JP6144448B2

JP6144448B2 - 単純ヘルペスウイルス複合サブユニットワクチンおよびその使用方法

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Publication number: JP6144448B2
Application number: JP2009544088A
Authority: JP
Inventors: フリードマン，ハーベイ; アワスティ，シタ; ルビンスキ，ジョン
Original assignee: ザトラスティーズオブザユニバーシティオブペンシルバニア
Priority date: 2006-12-28
Filing date: 2007-12-27
Publication date: 2017-06-07
Anticipated expiration: 2027-12-27
Also published as: EP2526966A2; US20090098162A1; CN101616688B; EP2526966A3; EP2114449A1; EP2114449B1; EP2591800A1; EP2114449A4; WO2008085486A1; CA2674051A1; EP2502634A1; EP2526966B1; AU2007342345B2; US9284355B2; CN101616688A; JP2010514767A; AU2007342345A1; CA2674051C; AU2007342345B9

Description

本発明は、ｇＤタンパク質、ｇＣタンパク質、およびｇＥタンパク質から選択される２つ以上の組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タンパク質を含有するワクチンと、対象にＨＳＶに対するワクチン接種をして、それにより免疫回避を阻害し、ＨＳＶ感染またはその症状もしくは兆候を治療、阻害、抑止、発生低減、および／または抑制する方法であって、本発明のワクチンを投与するステップを含む方法とを提供する。

単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）および単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）は、一般的なヒト病原体であり、口部顔面感染、性器ヘルペス、眼感染、ヘルペス脳炎、および新生児ヘルペスを含む、様々な臨床的疾病を引き起こす。ＨＳＶ−１は高い頻度で非性器感染に関連付けられ、ほとんどが非性的接触により小児期に罹患する。しかしながら過去１０年間において、これが性器ヘルペスの重要な原因となってきた。ＨＳＶ−２は性器ヘルペスのほとんどの症例の原因であり、毎年米国では推定５００，０００人が感染する。ＨＳＶ疾患を治療するための抗ウイルス剤が入手可能であるにもかかわらず、性器ＨＳＶ−２感染は、依然として、米国における１４〜４９歳の対象の間で約１７％の血清有病率を有する根強い問題であり、この罹患率は、南米およびアフリカの一部では、はるかに高い。

一次（初めての）感染を防止し、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の再発を防止するための方法が、当技術分野において早急に必要である。

単純ヘルペスウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に対する主要な危険因子でもある。ＨＳＶ−２に対して血清陽性である個人は、ＨＩＶを罹患する危険が２倍になる。初期ＨＳＶ−２感染後のＨＩＶ罹患率は、ＨＳＶ−２の再活性化が最も頻繁である場合、最大になると見られる。ＨＳＶ感染の低減を目的とした治療およびワクチン戦略が、ＨＩＶの伝染、罹患、および疾患の進行を防止し得る。

本発明は、ｇＤタンパク質、ｇＣタンパク質、およびｇＥタンパク質から選択される２つ以上の組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タンパク質を含有するワクチンと、対象にＨＳＶに対するワクチン接種をし、ＨＳＶ感染またはその症状もしくは兆候を治療、阻害、抑止、発生低減、および／または抑制する方法であって、本発明のワクチンを投与するステップを含む方法とを提供する。一実施形態において、該ワクチンは、アジュバントをさらに含有する。

一実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶｇＤタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメント、（ｃ）組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメント、および（ｄ）アジュバンとを含有するワクチンを提供する。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶｇＤタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメント、および（ｃ）アジュバンとを含有するワクチンを提供する。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶｇＤタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメント、および（ｃ）アジュバンとを含有するワクチンを提供する。

一実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメント、および（ｃ）アジュバンとを含有するワクチンを提供する。

一実施形態において、組換えＨＳＶタンパク質のそれぞれは、組換えＨＳＶ−１タンパク質である。別の実施形態において、組換えＨＳＶタンパク質のそれぞれは、組換えＨＳＶ−２タンパク質である。さらに別の実施形態において、組換えＨＳＶタンパク質は、組換えＨＳＶ−１タンパク質と組換えＨＳＶ−２タンパク質との混合物である。

別の実施形態において、本発明は、対象における抗ＨＳＶ免疫応答を誘発する方法であって、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む、方法を提供する。

別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を治療、抑制、阻害、または発生低減する方法であって、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む、方法を提供する。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ−１感染である。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ−２感染である。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染である。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、一次ＨＳＶ感染後の発赤、再発、または口唇ＨＳＶである。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ脳炎である。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＳＶ新生児感染である。一実施形態において、対象は、ＨＩＶに感染している。

ＨＳＶ−１感染細胞上における、Ｃ３ｂのｇＣへの結合を阻害する抗体を検出するための、ロゼット化アッセイ。（Ａ）上部。Ｃ３ｂのｇＣ−１への結合を測定するためのロゼット化アッセイの、記号的描写。ＨＳＶ−１感染Ｖｅｒｏ細胞が細胞表面にｇＣを発現し、Ｃ３ｂで被覆したヒツジ赤血球に結合し、感染したＶｅｒｏ細胞の周りにロゼットを形成している。下部。ロゼット化を阻害する抗体の記号的描写。抗ｇＣ抗体の存在下、Ｃ３ｂで被覆した赤血球はｇＣに結合できず、ロゼットは形成されない。（Ｂ）Ｃ３ｂで被覆した赤血球のロゼット化を阻害するために、偽免疫接種（偽免疫化）またはｇＣ−１免疫接種（ｇＣ−１免疫化）マウスからの血清を使用した（＋／−標準偏差）。致死量のＷＴウイルスを用いた側腹部感染によりチャレンジされたｇＣ−１免疫化マウスの疾患点数。マウスは、偽免疫接種、または０．１、１、もしくは１０μｇのｇＣ−１による免疫接種を施された。免疫接種マウスを、チャレンジ後３〜７日目に、接種および帯状ヘルペス部位の疾患の重症度について点数化した。免疫を与えられ、その後致死量のＷＴウイルスを用いた側腹部感染によりチャレンジされたマウスの疾患点数。マウスは、偽免疫接種、あるいはｇＤ−１のみ、またはｇＤ−１およびｇＣ−１の両方を免疫接種したかのいずれかであった。チャレンジ後３日から１４日まで、接種および帯状ヘルペス部位の疾患の重症度について、マウスを点数化した。免疫接種され、その後致死量のＷＴウイルスでチャレンジされたマウスの生存率。マウスは、偽免疫接種、あるいはｇＤ−１のみ、またはｇＤ−１およびｇＣ−１の両方を免疫接種したかのいずれかであった。チャレンジ後３日〜１５日まで生存率を監視した。ＤＲＧからのウイルスの回収。マウスは、偽免疫接種、あるいはｇＤ−１のみ、またはｇＤ−１およびｇＣ−１の両方を免疫接種したかのいずれかであった。その後、致死量のＨＳＶ−１で各群をチャレンジした。後根神経節（ＤＲＧ）を採取し、感染性ウイルスについて検定した。抗ｇＣ−１ＩｇＧは、ＨＳＶ−１を中和しない。筋肉内注射（ＩＭ）によって、ＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と混合した５μｇのｇＣ−１をマウスに３回免疫接種した。３回目に免疫接種した２週間後、血清を採取し、タンパク質Ｇカラム上でマウス血清からＩｇＧを精製し、抗体活性の中和について試験した。対照として、抗ｇＤ１モノクローナル抗体ＤＬ１１と、Ｃ３ｂと相互作用するｇＣ−１のドメインに結合することでＨＳＶ−１感染細胞へのＣ３ｂのロゼット化を阻害する抗ｇＣ−１モノクローナル抗体１Ｃ８と、非免疫マウスＩｇＧとを使用して中和を行った。約８０プラーク形成単位(ＰＦＵ)のＨＳＶ−１（ＮＳ株）を、免疫接種したマウスから採取された抗ｇＣ−１ＩｇＧ、ＤＬ１１、１Ｃ８、または非免疫マウスＩｇＧと共に１時間３７℃で培養した。その後、Ｖｅｒｏ細胞上のプラークアッセイにより、ウイルス力価を決定した。補体が完全なマウス（Ｃ５７Ｂｌ／６）またはＣ３ノックアウトマウス（Ｃ３ＫＯ）を、５×１０^５のＨＳＶ−１での側腹部感染の２４時間前に、２００μｇ／マウスの抗ｇＣ−１ＩｇＧ、１Ｃ８（２００μｇ／マウス）、または非免疫マウスＩｇＧ（２００μｇ／マウス）で受動的に免疫した。１１日間、接種部位および帯状ヘルペス部位の疾患について、マウスを評価した。（Ａ）ＨＳＶ−２野生型およびｇＣ２欠損感染細胞抽出物における、ｇＣ２発現のウエスタンブロット分析。ブロットは、ウサギ抗ｇＣ２抗体Ｒ８１またはウサギ抗ＶＰ５（対照）を用いてプローブした。（ＢからＥ）正常ヒト血清（ＮＨＳ）による、ＨＳＶ−１（ＮＳ）、ならびにＨＳＶ−２（Ｇ、３３３、および２．１２）野生型およびｇＣ１欠損株の中和。３７℃で、表示された濃度で１時間、ＰＢＳ（対照）または補体源としてＮＨＳを用いて、ウイルスを培養した。結果はＰＦＵ／ｍｌ（対照の％）として表され、（ＮＨＳを用いたＰＦＵ／ＰＢＳを用いたＰＦＵ）×１００として計算された。結果は、Ｇ株に対する４回の別個の実験、および株３３３、２．１２、およびＮＳに対する３回の実験の、平均力価±標準偏差を表す。野生型およびｇＣ１欠損ウイルスを比較する曲線下面積（ＡＵＣ）。Ｇ株についてはＰ＜０．０００１、３３３株についてはＰ＜０．００２、２．１２株についてはＰ＜０．００１、ＮＳ株についてはＰ＜０．０５。（Ａ）ＮＨＳ、Ｃ１ｑを枯渇させたＮＨＳ（Ｃ１ｑ枯渇）、およびＣ１ｑで再構成されたＣ１ｑ枯渇血清（Ｃ１ｑ枯渇＋Ｃ１ｑ）の総溶血補体価。ＥＡ（ＩｇＭで被覆したヒツジ赤血球）を血清で培養し、溶解されたＥＡのパーセンテージを決定した。（Ｂ）ｇＣ１欠損およびｇＣ２欠損ウイルスは、古典的補体経路により中和されている。Ｃ１ｑ枯渇または再構成された２０％のＮＨＳを用いて、中和実験を行った。示される結果は、３回の独立した実験の平均力価±標準偏差を表す。ｇＣ１欠損ＮＳおよびｇＣ２欠損Ｇについて、熱失活ＮＨＳと、ＮＨＳまたはＣ１ｑ回復血清のいずれかとを比較すると、Ｐ＜０．０２であり。対照的に、ｇＣ１欠損ＮＳおよびｇＣ２欠損Ｇについて、熱失活ＮＨＳをＣ１ｑ枯渇血清と比較すると、値は有意ではなく、それぞれＰ＜０．２３および０．８６である。４人の提供者からのＮＨＳによる、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２のｇＣ１欠損ウイルスの中和は、ＨＳＶに対して特異的な抗体の不在下で生じる。ＰＢＳ、熱失活ＮＨＳ（不活性ＮＨＳ）、または２０％のＮＨＳと共に培養したウイルスに対して、中和実験を行った。４つの血清試料は、１から４と名付けられている。示されている結果は、３つの個別の実験の平均力価±標準偏差を表す。ｇＣ１欠損ＮＳについてＰＢＳとＮＨＳを比較すると、Ｐは、４つの全ての血清に対して＜０．００１であり、ｇＣ２欠損Ｇウイルスについては、Ｐは、０．００６から＜０．００１の範囲であった。対照的に、熱失活ＮＨＳに対するＰＢＳの値は、有意ではなかった。ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２のｇＣ１欠損ウイルスの中和は、Ｃ３の活性化に依存する。ＰＢＳ、２０％のＮＨＳ、または不活性コンプスタチン（ＮＨＳ＋線状）または活性コンプスタチン（ＮＨＳ＋４Ｗ９Ａ）のいずれかで処置されたＮＨＳで処置したウイルスに対して、中和実験を行った。結果は、ｇＣ１欠損ＮＳについての３回の独立した実験、およびｇＣ２欠損Ｇについての３回の独立した実験の、平均力価±標準偏差を表す。両方のウイルスについて、ＰＢＳとＮＨＳとの間（Ｐ＜０．０１）、およびＰＢＳと不活性コンプスタチンで処置されたＮＨＳとの間（Ｐ＜０．０５）で、差異は有意であった。しかしながら、ＰＢＳと、活性コンプスタチンで処置されたＮＨＳとの間では、有意な差異は検出されなかった。（Ａ）ＮＨＳ、Ｃ５を枯渇させたＮＨＳ（Ｃ５枯渇）、およびＣ５回復血清（Ｃ５枯渇＋Ｃ５）の総溶血補体価。（Ｂ）ｇＣ１欠損およびｇＣ２欠損ウイルスの中和には、Ｃ５の存在が必要である。ＰＢＳ、２０％のＮＨＳ、２０％のＣ５を枯渇させたＮＨＳ（Ｃ５枯渇）、またはＣ５回復血清（Ｃ５枯渇＋Ｃ５）と共に、ウイルスを培養した。結果は、ｇＣ１欠損ＮＳについての４回の独立した実験、およびｇＣ２欠損Ｇについての２回のものの、平均力価±標準偏差として表されている。ＮＨＳおよびＣ５回復ＮＨＳを、ＰＢＳと比較すると、両方のウイルスについてＰ＜０．００５であった。ＰＢＳとＣ５枯渇ＮＨＳとの間には、有意な差異は検出されなかった。（Ｃ）ＮＨＳ、Ｃ６を枯渇させたＮＨＳ（Ｃ６枯渇）、およびＣ６回復血清（Ｃ６枯渇＋Ｃ６）の総溶血補体価。（Ｄ）ｇＣ１欠損またはｇＣ２欠損ウイルスの中和は、Ｃ６の存在に依存しない。ＰＢＳ、２０％のＮＨＳ、Ｃ６枯渇ＮＨＳ（Ｃ６枯渇）、およびＣ６回復血清（Ｃ６枯渇＋Ｃ６）で処置されたウイルスに対して、中和アッセイを行った。結果は、ｇＣ１欠損ＮＳについての３回の独立した実験、およびｇＣ２欠損Ｇについての７回の実験の、平均力価±標準偏差を表す。ＰＢＳと、ＮＨＳ、Ｃ６枯渇、およびＣ６再構成血清とを比較して、両方のウイルスについてＰ＜０．０１であった。（Ａ）ＮＨＳおよびＩｇＭを枯渇させたＮＨＳ（ＩｇＭ枯渇）を使用した、総溶血補体価。抗体で被覆したヒツジ赤血球を使用して、ＩｇＭ枯渇血清中の無傷の古典的補体経路を示すための、溶血アッセイを行った。（Ｂ）ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＣ１欠損ウイルスの中和には、天然ＩｇＭ抗体が必要とされる。２０％のＮＨＳ、熱失活ＮＨＳ（不活性ＮＨＳ）、２０％のＩｇＭを枯渇させたＮＨＳ（ＩｇＭ枯渇）、およびＩｇＭ回復血清（ＩｇＭ枯渇＋ＩｇＭ）と共に、ｇＣ１欠損ウイルスを培養した。示されている結果は、４回の独立した実験の平均力価±標準偏差を表す。ｇＣ１欠損ＮＳおよびｇＣ２欠損Ｇについて、ＩｇＭ枯渇と再構成された血清とを比較すると、Ｐ＜０．０５であった。対照的に、ｇＣ１欠損ＮＳおよびｇＣ２欠損Ｇについて、ＰＢＳとＩｇＭ枯渇血清とを比較すると、値は有意ではなく、それぞれＰは０．８３および０．３１であった。（ＣからＦ）ＥＬＩＳＡにより、ｇＣ２欠損ウイルスに結合する天然ＩｇＭ抗体を検出する。４人の提供者からの熱失活の２０％のＮＨＳを連続的に希釈し、ｇＣ２欠損Ｇで被覆したマイクロタイターウェルまたは対照ウェルに添加した。実験は２回行われ、類似の結果であった。１回の実験結果が示される。マウス側腹部モデルにおけるＮＳ−ｇＥ２６４疾患。ＮＳ−ｇＥ２６４またはレスキューＮＳ−ｇＥ２６４を用いて５×１０^５ＰＦＵでマウスを感染させ、感染後３〜７日目に帯状ヘルペス疾患について点数化した。（Ａ）ＩｇＧの受動的伝達がない場合。ＮＳ−ｇＥ２６４は、レスキューウイルスに匹敵する疾患を引き起こす。（Ｂ）ヒト抗ＨＳＶＩｇＧの受動的伝達の場合。ＮＳ−ｇＥ２６４の疾患点数は、レスキュー株よりも有意に低かった（Ｐ＜０．００１）。（Ｃ）ヒト非免疫ＩｇＧの受動的伝達の場合。ＮＳ−ｇＥ２６４と、レスキュー株との間には、有意な差異は存在しなかった。ＩｇＧなしのＮＳ−ｇＥ２６４についてのＮ＝１０を除き、１群当たりＮ＝５マウス。ＤＲＧ３および４ｄｐｉのウイルス力価。Ｂａｌｂ／Ｃマウスの側腹部に、１０^５ＰＦＵのＮＳ（ＷＴ）または５×１０^５ＰＦＵのＮＳ−ｇＣδελταＣ３を接種した。各マウスからのＤＲＧを、個別に滴定した。結果は、１群当たり３匹のマウスの平均±標準誤差を表す。線は、検出の下限を反映している（２ＰＦＵ）。（Ａ）ｇＣ欠損２．１２は、補体無傷マウスの２．１２より毒性が低い。補体無傷Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（ｎ＝１０）の側腹部に、５×１０^５ＰＦＵのＨＳＶ−２の２．１２株およびｇＣ欠損２．１２株を掻爬により接種し、接種後３〜７日目に疾患を点数化した。接種（左パネル）および帯状ヘルペス（右パネル）部位において、ｇＣ欠損２．１２が引き起こした疾患は、有意に少なかった（Ｐ＜０．００１）。（Ｂ）ｇＣ欠損２．１２は、Ｃ３ＫＯマウスの２．１２と同程度毒性がある。同一の実験を、Ｃ３ＫＯマウスに行った（ｎ＝４）。ｇＣ欠損２．１２と２．１２との間には、差異は検出されなかった。誤差バーは、標準偏差を表す。誘発する免疫原に対して測定された、マウス血清中の抗体。データは、ｂａｃ−ｇＥフラグメントで免疫を与えられた５匹のマウスの平均または３匹の偽免疫化マウスの平均±標準誤差として描かれている。ｇＥに結合し、ビオチン標識化非免疫ヒトＩｇＧのＦｃγＲへの結合を阻害する、マウスおよびウサギ抗体。（Ａ）免疫化マウス（１群当たりｎ＝５）または偽免疫化対照（ｎ＝３）からの血清とともに、感染細胞を培養した。フローサイトメトリーによって、感染細胞上のｇＥへの結合について、血清（１：１０希釈）を評価した。（Ｂ）１０μｇのビオチン標識化非免疫ヒトＩｇＧの結合を阻害するために、血清（無希釈）を感染細胞に添加した。バーは、各群の中央値を示す。ｇＤ／ｇＣワクチン接種に対する抗ｇＤ抗体応答。マウスにｇＤのみ（最初の３つのバー）で３回、または同一シリンジ内で併せたｇＣおよびｇＤ（最後の２つのバー）で、免疫を与えた。結果は、ｇＣおよびｇＤの同時投与が、５０ｎｇのｇＤへの抗体応答を鈍らせることを示す。マウスを図１９の通り免疫を与え、５０ｎｇのｇＤおよび１０μｇのｇＣを受けたマウスを、５０ｎｇのｇＤで追加免疫した。ｇＤに対する抗体応答は、改善した（最後のバー）。Ｃ３ｂで被覆した赤血球による、ロゼット形成を阻害する抗血清能力。ＣｐＧおよびアジュバントとしてミョウバンと混合したｇＣでの免疫化に対するＥＬＩＳＡ抗体応答。Ｃ３ｂで被覆した赤血球のロゼット形成を阻害する抗血清能力。ＨＳＶ−２への側腹部曝露後のｇＣ−２免疫化マウスの生存率。ミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と混合したＣｐＧ（５０μｇ／マウス）を使用して、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、腓腹筋に筋肉注射でで、２週間間隔で３回、０．５、１、２、または５μｇのｇＣ−２で免疫を与え、あるいはＣｐＧおよびミョウバンで、但しｇＣ−２なしで、偽免疫化した。３回目に免疫を与えた１４日後、剪毛し、化学的に剥皮したマウスの側腹部を、４×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株の掻爬による接種によってチャレンジした。０〜１４日目の間、生存率を記録した。ＨＳＶ−２への側腹部曝露後の、ｇＣ−２免疫化マウスにおける接種および帯状ヘルペス部位の疾患重症度。図２２の通り、実験を行った。４×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株での掻爬による接種チャレンジ後、３〜１４日の間、接種および帯状ヘルペス部位の疾患重症度について、動物を点数化した（１群当たりＮ＝５マウス）。ＨＳＶ−２への膣部曝露後のｇＣ−２免疫化マウスの生存率。Ｂａｌｂ／Ｃマウスを、腓腹筋に筋肉注射で、ＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）で偽免疫化し、あるいは２週間間隔で、ＣｐＧおよびミョウバンと共に、１、２、または５μｇのｇＣ−２で免疫を与えた。１群が５μｇ用量で２回免疫を与えられ［５μｇ（２×）と名付けられた］、５匹のマウスから成る別の１群が、３回免疫を与えられた［５μｇ（３×）と名付けられた］ことを除いて、各群５匹の動物に、３回免疫を与えた。３回目に免疫を与えた９日後、または５μｇ（２×）で免疫を与えた２３日後、マウスの腹腔内（ＩＰ）に、性周期を同期化するように、デポ・プロベラ（Depo Provera）（登録商標）（２ｍｇ／マウス）を注射した。５日後、マウスの膣内に、２×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株をチャレンジした。０〜１４日目の間、動物の死亡率を観察した。ＨＳＶ−２への膣部曝露後のｇＣ−２免疫化マウスの平均疾患点数。図２４の通り実験を行った。２×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株での膣内チャレンジ後、３〜１４日目の間、疾患重症度について動物を点数化した。ＨＳＶ−２への膣部曝露後の、ｇＣ−２免疫化マウスにおける、膣部ＨＳＶ−２ウイルス力価。図２４の通り実験を行った。チャレンジ後１〜１１日目の間、毎日膣スワブを取得し、ウイルス力価を決定した。ＨＳＶ−２への側腹部曝露後のｇＤ−２免疫化マウスの生存率。Ｂａｌｂ／Ｃマウスは、偽免疫化、あるいは腓腹筋に筋肉注射で、ＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と共に、１０、２５、５０、または１００ｎｇのｇＤ−２で、３回免疫を与えられた。４×１０^５ＰＦＵ／１０ｍｌのＨＳＶ−２の２．１２株で、マウスを側腹部接種によりチャレンジした。ＨＳＶ−２への側腹部曝露後の、ｇＤ−２免疫化マウスの平均疾患点数。図２７に記載の通り、実験を行った。４×１０^５ＰＦＵ／１０ｍｌでＨＳＶ−２の２．１２株での側腹部接種後、３〜１４日目の間、接種および帯状ヘルペス部位の疾患重症度について、動物を点数化した。ＨＳＶ−２への膣部曝露後の、ｇＤ−２免疫化マウスの生存率。５０、１００、または２５０ｎｇのｇＤ−２で３回（３×）、または２５０ｎｇのｇＤ−２で２回（２×）、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに筋肉注射で免疫を与えた。ｇＣ−２について図２４に記載した通り、接種前に、ｇＤ−２をＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と組み合わせた。マウスをデポ・プロベラ（Depo Provera）（登録商標）で処置し、ｇＣ−２の免疫化について図２４に記載した通り、２×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株でチャレンジし、生存率および疾患重症度について評価した。ＨＳＶ−２への膣部曝露後の、ｇＤ−２免疫化マウスの平均疾患点数。図２９に記載の通り、実験を行った。２×１０^５ＰＦＵでＨＳＶ−２の２．１２株での膣内チャレンジ後、３〜１４日目の間、疾患重症度について動物を点数化した。ＨＳＶ−２への膣部曝露後の、ｇＤ−２免疫化マウスの膣部ＨＳＶ−２ウイルス力価。図２９の通り、実験を行った。チャレンジ後１〜１１日目の間、各群３匹のマウスにおいて、毎日膣スワブを取得した。補体レベルは、ＨＩＶ／ＨＳＶ−１＋／２同時感染対象において維持されている。ＣＤ４Ｔ細胞数＜２００／μｌ、２００〜５００／μｌ、および＞５００／μｌを有するＨＩＶ陽性対象において、およびＨＩＶ非感染対照からの、血清の総溶血補体価（ＣＨ_５０）を測定した。示される結果は、平均＋／−標準誤差（ＳＥ）を表す。抗体のみ、または抗体および補体による、ＨＳＶ−１ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの中和。ＰＢＳ、補体を不活性化するようにＥＤＴＡで処置した１％の血清（Ａｂと名付けられた）、または活性補体を含有する１％の血清（Ａｂ＆Ｃと名付けられた）と共に、ＷＴまたはｇＣ／ｇＥ変異ウイルスを１時間、３７℃で培養した。ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスは、ＷＴウイルスと類似した、またはわずかに高い濃度のＨＳＶ−１糖タンパク質を、ビリオン表面に発現する。精製されたｇＣ／ｇＥ変異体およびＷＴウイルスを、総体糖タンパク質濃度を比較するために、ウエスタンブロットおよび濃度測定分析により、ＶＰ５、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ、ｇＨ／ｇＬ、およびｇＩ発現について評価した。抗体中和における、ＨＳＶ−１ＦｃγＲの役割。抗体のみによる中和に対する、ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスのより高い感受性を説明するための、考え得るモデル。ＷＴウイルスモデルの左側では、ｇＥがＩｇＧのＦｃドメインを結合し、Ｆ（ａｂ’）_２が抗原を結合するのを防いでいる（ここではｇＤとして示されている）。ＷＴウイルスモデルの右側では、ＦａｂドメインがｇＤに結合し、同じＩｇＧ分子のＦｃドメインがｇＥに結合している、抗体の２極化した架橋が示されている。抗体結合が、ＷＴウイルスモデルの右側ではなく、左側に示されるように生じる場合、ＨＳＶ−１ＦｃγＲ（ｇＥ／ｇＩから成る）は、いくつかのＦ（ａｂ’）_２ドメインが、それらの標的抗原と相互作用するのを防ぐことができる。ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスモデルでは、ΔｇＥはＩｇＧのＦｃドメインに結合することができず、Ｆ（ａｂ’）_２ドメインが抗原（ｇＤとして示されている）に結合し、ウイルスの中和が可能になる。非機能性ウイルスのＦｃγＲは、ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの抗体中和に対する感受性の増加を説明しない。ＨＩＶ陰性提供者から貯えたヒトＩｇＧでウイルスを培養し、中和量を決定した。ｇＣおよびｇＥ免疫回避ドメインは、極めて重要な中和エピトープを遮蔽する。ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスを、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬ、またはｇＩに対してウサギ血清で培養した。示される結果は、それぞれ個々の抗体を用いた２〜３回の測定の、中和（Ｌｏｇ_１０）＋／−標準誤差を表す。ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスを、それぞれ個々の糖タンパク質に対してウサギ血清と共に培養した。示される結果は、それぞれの抗体について２〜３回のアッセイの中和＋／−標準誤差を表す。ＨＳＶ−１ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスへの抗糖タンパク質免疫グロブリンの結合。ｇＣ／ｇＥ変異体およびＷＴウイルスへの抗ｇＤ結合の比較。ｇＣ／ｇＥ変異体およびＷＴウイルスへの抗ｇＢ結合の比較。ｇＣ／ｇＥ変異体およびＷＴウイルスへの抗ｇＨ／ｇＬ結合の比較。図Ａ〜Ｃは、３回の独立した実験の平均を表す。誤差バーは、標準偏差を示す。ニワトリ抗ｇＤ免疫グロブリンの結合。図Ｄは、１回行われた。エピトープマスキングモデル。左では、ｇＣがｇＤ上のエピトープを遮断し、中和ＩｇＧ抗体のＷＴウイルスへの結合を防いでいる。右では、変異ウイルス上のｇＣは、ｇＤ上のエピトープを遮断できず、中和抗体の結合を可能にしている。ｇＥによるエピトープ遮蔽は図には示されていないが、我々の所見は、ｇＥに対して類似モデルを支持する。

