滴度降低55％。在另一实施例中，滴度降低60％。在另一实施例中，滴度降低65％。在另一实施例中，滴度降低70％。在另一实施例中，滴度降低75％。在另一实施例中，滴度降低80％。在另一实施例中，滴度降低85％。在另一实施例中，滴度降低92％。在另一实施例中，滴度降低95％。在另一实施例中，滴度降低96％。在另一实施例中，滴度降低97％。在另一实施例中，滴度降低98％。在另一实施例中，滴度降低99％。在另一实施例中，滴度降低99％以上。
在另一实施例中，所述术语是指病毒复制程度降低90％。在另一实施例中，复制减少50％。在另一实施例中，复制减少55％。在另一实施例中，复制减少60％。在另一实施例中，复制减少65％。在另一实施例中，复制减少70％。在另一实施例中，复制减少75％。在另一实施例中，复制减少80％。在另一实施例中，复制减少85％。在另一实施例中，复制减少92％。在另一实施例中，复制减少95％。在另一实施例中，复制减少96％。在另一实施例中，复制减少97％。在另一实施例中，复制减少98％。在另一实施例中，复制减少99％。在另一实施例中，复制减少99％以上。
衡量HSV感染的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且在一个实施例中包括测定皮肤损伤和病毒介导的疾病的外观和严重程度(实例1和4)。衡量病毒感染的其它方法实施例阐述于(例如)博格斯(Burgos JS)等人(生殖腺中经由血流具有载脂蛋白E依赖性的I型单纯疱疹病毒感染受性别影响(Herpes simplex virus type 1infection via the bloodstream with apolipoprotein E dependence in the gonads is influencedby gender.)，病毒学期刊(J Virol.)2005年2月；79(3)：1605-12)和帕尔(Parr MB)等人(阴道内投与II型单纯疱疹病毒至小鼠中导致数个神经和神经外位点感染(Intravaginal administration of herpes simplex virus type 2 to mice leads to infection ofseveral neural and extraneural sites.)，神经病毒学期刊(J Neurovirol.)2003年12月；9(6)：594-602)。测定HSV复制和HSV感染程度的其它方法充分阐述于(例如)兰比亚斯(Lambiase A)等人(在疱疹性角膜炎动物模型中用神经生长因子实施局部治疗(Topical treatment with nerve growth factor in an animal model of herpetic keratitis.)，格拉芙临床与实验眼科学文献(Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.)，2007年5月4日)、雷马瓦米(Ramaswamy M)等人(HSV和HIV共感染中的相互影响和处理问题(Interactions and management issues in HSV and HIV coinfection.)，抗感染治疗专家综述(Expert Rev Anti Infect Ther.)2007年4月；5(2)：231-43)、和蒋(Jiang C)等人(可降低单纯疱疹病毒DNA聚合酶的持续合成因子的DNA结合、降低病毒产率、改变病毒DNA复制的动力学、并降低DNA复制的保真度的突变(Mutations that decrease DNAbinding of the processivity factor of the herpes simplex virus DNA polymerase reduce viralyield，alter the kinetics of viral DNA replication，and decrease the fidelity of DNAreplication.)，病毒学期刊，2007年4月；81(7)：3495-502)。
依照本文，用本发明gE无效HSV菌株接种疫苗可防止随后的有毒HSV感染。在另一实施例中，接种疫苗可防止由有毒HSV引起的疾病。在另一实施例中，疫苗菌株本身不引起明显疾病，所述疾病在一个实施例中是疱疹(实例1和4)，或在另一实施例中，疫苗菌株本身导致明显症状。
在一个实施例中，gE中的“失活突变”是指终止HSV神经元扩散的突变。在另一实施例中，所述术语是指终止HSV的细胞至细胞扩散的突变。在另一实施例中，所述术语是指终止沿轴突扩散。在另一实施例中，扩散是逆行性的(下文中予以定义)。在另一实施例中，扩散是顺行性的(下文中予以定义)。在另一实施例中，顺行和逆行方向二者的扩散均被终止。
在一个实施例中，神经元扩散降低90％。在另一实施例中，神经元扩散降低60％。在另一实施例中，降低65％。在另一实施例中，降低70％。在另一实施例中，降低75％。在另一实施例中，降低80％。在另一实施例中，降低85％。在另一实施例中，降低95％。在另一实施例中，降低96％。在另一实施例中，降低97％。在另一实施例中，降低98％。在另一实施例中，降低99％。在另一实施例中，降低99％以上。
在一个实施例中，所述术语是指终止gE蛋白质隔绝宿主抗HSV抗体的能力。在另一实施例中，gE对抗HSV抗体的隔绝降低90％。在另一实施例中，隔绝降低50％。在另一实施例中，降低65％。在另一实施例中，降低70％。在另一实施例中，降低75％。在另一实施例中，降低80％。在另一实施例中，降低85％。在另一实施例中，降低95％。在另一实施例中，降低96％。在另一实施例中，降低97％。在另一实施例中，降低98％。在另一实施例中，降低99％。在另一实施例中，降低99％以上。
在一个实施例中，所述术语是指终止gE蛋白质结合IgG单体的能力。在另一实施例中，gE对IgG单体的结合降低90％。在另一实施例中，结合降低50％。在另一实施例中，降低65％。在另一实施例中，降低70％。在另一实施例中，降低75％。在另一实施例中，降低80％。在另一实施例中，降低85％。在另一实施例中，降低95％。在另一实施例中，降低96％。在另一实施例中，降低97％。在另一实施例中，降低98％。在另一实施例中，降低99％。在另一实施例中，降低99％以上。
在一个实施例中，所述术语是指终止gE蛋白质结合IgG复合物的能力。在另一实施例中，gE对IgG复合物的结合降低90％。在另一实施例中，结合降低50％。在另一实施例中，降低65％。在另一实施例中，降低70％。在另一实施例中，降低75％。在另一实施例中，降低80％。在另一实施例中，降低85％。在另一实施例中，降低95％。在另一实施例中，降低96％。在另一实施例中，降低97％。在另一实施例中，降低98％。在另一实施例中，降低99％。在另一实施例中，降低99％以上。
在一个实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸124-508。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸110-500。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸1-552。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸1-50。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸1-100。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸1-250。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸100-300。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸1-400。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸200-500。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸24-71。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失氨基酸30-508。在另一实施例中，gE中的失活突变包含缺失约氨基酸40-70。在另一实施例中，gE中的失活突变包含向编码gE的基因的一部分中插入非天然序列，其中结果是所述gE失活。在另一实施例中，gE中的失活突变包含置换氨基酸残基，例如极性残基置换非极性残基、非极性残基置换极性残基、带电荷残基置换不带电荷残基、带正电荷残基置换带负电荷残基、或反之亦然或其组合，此已为所属领域的技术人员所习知。在另一实施例中，gE中的失活突变基本上由任何一种上文列示突变组成。在另一实施例中，gE中的失活突变由任何一种上文列示突变组成。在另一实施例中，本发明对于第一HSV菌株所阐述的gE或其它蛋白质中的失活突变也可在第二HSV菌株中对应蛋白质的等效位置上突变，其中如所属领域的技术人员所熟知，插入、缺失或置换的等效位置可通过序列比对来推断，其中与第一菌株中的突变序列匹配的区域在第二菌株中将突变。
在一个实施例中，gD中的“失活突变”是指抑制蛋白质/受体相互作用的突变，所述相互作用在一个实施例中是与HVEM细胞受体、连接蛋白-1细胞受体、或二者的相互作用，且在另一实施例中，gD中的“失活突变”是指抑制病毒入侵至细胞中、抑制gB、gH、和gL下游激活、抑制病毒包膜与细胞膜融合或其组合的突变。在一个实施例中，gD中的失活突变是在gD肽的氨基端，其在一个实施例中是残基1-15，且在另一实施例中，突变可抑制当gD结合HVEM时形成发夹环结构。在另一实施例中，突变是在氨基酸3、38、或二者处，且在一个实施例中，这些位置上的丙氨酸和酪氨酸残基被半胱氨酸残基代替(A3C/Y38C)以在氨基端产生3-38二硫键和/或固定发夹环。
在一个实施例中，本发明的失活突变是利用所属领域的技术人员所习知的手段来达成。在一个实施例中，用于本发明和编码本发明蛋白质和用于本发明方法中的核酸可通过例如所属领域的技术人员所熟知的任何合成或重组方法来产生。可借助所属领域的技术人员所习知的技术对核酸实施进一步修饰以改变生物物理学或生物学特性。例如，核酸可经修饰以增加其对核酸酶的稳定性(例如，“封端”)、或改良其亲油性、溶解性、或与互补序列的亲和性。在另一实施例中，可使用转座子来使基因失活突变，其中在一个实施例中，转座子可为Tn551、迈诺斯(Minos)、赫耳墨斯(Hermes)或骑肩(piggyback)。在另一实施例中，转座子可为AT-2(基于tyl的转座子，珀金埃尔默(PerkinElmer)；戴维尼(Devine)等人，(1997)基因组研究(Genome Res.)，7：551-563)、GPS-1(新英格兰生物实验室(New England Biolabs))、GPS-2(新英格兰生物实验室)、EZ::tn(基于Tn5的转座子，震中技术(Epicenter Technologies))、SIF(基于Tn7的转座子，毕尔瑞(Biery)等人，(2000)核酸研究(Nucl Acid Res)28：1067-1077)、或Mu(芬兰酶(Finnzymes)，哈帕(Haapa)等人，(1999)核酸研究13：2777-2784)。在一个实施例中，可利用来自各转座子突变体的经消化DNA的DNA印迹分析来证实转座子插入。在另一实施例中，可利用序列分析、PCR和/或杂交来确定转座子插入。突变也可使用甲磺酸乙酯(EMS)或辐射来引发。在另一实施例中，可利用化学试剂诱变。在其它实施例中，所述化学诱变剂可包含影响非复制DNA的诸如HNO2和NH2OH等化学品、以及影响复制DNA的诸如吖啶类染料等试剂，已显示其可导致移码突变。使用辐射或化学试剂产生突变体的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且任何方法均可用于本发明方法中(参见，例如，托马斯布鲁克(Thomas D.Brock)，生物技术：工业微生物学教程(Biotechnology：A Textbook of Industrial Microbiology)，第二版(1989)塞诺尔协会(Sinauer Associates)公司，桑德兰(Sunderland)，MA.，或戴什潘德(Deshpande)、穆昆德(Mukund V.)，应用生物化学与生物技术(Appl.Biochem.Biotechnol.)36，227(1992))。
在一个实施例中，DNA可通过业内习知方法全部或部分自四种核苷酸化学合成。所述方法包括阐述于卡如瑟(Caruthers)(1985年；科学(Science)230：281-285)中者。DNA也可通过制备重叠双链寡核苷酸、填充间隙、和将末端连接在一起来合成(通常参见，萨姆布鲁克(Sambrook)等人(1989年；分子克隆-实验室手册(Molecular Cloning-A Laboratory Manual)，第2版，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Habour LaboratoryPress)，纽约(New York)))。在另一实施例中，失活突变可通过位点定向诱变自野生型DNA制备(参见，例如，左勒(Zoller)等人(1982年；DNA.1984年12月；3(6)：479-88)；左勒(1983)；和左勒(1984年；DNA.1984年12月；3(6)：479-88)；麦克弗森(McPherson)(1991年；定向诱变：实用方法(Directed Mutagenesis：A PracticalApproach.)，牛津大学出版社(Oxford University Press)，NY))。可通过业内习知的方法对所获得DNA实施扩增。一种适宜方法是聚合酶链反应(PCR)方法，其阐述于佐伯(Saiki)等人(1988年；科学1988年1月29日；239(4839)：487-491)、穆利斯(Mullis)等人，美国专利第4,683,195号、和萨姆布鲁克等人(1989)。
在一个实施例中，本发明提供在个体中阻止潜伏HSV感染建立的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的潜伏HSV感染在原发性HSV感染之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效保护个体以防原发性HSV感染之后潜伏HSV感染。
在一个实施例中，本发明提供在个体中抑制HSV突发的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的突发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效保护个体以防个体暴露至HSV之后形成突发。
在一个实施例中，本发明提供保护个体以防HSV突发的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的突发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效保护个体以防个体暴露至HSV之后形成突发。
在一个实施例中，本发明提供降低HSV突发发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的突发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效降低个体暴露至HSV之后的突发发生率。
在一个实施例中，本发明提供在个体中抑制HSV复发的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的复发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效保护个体以防个体暴露至HSV之后复发。
在一个实施例中，本发明提供降低HSV复发发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所预防的复发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效降低个体暴露至HSV之后的复发发生率。
在另一实施例中，本发明提供在个体中阻抑HSV-1感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
在另一实施例中，本发明提供在个体中阻抑HSV-2感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
根据本发明的任何方法且在一个实施例中，所述个体是人类。在另一实施例中，所述个体是鼠科动物，其在一个实施例中是小鼠，且在另一实施例中是大鼠。在另一实施例中，所述个体是犬科动物、猫科动物、牛科动物、或猪。在另一实施例中，所述个体是哺乳动物。在另一实施例中，所述个体是易受HSV感染的任何生物体。
在另一实施例中，本发明提供在人类个体中保护个体以防形成带状疱疹样损伤或类似暴发的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在另一实施例中，本发明提供在人类个体中阻止形成HSV带状疱疹样损伤或类似暴发的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在另一实施例中，所阻止的带状疱疹样损伤或类似暴发在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效阻止个体暴露至HSV之后形成带状疱疹样损伤或类似暴发。
在另一实施例中，本发明提供在人类个体中阻止HSV带状疱疹样扩散或类似病状的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所阻止的带状疱疹样扩散或类似病状在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效阻止个体暴露至HSV之后形成带状疱疹样扩散或类似病状。
在一个实施例中，“带状疱疹样”是指HSV感染(尤其在复活感染期间)的皮肤损伤特征，在一个实施例中，其以疹形式开始且随后在生皮节附近分布，通常以条状或带状形式出现。在一个实施例中，疹发展成装满浆液的囊泡或小水疱。在一个实施例中，带状疱疹样损伤是由于接触HSV而在小鼠中形成。在另一实施例中，带状疱疹样损伤是由于接触HSV而在人类中形成。
在一个实施例中，“带状疱疹样扩散”是指HSV感染自神经节扩散到生皮节内的继发性皮肤位点。在另一实施例中，所述术语是指在与起始感染位点相同的生皮节内扩散。在另一实施例中，所述术语是指业内已知的“带状疱疹样扩散”的任何其它定义。在另一实施例中，“暴发”是指疾病症状或疾病扩散或流行突然增加，且在一个实施例中，是指带状疱疹样损伤突然增加，而在另一实施例中，“暴发”是指带状疱疹样损伤突然出现。
在一个实施例中，本发明提供在人类个体中阻止形成生皮节损伤或类似病状的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所阻止的生皮节损伤或类似病状在个体暴露至HSV之后。在一个实施例中，生皮节损伤是由于接触HSV而在人类中形成。在另一实施例中，人类中的生皮节损伤最常见地在病毒于神经节中自潜伏状态复活时出现，且在一个实施例中，沿神经扩散，在一个实施例中，导致复发感染。在另一实施例中，生皮节损伤是由于接触HSV而在小鼠中形成。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可有效阻止个体暴露至HSV之后形成生皮节损伤或类似病状。
依照本文，用本发明gE无效HSV菌株接种疫苗可防止在随后感染有毒HSV后潜伏HSV感染(实例5)和形成带状疱疹样和生皮节损伤(实例4)。在另一实施例中，接种疫苗可防止由潜伏HSV感染引起或与其有关的疾病。在另一实施例中，接种疫苗本身不会引起明显疾病(实例2)。
在一个实施例中，“有毒HSV”是指天然存在的HSV菌株。在另一实施例中，所述术语是指能够引起感染的HSV菌株。在另一实施例中，所述术语是指能够建立潜伏感染的HSV菌株。
在另一实施例中，本发明提供阻止个体中HSV神经元扩散的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，所阻止的神经元扩散在个体暴露至HSV之后。在另一实施例中，个体在接种疫苗之前已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，无论个体在接种疫苗时是否感染HSV，通过本发明方法接种疫苗均可在个体暴露至HSV之后有效阻止神经元扩散。
衡量神经元HSV扩散的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且在一个实施例中包括测定继发性生皮节损伤的存在和程度(实例2)。衡量病毒扩散的其它方法实施例阐述于(例如)拉贝图勒(Labetoulle M)等人(HSV1自口腔粘膜至眼睛的神经元增殖(Neuronal propagation of HSV1 from the oral mucosa to the eye.)，眼科学研究与视力学(Invest Ophthalmol Vis Sci.)，2000年8月；41(9)：2600-6)和汤普森(Thompson KA)等人(在病灶疱疹性脑炎大鼠模型中皮质类固醇治疗并未使单纯疱疹复制和弥散增加(Herpes simplex replication and dissemination is not increased by corticosteroid treatmentin a rat model of focal Herpes encephalitis.)，神经病毒学(J Neurovirol.)，2000年2月；6(1)：25-32)。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中疱疹性眼睛疾病发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中疱疹性眼睛疾病严重程度的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，疫苗菌株来自与攻击菌株不同的物种。在另一实施例中，疫苗菌株是与攻击菌株相同的物种。
在另一实施例中，本发明提供降低个体中HSV-1角膜感染、疱疹性角膜炎或任何其它疱疹性眼睛疾病发生率的方法，所述方法包含向所述个体投与本发明HSV突变体菌株由此降低个体中HSV-1角膜感染或疱疹性角膜炎发生率的步骤。在另一实施例中，向所述个体中投与本发明HSV突变体菌株引发对抗HSV-1的免疫应答。
测定疱疹性眼睛疾病、角膜感染和疱疹性角膜炎的存在和程度的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且阐述于(例如)拉贝图勒等人(HSV1自口腔粘膜至眼睛的神经元增殖，眼科学研究与视力学，2000年8月；41(9)：2600-6)和马任达(MajumdarSi)(用于治疗HSV-1诱导的角膜上皮和基质角膜炎的二肽单酯更昔洛韦前药：活体外和活体内评价(Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs for treating HSV-1-inducedcorneal epithelial and stromal keratitis：in vitro and in vivo evaluations.)，眼睛药理学与治疗学期刊(J Ocul Pharmacol Ther.)，2005年12月；21(6)：463-74)。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中生殖器溃疡疾病发生率的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中生殖器溃疡疾病严重程度的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，生殖器溃疡疾病的特征在于在生殖器上具有溃疡性损伤。测定生殖器溃疡疾病的存在和程度的方法已为所属领域的技术人员所熟知。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中HSV-1介导的脑炎的发生率的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，“HSV-1脑炎”是指由HSV-1引起的脑炎。在另一实施例中，所述术语是指与HSV-1有关的脑炎。在另一实施例中，所述术语是指业内已知的任何其它类型HSV-1介导的脑炎。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。在另一实施例中，疫苗菌株来自与攻击菌株不同的物种。在另一实施例中，疫苗菌株是与攻击菌株相同的物种。
在一个实施例中，“HSV-1”是指单纯疱疹病毒1。在另一实施例中，所述术语是指KOS菌株。在另一实施例中，所述术语是指F菌株。在另一实施例中，所述术语是指NS菌株。在另一实施例中，所述术语是指CL101菌株。在另一实施例中，所述术语是指“17”菌株。在另一实施例中，所述术语是指“17+syn”菌株。在另一实施例中，所述术语是指麦金泰尔(MacIntyre)菌株。在另一实施例中，所述术语是指MP菌株。在另一实施例中，所述术语是指HF菌株。在另一实施例中，所述术语是指业内已知的任何其它HSV-1菌株。
在一个实施例中，“HSV-2”是指单纯疱疹病毒2。在另一实施例中，所述术语是指HSV-2333菌株。在另一实施例中，所述术语是指2.12菌株。在另一实施例中，所述术语是指HG52菌株。在另一实施例中，所述术语是指MS菌株。在另一实施例中，所述术语是指186菌株。在另一实施例中，所述术语是指G菌株。在另一实施例中，所述术语是指业内已知的任何其它HSV-2菌株。
在另一实施例中，本发明提供降低个体中HSV-2介导的脑炎的发生率的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，“HSV-2脑炎”是指由HSV-2引起的脑炎。在另一实施例中，所述术语是指与HSV-2有关的脑炎。在另一实施例中，所述术语是指业内已知的任何其它类型的HSV-2介导的脑炎。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中疱疹介导的脑炎的严重程度的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，通过本发明方法治疗或预防的疱疹介导的脑炎是病灶疱疹性脑炎。在另一实施例中，疱疹介导的脑炎是新生儿疱疹性脑炎。在另一实施例中，疱疹介导的脑炎是业内已知的任何其它类型的疱疹介导的脑炎。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中弥散性HSV感染的发生率的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中弥散性HSV感染的严重程度的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体后代中新生儿HSV-1感染的发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，后代接触带有突变体HSV菌株的个体。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体后代中新生儿HSV-2感染的发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在一个实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供减少HSV-1感染自个体至其后代传播的方法，所述方法包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供减少HSV-2感染自个体至其后代传播的方法，所述方法包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供减少HSV-1传播至后代的方法，所述方法包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。业内已知，HSV-2感染会使生殖器分泌物中的HIV-1病毒排出增加(纳戈特(Nagot N)等人，利用阻抑单纯疱疹病毒的疗法来降低HIV-1RNA含量(Reduction of HIV-1 RNA levels with therapy to suppress herpes simplex virus.)，新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)2007年2月22日；356(8)：790-9)。因此，我们认为抑制HSV-2感染的本发明方法也可有效减少HIV-1至后代的传播。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供减少HSV-1传播至性伴侣的方法，所述方法包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。业内已知，HSV-2感染会使生殖器分泌物中的HIV-1病毒排出增加。因此，我们认为抑制HSV-2感染的本发明方法也可有效减少HIV-1至性伴侣的传播。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供降低对HIV-1的易感染性的方法，所述方法包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体HSV菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。业内已知，HSV-2感染会使HIV-1复制增加(屋德瑞古(Ouedraogo A)等人，在采取抗逆转录病毒疗法的女性中阻抑性疱疹疗法对生殖器HIV-1 RNA的影响：随机受控试验(Impact of suppressive herpes therapy on genitalHIV-1 RNA among women taking antiretroviral therapy：a randomized controlled trial.)，艾滋病(AIDS).2006年11月28日；20(18)：2305-13)。因此，我们认为抑制HSV-2感染的本发明方法也可有效降低对HIV-1的易感染性。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供降低个体后代中新生儿HSV感染的严重程度的方法，其包含使所述个体与HSV突变体菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，个体已感染HSV。在另一实施例中，个体具有HSV感染风险。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中与疱疹介导的脑炎有关的或其继发性疾病、病症、或症状的发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供治疗个体中与疱疹介导的脑炎有关的或其继发性疾病、病症、或症状的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触由此治疗个体中与疱疹介导的脑炎有关的或其继发性疾病、病症、或症状的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，所述疾病、病症、或症状是发热。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是头痛。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是颈强直。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是癫痫发作。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是部分麻痹。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是木僵。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是昏迷。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是业内已知的与疱疹介导的脑炎有关的或其继发性的任何其它疾病、病症、或症状。