別の実施形態において、本発明は、組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＤタンパク質、およびＨＳＶｇＣタンパク質およびＨＳＶｇＥタンパク質のうちの少なくとも１つから選択される組換えタンパク質を含むワクチンを提供する。一実施形態において、該ワクチンは、アジュバントをさらに含有する。

一実施形態において、本発明は、（ａ）組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−１ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＤ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に、宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に、宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含有する。

別の実施形態において、「ＨＳＶタンパク質」は、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２タンパク質を指す。別の実施形態において、「ＨＳＶタンパク質」は、ＨＳＶ−１タンパク質を指す。別の実施形態において、「ＨＳＶタンパク質」は、ＨＳＶ−２タンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質のフラグメントを指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質のフラグメントを指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質のフラグメントを指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質のフラグメントを指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＣタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＣタンパク質のフラグメントを指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＥタンパク質を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２ｇＥタンパク質のフラグメントを指す。一実施形態において、本明細書に言及されるフラグメントは、免疫原性フラグメントである。別の実施形態において、「免疫原性フラグメント」とは、免疫原性であり、対象に投与される場合、防御免疫応答を誘起する、オリゴペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の一部を指す。

一実施形態において、「免疫原性」または「免疫原性の」とは、動物にタンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体が投与される場合、動物におけるタンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体の免疫応答を誘起する先天的能力を指すように、本明細書で使用される。したがって、一実施形態における「免疫原性を強化する」とは、動物にタンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体が投与される場合、動物におけるタンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体の免疫応答を誘起する能力を高めることを指す。タンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体の免疫応答を誘起する能力の向上は、一実施形態において、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体に対するさらに多数の抗体、抗原または生命体への抗体のさらなる多様性、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体に対して特異的なさらに多数のＴ細胞、タンパク質、ペプチド、核酸、抗原、もしくは生命体へのさらに強い細胞毒性またはヘルパーＴ細胞応答等によって測定することができる。

一実施形態において、本発明の意義範囲内の「機能的」とは、タンパク質、ペプチド、核酸、フラグメント、もしくはその変異形の生物学的活性または機能を示す先天的能力を指すように、本明細書で使用される。一実施形態において、このような生物学的機能は、例えば、膜結合受容体等の相互作用パートナーへの結合特性であり、別の実施形態において、その三量化特性である。本発明の機能的フラグメントおよび機能的変異形の場合は、これらの生物学的機能は、実際、例えば、それらの特異性または選択性に関して変化し得るが、基本的な生物学的機能は保持される。

例えば、標識基質を使用するタンパク質アッセイ、ＨＰＬＣもしくは薄相クロマトグラフィー等のクロマトグラフ法による基質分析、分光光度法等の、タンパク質、ポリペプチド、または分子の生物学的活性を測定するための数々の方法が、関連技術から既知である（例えば、「Maniatis et al.(2001)Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.」を参照されたい）。

一実施形態において、「フラグメント」という用語は、全長タンパク質またはポリペプチドよりも短い、またはより少ないアミノ酸を含有するタンパク質またはポリペプチドを指すように、本明細書で使用される。別の実施形態において、フラグメントとは、全長核酸よりも短い、またはより少ない核酸を指す。別の実施形態において、該フラグメントは、Ｎ末端側フラグメントである。別の実施形態において、該フラグメントは、Ｃ末端側フラグメントである。一実施形態において、該フラグメントは、タンパク質、ペプチド、または核酸の内部連鎖部分である。別の実施形態において、該フラグメントは、タンパク質、ペプチド、または核酸の免疫原性内部連鎖部分である。別の実施形態において、該フラグメントは、タンパク質、ペプチド、または核酸の機能的内部連鎖部分である。別の実施形態において、該フラグメントは、Ｎ末端側免疫原性フラグメントである。一実施形態において、該フラグメントは、Ｃ末端側免疫原性フラグメントである。別の実施形態において、該フラグメントは、Ｎ末端側機能的フラグメントである。別の実施形態において、該フラグメントは、Ｃ末端側機能的フラグメントである。

したがって、一実施形態において、本発明に記載されるタンパク質（例えば、ｇＣ−１、ｇＣ−２、ｇＥ−１、ｇＥ−２、ｇＤ−１、ｇＤ−２等）の「免疫原性フラグメント」とは、免疫原性であるタンパク質の一部を指し、一実施形態において、および別の実施形態において、対象に投与される場合、防御免疫応答を誘起する。

一実施形態において、本発明の組成物および方法におけるＨＳＶへのいずれかの言及は、一実施形態において、ＨＳＶ−１を指し、別の実施形態において、ＨＳＶ−２を指し、別の実施形態において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の両方を指し、また別の実施形態において、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２を指す。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換え単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−２ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＤ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、言及される宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含有する。

本明細書に定められるように、ｇＣ−１サブユニットワクチンは、ＨＳＶ−１感染を防御する（図２）。さらに、一実施形態において、ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、ｇＤ−１のみ（図３）またはｇＣ−１のみを含有するワクチンと比較して、優れた防御を付与し、後根神経節の感染を低減または予防する（図５）。さらに、ｇＣ−２サブユニットワクチンは、ＨＳＶ−２感染を防御し（図２２〜２６）、ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチンは、ｇＤ−２のみ、またはｇＣ−２のみを含有するワクチンよりも優れた防御を付与する。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−１ｇＥ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＥおよびｇＤ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＥまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含む。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−２ｇＥ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＥおよびｇＤ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＥまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含む。

本明細書に定められるように、ｇＥ−１サブユニットワクチンは、ＨＳＶ−１感染を防御する。さらに、ｇＥ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、ｇＤ−１のみ、またはｇＥ−１のみを含有するワクチンと比較して、優れた防御を付与する。さらに、ｇＥ−２サブユニットワクチンは、ＨＳＶ−２感染を防御し、ｇＥ−２／ｇＤ−２複合ワクチンは、ｇＤ−２のみ、またはｇＥ−２のみを含有するワクチンよりも優れた防御を付与する。

別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥを併せた免疫増強効果は、いずれかの単独のみの効果よりも大きい。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥの免疫増強効果は、相乗効果を示す。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−１ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＥ免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＥまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＣ免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＣ抗体を含む。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発された抗ｇＥ抗体を含む。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換え単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−２ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＥ免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＥまたはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＣ免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、言及された宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発された抗ｇＣ抗体を含む。別の実施形態において、言及される宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＥ抗体を含む。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｄ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−１ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、ワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−１ｇＥ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥ、またはそのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−１の能力を制限する。別の実施形態において、該宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含有する。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを併せた免疫増強効果は、いずれかの単独のみの効果よりも大きい。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥの免疫増強効果は、相乗効果を示す。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｄ）アジュバントとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−２ｇＣ抗体を誘起する。別の実施形態において、ヒト対象へのワクチンの投与は、組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質に対応するＨＳＶタンパク質の免疫回避機能を遮断する、抗ＨＳＶ−２ｇＥ抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＣフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、その免疫回避ドメインを含む。別の実施形態において、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＥ、またはそれらのフラグメントを組み合わせた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを用いた免疫化は、その後のチャレンジの間に宿主抗ｇＤ免疫応答を回避するＨＳＶ−２の能力を制限する。別の実施形態において、該宿主免疫応答は、ワクチンによって誘発される抗ｇＤ抗体を含有する。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントを併せた免疫増強効果は、いずれかの単独のみの効果よりも大きい。別の実施形態において、ｇＣおよびｇＥ、またはそのフラグメントの免疫増強効果は、相乗効果を示す。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメント、あるいは（ｃ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメンとを含有するワクチンを提供する。別の実施形態において、本発明は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメント、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメント、あるいは（ｃ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメンとを含有するワクチンを提供する。一実施形態において、該ワクチンは、アジュバントをさらに含有する。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質のフラグメントを含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質のフラグメントを含む。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＤタンパク質フラグメントは、免疫原性フラグメントである。別の実施形態において、ｇＤ免疫防御抗原は、全タンパク質である必要はない。別の実施形態において、該防御免疫応答は、通常、抗体応答を必要とする。別の実施形態において、ｇＤの変異体、配列保存的変異形、および機能保存的変異形は、すべてのこのような変異形が、必要とされる免疫防御効果を保持するという条件で、本発明の方法および組成物において有用である。

別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、ＨＳＶの任意の株からの免疫防御ｇＤ抗原を含有することができる。別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、感染した個人に認められるように、ＨＳＶの配列変異形を含有することができる。

一実施形態において、免疫原性ポリペプチドはまた、抗原性でもある。別の実施形態において、「抗原性」とは、例えば、免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体等の免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用可能なペプチドを指す。別の実施形態において、抗原性ペプチドは、少なくとも約８個のアミノ酸（ＡＡ）のエピトープを含有する。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約９個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１１個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１２個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１５個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約２０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約２５個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約３０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約４０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約５０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約７０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１００個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約１５０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約２００個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約２５０個のＡＡを有するペプチドを指す。別の実施形態において、該用語は、少なくとも約３００個のＡＡを有するペプチドを指す。ある実施形態において、該ペプチドは、２０、２５、３０、４０、５０、７０、１００、１５０、２００、２５０、または３００個のＡＡの上限を有する。一実施形態において、本明細書でエピトープとも称される、ポリペプチドの抗原性部分は、抗体またはＴ細胞受容体認識に対する免疫優勢である部分であり得るか、または免疫化のために担体ポリペプチドに抗原性部分を抱合することによって、分子への抗体を産生するために使用される一部であり得る。抗原性である分子は、それ自体、免疫原性、すなわち、担体なしで免疫応答を誘起することが可能である必要はない。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物のｇＤタンパク質フラグメントは、ｇＤ−１フラグメントである。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、ｇＤ−１外部ドメインからなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、該ｇＤ−１外部ドメインを含有する。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、該ｇＤ−１外部ドメインのフラグメントからなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、該ｇＤ−１外部ドメインのフラグメントを含有する。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＤ−１フラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＤ−１タンパク質は、配列：

ＭＧＧＡＡＡＲＬＧＡＶＩＬＦＶＶＩＶＧＬＨＧＶＲＧＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＬＡＤＰＮＲＦＲＲＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＡＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡＴＰＮＮＭＧＬＩＡＧＡＶＧＧＳＬＬＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＲＲＲＴＱＫＡＰＫＲＩＲＬＰＨＩＲＥＤＤＱＰＳＳＨＱＰＬＦＹ（配列番号１）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＤ−１タンパク質フラグメントは、配列番号１の相同体である。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、配列番号１のアイソフォームである。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、配列番号１の変異形である。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、配列番号１のフラグメントである。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、配列番号１のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号１の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＤ−１タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１８０６、Ｘ１４１１２、Ｅ０３１１１、Ｅ０３０２３、Ｅ０２５０９、Ｅ００４０２、Ｅ００４０１、Ｅ００３９５、ＡＦ４８７９０２、ＡＦ４８７９０１、ＡＦ２９３６１４、Ｌ０９２４２、Ｊ０２２１７、Ｌ０９２４４、Ｌ０９２４５、およびＬ０９２４３のうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該ｇＤ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約アミノ酸（ＡＡ）２６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ３６−２９６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ４６−２８６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ５６−２７６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ６６−２６６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ７６−２５６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ８６−２４６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ９６−２３６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ１０６−２２６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１１６−２１６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１２６−２０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１３６−１９６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−２８６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−２６６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−２４６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−２０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−１６６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−１２６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２６−１０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ４６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ６６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ８６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１０６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１２６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１４６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１６６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ１８６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、約ＡＡ２０６−３０６からなる。代替的な実施形態において、該ｇＤ−１フラグメントは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において、ＨＳＶ−１ｇＤＡＡ配列が利用される。別の実施形態において、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはペプチドが利用される。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物のｇＤタンパク質フラグメントは、ｇＤ−２フラグメントである。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、ｇＤ−２外部ドメインからなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、該ｇＤ−２外部ドメインを含有する。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、該ｇＤ−２外部ドメインのフラグメントからなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、該ｇＤ−２外部ドメインのフラグメントを含有する。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＤ−２フラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＤ−２タンパク質は、配列：

ＭＧＲＬＴＳＧＶＧＴＡＡＬＬＶＶＡＶＧＬＲＶＶＣＡＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨＡＰＡＡＰＳＮＰＧＬＩＩＧＡＬＡＧＳＴＬＡＶＬＶＩＧＧＩＡＦＷＶＲＲＲＡＱＭＡＰＫＲＬＲＬＰＨＩＲＤＤＤＡＰＰＳＨＱＰＬＦＹ（配列番号２）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＤ−２タンパク質フラグメントは、配列番号２の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号２のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号２の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号２のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号２のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号２の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＤ−２タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１７９８、Ｅ００２０５、Ｚ８６０９９、ＡＹ７７９７５４、ＡＹ７７９７５３、ＡＹ７７９７５２、ＡＹ７７９７５１、ＡＹ７７９７５０、ＡＹ５１７４９２、ＡＹ１５５２２５、およびＫ０１４０８のうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＤ−２タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ３６−２９６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ４６−２８６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ５６−２７６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ６６−２６６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ７６−２５６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ８６−２４６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ９６−２３６からなる。別の実施形態において、該フラグメントは、約ＡＡ１０６−２２６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１１６−２１６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１２６−２０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１３６−１９６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−２８６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−２６６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−２４６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−２０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−１６６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−１２６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２６−１０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ４６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ６６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ８６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１０６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１２６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１４６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１６６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ１８６−３０６からなる。別の実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、約ＡＡ２０６−３０６からなる。代替的な実施形態において、該ｇＤ−２フラグメントは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、その組換えｇＤタンパク質フラグメントは、ｇＤの細胞受容体への結合を阻害する抗体を誘起する。別の実施形態において、該受容体は、ヘルペスウイルス侵入メディエータＡ（ＨｖｅＡ／ＨＶＥＭ）である。別の実施形態において、該受容体は、ネクチン１（ＨｖｅＣ）である。別の実施形態において、該受容体は、ネクチン２（ＨｖｅＢ）である。別の実施形態において、該受容体は、ヘパラン硫酸修飾型である。別の実施形態において、該受容体は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンである。別の実施形態において、該受容体は、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＤ受容体である。

別の実施形態において、該組換えｇＤタンパク質またはそのフラグメントは、ＡＡ２６−５７を含む。別の実施形態において、これらの残基を含有することにより、ＨＶＥＭへの結合を阻害する抗体を誘起する。別の実施形態において、該ｇＤタンパク質またはフラグメントは、Ｙ６３を含む。別の実施形態において、該ｇＤタンパク質またはフラグメントは、Ｒ１５９を含む。別の実施形態において、該ｇＤタンパク質またはフラグメントは、Ｄ２４０を含む。別の実施形態において、該ｇＤタンパク質またはフラグメントは、Ｐ２４６を含む。別の実施形態において、該組換えｇＤタンパク質またはフラグメントは、Ｙ６３、Ｒ１５９、Ｄ２４０、およびＰ２４６から選択される残基を含む。別の実施形態において、これらの残基のうちの１つの含有は、ネクチン１への結合を阻害する抗体を誘起する。

ｇＤＡＡ残基に対する上記の命名法は、シグナル配列の残基を含む。したがって、成熟タンパク質のうちの残基１は、「２６」と称される。

別の実施形態において、ＨＳＶ−２ｇＤＡＡ配列が、本発明の方法および組成物において利用される。別の実施形態において、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはペプチドが利用される。

それぞれの組換えｇＤ−１およびｇＤ−２タンパク質またはそのフラグメントは、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質のフラグメントを含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質のフラグメントを含む。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＣ−１タンパク質は、配列：

ＭＡＰＧＲＶＧＬＡＶＶＬＷＧＬＬＷＬＧＡＧＶＡＧＧＳＥＴＡＳＴＧＰＴＩＴＡＧＡＶＴＮＡＳＥＡＰＴＳＧＳＰＧＳＡＡＳＰＥＶＴＰＴＳＴＰＮＰＮＮＶＴＱＮＫＴＴＰＴＥＰＡＳＰＰＴＴＰＫＰＴＳＴＰＫＳＰＰＴＳＴＰＤＰＫＰＫＮＮＴＴＰＡＫＳＧＲＰＴＫＰＰＧＰＶＷＣＤＲＲＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＲＮＳＴＲＭＥＦＲＬＱＩＷＲＹＳＭＧＰＳＰＰＩＡＰＡＰＤＬＥＥＶＬＴＮＩＴＡＰＰＧＧＬＬＶＹＤＳＡＰＮＬＴＤＰＨＶＬＷＡＥＧＡＧＰＧＡＤＰＰＬＹＳＶＴＧＰＬＰＴＱＲＬＩＩＧＥＶＴＰＡＴＱＧＭＹＹＬＡＷＧＲＭＤＳＰＨＥＹＧＴＷＶＲＶＲＭＦＲＰＰＳＬＴＬＱＰＨＡＶＭＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＡＹＹＰＲＮＰＶＥＦＤＷＦＥＤＤＲＱＶＦＮＰＧＱＩＤＴＱＴＨＥＨＰＤＧＦＴＴＶＳＴＶＴＳＥＡＶＧＧＱＶＰＰＲＴＦＴＣＱＭＴＷＨＲＤＳＶＴＦＳＲＲＮＡＴＧＬＡＬＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＧＶＲＨＶＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＰＳＰＡＡＫＳＡＶＴＡＱＥＳＣＤＨＰＧＬＡＴＶＲＳＴＬＰＩＳＹＤＹＳＥＹＩＣＲＬＴＧＹＰＡＧＩＰＶＬＥＨＨＧＳＨＱＰＰＰＲＤＰＴＥＲＱＶＩＥＡＩＥＷＶＧＩＧＩＧＶＬＡＡＧＶＬＶＶＴＡＩＶＹＶＶＲＴＳＱＳＲＱＲＨＲＲ（配列番号３）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＣ−１タンパク質は、配列番号３の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号３のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号３の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号３のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号３のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号３の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＣ−１タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１８０６、Ｘ１４１１２、ＡＪ４２１５０９、ＡＪ４２１５０８、ＡＪ４２１５０７、ＡＪ４２１５０６、ＡＪ４２１５０５、ＡＪ４２１５０４、ＡＪ４２１５０３、ＡＪ４２１５０２、ＡＪ４２１５０１、ＡＪ４２１５００、ＡＪ４２１４９９、ＡＪ４２１４９８、ＡＪ４２１４９７、ＡＪ４２１４９６、ＡＪ４２１４９５、ＡＪ４２１４９４、ＡＪ４２１４９３、ＡＪ４２１４９２、ＡＪ４２１４９１、ＡＪ４２１４９０、ＡＪ４２１４８９、ＡＪ４２１４８８、およびＡＪ４２１４８７のうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＣ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＣ−２タンパク質は、配列：