测定疱疹介导的脑炎的存在和严重程度的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且阐述于(例如)邦考斯卡(Bonkowsky JL)等人(在用促皮质素治疗婴儿痉挛症期间单纯疱疹病毒中枢神经系统疾病复发(Herpes simplex virus central nervous systemrelapse during treatment of infantile spasms with corticotropin.)，儿科学(Pediatrics)，2006年5月；117(5)：e1045-8)和可汗(Khan OA)等人(以轻微失语症存在的疱疹性脑炎：病例报告(Herpes encephalitis presenting as mild aphasia：case report.)，BMC家庭医学(BMC Fam Pract.)，2006年3月24日；7：22)。
在一个实施例中，本发明提供治疗个体中与HSV感染有关的疾病、病状、或症状的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中与HSV感染有关的疾病、病状、或症状的发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供治疗个体中HSV感染的继发性疾病、病状、或症状的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，本发明提供降低个体中HSV感染的继发性疾病、病状、或症状的发生率的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。
在一个实施例中，HSV感染的继发性疾病、病症、或症状是口腔损伤。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是生殖器损伤。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是口腔溃疡。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是生殖器溃疡。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是发热。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是头痛。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是肌肉痛。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是腹股沟区域中腺体肿胀。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是排尿疼痛。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是阴道排出物异常。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是发疱。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是流感样身体不适。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是角膜炎。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是疱疹性瘭疽。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是贝尔麻痹(Bell′s palsy)。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是疱疹性多形红斑。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是下背部症状(例如麻木、臀部或肛门附近区域具有麻刺感、尿潴留、便秘、和阳萎)。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是局部疱疹性湿疹。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是弥散性疱疹性湿疹。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是外伤性疱疹。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是疱疹性须疮。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是食管症状(例如吞咽困难或烧灼感、吞咽时咽喉刺痛、体重减轻、吞咽时上胸中或上胸后疼痛)。在另一实施例中，所述疾病、病症、或症状是业内已知的任何其它疾病、病症、或症状。
在一个实施例中，通过本发明方法和组合物治疗或改善的HSV感染是生殖器HSV感染。在另一实施例中，HSV感染是口腔HSV感染。在另一实施例中，HSV感染是眼睛HSV感染。在另一实施例中，HSV感染是皮肤病HSV感染。
在一个实施例中，HSV感染是HSV-2感染。在另一实施例中，HSV感染是HSV-1感染。在另一实施例中，HSV感染是业内已知的任何其它类型HSV感染。
在一个实施例中，本发明提供在个体中诱导快速清除HSV-1感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供在个体中诱导快速清除HSV-2感染的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供在个体中诱导抗HSV免疫应答的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触由此在个体中诱导抗HSV免疫应答的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供在个体中诱导抗HSV中和抗体应答的方法，其包含使所述个体与突变体HSV菌株接触的步骤，其中突变体菌株在编码gE蛋白质的Us8基因中含有失活突变。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。
在一个实施例中，本发明提供在个体中抑制唇部HSV感染的方法，其包含按照本发明方法向个体接种疫苗以对抗HSV的步骤。
在另一实施例中，本发明提供在个体中抑制唇部HSV感染的方法，其包含按照本发明方法阻止个体中HSV感染的步骤。
在一个实施例中，通过本发明方法和组合物诱导的免疫应答是细胞免疫应答。在另一实施例中，免疫应答包含CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。在另一实施例中，免疫应答包含CD4+辅助性T细胞应答。在另一实施例中，免疫应答包含体液免疫应答。
在一个实施例中，本发明方法中突变体菌株的投与途径是经表皮。在另一实施例中，突变体菌株是通过表皮划痕或刮痕来投与。在另一实施例中，突变体菌株是经肌内投与。在另一实施例中，突变体菌株是经皮下投与。在另一实施例中，突变体菌株是经鼻内投与。在另一实施例中，突变体菌株是经皮投与。在另一实施例中，突变体菌株是经阴道内投与。在另一实施例中，突变体菌株是经粘膜投与，在一个实施例中，所述经粘膜投与是经呼吸系统内粘膜投与。在另一实施例中，突变体菌株是经鼻内投与。在另一实施例中，突变体菌株是以气溶胶形式投与。在另一实施例中，突变体菌株是经由业内已知的任何其它途径来投与。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述HSV菌株的编码gE的基因中的失活突变是缺失突变。在另一实施例中，失活突变是插入突变。在另一实施例中，失活突变是置换突变。在另一实施例中，失活突变是gE无效突变。在另一实施例中，失活突变是业内已知的任何其它类型突变。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述HSV菌株的编码糖蛋白的基因中的失活突变是缺失突变。在另一实施例中，失活突变是插入突变。在另一实施例中，失活突变是置换突变。在另一实施例中，失活突变是无效突变。在另一实施例中，失活突变是业内已知的任何其它类型突变。在一个实施例中，插入、缺失或置换突变包含插入、缺失或置换单一氨基酸，而在另一实施例中，其包含插入、缺失或置换1-5个氨基酸、1-10个氨基酸、5-20个氨基酸、10-50个氨基酸、25-100个氨基酸、100-500个氨基酸、300-400个氨基酸、200-1000个氨基酸、或1000个或1000个以上氨基酸。
在一个实施例中，本发明提供在编码gE蛋白质的基因中包含第一失活突变且包含第二失活突变的经分离突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，编码gE蛋白质的基因是Us8基因。在另一实施例中，突变是gE无效突变。在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的经分离突变体HSV-1菌株进一步包含一或多种额外突变，所述额外突变在一个实施例中是失活突变。在另一实施例中，第二或额外失活突变是在Us7基因中。在另一实施例中，第二或额外失活突变是在Us9基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在赋予神经毒力的任何基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在为病毒入侵至宿主细胞中所需要的任何基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在宿主关闭基因(shut-off gene)中。在另一实施例中，第二失活突变是在胸苷激酶基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在业内已知的任何其它HSV-1基因中。在另一实施例中，经分离突变体HSV-1菌株在编码gE蛋白质的基因、Us7基因、和Us9基因中含有失活突变。在另一实施例中，本发明方法和组合物中所述的经分离突变体HSV-1菌株在编码gD蛋白质的基因中进一步包含额外突变。
在一个实施例中，本发明提供在编码gE蛋白质的基因中包含第一失活突变且包含第二失活突变的经分离突变体HSV-2菌株。在另一实施例中，编码gE蛋白质的基因是Us8基因。在另一实施例中，突变是gE无效突变。在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的经分离突变体HSV-2菌株进一步包含一或多种额外突变，所述额外突变在一个实施例中是失活突变。在另一实施例中，第二或额外失活突变是在Us7基因中。在另一实施例中，第二或额外失活突变是在Us9基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在赋予神经毒力的任何基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在为病毒入侵至宿主细胞中所需要的任何基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在宿主关闭基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在胸苷激酶基因中。在另一实施例中，第二失活突变是在业内已知的任何其它HSV-2基因中。在另一实施例中，经分离突变体HSV-2菌株在编码gE蛋白质的基因、Us7基因、和Us9基因中含有失活突变。在另一实施例中，本发明方法和组合物中所述的经分离突变体HSV-2菌株在编码gD蛋白质的基因中进一步包含额外突变。
在一个实施例中，突变的Us7基因在α-疱疹病毒中高度保守。在另一实施例中，突变的Us7基因为病毒顺行性扩散所需要。在另一实施例中，突变的Us7基因为病毒逆行性扩散所需要。
在一个实施例中，突变的Us9基因在α-疱疹病毒中高度保守。在另一实施例中，突变的Us9基因为病毒顺行性扩散所需要。在另一实施例中，突变的Us9基因为病毒逆行性扩散所需要。
在一个实施例中，Us7和/或Us9中的突变是失活突变。在另一实施例中，突变是缺失突变。在另一实施例中，突变是插入突变。在另一实施例中，突变是置换突变。在另一实施例中，突变是业内已知的任何其它类型突变。
在一个实施例中，突变的额外基因在α-疱疹病毒中高度保守。在另一实施例中，突变的额外基因为病毒顺行性扩散所需要。在另一实施例中，突变的额外基因为病毒逆行性扩散所需要。
在一个实施例中，突变的额外基因是病毒粒子膜蛋白质。在一个实施例中，额外基因是病毒入侵不需要或必需的病毒粒子膜蛋白质。在另一实施例中，膜蛋白质是糖蛋白。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白J。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白G。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白K。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白M。在另一实施例中，额外基因是选自糖蛋白J、G、K、和M。
在一个实施例中，“顺行性”是指自神经节到皮肤扩散。在另一实施例中，所述术语是指自细胞体向轴突扩散。在另一实施例中，所述术语是指业内接受的任何其它定义。
在一个实施例中，“逆行性”是指自感染位点到神经节扩散。在另一实施例中，所述术语是指自轴突向细胞体扩散。在另一实施例中，所述术语是指业内接受的任何其它定义。
在一个实施例中，引入额外突变以增强对突变体HSV-1菌株顺行性扩散的抑制。在另一实施例中，需要额外突变与gE突变来抑制突变体HSV-1菌株顺行性扩散。在另一实施例中，gE突变不足以抑制突变体HSV-1菌株的顺行性扩散。在另一实施例中，于不存在gE突变下额外突变已足以抑制突变体HSV-1菌株的顺行性扩散。
在一个实施例中，引入额外突变以增强对突变体HSV-2菌株的顺行性扩散的抑制。在另一实施例中，需要额外突变与gE突变来抑制突变体HSV-2菌株的顺行性扩散。在另一实施例中，gE突变不足以抑制突变体HSV-2菌株的顺行性扩散。在另一实施例中，于不存在gE突变的情况下额外突变已足以抑制突变体HSV-2菌株的顺行性扩散。
在一个实施例中，引入额外突变以增强对HSV-1或HSV-2菌株或二者的毒力的衰减。在另一实施例中，需要额外突变与gE突变来衰减毒力。
在一个实施例中，突变的额外基因是病毒粒子膜蛋白质。在另一实施例中，额外基因是病毒入侵所需要的病毒粒子膜蛋白质。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白B。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白D。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白H。在另一实施例中，额外基因是糖蛋白L。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体HSV菌株在个体的皮肤组织中具有复制能力。在另一实施例中，突变体菌株在个体的皮肤细胞中具有复制能力。在另一实施例中，突变体菌株在个体所属物种的皮肤组织中具有复制能力。在另一实施例中，突变体菌株在来源于个体物种皮肤组织的细胞系中具有复制能力。在另一实施例中，突变体菌株在个体物种的皮肤细胞培养物中具有复制能力。在另一实施例中，突变体菌株在来源于个体物种皮肤细胞的细胞系中具有复制能力。
在一个实施例中，“具有复制能力”是指能够复制。在另一实施例中，所述术语包括展示受损但仍可检测到的复制水平的菌株。在另一实施例中，所述术语是指展示可测量复制的菌株。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体HSV菌株不能自接种位点扩散到背根神经节(DRG)。在一个实施例中，背根神经节含有神经纤维的神经元细胞体。在另一实施例中，突变体HSV菌株不能逆行性扩散。在另一实施例中，突变体HSV菌株的逆行性扩散受损。在另一实施例中，突变体HSV菌株的逆行性扩散显著受损。在另一实施例中，突变体HSV菌株的逆行性扩散受损，但在皮肤中仍具有复制能力。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体HSV菌株不能自DRG扩散到皮肤。在另一实施例中，突变体HSV菌株不能顺行性扩散。在另一实施例中，突变体HSV菌株的顺行性扩散受损。在另一实施例中，突变体HSV菌株的顺行性扩散显著受损。在另一实施例中，突变体HSV菌株的顺行性扩散受损，但在皮肤中仍具有复制能力。
在一个实施例中，“DRG”是指神经元细胞体。在另一实施例中，所述术语是指业内使用的“DRG”的任何其它定义。
在一个实施例中，“突发”或“复发”是指在潜伏神经元HSV感染后皮肤组织再感染。在另一实施例中，所述术语是指在潜伏期后HSV复活。在另一实施例中，所述术语是指在无症状潜伏期后出现症状性HSV损伤。
在一个实施例中，本发明的突变体HSV菌株在特定组织中或普遍(例如在神经组织中)具有复制缺陷。衡量病毒复制的方法已为所属领域的技术人员所熟知，且在一个实施例中包括对接种位点附近的组织样品实施滴定分析(本文实例)。在另一实施例中，利用自接种位点附近的组织中回收传染性病毒(本文实例)。衡量病毒复制的方法中所述的其它实施例阐述于(例如)森(Thi TN)等人(通过实时PCR来快速测定I型和II型单纯疱疹病毒的抗病毒药物敏感性(Rapid determination of antiviral drugsusceptibility of herpes simplex virus types 1 and 2 by real-time PCR.)，抗病毒研究(Antiviral Res.)，2006年3月；69(3)：152-7)；熊兹(Schang LM)等人(细胞周期蛋白依赖激酶的特异性抑制剂罗斯克韦亭(Roscovitine)于病毒早期蛋白质存在下抑制单纯疱疹病毒DNA合成(Roscovitine，a specific inhibitor of cellular cyclin-dependent kinases，inhibits herpes simplex virus DNA synthesis in the presence of viral early proteins.)，病毒学期刊，2000年3月；74(5)：2107-20)；和肯尼迪(Kennedy PG)等人(I型单纯疱疹病毒RL1突变体1716在原代神经元细胞培养物中的复制-可能与用作病毒载体具有相关性(Replication of the herpes simplex virus type 1 RL1 mutant 1716 in primaryneuronal cell cultures-possible relevance to use as a viral vector.)，神经病学期刊(JNeurol Sci.)，2000年10月1日；179(S1-2)：108-14)。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体菌株在个体神经组织中的扩散受损。在另一实施例中，突变体菌株在个体神经细胞培养物中的扩散受损。在另一实施例中，突变体菌株在个体所属物种的神经组织中的扩散受损。在另一实施例中，突变体菌株在来源于个体物种神经组织的细胞系中的扩散受损。在另一实施例中，突变体菌株在个体物种的神经细胞培养物中的扩散受损。在另一实施例中，突变体菌株在来源于个体物种神经细胞的细胞系中的扩散受损。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述突变体菌株入侵个体神经组织的能力受损。在另一实施例中，突变体菌株入侵个体神经细胞培养物的能力受损。在另一实施例中，突变体菌株入侵个体所属物种的神经组织的能力受损。在另一实施例中，突变体菌株入侵来源于个体物种神经组织的细胞系的能力受损。在另一实施例中，突变体菌株入侵个体物种的神经细胞培养物的能力受损。在另一实施例中，突变体菌株入侵来源于个体物种神经细胞的细胞系的能力受损。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体HSV菌株可诱导抗HSV免疫应答。在另一实施例中，免疫应答阻止HSV在个体中复制。在另一实施例中，免疫应答阻止HSV在个体中的神经元扩散。在另一实施例中，免疫应答可杀死个体中受HSV感染的细胞。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的突变体HSV菌株是突变体HSV-1菌株。在另一实施例中，所述突变体HSV-1菌株赋予对抗HSV-1感染、扩散、或其后果(例如带状疱疹样损伤或疱疹性眼睛疾病)的保护。在另一实施例中，突变体HSV菌株是突变体HSV-2菌株。在另一实施例中，所述突变体HSV-2菌株赋予对抗HSV-2感染、扩散、或其后果(例如带状疱疹样损伤或疱疹性眼睛疾病)的保护。在另一实施例中，突变体HSV菌株是业内已知的任何其它突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明的突变体HSV-1菌株可保护个体以防野生型HSV-1感染和与其有关的病症和症状。在另一实施例中，所述病症和症状包括唇疱疹(感冒疮或发热性水疱)。在另一实施例中，所述病症和症状包括HSV介导的角膜疾病。在另一实施例中，所述病症和症状包括疱疹介导的视网膜炎。在另一实施例中，所述病症和症状包括疱疹介导的脑炎。在另一实施例中，所述病症和症状包括HSV-1介导的生殖器溃疡疾病。在另一实施例中，本发明的突变体HSV-1菌株提供对抗HSV-1感染的充分保护和对抗与HSV-2感染有关的一或多种症状的部分保护。在另一实施例中，这些HSV-2症状包括上文所述症状。
在另一实施例中，所述病症和症状包括免疫受损个体(包括带有人类免疫缺陷病毒(HIV)的个体)中的HSV感染。在另一实施例中，本发明的突变体HSV-1菌株可阻止或抑制生殖器HSV-1自接种疫苗的母亲传播至其新生婴儿。在另一实施例中，本发明的突变体HSV菌株可在老年个体中治疗、阻抑、阻止或抑制HSV。
在一个实施例中，本发明的突变体HSV-2菌株可保护个体以防野生型HSV-2感染和与其有关的病症和症状。在另一实施例中，所述突变体HSV-2菌株可阻止或抑制生殖器HSV-2自接种疫苗的母亲传播至其新生婴儿。在另一实施例中，所述突变体HSV-2菌株可预防或抑制生殖器溃疡疾病。在另一实施例中，所述突变体HSV-2菌株可提供对抗HSV-2感染和HSV-1感染二者的充分保护。
根据本发明的任何方法且在一个实施例中，感染是HSV-1感染。在另一实施例中，感染是HSV-2感染。
根据本发明的任何方法且在一个实施例中，疫苗菌株来自与采取保护措施所对抗的菌株(“攻击菌株”)不同的物种。在另一实施例中，疫苗菌株是与攻击菌株相同的物种。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的疫苗可保护个体以防异源HSV攻击。在另一实施例中，异源攻击是相同物种的不同菌株。在另一实施例中，在突变体HSV-1疫苗菌株情形下，所述疫苗可赋予对抗异源HSV-1菌株的保护。在另一实施例中，在突变体HSV-2疫苗菌株情形下，所述疫苗可赋予对抗异源HSV-2菌株的保护。在另一实施例中，异源菌株具有相对于疫苗菌株明显异源的抗原蛋白质。在另一实施例中，抗原蛋白质是gD。在另一实施例中，抗原蛋白质是gB。在另一实施例中，抗原蛋白质是业内已知的任何其它抗原蛋白质。
在一个实施例中，异源菌株具有相对于疫苗菌株明显异源的gD蛋白质。在另一实施例中，异源菌株的gD蛋白质与疫苗菌株具有50％同源性。在另一实施例中，异源菌株的gD蛋白质与疫苗菌株具有55％同源性。在另一实施例中，具有60％同源性。在另一实施例中，具有65％同源性。在另一实施例中，具有70％同源性。在另一实施例中，具有75％同源性。在另一实施例中，具有80％同源性。在另一实施例中，具有85％同源性。在另一实施例中，具有90％同源性。在另一实施例中，具有95％同源性。在另一实施例中，具有98％同源性。在另一实施例中，具有98％以上的同源性。
在一个实施例中，异源菌株具有相对于疫苗菌株明显异源的gB蛋白质。在另一实施例中，异源菌株的gB蛋白质与疫苗菌株具有50％同源性。在另一实施例中，异源菌株的gB蛋白质与疫苗菌株具有55％同源性。在另一实施例中，具有60％同源性。在另一实施例中，具有65％同源性。在另一实施例中，具有70％同源性。在另一实施例中，具有75％同源性。在另一实施例中，具有80％同源性。在另一实施例中，具有85％同源性。在另一实施例中，具有90％同源性。在另一实施例中，具有95％同源性。在另一实施例中，具有98％同源性。在另一实施例中，具有98％以上的同源性。
在一个实施例中，异源攻击菌株是HSV-1NS。在另一实施例中，异源攻击菌株是HSV-1(F)。在另一实施例中，异源攻击菌株是HSV-1(17)。在另一实施例中，异源攻击菌株是业内已知的任何其它HSV-1菌株。
在一个实施例中，异源攻击菌株是HSV-2(2.12)。在另一实施例中，异源攻击菌株是业内已知的任何其它HSV-2菌株。
在一个实施例中，异源攻击菌株是不同的HSV物种。在另一实施例中，在突变体HSV-1疫苗菌株情形下，所述疫苗可赋予对抗HSV-2攻击的保护。在另一实施例中，在突变体HSV-2疫苗菌株情形下，所述疫苗可赋予对抗HSV-1攻击的保护。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的疫苗可保护个体对抗HSV大接种物攻击。在另一实施例中，大接种物为106噬斑形成单位(pfu)。在另一实施例中，接种物为1.5×106pfu。在另一实施例中，接种物为2×106pfu。在另一实施例中，接种物为3×106pfu。在另一实施例中，接种物为4×106pfu。在另一实施例中，接种物为5×106pfu。在另一实施例中，接种物为7×106pfu。在另一实施例中，接种物为1×107pfu。在另一实施例中，接种物为1.5×107pfu。在另一实施例中，接种物为2×107pfu。在另一实施例中，接种物为3×107pfu。在另一实施例中，接种物为4×107pfu。在另一实施例中，接种物为5×107pfu。在另一实施例中，接种物为7×107pfu。在另一实施例中，接种物为108pfu。在另一实施例中，接种物为103-106pfu。在另一实施例中，接种物为103-105pfu。在另一实施例中，接种物为104-106pfu。在另一实施例中，接种物为3×104-3×106pfu。在另一实施例中，接种物为104-107pfu。在另一实施例中，接种物为3×104-3×107pfu。在另一实施例中，接种物为105-108pfu。在另一实施例中，接种物为3×105-3×108pfu。在另一实施例中，接种物为108pfu以上。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的疫苗由于不能感染神经节而展示相对于含gE HSV疫苗菌株增强的安全性。在另一实施例中，本发明方法由于不能在神经元中扩散而展示相对于含gE HSV疫苗菌株增强的安全性。
在另一实施例中，突变体HSV颗粒的多种剂量范围实施例可用于本发明方法中。在另一实施例中，剂量为103pfu。在另一实施例中，剂量为2×103pfu。在另一实施例中，剂量为3×103pfu。在另一实施例中，剂量为5×103pfu。在另一实施例中，剂量为104pfu。在另一实施例中，剂量为1.5×104pfu。在另一实施例中，剂量为104pfu。在另一实施例中，剂量为2×104pfu。在另一实施例中，剂量为3×104pfu。在另一实施例中，剂量为5×104pfu。在另一实施例中，剂量为7×104pfu。在另一实施例中，剂量为105pfu。在另一实施例中，剂量为2×105pfu。在另一实施例中，剂量为3×105pfu。在另一实施例中，剂量为5×105pfu。在另一实施例中，剂量为7×105pfu。在另一实施例中，剂量为106pfu。在另一实施例中，剂量为2×105pfu。在另一实施例中，剂量为3×106pfu。在另一实施例中，剂量为5×105pfu。在另一实施例中，剂量为7×106pfu。在另一实施例中，剂量为107pfu。在另一实施例中，剂量为2×107pfu。在另一实施例中，剂量为3×107pfu。在另一实施例中，剂量为5×107pfu。在另一实施例中，剂量为7×107pfu。在另一实施例中，剂量为108pfu。在另一实施例中，剂量为2×108pfu。在另一实施例中，剂量为3×108pfu。在另一实施例中，剂量为5×108pfu。在另一实施例中，剂量为7×108pfu。