ＭＡＬＧＲＶＧＬＡＶＧＬＷＧＬＬＷＶＧＶＶＶＶＬＡＮＡＳＰＧＲＴＩＴＶＧＰＲＧＮＡＳＮＡＡＰＳＡＳＰＲＮＡＳＡＰＲＴＴＰＴＰＰＱＰＲＫＡＴＫＳＫＡＳＴＡＫＰＡＰＰＰＫＴＧＰＰＫＴＳＳＥＰＶＲＣＮＲＨＤＰＬＡＲＹＧＳＲＶＱＩＲＣＲＦＰＮＳＴＲＴＥＦＲＬＱＩＷＲＹＡＴＡＴＤＡＥＩＧＴＡＰＳＬＥＥＶＭＶＮＶＳＡＰＰＧＧＱＬＶＹＤＳＡＰＮＲＴＤＰＨＶＩＷＡＥＧＡＧＰＧＡＳＰＲＬＹＳＶＶＧＰＬＧＲＱＲＬＩＩＥＥＬＴＬＥＴＱＧＭＹＹＷＶＷＧＲＴＤＲＰＳＡＹＧＴＷＶＲＶＲＶＦＲＰＰＳＬＴＩＨＰＨＡＶＬＥＧＱＰＦＫＡＴＣＴＡＡＴＹＹＰＧＮＲＡＥＦＶＷＦＥＤＧＲＲＶＦＤＰＡＱＩＨＴＱＴＱＥＮＰＤＧＦＳＴＶＳＴＶＴＳＡＡＶＧＧＱＧＰＰＲＴＦＴＣＱＬＴＷＨＲＤＳＶＳＦＳＲＲＮＡＳＧＴＡＳＶＬＰＲＰＴＩＴＭＥＦＴＧＤＨＡＶＣＴＡＧＣＶＰＥＧＶＴＦＡＷＦＬＧＤＤＳＳＰＡＥＫＶＡＶＡＳＱＴＳＣＧＲＰＧＴＡＴＩＲＳＴＬＰＶＳＹＥＱＴＥＹＩＣＲＬＡＧＹＰＤＧＩＰＶＬＥＨＨＧＳＨＱＰＰＰＲＤＰＴＥＲＱＶＩＲＡＶＥＧＡＧＩＧＶＡＶＬＶＡＶＶＬＡＧＴＡＶＶＹＬＴＨＡＳＳＶＲＹＲＲＬＲ（配列番号４）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＣ−２タンパク質は、配列番号４の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号４のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号４の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号４のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号４のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号４の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＣ−２タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１７９８、Ｚ８６０９９、Ｍ１００５３、ＡＪ２９７３８９、ＡＦ０２１３４１、Ｕ１２１７９、Ｕ１２１７７、Ｕ１２１７６、およびＵ１２１７８のうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＣ−２タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＣタンパク質フラグメントは、免疫原性フラグメントである。別の実施形態において、ｇＣ免疫防御抗原は、全タンパク質である必要はない。別の実施形態において、該防御免疫応答は、通常、抗体応答を必要とする。別の実施形態において、ｇＣの変異体、配列保存的変異形、および機能保存的変異形は、すべてのこのような変異形が、必要とされる免疫防御効果を保持するという条件で、本発明の方法および組成物において有用である。

別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、ＨＳＶの任意の株からの免疫防御ｇＣ抗原を含有することができる。別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、感染した個人に認められるように、ＨＳＶの配列変異形を含有することができる。

別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、ｇＣ免疫回避ドメインを含有する。別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、ｇＣ免疫回避ドメインの一部を含有する。別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、ｇＣ免疫回避ドメインである。別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、ｇＣ免疫回避ドメインの一部である。別の実施形態において、ＨＳＶ−１ｇＣＡＡ配列が利用される。別の実施形態において、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはペプチドが利用される。

別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、Ｃ３ｂ結合ドメインである。別の実施形態において、ｇＣタンパク質フラグメントは、Ｃ３ｂ結合ドメインの一部である。別の実施形態において、「Ｃ３ｂ結合ドメイン」とは、ｇＣの宿主Ｃ３ｂ分子との結合を媒介するドメインを指す。別の実施形態において、該用語は、ｇＣの宿主Ｃ３ｂ分子との相互作用を媒介するドメインを指す。

別の実施形態において、（例えば、ｇＣ−１の場合）、該ｇＣドメインは、約ＡＡ２６−４５７からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ４６−４５７からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８６−４５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０６−４５７である。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２２６−４５７からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２４６−４５７からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−４４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−４３７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−４２７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−４１７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−４０７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−３８７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−３６７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−３４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−３２７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−３０７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−２８７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−２６７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６−２４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３６−４４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ４６−４３７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ５６−４２７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６６−４１７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ７６−４０７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８６−３９７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ９６−３８７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０６−３７７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１６−３６７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２６−３５７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１３６−３４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４７−３３７である。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ１２４−３６６からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ１２４−１３７からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２３−２４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７６−２９２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３９−３６６である。代替的な実施形態において、該ｇＣドメインは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２４−２４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２４−２９２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２３−２９２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２３−３６６である。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、ＡＡ１２４−１３７、２２３−２４６、２７６−２９２、および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１２４−１３７および２２３−２４６から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１２４−１３７および２７６−２９２から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１２４−１３７および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ２２３−２４６および２７６−２９２から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ２２３−２４６および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ２７６−２９２および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１２４−１３７、２２３−２４６、および２７６−２９２から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１２４−１３７、２２３−２４６、および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、ＡＡ１２４−１３７、２７６−２９２、および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、ＡＡ２２３−２４６、２７６−２９２、および３３９−３６６から選択される。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６４−３６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０４−３６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４４−３６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２４−３２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２４−２８６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２４−２４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０４−３２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４４−３２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０４−２８６である。代替的な実施形態において、該範囲は、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ｇＣ−１タンパク質は、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、上記のｇＣ−１フラグメントのうちの１つは、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、該タグは、ヒスチジン（「Ｈｉｓ」）タグである。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、５つのヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、６つのヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、別の数のヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＣ−１フラグメントは、Ｈｉｓタグで修飾されるＡＡ２６−４５７である。

別の実施形態において、（例えば、ｇＣ−２の場合）、該ｇＣドメインは、約ＡＡ２７−４２６からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ４７−４２６からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８７−４２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０７−４２６である。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２２７−４２６からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２４７−４２６からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−４０６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−３８６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−３６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−３４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−３２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−３０６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−２８６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−２６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７−２４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３７−４１６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ４７−４０６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ５７−３９６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６７−３８６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ７７−３７６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８７−３６６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ９７−３５６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０７−３４６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１７−３２６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２７−３１６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１３７−３０６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４７−２９６である。代替的な実施形態において、該ｇＣドメインは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ１０２−１０７からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２２２−２７９からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ３０７−３７９からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ９４−３５５である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−３７９である。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、ＡＡ１０２−１０７、２２２−２７９、および３０７−３７９から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１０２−１０７および２２２−２７９から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ１０２−１０７および３０７−３７９から選択される。別の実施形態において、該ドメインは、ＡＡ２２２−２７９および３０７−３７９から選択される。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４２−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−３１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−２９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−２５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０２−２３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１２−３６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２２−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１３２−３４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４２−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１５２−３２９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６２−３１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１７２−３０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８２−２９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１９２−２８９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２５２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６２−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−２６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−２５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−２４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２２−２３９である。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２２７−２７４からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２３２−２６９からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２３７−２６４からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ２４２−２５９からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約ＡＡ３０７−３７９からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１７−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２７−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３７−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３４７−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３５７−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０７−３６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０７−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０７−３４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０７−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０７−３２９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１２−３７４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１７−３６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２２−３６４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２７−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３２−３５４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３７−３４９である。代替的な実施形態において、該ｇＣドメインは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ｇＣ−２タンパク質は、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、上記のｇＣ−２フラグメントのうちの１つが、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、該タグは、ヒスチジン（「Ｈｉｓ」）タグである。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、５つのヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、６つのヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、別の数のヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＣ−２フラグメントは、Ｈｉｓタグで修飾されるＡＡ２７−４２６である。

別の実施形態において、該ｇＣドメインは、ｇＣの宿主Ｃ３ｂ分子への結合または相互作用を媒介するための、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＣドメインである。

別の実施形態において、該ｇＣタンパク質フラグメントは、プロパージン干渉ドメインである。別の実施形態において、該ｇＣタンパク質フラグメントは、プロパージン干渉ドメインの一部である。別の実施形態において、「プロパージン干渉ドメイン」とは、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主プロパージン分子との結合を遮断または阻害するドメインを指す。別の実施形態において、該用語は、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主プロパージン分子との相互作用を遮断または阻害するドメインを指す。別の実施形態において、（例えば、ｇＣ−１の場合）、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−７３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−８３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−９３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−１０３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−１１３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−１２３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ４３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ５３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ６３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ７３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ８３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ９３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ１０３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、約ＡＡ４３−９３からなる。代替的な実施形態において、該ｇＣドメインは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ｇＣドメインは、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主プロパージン分子との結合に干渉するための、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＣドメインである。

別の実施形態において、該ｇＣタンパク質フラグメントは、Ｃ５干渉ドメインである。別の実施形態において、該ｇＣタンパク質フラグメントは、Ｃ５干渉ドメインの一部である。別の実施形態において、「Ｃ５干渉ドメイン」とは、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主Ｃ５分子との結合に干渉するドメインを指す。別の実施形態において、該用語は、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主Ｃ５分子との相互作用に干渉するドメインを指す。別の実施形態において、（例えば、ｇＣ−１の場合）、該ｇＣドメインは、約ＡＡ３３−１３３からなる。別の実施形態において、該ｇＣドメインは、宿主Ｃ３ｂ分子の宿主Ｃ５分子への結合もしくは相互作用に干渉する、または阻害するための当技術分野において既知のいずれかの他のｇＣドメインである。

それぞれの組換えｇＣ−１またはｇＣ−２タンパク質またはそのフラグメントは、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質のフラグメントを含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＥタンパク質を含む。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−２ｇＥタンパク質のフラグメントを含む。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＥ−１タンパク質は、配列：

ＭＤＲＧＡＶＶＧＦＬＬＧＶＣＶＶＳＣＬＡＧＴＰＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＩＹＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＳＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＡＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＴＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＦＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＮＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡＰＰＨＡＰＰＴＨＧＡＬＲＬＧＡＶＭＧＡＡＬＬＬＳＡＬＧＬＳＶＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＡＷＲＡＶＫＳＲＡＳＧＫＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＱＶＰＷＬＡＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＲＳＤＧＨＱＳＲＲＱＬＴＴＦＧＳＧＲＰＤＲＲＹＳＱＡＳＤＳＳＶＦＷ（配列番号５）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＥ−１タンパク質は、配列番号５の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号５のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号５の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号５のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号５のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号５の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＥ−１タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１８０６、Ｘ１４１１２、ＤＱ８８９５０２、Ｘ０２１３８、およびＡＪ６２６４６９−ＡＪ６２６４９８のうちのいずれかのうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＥ−１タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＥ−２タンパク質は、配列：

ＭＡＲＧＡＧＬＶＦＦＶＧＶＷＶＶＳＣＬＡＡＡＰＲＴＳＷＫＲＶＴＳＧＥＤＶＶＬＬＰＡＰＡＥＲＴＲＡＨＫＬＬＷＡＡＥＰＬＤＡＣＧＰＬＲＰＳＷＶＡＬＷＰＰＲＲＶＬＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＥＰＬＡＩＡＹＳＰＰＦＰＡＧＤＥＧＬＹＳＥＬＡＷＲＤＲＶＡＶＶＮＥＳＬＶＩＹＧＡＬＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＶＧＬＳＤＥＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＥＰＡＰＶＰＴＰＴＰＤＤＹＤＥＥＤＤＡＧＶＴＮＡＲＲＳＡＦＰＰＱＰＰＰＲＲＰＰＶＡＰＰＴＨＰＲＶＩＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＨＭＥＴＬＥＡＩＬＦＡＰＧＥＴＦＧＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＧＰＹＡＭＤＶＶＷＭＲＦＤＶＰＳＳＣＡＤＭＲＩＹＥＡＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＶＳＳＷＡＹＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＴＰＰＰＲＣＦＡＥＡＲＭＥＰＶＰＧＬＡＷＬＡＳＴＶＮＬＥＦＱＨＡＳＰＱＨＡＧＬＹＬＣＶＶＹＶＤＤＨＩＨＡＷＧＨＭＴＩＳＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＨＬＰＱＲＱＰＥＰＶＥＰＴＲＰＨＶＲＡＰＨＰＡＰＳＡＲＧＰＬＲＬＧＡＶＬＧＡＡＬＬＬＡＡＬＧＬＳＡＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＳＷＲＡＶＫＳＲＡＳＡＴＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＧＳＬＷＱＤＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＨＳＥＧＲＫＳＲＲＰＬＴＴＦＧＳＧＳＰＧＲＲＨＳＱＡＳＹＰＳＶＬＷ（配列番号６）を有する。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＥ−２タンパク質は、配列番号６の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号６のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号６の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号６のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号６のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、配列番号６の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるｇＥ−２タンパク質をコードする核酸配列は、以下の登録番号：ＮＣ＿００１７９８、Ｚ８６０９９、Ｄ０００２６、Ｘ０４７９８、およびＭ１４８８６のうちの１つを有するＧｅｎＢａｎｋ登録に定められている。別の実施形態において、該ｇＥ−２タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列を有するヌクレオチド分子によってコードされている。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の相同体である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形である。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質のアイソフォームのフラグメントである。別の実施形態において、該タンパク質は、上記のＧｅｎＢａｎｋ登録のうちの１つに定められている配列によってコードされるタンパク質の変異形のフラグメントである。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＥフラグメントは、ｇＥタンパク質のＩｇＧＦｃ結合ドメインを含有する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、ＡＡ２４−２２４を含有する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、ＡＡ２４−２２４の一部を含有する。別の実施形態において、該一部は、該ｇＥタンパク質のＩｇＧＦｃ結合ドメインによって免疫回避を遮断する抗体を誘起するには十分である。

別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、ｇＥＩｇＧＦｃ結合ドメインの一部を含有する。別の実施形態において、（例えば、ｇＥ−１の場合）、該ｇＥドメインは、約ＡＡ２４−４０９からなる。別の実施形態において、該ドメインは、約２４−２２４からなる。代替的な実施形態において、該ｇＥドメインは、前記特定されたアミノ酸残基範囲のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３４−３９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ５４−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ７４−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ９４−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１４−３１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１３４−２９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１５４−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ５４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１７４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３４−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−３８９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−３６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−３４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−３２９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−３０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−２８９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−２６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−２４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−２２９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−２０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４−１８９である。代替的な実施形態において、該ｇＥドメインは、前記特定されたアミノ酸残基範囲のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該範囲は、約２２３−３９６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３０−３９０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２５５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２８５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２９５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０５−３８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３７０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３７０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３６０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３５０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３４０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３３０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３２０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３１０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３５−３００である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２２−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２７−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３２−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３７−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２２−３５４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２２−３４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２２−３４４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２７−３５４である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３２−３４９である。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、ＡＡ３８０を含む。代替的な実施形態において、該ｇＥドメインは、前記特定されたアミノ酸残基範囲のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ｇＥタンパク質は、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、上記のｇＥフラグメントのうちの１つは、抗原性タグで修飾される。別の実施形態において、該タグは、ヒスチジン（「Ｈｉｓ」）タグである。別の実施形態において、該Ｈｉｓタグは、５〜６のヒスチジン残基からなる。別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＥフラグメントは、Ｃ末端に６つのＨｉｓタグを有する約ＡＡ２４−４０９である。

別の実施形態において、（例えば、ｇＥ−２の場合）、該ｇＥドメインは、約ＡＡ２１８−３９１からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２３−３８６である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−２８０である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３０−３７５である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２５８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２７８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２８８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２９８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３０８−３７３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３６３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３５３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３４３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３３３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３２３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３１３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２８−３０３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２３８−３６３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４８−３５３である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２５８−３４３である。別の実施形態において、該ｇＥ範囲は、約ＡＡ３１５−３５２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２０−３５２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２５−３５２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３０−３５２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３３５−３５２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１５−３４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１５−３４２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１５−３３７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１５−３３２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２０−３４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２５−３４７である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２０−３４２である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３２５−３４２である。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、ＡＡ３７３を含む。代替的な実施形態において、該ｇＥドメインは、前記特定されたアミノ酸残基範囲のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、該ｇＥドメインは、ＩｇＧＦｃへの結合を媒介するための、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＥドメインである。

別の実施形態において、該ｇＥタンパク質は、細胞間伝播に関与するｇＥドメインを含有する。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、約ＡＡ２５６−２９１からなる。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、約ＡＡ３４８−３８０からなる。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、ＡＡ３８０を含む。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、細胞間伝播に関与する、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＥドメインである。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、細胞間伝播を促進することが既知である。別の実施形態において、該ｇＥドメインは、細胞間伝播に必要であることが既知である。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物に利用されるｇＥフラグメントは、免疫原性フラグメントである。別の実施形態において、「免疫原性フラグメント」とは、免疫原性であり、対象に投与されると、防御免疫応答を誘起する、ｇＥの一部を指す。別の実施形態において、ｇＥ免疫防御抗原は、全タンパク質である必要はない。別の実施形態において、該防御免疫応答は、通常、抗体応答を必要とする。別の実施形態において、ｇＥの変異体、配列保存的変異形、および機能保存的変異形は、すべてのこのような変異形が、必要とされる免疫防御効果を保持するという条件で、本発明の方法および組成物において有用である。

別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、ＨＳＶの任意の株からの免疫防御ｇＥ抗原を含有し得る。別の実施形態において、該免疫原性フラグメントは、感染した個人に認められる、ＨＳＶの配列変異形を含有し得る。

別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、免疫回避ドメインを含有する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、免疫回避ドメインの一部を含有する。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、免疫回避ドメインである。別の実施形態において、該ｇＥフラグメントは、免疫回避ドメインの一部である。別の実施形態において、ＨＳＶ−１ｇＥＡＡ配列が利用される。別の実施形態において、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはペプチドが利用される。

別の実施形態において、（例えば、ｇＥ−１の場合）、該ｇＥタンパク質フラグメントは、約ＡＡ２１−４１９からなる。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ４１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２０１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２２１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２４１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２６１−４１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−３９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−３１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−２９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−２５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−２３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−２１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−１９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−１７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−１５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ２１−１３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ３１−４０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ４１−３９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ５１−３８９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ６１−３７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ７１−３６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ８１−３５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ９１−３４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１０１−３３９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１１１−３２９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１２１−３１９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１３１−３０９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１４１−２９９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１５１−２７９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１６１−２６９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１７１−２５９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１８１−２４９である。別の実施形態において、該範囲は、約ＡＡ１９１−２３９である。代替的な実施形態において、該ｇＥタンパク質フラグメントは、前記特定されたアミノ酸残基のうちのいずれかから実質的になる、またはそれを含有する。

別の実施形態において、（例えば、ｇＥ−２の場合）、該ｇＥタンパク質フラグメントは、約ＡＡ２１−４１６からなる。別の実施形態において、該範囲は、前段落で特定された範囲のうちのいずれかである。

それぞれの組換えｇＥ−１またはｇＥ−２タンパク質またはそのフラグメントは、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、「免疫回避ドメイン」とは、抗ＨＳＶ抗体（例えば、抗ｇＤ抗体）の生体内抗ＨＳＶ効率に干渉、またはそれを低減するドメインを指す。別の実施形態において、該ドメインは、抗ＨＳＶ免疫応答の生体内抗ＨＳＶ効率に干渉、またはそれを低減する。別の実施形態において、該ドメインは、その後の感染の間におけるＨＳＶタンパク質（例えば、ｇＤ）の免疫原性を低減する。別の実施形態において、該ドメインは、その後のチャレンジの間におけるＨＳＶタンパク質の免疫原性を低減する。別の実施形態において、該ドメインは、その後のチャレンジの間におけるＨＳＶの免疫原性を低減する。別の実施形態において、該ドメインは、進行中のＨＳＶ感染との関連において、ＨＳＶタンパク質の免疫原性を低減する。別の実施形態において、該ドメインは、進行中のＨＳＶ感染との関連において、ＨＳＶの免疫原性を低減する。

本発明はまた、ＨＳＶタンパク質もしくはポリペプチド、またはそのフラグメントの類似体も提供する。類似体は、保存アミノ酸配列置換、または配列に影響を与えない修飾、またはその両方により、自然発生のタンパク質またはペプチドとは異なり得る。

例えば、タンパク質またはペプチドの一次配列を変化させるが、通常、その機能を変化させない、保存アミノ酸変換を行うことができる。保存アミノ酸置換は、一般に、（ａ）グリシン、アラニン、（ｂ）バリン、イソロイシン、ロイシン、（ｃ）アスパラギン酸、グルタミン酸、（ｄ）アスパラギン、グルタミン、（ｅ）セリン、スレオニン、（ｆ）リジン、アルギニン、（ｇ）フェニルアラニン、チロシン等の群内での置換を含む。

修飾（通常、一次配列を変化させない）は、例えば、アセチル化、またはカルボキシル化等のポリペプチドの生体内、または体外の化学誘導体化を含む。また、グリコシル化の修飾、例えば、その合成および処理の間、またはさらなる処理ステップにおいて、ポリペプチドのグリコシル化パターンを修飾することによって、例えば、哺乳類のグリコシル化酵素または脱グリコシル化酵素等のグリコシル化に影響を与える酵素にポリペプチドを曝露することによって、作製されるものも含む。また、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホスレオニン等のリン酸化アミノ酸残基を有する配列も含む。

また、タンパク質分解への耐性を改善する、または溶解特性を最適化する、または治療剤としてそれらをさらに適した状態にするために、一般の分子生物学的手法を使用して修飾されているポリペプチドも含む。このようなポリペプチドの類似体は、自然発生のＬアミノ酸以外の残基、例えば、例えば、Ｄアミノ酸、または非自然発生の合成アミノ酸を含有するものを含む。本発明のペプチドは、本明細書に記載された特定の例示的な処理のうちのいずれの生成物にも限定されない。

一実施形態において、本発明のワクチンは、アジュバントを含むが、別の実施形態において、該ワクチンは、アジュバントを含まない。「アジュバント」とは、別の実施形態において、個人に投与される、または体外で試験される際、抗原が投与される個人または試験システムにおいて、抗原への免疫応答を増強する化合物を指す。別の実施形態において、免疫アジュバントは、単独で投与された時は弱免疫原性、すなわち、抗体力価もしくは細胞媒介免疫応答を誘発しないか、それらをわずかにしか誘発しない抗原への免疫応答を強化する。別の実施形態において、該アジュバントは、抗原への抗体力価を増強する。別の実施形態において、該アジュバントは、個人における、免疫応答を達成するために有効な抗原の用量を低下させる。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物において利用されるアジュバントは、ＣｐＧ含有ヌクレオチド配列である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。別の実施形態において、該アジュバントは、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧＯＤＮ）である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＯＤＮ１８２６であり、一実施形態において、それは、コーリー・ファーマシューティカル・グループ（Coley Pharmaceutical Group）社から入手される。

別の実施形態において、「ＣｐＧ含有ヌクレオチド」、「ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド」、「ＣｐＧオリゴヌクレオチド」、および類似の用語は、非メチル化ＣｐＧ部分を含有する、８〜５０のヌクレオチドの長さのヌクレオチド分子を指す。別の実施形態においては、該用語の、当技術分野で一般に認められているいずれの他の定義も意図する。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチドである。別の実施形態において、「修飾オリゴヌクレオチド」とは、そのヌクレオチドのうちの少なくとも２つが、合成インターヌクレオシド連鎖（すなわち、あるヌクレオチドの５´末端と別のヌクレオチドの３´末端の間のホスホジエステル連鎖以外の連鎖）を介して共有結合的に連結している、オリゴヌクレオチドを指す。別の実施形態において、通常、核酸と関連しない化学基が、オリゴヌクレオチドに共有結合している。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、ホスホロチオエート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、アルキルホスホネート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、ホスホロジチオエート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、リン酸エステル連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、アルキルホスホノチオエート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、ホスホルアミダート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、カルバメート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、カルボネート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、リン酸トリエステル連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、アセトアミダート連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、カルボキシメチルエステル連鎖である。別の実施形態において、該合成インターヌクレオシド連鎖は、ペプチド連鎖である。

別の実施形態において、「修飾オリゴヌクレオチド」という用語は、共有結合的に修飾された塩基および／または糖類を有するオリゴヌクレオチドを指す。別の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３´位で水酸基、および５´位でリン酸基以外の低分子量の有機基に共有結合している、骨格糖類を有する、オリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２´−Ｏ−アルキル化リボース基を含む。別の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、リボースの代わりにアラビノース等の糖類を含む。別の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、医薬的に許容される担体と共に、マウスＴＬＲ９ポリペプチドを含む。

別の実施形態において、該ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、２本鎖である。別の実施形態において、該ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、１本鎖である。別の実施形態において、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」とは、多重ヌクレオチド（すなわち、リン酸基および置換性有機塩基に連結する糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）を指し、それは、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、もしくはウラシル（Ｕ））か、置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれか、または修飾塩基である。別の実施形態において、該用語は、オリゴリボヌクレオチド、ならびにオリゴデオキシリボヌクレオチドを指す。別の実施形態において、該用語は、ポリヌクレオシド（すなわち、リン酸塩を引いたポリヌクレオチド）およびいずれの他の有機塩基含有ポリマーをも含む。別の実施形態では、該用語は、本明細書に記載されるように、共有結合的に修飾された塩基および／または糖を有する、核酸またはオリゴヌクレオチドを包含する。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、置換プリンおよびピリミジンを含有する。別の実施形態において、該オリゴヌクレオチドは、シトシン等の標準プリンおよびピリミジン、ならびにＣ−５プロピン置換塩基等の塩基類似体を含有する。「Wagner R W et al., Nat Biotechnol 14:840-844(1996)」を参照されたい。別の実施形態において、プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、ならびに他の自然および非自然発生の核酸塩基、置換および非置換芳香族部分が挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態において、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、塩基またはヌクレオチドの連結ポリマーである。別の実施形態において、「連結された」とは、任意の物理化学的手段によって、互いに結合する２つの実体を指す。

別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、７９０９であり、一実施形態において、それは、５´ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴである。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２２１６であり、一実施形態において、それは、５´ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧＧである。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、８９１６である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、１８２６である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２００７である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、１０１０４である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２３９５である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２３３６である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２１３７である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２１３８である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、２２４３である。一実施形態において、上記で引用される該ＣｐＧヌクレオチド分子は、コーリー・ファーマシューティカル・グループ（Coley Pharmaceutical Group）社から入手する。別の実施形態において、該ＣｐＧ含有ヌクレオチド分子の配列は、ＣＴＡＧＡＣＧＴＴＡＧＣＧＴ（配列番号７）である。別の実施形態において、該ＣｐＧ含有ヌクレオチド分子の配列は、ＴＣＡＡＣＧＴＴ（配列番号８）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ（配列番号９）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号１０）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＣＧＴＣＧＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号１１）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１２）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴ（配列番号１３）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、ＴＣＣＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＴＧＡＧＣＴＴ（配列番号１４）（完全ホスホロチオエート骨格）である。別の実施形態において、該配列は、Ｇ＊Ｇ＊ＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１５）（＊は、ホスホロチオエート結合を示し、他は、本配列および次の配列に対して、リン酸ジエステル結合である）である。別の実施形態において、該配列は、Ｇ＊Ｇ＊ＧＧＧＡＧＣＡＴＧＣＴＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１６）である。別の実施形態において、該ＣｐＧ含有ヌクレオチド分子の配列は、当技術分野において既知のいずれかの他のＣｐＧ含有配列である。別の実施形態において、該ＣｐＧヌクレオチド分子は、当技術分野において既知のいずれかの他のＣｐＧ含有ヌクレオチド分子である。

別の実施形態において、該ＣｐＧオリゴヌクレオチドの用量は、１０ｍｃｇ（マイクログラム）である。別の実施形態において、該用量は、１５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇ以上である。

別の実施形態において、該ＣｐＧオリゴヌクレオチドの用量は、１０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１０〜３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００〜２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００〜２５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０〜２５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０〜３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００〜４００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２５０〜５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００〜６００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００〜１０００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００〜１５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、０．２５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、０．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２〜３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３〜５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５〜８ｍｇである。

ＣｐＧオリゴヌクレオチドの使用方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「Sur S et al.(Long term prevention of allergic lung inflammation in a mouse model of asthma by CpG oligodeoxynucleotides.J Immunol.1999 May 15;162(10):6284-93)」、「Verthelyi D.(Adjuvant properties of CpG oligonucleotides in primates. Methods Mol Med. 2006;127:139-58)」、および「Yasuda K et al. (Role of immunostimulatory DNA and TLR9 in gene therapy. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst.2006;23(2):89-110)」に記載されている。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、「核酸」または「ヌクレオチド」とは、少なくとも２つの塩基−糖−リン酸塩の組み合わせからなる列を指す。該用語は、別の実施形態において、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。「ヌクレオチド」とは、一実施形態において、核酸ポリマーのモノマー単位を指す。ＲＮＡは、一実施形態において、ｔＲＮＡ（トランスファーＲＮＡ）、ｓｎＲＮＡ（核内低分子）、ｒＲＮＡ（リボソームＲＮＡ）、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、低分子の抑制性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびリボザイムの形式である。ｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡの使用が記載されている（Ｃaudy AA et al.,Genes & Devel 16:2491-96、およびその中に引用される参考文献）。ＤＮＡは、他の実施形態において、プラスミドＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、線状ＤＮＡ、または染色体ＤＮＡもしくはこれらの群の誘導体の型であり得る。さらに、ＤＮＡおよびＲＮＡのこれらの型は、１本鎖、２本鎖、３本鎖、または４本鎖であり得る。該用語はまた、別の実施形態において、他の型の骨格であるが、同一の塩基を含有する、人工核酸を含む。一実施形態において、該人工核酸は、ＰＮＡ（ペプチド核酸）である。ＰＮＡは、ペプチド骨格およびヌクレオチド塩基を含有し、一実施形態において、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子の双方に結合することができる。別の実施形態において、該ヌクレオチドは、オキセタンで修飾される。別の実施形態において、該ヌクレオチドは、１つ以上のリン酸ジエステル結合をホスホロチオエート結合と置換することにより修飾される。別の実施形態において、人工核酸は、当技術分野において既知の天然核酸のリン酸骨格のいずれかの他の変異形を含有する。ホスホチオレート核酸およびＰＮＡの使用は、当業者に既知であり、例えば、「Neilsen PE,Curr Opin Struct Biol 9:353-57」、および「Raz NK et al.Biochem Biophys Res Commun.297:1075-84」に記載されている。核酸の生成および使用は、当業者に既知であり、例えば、「Molecular Cloning,(2001),Sambrook and Russell, eds.」および「Methods in Enzymology:Methods for molecular cloning in eukaryotic cells(2003)Purchio and G.C.Fareed」に記載されている。それぞれの核酸誘導体は、本発明の別個の実施形態を成す。

修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれの型は、本発明の別個の実施形態を成す。

修飾骨格を有する核酸の生成方法は、当技術分野において公知であり、例えば、特許文献１ないし３（Hutchersonら）に記載されている。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、該アジュバントは、アルミニウム塩アジュバントである。別の実施形態において、該アルミニウム塩アジュバントは、ミョウバン沈殿ワクチンである。別の実施形態において、該アルミニウム塩アジュバントは、ミョウバン吸着ワクチンである。アルミニウム塩アジュバントは、当技術分野において公知であり、例えば、「Harlow,E.and D.Lane(1988;Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory)」および「Nicklas,W.(1992;Aluminum salts.Research in Immunology 143:489-493)」に記載されている。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、水酸化アルミニウムである。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アルミナ水和物である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アルミナ三水和物（ＡＴＨ）である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アルミニウム水和物である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アルミニウム三水和物である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アルハイドロゲルである。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、スーパーフォス（Superfos）である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、アンホジェル（Amphogel）である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、水酸化アルミニウム（ＩＩＩ）である。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、非晶質アルミナである。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、三水和アルミナである。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、トリヒドロキシアルミニウムである。別の実施形態において、該アルミニウム塩は、当技術分野において既知のいずれかの他のアルミニウム塩である。

別の実施形態において、市販のＡｌ（ＯＨ）_３（例えば、ニューヨーク州ウェストベリーのデンマーク／アキュレート・ケミカル・アンド・サイエンティフィック（Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co.）社製のアルハイドロゲル（Alhydrogel）またはスーパーフォス（Superfos））を使用して、タンパク質５０〜２００ｇ／水酸化アルミニウム１ｍｇの比率でタンパク質を吸着する。別の実施形態において、タンパク質の吸着は、タンパク質のｐＩ（等電ｐＨ）および培地のｐＨに依存する。低ｐＩであるタンパク質は、高ｐＩであるタンパク質よりもさらに強く、正電荷を持つアルミニウムイオンに吸着する。別の実施形態において、アルミニウム塩は、マクロファージの非特的活性化および補体活性化によって、２〜３週間にわたって、ゆっくりと放出されるＡｇの持続性薬剤を構築する。

別の実施形態において、該ミョウバン塩の用量は、１０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇ以上である。一実施形態において、上述のミョウバン塩の用量は、組換えタンパク質１ｍｃｇ当たりの量である。

別の実施形態において、該ミョウバン塩の用量は、１０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００〜２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０〜３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００〜４００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００〜６００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００〜１０００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００〜１５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２〜３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３〜５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５〜８ｍｇである。一実施形態において、上述のミョウバン塩の用量は、組換えタンパク質１ｍｃｇ当たりの量である。

別の実施形態において、該アジュバントは、モンタニド（Montanide）ＩＳＡアジュバントである。別の実施形態において、該アジュバントは、補体成分Ｃ３ｄの三量体である。別の実施形態において、該三量体は、タンパク質免疫原に共有結合的に連結している。別の実施形態において、該アジュバントは、ＭＦ５９である。別の実施形態において、該アジュバントは、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）タンパク質である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＧＭ−ＣＳＦタンパク質を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＧＭ−ＣＳＦをコードするヌクレオチド分子である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＧＭ−ＣＳＦをコードするヌクレオチド分子の混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、サポニンＱＳ２１である。別の実施形態において、該アジュバントは、サポニンＱＳ２１を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＭＰＬを含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＳＢＡＳ２である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＳＢＡＳ２を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。別の実施形態において、該アジュバントは、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、免疫刺激サイトカインである。別の実施形態において、該アジュバントは、免疫刺激サイトカインを含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、免疫刺激サイトカインをコードするヌクレオチド分子である。別の実施形態において、該アジュバントは、免疫刺激サイトカインをコードするヌクレオチド分子を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、クイルグリコシド（quill glycoside）を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、細菌マイトジェンを含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、細菌毒素を含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、当技術分野において既知のいずれかの他のアジュバントを含有する混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、上記のアジュバントの２つからなる混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、上記のアジュバントの３つからなる混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、上記のアジュバントの３つ以上からなる混合物である。別の実施形態において、該アジュバントは、ＭＰＬと５００μｇのミョウバンの混合物である。

別の実施形態において、本発明のワクチンによって誘起される抗ｇＣまたは抗ｇＥ抗体による免疫回避の遮断は、有効な抗ｇＤ免疫応答を誘起するために必要とされるアジュバントを低用量にすることができる。別の実施形態では、本発明のワクチン用に、有効な抗ＨＳＶ免疫応答を誘起するためのアジュバントの必要用量が、より低くなる。別の実施形態では、アジュバントが使用される場合、有効な抗ＨＳＶ免疫応答を誘起するための、ワクチンの必要用量が、より低くなる。

別の実施形態において、該アジュバントは、担体ポリペプチドである。別の実施形態において、「担体ポリペプチド」とは、ポリペプチドの免疫原性を強化するために、本発明のＨＳＶタンパク質と抱合または接合することができる、タンパク質またはその免疫原性フラグメントを指す。担体タンパク質の例としては、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、アルブミン、コレラ毒素、易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）等が挙げられるが、これらに決して限定されない。別の実施形態において、該２つの成分は、融合ポリペプチドとして発現するためのキメラ構築物として調製される。別の実施形態において、化学的架橋を使用して、ＨＳＶタンパク質を担体ポリペプチドと連結させる。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物のワクチンは、組換えＨＳＶ−１タンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えＨＳＶ−２タンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２タンパク質の両方を含有する。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物の組換えＨＳＶ−１−タンパク質含有ワクチンは、組換えＨＳＶ−２タンパク質をさらに含有する。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−２タンパク質は、ｇＤ２タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−２タンパク質は、ｇＣ２タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−２タンパク質は、ｇＥ２タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−１タンパク質含有ワクチンは、ｇＤ２タンパク質およびｇＣ２タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＤ２タンパク質およびｇＥ２タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＥ２タンパク質およびｇＣ２タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＤ２タンパク質、ｇＥ２タンパク質、およびｇＣ２タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物の組換えＨＳＶ−２−タンパク質含有ワクチンは、組換えＨＳＶ−１タンパク質をさらに含有する。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−１タンパク質は、ｇＤ１タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−１タンパク質は、ｇＣ１タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−１タンパク質は、ｇＥ１タンパク質またはそのフラグメントである。別の実施形態において、該組換えＨＳＶ−２タンパク質含有ワクチンは、ｇＤ１タンパク質およびｇＣ１タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＤ１タンパク質およびｇＥ１タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＥ１タンパク質およびｇＣ１タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＤ１タンパク質、ｇＥ１タンパク質、およびｇＣ１タンパク質、またはそのフラグメントをさらに含有する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質は含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＤタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントのいずれをも含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質は含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＥタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントのいずれかを含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−１ｇＣタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質は含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＣタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−１ｇＥタンパク質またはそのフラグメントのいずれかを含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質を含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＤタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントのいずれかを含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質を含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＥタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントのいずれをも含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で使用される組換えＨＳＶ−２ｇＣタンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するが、プライミングワクチン接種で存在した他の組換えタンパク質を含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質およびＨＳＶ−２ｇＣタンパク質の両方を含有する。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、プライミングワクチン接種で存在した組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントを含有しない。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、（ａ）組換えＨＳＶ−２ｇＤタンパク質またはそのフラグメントか、（ｂ）組換えＨＳＶ−２ｇＥタンパク質またはそのフラグメントのいずれをも含有しないが、それらの両方は、プライミングワクチン接種に存在する。

一実施形態において、以上に記載の追加免疫ワクチン接種のいずれかは、１つ以上のＨＳＶ−１タンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するプライミングワクチン接種後に実施される。別の実施形態において、以上に記載の追加免疫ワクチン接種のいずれかは、１つ以上のＨＳＶ−２タンパク質またはその免疫原性フラグメントを含有するプライミングワクチン接種後に実施される。

別の実施形態において、本発明のワクチンレジメンは、対象に追加免疫ワクチン接種を実施するステップをさらに含み、該追加免疫ワクチン接種は、実質的に組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはその免疫原性フラグメントからなる。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、組換えＨＳＶ−１ｇＤタンパク質またはその免疫原性フラグメントおよびアジュバントからなる。一実施形態において、該ＨＳＶｇＤタンパク質またはその免疫原性フラグメントは、ＨＳＶ−１ｇＤタンパク質であるが、別の実施形態において、ＨＳＶ−２ｇＤタンパク質であり、別の実施形態において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＤタンパク質の両方である。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、実質的に組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはその免疫原性フラグメントからなる。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはその免疫原性フラグメントおよびアジュバントからなる。一実施形態において、該ＨＳＶｇＥタンパク質またはその免疫原性フラグメントは、ＨＳＶ−１ｇＥタンパク質であるが、別の実施形態において、ＨＳＶ−２ｇＥタンパク質であり、別の実施形態において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＥタンパク質の両方である。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、実質的に組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはその免疫原性フラグメントからなる。別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはその免疫原性フラグメントおよびアジュバントからなる。一実施形態において、該ＨＳＶｇＣタンパク質またはその免疫原性フラグメントは、ＨＳＶ−１ｇＣタンパク質であるが、別の実施形態において、ＨＳＶ−２ｇＣタンパク質であり、別の実施形態において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ｇＣタンパク質の両方である。

別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、単一のプライミングワクチン接種に続く。別の実施形態において、「プライミングワクチン接種」とは、（ａ）ｇＤタンパク質と、（ｂ）ｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、あるいはその混合物のいずれか、との混合物を含有するワクチン接種を指す。別の実施形態において、プライミングワクチン接種とは、ｇＤタンパク質、ｇＣタンパク質、およびｇＥタンパク質から選択される２つ以上の組換えＨＳＶタンパク質を含有するワクチン接種を指す。別の実施形態において、該用語は、初期投与されたワクチンを指す。別の実施形態において、２つのプライミングワクチン接種が、追加免疫ワクチン接種前に実施される。別の実施形態において、３つのプライミングワクチン接種が、追加免疫ワクチン接種前に実施される。別の実施形態において、４つのプライミングワクチン接種が、追加免疫ワクチン接種前に実施される。

別の実施形態において、単一の追加免疫ワクチン接種が、プライミングワクチン接種後に実施される。別の実施形態において、２回の追加免疫ワクチン接種が、プライミングワクチン接種後に実施される。別の実施形態において、３回の追加免疫ワクチン接種が、プライミングワクチン接種後に実施される。

一実施形態において、ｇＤおよびｇＥは、同じ部位に、１本の注射器で投与されるが、別の実施形態において、ｇＤおよびｇＥは、別個の部位に、別個の注射器で投与されるか、または別の実施形態において、ｇＤおよびｇＥは、単一部位に、同時に投与され、その後、ｇＥなしのｇＤの追加免疫用量が投与される。

一実施形態において、ｇＤおよびｇＣは、同じ部位に、１本の注射器で投与されるが、別の実施形態において、ｇＤおよびｇＣは、別個の部位に、別個の注射器で投与されるか、または別の実施形態において、ｇＤおよびｇＣは、単一部位に、同時に投与され、その後、ｇＣなしのｇＤの追加免疫用量が投与される。

一実施形態において、ｇＥおよびｇＣは、同じ部位に、１本の注射器で投与されるが、別の実施形態において、ｇＥおよびｇＣは、別個の部位に、別個の注射器で投与されるか、または別の実施形態において、ｇＥおよびｇＣは、単一部位に、同時に投与され、その後、ｇＥなしのｇＣの追加免疫用量が投与される。

一実施形態において、ｇＤ、ｇＣ、およびｇＥは、同じ部位に、１本の注射器で投与されるが、別の実施形態において、ｇＤ、ｇＣ、およびｇＥは、別個の部位に、別個の注射器で投与されるか、または別の実施形態において、ｇＤ、ｇＣ、およびｇＥは、単一部位に、同時に投与され、その後、ｇＣおよびｇＥなしのｇＤの追加免疫用量が投与される。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＤ−１の用量は、例えば、ヒト対象に対して、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。

別の実施形態において、該投与量は、０．１ｍｃｇ／体重１ｋｇ（１回の接種につき）である。別の実施形態において、該投与量は、０．２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１１ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０９ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０８ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０７ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０６ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０４ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇ未満である。

別の実施形態において、該投与量は、１〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４〜８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜４０ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８〜５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜５０ｍｃｇ／接種である。

ｇＤ−１のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＤ−２の用量は、１０ｎｇ／接種であり、一実施形態において、ヒト対象用である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７５０ｎｇ／接種である。

別の実施形態において、該投与量は、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。

別の実施形態において、該投与量は、５００ｎｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１．２５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、２．５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１２．５ｍｃｇ／ｋｇである。

ｇＤ−２のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＣ−１の用量は、例えば、ヒト対象に対して、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。

別の実施形態において、該投与量は、１０〜１００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜２５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜５００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜３００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４〜８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜４０ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００〜５００ｍｃｇ／接種である。

ｇＣ−１のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＣ−２の用量は、例えば、ヒト対象に対して、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。

別の実施形態において、該投与量は、０．１ｍｃｇ／体重１ｋｇ（１回の接種につき）である。別の実施形態において、該投与量は、０．２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１１ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０９ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０８ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０７ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０６ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０４ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇ未満である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／ｋｇである。

別の実施形態において、該投与量は、１〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４〜８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜４０ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００〜５００ｍｃｇ／接種である。

ｇＣ−２のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＥ−１の用量は、例えば、ヒト対象に対して、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。

別の実施形態において、該投与量は、０．５〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、０．５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２．５〜７．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４〜８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜４０ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００〜５００ｍｃｇ／接種である。

ｇＥ−１のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、ワクチン接種または追加免疫ワクチン接種に利用される組換えＨＳＶｇＥ−２の用量は、例えば、ヒト対象に対して、１回の接種につき２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。

ｇＥ−２のそれぞれの用量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、該追加免疫ワクチン接種は、アジュバントを含有する。別の実施形態において、該アジュバントは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含有する。別の実施形態において、該アジュバントは、アルミニウム塩を含有する。別の実施形態において、該アジュバントは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびアルミニウム塩の両方を含有する。別の実施形態において、該アジュバントは、上に開示のいずれかの他のアジュバントを含有する。別の実施形態において、該アジュバントは、上に開示のアジュバントのいずれかの組み合わせを含有する。

別の実施形態において、本発明のワクチン接種または追加免疫ワクチン接種におけるＣｐＧオリゴヌクレオチドの用量は、１０ｍｃｇ（マイクログラム）である。別の実施形態において、該用量は、１５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇ以上である。

別の実施形態において、該ＣｐＧオリゴヌクレオチドの用量は、１０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００〜２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０〜３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００〜４００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００〜６００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００〜１０００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００〜１５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２〜３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３〜５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５〜８ｍｇである。

別の実施形態において、追加免疫ワクチン接種におけるミョウバン塩の用量は、１０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇ以上である。