在另一实施例中，剂量为103pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×103pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×103pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×103pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为1.5×104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为7×104pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为105pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×105pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×105pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×105pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为7×105pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为106pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×106pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×106pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×106pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为7×106pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为107pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×107pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×107pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×107pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为7×107pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为108pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为2×108pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为3×108pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为5×108pfu/剂量。在另一实施例中，剂量为7×108pfu/剂量。在另一实施例中，剂量大于108pfu。在另一实施例中，剂量为103-106pfu。在另一实施例中，剂量为103-105pfu。在另一实施例中，剂量为104-106pfu。在另一实施例中，剂量为3×104-3×106pfu。在另一实施例中，剂量为104-107pfu。在另一实施例中，剂量为3×104-3×107pfu。在另一实施例中，剂量为105-108pfu。在另一实施例中，剂量为3×105-3×108pfu。
在一个实施例中，“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic或preventative)措施二者，其中目的是预防或减轻上文所述目标病理学病状或病症。因此，在一个实施例中，治疗可包括直接影响或治愈、阻抑、抑制、预防疾病、病症或病状、减轻其严重程度、延迟其发作、减少其伴随的症状或其组合。因此，在一个实施例中，“治疗”尤其是指延迟进展、促进好转、诱导好转、增强好转、加速恢复、增强替代疗法的功效或降低对替代疗法的抗性或其组合。在一个实施例中，“预防”尤其是指延迟症状发作、防止疾病复发、减少复发事件的次数或频率、延长症状性事件之间的潜伏期或其组合。在一个实施例中，“阻抑”或“抑制”尤其是指降低症状的严重程度、降低急性事件的严重程度、减少症状次数、降低疾病相关症状的发生率、减少潜伏症状、改善症状、减少继发性症状、减少继发性感染、延长患者存活期或其组合。
在一个实施例中，症状是原发性症状，而在另一实施例中，症状是继发性症状。在一个实施例中，“原发性”是指症状是个体病毒感染的直接结果，而在一个实施例中，“继发性”是指症状来源于原发性原因或为其结果。在一个实施例中，用于本发明的组合物和菌株可治疗与HSV感染有关的原发性或继发性症状或继发性并发症。
在另一实施例中，“症状”可为HSV感染的任何表现形式，包含水疱、溃疡形成、或女性尿道、子宫颈、大腿上部、和/或肛门损伤和男性阴茎、尿道、阴囊、大腿上部、和肛门损伤、炎症、肿胀、发热、流感样症状、口疮、咽喉痛、咽炎、疼痛、舌头、口腔或嘴唇上的水疱、溃疡、感冒疮、颈痛、淋巴结肿大、发红、出血、瘙痒、排尿困难、头痛、肌肉痛等或其组合。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的gE蛋白质具有以下序列：
MDRGAVVGFLLGVCVVSCLAGTPKTSWRRVSVGEDVSLLPAPGPTGRGPTQKLLWAVEPLDGCGPLHPSWVSLMPPKQVPETVVDAACMRAPVPLAMAYAPPAPSATGGLRTDFVWQERAAVVNRSLVIHGVRETDSGLYTLSVGDIKDPARQVASVVLVVQPAPVPTPPPTPADYDEDDNDEGEDESLAGTPASGTPRLPPPPAPPRSWPSAPEVSHVRGVTVRMETPEAILFSPGETFSTNVSIHAIAHDDQTYSMDVVWLRFDVPTSCAEMRIYESCLYHPQLPECLSPADAPCAASTWTSRLAVRSYAGCSRTNPPPRCSAEAHMEPVPGLAWQAASVNLEFRDASPQHSGLYLCVVYVNDHIHAWGH1TISTAAQYRNAVVEQPLPQRGADLAEPTHPHVGAPPHAPPTHGALRLGAVMGAALLLSALGLSVWACMTCWRRRAWRAVKSRASGKGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDQVPWLAPPERPDSPSTNGSGFEILSPTAPSVYPRSDGHQSRRQLTTFGSGRPDRRYSQASDSSVFW(SEQ ID No：2)。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：2的同源物。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：2的变体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ IDNo：2的异构体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：2的片段。在另一实施例中，gE蛋白质包含SEQ ID No：2。
在另一实施例中，gE蛋白质是由具有以下序列的核苷酸序列编码：
atggatcgcggggcggtggtggggtttcttctcggtgtttgtgttgtatcgtgcttggcgggaacgcccaaaacgtcctggagacgggtgagtgtcggcgaggacgtttcgttgcttccagctccggggcctacggggcgcggcccgacccagaaactactatgggccgtggaacccctggatgggtgcggccccttacacccgtcgtgggtctcgctgatgccccccaagcaggtgcccgagacggtcgtggatgcggcgtgcatgcgcgctccggtcccgctggcgatggcgtacgcccccccggccccatctgcgaccgggggtctacgaacggacttcgtgtggcaggagcgcgcggccgtggttaaccggagtctggttattcacggggtccgagagacggacagcggcctgtataccctgtccgtgggcgacataaaggacccggctcgccaagtggcctcggtggtcctggtggtgcaaccggccccagttccgaccccacccccgaccccagccgattacgacgaggatgacaatgacgagggcgaggacgaaagtctcgccggcactcccgccagcgggaccccccggctcccgcctccccccgcccccccgaggtcttggcccagcgcccccgaagtctcacatgtgcgtggggtgaccgtgcgtatggagactccggaagctatcctgttttcccccggggagacgttcagcacgaacgtctccatccatgccatcgcccacgacgaccagacctactccatggacgtcgtctggttgaggttcgacgtgccgacctcgtgtgccgagatgcgaatatacgaatcgtgtctgtatcacccgcagctcccagaatgtctgtccccggccgacgcgccgtgcgccgcgagtacgtggacgtctcgcctggccgtccgcagctacgcggggtgttccagaacaaaccccccaccgcgctgttcggccgaggctcacatggagcccgtcccggggctggcgtggcaggcggcctccgtcaatctggagttccgggacgcgtccccacaacactccggcctgtatctgtgtgtggtgtacgtcaacgaccatattcacgcctggggccacattaccatcagcaccgcggcgcagtaccggaacgcggtggtggaacagcccctcccacagcgcggcgcggatttggccgagcccacccacccgcacgtcggggcccctccccacgcgcccccaacccacggcgccctgcggttaggggcggtgatgggggccgccctgctgctgtctgcactggggttgtcggtgtgggcgtgtatgacctgttggcgcaggcgtgcctggcgggcggttaaaagcagggcctcgggtaaggggcccacgtacattcgcgtggccgacagcgagctgtacgcggactggagctcggacagcgagggagaacgcgaccaggtcccgtggctggcccccccggagagacccgactctccctccaccaatggatccggctttgagatcttatcaccaacggctccgtctgtatacccccgtagcgatgggcatcaatctcgccgccagctcacaacctttggatccggaaggcccgatcgccgttactcccaggcctccgattcgtccgtcttctggtaa(SEQ ID No：3)。在另一实施例中，gE蛋白质是由为SEQ ID No：3同源物的核苷酸分子编码。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：3的变体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：3的异构体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：3的片段。在另一实施例中，核苷酸分子包含SEQ ID No：3。
在另一实施例中，本发明方法和组合物中所述的gE蛋白质具有以下序列：
MDRGAVVGFLLGVCVVSCLAGTPKTSWRRVSVGEDVSLLPAPGPTGRGPTQKLLWAVEPLDGCGPLHPSWVSLMPPKQVPETVVDAACMRAPVPLAMAYAPPAPSATGGLRTDFVWQERAAVVNRSLVIYGVRETDSGLYTLSVGDIKDPARQVASVVLVVQPAPVPTPPPTPADYDEDDNDEGEGEDESLAGTPASGTPRLPPSPAPPRSWPSAPEVSHVRGVTVRMETPEAILFSPGEAFSTNVSIHAIAHDDQTYTMDVVWLRFDVPTSCAEMRIYESCLYHPQLPECLSPADAPCAASTWTSRLAVRSYAGCSRTNPPPRCSAEAHMEPFPGLAWQAASVNLEFRDASPQHSGLYLCVVYVNDHIHAWGHITINTAAQYRNAVVEQPLPQRGADLAEPTHPHVGAPPHAPPTHGALRLGAVMGAALLLSALGLSVWACMTCWRRRAWRAVKSRASGKGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDQVPWLAPPERPDSPSTNGSGFEILSPTAPSVYPRSDGHQSRRQLTTFGSGRPDRRYSQASDSSVFW(SEQ ID No：4)。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：4的同源物。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：4的变体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQID No：4的异构体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：4的片段。在另一实施例中，gE蛋白质包含SEQ ID No：4。
在另一实施例中，gE蛋白质是由具有以下序列的核苷酸序列编码：
atggatcgcggggcggtggtggggtttcttctcggtgtttgtgttgtatcgtgcttggcgggaacgcccaaaacgtcctggagacgggtgagtgtcggcgaggacgtttcgttgctaccagctccggggcctacggggcgcggcccgacccagaaactactatgggccgtggaacccctggatgggtgcggccccttacacccgtcgtgggtctcgctgatgccccccaagcaggtacccgagacggtcgtggatgcggcgtgcatgcgcgctccggtcccgctggcgatggcatacgcccccccggccccatctgcgaccgggggtctacggacggacttcgtgtggcaggagcgcgcggccgtggttaaccggagtctggttatttacggggtccgagagacggacagcggcctgtataccctgtctgtgggcgacataaaggacccggctcgccaagtggcctcggtggtcctggtggtgcaaccggccccagttccgactccacccccgaccccagccgattacgacgaggatgacaatgacgagggcgagggcgaggacgaaagtctagccggcactcccgccagcgggaccccccggctcccgccttcccccgcccccccgaggtcttggcccagcgcccccgaagtctcacacgtgcgtggggtgaccgtgcgtatggagactccggaagctatcctgttttcccccggggaggcgtttagcacgaacgtctccatccatgccatcgcccacgacgaccagacctacaccatggacgtcgtctggttgaggttcgacgtgccgacctcgtgtgccgagatgcgaatatacgaatcgtgtctgtatcatccgcagctcccagagtgtctgtccccggccgacgctccgtgcgccgcgagtacgtggacgtctcgcctggccgtccgcagctacgcggggtgttccagaacaaaccccccgccgcgctgttcggccgaggctcacatggagcccttcccggggctggcgtggcaggcggcctcagtcaatctggagttccgggacgcgtccccacaacactccgggctgtatctgtgcgtggtgtacgtcaacgaccatattcacgcatggggccacattaccatcaacaccgcggcgcagtaccggaacgcggtggtggaacagcccctcccacagcgcggcgcggatttggccgagcccacccacccgcacgtcggggcccctccccacgcgcccccaacccacggcgccctgcggttaggggcggtgatgggggccgccctgctgctgtctgcgctggggttgtcggtgtgggcgtgtatgacctgttggcgcaggcgtgcctggcgggcggttaaaagcagggcctcgggtaaggggcccacgtacattcgcgtggccgacagcgagctgtacgcggactggagctcggacagcgagggagaacgcgaccaggtcccgtggctggcccccccggagagacccgactctccctccaccaatggatccggctttgagatcttatcaccaacggctccgtctgtatacccccgtagcgatgggcatcaatctcgccgccagctcacaacctttggatccggaaggcccgatcgccgttactcccaggcctccgattcgtccgtcttctggtaa(SEQ ID No：5)。在另一实施例中，gE蛋白质是由为SEQ ID No：5同源物的核苷酸分子编码。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：5的变体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：5的异构体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：5的片段。在另一实施例中，核苷酸分子包含SEQ ID No：5。
在另一实施例中，本发明方法和组合物中所述的gE蛋白质具有以下序列：
MARGAGLVFFVGVWVVSCLAAAPRTSWKRVTSGEDVVLLPAPAERTRAHKLLWAAEPLDACGPLRPSWVALWPPRRVLETWDAACMRAPEPLAIAYSPPFPAGDEGLYSELAWRDRVAVVNESLVIYGALETDSGLYTLSVVGLSDEARQVASVVLVVEPAPVPTPTPDDYDEEDDAGVTNARRSAFPPQPPPRRPPVAPPTHPRVIPEVSHVRGVTVHMETLEAILFAPGETFGTNVSIHAIAHDDGPYAMDVVWMRFDVPSSCADMRIYEACLYHPQLPECLSPADAPCAVSSWAYRLAVRSYAGCSRTTPPPRCFAEARMEPVPGLAWLASTVNLEFQHASPQHAGLYLCVVYVDDHIHAWGHMTISTAAQYRNAVVEQHLPQRQPEPVEPTRPHVRAPHPAPSARGPLRLGAVLGAALLLAALGLSAWACMTCWRRRSWRAVKSRASATGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDGSLWQDPPERPDSPSTNGSGFEILSPTAPSVYPHSEGRKSRRPLTTFGSGSPGRRHSQASYPSVLW(SEQID No：6；此蛋白质在本文实例1-5中突变)。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ IDNo：6的同源物。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：6的变体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：6的异构体。在另一实施例中，gE蛋白质是SEQ ID No：6的片段。在另一实施例中，gE蛋白质包含SEQ ID No：6。
在另一实施例中，gE蛋白质是由具有以下序列的核苷酸序列编码：
atggctcgcggggccgggttggtgttttttgttggagtttgggtcgtatcgtgcctggcggcagcacccagaacgtcctggaaacgggtaacctcgggcgaggacgtggtgttgcttccggcgcccgcggaacgcacccgggcccacaaactactgtgggccgcggaacccctggatgcctgcggtcccctgcgcccgtcgtgggtggcgctgtggcccccccgacgggtgctcgagacggtcgtggatgcggcgtgcatgcgcgccccggaaccgctcgccatagcatacagtcccccgttccccgcgggcgacgagggactgtattcggagttggcgtggcgcgatcgcgtagccgtggtcaacgagagtctggtcatctacggggccctggagacggacagcggtctgtacaccctgtccgtggtcggcctaagcgacgaggcgcgccaagtggcgtcggtggttctggtcgtggagcccgcccctgtgccgaccccgacccccgacgactacgacgaagaagacgacgcgggcgtgacgaacgcacgccggtcagcgttccccccccaaccccccccccgtcgtccccccgtcgcccccccgacgcaccctcgtgttatccccgaggtgtcccacgtgcgcggggtaacggtccatatggagaccctggaggccattctgtttgcccccggggagacgtttgggacgaacgtctccatccacgccattgcccacgacgacggtccgtacgccatggacgtcgtctggatgcggtttgacgtgccgtcctcgtgcgccgatatgcggatctacgaagcttgtctgtatcacccgcagcttccagagtgtctatctccggccgacgcgccgtgcgccgtaagttcctgggcgtaccgcctggcggtccgcagctacgccggctgttccaggactacgcccccgccgcgatgttttgccgaggctcgcatggaaccggtcccggggttggcgtggctggcctccaccgtcaatctggaattccagcacgcctccccccagcacgccggcctctacctgtgcgtggtgtacgtggacgatcatatccacgcctggggccacatgaccatcagcaccgcggcgcagtaccggaacgcggtggtggaacagcacctcccccagcgccagcccgagcccgtcgagcccacccgcccgcacgtgagagccccccatcccgcgccctccgcgcgcggcccgctgcgcctcggggcggtgctgggggcggccctgttgctggccgccctcgggctgtccgcgtgggcgtgcatgacctgctggcgcaggcgctcctggcgggcggttaaaagccgggcctcggcgacgggccccacttacattcgcgtggcggacagcgagctgtacgcggactggagttcggacagcgagggggagcgcgacgggtccctgtggcaggaccctccggagagacccgactctccctccacaaatggatccggctttgagatcttatcaccaacggctccgtctgtatacccccatagcgaggggcgtaaatctcgccgcccgctcaccacctttggttcgggaagcccgggccgtcgtcactcccaggcctcctatccgtccgtcctctggtaa(SEQ ID No：7；此基因在本文实例1-5中突变)。在另一实施例中，gE蛋白质是由为SEQ ID No：7同源物的核苷酸分子编码。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：7的变体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：7的异构体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：7的片段。在另一实施例中，核苷酸分子包含SEQ ID No：7。
在一个实施例中，gE蛋白质是由以下基因库登录号(GenBank Accession Number)中的一个和AJ626469-AJ626498中的任何一个编码：DQ889502、NC_001806、NC_001798、Z86099、X14112、L00036、X02138、和X04798。在另一实施例中，gE蛋白质与一个上文基因库登录号所揭示的序列同源。在另一实施例中，gE蛋白质是一个上文基因库登录号所揭示序列的变体。在另一实施例中，gE蛋白质是一个上文基因库登录号所揭示序列的片段。
在一个实施例中，gE蛋白质HSV-1糖蛋白E(gE)是病毒粒子表面蛋白质，其为在神经元中扩散所需要，且在一个实施例中，其为在任一方向上沿轴突至(“逆行性”)和自(“顺行性”)神经元细胞体扩散所需要。在另一实施例中，gE也有助于通过隔绝对抗HSV-1的宿主抗体使其无活性来躲避宿主免疫系统。在一个实施例中，gE缺失型HSV-1能在皮肤中复制，但不能沿神经元扩散以建立潜伏或逃避宿主抗体应答。因此，在一个实施例中，活减毒gE缺失型HSV-1或HSV-2感染会在皮肤中引发强烈免疫应答并防止宿主将来遭到野生型病毒的侵袭。
在一个实施例中，gE蛋白质是HSV-1gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(NS)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(17)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(F)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(KOS)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(CL101)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(麦金泰尔(MacIntyre))gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(MP)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(17+syn)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-1(KOS)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是业内已知的任何其它HSV-1gE蛋白质。
在一个实施例中，gE蛋白质是HSV-2gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-2(HG52)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-2(2.12)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-2(MS)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-2(186)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是HSV-2(G)gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是业内已知的任何其它HSV-2gE蛋白质。
在另一实施例中，gE蛋白质是任何其它HSV-1或HSV-2gE蛋白质，其在一个实施例中与上文所列示的一种gE蛋白质或核酸序列具有80％以上的同源性，在另一实施例中具有85％以上的同源性，在另一实施例中具有95％以上的同源性，且在另一实施例中具有98％以上的同源性。在另一实施例中，gE蛋白质与HSV(NS)或HSV(17)或二者具有98.6％的同源性。
在一个实施例中，gE蛋白质是业内已知的任何其它gE蛋白质。在另一实施例中，gE蛋白质是由业内已知的任何Us8核苷酸编码。在一个实施例中，Us8基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703448或GeneID：1487360所示的核酸序列，或编码糖蛋白E的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044670.1或NP_044538.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是Us6基因失活。在一个实施例中，Us6基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703444、GeneID：1487358、NC_001806、NC_001798、EU029158、EF177451、EF177450、EF157322、EF157321、EF157320、EF157319、Z86099、AJ004801、X14112、AF147806、AY779754、AY779753、AY779752、AY779751、AY779750、AY517492、AY155225、AB016432、AF021342、U12183、U12182、U12181、U12180、或InterPro：IPR002896所示的核酸序列，或编码糖蛋白D的蛋白质序列，其在一个实施例中，对应于以下基因库登录号所示者：NP_044668.1、NP_044536.1、CAA38245、AAB59754、AAA19629、AAA19631、AAA19630、AAK93950、ABS84899、ABM66848、ABM66847、AAW23134、AAW23133、AAW23132、AAW23131、AAW23130、AAS01730、ABM52981、ABM52980、ABM52979、ABM52978、AAN74642、AA026211、AAL90884、AAL90883、AAK19597、AAA45785、BAA00020、AAB60555、AAB60554、AAB60553、AAB60552、AAA98962、AAA98963、AAA45842、AAA45786、VGBEDZ、CAB06713、CAA32283、AAB72102、或CAB06713.1。