別の実施形態において、該ミョウバン塩の用量は、１０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１００〜２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１５０〜３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、２００〜４００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、３００〜６００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、５００〜１０００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、７００〜１５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２〜３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３〜５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５〜８ｍｇである。

別の実施形態において、該ミョウバン塩の用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１５ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり２０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり３０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり７０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１５０ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり７００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５ｍｇ以上である。

別の実施形態において、該ミョウバン塩の用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり２０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり３０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり５０〜１００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１００〜２００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり１５０〜３００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり２００〜４００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり３００〜６００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり５００〜１０００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１ｍｃｇ組換えタンパク質当たり７００〜１５００ｍｃｇである。別の実施形態において、該用量は、１〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、１．５〜２ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、２〜３ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、３〜５ｍｇである。別の実施形態において、該用量は、５〜８ｍｇである。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、ｇＤの細胞受容体への結合を阻害する抗体を誘起する。別の実施形態において、該受容体は、ヘルペスウイルス侵入メディエータＡ（ＨｖｅＡ／ＨＶＥＭ）である。別の実施形態において、該受容体は、ネクチン１（ＨｖｅＣ）である。別の実施形態において、該受容体は、ネクチン２（ＨｖｅＢ）である。別の実施形態において、該受容体は、ヘパラン硫酸修飾型である。別の実施形態において、該受容体は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンである。別の実施形態において、該受容体は、当技術分野において既知のいずれかの他のｇＤ受容体である。

別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントをワクチンに含有させることにより、ワクチンによって誘起される抗ｇＤ抗体の有効性を増加させる。別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントを含有させることにより、ｇＤの細胞受容体への結合を阻害する抗体を誘起するために必要とされる組換えｇＤの用量を増加させる（図１９）。別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントは、ｇＤの用量をｇＣタンパク質（図２０Ａ）またはｇＥタンパク質とは別個に投与する際、ｇＤの細胞受容体への結合を阻害する抗体を誘起するために必要とされる組換えｇＤの用量を減少させる。

別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントをワクチンに含有させることにより、先天的免疫応答の有効性を強化する。別の実施形態において、該先天的免疫応答は、抗体媒介免疫応答である。別の実施形態において、該先天的免疫応答は、非抗体媒介免疫応答である。別の実施形態において、該先天的免疫応答は、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞応答である。別の実施形態において、該先天的免疫応答は、当技術分野において既知のいずれかの他の先天的免疫応答である。

一実施形態において、ｇＣ−１タンパク質、および／またはアジュバントをワクチンに含有させることにより、疾患および死亡から防御するが、別の実施形態において、ｇＣ−２タンパク質をワクチンに含有させることにより、疾患および死亡から防御する（例えば、図２２〜２６）。一実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位の疾患点数の最大の低減は、５ｍｃｇの用量を用いて達成される。別の実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、２ｍｃｇの用量を用いて達成される。一実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、１ｍｃｇの用量を用いて達成される。別の実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、０．５ｍｃｇの用量を用いて達成される。一実施形態において、ヒト用のワクチンに有用なｇＣ−２の用量は、当技術分野において既知の、マウス実験データに基づいて推定される。

一実施形態において、ｇＤ−１タンパク質、および／またはアジュバントをワクチンに含有させることにより、疾患および死亡から防御するが、別の実施形態において、ｇＤ−２タンパク質をワクチンに含有させることにより、疾患および死亡から防御する（例えば、図２７〜３１）。一実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位の疾患点数の最大の低減は、２５０ｎｇの用量を用いて達成される。一実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、１００ｎｇの用量を用いて達成される。別の実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、５０ｎｇの用量を用いて達成される。一実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、２５ｎｇの用量を用いて達成される。別の実施形態において、接種および帯状ヘルペス部位における疾患点数の低減は、１０ｎｇの用量を用いて達成される。一実施形態において、ヒト用のワクチンに有用なｇＤ−２の用量は、当技術分野において既知の、マウス実験データに基づいて推定される。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、細胞結合および／または細胞侵入に関与する別のＨＳＶ糖タンパク質をさらに含む。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＨである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＬである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＢである。別の実施形態において、ＨＳＶｇＢ又はその免疫原性フラグメントを含まない。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、追加のＨＳＶ糖タンパク質をさらに含む。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＭである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＮである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＫである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＧである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＩである。別の実施形態において、該糖タンパク質は、ｇＪである。

一実施形態において、本発明のワクチンおよび組成物は、単一組換えＨＳＶ糖タンパク質を含み、一実施形態において、それは、ｇＣ、ｇＥ、またはｇＤ、および任意にアジュバントである。一実施形態において、該ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ−１糖タンパク質であるが、別の実施形態において、該ＨＳＶ糖タンパク質は、ＨＳＶ−２糖タンパク質である。別の実施形態において、本発明は、組換えＨＳＶ糖タンパク質をコードする組換えワクチンベクターを提供する。

別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントをワクチンに含有させることにより、上記の糖タンパク質のうちの１つに対してワクチンによって誘起される抗体の有効性を増加する。別の実施形態において、本発明のｇＣタンパク質、ｇＥタンパク質、および／またはアジュバントは、糖タンパク質のうちの１つの用量が、他の糖タンパク質のうちの１つとは別個に投与される場合（図２０Ａ）、糖タンパク質のその細胞受容体への結合を阻害する抗体を誘起するために必要とされる上記の糖タンパク質のうちの１つの用量を低減する（図１９）。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、組換えヌクレオチドワクチンである。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えＤＮＡワクチンである。別の実施形態において、該ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶｇＣタンパク質およびＨＳＶｇＤタンパク質をコードする。別の実施形態において、該ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶｇＥタンパク質およびＨＳＶｇＤタンパク質をコードする。別の実施形態において、該ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶｇＥタンパク質、ＨＳＶｇＣタンパク質、およびＨＳＶｇＤタンパク質をコードする。別の実施形態において、該組換えタンパク質は、ＨＳＶ−２タンパク質である。別の実施形態において、該組換えタンパク質は、ＨＳＶ−１タンパク質である。別の実施形態において、該タンパク質は、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２タンパク質の両方を含有する。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、本発明のＨＳＶ抗原を装填した樹枝状細胞（ＤＣ）を含有する。別の実施形態において、該ＤＣは、本発明のＨＳＶ抗原に曝露されている。別の実施形態において、該ＤＣは、本発明のＨＳＶ抗原をコードするヌクレオチドを装填する。別の実施形態において、該ＤＣは、活性化されている。

別の実施形態において、本発明は、本発明の組換えＨＳＶタンパク質の組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の組換えＨＳＶタンパク質をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を提供する。別の実施形態において、該免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含有する。

別の実施形態において、本発明は、本発明の組換えＨＳＶタンパク質をコードする組換えワクチンベクターを提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の組換えＨＳＶタンパク質を含む組換えワクチンベクターを提供する。

別の実施形態において、本発明は、本発明のヌクレオチド分子を含む組換えワクチンベクターを提供する。別の実施形態において、該発現ベクターは、プラスミドである。別の実施形態において、本発明は、細胞への本発明のヌクレオチド分子の導入方法を提供する。組換えベクターを構築および利用する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「Sambrook et al.(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)」、および「Brent et al.(2003,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,New York)」に記載されている。別の実施形態において、該ベクターは、細菌ベクターである。他の実施形態において、該ベクターは、サルモネラ属菌、シゲラ属菌、ＢＣＧ、リステリア・モノサイトゲネス（L.monocytogenes）およびストレプトコッカス・ゴルドニ（S.gordonii）から選択される。別の実施形態において、該組換えＨＳＶタンパク質は、食胞リソソームの融合を回避し、細胞の細胞質に生息するために修飾された組換え細菌ベクターによって送達される。別の実施形態において、該ベクターは、ウイルスベクターである。他の実施形態において、該ベクターは、ワクシニア、アビポッツクス、アデノウイルス、ＡＡＶ、ワクシニアウイルスＮＹＶＡＣ、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、セムリキ森林熱ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレトロウイルスから選択される。別の実施形態において、該ベクターは、裸のＤＮＡベクターである。別の実施形態において、該ベクターは、当技術分野において既知のいずれかの他のベクターである。

別の実施形態において、本発明のヌクレオチドは、該ベクターが中に導入される細胞におけるコード化ペプチドの発現を促進する、プロモーター／調節配列に作動可能に連結される。遺伝子の構成的発現を促進するために有用なプロモーター／調節配列は、当技術分野において公知であり、例えば、サイトメガロウイルス即初期プロモーターエンハンサー配列、ＳＶ４０早期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態において、本発明のペプチドをコードする核酸の誘導および組織特異的発現は、誘発または組織特異的プロモーター／調節配列の制御下で、ペプチドをコードする核酸を置くことによって達成される。本目的のために有用な組織特異的または誘発プロモーター／調節配列の例としては、ＭＭＴＶＬＴＲ誘発プロモーター、およびＳＶ４０後期エンハンサー／プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態において、金属、グルココルチコイド等の誘発剤に応答して誘発されるプロモーターを利用する。したがって、本発明は、既知または未知のいずれかであり、それに作動可能に連結される所望のタンパク質の発現を促進することが可能である、任意のプロモーター／調節配列の使用を含むことが理解される。

別の実施形態において、本発明は、本発明のベクターを含む細胞を提供する。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生成する方法は、当技術分野において公知である。例えば、「Sambrook et al.(1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)」、および「Ausubel et al.(1997,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,New York)」を参照されたい。

他の実施形態において、上述の方法のうちのいずれかのワクチンは、本発明の組成物のワクチンの性質のうちのいずれかを有する。それぞれの性質は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明は、対象における一次ＨＳＶ感染を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を治療する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における一次ＨＳＶ感染後の、発赤を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

一実施形態において、「発赤」または「再発」とは、潜伏神経ＨＳＶ感染後の、皮膚組織の再感染を指す。別の実施形態において、該用語は、潜伏期後のＨＳＶの再活性化を指す。別の実施形態において、該用語は、症状を示さない潜伏期後の、症状を示すＨＳＶ病変を指す。

別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶの伝播を阻害する方法を提供する。一実施形態において、ＤＲＧから皮膚への伝播が阻害される。一実施形態において、ＨＳＶの細胞間伝播が阻害される。一実施形態において、順行性伝播が阻害される。一実施形態において、逆行性伝播が阻害される。「ＤＲＧ」とは、一実施形態において、神経細胞体を指し、また別の実施形態において、神経線維のニューロン細胞体を含有する。別の実施形態において、該用語は、当技術分野において使用される「ＤＲＧ」のいずれかの他の定義を指す。別の実施形態において、神経組織へのＨＳＶの伝播が阻害される。

別の実施形態において、本発明は、対象における、一次ＨＳＶ感染後の再発を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、一次ＨＳＶ感染後の再発を予防する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象における、一次ＨＳＶ感染後の口唇ＨＳＶを阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ感染の再発を予防する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染の再発の重症度を軽減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染の再発の頻度を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。一実施形態において、本発明は、ＨＳＶ感染対象における、記載される方法のいずれかを提供する。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ脳炎を治療する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ脳炎の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。「ＨＳＶ脳炎」とは、一実施形態において、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）によって生じる脳炎を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶと関連する脳炎を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ媒介脳炎のいずれかの他の型を指す。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ新生児感染を治療または軽減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

本明細書で言及されるＨＳＶは、一実施形態において、ＨＳＶ−１を指すが、別の実施形態において、ＨＳＶ−２を指し、また別の実施形態において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２を指すことを理解されたい。

「ＨＳＶ−１」とは、別の実施形態において、単純ヘルペスウイルス１型を指す。別の実施形態において、該用語は、ＫＯＳ株を指す。別の実施形態において、該用語は、Ｆ株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＮＳ株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＣＬ１０１株を指す。別の実施形態において、該用語は、「１７」株を指す。別の実施形態において、該用語は、「１７＋ｓｙｎ」株を指す。別の実施形態において、該用語は、マッキンタイヤ（MacIntyre）株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＭＰ株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＦ株を指す。別の実施形態において、該用語は、当技術分野において既知のいずれかの他のＨＳＶ−１株を指す。

「ＨＳＶ−２」とは、別の実施形態において、単純ヘルペスウイルス２型を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＳＶ−２３３３株を指す。別の実施形態において、該用語は、２．１２株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＨＧ５２株を指す。別の実施形態において、該用語は、ＭＳ株を指す。別の実施形態において、該用語は、Ｇ株を指す。別の実施形態において、該用語は、１８６株を指す。別の実施形態において、該用語は、当技術分野において既知のいずれかの他のＨＳＶ−２株を指す。

別の実施形態において、本発明は、対象にＨＳＶ感染に対するワクチン接種をする方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染を抑制する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ感染を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、一次ＨＳＶ感染を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、ニューロンＨＳＶ伝播を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

「ＨＳＶ感染を阻害する」および「一次ＨＳＶ感染を阻害する」という用語は、別の実施形態において、感染性ウイルスの力価を９０％減少させることを指す。別の実施形態において、該力価は、５０％減少する。別の実施形態において、該力価は、５５％減少する。別の実施形態において、該力価は、６０％減少する。別の実施形態において、該力価は、６５％減少する。別の実施形態において、該力価は、７０％減少する。別の実施形態において、該力価は、７５％減少する。別の実施形態において、該力価は、８０％減少する。別の実施形態において、該力価は、８５％減少する。別の実施形態において、該力価は、９２％減少する。別の実施形態において、該力価は、９５％減少する。別の実施形態において、該力価は、９６％減少する。別の実施形態において、該力価は、９７％減少する。別の実施形態において、該力価は、９８％減少する。別の実施形態において、該力価は、９９％減少する。別の実施形態において、該力価は、９９％を超えて減少する。

別の実施形態において、該用語は、９０％のウイルス複製の程度の減少を指す。別の実施形態において、複製は、５０％減少する。別の実施形態において、複製は、５５％減少する。別の実施形態において、複製は、６０％減少する。別の実施形態において、複製は、６５％減少する。別の実施形態において、複製は、７０％減少する。別の実施形態において、複製は、７５％減少する。別の実施形態において、複製は、８０％減少する。別の実施形態において、複製は、８５％減少する。別の実施形態において、複製は、９２％減少する。別の実施形態において、複製は、９５％減少する。別の実施形態において、複製は、９６％減少する。別の実施形態において、複製は、９７％減少する。別の実施形態において、複製は、９８％減少する。別の実施形態において、複製は、９９％減少する。別の実施形態において、複製は、９９％を超えて減少する。

ＨＳＶ複製およびＨＳＶ感染の程度を決定する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「Lambiase A et al.(Topical treatment with nerve growth factor in an animal model of herpetic keratitis.Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.2007 May 4)」、「Ramaswamy M et al.(Interactions and management issues in HSV and HIV coinfection.Expert Rev Anti Infect Ther.2007 Apr;5(2):231-43)」、および「Jiang C et al.(Mutations that decrease DNA binding of the processivity factor of the herpes simplex virus DNA polymerase reduce viral yield,alter the kinetics of viral DNA replication,and decrease the fidelity of DNA replication.J Virol.2007 Apr;81(7):3495-502)」に記載されている。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ媒介ヘルペス性眼疾患の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ−１角膜感染またはヘルペス性角膜炎を治療する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ−１角膜感染またはヘルペス性角膜炎の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

ヘルペス性眼疾患、角膜感染、ヘルペス性角膜炎の存在および程度を決定する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「Labetoulle M et al.(Neuronal propagation of HSV1 from the oral mucosa to the eye.Invest Ophthalmol Vis Sci.2000 Aug;41(9):2600-6)」および「Majumdar S et al.(Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs for treating HSV-1-induced corneal epithelial and stromal keratitis:in vitro and in vivo evaluations.J Ocul Pharmacol Ther.2005 Dec;21(6):463-74)」に記載されている。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ性器感染を治療、抑制、または阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、反復ＨＳＶ感染のいずれかの兆候を治療、抑制、または阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ媒介性器潰瘍の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ潜伏感染の確立を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ媒介脳炎の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明の方法によって治療または予防される、該ヘルペス媒介脳炎は、局所ヘルペス脳炎である。別の実施形態において、該ヘルペス媒介脳炎は、新生児ヘルペス脳炎である。別の実施形態において、該ヘルペス媒介脳炎は、当技術分野において既知のいずれかの他の型のヘルペス媒介脳炎である。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ媒介脳炎に関連する、またはそれに続発する、疾患、障害、もしくは症状を治療する、またはそれらの発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症を治療する、その病原を減少させる、その症状を改善する、その二次症状を改善する、その発症を減少させる、その再発に対して潜伏時間を延期させる方法を提供し、本発明のワクチンを対象に投与するステップを含む。

本発明の方法のいずれかによると、また一実施形態において、該対象は、ヒトである。別の実施形態において、該対象は、ネズミ科の動物であり、一実施形態においては、マウスであり、また別の実施形態においては、ラットである。別の実施形態において、該対象は、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、またはブタである。別の実施形態において、該対象は、哺乳類である。別の実施形態において、該対象は、ＨＳＶによる感染症を起こしやすい任意の生命体である。

別の実施形態において、本発明は、ヒト対象において、帯状ヘルペス病変部の形成または類似の発生の形成から対象を防御する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒト対象における、ＨＳＶ帯状ヘルペス病変部の形成または類似の発生を阻害する方法を提供する。

一実施形態における「帯状ヘルペス」とは、特に感染の再活性化の間の、ＨＳＶ感染の皮膚病変部の性質を指し、一実施形態において、ストリップまたは帯様のパターンでよく見られ、発疹として始まり、真皮節付近の分布に続く。一実施形態において、該発疹は、漿液で満たされた小胞または小水疱に発展する。一実施形態において、帯状ヘルペス病変部は、マウスにおいて、ＨＳＶとの接触の結果形成される。一実施形態において、帯状ヘルペス病変部は、ヒトにおいて、ＨＳＶとの接触の結果形成される。「帯状ヘルペス伝播」は、一実施形態において、真皮節内の神経節から二次皮膚部位へ伝播するＨＳＶ感染を指す。別の実施形態において、該用語は、感染の初期部位と同じ真皮節内で伝播することを指す。別の実施形態において、該用語は、当技術分野において既知の「帯状ヘルペス病変部」のいずれかの他の定義を指す。「発生」とは、別の実施形態において、疾患の症状、または疾患の伝播もしくは罹患率の急増を指し、一実施形態においては、帯状ヘルペス病変部の急増を指すが、別の実施形態においては、「発生」とは、帯状ヘルペス病変部の突発を指す。

一実施形態において、本発明は、対象における、真皮節の病変部または類似状態の形成を阻害する方法を提供する。一実施形態において、真皮節の病変部は、ＨＳＶとの接触の結果として、形成される。別の実施形態において、真皮節の病変部は、ほとんどの場合、ウイルスが神経節における潜伏から再活性化する際に進行し、一実施形態において、神経まで伝播し、一実施形態において、反復感染を引き起こす。

本発明の方法は、ＨＳＶ感染、または対象のＨＳＶへの曝露に次ぐ、このような感染に関連した一次もしくは二次症状を治療、阻害、抑制する等に使用され得ることを理解されたい。別の実施形態において、該対象は、ワクチン接種前に、ＨＳＶに感染している。別の実施形態において、該対象は、ＨＳＶ感染の危険性がある。別の実施形態において、該対象がワクチン接種時にＨＳＶに感染しているか、していないかに関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、ＨＳＶ感染、またはこのような感染に関連した一次もしくは二次症状を治療、阻害、抑制する等に効果的である。

一実施形態において、「治療（する）」とは、治療上の処置、または予防もしくは防止対策を指し、該目的は、上に記載されるように、標的とされた病的状態または障害を予防または緩和することである。したがって、一実施形態において、治療（する）は、疾患、障害、もしくは状態、またはそれらの組み合わせと関連する症状に直接影響を与える、または治癒する、抑制する、阻害する、予防する、重症度を軽減する、その発病を遅延させる、それを軽減することを含み得る。したがって、一実施形態において、「治療（する）」とは、とりわけ、進行を遅延する、寛解を促進する、寛解を誘導する、寛解を増強する、回復を加速する、代替療法の有効性を増加、もしくは代替療法への耐性を低下する、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態において、「予防（する）」とは、とりわけ、症状の発病を遅延させる、疾患への再発を予防する、再発の発病の数もしくは頻度の減少する、症候性発病間での潜伏期の増加する、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態において、「抑制（する）」または「阻害（する）」とは、とりわけ、症状の重症度を軽減する、急性発病の重症度を軽減する、症状数を軽減する、疾患関連症状の発症を低減する、症状の潜在を減らす、症状を改善する、二次症状を軽減する、二次感染を軽減する、患者生存を延長する、またはそれらの組み合わせを指す。

一実施形態において、症状は、一次的であるが、別の実施形態において、症状は、二次的である。一実施形態において、「一次的」とは、対象ウイルス性感染症の直接的な結果である症状を指すが、一実施形態において、「二次的」とは、主原因から派生する、または主原因からもたらされる症状を指す。一実施形態において、本発明で用いる組成物および株は、一次もしくは二次症状、またはＨＳＶ感染に関連する二次性合併症を治療する。

別の実施形態において、「症状」は、水疱、潰瘍、もしくは女性においては尿道、頸部、大腿上方、および／または肛門、および、男性においては、陰茎、尿道、陰嚢、大腿上方、および肛門における、病変部、炎症、腫脹、発熱、インフルエンザに似た症状、口の痛み、喉の痛み、咽頭炎、疼痛、舌、口、もしくは唇における水疱、潰瘍、ヘルペス（cold sore）、頸痛、腫大したリンパ節、発赤、出血、そう痒、排尿障害、頭痛、筋肉痛等、またはそれらの組み合わせを含む、ＨＳＶ感染のいずれかの兆候であり得る。

別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発熱である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、頭痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、斜頸である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発作である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、部分麻痺である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、知覚麻痺である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、昏睡である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス媒介脳炎と関連がある、またはそれに二次的である、当技術分野において既知のいずれかの他の疾患、障害、または症状である。

ヘルペス媒介脳炎の存在および重症度を決定する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「Bonkowsky JL et al.(Herpes simplex virus central nervous system relapse during treatment of infantile spasms with corticotropin. Pediatrics.2006 May;117(5):e1045-8)」、および「Khan OA, et al.(Herpes encephalitis presenting as mild aphasia:case report.BMC Fam Pract.2006 Mar 24;7:22)」に記載されている。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本発明は、対象における、ＨＳＶ感染に関連する、疾患、障害、もしくは症状を治療する、またはそれらの発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、ＨＳＶ感染に二次的である、疾患、障害、または症状は、口腔病変部である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、性器病変部である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、口腔潰瘍である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、生殖器潰瘍である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、発熱である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、頭痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、筋肉痛である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、鼠径部部分における肥大した腺である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、痛みを伴う排尿である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、おりものである。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、水疱形成である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、インフルエンザに似た倦怠感である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、角膜炎である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、疱疹性ひょう疽である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ベル麻痺である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス性多形性紅斑である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、腰部の症状（例えば、無感覚、臀部または肛門周辺部分のうずき、尿閉、便秘、および陰萎）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、局在性ヘルペス性湿疹である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、播種性ヘルペス性湿疹である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、剣状ヘルペス（herpes gladiatorum）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、ヘルペス性毛瘡（herpetic sycosis）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、食道の症状（例えば、嚥下困難もしくは灼熱痛、嚥下時の絞るような喉の痛み、体重減少、嚥下時の胸郭上部内もしくは後方の疼痛）である。別の実施形態において、疾患、障害、または症状は、当技術分野において既知のいずれかの他の疾患、障害、または症状である。それぞれの疾患、障害、または症状は、本発明の別個の実施形態を成す。