在另一实施例中，gD蛋白质是任何其它HSV-1或HSV-2gD蛋白质，其在一个实施例中与上文所列示的一种gD蛋白质或核酸序列具有80％以上的同源性，在另一实施例中具有85％以上的同源性，在另一实施例中具有95％以上的同源性，且在另一实施例中具有98％以上的同源性。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是Us9基因失活。在一个实施例中，Us9基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703452或GeneID：1487362所示的核酸序列，或编码Us9膜蛋白质的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044672.1或NP_044540.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是Us5基因失活。在一个实施例中，Us5基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703406或GeneID：1487357所示的核酸序列，或编码糖蛋白J的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044667.1或NP_044535.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是Us4基因失活。在一个实施例中，Us4基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703404或GeneID：1487356所示的核酸序列，或编码糖蛋白G的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044666.1或NP_044534.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL53基因失活。在一个实施例中，UL53基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703425或GeneID：1487342所示的核酸序列，或编码糖蛋白K的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044656.1或NP_044524.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL10基因失活。在一个实施例中，UL10基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703379或GeneID：1487293所示的核酸序列，或编码糖蛋白M的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044611.1或NP_044479.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL1基因失活。在一个实施例中，UL1基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703393或GeneID：1487292所示的核酸序列，或编码糖蛋白L的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044602.1或NP_044470.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL22基因失活。在一个实施例中，UL22基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703373或GeneID：1487306所示的核酸序列，或编码糖蛋白H的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044623.1或NP_044491.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL27基因失活。在一个实施例中，UL27基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703455或GeneID：1487312所示的核酸序列，或编码糖蛋白B的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044629.1或NP_044497.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL44基因失活。在一个实施例中，UL44基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703410或GeneID：1487331所示的核酸序列，或编码糖蛋白C的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044646.1或NP_044514.1所示者。
在一个实施例中，本发明方法的和用于本发明方法中的HSV菌株包含额外失活突变，其在一个实施例中是UL49a基因失活。在一个实施例中，UL49a基因所具有的核酸序列对应于基因库登录号GeneID：2703419或GeneID：1487337所示的核酸序列，或编码糖蛋白N的蛋白质序列，其在一个实施例中对应于基因库登录号NP_044652.1或NP_044520.1所示者。
在另一实施例中，额外突变是在HSV-1或HSV-2糖蛋白中，在一个实施例中其与上文所列示的一或多种糖蛋白具有80％以上的同源性，在另一实施例中具有85％以上的同源性，在另一实施例中具有95％以上的同源性，且在另一实施例中具有98％以上的同源性。
在一个实施例中，本发明的和用于本发明中的HSV菌株在编码gD的基因中包含失活突变，在一个实施例中所述基因是Us6。在另一实施例中，本发明的和用于本发明中的HSV菌株在编码gE的基因中包含失活突变，在一个实施例中所述基因是Us8。在另一实施例中，本发明的和用于本发明中的HSV菌株在编码gE的基因和编码gD的基因中包含失活突变。在一个实施例中，引入Us6突变以衰减包含Us8突变的高毒力HSV菌株的毒力。在一个实施例中，Us6突变可减少病毒入侵。Us6突变以及本发明的任何突变可在HSV-1或HSV-2或二者中。在一个实施例中，HSV-1gD与HSV-2gD具有较大程度的同源性。在一个实施例中，HSV-1gD与HSV-2gD的氨基酸序列具有81％的同源性，或在另一实施例中80％以上的同源性，或在另一实施例中85％以上的同源性，或在另一实施例中90％以上的同源性，或在另一实施例中95％以上的同源性。在一个实施例中，HSV-1gD与HSV-2gD的核酸序列具有85％的同源性，或在另一实施例中80％以上的同源性，或在另一实施例中85％以上的同源性，或在另一实施例中90％以上的同源性，或在另一实施例中95％以上的同源性。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中得到的gD蛋白质具有以下序列：
MGGTAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKMADPNRFRGKDLPVLDQLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGASEDVRKQPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPPSACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPEISETPNATQPELAPEDPEDSALLEDPVGTVAPQIPPNWHIPSIQDAATPYHPPATPNNMGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMHRRTRKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPL(SEQ ID No：14)。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：14的同源物。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：14的变体。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：14的异构体。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：14的片段。在另一实施例中，gD蛋白质包含SEQ ID No：14。在一个实施例中，gD氨基酸序列是HSV-1氨基酸序列。
在另一实施例中，gD蛋白质是由具有以下序列的核苷酸序列编码：
gtggccccggcccccaacaaaaatcacggtagcccggccgtgtgacactatcgtccataccgaccacaccgacgaacccctaagggggaggggccattttacgaggaggaggggtataacaaagtctgtctttaaaaagcaggggttagggagttgttcggtcataagcttcagcgcgaacgaccaactaccccgatcatcagttatccttaaggtctcttttgtgtggtgcgttccggtatgggggggactgccgccaggttgggggccgtgattttgtttgtcgtcatagtgggcctccatggggtccgcggcaaatatgccttggcggatgcctctctcaagatggccgaccccaatcgctttcgcggcaaagaccttccggtcctggaccagctgaccgaccctccgggggtccggcgcgtgtaccacatccaggcgggcctaccggacccgttccagccccccagcctcccgatcacggtttactacgccgtgttggagcgcgcctgccgcagcgtgctcctaaacgcaccgtcggaggccccccagattgtccgcggggcctccgaagacgtccggaaacaaccctacaacctgaccatcgcttggtttcggatgggaggcaactgtgctatccccatcacggtcatggagtacaccgaatgctcctacaacaagtctctgggggcctgtcccatccgaacgcagccccgctggaactactatgacagcttcagcgccgtcagcgaggataacctggggttcctgatgcacgcccccgcgtttgagaccgccggcacgtacctgcggctcgtgaagataaacgactggacggagattacacagtttatcctggagcaccgagccaagggctcctgtaagtacgccctcccgctgcgcatccccccgtcagcctgcctctccccccaggcctaccagcagggggtgacggtggacagcatcgggatgctgccccgcttcatccccgagaaccagcgcaccgtcgccgtatacagcttgaagatcgccgggtggcacgggcccaaggccccatacacgagcaccctgctgcccccggagctgtccgagacccccaacgccacgcagccagaactcgccccggaagaccccgaggattcggccctcttggaggaccccgtggggacggtggcgccgcaaatcccaccaaactggcacatcccgtcgatccaggacgccgcgacgccttaccatcccccggccaccccgaacaacatgggcctgatcgccggcgcggtgggcggcagtctcctggcagccctggtcatttgcggaattgtgtactggatgcaccgccgcactcggaaagccccaaagcgcatacgcctcccccacatccgggaagacgaccagccgtcctcgcaccagcccttgttttactagatacccccccttaatgggtgcgggggggtcaggtctgcggggttgggatgggaccttaactccatataaagcgagtctggaaggggggaaaggcggacagtcgataagtcggtagcgggggacgcgcacctgttccgcctgtcgcacccacagctttttcgcgaaccgtcccgttttcgggat(SEQ ID No：15)。在另一实施例中，gD蛋白质是由为SEQ ID No：15同源物的核苷酸分子编码。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：15的变体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：15的异构体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：15的片段。在另一实施例中，核苷酸分子包含SEQ ID No：15。在一个实施例中，gD核苷酸序列是HSV-1核苷酸序列。
在一个实施例中，本发明方法和组合物中所述的gD蛋白质具有以下序列：
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRWCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVLDQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQ1VRGASDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPPAACLTSKAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPELSDTTNATQPELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPGLIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHQPLFY(SEQ ID No：16)。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：16的同源物。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：16的变体。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQID No：16的异构体。在另一实施例中，gD蛋白质是SEQ ID No：16的片段。在另一实施例中，gD蛋白质包含SEQ ID No：16。在一个实施例中，gD氨基酸序列是HSV-2氨基酸序列。
在另一实施例中，gD蛋白质是由具有以下序列的核苷酸序列编码：
atggggcgtt tgacctccgg cgtcgggacg gcggccctgc tagttgtcgc ggtgggactc cgcgtcgtctgcgccaaatacgccttagca gacccctcgc ttaagatggc cgatcccaat cgatttcgcg ggaagaacct tccggttttggaccagctga ccgacccccc cggggtgaag cgtgtttacc acattcagcc gagcctggag gacccgttcc agccccccagcatcccgatc actgtgtact acgcagtgct ggaacgtgcc tgccgcagcg tgctcctaca tgccccatcg gaggccccccagatcgtgcg cggggcttcg gacgaggccc gaaagcacac gtacaacctg accatcgcct ggtatcgcat gggagacaattgcgctatcc ccatcacggt tatggaatac accgagtgcc cctacaacaa gtcgttgggg gtctgcccca tccgaacgcagccccgctgg agctactatg acagctttag cgccgtcagc gaggataacc tgggattcct gatgcacgcc cccgccttcgagaccgcggg tacgtacctg cggctagtga agataaacga ctggacggag atcacacaat ttatcctgga gcaccgggcccgcgcctcct gcaagtacgc tctccccctg cgcatccccc cggcagcgtg cctcacctcg aaggcctacc aacagggcgtgacggtcgac agcatcggga tgctaccccg ctttatcccc gaaaaccagc gcaccgtcgc cctatacagc ttaaaaatcgccgggtggca cggccccaag cccccgtaca ccagcaccct gctgccgccg gagctgtccg acaccaccaacgccacgcaa cccgaactcg ttccggaaga ccccgaggac tcggccctct tagaggatcc cgccgggacg gtgtcttcgcagatcccccc aaactggcac atcccgtcga tccaggacgt cgcgccgcac cacgcccccg ccgcccccagcaacccgggc ctgatcatcg gcgcgctggc cggcagtacc ctggcggtgc tggtcatcgg cggtattgcg ttttgggtacgccgccgcgc tcagatggcc cccaagcgcc tacgtctccc ccacatccgg gatgacgacgcgcccccctcgcaccagcca ttgttttact ag(SEQ ID No：17)。在另一实施例中，gD蛋白质是由为SEQ ID No：17同源物的核苷酸分子编码。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ IDNo：17的变体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：17的异构体。在另一实施例中，核苷酸分子是SEQ ID No：17的片段。在另一实施例中，核苷酸分子包含SEQID No：17。在一个实施例中，gD核酸序列是HSV-2核酸序列。
在一个实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含HSV-1gD或HSV-2gD的氨基酸3上的丙氨酸突变成半胱氨酸的突变(A3C)。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含以下突变：HSV-1gD或HSV-2gD的残基3上的丙氨酸突变成半胱氨酸(A3C)、残基2上的酪氨酸突变成丙氨酸(Y2A)、残基4上的亮氨酸突变成丙氨酸(L4A)或其组合。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含HSV-1gD或HSV-2gD的残基3上的丙氨酸缺失、残基2上的酪氨酸缺失、残基4上的亮氨酸缺失或其组合。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含氨基酸位置38、222、223、215或其组合上的突变。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含Y38C突变，而在另一实施例中，其包含R222N、F223I、D215G突变或其组合。
在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变包含氨基酸2和3、3和4、2-4、1-5、1-7、或1-10中的突变。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变基本上由HSV-1gD或HSV-2gD的氨基酸3上的丙氨酸突变成半胱氨酸的突变(A3C)组成。在另一实施例中，编码gD的基因中的失活突变由HSV-1gD或HSV-2gD的氨基酸3上的丙氨酸突变成半胱氨酸的突变(A3C)组成。在一个实施例中，用于描述突变位置的编号方式是指在信号序列裂解后成熟肽的氨基酸编号方式，在一个实施例中，其为HSV-1或HSV-2gD的最初25个氨基酸，如业内所习知。
依照本文且在一个实施例中，包含gD中的突变的本发明突变体HSV菌株具有降低的毒力(实例21)且能够到达DRG(实例22)。在另一实施例中，用本发明包含gD中的突变的突变体HSV菌株接种疫苗可在后来感染有毒HSV后防止潜伏HSV感染(实例23)。在另一实施例中，接种疫苗可防止由潜伏HSV感染引起或与其有关的疾病。在另一实施例中，接种疫苗本身不会引起明显疾病。
在一些实施例中，在本文所述的任何形式或实施例中，本发明方法的和用于本发明方法的任何突变体HSV菌株将包含本发明的失活突变。在一些实施例中，在本文所述的任何形式或实施例中，本发明的任何突变体HSV菌株将由本发明的失活突变组成。在一些实施例中，在本文所述的任何形式或实施例中，本发明的突变体HSV菌株将基本上由本发明的失活突变组成。在一些实施例中，术语“包含”是指包括诸如gE或gD中的突变等失活突变、以及包括业内已知的其它突变。在一些实施例中，术语“基本上由其组成”是指仅菌株的功能突变是指定的功能突变，然而，也可包括与菌株效用不直接相关的其它突变。在一些实施例中，术语“由其组成”是指菌株含有特定基因的突变或特定突变。
在一个实施例中，可使用质粒互补来补充失活突变，在一个实施例中，此容许至少一轮本发明突变体HSV感染。
在一个实施例中，本发明提供用于阻止个体中形成带状疱疹样损伤的组合物，所述组合物包含本发明的突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明提供用于阻止个体中疱疹性眼睛疾病的组合物，所述组合物包含本发明的突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明提供用于向个体接种疫苗以防HSV感染的组合物，所述组合物包含本发明的突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明提供用于阻止个体中HSV感染的组合物，所述组合物包含本发明的突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明提供用于阻止个体中疱疹介导的脑炎的组合物，所述组合物包含本发明的突变体HSV菌株。
在一个实施例中，本发明gE蛋白质与本文所揭示或列举的肽同源。在一个实施例中，当提及任何蛋白质或肽时，术语“同源性”、“同源的”等是指在比对序列并引入间隙(若需要，以达成最大百分比同源性)后候选序列中与对应天然多肽残基相同的氨基酸(AA)残基的百分比，且不应将任何保守置换视为序列一致性的一部分。用于比对的方法和计算机程序在业内已众所周知。
在一个实施例中，同源性是通过业内充分阐述的方法通过用于序列比对的计算机算法来测定。例如，核酸序列同源性的计算机算法分析可包括使用任何数量的可用软件包，例如BLAST、DOMAIN、BEAUTY(BLAST增强比对效用(BLAST EnhancedAlignment Utility))、GENPEPT和TREMBL包。
在一个实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有70％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有72％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有75％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有78％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有80％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有82％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有83％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有85％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有87％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有88％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有90％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有92％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有93％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有95％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与选自SEQ ID No：2-7的序列具有96％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有97％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有98％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有99％以上的一致性。在另一实施例中，“同源性”是指与SEQ ID No：2-7之一具有100％的一致性。
在一个实施例中，同源性是经由测定候选序列杂交来测定，此方法业内已充分阐述(参见，例如，“核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)”，黑姆斯(Hames BD)和希金斯(Higgins SJ)编辑，(1985)；萨姆布鲁克等人，2001，分子克隆-实验室手册，冷泉港出版社，纽约；和奥苏贝尔(Ausubel)等人，1989，分子生物学现行方案(CurrentProtocols in Molecular Biology)，格林出版协会和约翰威立公司(Green PublishingAssociates and Wiley Interscience)，纽约)。在其它实施例中，在中等至严格条件下实施与编码天然半胱天冬酶肽的DNA补体的杂交方法。例如，杂交条件为在42℃下于包含以下的溶液中过夜培育：10-20％甲酰胺、5X SSC(150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5X丹哈德溶液(Denhardt′s solution)、10％硫酸葡聚糖、和20μg/ml变性已剪切的鲑鱼精DNA。
在一个实施例中，通过业内充分阐述的方法(包括免疫印迹分析)或经由AA序列的计算机算法分析使用众多可用软件包的任何一种经由既定方法来测定本文所列示任何AA序列的蛋白质和/或肽同源性。这些软件包的一些包括FASTA、BLAST、MPsrch或Scanps软件包，且在另一实施例中，例如，利用使用史密斯(Smith)和沃特曼(Waterman)算法、和/或全局/局部(global/local)或BLOCKS比对来分析。
在一个实施例中，“变体”是指与大多数群体不同但与普通模式仍然充分类似可视为其中之一的氨基酸或核酸序列(或在其它实施例中是生物体或组织)，例如剪接变体。
在一个实施例中，“异构体”是指由相同元素以相同比例构成但由于原子排列不同而具有不同化学和/或生物学特性的两种或更多种物质中的任何一种，在一个实施例中其为立体异构体，在另一实施例中其为组成型异构体或互变异构体。在一个实施例中，异构体是光学异构体或对映异构体、几何异构体、D-和L-异构体、位置异构体、或顺-反异构体。
在本发明的一个实施例中，“核酸”或“核苷酸”是指至少两个碱基-糖-磷酸组合的串。在一个实施例中，所述术语包括DNA和RNA。在一个实施例中，“核苷酸”是指核酸聚合物的单体单元。在一个实施例中，RNA呈以下形式：tRNA(转移RNA)、snRNA(小核RNA)、rRNA(核糖体RNA)、mRNA(信使RNA)、反义RNA、小抑制RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)和核酶。siRNA和miRNA的用途已有阐述(考迪(Caudy AA)等人，基因与发育(Genes & Devel)16：2491-96和其中所引用的参考文献)。在其它实施例中，DNA可呈质粒DNA、病毒DNA、线状DNA、或染色体DNA或这些类别DNA的衍生物形式。另外，这些DNA和RNA形式可为单链、双链、三链、或四链。在另一实施例中，所述术语也包括含有其它类型主链但相同碱基的人工核酸。在一个实施例中，人工核酸是PNA(肽核酸)。PNA含有肽主链和核苷酸碱基且在一个实施例中能够结合DNA和RNA分子二者。在另一实施例中，核苷酸经环氧丙烷修饰。在另一实施例中，通过用硫代磷酸酯键代替一或多个磷酸二酯键对核苷酸进行修饰。在另一实施例中，人工核酸含有业内已知的天然核酸的磷酸主链的任何其它变体。硫代磷酸酯核酸和PNA的使用已为所属领域的技术人员所习知，且阐述于(例如)尼尔森(Neilsen PE)，结构生物学新观点(Curr Opin Struct Biol)9：353-57；和拉兹(Raz NK)等人，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem BiophysRes Commun.)297：1075-84。核酸的产生和使用已为所属领域的技术人员所习知，且阐述于(例如)分子克隆(Molecular Cloning)，(2001)，萨姆布鲁克和拉塞尔(Russell)编辑；和酶学方法：真核细胞中的分子克隆方法(Methods in Enzymology：Methods formolecular cloning in eukaryotic cells)，(2003)，普尔丘(Purchio)和法瑞德(G.C.Fareed)。
在一个实施例中，本发明提供包含在实施本发明方法中所使用的化合物或组合物的试剂盒。在另一实施例中，本发明提供包含本发明组合物、工具、或装置的试剂盒。
在一个实施例中，“接触”是指使靶细胞与本发明的突变体HSV菌株直接接触。在另一实施例中，“接触”是指使靶细胞与本发明突变体HSV菌株间接接触。因此，在一个实施例中，本发明方法包括如下方法：使个体与突变体HSV菌株接触以通过扩散或业内已知的任何其它主动运输或被动运输过程(化合物借此在体内循环)使突变体HSV菌株与靶细胞接触。
在本发明方法的一个实施例中，突变体HSV菌株在个体血流中被携带到靶细胞。在另一实施例中，通过扩散将突变体HSV菌株携带到靶细胞。在另一实施例中，通过主动运输将突变体HSV菌株携带到靶细胞。在另一实施例中，突变体HSV菌株是以可直接接触靶细胞的方式投与到个体中。
医药组合物和投与方法
在一个实施例中，本发明方法包含投与包含突变体HSV菌株和医药上可接受的载剂的医药组合物。
在一个实施例中，“医药组合物”是指治疗有效量的活性成份(即突变体HSV菌株)与医药上可接受的载剂或稀释剂。在一个实施例中，“治疗有效量”是指对于给定病状和投与方案可提供治疗效果的量。
在一个实施例中，可通过所属领域的技术人员所习知的任何方法将含有突变体HSV菌株的医药组合物投与到个体中，例如非经肠、经粘膜、经皮、肌内、静脉内、皮内、皮下、腹膜腔内、心室内、颅内、阴道内或瘤内。
在如本发明方法和组合物中所述的另一实施例中，医药组合物是经口投与，且因此以适于经口投与的形式经调配，即以固体或液体制剂形式。适宜固体经口调配物包括片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、小药丸和其类似物。适宜液体经口调配物包括溶液、悬浮液、分散液、乳液、油状物和其类似物。在本发明的另一实施例中，将活性成份调配于胶囊中。根据此实施例，除活性化合物和惰性载剂或稀释剂外，本发明组合物也包含硬凝胶化胶囊。
在另一实施例中，所述医药组合物是通过静脉内、动脉内、或肌内注射液体制剂来投与。适宜液体调配物包括溶液、悬浮液、分散液、乳液、油状物和其类似物。在另一实施例中，所述医药组合物是经静脉内投与且因此将其调配成适于静脉内投与的形式。在另一实施例中，所述医药组合物是经动脉内投与且因此将其调配成适于动脉内投与的形式。在另一实施例中，所述医药组合物是经肌内投与且因此将其调配成适于肌内投与的形式。
在另一实施例中，所述医药组合物是经局部投与到身体表面且因此将其调配成适于局部投与的形式。适宜局部调配物包括凝胶、软膏、乳膏、洗剂、滴剂和其类似物。对于局部投与，制备突变体HSV菌株并以存于含有或不含有医药载剂的生理学上可接受的稀释剂中的溶液、悬浮液、或乳液形式施用。
在另一实施例中，本文提供的医药组合物是受控释放组合物，即组合物中的突变体HSV菌株在投与后经一段时间释放出来。受控或持续释放组合物包括存于亲脂贮藏物质(例如脂肪酸、蜡、油)中的调配物。在另一实施例中，所述组合物是立即释放组合物，即组合物中的所有突变体HSV菌株在投与后立即释放出来。
上文添加剂、赋形剂、调配物和投与方法中的每一者均代表本发明的单独实施例。
实验细节部分
实例1：HSV (gE无效) 不引起疾病
材料和实验方法(实例1-4)
病毒菌株
使用低传代数临床分离物野生型HSV-1菌株NS来产生突变体病毒。为构建HSV-1(gE无效)，用XbaI将全部gE编码序列自pCMV3gE-1切除并克隆到pSPT18中。pSPT18具有以下序列：
gaatacaagcttgcatgcctgcaggtcgactctagaggatccccgggtaccgagctcgaattccggtctccctatagtgagtcgtattaatttcgataagccagctgggcctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacggtcacagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcgggtgttggcgggtgtcggggcgcagccatgacccagtcacgtagcgatagcggagtgtatatactggcttaactatgcggcatcagagcagattgtactgagagtgcaccatatgcggtgtgaaataccgcacagatgcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgctcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgctcggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagctcactcaaaggcggtaatacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcaatgctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaaggacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacggggtctgacgctcagtggaacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgagattatcaaaaaggatcttcacctagatccttttaaattaaaaatgaagttttaaatcaatctaaagtatatatgagtaaacttggtctgacagttaccaatgcttaatcagtgaggcacctatctcagcgatctgtctatttcgttcatccatagttgcctgactccccgtcgtgtagataactacgatacgggagggcttaccatctggccccagtgctgcaatgataccgcgagacccacgctcaccggctccagatttatcagcaataaaccagccagccggaagggccgagcgcagaagtggtcctgcaactttatccgcctccatccagtctattaattgttgccgggaagctagagtaagtagttcgccagttaatagtttgcgcaacgttgttgccattgctacaggcatcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtatggcttcattcagctccggttcccaacgatcaaggcgagttacatgatcccccatgttgtgcaaaaaagcggttagctccttcggtcctccgatcgttgtcagaagtaagttggccgcagtgttatcactcatggttatggcagcactgcataattctcttactgtcatgccatccgtaagatgcttttctgtgactggtgagtactcaaccaagtcattctgagaatagtgtatgcggcgaccgagttgctcttgcccggcgtcaatacgggataataccgcgccacatagcagaactttaaaagtgctcatcattggaaaacgttcttcggggcgaaaactctcaaggatcttaccgctgttgagatccagttcgatgtaacccactcgtgcacccaactgatcttcagcatcttttactttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaacaggaaggcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaatactcatactcttcctttttcaatattattgaagcatttatcagggttattgtctcatgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaaataaacaaataggggttccgcgcacatttccccgaaaagtgccacctgacgtctaagaaaccattattatcatgacattaacctataaaaataggcgtatcacgaggccctttcgtctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacggtcacagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcgggtgttggcgggtgtcggggctggcttaactatgcggcatcagagcagattgtactgagagtgcaccatatcgacgctctcccttatgcgactcctgcattaggaagcagcccagtagtaggttgaggccgttgagcaccgccgccgcaaggaatggtgcatgcaaggagatggcgcccaacagtcccccggccacgggcctgccaccatacccacgccgaaacaagcgctcatgagcccgaagtggcgagcccgatcttccccatcggtgatgtcggcgatataggcgccagcaaccgcacctgtggcgccggtgatgccggccacgatgcgtccggcgtagaggatctggctagcgatgaccctgctgattggttcgctgaccatttccgggtgcgggacggcgttaccagaaactcagaaggttcgtccaaccaaaccgactctgacggcagtttacgagagagatgatagggtctgcttcagtaagccagatgctacacaattaggcttgtacatattgtcgttagaacgcggctacaattaatacataaccttatgtatcatacacatacgatttaggtgacactata(SEQ ID No：1)。
自氨基酸(AA)124-508切除1.1kb HpaI-BglII片段，并将HpaI位点改变成BglII位点。将在HSV ICP6启动子控制下来源于含有大肠杆菌(Escherichia coli)β-半乳糖苷酶基因(β-gal)的pD6P的4.3kb片段克隆到BglII位点中。所得载体含有ICP6::lacZ盒的374bp NS DNA序列5′和225bp 3′并使用其来构建gE无效病毒。分离出含有侧翼序列载体的XbaI片段，并将750ng XbaI片段与1.0μg NS DNA通过磷酸钙转染共转染到非洲绿猴肾细胞(Vero cell)中。移除DNA-磷酸钙混合物，并用15％甘油使细胞休克。当在30-40％的细胞中观察到细胞病变效应时，收获细胞并实施超声处理以制备病毒库。通过感染非洲绿猴肾细胞并覆盖0.5％琼脂糖、5.0％胎牛血清(FBS)、和300μg5-溴-D-吡喃半乳糖苷(X-Gal)来选择表达β-gal的重组gE无效病毒。挑选蓝色噬斑并在X-Gal琼脂糖覆盖物中纯化两次并通过限制稀释纯化一次。在5-70％蔗糖梯度上自受感染非洲绿猴肾细胞的上清液提纯病毒。
通过用1.0μg NS-gE无效DNA和1.5μg野生型gE片段(纯化自pCMV3gE-1)共转染非洲绿猴肾细胞来制备HSV-1(拯救gE无效)，pCMV3gE-1是通过用NruI消化HSV-1(NS)DNA来获得。通过使用抗gE MAb 1BA10实施免疫过氧化物酶染色来检查子代病毒以证实gE在受感染细胞表面上表达。通过限制稀释来纯化噬斑，并制备病毒库。
使病毒原液以2.0MOI在汇合非洲绿猴肾细胞(Vero cell)(非洲绿猴肾上皮细胞系)上生长。感染后24小时，在培养基中刮除细胞并在3,000xg下离心。移除差不多1mL上清液，并再悬浮细胞，超声处理3秒并分配成50mcL(微升)分液。对于模拟感染，使用未经感染细胞来制备类似分液。
小鼠侧腹感染方案
所有实验方案均经宾夕法尼亚州大学(University of Pennsylvania)动物和实验室资源IACUC委员会批准。使五周至六周龄BalbC小鼠(美国国家癌症研究所(NationalCancer Institute))适应恒定温度和光周期(12小时光照，12小时黑暗)的生物安全2级动物设施达1周。给小鼠剃毛并用脱毛乳膏(奈尔(Nair)TM)沿右侧腹(用于接种疫苗)或左侧腹(用于攻击)进行脱毛，随后用温水洗涤。第二天，经由腹膜腔内注射75mcL存于PBS中的14.3mg/ml氯胺酮和1.8mg/ml甲苯噻嗪使小鼠麻醉，随后通过在1cm2侧腹面积(距脊柱1cm的背侧)中用26号(3/8)计量注射针表面刮痕60次借助10mcL含有5×103-5×105pfu HSV的微滴进行感染(图1)。在侧腹受HSV感染的小鼠中，自一或多个脊神经节的神经元继发性扩散回皮肤导致带状损伤(图2)。通过用CO2窒息、继之颈椎脱臼宰杀小鼠。自接种后第3天开始以24小时间隔观察小鼠以记录皮肤损伤和疾病的外观和严重程度。使用用以描述损伤严重程度的标准化评分系统来使观察结果一致(图3)。
接种疫苗和攻击
对于接种疫苗，通过在右侧腹上造成刮痕借助含有HSV-1(gE无效)或无病毒细胞溶解产物(上文所述)的接种物使小鼠受感染。28天后借助含有1×105pfu HSV-1(NS)的微滴通过刮痕在相对(左)侧腹上对小鼠进行攻击。
解剖背根神经节和皮肤
取下沿脊柱右侧(用于接种HSV-1(gE无效)疫苗或HSV-1(拯救gE无效)感染分析)或左侧(用于HSV-1(NS)攻击分析)的背根神经节(DRG)，集中并置于110mcL DMEM(2.5％FBS)中并在-80℃下冷冻，直至分析。
取下接种位点处1cm2面积的皮肤。将一半样品置于含有110mcL DMEM(2.5％FBS)的管中并在-80℃下冷冻直至分析。将另一半置于含有类似样品的索引卡上并在4℃下于存于1X PBS中的4％多聚甲醛中浸没24小时，随后用1X PBS代替所述溶液。将样品保存在4℃下直至组织学分析处理。
切片、组织学和免疫组织化学
由费城儿童医院(Children′s Hospital of Philadelphia)的病理学核心设施(PathologyCore Facility)对皮肤样品实施石蜡包埋、切片和染色。使用抗HSV-1兔多克隆抗体(DAKO)针对HSV-1抗原对皮肤切片进行染色并用苏木素对比染色。
结果
通过103.5、104.5、或105.5噬斑形成单位(pfu)疫苗菌株HSV-1(gE无效)划痕使具有五只小鼠的群组侧腹感染。为与HSV-1的有毒形式进行比较，将具有五只小鼠的另一群组用105.5pfu HSV-1(拯救gE无效)侧腹感染，所述HSV-1(拯救gE无效)疫苗菌株主链的编码gE的基因已恢复。HSV-1(拯救gE无效)感染导致疾病和60％的死亡率(图4)。然而，在HSV-1(gE无效)接种疫苗后未出现疾病、病或死亡的临床体征。
另外，HSV-1(拯救gE无效)感染导致看似溃疡性和坏死性的严重原发性损伤(图5)。相比之下，HSV-1(gE无效)感染导致与模拟接种疫苗无差别的接种位点处的轻微皮肤病变。因此，在投与HSV-1(gE无效)后的所有或基本上所有皮肤病变均由刮痕接种过程本身造成。
这些发现显示，感染gE无效疱疹病毒不会引起疾病。
实例2：HSV (gE无效) 不在感觉神经元中扩散
HSV-1(拯救gE无效)感染造成严重继发性(带状疱疹样)溃疡性和坏死性损伤，所述损伤在4-5(感染后天数)dpi时首次出现(图6)。相比之下，HSV-1(gE无效)感染后未看见继发性损伤。由于沿生皮节的继发性损伤形成取决于病毒沿神经元自皮肤到神经节和随后再反向扩散的能力，因此这些结果显示疫苗不能在感觉神经元中扩散。因此，HSV(gE无效)不能引起复发感染。
实例3：HSV (gE无效) 可在皮肤细胞中复制
为测定HSV-1(gE无效)在皮肤细胞中的复制程度，使小鼠(n＝3)感染HSV-1(gE无效)或有毒HSV-1(拯救gE无效)。在接种后1、3、6、8和13天，宰杀小鼠，取下接种位点处的皮肤，并集中来自每只小鼠右侧的DRG。对均质化组织进行滴定以测定其病毒含量，揭示接种疫苗后HSV-1(gE无效)在皮肤中复制，但不及HSV-1(拯救gE无效)大量(图7)。此外，免疫细胞浸润接种HSV-1(gE无效)疫苗的皮肤，且截止第6天病毒已被清除(图8)。
这些结果显示HSV(gE无效)在皮肤中复制，且因此预期会引发宿主炎症应答。
HSV-1(拯救gE无效)的含量超过HSV-1(gE无效)4个数量级(图9)。另外，在感染HSV-1(gE无效)小鼠的DRG中未检测到传染性病毒。在神经节中不存在特征性带状模式损伤和可检测病毒证实在接种HSV-1(gE无效)疫苗后未发生神经元病毒扩散。
因此，gE不存在的HSV感染限于宿主皮肤，且免疫系统能够快速检测到病毒并将其清除。
实例4：接种HSV-1 (gE无效) 疫苗可防止野生型HSV-1感染
在接种疫苗后28天用致死剂量的105pfu WT HSV-1(NS菌株)对模拟接种疫苗或接种HSV-1(gE无效)疫苗的小鼠进行攻击。尽管100％的模拟接种疫苗的小鼠在攻击后死亡，但100％的接种HSV-1(gE无效)疫苗的小鼠历经致死攻击而存活下来(图10)。HSV-1(gE无效)的所有测试剂量(103.5、104.5、和105.5pfu)均可对抗攻击。另外，在对接种HSV-1(gE无效)疫苗的小鼠进行攻击后观察到非常少的原发性(接种位点)疾病(图11)。接种疫苗小鼠的皮肤中具有不可检测到的攻击病毒含量，比模拟接种疫苗小鼠低至少5个数量级(图12)。
与严重患病的模拟接种疫苗小鼠相比，在接种疫苗的小鼠中原发性疾病快速痊愈。为证实此观察结果，同等皮肤样品的免疫组织化学展示第3天时在接种疫苗的小鼠中存在非常少抗原且截止第6天已清除(图13)。组织学分析也揭示，接种疫苗的小鼠中免疫细胞明显浸润，显示疫苗成功起动宿主免疫系统。
与模拟接种疫苗小鼠中病毒带状疱疹样扩散导致严重生皮节损伤不同，在接种疫苗小鼠中未看见带状疱疹样疾病(图14)。另外，在接种疫苗小鼠中在粉碎的DRG中不能检测到病毒滴度，且因此，此病毒滴度较模拟接种疫苗小鼠至少低4个数量级(图15)。
实例5：接种HSV (gE无效) 疫苗可预防在随后攻击后 建立潜伏野生型HSV-1感染
材料和实验方法
自组织中回收传染性病毒
在宰杀后立即(在1、3、6、8或13dpi)取下小鼠的DRG和皮肤样品。对于每一数据点感染三只小鼠，但对来自这些小鼠的类似组织单独进行分析。将组织置于110mcL含有2.5％FBS的DMEM中并存储于-80℃下直至分析。为测定病毒滴度，解冻组织并使用用即弃研杵将其粉碎。通过在12孔盘中对汇合非洲绿猴肾细胞进行噬斑分析来定量存于50mcL连续稀释(1∶10、1∶100和1∶1000)上清液中的传染性病毒。
DRG外植体
为自潜伏受感染小鼠取出传染性病毒，自感染HSV-1(gE无效)的相同(右)侧取DRG。将来自个体小鼠的所有DRG置于12孔盘的一个孔中，所述12孔盘含有浸泡在DMEM(2.5％FBS)中的汇合非洲绿猴肾细胞。每两天更换培养基并监测细胞的细胞病变效应(CPE)迹象，其为DRG含有传染性病毒的指示。
结果
在攻击后28天，取出接种疫苗小鼠的DRG，并外植以使潜伏攻击病毒复活。在取出后15只接种疫苗小鼠中仅1只的相关神经元发生复活(图16)。
此实例和先前实例的结果显示，HSV(gE无效)可保护小鼠免于攻击后的神经元感染和免于通常伴随WT HSV感染的潜伏感染发生。
实例6：给小鼠接种HSV-1ΔgE疫苗 可交叉保护对抗HSV-2攻击
材料和实验方法
使6-8周龄的雌性Balb/C小鼠适应所述动物设施达10天。将小鼠麻醉并剃毛并通过奈尔(Nair)处理右侧腹移除毛发。第二天，给麻醉小鼠模拟接种疫苗或接种5×105pfu HSV-1ΔgE(在一个实施例中，其为gE无效形式)，此通过用26号(5/8)计量注射针刮痕60次借助10mcl(微升)接种物微滴来实施。27天后，如上将每只小鼠的相对侧腹(左侧)剃毛和脱毛。第二天(第28天)，通过刮痕接种105pfu HSV-2(菌株2.12)来攻击小鼠。观察小鼠并且每天对接种位点疾病、带状疱疹样疾病和存活进行评分。(评分：0＝无疾病＝＞4＝严重坏死性疾病)。误差棒代表平均值的标准误差(SEM)。
结果
为测试接种HSV-1ΔgE疫苗防止HSV-2疾病的能力，用野生型HSV-2经表皮攻击接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠。接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠没有一只死亡，而80％的模拟接种疫苗小鼠死亡(图17，上图)。与未接种疫苗的小鼠相比，接种疫苗的小鼠展示可快速痊愈的接种位点疾病(图17，中图)。另外，接种疫苗小鼠经保护完全免于模拟接种疫苗小鼠中所观察到的带状疱疹样疾病和死亡(图17，下图)。，
因此，接种ΔgE HSV疫苗能够保护个体以防异源HSV疾病，甚至不同物种的单纯疱疹。
实例7：接种HSV-1ΔgE疫苗可对抗HSV-1(KOS) 并抑制HSV-1潜伏建立
材料和实验方法
如先前实例中所述实施疫苗接种和疾病评价，只是使用5×105pfu HSV-1菌株KOS进行攻击。为衡量潜伏感染，在攻击后第41天宰杀小鼠，并取右侧和左侧DRG，置于DMEM/10％FBS中，用剪刀剪碎，并外植到亚汇合的非洲绿猴肾细胞单层上。每天检测培养物的噬斑形成(指示自潜伏状态复活)，持续20天。
结果
此实验测试接种HSV-1ΔgE疫苗保护小鼠免于与异源HSV-1野生型菌株有关的疾病的能力。与未接种疫苗的小鼠相比，用野生型HSV-1菌株KOS攻击的接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠展示可快速痊愈的接种位点疾病(图18，上图)。另外，接种HSV-1ΔgE疫苗可保护受HSV-1KOS攻击的小鼠完全免于带状疱疹样疾病(图18，中图)。由于HSV-1KOS感染对于小鼠并非致死的，因此在攻击后4周在模拟接种疫苗相对于接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠中使用此菌株来比较病毒自潜伏状态的复活。在模拟接种疫苗的小鼠中，来自外植DRG的HSV-1(KOS)病毒在100％小鼠(n＝10)中复活，而接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠中仅1/10(10％)展示复活(图18，下图表)，其可能为疫苗或攻击病毒潜伏感染。因此，接种HSV-1ΔgE疫苗可有效保护小鼠免于疾病和通过异源HSV病毒建立潜伏。
实例8：接种HSV-1ΔgE疫苗可对抗HSV-1阴道攻击
材料和实验方法
如实例6中所述实施疫苗接种。33天后，将于0.9％NaCl/10mM HEPES缓冲液中稀释至100mcl总体积的乙酸甲羟孕酮(2mg)(思科医药(Sicor Pharmaceuticals)公司，加利福尼亚州尔湾(Irvine CA))经皮下注射到每只小鼠的颈部中。5天后(第38天)，麻醉小鼠，用浸于PBS中的藻酸钙拭子擦拭阴道内，并通过阴道内滴注5×105pfu HSV-1(菌株NS)进行攻击。使小鼠在其笼中恢复，以俯卧姿势休息。每天观察受攻击小鼠的阴道疾病和存活情况。每天取阴道内擦拭物以用于通过在非洲绿猴肾细胞上实施病毒滴定进行的分析。
结果
测试接种HSV-1ΔgE疫苗对抗野生型HSV-1阴道攻击的能力。接种HSV-1ΔgE疫苗的所有小鼠均历经攻击而存活下来，而60％的模拟接种疫苗小鼠死亡(图19A，上图)。所有模拟接种疫苗小鼠均在阴道部位显示一些可见疾病体征；然而，接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠则未显示明显可见疾病体征(图19B)。截止阴道攻击后第1天，如在阴道擦拭物样品中所检测，接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠所具有的传染性病毒为模拟接种疫苗动物的1/100。截止攻击后第3天，在来自接种HSV-1AgE疫苗小鼠的擦拭物中未检测到传染性病毒，此值为相同天时模拟接种疫苗小鼠的1/至少30,000。另外，接种HSV-1ΔgE疫苗的小鼠的感染清除比模拟接种疫苗小鼠快接近三倍(图19A，下图)。因此，接种HSV-1ΔgE疫苗可防止死亡和与HSV-1阴道攻击有关的疾病并赋予快速清除HSV感染的能力。
实例9：经表皮、皮下、和肌内途径接种HSV-1ΔgE 疫苗均可对抗HSV-1攻击
材料和实验方法
用5×105pfu HSV-1ΔgE通过借助10mcl接种物微滴用26号(5/8)计量注射针刮痕60次、经皮下注射100mcl接种物到颈背中、或通过肌内注射100mcl接种物到右股后肌中来实施疫苗接种。
为衡量潜伏感染，在攻击后32天宰杀小鼠，并取右侧和左侧DRG，置于DMEM/10％FBS中，用剪刀剪碎，并外植到亚汇合的非洲绿猴肾细胞单层上。每天(持续15天)检测培养物的噬斑形成(指示自潜伏状态复活)。
结果
将肌内和皮下途径投与HSV-1ΔgE疫苗的功效与先前实例中所用的表皮划痕进行比较。所有疫苗接种途径均可有效保护小鼠以防HSV-1(NS)表皮攻击后死亡(图20，上图)。通过三种途径的每一种接种疫苗的小鼠在HSV-1(NS)攻击后均展示接种位点疾病，仅略微大于模拟攻击的小鼠(图20，左下图)。通过表皮划痕或肌内注射接种HSV-1ΔgE疫苗可保护小鼠完全对抗带状疱疹样疾病(图20，右下图)。攻击后，经皮下途径接种疫苗的小鼠有1/5具有数个不连续的带状疱疹样损伤，其不严重且快速消退(图20，右下图)。另外，也衡量疫苗防止潜伏感染的能力。经所有途径接种HSV-1ΔgE疫苗均可防止潜伏建立(表1)。模拟接种疫苗的小鼠显示100％复活(表1；也参见图18)。
表1.经不同途径接种HSV-1疫苗均可防止HSV潜伏。
疫苗接种途径   自潜伏状态复活
模拟           1/1
表皮划痕       0/4
肌内           0/5
皮下           1/5
因此，经表皮、肌内或皮下途径投与HSV-1ΔgE各自均可对抗野生型HSV攻击的急性疾病、突发和潜伏疾病。
实例10：经表皮划痕、皮下注射和肌内注射接种HSV-1ΔgE 疫苗可诱导中和抗体
材料和实验方法
如先前实例中所述给小鼠接种疫苗。在第21天，通过颈静脉给小鼠放血。在第28天，如上将每只小鼠的相对侧腹(左侧)剃毛和脱毛。如下对血清样品实施中和分析：在37℃下将50mcl血清稀释物(1∶10到1∶320)与5mcl 102pfu HSV-1(NS)培育1小时，并随后接种非洲绿猴肾细胞单层。
结果
衡量经表皮划痕、肌内、和皮下投与途径接种HSV-1ΔgE疫苗对于诱导中和抗体的功效。经所有三种途径给小鼠接种HSV-1ΔgE疫苗均可诱导中和抗体形成；表皮划痕和肌内途径比皮下接种疫苗产生显著较高的量(图21)。
实例11：接种HSV-1ΔgE疫苗可对抗多种异源HSV-1菌株的侧腹攻击
衡量接种HSV-1ΔgE疫苗对抗异源较高毒力野生型HSV-1菌株(F和17)的能力；疫苗接种和攻击如实例7中所述实施，只是使用不同菌株进行攻击。接种HSV-1ΔgE疫苗可完全保护小鼠免于HSV-1(NS)、HSV-1(F)和HSV-1(17)表皮攻击后死亡(图22，上图)。接种疫苗也会减少接种位点疾病，尽管HSV-1(F)攻击会在接种位点造成比HSV-1(NS)或HSV-1(17)攻击略微较多的疾病(图22，中图)。而且，接种HSV-1ΔgE疫苗可完全保护所有受HSV-1(NS)和HSV-1(17)攻击的小鼠和2/3的受HSV-1(F)攻击的小鼠免于带状疱疹样疾病；受HSV-1(F)攻击的其它小鼠具有两处小带状疱疹样损伤(图22，下图)。因此，接种HSV-1ΔgE疫苗可保护小鼠对抗多种异源HSV-1菌株。
实例12：接种HSV-1ΔgE疫苗可对抗剂量高达 1X 10 7 PFU HSV-1(NS)的侧腹攻击
衡量接种HSV-1ΔgE疫苗对抗较高剂量野生型HSV-1的能力，如实例7中所述实施疫苗接种和攻击，只是使用105、106或107pfu HSV-1(NS)较高剂量进行攻击。接种疫苗的小鼠全部完全经保护免于死亡和带状疱疹样疾病(图23，上图和下图)。接种疫苗且用105pfu HSV-1(NS)攻击的小鼠展示的接种位点疾病比模拟攻击小鼠略微严重，表明大多数疾病是由划痕(针刮痕)造成。接种HSV-1ΔgE疫苗且用106或107pfu攻击的小鼠的接种位点处疾病显著减少，与模拟接种疫苗小鼠相比其快速痊愈(中图)。
实例13：HSV-2 (gE无效) 不引起疾病
材料和实验方法
细胞和病毒
在含有热灭活10％新生牛血清(生命技术公司(Life Technologies)，盖瑟斯堡(Gaithersburg)，马里兰州(Md.))加上50微克(mcg)青霉素/ml、50mcg/ml链霉素/ml、和O.15mcg/ml两性霉素B
Figure G2007800387987D00461
(生命技术公司)的杜贝克氏改良鹰氏培养基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)中于37℃和5％CO2下培养非洲绿猴肾细胞(ATCC CCL81)。自受感染非洲绿猴肾细胞单层制备HSV-2菌株的澄清原液并存储于-80℃下直至使用。通过标准噬斑分析来测定病毒滴度。
如下引入编码HSV-2gE的1635bp HSV-2(2.12)Us8基因的碱基对(bp)369-1479缺失。将来自HSV-2(2.12)的两种PCR片段，即对应于具有拟定缺失的5′区域的658bp片段和具有拟定缺失的536bp片段3′亚克隆到pBluescript SK+多克隆位点(MCS)中。将5′侧翼区域亚克隆到pBluescript SK+MCS的KpnI和HindIII位点中，并将3′侧翼区域亚克隆到MCS的PstI和SacI位点中。此留下介于5′与3′侧翼区域之间的一段较短MCS序列，包括EcoRI和EcoRV限制位点并造成移码，由此仅表达gE的最初123个氨基酸(图24B)。将载体与HSV-2(2.12)基因组DNA共转染到非洲绿猴肾细胞中以实施同源重组。通过PCR来筛选自所得噬斑纯化的病毒粒子DNA以检测缺失纳入。
HSV-2感染的小鼠阴道模型
在病毒接种前7天和1天用2.0mg得普乐(Depo-Provera)(普强(Upjohn)，卡拉马祖市(Kalamazoo)，密执安州(MI))经皮下在颈背中对小鼠进行处理以使其动情周期同步并增强其对于HSV-2阴道感染的易感染性。用藻酸钙拭子(飞世尔科学(FisherScientific)，匹兹堡(Pittsburgh)，宾夕法尼亚州(Pa.))进行湿润和随后干燥阴道擦拭，然后将HSV-2病毒(104pfu)滴注入阴道腔中。在接种后(p.i.)14天期间每天评价动物的症状性疾病(由阴道附近脱毛和红斑来指示)。在接种后21天期间观察存活。作为感染的另一指标，收集阴道擦拭物并在非洲绿猴肾细胞上检验病毒含量。
结果
使用与HSV-1(实例1)所用类似的策略自菌株HG52构建gE无效HSV-2病毒。HSV-1(NS)gE(实例1-5)与HSV-2(HG52)gE序列72％一致且79％类似(阳性)(图24A)。另外，也构建HSV-2(拯救gE无效)菌株。
为测试HSV-2(gE无效)菌株是否会引起疾病，将104pfu(在wt病毒情形下致死)wt HSV-2和HSV-2(gE无效)菌株投与到单独小鼠群组中。预期接受wt和HSV-2(拯救gE无 效)病毒的小鼠会死亡，同时预期接受HSV-2(gE无效)菌株的小鼠会存活，且预期不会展示明显疾病体征。
实例14：接种HSV-2 (gE无效) 疫苗可防止野生型HSV-2感染
材料和实验方法
如先前实例中所述给小鼠接种HSV-2(gE无效)疫苗或模拟接种疫苗，并在28天后用致死剂量的WT HSV-2进行攻击。预期接种HSV-2(gE无效)疫苗的小鼠在攻击后不会死亡，而预期模拟接种疫苗的小鼠会死于此感染。另外，预期接种HSV-2(gE无效)疫苗会大大减少或消除wt HSV-2攻击后的原发性(接种位点)疾病。与模拟接种疫苗小鼠中阴道附近预期出现脱毛和红斑不同，在接种疫苗小鼠中预期不会观察到带状疱疹样疾病。在攻击后数天在接种疫苗小鼠中预期相同皮肤样品的免疫组织化学展示大大降低的抗原含量，此可证实上述观察。预期组织学分析会揭示，接种疫苗的小鼠展示免疫细胞明显浸润。
在另外实验中，在小鼠侧腹模型中对HSV-2(gE无效)疫苗进行测试(实例4-5)，且预期可防止HSV-2感染。
实例15：接种HSV-2 (gE无效) 疫苗对抗天竺鼠模型中 现存HSV-2生殖器感染的功效
材料和实验方法
生殖器疱疹的天竺鼠模型
在接种当天，用预湿润的藻酸钙拭子使阴道封闭膜破裂。用干燥藻酸钙拭子擦拭阴道穹窿，并用注射器和20号计量塑料导管将105.7pfu HSV-2滴注到阴道穹窿中。此剂量是亚致死量的，同时使几乎每只接种动物都感染。在急性生殖器感染期间，在p.i.14天期间每天评价动物的生殖器皮肤疾病和尿潴留。通过自0(无疾病)到4(严重疾病，特征在于大溃疡和衰弱)不等的皮肤损伤评分系统来定量疾病。在急性疾病后，基于疾病严重程度来分配动物以产生统计学类似的群组。自p.i.21-56每天对每只动物进行评分以确定外部复发疱疹性损伤的频率。
病毒排出检测
即使不存在疾病体征，天竺鼠仍本能地自阴道腔排出HSV-2。可在10-20％的来自潜伏感染天竺鼠的阴道擦拭物中检测到病毒DNA，此容许研究病毒排出频率并比较数量。在p.i.22-43天每天用顶端覆盖有藻酸钙的拭子擦拭阴道腔。使用
Figure G2007800387987D00471
DNA提取系统(凯俊(Qiagen)公司，查茨沃思(Chatsworth)，CA)自每一擦拭物样品提取DNA，包括模拟擦拭物空白作为样品污染的检测物质，并使用靶向DNA聚合酶基因的引物经PCR来定量HSV-2DNA。使用扩增单拷贝天竺鼠白蛋白基因的第二组引物对于每一样本实施单独反应以确定模板的质量和量。使用所得498bp扩增引物来规范化DNA浓度并更定量性地估计每一样本中的HSV-2负荷。比较阳性样本与使用MS HSV-2原液扩增的既定基因组等效物的一系列10倍系列稀释物。在基因扩增
Figure G2007800387987D00472
PCR系统9600(珀金埃尔默(Perkin-Elmer)公司，诺沃克(Norwalk)，Conn.)中进行反应，先在95℃下进行2min“热启动”；随后在95℃下进行35个变性周期，1min，在65℃下复性1min，和72℃下延伸1min 30s；和最后在72℃下延伸7min。通过DNA印迹来检测每一样品的扩增产物、阳性和阴性对照、和已知标准物系列。HSV-2负荷是自线性关系推断得出，所述线性关系是自与样品平行扩增的已知基因组等效物的系列稀释物的带密度确立。