したがって、一実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染自体を治療、抑制、阻害、または発生低減するが、別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染の一次症状を治療、抑制、阻害、または発生低減し、また別の実施形態において、本発明の組成物および方法は、感染の二次症状を治療、抑制、阻害、または発生低減する。本発明の組成物および方法は、感染、感染によって引き起こされる一次症状、および感染に関連する二次症状のいずれかの組み合わせに影響を与え得ることを理解されたい。

本発明の組成物および方法によって治療される、または改善される、ＨＳＶ感染は、別の実施形態において、性器ＨＳＶ感染である。別の実施形態において、該ＨＳＶ感染は、口腔ＨＳＶ感染である。別の実施形態において、該ＨＳＶ感染は、眼ＨＳＶ感染である。別の実施形態において、該ＨＳＶ感染は、皮膚ＨＳＶ感染である。

別の実施形態において、本発明は、対象における、播種性ＨＳＶ感染の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象の出生児における、新生児ＨＳＶ感染の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、対象からその出生児へのＨＳＶ感染の伝染を軽減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、該出生児は乳児である。別の実施形態において、軽減または阻害される伝染は、出産中の伝染である。別の実施形態において、授乳中の伝染が、軽減または阻害される。別の実施形態において、軽減または阻害される伝染は、当技術分野において既知の親から出生児への伝染のいずれかの他の型である。

別の実施形態において、本発明は、対象の出生児における、新生児ＨＳＶ感染の重症度を軽減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

一実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染を治療、抑制、阻害、または発生低減する方法を提供し、該方法は、該対象に、（ａ）組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを投与するステップを含む。一実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染を治療、抑制、阻害、または発生低減する方法を提供し、該方法であって、該対象に、（ａ）組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメントであって、該フラグメントは、そのＣ３ｂ結合ドメイン、そのプロパージン干渉ドメイン、そのＣ５干渉ドメイン、または該Ｃ３ｂ結合ドメイン、プロパージン干渉ドメイン、もしくはＣ５干渉ドメインのフラグメントのいずれかを含む、組換えＨＳＶｇＣタンパク質またはそのフラグメントと、（ｂ）組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメントであって、該フラグメントは、ＡＡ２４−４０９もしくはそのフラグメントを含有する、組換えＨＳＶｇＥタンパク質またはそのフラグメントと、（ｃ）アジュバントとを含有するワクチンを投与するステップを含む。

別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染を治療する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染を抑制する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染を阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶに感染した対象における、ＨＳＶ感染の発症を低減する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染を予防する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のＨＳＶワクチンを投与するステップを含む。一実施形態において、ＨＳＶ感染は、ＨＩＶ感染の危険性が高まり、ＨＳＶ感染からの防御は、ＨＩＶ感染の危険性を低くする。したがって、一実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染の危険性を低くする方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。

一実施形態において、本発明の方法で用いるワクチンは、ＨＳＶに対する免疫応答を誘起する。別の実施形態において、本発明の方法で用いるワクチンは、ＨＳＶ−１に対する免疫応答を誘起する。別の実施形態において、本発明の方法で用いるワクチンは、ＨＳＶ−２に対する免疫応答を誘起する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えｇＤおよびｇＣタンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えｇＥおよびｇＤタンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えｇＣおよびｇＥタンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えｇＥ、ｇＤ、およびｇＣタンパク質を含有する。別の実施形態において、該ワクチンは、組換えｇＥ、ｇＤ、またはｇＣタンパク質を含有する。別の実施形態において、該組換えタンパク質は、ＨＳＶ−１タンパク質である。別の実施形態において、該組換えタンパク質は、ＨＳＶ−２タンパク質である。別の実施形態において、該タンパク質は、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２タンパク質の両方を含む。

一実施形態において、本明細書に記載される任意の実施形態による対象は、ＨＳＶに感染した対象、または別の実施形態において、ＨＳＶに感染しやすい対象であり得ることを理解されたい。一実施形態において、対象は、少なくとも１つの他の病原体に感染され得る、または別の実施形態において、少なくとも１つの他の病原体に感染しやすい。一実施形態において、対象は、免疫抑制状態であり得る。一実施形態において、該対象は、ＨＳＶによって感染するが、別の実施形態において、該対象は、ＨＳＶによって感染の危険性があり、一実施形態においては、対象は、新生児であり、また、別の実施形態においては、免疫抑制状態であり、別の実施形態においては、高齢者であり、別の実施形態においては、免疫抑制状態である新生児、もしくは免疫抑制状態である高齢者の対象である。

別の実施形態において、本発明の組成物またはワクチン、およびそれらの関連する使用は、対象における、ＨＩＶ感染を抑制、阻害、防御、または治療し得る。一実施形態において、本発明の組成物またはワクチン、およびそれらの関連する使用は、ＨＩＶ感染の二次性合併症を治療し得、一実施形態において、それらは、日和見感染、新生物、神経的異常、または進行性免疫の低下である。別の実施形態において、該方法は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を治療する方法を含む。別の実施形態において、該方法は、ＣＤ４^＋Ｔリンパ球の数の減少を治療する方法を含む。

別の実施形態において、本発明は、出生児へのＨＩＶ−１伝染を軽減する方法を提供し、該方法は、対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。当技術分野において既知のように、ＨＳＶ−２感染は、性器からの分泌物における、ＨＩＶ−１ウイルスの排出を増大する（Nagot N et al., Reduction of HIV-1 RNA levels with therapy to suppress herpes simplex virus. N Engl J Med.2007 Feb 22;356(8):790-9）。したがって、ＨＳＶ−２感染を阻害する本発明の方法はまた、出生児へのＨＩＶ−１伝染を軽減するのに有効である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−１株である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−２株である。

別の実施形態において、本発明は、性交渉の相手へのＨＩＶ−１伝染を軽減する方法を提供し、該方法は、対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。当技術分野において既知のように、ＨＳＶ−２感染は、性器からの分泌物における、ＨＩＶ−１ウイルスの排出を増大する。したがって、ＨＳＶ−２感染を阻害する本発明の方法はまた、性交渉の相手へのＨＩＶ−１伝染を軽減するのに有効である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−１株である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−２株である。

別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ−１への感受性を軽減する方法を提供し、該方法は、対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。当技術分野において既知のように、ＨＳＶ−２感染は、ＨＩＶ−１複製を増大する（Ouedraogo A et al., Impact of suppressive herpes therapy on genital HIV-1 RNA among women taking antiretroviral therapy: a randomized controlled trial.AIDS.2006 Nov 28;20(18):2305-13）。したがって、ＨＳＶ−２感染を阻害する本発明の方法はまた、ＨＩＶ−１への感受性を軽減するのに有効である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−１株である。別の実施形態において、変異ＨＳＶ株は、ＨＳＶ−２株である。

したがって、一実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染対象における、一次ＨＳＶ感染を阻害する方法を提供し、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染対象における、ＨＳＶ感染を治療、または発生低減する方法を提供し、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。別の実施形態において、本発明は、ＨＩＶ感染対象における、一次ＨＳＶ感染後の、発赤、再発、または口唇ＨＳＶを阻害する方法を提供し、該方法は、該対象に本発明のワクチンを投与するステップを含む。一実施形態において、本発明のワクチン投与は、抗ＨＳＶ免疫応答である。

一実施形態において、本明細書に記載される任意の実施形態による対象は、ＨＩＶに感染した対象、または別の実施形態において、ＨＩＶに感染しやすい対象であり得ることを理解されたい。別の実施形態において、本明細書に記載される任意の実施形態による対象は、ＨＩＶ陽性対象である。一実施形態において、本発明の組成物またはワクチン、およびそれらの関連する使用は、ＨＩＶ感染対象における、ＨＳＶ感染を抑制、阻害、防御、または治療し得る。一実施形態において、該ＨＩＶ感染対象は、２００／μｌより低いＣＤ４Ｔ細胞数を有し得、別の実施形態において、該ＨＩＶ感染対象は、２００〜５００／μｌのＣＤ４Ｔ細胞数を有し得、また別の実施形態において、該ＨＩＶ感染対象は、５００／μｌより高いＣＤ４Ｔ細胞数を有し得る。一実施形態において、ＨＩＶ感染対象は、溶血性が高い血清補体価（ＣＨ５０）値を有するが、別の実施形態において、ＨＩＶ感染対象は、低ＣＨ５０値を有する。

一実施形態において、ＨＩＶ感染対象は、特徴的症状、および／または病状によって同定され得、別の実施形態において、本発明のワクチンおよび方法は、ＨＩＶ感染と関連する、１つ以上の症状、および／または病状を緩和し得る。一実施形態において、ＨＩＶ感染または病因（例えば、病気）と関連する、またはそれらによって引き起こされる症状の非限定例は、発熱、疲労、頭痛、喉の痛み、リンパ節の腫大、体重減少、発疹、おでき、いぼ、口腔カンジダ症、帯状疱疹、慢性もしくは急性骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、咳および息切れ、発作および協調不全、嚥下困難もしくは嚥下痛、精神錯乱および健忘症等の神経心理学的症状、重度の下痢および持続性下痢、発熱、失明、嘔気、腹部けいれん、および嘔吐、昏睡、乾性咳、あざ、出血、無感覚もしくは麻痺、筋衰弱、日和見疾患、神経損傷、脳症、認知症、ならびに死亡を含む。別の実施形態において、該対象はまた、様々な癌、特に、カポジ肉腫、および子宮頸癌、またはリンパ腫等のウイルスによって引き起こされるものに進行する傾向があり得る。

別の実施形態において、ＨＩＶ感染または病因と関連する、またはそれらによって引き起こされる、病状の非限定例は、アスペルギルス・フミガーツス、気管支、気管、肺、もしくは食道のカンジダ症、カンジダ・アルビカンス、子宮頸癌、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、クリプトコックス・ネオフォルマンス、クリプトスポリジウム症、細菌性血管腫症、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サイトメガロウイルス性網膜炎、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、パピローマ・ウイルス、ヒストプラスマ症、イソスポーラ症、カポジ肉腫、バーキットリンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、トリ型結核菌、ヒト型結核菌、ニューモシスティス・カリニ、肺炎、進行性多病巣性白質脳障害（ＰＭＬ）、サルモネラ感染症、トキソプラズマ症、消耗症候群、およびリンパ球様間質性肺炎／肺リンパ型等の日和見感染（例えば、細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫感染）を含む。ＨＩＶ感染または病因（例えば、病気）の他の症状および病状は、当技術分野において既知であり、本発明に従ってその治療は、提供される。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、抗ｇＣ中和抗体を誘起する。別の実施形態において、該抗体は、ロゼット形成を阻害することが可能である。別の実施形態において、該抗体は、ロゼット形成を阻害する。

別の実施形態において、本発明のワクチンは、ｇＤのみを含有するワクチンと比較して強化される免疫応答を誘起する。別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、強化された抗ｇＤ免疫応答を付与する。別の実施形態において、強化された抗ｇＤ免疫応答は、ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原とｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ｇＤ免疫応答は、本発明のアジュバントとｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

一実施形態において、ｇＣは、中和抗体からウイルス糖タンパク質上のエピトープを遮蔽する。一実施形態において、ｇＥは、中和抗体からウイルス糖タンパク質上のエピトープを遮蔽する。

別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、強化された抗ＨＳＶ免疫応答を付与する。別の実施形態において、強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原とｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、本発明のアジュバントとｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、強化された抗ｇＤ免疫応答は、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ｇＤ免疫応答は、本発明のアジュバントとｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、本発明のアジュバントとｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、さらに強化された抗ｇＤ免疫応答は、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ｇＤ免疫応答は、（ａ）本発明のアジュバントと、（ｂ）ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原と、（ｃ）ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、さらに強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに強化された抗ＨＳＶ免疫応答は、（ａ）本発明のアジュバントと、（ｂ）ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原と、（ｃ）ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

本発明の方法および組成物において利用される組換えＨＳＶｇＤタンパク質の用量は、別の実施形態において、１回の接種につき２０ｍｃｇである。一実施形態において、「タンパク質」は、組換えＨＳＶ糖タンパク質を指し、また別の実施形態において、そのフラグメントを指す。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｎｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７５０ｎｇ／接種である。

別の実施形態において、該投与量は、０．１ｍｃｇ／体重１ｋｇ（１回の接種につき）である。別の実施形態において、該投与量は、０．２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１１ｍｃｇ／ｋｇ別の実施形態において、該投与量は、０．０９ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０８ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０７ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０６ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０４ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２ｍｃｇ／ｋｇ未満である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｎｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１．２５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、２．５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、１２．５ｍｃｇ／ｋｇである。

別の実施形態において、該投与量は、０．０１〜０．０２ｍｃｇ／体重１ｋｇ（１回の注射につき）である。別の実施形態において、該投与量は、０．０２〜０．０３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０２〜０．０４ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０３〜０．０６ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０４〜０．０８ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０５〜０．１ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．０５〜０．１５ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．１〜０．２ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．２〜０．３ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．３〜０．４ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．４〜０．６ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．５〜０．８ｍｃｇ／ｋｇである。別の実施形態において、該投与量は、０．８〜１ｍｃｇ／ｋｇである。

別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＤタンパク質の投与量は、動物実験からヒトデータへの外挿によって決定される。別の実施形態において、ｇＤタンパク質の投与量は、ヒト対マウス試験において有効なタンパク質の比率を使用することによって決定される。別の実施形態において、該比率は、１：４００（ヒトワクチン接種に使用されるｇＤ−２に対する本実施例に使用されるｇＤ−１タンパク質の比率）である。別の実施形態において、該比率は、１：１００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５０である。別の実施形態において、該比率は、１：３００である。別の実施形態において、該比率は、１：５００である。別の実施形態において、該比率は、１：６００である。別の実施形態において、該比率は、１：７００である。別の実施形態において、該比率は、１：８００である。別の実施形態において、該比率は、１：９００である。別の実施形態において、該比率は、１：１０００である。別の実施形態において、該比率は、１：１２００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５００である。別の実施形態において、該比率は、１：２０００である。別の実施形態において、該比率は、１：３０００である。別の実施形態において、該比率は、１：４０００である。別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＤタンパク質の投与量は、実験的に決定される。別の実施形態において、該比率は、１：５０００である。

別の実施形態において、総組換えｇＤタンパク質（ｇＤ−１タンパク質およびｇＤ−２タンパク質）の投与量は、上記の量のうちの１つである。別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量のｇＤを可能にする。別の実施形態において、より低い有効量のｇＤは、ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに低い有効量のｇＤは、本発明のアジュバントとｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、より低い有効量のｇＤは、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＤの組み合わせによって可能となる（例えば、１用量当たり２０ｍｃｇの代わりに１０ｍｃｇがヒトにおいて必要とされる）。別の実施形態において、２０ｍｃｇの代わりに１５ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、２０ｍｃｇの代わりに１２ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、２０ｍｃｇの代わりに８ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、６ｍｃｇの代わりに７ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、２０ｍｃｇの代わりに５ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、２０ｍｃｇの代わりに３ｍｃｇが必要とされる。別の実施形態において、必要とされる量の低減は、本明細書で言及されるいずれかの量である。

別の実施形態において、より低い有効量のｇＤは、本発明のアジュバントとｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、より低い有効量のｇＤは、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに低い有効量のｇＤは、（ａ）本発明のアジュバントと、（ｂ）ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原と、（ｃ）ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原と、ｇＤの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、上記のｇＤ用量のうちの１つは、本発明のプライミングワクチン接種において利用される。別の実施形態において、上記のｇＤ用量は、ｇＤ−１、ｇＤ−２、またはそれらの組み合わせの用量を指し得る。ｇＤのそれぞれの可能性およびそれぞれの投与量は、本発明の別個の実施形態を成す。

本発明の方法および組成物において利用される組換えＨＳＶｇＣタンパク質の用量は、別の実施形態において、１回の接種につき２０ｍｃｇである。一実施形態において、「タンパク質」は、組換えＨＳＶ糖タンパク質を指し、また別の実施形態において、そのフラグメントを指す。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、０．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。

別の実施形態において、該投与量は、３０〜６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０〜１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００〜２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００〜３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００〜４００ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１〜２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２〜４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３〜６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４〜８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５〜１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０〜２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２０〜３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０〜４０ｍｃｇ／タンパク質／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０〜６０ｍｃｇ／接種である。

別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＣタンパク質の投与量は、動物実験からヒトデータへの外挿によって決定される。別の実施形態において、ヒト用の投与量は、ヒト対マウス試験において有効なタンパク質の比率を使用することによって決定される。別の実施形態において、該比率は、１：４００である。別の実施形態において、該比率は、１：１００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５０である。別の実施形態において、該比率は、１：３００である。別の実施形態において、該比率は、１：５００である。別の実施形態において、該比率は、１：６００である。別の実施形態において、該比率は、１：７００である。別の実施形態において、該比率は、１：８００である。別の実施形態において、該比率は、１：９００である。別の実施形態において、該比率は、１：１０００である。別の実施形態において、該比率は、１：１２００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５００である。別の実施形態において、該比率は、１：２０００である。別の実施形態において、該比率は、１：３０００である。別の実施形態において、該比率は、１：４０００である。別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＣタンパク質の投与量は、実験的に決定される。別の実施形態において、該比率は、１：５０００である。

別の実施形態において、総組換えｇＣタンパク質（ｇＣ−１タンパク質およびｇＣ−２タンパク質）の投与量は、上記の量のうちの１つである。別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量の総組換えｇＣタンパク質を可能にする。

別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量のｇＣを可能にする。別の実施形態において、より低い投与量のｇＣは、ｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原とｇＣの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらにより低い有効量のｇＣは、本発明のアジュバントとｇＥの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＥ免疫原との両方と、ｇＣの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、上記のｇＣ用量のうちの１つは、本発明のプライミングワクチン接種において利用される。別の実施形態において、上記のｇＣ用量は、ｇＣ−１、ｇＣ−２、またはそれらの組み合わせの用量を指し得る。ｇＣのそれぞれの可能性およびそれぞれの投与量は、本発明の別個の実施形態を成す。

本発明の方法および組成物において利用される組換えＨＳＶｇＥタンパク質の用量は、別の実施形態において、１回の接種につき２０ｍｃｇである。一実施形態において、「タンパク質」は、組換えＨＳＶ糖タンパク質を指し、また別の実施形態において、そのフラグメントを指す。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２７０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４５０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５００ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１０ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、９ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、８ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、７ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、６ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、４ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、３ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、２ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１．５ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種である。別の実施形態において、該投与量は、１ｍｃｇ／接種未満である。

別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＥタンパク質の投与量は、動物実験からヒトデータへの外挿によって決定される。別の実施形態において、ヒト用の投与量は、ヒト対マウス試験において有効なタンパク質の比率を使用することによって決定される。別の実施形態において、該比率は、１：４００である。別の実施形態において、該比率は、１：１００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５０である。別の実施形態において、該比率は、１：３００である。別の実施形態において、該比率は、１：５００である。別の実施形態において、該比率は、１：６００である。別の実施形態において、該比率は、１：７００である。別の実施形態において、該比率は、１：８００である。別の実施形態において、該比率は、１：９００である。別の実施形態において、該比率は、１：１０００である。別の実施形態において、該比率は、１：１２００である。別の実施形態において、該比率は、１：１５００である。別の実施形態において、該比率は、１：２０００である。別の実施形態において、該比率は、１：３０００である。別の実施形態において、該比率は、１：４０００である。別の実施形態において、ヒトワクチン接種用のｇＥタンパク質の投与量は、実験的に決定される。別の実施形態において、該比率は、１：５０００である。

別の実施形態において、総組換えｇＥタンパク質（ｇＥ−１タンパク質およびｇＥ−２タンパク質）の投与量は、上記の量のうちの１つである。別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量の総組換えｇＥタンパク質を可能にする。

別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量のｇＥを可能にする。別の実施形態において、より低い投与量のｇＥは、ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原とｇＥの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに低い有効量のｇＥは、本発明のアジュバントとｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＥの組み合わせによって可能となる。

別の実施形態において、上記のｇＥ用量のうちの１つは、本発明のプライミングワクチン接種において利用される。別の実施形態において、上記のｇＥ用量は、ｇＥ−１、ｇＥ−２、またはそれらの組み合わせの用量を指し得る。ｇＥのそれぞれの可能性およびそれぞれの投与量は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、組換えｇＥタンパク質の投与量は、上記の量のうちの１つである。別の実施形態において、本発明のアジュバントの利用は、より低い有効量のｇＥを可能にする。別の実施形態において、より低い投与量のｇＥは、ｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原とｇＥの組み合わせによって可能となる。別の実施形態において、さらに低い有効量のｇＥは、本発明のアジュバントとｇＣの免疫回避機能を遮断する抗体を誘発するｇＣ免疫原との両方と、ｇＥの組み合わせによって可能となる。ｇＥのそれぞれの可能性およびそれぞれの投与量は、本発明の別個の実施形態を成す。

糖タンパク質の「有効量」は、別の実施形態において、その後のチャレンジの間に、ＨＳＶウイルスの免疫回避機能を著しく遮断する抗体を誘起するのに必要とされる用量を指す。別の実施形態において、該用語は、その後のチャレンジの間に、ＨＳＶウイルスの免疫回避機能を効果的に遮断する抗体を誘起するのに必要とされる用量を指す。別の実施形態において、該用語は、その後のチャレンジの間に、ＨＳＶウイルスの感染性を著しく低減する抗体を誘起するのに必要とされる用量を指す。

組換え糖タンパク質のそれぞれの投与量、およびそれぞれのそれらの組み合わせは、本発明の別個の実施形態を成す。

免疫原（例えば、ヒト対象における）の用量を測定する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、用量漸増試験を含む。それぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本明細書に示される戦略は、別のウイルスおよび／または別の病原体に利用される。別の実施形態において、感染に関与する第１タンパク質と免疫回避機能を有する１つの（または１つ以上の）第２タンパク質の両方を含有する、組み合わせサブユニットワクチンが利用され、ワクチンによって第２タンパク質を誘起する抗体は、免疫回避機能を遮断する。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−１ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＣ−１の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＣ−１タンパク質とアジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−１ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＥ−１の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＥ−１タンパク質とアジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−１ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＣ−１およびｇＥ−１の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＣ−１タンパク質と、組換えｇＥ−１タンパク質と、アジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−２ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＣ−２の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＣ−２タンパク質とアジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−２ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＥ−２の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＥ−２タンパク質とアジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

別の実施形態において、本発明は、既存のＨＳＶ−２ワクチンの改善のための方法を提供し、該方法は、（１）ｇＣ−２およびｇＥ−２の免疫回避特性を遮断する能力について、組換えｇＣ−２タンパク質と、組換えｇＥ−２タンパク質と、アジュバントの組み合わせをスクリーニングするステップと、（２）組換えｇＤタンパク質を加え、得られるワクチンをアジュバントおよびｇＤタンパク質のみを含有するワクチンと比較するステップとを含む。

一部の実施形態において、本発明の方法の、および本発明の方法で用いる、いずれのＨＳＶワクチンも、本明細書に記載される任意の型または実施形態における、ＨＳＶタンパク質、または本発明のＨＳＶタンパク質の組み合わせを含む。一部の実施形態において、該方法の、および該方法で用いる、いずれのＨＳＶワクチンも、本明細書に記載される任意の型または実施形態における、ＨＳＶタンパク質、または本発明のＨＳＶタンパク質の組み合わせからなる。一部の実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、本明細書に記載される任意の型または実施形態における、ＨＳＶタンパク質、または本発明のＨＳＶタンパク質の組み合わせから実質的になる。一部の実施形態において、「comprise（含有する）」という用語は、他の組換えＨＳＶタンパク質の含有、ならびに当技術分野において既知であり得る他のタンパク質の含有を指す。一部の実施形態において、「consisting essentially of（〜から実質的になる）」という用語は、特異的ＨＳＶタンパク質またはそのフラグメントを有するワクチンを指す。しかしながら、ＨＳＶタンパク質の実用性に直接関与しない、他のペプチドが、含まれ得る。一部の実施形態において、「consisting（〜からなる）」という用語は、ワクチンが、本明細書に記載される任意の型または実施形態における、特定のＨＳＶタンパク質もしくはフラグメント、または本発明のＨＳＶタンパク質もしくはフラグメントの組み合わせを有することを指す。

別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ−１、またはその症状もしくは兆候を治療する組成物を提供し、該組成物は、本発明のワクチンを含有する。

別の実施形態において、本発明は、ＨＳＶ−２、またはその症状もしくは兆候を治療する組成物を提供し、該組成物は、本発明のワクチンを含有する。

本発明の方法の別の実施形態において、本発明のワクチンは、単回接種として投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、２回投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、３回投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、４回投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、少なくとも４回投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、４回以上投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、ｇＣまたはｇＥとは別個にｇＤとともに別個の部位で投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、１週間間隔で投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、２週間間隔で投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、３週間間隔で投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、４週間間隔で投与される。別の実施形態において、該ワクチンは、１ヶ月間隔で投与される。

本発明の組成物／ワクチン、および方法は、非ＨＳＶヘルペスウイルスにも使用され得、一実施形態において、ｇＤ、ｇＥ、ｇＣタンパク質を含有し、ＨＳＶ−１の、または、別の実施形態において、ＨＳＶ−２のｇＤ、ｇＥ、またはｇＣタンパク質に対して、一実施形態において、７０％相同であり、別の実施形態において、８０％相同であり、別の実施形態において、８５％相同であり、別の実施形態において、９０％相同であり、別の実施形態において、９５％相同であり、別の実施形態において、９８％相同であり、また別の実施形態において、１００％相同であることを理解されたい。一実施形態において、このようなワクチンは、癌、または、別の実施形態において、腫瘍を抑制、阻害、防御、または治療するのに有用であり得る。一実施形態において、非ＨＳＶヘルペスウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）、ＥＢＮＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、およびヒトヘルペスウイルス６型（ＨＨＶ−６）を含有する。

別の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、明示的か、ＧｅｎＢａｎｋ登録への言及によって、のいずれかで、上に記述されている配列に対して相同である。「相同性」、「相同」等の用語は、いずれかのタンパク質またはペプチドに関する場合、一実施形態において、もし必要ならば、最大パーセントの相同性を達成するために配列を整列させて間隙を導入した後、配列の同一性の一部としていかなる保存的置換をも考慮せず、対応する天然ポリペプチドの残基と一致する候補配列におけるＡＡ残基のパーセンテージを指す。配列のための方法およびコンピュータプログラムは、当技術分野において公知である。

相同性は、別の実施形態において、配列アライメントのためのコンピュータアルゴリズム、当技術分野において十分に記載されている方法によって決定される。例えば、核酸配列の相同性のコンピュータアルゴリズム分析は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＤＯＭＡＩＮ、ＢＥＡＵＴＹ（BLAST Enhanced Alignment Utility）、ＧＥＮＰＥＰＴ、およびＴＲＥＭＢＬパッケージ等の入手可能なソフトウェアパッケージをいくつでも利用することを含むことができる。

別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する７０％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する７２％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する７５％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する７８％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する８０％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する８２％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に８３％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する８５％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する８７％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する８８％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９０％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９２％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に対する９３％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９５％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６から選択される配列に９６％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９７％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９８％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する９９％を上回る同一性を指す。別の実施形態において、「相同性」は、配列番号１〜６のうちの１つに対する１００％の同一性を指す。

別の実施形態において、相同性は、当技術分野において十分に記載されている方法である、候補配列ハイブリダイゼーションの測定を介して測定される（例えば、「Nucleic Acid Hybridization, Hames,B.D.,and Higgins S.J.,Eds.(1985)」、「Sambrook et al.,2001,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,N.Y.」）、および「Ausubel et al.,1989,Current Protocols in Molecular Biology,Green Publishing Associates and Wiley Interscience,N.Y」を参照されたい）。他の実施形態において、ハイブリダイゼーション法は、中程度にストリンジェントな条件下で、天然カスパーゼペプチドをコードするＤＮＡの補体に対して実行される。ハイブリダイゼーション条件は、例えば、４２℃で、１０〜２０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハート液、１０％の硫酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌの変性断片化処理したサケ精子ＤＮＡを含有する、溶液中で、一晩インキュベートする。

本明細書に記載のいずれかのＡＡ配列のためのタンパク質および／またはペプチドの相同性は、別の実施形態において、イムノブロット解析、またはＡＡ配列のコンピュータアルゴリズム解析を介する方法を含む、当技術分野において十分に記載されている方法によって、構築された方法を介して入手可能な多くのソフトウェアパッケージのいずれかを利用して、決定される。これらのパッケージのいくつかには、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、ＭＰｓｒｃｈ、またはＳｃａｎｐｓパッケージが挙げられ、別の実施形態において、例えば、スミス・アンド・ウォーターマン（Smith and Waterman）アルゴリズム、および／または解析のためのグローバル／ローカルもしくはＢＬＯＣＫＳアライメントの使用を利用する。相同性を決定するそれぞれの方法は、本発明の別個の実施形態を成す。

一実施形態において、「変異形」とは、例えば、スプライス変異等の集団の大部分とは異なるが、それらのうちの１つであると考えられる、共通モードに十分に類似する、アミノ酸または核酸配列（または、他の実施形態において、生命体または組織）を指す。一実施形態において、該変異形は、配列保存的変異形であり得るが、別の実施形態において、該変異形は、機能保存的変異形であり得る。一実施形態において、変異形は、１個のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含み得る。一実施形態において、変異形は、２個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、３個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、４個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、５個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、７個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、１０個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、２〜１５個のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、３〜２０個のアミノ酸の付加、欠失、もしくは置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態において、変異形は、４〜２５個のアミノ酸の付加、欠失、もしくは置換、またはそれらの組み合わせを含み得る。

一実施形態において、「アイソフォーム」とは、例えば、同一のタンパク質の別のアイソフォームに対してわずかな相違のみを有するタンパク質等の分子の種類を指す。一実施形態において、アイソフォームは、異なるが、関連遺伝子から生成され得、また別の実施形態において、別のスプライシングによって同一の遺伝子から発生し得る。別の実施形態において、アイソフォームは、単一の塩基多型によって生じる。

別の実施形態において、本発明の方法および組成物は、抗タグ抗体が選択的に結合することができるエピトープを提供するタグポリペプチドを有する組換えＨＳＶタンパク質の融合を含む、キメラ分子を利用する。該エピトープタグは、他の実施形態において、タンパク質のアミノまたはカルボキシル末端で、またはその内部配置に置かれる。組換えＨＳＶタンパク質のこのようなエピトープ標識型の存在は、別の実施形態において、タグポリペプチドに対する抗体を使用して、検出される。別の実施形態において、該エピトープタグの含有は、抗タグ抗体、またはエピトープタグに結合する親和性マトリクスの別の種類を使用して、親和性精製によって、組換えＨＳＶタンパク質を容易に精製することを可能にする。様々なタグポリペプチドおよびそれらのそれぞれの抗体が、当技術分野において既知である。例としては、ポリヒスチジン（poly-his）またはポリヒスチジングリシン（poly-his-gly）タグ；インフルエンザＨＡタグポリペプチドおよびその抗体である１２ＣＡ５（Field et al.,Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165(1988)）；ｃ−ｍｙｃタグおよびその抗体である８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７、および９Ｅ１０（Evan et al.,Molecular and Cellular Biology,5:3610-3616(1985)）；ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびその抗体（Paborsky et al.,Protein Engineering,3(6):547-553(1990)）が挙げられる。他のタグポリペプチドは、Ｆｌａｇペプチド（Hopp et al.,BioTechnology,6:1204-1210(1988)）、ＫＴ３エピトープペプチド（Martin et al.,Science,255:192-194(1992)）、チューブリンエピトープペプチド（Skinner et al.,J.Biol.Chem.,266:15163-15166(1991)）、およびＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ（Lutz-Freyermuth et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990)）が挙げられる。別の実施形態において、キメラ分子は、免疫グロブリン、あるいは免疫グロブリンの特定領域と、組換えＨＳＶタンパク質の融合を含む。融合タンパク質を構築する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、「LaRochelle et al.,J.Cell Biol.,139(2):357-66(1995)」、「Heidaran et al.,FASEB J.,9(1):140-5(1995)」、「Ashkenazi et al.,Int.Rev.Immunol.,10(2-3):219-27(1993)」、および「Cheon et al.,PNAS USA,91(3):989-93(1994)」に記載されている。

別の実施形態において、本発明は、本発明の方法を実施する上で利用されるワクチンを含有するキットを提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明のワクチンを含有するキットを提供する。

「Administering（投与する）」とは、別の実施形態において、注射または他の手段によって、対象に本発明の組成物を直接導入することを指す。別の実施形態において、「administering（投与する）」とは、ワクチンまたは組換えＨＳＶタンパク質またはそれらの混合物を、対象の免疫系の細胞と接触させること指す。

医薬組成物および投与方法

別の実施形態において、本発明の方法は、組換えＨＳＶタンパク質および医薬的に許容される担体を投与するステップを含む。ワクチンを含有する医薬組成物は、別の実施形態において、当業者に既知の任意の方法によって、対象に非経口、経粘膜的、経皮的、筋肉内、静脈内、皮内、鼻腔内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋内、または膣内等で投与され得る。別の実施形態において、本発明のワクチンは、表皮注射、別の実施形態において、筋肉内注射、別の実施形態において、皮下注射、および別の実施形態において、呼吸器内（intra-respiratory）粘膜注射を介して投与される。

本発明の方法および組成物の別の実施形態において、該医薬組成物は、経口投与され、したがって、経口投与に適する型、すなわち、固体または液体製剤に製剤化される。適する固体経口製剤としては、錠剤、カプセル剤、丸薬、顆粒、ペレット等が挙げられる。適する液体経口製剤としては、溶液、懸濁剤、分散剤、乳液、油等が挙げられる。本発明の別の実施形態において、該ワクチンは、カプセル剤に製剤化される。別の実施形態において、本発明の組成物は、ハードゼラチンカプセル剤を含有する。

別の実施形態において、該医薬組成物は、液体製剤の静脈内、動脈内、または筋肉内注射によって投与される。適する液体製剤は、溶液、懸濁剤、分散剤、乳液、油等を含む。別の実施形態において、該医薬組成物は、静脈内投与され、したがって、静脈内投与に適する型に製剤化される。別の実施形態において、該医薬組成物は、動脈内投与され、ひいては、動脈内投与に適する型に製剤化される。別の実施形態において、該医薬組成物は、筋肉内投与され、ひいては、筋肉内投与に適する型に製剤化される。

別の実施形態において、該医薬組成物は、体表面に局所性投与され、したがって、局所性投与に適する型に製剤化される。適する局所製剤としては、ゲル剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤、ドロップ等が挙げられる。

別の実施形態において、該医薬組成物は、例えば、肛門坐剤または尿道坐剤等の坐薬として投与される。別の実施形態において、該医薬組成物は、ペレットの皮下移植によって投与される。別の実施形態において、該ペレットは、ある期間にわたって、抗原剤の制御放出を提供する。

別の実施形態において、該ワクチンは、例えば、リポソーム等の小胞において送達される。

他の実施形態において、本発明の方法に使用される担体または希釈剤としては、ガム、デンプン（例えば、コーンスターチ、プレゼラチン化スターチ（pregeletanized starch））、糖（例えば、ラクトース、マンニトール、スクロース、デキストロース）、セルロース系材料（例えば、微結晶性セルロース）、アクリレート（例えば、ポリメチルアクリレート）、炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、タルク、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

他の実施形態において、液体製剤用の医薬的に許容される担体は、水溶液もしくは非水溶液、懸濁液、乳液、または油である。非水溶剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性の担体には、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール溶液／水溶液、乳剤または懸濁液が挙げられる。油剤の例は、動物性油、植物性油、または合成由来の油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、ひまわり油、魚肝油、別の魚油、または牛乳もしくは卵からの脂質である。

別の実施形態において、非経口の賦形剤（皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内注射用）は、塩化ナトリウム液、Ｄ形グルコースリンゲル液、Ｄ形グルコースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、および固定油を含む。静脈内の賦形剤は、液体および栄養補充液、例えば、Ｄ形グルコースリンゲル液に基づいたもの等の電解質補充液を含む。その例は、界面活性剤および他の医薬的に許容されるアジュバントが添加されたまたは添加されていない、水および油等の殺菌した液体である。一般に、水、生理食塩水、水性のＤ形グルコースおよび関連糖液、ならびにプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコールが、特に注射剤として好ましい液体担体である。油剤の例は、動物性油、植物性油、または合成由来の油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、オリーブ油、ひまわり油、魚肝油、別の魚油、または牛乳もしくは卵からの脂質である。

他の実施形態において、該組成物は、結合剤（例えば、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアールガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメローセナトリウム、クロスポビドン、グアールガム、デンプングリコレートナトリウム）、様々なｐＨおよびイオン強度の緩衝剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、アセテート、リン酸塩）、表面への吸着を防止するためのアルブミンまたはゼラチン等の添加剤、浄化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩）、タンパク質分解酵素抑制剤、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、浸透強化剤、溶解補助剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール）、安定剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、粘度上昇剤（例えば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアールガム）、甘味剤（例えば、アスパルテーム、クエン酸）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動性改質剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマー被覆（例えば、ポロキサマー、ポロキサミン）、被覆剤および被膜剤（例えば、エチルセルロース、アクリレーツ、ポリメタクリル樹脂）、および／またはアジュバントをさらに含む。上記の賦形剤のそれぞれは、本発明の別個の実施形態を成す。

別の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、制御放出組成物、すなわち、該抗原が、投与後、ある期間にわたって放出される組成物である。制御または持続放出組成物は、親油性のデポー剤（例えば、脂肪酸、ろう剤、油剤）を含む。別の実施形態において、該組成物は、短時間作用型の組成物、すなわち、全ての抗エストロゲン化合物が、投与された直後に放出される組成物である。

別の実施形態において、該医薬組成物は、制御放出システムにより送達される。別の実施形態において、該製剤は、静脈内注射、埋込型浸透ポンプ、経皮貼布、リポソーム、または他の投与方法を用いて投与される。別の実施形態において、ポンプが使用される（上記のLanger、「Sefton,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987)」、「Buchwald et al.,Surgery 88:507(1980)」、および「Saudek et al.,N.Engl.J.Med.321:574(1989)」を参照されたい）。別の実施形態において、高分子材料は、例えば、マイクロスフェア、または埋め込みに使用される。

該組成物はまた、別の実施形態において、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル等、または、リポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層または多層状の小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト等の高分子化合物の特定製剤内にまたは上に組み込んだ活性剤をも含む。このような組成物は、物理的状態、溶解度、安定性、生体内での放出率、および生体内でのクリアランス率に影響を与える。

また、ポリマー（例えば、ポロキサマー、ポロキサミン）に被膜された微粒子の組成物、および組織特異的受容体、リガンド、もしくは抗原に対して向けられた抗体と結合した化合物、または組織特異的受容体のリガンドと結合した化合物も、本発明に含まれる。

また、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、またはポリプロリン等の水溶性高分子の共有結合により改変された化合物も、本発明に含まれる。改変された化合物は、対応する未修飾化合物よりも、静脈内注射後、血液中で大幅に長い半減期を示すことが既知である（「Abuchowski et al.,1981」、「Newmark et al.,1982」、および「Katre et al.,1987」）。このような改変はまた、別の実施形態において、水溶液中での化合物の溶解度を増加させ、凝集を除去し、化合物の物理的または化学的安定性を向上させ、ならびに化合物の免疫抗原性および反応性を大幅に減少させる。別の実施形態において、所望する生体内での生物活性が、このような高分子化合物外転の投与によって、未修飾化合物よりも低い頻度またはより低用量で達成される。

例えば、混合、顆粒化、または錠剤形成処理による活性成分を含む医薬組成物の製剤は、当業者には周知である。活性成分は、別の実施形態において、中和された医薬的に許容される塩の形態として組成物に製剤化される。医薬的に許容される塩は、例えば、塩酸やリン酸等の無機酸、または例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸により形成される、酸付加塩（ポリペプチドまたは抗体分子の遊離アミノ基により形成される）を含む。遊離カルボキシル基により形成される塩はまた、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、もしくは水酸化第二鉄等の無機塩基、および例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から得ることもできる。

上記の添加剤、賦形剤、製剤、および投与方法のそれぞれは、本発明の別個の実施形態を成す。

本発明はまた、本明細書においてワクチンについて記載されるように、ｇＤタンパク質、ｇＣタンパク質、およびｇＥタンパク質から選択される１つ以上の組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タンパク質を含有する組成物を包含することを理解されたい。

実施例１：ＨＳＶ−１ｇＣ−１サブユニットワクチンはＨＳＶ−１感染を防御する

材料および実験方法（実施例１〜２）

ロゼット阻害アッセイ

Ｖｅｒｏ細胞に、感染多重率（ＭＯＩ）２で、ＷＴＨＳＶ−１を２０時間感染させた。感染細胞にＩｇＧを添加し、室温で１時間培養した。Ｃ３ｂで被覆されたヒツジ赤血球を添加し、３７℃で１時間培養し、光学顕微鏡法によりロゼットについて検視した。Ｃ３ｂで被覆された赤血球のロゼットを形成する細胞のパーセンテージは、（４つ以上の赤血球が結合した細胞の数÷計数された細胞の総数×１００％）として計算する。Ｃ３ｂで被覆されたロゼットが阻害された場合は、それは、Ｃ３ｂのｇＣ−１への結合を阻害する抗体が存在することを示す。

マウス側腹部モデル

雌のＢＡＬＢ／ｃもしくはＣ５７Ｂｌ／６マウス（Charles River, Wilmington, MA）、または５〜７週齢のＣ３ノックアウトマウスを麻酔し、マウスの側腹部を剪毛し、化学的に剥皮した。１６〜２０時間後、５×１０^４または５×１０^５ＰＦＵの精製ＨＳＶ−１ＷＴウイルスを含有する１０μｌの液体を添加し、３０ゲージ針のベベルで皮膚を掻爬することにより、マウスをＨＳＶ−１ＷＴウイルスに感染させた。接種部位の疾患を、以下の通り点数化した。小胞がない紅斑または腫脹には０．５点が与えられ、個々の小胞にはそれぞれ１点が得点され、１日の総最高点数は５とした。病変部が合体した場合は、病変部の大きさに基づいて最大５点が与えられた。帯状ヘルペス疾患は、より広範囲の皮膚部分でより多くの病変部が計数され得るため、１日の最高点数が１０であることを除き、同様に点数化された。ＨＳＶ−２（図１６Ａおよび１６Ｂ）を用いたいくつかの実験については、ＨＳＶ−２は、ＨＳＶ−１よりもより重度の側腹部疾患を引き起こすため、点数化システムを、疾患スペクトルの重度側の端部の動物を区別するように修正した。接種部位では、点数は、０〜３の範囲とし、０は疾患がなく、１は赤みまたは単独病変部、２は潰瘍、３は組織壊死を伴う部分を表すとした。帯状ヘルペス部位では、点数は０〜４の範囲とし、０は疾患がなく、１は単独病変部、２は融合性病変部、３は潰瘍、４は組織壊死を伴う部分とした。

ワクチン

ワクチンは、組換えＨＳＶ−１ｂａｃ−ｇＤ−１（３０６ｔ）（Ｃ−末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ（アミノ酸）２６−３０６）およびＨＳＶ−１ｂａｃ−ｇＣ−１フラグメント（５Ｈｉｓタグで修飾されたＡＡ２６−４５７）を含有した。

結果

ｇＣ−１サブユニットワクチンの最適用量：本実験により、免疫回避を阻害することができる抗ｇＣ抗体を産生するｇＣ−１免疫接種（免疫化）の用量が確定された。これは、Ｃ３ｂのｇＣ−１への結合の阻害を測定することによって行われた。マウスを偽免疫接種し、あるいは０．１、１、または１０μｇのｇＣ−１で免疫接種し、得られた血清を、ロゼット化アッセイでＣ３ｂの結合を阻害する能力について試験した（図１、左パネル）。１０μｇのｇＣ−１で免疫を与えられたマウスは、ロゼット化を８５％阻害する抗ｇＣ抗体を生成した（図１、右パネル）。その後、致死量のＨＳＶ−１でマウスをチャレンジし、チャレンジ後３日目から７日目まで、接種および帯状ヘルペス部位の疾患について点数化した（図２ＡおよびＢ）。接種部位の疾患には、ｇＣ−１免疫接種による有意な変化はなかったが、帯状ヘルペス疾患は、偽免疫化マウスと比較して低減した（Ｐ＜０．００１）。

チャレンジ後１４日間、偽免疫接種およびｇＣ−１免疫接種したマウスの生存率を点数化した。１０μｇのｇＣ−１を接種したマウス群ではその４０％が生存したのに対して、それよりも低量のｇＣ−１を接種した群では生存したマウスはなかった。したがって、１０μｇのｇＣ−１を接種すると、マウスを帯状ヘルペス疾患および死亡から防御する抗体が産生される。

実施例２：ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、ｇＤ−１またはｇＣ−１のみを含有するワクチンよりも優れた防御を付与する

ｇＤ−１サブユニットワクチンの最適用量：部分的に防御するｇＤ−１サブユニットワクチンを模擬するために、マウス側腹部モデルを使用して、マウスを疾患から部分的に防御するｇＤ−１用量を確定した。これらの調査に基づき、５０ｎｇのｇＤ−１用量が選択されたが、これは、接種部位において最低限の防御、および帯状ヘルペス疾患に対する中程度の防御を提供した（結果は図３に含まれる）。

ｇＤ−１およびｇＣ−１複合サブユニットワクチン：マウスに、偽免疫接種、Ｄ−１のみ（５０ｎｇ）による免疫接種、またはｇＤ−１（５０ｎｇ）およびｇＣ−１（１０μｇ）の両方による免疫接種のいずれかを施し、致死量のＨＳＶ−１でチャレンジした（図３）。ｇＤ−１／ｇＣ−１複合ワクチンを投与したマウスでは、接種部位における重症度は著しく低減され（Ｐ＜０．０２）、帯状ヘルペス部位の疾患は完全に防止された。これは、ｇＤ−１のみまたはｇＣ−１のみを接種したものと比較して有意な結果であった（Ｐ＜０．００１）（図２Ａおよび２Ｂ）。さらに、複合ワクチンにより、マウスの生存率は１００％であった（図４）。

したがって、複合ｇＣ−１／ｇＤ−１ワクチンは、ｇＤ−１のみまたはｇＣ−１のみを含有するワクチンと比較して、より優れた防御を付与する。

実施例３：ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、後根神経節（DORSAL ROOT GANGLIA：ＤＲＧ）における感染を防止する