测定HSV-2DNA在天竺鼠背根神经节中的拷贝数。
解剖骶骨背根神经节(每只动物6-8节)并称重，通过使用DNA微型试剂盒(凯俊(QIAGEN))来提取病毒DNA，并实施实时PCR。使用含有HSV-2gD基因序列的纯化质粒来构建每个实验的标准曲线。将数据以对于天竺鼠乳清蛋白DNA具有特异性的探针为基准进行规范化。
结果
使用天竺鼠模型来评价ISS对抗复发疱疹性疾病的功效。此模型提供与人类HSV-2感染中所见类似的天然存在复发疾病，且受潜伏感染的天竺鼠以类似于人类中所观察到的频率经阴道排出病毒。
给天竺鼠接种HSV-2(gE无效)疫苗或模拟接种疫苗并在28天后用105.7pfu HSV-2进行攻击。预期与模拟接种疫苗的动物相比接种HSV-2(gE无效)疫苗会显著降低生殖器损伤发生的频率并减少经历任何复发的动物的数量。另外，预期接种HSV-2(gE无效)疫苗会显著降低病毒排出量。
为测试接种HSV-2(gE无效)疫苗对潜伏HSV-2感染建立的影响，对wt HSV-2病毒基因组在天竺鼠DRG中的聚集进行评价。预期接种HSV-2(gE无效)疫苗会显著降低DRG中病毒基因组的数量。
预期此实例和先前实例将提供HSV-2(gE无效)疫苗可有效保护个体以防HSV-2感染和随后生殖器复活的额外证据。
实例16：向Us区域中引入额外缺失以进一步削弱 ΔgE-2疫苗菌株的顺行性扩散
为进一步衰减ΔgE-2疫苗菌株的毒力，使用与构建HSV-2Us8缺失所用类似的方法向编码gI和Us9蛋白质的Us7和Us9中引入额外缺失(图25)。构建含有两个500-1000碱基对侧翼区域的克隆用载体，每一侧翼区域与具有拟定缺失的DNA序列5′或3′同源。这两个区域的DNA是通过对HSV-2(2.12)基因组DNA实施PCR来获得。将克隆用载体与HSV-2基因组DNA共转染，由此通过同源重组将缺失纳入到病毒DNA中。通过PCR针对正确的Us缺失来筛选所得噬斑。
实例17：识别削弱ΔgE-2疫苗菌株的顺行性扩散的额外突变
使用RNA干扰(RNAi)基因沉默方法来识别与病毒扩散有关的除gE、Us7和Us9之外的基因。RNAi技术使用约20-22个碱基对双链RNA片段，其序列与靶向沉默的病毒基因相同。为靶向HSV-1或HSV-2病毒基因上的序列，使用业内已知的标准技术来合成序列与病毒RNA相同的小RNA双链片段，并通过转染技术引入到细胞中，随后用HSV-1或HSV-2野生型或突变体病毒感染。缺陷病毒的扩散是通过筛选人类表皮角质形成细胞(HaCaT)中的小噬斑来检测(柯林斯(Collins WJ)等人，在上皮细胞中表达的单纯疱疹病毒gE/gI干扰细胞到细胞的扩散(Herpes simplex virus gE/gIexpressed in epithelial cells interferes with cell-to-cell spread.)，病毒学期刊(J Virol.)，2003年2月；77(4)：2686-95)。在基因缺失研究中使用诱导小噬斑的RNAi片段靶向的基因。随后将失活突变引入到通过上文RNAi筛选方法识别的一或多种基因中以产生突变体病毒。突变体病毒的扩散特性是使用大鼠颈上神经节细胞神经元培养物(王(Wang F)、唐(Tang W)、麦格罗(McGraw HM)、班尼特(Bennett J)、安奎斯特(EnquistLW)、和弗里德曼(Friedman HM)，病毒学期刊79：13362-72，2005)和小鼠视网膜眼感染模型(王(Wang F)、唐(Tang W)、麦格罗(McGraw HM)、班尼特(Bennett J)、安奎斯特(Enquist LW)、弗里德曼(Friedman HM)，病毒学期刊79：13362-72，2005)在活体外进行评价。将识别的活体外或活体内扩散改变的病毒突变体菌株引入到含有gE、Us7或Us9缺失的菌株中以产生含有多种基因缺失的菌株以确定最佳突变组合，所述最佳突变组合接种到实验室动物中时引起很少或不引起疾病、在DRG中产生低含量病毒DNA或不产生病毒DNA、并在通过感染野生型HSV-1或HSV-2进行攻击时提供对抗疾病和病毒潜伏建立的最大保护。
在其它实验中，人们的努力集中在病毒粒子膜蛋白质上，例如糖蛋白J、G、K、和M。病毒入侵所需要的诸如糖蛋白B、D、H和L等膜糖蛋白被排出在外。如先前段落中所述对这些病毒粒子膜蛋白质进行分析。
实例18：HSV gD突变体的特征和稳定性
材料和实验方法(实例18-23)
病毒菌株
使用野生型HSV-1菌株KOS来制备gD突变体。为构建HSV-1(gD无效)，通过向质粒pRM416中插入A3C(丙氨酸到半胱氨酸)和Y38C(酪氨酸到半胱氨酸)突变来构建质粒pSC594，所述质粒pRM416含有KOS gD开放读码框，其侧翼为开放读码框的474个碱基对5′和985个碱基对3′。将HSV-1gD-无效DNA和pSC594 DNA共转染到VD60细胞中。通过在非洲绿猴肾细胞中复制来筛选重组病毒并随后进行噬斑纯化。在每次噬斑纯化后，通过在gD基因的5′端(包括突变位点)实施PCR来扩增600个碱基对。通过限制酶图谱法来筛选扩增的gD片段。引入新Sspl位点证实存在A3C突变且无Rsal位点证实存在Y38C突变。在进一步噬斑纯化后，实施DNA测序以证实存在突变。无性系在非洲绿猴肾细胞上生长到高滴度，在10％到60％蔗糖梯度上纯化，并最后实施DNA序列分析和限制性内切酶图谱法，其揭示仅剩余A3C突变。在蔗糖梯度上进一步纯化KOS-gDA3C并对全部gD基因进行测序以证实存在A3C突变和不存在额外非拟定突变。
拯救的KOS-gDA3C病毒(称为rKOS-gDA3C)是通过用KOS-gDA3C和pRM416DNA共转染非洲绿猴肾细胞来产生。
病毒原液是在补充有10％胎牛血清(FCS)的杜贝克氏最低必需培养基(Dulbecco′sminimum essential medium)(DMEM)中生长。B78-H1细胞是不允许HSV-1入侵的小鼠黑色素瘤细胞，使其在含有5％FCS的DMEM中生长。B78-H1-A10细胞(A10)和B78-H1-C10细胞(C10)分别稳定表达HVEM和连接蛋白-1，并使其在含有5％FCS和500μg/ml G418的DMEM中生长。在用gD DNA稳定转染的非洲绿猴肾细胞(VD60细胞)中繁殖gD无效病毒。使用HSV-1菌株NS(低传代临床分离物)来进行小鼠攻击研究。除非另外说明，病毒均在非洲绿猴肾细胞中生长，在蔗糖梯度上纯化并存储于-80℃下。
小鼠侧腹感染方案
所有实验方案均经宾夕法尼亚州大学动物和实验室资源IACUC委员会批准。使五至六周龄的Balb/c小鼠(查尔斯河(Charles River))适应恒定温度和光周期(12小时光照，12小时黑暗)的生物安全2级动物设施达1周。给小鼠剃毛并用脱毛乳膏(奈尔(Nair)TM)沿右侧腹(用于接种疫苗)或左侧腹(用于攻击)进行脱毛，随后用温水洗涤。第二天，经由腹膜腔内注射75mcL存于PBS中的14.3mg/ml氯胺酮和1.8mg/ml甲苯噻嗪使小鼠麻醉，随后通过在1cm2侧腹面积(距脊柱1cm的背侧)中用30号计量注射针表面刮痕60次借助10mcL含有5×105pfu HSV的微滴进行感染。自接种后第3天开始以24小时间隔观察小鼠以记录皮肤损伤和疾病的外观和严重程度。接种位点处的评分自0到5不等且带状疱疹样位点处的评分自0到10不等。每个囊泡指定一个点或若损伤汇合，则基于汇合损伤的大小指定多个点。
入侵分析
将KOS-gDA3C、rKOS-gDA3C或KOS(400pfu)与B78-H1、A10、C10或非洲绿猴肾细胞在4℃下培育一小时。使细胞升温到37℃，保持0、10、30、60或120分钟，随后洗涤移除未结合的病毒并经受柠檬酸盐缓冲液pH 3.0洗涤1分钟以使已结合但未入侵细胞的病毒失活。额外洗涤后，给细胞覆盖上存于DMEM中的0.6％低熔点琼脂，并使噬斑显影并于68小时后计数。
单步骤和多步骤生长曲线
实施MOI为3下与KOS、KOS-gDA3C或rKOS-gDA3C病毒一起培育的B78-H1、A10和C10细胞的单步骤生长曲线。在于37℃下一小时后，将细胞用柠檬酸盐缓冲液pH 3.0处理一分钟，并立即(0时间)或在2、4、8、10、12、20和24小时收集细胞和上清液。将样品冷冻-解冻一次，超声处理三次(每次持续10秒)，并在非洲绿猴肾细胞上进行滴定。以类似方式实施多步骤生长曲线，只是感染是在MOI为0.01下实施且滴度是在24、48和72小时测定。
背根神经节(DRG)中病毒DNA的实时定量PCR
收获最接近接种位点的DRG并使用凯俊扩增微型(Qia Amp-mini)DNA试剂盒(凯俊(Qiagen))来分离DNA。扩增Us9基因以定量DRG中的病毒基因组拷贝数。在50mcl体积中用最少200ng来自DRG的DNA实施PCR反应。添加50pmol正向引物5′cgacgccttaataccgactgtt(SEQ ID NO：8)和反向引物5′acagcgcgatccgacatgtc(SEQID NO：9)和15pmol塔曼(Taqman)探针5′tcgttggccgcctcgtcttcgct(SEQ ID NO：10)。每50mcl反应物添加一单位扩增塔曼金(Ampli Taq Gold)(应用生物科学(AppliedBioscience))。在ABI Prism7700序列检测器(应用生物系统(Applied Biosystems))上实施实时PCR扩增。自经纯化HSV-1(NS)DNA产生标准曲线。小鼠脂肪细胞蛋白酶(细胞持家基因)也在相同条件下自DRG DNA扩增。用于扩增的引物是正向5′gatgcagtcgaaggtgtggtta(SEQ ID NO：11)和反向5′cggtaggatgacactcgggtat(SEQ ID NO：12)，同时使用塔曼(Taqman)探针5′tctcgcgtctgtggcaatggc(SEQ ID NO：13)进行检测。随后基于鼠科动物脂肪细胞蛋白酶拷贝数将病毒DNA拷贝规范化。
结果
由于gD转录物与gI和gJ同3′末端，因此gD和gI的分子量是通过对感染WT、rKOS-gDA3C、或KOS-gDA3C病毒的细胞实施蛋白质印迹法来定值。对于所述三种病毒，蛋白质大小类似(图26A)，同时DNA测序证实KOS-gDA3C中的gJ基因完整(结果未显示)。通过使用经PCR扩增的DNA片段的SspI进行限制酶切消化证实位置3上存在半胱氨酸残基来证实gDA3C突变的稳定性。所述Sspl位点经30次传代仍存在，表明残基3上丙氨酸到半胱氨酸的改变是稳定的(图26B)。此通过每5次传代后实施DNA序列分析得以证实。
在侧腹上给小鼠刮痕接种KOS-gDA3C，并在感染后5天收获DRG以证实gDA3C突变在活体内的稳定性。自三个单独噬斑分离病毒。所有三种分离物均保留Sspl位点(图26C)，表明氨基酸3上的半胱氨酸残基存在，此通过DNA测序得以证实。
实例19：HSV gD突变体作为入侵受损的活病毒疫苗
对KOS、rKOS-gDA3C、和KOS-gDA3C至表达HVEM(A10)、连接蛋白-1(C10)、二者(非洲绿猴肾细胞)、或两受体均不表达(B78-H1)的细胞的入侵进行评价。三种病毒至非洲绿猴肾细胞的入侵相当(图27A)，然而各病毒均不能入侵B78-H1细胞(图27B)。与KOS或rKOS-gDA3C相比，KOS-gDA3C至A10细胞的入侵被减少约50％(图27C)，且至C10细胞的入侵被减少约70％(图27D)。
这些发现显示，gDA3C突变可减少由HVEM和连接蛋白-1受体二者调介的入侵。
实例20：HSV gD突变体病毒的生长曲线
通过实施MOI为3时的单步骤生长曲线来检查病毒复制。KOS、rKOS-gDA3C和KOS-gDA3C不能感染B78-H1细胞(结果未显示)。三种病毒的复制在A10细胞(图28A)和C10细胞(图28B)中相当，只是KOS-gDA3C的滴度在0时间(在一小时吸附期结束时)降低，此反映实例19中所见的入侵缺陷。
通过在MOI为0.01下感染细胞以容许多周期病毒复制来实施多步骤生长曲线。与KOS和rKOS-gDA3C相比，KOS-gDA3C的峰值滴度在72小时于A10细胞中降低约1.5log10(图28C)且在C10细胞中降低约2log10(图28D)。
实例21：HSV gD突变体毒力降低
KOS-gDA3C突变体的毒力是在小鼠侧腹模型中予以评价。用5×105PFU KOS、rKOS-gDA3C、或KOS-gDA3C将小鼠感染并对接种位点和带状疱疹样位点处的疾病进行评分。感染KOS-gDA3C的小鼠接种位点处的疾病较为不严重(图29A)且几乎无带状疱疹样疾病，在第5天30只小鼠中仅一只小鼠发生3处损伤(图29B)。显示第10天带状疱疹样位点疾病的照片(图29C)。
这些发现显示，用gD突变体疱疹病毒感染引起最少疾病。
实例22：HSV gD突变体到达DRG的能力降低
用5×105 PFU KOS、rKOS-gDA3C、或KOS-gDA3C接种小鼠且在感染后5天，收获DRG以测量病毒滴度(图30A)和病毒基因组拷贝数(图30B)，与KOS或rKOS-gDA3C相比KOS-gDA3C降低。
这些发现显示，gD突变体疱疹病毒不能到达DRG。
实例23：HSV gD突变体作为减毒活病毒疫苗
将小鼠模拟感染或用rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C感染并使其恢复。尽管rKOS-gDA3C引起大面积疾病，但所有动物都存活，此与所有小鼠感染KOS的情形相同。30天后，在相对侧腹上用HSV-1菌株NS以106PFU(约20LD50)攻击先前感染KOS-gDA3C或rKOS-gDA3C的小鼠。攻击病毒在模拟群组中在接种位点(图31A)和带状疱疹样位点(图31B)引起大面积疾病。KOS-gDA3C和rKOS-gDA3C对抗接种位点处的疾病且两种病毒全部可防止带状疱疹样疾病。感染rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C的小鼠在NS菌株攻击后没有一只死亡，而模拟感染的小鼠100％死亡(结果未显示)。
这些发现显示，KOS-gDA3C可提供与更具毒力rKOS-gDA3C所提供保护相当的对抗攻击的保护。
对先前感染KOS-gDA3C阻止WT病毒到达DRG的能力进行评价。将小鼠模拟感染或在侧腹中用5×105pfu rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C进行感染。30天后，在相对侧腹上用106pfu NS对小鼠进行攻击。攻击后5天，收获分布神经于攻击位点中的DRG。先前模拟感染的小鼠的DRG中NS病毒滴度为约6log10，而自先前感染rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C的小鼠的DRG中未回收到病毒(图31C)。
在攻击后5天，对DRG实施定量PCR。在先前模拟感染小鼠的DRG中检测到约5.8log10 HSV-1基因组拷贝，相比之下，在先前感染rKOS-gDA3C或KOS-gDA3C的小鼠中分别为3.4或3.2log10 DNA拷贝(图31D)。
这些发现显示，KOS-gDA3C在接种位点和带状疱疹样位点处引起皮肤损伤和感染DRG的毒力减弱，然而其仍然可与rKOS-gDA3C同样有效地保护小鼠对抗WTHSV-1攻击。
这些实例表明，gD中具有突变的HSV菌株可用作减毒活HSV疫苗。图32显示在病毒生命周期的每一步骤由于病毒入侵具有缺陷导致产生较少KOS-gDA3C的模型。这些步骤包括在表皮细胞(标记为E)、DRG核(标记为N)中产生、和返回到皮肤带状疱疹样位点的病毒的量。
在一个实施例中，本发明实例为接种疫苗对抗HSV感染的方法提供实验支持，所述方法通过使个体与含有一或多种失活突变的HSV突变体菌株接触来实施。
序列表
<110>宾夕法尼亚大学董事会
<120>HSV-1和HSV-2疫苗和其使用方法
<130>P-9066-US
<160>17
<170>PatentIn version 3.4
<210>1
<211>3104
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒1型
<400>1
gaatacaagc ttgcatgcct gcaggtcgac tctagaggat ccccgggtac cgagctcgaa    60
ttccggtctc cctatagtga gtcgtattaa tttcgataag ccagctgggc ctcgcgcgtt   120
tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc   180
tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt   240
gtcggggcgc agccatgacc cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatata ctggcttaac   300
tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata tgcggtgtga aataccgcac   360
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ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg   480
ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag   540
gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac   600
gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga   660
taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt   720
accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc   780
tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc   840
cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta   900
agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat   960
gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca  1020
gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct  1080
tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt  1140
acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct  1200
cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc  1260
acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa  1320
acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta  1380
tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc  1440
ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat  1500
ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta  1560
tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt  1620
aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt  1680
ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg  1740
ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc  1800
gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc  1860
gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg  1920
cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga  1980
actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta  2040
ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct  2100
tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag  2160
ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga  2220
agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat  2280
aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc  2340
attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg  2400
cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct  2460
tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc  2520
gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat  2580
atcgacgctc tcccttatgc gactcctgca ttaggaagca gcccagtagt aggttgaggc  2640
cgttgagcac cgccgccgca aggaatggtg catgcaagga gatggcgccc aacagtcccc  2700
cggccacggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg ctcatgagcc cgaagtggcg  2760
agcccgatct tccccatcgg tgatgtcggc gatataggcg ccagcaaccg cacctgtggc  2820
gccggtgatg ccggccacga tgcgtccggc gtagaggatc tggctagcga tgaccctgct  2880
gattggttcg ctgaccattt ccgggtgcgg gacggcgtta ccagaaactc agaaggttcg  2940
tccaaccaaa ccgactctga cggcagttta cgagagagat gatagggtct gcttcagtaa  3000
gccagatgct acacaattag gcttgtacat attgtcgtta gaacgcggct acaattaata  3060
cataacctta tgtatcatac acatacgatt taggtgacac tata                   3104
<210>2
<211>550
<212>PRT
<213>单纯疱疹病毒1型
<400>2
Met Asp Arg Gly Ala Val Val Gly Phe Leu Leu Gly Val Cys Val Val
1               5                   10                  15
Ser Cys Leu Ala Gly Thr Pro Lys Thr Ser Trp Arg Arg Val Ser Val
            20                  25                  30
Gly Glu Asp Val Ser Leu Leu Pro Ala Pro Gly Pro Thr Gly Arg Gly
        35                  40                  45
Pro Thr Gln Lys Leu Leu Trp Ala Val Glu Pro Leu Asp Gly Cys Gly
    50                  55                  60
Pro Leu His Pro Ser Trp Val Ser Leu Met Pro Pro Lys Gln Val Pro
65                  70                  75                  80
Glu Thr Val Val Asp Ala Ala Cys Met Arg Ala Pro Val Pro Leu Ala
                85                  90                  95
Met Ala Tyr Ala Pro Pro Ala Pro Ser Ala Thr Gly Gly Leu Arg Thr
            100                 105                 110
Asp Phe Val Trp Gln Glu Arg Ala Ala Val Val Asn Arg Ser Leu Val
        115                 120                 125
Ile His Gly Val Arg Glu Thr Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Val
    130                 135                 140
Gly Asp Ile Lys Asp Pro Ala Arg Gln Val Ala Ser Val Val Leu Val
145                 150                 155                 160
Val Gln Pro Ala Pro Val Pro Thr Pro Pro Pro Thr Pro Ala Asp Tyr
                165                 170                 175
Asp Glu Asp Asp Asn Asp Glu Gly Glu Asp Glu Ser Leu Ala Gly Thr
            180                 185                 190
Pro Ala Ser Gly Thr Pro Arg Leu Pro Pro Pro Pro Ala Pro Pro Arg
        195                 200                 205
Ser Trp Pro Ser Ala Pro Glu Val Ser His Val Arg Gly Val Thr Val
    210                 215                 220
Arg Met Glu Thr Pro Glu Ala Ile Leu Phe Ser Pro Gly Glu Thr Phe
225                 230                 235                 240
Ser Thr Asn Val Ser Ile His Ala Ile Ala His Asp Asp Gln Thr Tyr
                245                 250                 255
Ser Met Asp Val Val Trp Leu Arg Phe Asp Val Pro Thr Ser Cys Ala
            260                 265                 270
Glu Met Arg Ile Tyr Glu Ser Cys Leu Tyr His Pro Gln Leu Pro Glu
        275                 280                 285
Cys Leu Ser Pro Ala Asp Ala Pro Cys Ala Ala Ser Thr Trp Thr Ser
    290                 295                 300
Arg Leu Ala Val Arg Ser Tyr Ala Gly Cys Ser Arg Thr Asn Pro Pro
305                 310                 315                 320
Pro Arg Cys Ser Ala Glu Ala His Met Glu Pro Val Pro Gly Leu Ala
                325                 330                 335
Trp Gln Ala Ala Ser Val Asn Leu Glu Phe Arg Asp Ala Ser Pro Gln
            340                 345                 350
His Ser Gly Leu Tyr Leu Cys Val Val Tyr Val Asn Asp His Ile His
        355                 360                 365
Ala Trp Gly His Ile Thr Ile Ser Thr Ala Ala Gln Tyr Arg Asn Ala
    370                 375                 380
Val Val Glu Gln Pro Leu Pro Gln Arg Gly Ala Asp Leu Ala Glu Pro
385                 390                 395                 400
Thr His Pro His Val Gly Ala Pro Pro His Ala Pro Pro Thr His Gly
                405                 410                 415
Ala Leu Arg Leu Gly Ala Val Met Gly Ala Ala Leu Leu Leu Ser Ala
            420                 425                 430
Leu Gly Leu Ser Val Trp Ala Cys Met Thr Cys Trp Arg Arg Arg Ala
        435                 440                 445
Trp Arg Ala Val Lys Ser Arg Ala Ser Gly Lys Gly Pro Thr Tyr Ile
    450                 455                 460
Arg Val Ala Asp Ser Glu Leu Tyr Ala Asp Trp Ser Ser Asp Ser Glu
465                 470                 475                 480
Gly Glu Arg Asp Gln Val Pro Trp Leu Ala Pro Pro Glu Arg Pro Asp
                485                 490                 495
Ser Pro Ser Thr Asn Gly Ser Gly Phe Glu Ile Leu Ser Pro Thr Ala
            500                 505                 510
Pro Ser Val Tyr Pro Arg Ser Asp Gly His Gln Ser Arg Arg Gln Leu
        515                 520                 525
Thr Thr Phe Gly Ser Gly Arg Pro Asp Arg Arg Tyr Ser Gln Ala Ser
    530                 535                 540
Asp Ser Ser Val Phe Trp
545                 550
<210>3
<211>1653
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒
<400>3
atggatcgcg gggcggtggt ggggtttctt ctcggtgttt gtgttgtatc gtgcttggcg    60
ggaacgccca aaacgtcctg gagacgggtg agtgtcggcg aggacgtttc gttgcttcca   120
gctccggggc ctacggggcg cggcccgacc cagaaactac tatgggccgt ggaacccctg   180
gatgggtgcg gccccttaca cccgtcgtgg gtctcgctga tgccccccaa gcaggtgccc   240
gagacggtcg tggatgcggc gtgcatgcgc gctccggtcc cgctggcgat ggcgtacgcc   300
cccccggccc catctgcgac cgggggtcta cgaacggact tcgtgtggca ggagcgcgcg   360
gccgtggtta accggagtct ggttattcac ggggtccgag agacggacag cggcctgtat   420
accctgtccg tgggcgacat aaaggacccg gctcgccaag tggcctcggt ggtcctggtg   480
gtgcaaccgg ccccagttcc gaccccaccc ccgaccccag ccgattacga cgaggatgac   540
aatgacgagg gcgaggacga aagtctcgcc ggcactcccg ccagcgggac cccccggctc   600
ccgcctcccc ccgccccccc gaggtcttgg cccagcgccc ccgaagtctc acatgtgcgt   660
ggggtgaccg tgcgtatgga gactccggaa gctatcctgt tttcccccgg ggagacgttc   720
agcacgaacg tctccatcca tgccatcgcc cacgacgacc agacctactc catggacgtc   780
gtctggttga ggttcgacgt gccgacctcg tgtgccgaga tgcgaatata cgaatcgtgt   840
ctgtatcacc cgcagctccc agaatgtctg tccccggccg acgcgccgtg cgccgcgagt   900
acgtggacgt ctcgcctggc cgtccgcagc tacgcggggt gttccagaac aaacccccca   960
ccgcgctgtt cggccgaggc tcacatggag cccgtcccgg ggctggcgtg gcaggcggcc  1020
tccgtcaatc tggagttccg ggacgcgtcc ccacaacact ccggcctgta tctgtgtgtg  1080
gtgtacgtca acgaccatat tcacgcctgg ggccacatta ccatcagcac cgcggcgcag  1140
taccggaacg cggtggtgga acagcccctc ccacagcgcg gcgcggattt ggccgagccc  1200
acccacccgc acgtcggggc ccctccccac gcgcccccaa cccacggcgc cctgcggtta  1260
ggggcggtga tgggggccgc cctgctgctg tctgcactgg ggttgtcggt gtgggcgtgt  1320
atgacctgtt ggcgcaggcg tgcctggcgg gcggttaaaa gcagggcctc gggtaagggg  1380
cccacgtaca ttcgcgtggc cgacagcgag ctgtacgcgg actggagctc ggacagcgag  1440
ggagaacgcg accaggtccc gtggctggcc cccccggaga gacccgactc tccctccacc  1500
aatggatccg gctttgagat cttatcacca acggctccgt ctgtataccc ccgtagcgat  1560
gggcatcaat ctcgccgcca gctcacaacc tttggatccg gaaggcccga tcgccgttac  1620
tcccaggcct ccgattcgtc cgtcttctgg taa                               1653
<210>4
<211>552
<212>PRT
<213>单纯疱疹病毒
<400>4
Met Asp Arg Gly Ala Val Val Gly Phe Leu Leu Gly Val Cys Val Val
1               5                   10                  15
Ser Cys Leu Ala Gly Thr Pro Lys Thr Ser Trp Arg Arg Val Ser Val
            20                  25                  30
Gly Glu Asp Val Ser Leu Leu Pro Ala Pro Gly Pro Thr Gly Arg Gly
        35                  40                  45
Pro Thr Gln Lys Leu Leu Trp Ala Val Glu Pro Leu Asp Gly Cys Gly
    50                  55                  60
Pro Leu His Pro Ser Trp Val Ser Leu Met Pro Pro Lys Gln Val Pro
65                  70                  75                  80
Glu Thr Val Val Asp Ala Ala Cys Met Arg Ala Pro Val Pro Leu Ala
                85                  90                  95
Met Ala Tyr Ala Pro Pro Ala Pro Ser Ala Thr Gly Gly Leu Arg Thr
            100                 105                 110
Asp Phe Val Trp Gln Glu Arg Ala Ala Val Val Asn Arg Ser Leu Val
        115                 120                 125
Ile Tyr Gly Val Arg Glu Thr Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Val
    130                 135                 140
Gly Asp Ile Lys Asp Pro Ala Arg Gln Val Ala Ser Val Val Leu Val
145                 150                 155                 160
Val Gln Pro Ala Pro Val Pro Thr Pro Pro Pro Thr Pro Ala Asp Tyr
                165                 170                 175
Asp Glu Asp Asp Asn Asp Glu Gly Glu Gly Glu Asp Glu Ser Leu Ala
            180                 185                 190
Gly Thr Pro Ala Ser Gly Thr Pro Arg Leu Pro Pro Ser Pro Ala Pro
        195                 200                 205
Pro Arg Ser Trp Pro Ser Ala Pro Glu Val Ser His Val Arg Gly Val
    210                 215                 220
Thr Val Arg Met Glu Thr Pro Glu Ala Ile Leu Phe Ser Pro Gly Glu
225                 230                 235                 240
Ala Phe Ser Thr Asn Val Ser Ile His Ala Ile Ala His Asp Asp Gln
                245                 250                 255
Thr Tyr Thr Met Asp Val Val Trp Leu Arg Phe Asp Val Pro Thr Ser
            260                 265                 270
Cys Ala Glu Met Arg Ile Tyr Glu Ser Cys Leu Tyr His Pro Gln Leu
        275                 280                 285
Pro Glu Cys Leu Ser Pro Ala Asp Ala Pro Cys Ala Ala Ser Thr Trp
    290                 295                 300
Thr Ser Arg Leu Ala Val Arg Ser Tyr Ala Gly Cys Ser Arg Thr Asn
305                 310                 315                 320
Pro Pro Pro Arg Cys Ser Ala Glu Ala His Met Glu Pro Phe Pro Gly
                325                 330                 335
Leu Ala Trp Gln Ala Ala Ser Val Asn Leu Glu Phe Arg Asp Ala Ser
            340                 345                 350
Pro Gln His Ser Gly Leu Tyr Leu Cys Val Val Tyr Val Asn Asp His
        355                 360                 365
Ile His Ala Trp Gly His Ile Thr Ile Asn Thr Ala Ala Gln Tyr Arg
    370                 375                 380
Asn Ala Val Val Glu Gln Pro Leu Pro Gln Arg Gly Ala Asp Leu Ala
385                 390                 395                 400
Glu Pro Thr His Pro His Val Gly Ala Pro Pro His Ala Pro Pro Thr
                405                 410                 415
His Gly Ala Leu Arg Leu Gly Ala Val Met Gly Ala Ala Leu Leu Leu
            420                 425                 430
Ser Ala Leu Gly Leu Ser Val Trp Ala Cys Met Thr Cys Trp Arg Arg
        435                 440                 445
Arg Ala Trp Arg Ala Val Lys Ser Arg Ala Ser Gly Lys Gly Pro Thr
    450                 455                 460
Tyr Ile Arg Val Ala Asp Ser Glu Leu Tyr Ala Asp Trp Ser Ser Asp
465                 470                 475                 480
Ser Glu Gly Glu Arg Asp Gln Val Pro Trp Leu Ala Pro Pro Glu Arg
                485                 490                 495
Pro Asp Ser Pro Ser Thr Asn Gly Ser Gly Phe Glu Ile Leu Ser Pro
            500                 505                 510
Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Arg Ser Asp Gly His Gln Ser Arg Arg
        515                 520                 525
Gln Leu Thr Thr Phe Gly Ser Gly Arg Pro Asp Arg Arg Tyr Ser Gln
    530                 535                 540
Ala Ser Asp Ser Ser Val Phe Trp
545                 550
<210>5
<211>1659
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒
<400>5
atggatcgcg gggcggtggt ggggtttctt ctcggtgttt gtgttgtatc gtgcttggcg   60
ggaacgccca aaacgtcctg gagacgggtg agtgtcggcg aggacgtttc gttgctacca  120
gctccggggc ctacggggcg cggcccgacc cagaaactac tatgggccgt ggaacccctg  180
gatgggtgcg gccccttaca cccgtcgtgg gtctcgctga tgccccccaa gcaggtaccc  240
gagacggtcg tggatgcggc gtgcatgcgc gctccggtcc cgctggcgat ggcatacgcc  300
cccccggccc catctgcgac cgggggtcta cggacggact tcgtgtggca ggagcgcgcg  360
gccgtggtta accggagtct ggttatttac ggggtccgag agacggacag cggcctgtat  420
accctgtctg tgggcgacat aaaggacccg gctcgccaag tggcctcggt ggtcctggtg  480
gtgcaaccgg ccccagttcc gactccaccc ccgaccccag ccgattacga cgaggatgac  540
aatgacgagg gcgagggcga ggacgaaagt ctagccggca ctcccgccag cgggaccccc  600
cggctcccgc cttcccccgc ccccccgagg tcttggccca gcgcccccga agtctcacac  660
gtgcgtgggg tgaccgtgcg tatggagact ccggaagcta tcctgttttc ccccggggag  720
gcgtttagca cgaacgtctc catccatgcc atcgcccacg acgaccagac ctacaccatg  780
gacgtcgtct ggttgaggtt cgacgtgccg acctcgtgtg ccgagatgcg aatatacgaa  840
tcgtgtctgt atcatccgca gctcccagag tgtctgtccc cggccgacgc tccgtgcgcc  900
gcgagtacgt ggacgtctcg cctggccgtc cgcagctacg cggggtgttc cagaacaaac  960
cccccgccgc gctgttcggc cgaggctcac atggagccct tcccggggct ggcgtggcag  1020
gcggcctcag tcaatctgga gttccgggac gcgtccccac aacactccgg gctgtatctg  1080
tgcgtggtgt acgtcaacga ccatattcac gcatggggcc acattaccat caacaccgcg  1140
gcgcagtacc ggaacgcggt ggtggaacag cccctcccac agcgcggcgc ggatttggcc  1200
gagcccaccc acccgcacgt cggggcccct ccccacgcgc ccccaaccca cggcgccctg  1260
cggttagggg cggtgatggg ggccgccctg ctgctgtctg cgctggggtt gtcggtgtgg  1320
gcgtgtatga cctgttggcg caggcgtgcc tggcgggcgg ttaaaagcag ggcctcgggt  1380
aaggggccca cgtacattcg cgtggccgac agcgagctgt acgcggactg gagctcggac  1440
agcgagggag aacgcgacca ggtcccgtgg ctggcccccc cggagagacc cgactctccc  1500
tccaccaatg gatccggctt tgagatctta tcaccaacgg ctccgtctgt atacccccgt  1560
agcgatgggc atcaatctcg ccgccagctc acaacctttg gatccggaag gcccgatcgc  1620
cgttactccc aggcctccga ttcgtccgtc ttctggtaa                         1659
<210>6
<211>545
<212>PRT
<213>单纯疱疹病毒2型
<400>6
Met Ala Arg Gly Ala Gly Leu Val Phe Phe Val Gly Val Trp Val Val
1               5                   10                  15
Ser Cys Leu Ala Ala Ala Pro Arg Thr Ser Trp Lys Arg Val Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Glu Asp Val Val Leu Leu Pro Ala Pro Ala Glu Arg Thr Arg Ala
        35                  40                  45
His Lys Leu Leu Trp Ala Ala Glu Pro Leu Asp Ala Cys Gly Pro Leu
    50                  55                  60
Arg Pro Ser Trp Val Ala Leu Trp Pro Pro Arg Arg Val Leu Glu Thr
65                  70                  75                  80
Val Val Asp Ala Ala Cys Met Arg Ala Pro Glu Pro Leu Ala Ile Ala
                85                  90                  95
Tyr Ser Pro Pro Phe Pro Ala Gly Asp Glu Gly Leu Tyr Ser Glu Leu
            100                 105                 110
Ala Trp Arg Asp Arg Val Ala Val Val Asn Glu Ser Leu Val Ile Tyr
        115                 120                 125
Gly Ala Leu Glu Thr Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Val Val Gly
    130                 135                 140
Leu Ser Asp Glu Ala Arg Gln Val Ala Ser Val Val Leu Val Val Glu
145                 150                 155                 160
Pro Ala Pro Val Pro Thr Pro Thr Pro Asp Asp Tyr Asp Glu Glu Asp
                165                 170                 175
Asp Ala Gly Val Thr Asn Ala Arg Arg Ser Ala Phe Pro Pro Gln Pro
            180                 185                 190
Pro Pro Arg Arg Pro Pro Val Ala Pro Pro Thr His Pro Arg Val Ile
        195                 200                 205
Pro Glu Val Ser His Val Arg Gly Val Thr Val His Met Glu Thr Leu
    210                 215                 220
Glu Ala Ile Leu Phe Ala Pro Gly Glu Thr Phe Gly Thr Asn Val Ser
225                 230                 235                 240
Ile His Ala Ile Ala His Asp Asp Gly Pro Tyr Ala Met Asp Val Val
                245                 250                 255
Trp Met Arg Phe Asp Val Pro Ser Ser Cys Ala Asp Met Arg Ile Tyr
            260                 265                 270
Glu Ala Cys Leu Tyr His Pro Gln Leu Pro Glu Cys Leu Ser Pro Ala
        275                 280                 285
Asp Ala Pro Cys Ala Val Ser Ser Trp Ala Tyr Arg Leu Ala Val Arg
    290                 295                 300
Ser Tyr Ala Gly Cys Ser Arg Thr Thr Pro Pro Pro Arg Cys Phe Ala
305                 310                 315                 320
Glu Ala Arg Met Glu Pro Val Pro Gly Leu Ala Trp Leu Ala Ser Thr
                325                 330                 335
Val Asn Leu Glu Phe Gln His Ala Ser Pro Gln His Ala Gly Leu Tyr
            340                 345                 350
Leu Cys Val Val Tyr Val Asp Asp His Ile His Ala Trp Gly His Met
        355                 360                 365
Thr Ile Ser Thr Ala Ala Gln Tyr Arg Asn Ala Val Val Glu Gln His
    370                 375                 380
Leu Pro Gln Arg Gln Pro Glu Pro Val Glu Pro Thr Arg Pro His Val
385                 390                 395                 400
Arg Ala Pro His Pro Ala Pro Ser Ala Arg Gly Pro Leu Arg Leu Gly
                405                 410                 415
Ala Val Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Ser Ala
            420                 425                 430
Trp Ala Cys Met Thr Cys Trp Arg Arg Arg Ser Trp Arg Ala Val Lys
        435                 440                 445
Ser Arg Ala Ser Ala Thr Gly Pro Thr Tyr Ile Arg Val Ala Asp Ser
    450                 455                 460
Glu Leu Tyr Ala Asp Trp Ser Ser Asp Ser Glu Gly Glu Arg Asp Gly
465                 470                 475                 480
Ser Leu Trp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Pro Asp Ser Pro Ser Thr Asn
                485                 490                 495
Gly Ser Gly Phe Glu Ile Leu Ser Pro Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro
            500                 505                 510
His Ser Glu Gly Arg Lys Ser Arg Arg Pro Leu Thr Thr Phe Gly Ser
        515                 520                 525
Gly Ser Pro Gly Arg Arg His Ser Gln Ala Ser Tyr Pro Ser Val Leu
    530                 535                 540
Trp
545
<210>7
<211>1638
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒
<400>7
atggctcgcg gggccgggtt ggtgtttttt gttggagttt gggtcgtatc gtgcctggcg     60
gcagcaccca gaacgtcctg gaaacgggta acctcgggcg aggacgtggt gttgcttccg    120
gcgcccgcgg aacgcacccg ggcccacaaa ctactgtggg ccgcggaacc cctggatgcc    180
tgcggtcccc tgcgcccgtc gtgggtggcg ctgtggcccc cccgacgggt gctcgagacg    240
gtcgtggatg cggcgtgcat gcgcgccccg gaaccgctcg ccatagcata cagtcccccg    300
ttccccgcgg gcgacgaggg actgtattcg gagttggcgt ggcgcgatcg cgtagccgtg    360
gtcaacgaga gtctggtcat ctacggggcc ctggagacgg acagcggtct gtacaccctg    420
tccgtggtcg gcctaagcga cgaggcgcgc caagtggcgt cggtggttct ggtcgtggag    480
cccgcccctg tgccgacccc gacccccgac gactacgacg aagaagacga cgcgggcgtg    540
acgaacgcac gccggtcagc gttccccccc caaccccccc cccgtcgtcc ccccgtcgcc   600
cccccgacgc accctcgtgt tatccccgag gtgtcccacg tgcgcggggt aacggtccat   660
atggagaccc tggaggccat tctgtttgcc cccggggaga cgtttgggac gaacgtctcc   720
atccacgcca ttgcccacga cgacggtccg tacgccatgg acgtcgtctg gatgcggttt   780
gacgtgccgt cctcgtgcgc cgatatgcgg atctacgaag cttgtctgta tcacccgcag   840
cttccagagt gtctatctcc ggccgacgcg ccgtgcgccg taagttcctg ggcgtaccgc   900
ctggcggtcc gcagctacgc cggctgttcc aggactacgc ccccgccgcg atgttttgcc   960
gaggctcgca tggaaccggt cccggggttg gcgtggctgg cctccaccgt caatctggaa  1020
ttccagcacg cctcccccca gcacgccggc ctctacctgt gcgtggtgta cgtggacgat  1080
catatccacg cctggggcca catgaccatc agcaccgcgg cgcagtaccg gaacgcggtg  1140
gtggaacagc acctccccca gcgccagccc gagcccgtcg agcccacccg cccgcacgtg  1200
agagcccccc atcccgcgcc ctccgcgcgc ggcccgctgc gcctcggggc ggtgctgggg  1260
gcggccctgt tgctggccgc cctcgggctg tccgcgtggg cgtgcatgac ctgctggcgc  1320
aggcgctcct ggcgggcggt taaaagccgg gcctcggcga cgggccccac ttacattcgc  1380
gtggcggaca gcgagctgta cgcggactgg agttcggaca gcgaggggga gcgcgacggg  1440
tccctgtggc aggaccctcc ggagagaccc gactctccct ccacaaatgg atccggcttt  1500
gagatcttat caccaacggc tccgtctgta tacccccata gcgaggggcg taaatctcgc  1560
cgcccgctca ccacctttgg ttcgggaagc ccgggccgtc gtcactccca ggcctcctat  1620
ccgtccgtcc tctggtaa                                                1638
<210>8
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>8
cgacgcctta ataccgactg tt                                           22
<210>9
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>9
acagcgcgat ccgacatgtc                                              20
<210>10
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>10
tcgttggccg cctcgtcttc gct    23
<210>11
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>11
gatgcagtcg aaggtgtggt ta     22
<210>12
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>12
cggtaggatg acactcgggt at     22
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>13
tctcgcgtct gtggcaatgg c      21
<210>14
<211>392
<212>PRT
<213>单纯疱疹病毒1型
<400>14
Met Gly Gly Thr Ala Ala Arg Leu Gly Ala Val Ile Leu Phe Val Val
1               5                   10                  15
Ile Val Gly Leu His Gly Val Arg Gly Lys Tyr Ala Leu Ala Asp Ala
            20                  25                  30
Ser Leu Lys Met Ala Asp Pro Asn Arg Phe Arg Gly Lys Asp Leu Pro
        35                  40                  45
Val Leu Asp Gln Leu Thr Asp Pro Pro Gly Val Arg Arg Val Tyr His
    50                  55                  60
Ile Gln Ala Gly Leu Pro Asp Pro Phe Gln Pro Pro Ser Leu Pro Ile
65                  70                  75                  80
Thr Val Tyr Tyr Ala Val Leu Glu Arg Ala Cys Arg Ser Val Leu Leu
                85                  90                  95
Asn Ala Pro Ser Glu Ala Pro Gln Ile Val Arg Gly Ala Ser Glu Asp
            100                 105                 110
Val Arg Lys Gln Pro Tyr Asn Leu Thr Ile Ala Trp Phe Arg Met Gly
        115                 120                 125
Gly Asn Cys Ala Ile Pro Ile Thr Val Met Glu Tyr Thr Glu Cys Ser
    130                 135                 140
Tyr Asn Lys Ser Leu Gly Ala Cys Pro Ile Arg Thr Gln Pro Arg Trp
145                 150                 155                 160
Asn Tyr Tyr Asp Ser Phe Ser Ala Val Ser Glu Asp Asn Leu Gly Phe
                165                 170                 175
Leu Met His Ala Pro Ala Phe Glu Thr Ala Gly Thr Tyr Leu Arg Leu
            180                 185                 190
Val Lys Ile Asn Asp Trp Thr Glu Ile Thr Gln Phe Ile Leu Glu His
        195                 200                 205
Arg Ala Lys Gly Ser Cys Lys Tyr Ala Leu Pro Leu Arg Ile Pro Pro
    210                 215                 220
Ser Ala Cys Leu Ser Pro Gln Ala Tyr Gln Gln Gly Val Thr Val Asp
225                 230                 235                 240
Ser Ile Gly Met Leu Pro Arg Phe Ile Pro Glu Asn Gln Arg Thr Val
                245                 250                 255
Ala Val Tyr Ser Leu Lys Ile Ala Gly Trp His Gly Pro Lys Ala Pro
            260                 265                 270
Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Pro Pro Glu Leu Ser Glu Thr Pro Asn Ala
        275                 280                 285
Thr Gln Pro Glu Leu Ala Pro Glu Asp Pro Glu Asp Ser Ala Leu Leu
    290                 295                 300
Glu Asp Pro Val Gly Thr Val Ala Pro Gln Ile Pro Pro Asn Trp His
305                 310                 315                 320
Ile Pro Ser Ile Gln Asp Ala Ala Thr Pro Tyr His Pro Pro Ala Thr
                325                 330                 335
Pro Asn Asn Met Gly Leu Ile Ala Gly Ala Val Gly Gly Ser Leu Leu
            340                 345                 350
Ala Ala Leu Val Ile Cys Gly Ile Val Tyr Trp Met His Arg Arg Thr
        355                 360                 365
Arg Lys Ala Pro Lys Arg lle Arg Leu Pro His Ile Arg Glu Asp Asp
    370                 375                 380
Gln Pro Ser Ser His Gln Pro Leu
385                 390
<210>15
<211>1608
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒1型
<400>15
gtggccccgg cccccaacaa aaatcacggt agcccggccg tgtgacacta tcgtccatac   60
cgaccacacc gacgaacccc taagggggag gggccatttt acgaggagga ggggtataac  120
aaagtctgtc tttaaaaagc aggggttagg gagttgttcg gtcataagct tcagcgcgaa  180
cgaccaacta ccccgatcat cagttatcct taaggtctct tttgtgtggt gcgttccggt  240
atggggggga ctgccgccag gttgggggcc gtgattttgt ttgtcgtcat agtgggcctc  300
catggggtcc gcggcaaata tgccttggcg gatgcctctc tcaagatggc cgaccccaat  360
cgctttcgcg gcaaagacct tccggtcctg gaccagctga ccgaccctcc gggggtccgg  420
cgcgtgtacc acatccaggc gggcctaccg gacccgttcc agccccccag cctcccgatc  480
acggtttact acgccgtgtt ggagcgcgcc tgccgcagcg tgctcctaaa cgcaccgtcg  540
gaggcccccc agattgtccg cggggcctcc gaagacgtcc ggaaacaacc ctacaacctg  600
accatcgctt ggtttcggat gggaggcaac tgtgctatcc ccatcacggt catggagtac  660
accgaatgct cctacaacaa gtctctgggg gcctgtccca tccgaacgca gccccgctgg  720
aactactatg acagcttcag cgccgtcagc gaggataacc tggggttcct gatgcacgcc  780
cccgcgtttg agaccgccgg cacgtacctg cggctcgtga agataaacga ctggacggag  840
attacacagt ttatcctgga gcaccgagcc aagggctcct gtaagtacgc cctcccgctg  900
cgcatccccc cgtcagcctg cctctccccc caggcctacc agcagggggt gacggtggac  960
agcatcggga tgctgccccg cttcatcccc gagaaccagc gcaccgtcgc cgtatacagc 1020
ttgaagatcg ccgggtggca cgggcccaag gccccataca cgagcaccct gctgcccccg 1080
gagctgtccg agacccccaa cgccacgcag ccagaactcg ccccggaaga ccccgaggat  1140
tcggccctct tggaggaccc cgtggggacg gtggcgccgc aaatcccacc aaactggcac  1200
atcccgtcga tccaggacgc cgcgacgcct taccatcccc cggccacccc gaacaacatg  1260
ggcctgatcg ccggcgcggt gggcggcagt ctcctggcag ccctggtcat ttgcggaatt  1320
gtgtactgga tgcaccgccg cactcggaaa gccccaaagc gcatacgcct cccccacatc  1380
cgggaagacg accagccgtc ctcgcaccag cccttgtttt actagatacc cccccttaat  1440
gggtgcgggg gggtcaggtc tgcggggttg ggatgggacc ttaactccat ataaagcgag  1500
tctggaaggg gggaaaggcg gacagtcgat aagtcggtag cgggggacgc gcacctgttc  1560
cgcctgtcgc acccacagct ttttcgcgaa ccgtcccgtt ttcgggat               1608
<210>16
<211>393
<212>PRT
<213>单纯疱疹病毒2型
<400>16
Met Gly Arg Leu Thr Ser Gly Val Gly Thr Ala Ala Leu Leu Val Val
1               5                   10                  15
Ala Val Gly Leu Arg Val Val Cys Ala Lys Tyr Ala Leu Ala Asp Pro
            20                  25                  30
Ser Leu Lys Met Ala Asp Pro Asn Arg Phe Arg Gly Lys Asn Leu Pro
        35                  40                  45
Val Leu Asp Gln Leu Thr Asp Pro Pro Gly Val Lys Arg Val Tyr His
    50                  55                  60
Ile Gln Pro Ser Leu Glu Asp Pro Phe Gln Pro Pro Ser Ile Pro Ile
65                  70                  75                  80
Thr Val Tyr Tyr Ala Val Leu Glu Arg Ala Cys Arg Ser Val Leu Leu
                85                  90                  95
His Ala Pro Ser Glu Ala Pro Gln Ile Val Arg Gly Ala Ser Asp Glu
            100                 105                 110
Ala Arg Lys His Thr Tyr Asn Leu Thr Ile Ala Trp Tyr Arg Met Gly
        115                 120                 125
Asp Asn Cys Ala Ile Pro Ile Thr Val Met Glu Tyr Thr Glu Cys Pro
    130                 135                 140
Tyr Asn Lys Ser Leu Gly Val Cys Pro Ile Arg Thr Gln Pro Arg Trp
145                 150                 155                 160
Ser Tyr Tyr Asp Ser Phe Ser Ala Val Ser Glu Asp Asn Leu Gly Phe
                165                 170                 175
Leu Met His Ala Pro Ala Phe Glu Thr Ala Gly Thr Tyr Leu Arg Leu
            180                 185                 190
Val Lys Ile Asn Asp Trp Thr Glu Ile Thr Gln Phe Ile Leu Glu His
        195                 200                 205
Arg Ala Arg Ala Ser Cys Lys Tyr Ala Leu Pro Leu Arg Ile Pro Pro
    210                 215                 220
Ala Ala Cys Leu Thr Ser Lys Ala Tyr Gln Gln Gly Val Thr Val Asp
225                 230                 235                 240
Ser Ile Gly Met Leu Pro Arg Phe Ile Pro Glu Asn Gln Arg Thr Val
                245                 250                 255
Ala Leu Tyr Ser Leu Lys Ile Ala Gly Trp His Gly Pro Lys Pro Pro
            260                 265                 270
Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Pro Pro Glu Leu Ser Asp Thr Thr Asn Ala
        275                 280                 285
Thr Gln Pro Glu Leu Val Pro Glu Asp Pro Glu Asp Ser Ala Leu Leu
    290                 295                 300
Glu Asp Pro Ala Gly Thr Val Ser Ser Gln Ile Pro Pro Asn Trp His
305                 310                 315                 320
Ile Pro Ser Ile Gln Asp Val Ala Pro His His Ala Pro Ala Ala Pro
                325                 330                 335
Ser Asn Pro Gly Leu Ile Ile Gly Ala Leu Ala Gly Ser Thr Leu Ala
            340                 345                 350
Val Leu Val Ile Gly Gl yIle Ala Phe Trp Val Arg Arg Arg Ala Gln
        355                 360                 365
Met Ala Pro Lys Arg Leu Arg Leu Pro His Ile Arg Asp Asp Asp Ala
    370                 375                 380
Pro Pro Ser His Gln Pro Leu Phe Tyr
385                 390
<210>17
<211>1182
<212>DNA
<213>单纯疱疹病毒2型
<400>17
atggggcgtt tgacctccgg cgtcgggacg gcggccctgc tagttgtcgc ggtgggactc   60
cgcgtcgtct gcgccaaata cgccttagca gacccctcgc ttaagatggc cgatcccaat  120
cgatttcgcg ggaagaacct tccggttttg gaccagctga ccgacccccc cggggtgaag  180
cgtgtttacc acattcagcc gagcctggag gacccgttcc agccccccag catcccgatc  240
actgtgtact acgcagtgct ggaacgtgcc tgccgcagcg tgctcctaca tgccccatcg  300
gaggcccccc agatcgtgcg cggggcttcg gacgaggccc gaaagcacac gtacaacctg  360
accatcgcct ggtatcgcat gggagacaat tgcgctatcc ccatcacggt tatggaatac  420
accgagtgcc cctacaacaa gtcgttgggg gtctgcccca tccgaacgca gccccgctgg  480
agctactatg acagctttag cgccgtcagc gaggataacc tgggattcct gatgcacgcc  540
cccgccttcg agaccgcggg tacgtacctg cggctagtga agataaacga ctggacggag  600
atcacacaat ttatcctgga gcaccgggcc cgcgcctcct gcaagtacgc tctccccctg  660
cgcatccccc cggcagcgtg cctcacctcg aaggcctacc aacagggcgt gacggtcgac  720
agcatcggga tgctaccccg ctttatcccc gaaaaccagc gcaccgtcgc cctatacagc  780
ttaaaaatcg ccgggtggca cggccccaag cccccgtaca ccagcaccct gctgccgccg  840
gagctgtccg acaccaccaa cgccacgcaa cccgaactcg ttccggaaga ccccgaggac  900
tcggccctct tagaggatcc cgccgggacg gtgtcttcgc agatcccccc aaactggcac  960
atcccgtcga tccaggacgt cgcgccgcac cacgcccccg ccgcccccag caacccgggc 1020
ctgatcatcg gcgcgctggc cggcagtacc ctggcggtgc tggtcatcgg cggtattgcg 1080
ttttgggtac gccgccgcgc tcagatggcc cccaagcgcc tacgtctccc ccacatccgg 1140
gatgacgacg cgcccccctc gcaccagcca ttgttttact ag                    1182

Claims (20)

1.一种突变体HSV-1菌株，其包含单一失活突变，其中所述突变由编码HSV-1糖蛋白E的氨基酸124-508的Us8基因的失活部分组成，且其中所述突变体HSV菌株的顺行和逆行方向的神经元扩散具有缺陷。
2.一种突变体HSV-2菌株，其包含单一失活突变，其中所述突变由HSV-2Us8基因的碱基对(bp)369-1479的缺失组成且其中所述突变体HSV菌株的顺行和逆行方向的神经元扩散具有缺陷。
3.如权利要求1-2中任一权利要求所述的HSV菌株，其中所述突变体菌株在皮肤组织中具有复制能力。
4.一种包含突变体单纯疱疹病毒疫苗菌株的组合物的用途，其用以制造用于在个体中减少单纯疱疹病毒(HSV)感染的发病、改善其症状、改善其继发性症状、降低其发生率、或延长至其复发的潜伏期的疫苗；
其中所述突变体HSV疫苗菌株包含Us8基因的单一失活突变；
其中所述突变选自如下组成的群组：a)编码HSV-1糖蛋白E的氨基酸124-508的Us8基因的失活部分和b)HSV-2Us8基因的碱基对(bp)369-1479的缺失。
5.一种包含突变体单纯疱疹病毒疫苗菌株的组合物的用途，其用以制造用于在个体中治疗单纯疱疹病毒(HSV)感染的疫苗；
其中所述突变体HSV疫苗菌株包含Us8基因的单一失活突变；
其中所述突变选自如下组成的群组：a)编码HSV-1糖蛋白E的氨基酸124-508的Us8基因的失活部分和b)HSV-2Us8基因的碱基对(bp)369-1479的缺失。
6.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述突变体HSV疫苗菌株是HSV-1菌株或HSV-2菌株。
7.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述HSV感染是HSV-1感染或HSV-2感染。
8.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述突变体菌株的神经元病毒扩散被阻止。
9.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述突变体菌株在所述个体的皮肤组织中具有复制能力。
10.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述HSV感染是生殖器HSV感染。
11.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述HSV感染是唇部HSV感染。
12.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述HSV感染是HSV脑炎、眼睛疾病或其组合。
13.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述个体已感染HSV。
14.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述个体具有感染HSV的风险。
15.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述个体是新生儿或老年个体。
16.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述个体是免疫受损个体。
17.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述治疗单纯疱疹病毒(HSV)感染、减少其发病、改善其症状、改善其继发性症状、降低其发生率、延长至其复发的潜伏期是通过在所述个体中诱导抗HSV免疫应答来实施。
18.如权利要求17所述的用途，其中所述抗HSV免疫应答是抗HSV中和抗体应答。
19.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述疫苗适于表皮、肌内或皮下注射。
20.如权利要求4-5中任一权利要求所述的用途，其中所述疫苗适于呼吸系统内粘膜投予。
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