材料および実験方法

感染後５日目に、ＤＲＧを採取した。マウスを安楽死処分し、拡大解剖顕微鏡下で、接種を受けた皮膚を神経支配する神経節を同定した。神経節を除去し、ＤＭＥＭ中で均質化し、神経節中のウイルスをプラークアッセイにより力価測定した。

結果

ＨＳＶ−１は、後根神経節（ＤＲＧ）内の神経細胞体内で潜伏期を経る。ｇＤ−１およびｇＣ−１による免疫接種がＤＲＧの感染を防止するかどうかを試験するために、致死量のＨＳＶ−１でチャレンジした後の５日目（ピーク力価時）にＤＲＧを採取した。ｇＤ−１およびｇＣ−１を免疫接種したマウスにでは感染性ウイルスは見つけられなかったのに対して、偽免疫接種またはｇＤ−１免疫接種を施したマウスからはウイルスが回収された（図５）。

したがって、ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、ｇＤ−１またはｇＣ−１のみの免疫接種よりも著しくマウスを疾患、死亡、およびＤＲＧ感染から防御する。

実施例４：ｇＤ−１およびｇＣ−１で免疫を与えられたマウスにおける、抗ｇＣ−１ＩｇＧにより媒介される防御は、Ｃ３ｂに依存する。

材料および実験方法

側腹部モデル

マウスの抗ｇＣ−１ＩｇＧ防御が、ｇＣ−１およびＣ３ｂの間の相互作用の阻害により生じることを実証するための実験を行った。ＩＭ（筋肉内注射）で３回、ＣｐＧ（＃１８２６、コーリー・ファーマシューティカル・グループ（Coley Pharmaceutical Group）社製）（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）（アキュレート・ケミカル・アンド・サイエンティフィック（Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co.）社製）と混合した５μｇのｇＣ−１を、マウスに免疫接種した。３回目に免疫接種した週間後に血清を採取し、ウエスタンブロット法を行ったところ、ｇＣ−１タンパク質と相互作用し（結果は図示せず）、ＨＳＶ−１感染細胞上のＣ３ｂのロゼット化を阻害することが示された（図１に記載の通り）。タンパク質Ｇカラム（Hi-Trap（登録商標）、スウェーデンのウプサラのアマシャム・バイオサイエンス（Amersham Biosciences）社）でマウス血清からＩｇＧを精製し、抗体の中和活性について試験した。抗ｇＤ１モノクローナル抗体ＤＬ１１（Eisenberg, RJ et al. J. Virol 53: 634-644, 1985）、Ｃ３ｂと相互作用するｇＣ−１ドメインに結合してＨＳＶ−１感染細胞へのＣ３ｂのロゼット化を阻害する抗ｇＣ−１モノクローナル抗体１Ｃ８（Judson KA et al. J Virol 77:12639-45, 2003）、および非免疫マウスＩｇＧを対照として含めた。約８０ＰＦＵのＨＳＶ−１のＮＳ株を、免疫接種したマウスから得られた抗ｇＣ−１ＩｇＧ、ＤＬ１１、１Ｃ８、または非免疫マウスＩｇＧと共に、１時間３７℃で培養した。その後、Ｖｅｒｏ細胞上のプラークアッセイにより、ウイルス力価を決定した。

抗ｇＣ−１ＩｇＧのマウスを防御する能力を試験するために、５×１０^５のＨＳＶ−１による側腹部感染の２４時間前に、２００μｇ／マウスの抗ｇＣ−１ＩｇＧで、補体無傷マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６）またはＣ３ノックアウトマウス（Ｃ３ＫＯ）に受動免疫を施した。接種および帯状ヘルペス部位の疾患について、１１日間、マウスを評価した。対照として、１Ｃ８（２００μｇ／マウス）または非免疫マウスＩｇＧ（２００μｇ／マウス）を受動伝達した。接種部位の疾患についての点数化システムは、疾患がなければ０、接種部位の病変部の大きさに基づいて１〜５の点数とした。帯状ヘルペス部位の疾患についての点数化システムは、疾患がなければ０、各病変部について１の点数、最大点数を１０までとした。実験の終了前に死亡した動物には、調査期間中に最終評価時の点数を与えた。

結果

ＤＬ１１は、０．１μｇ／ｍｌでさえ、ＨＳＶ−１の中和に極めて有効であったが、その一方、抗ｇＣ−１ＩｇＧは、３ｌｏｇ_１０高い濃度である１００μｇ／ｍｌで使用された場合でも、ＨＳＶ−１を中和できなかった（図６）。また、抗ｇＣ−１モノクローナル抗体１Ｃ８および非免疫マウスＩｇＧも、ＨＳＶ−１を中和できなかった。マウス抗ｇＣ−１ＩｇＧは、ＨＳＶ−１を中和できず、この抗体により提供される防御はその中和活性に帰することはできないことを示している。

図７は、補体無傷Ｃ５７Ｂｌ／６マウスまたはＣ３ノックアウト（Ｃ３ＫＯ）マウスにおける、抗ｇＣ１ＩｇＧまたはモノクロ−ナル抗ｇＣ−１１Ｃ８の受動免疫による防御を示す。抗ｇＣ１ＩｇＧまたはモノクローナル抗ｇＣ−１１Ｃ８による受動免疫は、接種部位の疾患にほとんど効果がなかった（統計的には非免疫ＩｇＧと異ならない）が、抗ｇＣ１ＩｇＧまたはモノクローナル抗ｇＣ−１１Ｃ８は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける帯状ヘルペス部位の疾患を大きく低減した（非免疫ＩｇＧと比較して、抗ｇＣ−１または１Ｃ８について、Ｐ＜０．００１）。対照的に、抗ｇＣ−１ＩｇＧまたは１Ｃ８は、Ｃ３ＫＯマウスにおいて、ほとんど効果がなかった（接種または帯状ヘルペス部位において、抗ｇＣ−１または１Ｃ８を非免疫ＩｇＧと比較して、統計的な差異はなかった）。

これらの実験から、我々は、抗ｇＣ−１ＩｇＧはＨＳＶ−１を中和せず、補体無傷マウスにおいて検出された防御効果は補体に依存すると結論付ける。これらの結果は、ｇＤ−１免疫接種にｇＣ−１を加えると、ｇＣ媒介性免疫回避を防ぐことによりワクチンの有効性が向上するという、図１〜５に表された我々の所見を支持している。

実施例５：複数の株からのｇＣ２は正常ヒト血清による補体媒介性の中和からＨＳＶ−２を防御する

材料および実験方法（実施例５〜１１）

細胞およびウイルス

アフリカミドリザル腎細胞（Ｖｅｒｏ）を、１０％の熱失活ウシ胎児血清、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、２ｍＭのＬ−グルタミン、２０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、および１μｇ／ｍｌのＦｕｎｇｉｚｏｎｅ（Life Technologies, Rockville, MD）を含んだダルベッコ変法イーグル培地中で生育した。Ｖｅｒｏ細胞を感染多重度０．００５でウイルスに感染させた後、ウイルスを精製してウイルス・プールを作成した。感染の４８時間後、無細胞ウイルス用に上澄み液を収穫し、５％から７０％のショ糖勾配で遠心分離した。

ＨＳＶ−１のｇＣ欠失変異株は、ＮＳ株から由来し（ＮＳ−ｇＣｎｕｌｌ）、ＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌと名づけられた。なお、この欠失株では、ｇＣ１タンパク質コード領域は、ＨＳＶ−１感染細胞タンパク質６（infected-cell protein：ＩＣＰ６）初期プロモーター制御下のβ−ガラクトシダーゼ発現カセットと置き換えられている（Friedman et al., 1996. J. Virol. 70:4253-4260; Goldstein and Weller, 1988. J. Virol. 62:2970-2977）。野生型ＨＳＶ−２株は、ＨＳＶ−２（Ｇ）、ＨＳＶ−２（３３３）、およびＨＳＶ−２．１２（１８歳の女性の性器病変部から得られた低継代ＨＳＶ−２単離株）を含む。また、ＨＳＶ−２のｇＣ欠失変異株はＨＳＶ−２のＧ株および３３３株から由来し、それぞれ、Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌおよび３３３−ｇＣ２Δと名づけられた。Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスは、ｇＣ２の代わりにβ−ガラクトシダーゼ遺伝子を含む。一方、３３３−ｇＣ２Δウイルスは、ｇＣ２内の１３０塩基対（０．６１３から０．６２６までのマップ・ユニットに相当する）が欠失しており、ｇＣ２タンパク質を発現しない。一方、ＨＳＶ−２．１２からｇＣ２−ｎｕｌｌ株を構築するために、まず、ＨＳＶ−２．１２のＤＮＡと、ｇＣ２配列の５´末端の８４８ｂｐ及び３´末端の７３８ｂｐに挟まれてｇＣ２タンパク質コード配列の大部分（開始部位の−１ｂｐ前から停止部位の１６ｂｐ前まで及ぶ）を置き換えたＩＣＰ６：：ｌａｃＺ発現カセットを発現するフランキング配列ベクターとをＶｅｒｏ細胞に共トランスフェクションした。これによって組換えウイルスが発生し、青プラーク選択でｇＣ２ｎｕｌｌを単離し、使用前に３回プラーク精製を行った。

補体試薬

補体源は、４人の健康な成人志願者から取得された、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の非免疫ヒト血清（正常ヒト血清［ＮＨＳ］と称する）であった。室温で２０分間、そして一晩４℃で血液を凝固させ、その後血清を分離し、分割し、−８０℃で凍結させた。「Children's Hospital of PhiladelphiaのClinical Virology Laboratory」により行われたＨＳＶ酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、および本書に記載されるウイルス中和アッセイにより、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２特異的ＩｇＧ抗体の不在を確認した。各提供者からの血清は、「Hospital of the University of PennsylvaniaのClinical Immunology Laboratory」による測定によると、正常濃度の免疫グロブリンを有した。提供者１については、ＩｇＡは１３１ｍｇ／ｄｌ（正常、５０から５００ｍｇ／ｄｌ）、ＩｇＧは９８４ｍｇ／ｄｌ（正常、６５０から２，０００ｍｇ／ｄｌ）、ＩｇＭは５５ｍｇ／ｄｌ（正常、４０から２７０ｍｇ／ｄｌ）であった。提供者２については、ＩｇＡは１４７ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＧは１，０２３ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＭは２０５ｍｇ／ｄｌであった。提供者３については、ＩｇＡは１７０ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＧは９０５ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＭは２３７ｍｇ／ｄｌであった。提供者４については、ＩｇＡは２５３ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＧは１，１４０ｍｇ／ｄｌ、ＩｇＭは１５５ｍｇ／ｄｌであった。

適応があれば、補体を不活性化するために、ＮＨＳを５６℃で３０分間加熱した。ウイルスの中和に関与する補体経路を同定するために、ＮＨＳを、１０ｍＭのＥＤＴＡで処置して古典的マンナン結合レクチンおよび代替経路を不活性化し、８ｍＭのＥＧＴＡおよび２ｍＭのＭｇ^２＋で処置し、古典的マンナン結合レクチン経路を不活性化し、１００ｍＭのＤ−マンノースで処置し、マンナン結合レクチン経路の活性化を干渉した。Ｃ３活性化を干渉するために、４０μＭの濃度の低分子合成ペプチドのコンプスタチン（4W9A; Hook, et al. 2006. J. Virol. 80:4038-4046; Sahu, et al. 1996, J. Immunol. 157:884-891; Kase, et al. 1999, Immunology 97:385-392; Klepeis, et al. 2003, J. Am. Chem. Soc. 125:8422-8423）でＮＨＳを処置し、不活性対照として４０μＭの線状コンプスタチンを使用した。

ＮＨＳからのＩｇＭおよび補体成分の枯渇

３０ｍＭのＥＤＴＡを添加し、血清を、抗ヒトＩｇＭカラム（Sigma, St. Louis, MO）に通過させることでＮＨＳのＩｇＭを枯渇させた。ＩｇＭの精製を２回繰り返して、９０から９５％のＩｇＭを除去した。その後、１ｍＭのＥＤＴＡを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で血清を透析し、ＥＤＴＡ濃度を低下させ、中和実験に使用する前に１ｍＭのＭｇ^２＋および２ｍＭのＣａ^２＋を添加した。

ＮＨＳから補体成分Ｃ１ｑ、Ｃ５、およびＣ６を枯渇させるために、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧで、Ｃ１ｑ、Ｃ５、またはＣ６に対して調製されたヒツジまたはヤギの抗血清のＩｇＧ分画を、臭化シアン・セファロース（Sepharose）（Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ）と共役することにより、免疫吸着カラムを調製した。単離されたタンパク質分画を濃縮し、０．１ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳで透析し、ＥＤＴＡ濃度を低下させ、アジ化ナトリウムを除去した。血清の当初容積を透析緩衝液で回復し、使用前に１ｍＭのＭｇ^２＋および２ｍＭのＣａ^２＋を添加した。生理学的濃度を回復するために、５５０μｇ／ｍｌのＩｇＭ、１００μｇ／ｍｌのＣ１ｑ、７５μｇ／ｍｌのＣ５、または６０μｇ／ｍｌのＣ６（Sigma, St. Louis, MO）で、補体枯渇ＮＨＳを再構成した。

ＩｇＭの精製

抗ＩｇＭカラム（Sigma, St. Louis, MO）を使用して、ＮＨＳからＩｇＭを精製した。タンパク質含有分画をプールし、４℃でＰＢＳで透析し、５０ｋＤａカットオフの膜を使用した超遠心分離により濃縮し、−８０℃で、一定分量を保存した。

中和アッセイ

１時間３７℃で、ＮＨＳ、または熱もしくはＥＤＴＡ失活血清、あるいは対照としてＰＢＳと共に、精製されたウイルスを培養した。Ｖｅｒｏ細胞上のプラークアッセイにより、ウイルス力価を測定した。

古典的補体経路の溶血活性のためのアッセイ

９６ウェルのマイクロタイタープレート中で、３７℃で４５分間、抗体感作ヒツジ赤血球（ＥＡ）（Sigma, St. Louis, MO）と共に、血清の段階的２倍希釈物を培養し、ＮＨＳまたは補体成分枯渇血清の総溶血補体価（ＣＨ_５０）を決定した。無傷のＥＡを、３分間１２０×ｇで遠心分離して除去し、上澄み液を新しい９６ウェルプレートに移し、４０５ｎｍの分光光度法により、溶解されたＥＡのパーセンテージを決定した。

Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスへのＩｇＭの結合を測定するためのＥＬＩＳＡ

ショ糖勾配で精製され、ダルベッコのＰＢＳ（ｐＨ７．１）に含まれたＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスを２×１０^６ＰＦＵ／ウェルでHigh Binding Costarマイクロタイタープレート（Corning Incorporated, Corning, NY）の９６ウエルに加え、室温で２時間培養し、５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の脱脂乳を用いて４℃一晩でブロックした。ウイルスで被覆されたウェルに、またはＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中の脱脂乳で被覆された対照ウェルに、ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で希釈された熱失活ＮＨＳの段階的２倍希釈物を添加し、１時間３７℃でインキュベートした。西洋わさびペルオキシダーゼ抱合ヤギＦ（ａｂ’）_２ＩｇＧ抗ヒトＩｇＭ μ−鎖（Sigma, St. Louis, MO）を使用して、４０５ｎｍの光学密度で、結合したＩｇＭを検出した。終点力価は、０．１を超える光学密度、および対照ウェルの光学密度の少なくとも２倍をもたらす該血清希釈であった。

ウエスタンブロット分析

感染細胞抽出物に４から１５％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）を実行し、イモビロン（Immobilon）−Ｐ転写膜（Millipore Corp., Bedford, MA）に移し、ウサギ抗ｇＣ２抗体Ｒ８１およびウサギ抗ＶＰ５抗体と反応させた。

統計分析

曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して、ウイルスの中和率を比較した。スチューデントｔ検定（Microsoft Excelソフトウェア）を使用して、Ｐ値を決定した。結果は、＜０．０５の確率（Ｐ）で、有意であるとした。

結果

Ｇ株、３３３、および２．１２を含む複数のＨＳＶ−２株のｇＣ２による防御効果を調べた。ウエスタンブロット法により、野生型感染細胞においてｇＣ２の発現は確認されたが、ｇＣ２欠損感染細胞においては確認されなかった（図８Ａ）。補体源としてのＮＨＳの濃度を上昇させて、それぞれのウイルスを１時間３７℃で培養し、中和アッセイを行った。ＰＢＳで培養されたウイルスは、対照としての役割を果たした。全ての３つの野生型ＨＳＶ−２ウイルスは、ｇＣ２欠損ウイルスよりも、補体媒介性の中和に抵抗性であった（図８ＢからＤ）。ＨＳＶ−１の野生型およびｇＣ１欠損ウイルスでも、類似した結果が得られた（図８Ｅ）。ＨＳＶ−２野生型ウイルスの中和は、２０％の濃度のＮＨＳではほとんど、または全く生じなかったが、ｇＣΔ３３３、ｇＣ２欠損２．１２、およびｇＣ２欠損Ｇの力価は、それぞれ約２５％、７５％、および８５％低減した（図８ＢからＤ）。ｇＣ２欠損ウイルスの補体中和に対する感受性の増加は、評価された補体濃度範囲にわたって持続した。ｇＣ２欠損ウイルスと比較して、類似レベルの野生型ウイルスの中和を達成するには、概して４倍以上の濃度のＮＨＳが必要であった。結果は、ｇＣ２が、補体媒介性の中和からウイルスを防御することを示している。

実施例６：ｇＣ１欠損ウイルスの中和にはＣ１ｑが関与する

古典的補体経路の第１成分であるＣ１ｑが、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２のｇＣ１欠損ウイルスを中和するために必要であるかどうかを決定するために、ＮＨＳからＣ１ｑを枯渇させたところ、総溶血補体価が低下した。この低下は、Ｃ１ｑの再構成により回復した（図９Ａ）。Ｃ１ｑ枯渇血清は、９５％以上のＣ１ｑを枯渇させたにもかかわらず、残留活性を示した。これは、比較的低濃度のＣ１ｑが、古典的補体カスケードを開始させ、抗体で被覆された赤血球を溶解するのに十分であることを示している。中和実験を行って、２０％のＮＨＳ、Ｃ１ｑ枯渇ＮＨＳ、およびＣ１ｑを再構成したＣ１ｑ枯渇ＮＨＳを比較した。対照として、２０％の熱失活されたＮＨＳでウイルスを培養した。Ｃ１ｑ枯渇血清はＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌまたはＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌを中和せず、その一方、Ｃ１ｑを再構成した血清は、中和を回復した（図９Ｂ）。したがって、ｇＣ欠損ウイルスの中和にはＣ１ｑが関与し、これは古典的補体経路の活性化により生じる。

実施例７：複数の提供者からのＮＨＳがｇＣ欠損ウイルスを中和する

ＮＨＳの中和が対象により異なるかどうかを決定するために、４人のＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２血清陰性ヒト提供者を使用して、補体によるＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌおよびＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌの中和を測定した。全ての試料が２０％のＮＨＳでｇＣ欠損ウイルスを中和したが、その一方、熱失活ＮＨＳは中和できず、したがって、全ての試料はｇＣ１欠損ウイルスの補体媒介性の中和を示した（図１０）。

実施例８：ｇＣ欠損ウイルスの中和にはＣ３の活性化が関与する

Ｃ３は、３つの補体経路全ての成分である。Ｃ３は高濃度でＮＨＳ中に存在するため、その枯渇は困難である。したがって、Ｃ３がｇＣ欠損ウイルスの中和に必要かどうかを確認するために、コンプスタチンを使用してＣ３の活性化を阻害した。コンプスタチン（４Ｗ９Ａ）は、Ｃ３に結合し、その活性化を防ぐことにより、低濃度で補体を干渉する低分子合成ペプチドである。２０％のＮＨＳ、または活性（４Ｗ９Ａ）または不活性（線状）コンプスタチンのいずれかで処置した２０％のＮＨＳでの処理後の中和を調べる実験を行った。対照として、未処置のウイルスも使用した。ＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌおよびＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスを、ＮＨＳまたは不活性コンプスタチンで処置したＮＨＳで処理したところ、これらのウイルスは中和された（図１１）。活性コンプスタチンで処置したＮＨＳはウイルス力価を低下させなかった。これは、ｇＣ欠損ウイルスの中和にＣ３の活性化が関与することを示す。

実施例９：Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスの中和にはＣ５が関与する

次に、Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌの中和に、Ｃ５依存性抗体非依存性補体中和が関与するかどうかを確認した。ＮＨＳからのＣ５を枯渇させたところ、総溶血活性は低下したが、これは、Ｃ５が再構成されると回復した（図１２Ａ）。２０％のＮＨＳ、Ｃ５を枯渇させた血清、およびＣ５再構成血清とともに、ＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌおよびＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌを培養した。その結果、Ｃ５枯渇血清はウイルスを中和せず、その一方、ＮＨＳおよび再構成された血清はウイルスを中和した（図１２Ｂ）。したがって、Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌの中和には、Ｃ５が関与する。

別の研究により、Ｇ−ｇＣ１ｎｕｌｌおよびＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌウイルスの中和には、代替の補体経路の活性化、マンナン結合レクチン補体経路の活性化、またはＣ６をも必要としないことが示された（Ｃ６結果は図１２Ｃおよび１２Ｄに示されている）。

実施例１０：ｇＣ欠損ウイルスの中和には天然ＩｇＭ抗体が関与する

古典的補体経路の活性化は、Ｃ１ｑがビリオン表面のＩｇＭまたは２つのＩｇＧ分子に結合する際に生じる。また、この活性化は、ヒトサイトメガロウイルスおよびヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスについて報告されているように、Ｃ１ｑがウイルス膜タンパク質に直接結合する際にも生じる。補体の中和の媒介における、天然ＩｇＭ抗体の役割を評価した。ＮＨＳからＩｇＭを枯渇させても、総溶血補体価は減少しない。これは、古典的補体経路成分がＩｇＭと共に枯渇されなかったことを示している（図１３Ａ）。２０％のＮＨＳ、ＩｇＭを枯渇させた２０％のＮＨＳ、およびＩｇＭ再構成ＮＨＳでの後の中和を比較する実験を行った。ＩｇＭ枯渇血清は、ＮＳ−ｇＣ１ｎｕｌｌまたはＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌをも中和しなかったが、その一方、ＮＨＳまたはＩｇＭ再構成ＮＨＳは、これらのウイルスを中和した（図１３Ｂ）。したがって、ＩｇＭおよび補体の両方が、ｇＣ１欠損ウイルスの中和に関与する。

実施例１１：ＩｇＭ抗体はＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌＧウイルスに結合する

ＥＬＩＳＡを利用して、熱失活ＮＨＳにおけるＩｇＭのＧ−ｇＣ２ｎｕｌｌへの結合を測定した。２０％のＮＨＳで開始する、血清の段階的２倍希釈物を、Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌとともにまたは対照ウェルにおいて培養した。４人の提供者のそれぞれからのＮＨＳ中のＩｇＭが、Ｇ−ｇＣ２ｎｕｌｌに結合することが検出された（図１３Ｃ−Ｆ）。終点力価は４人の提供者で異なり（提供者１は１：２０、提供者２および３は１：３２０、および提供者４は１：８０）、これは、血清中のＩｇＭ濃度と相関した（提供者１は５５ｍｇ／ｄｌ、提供者２は２０５ｍｇ／ｄｌ、提供者３は２３７ｍｇ／ｄｌ、および提供者４は１５５ｍｇ／ｄｌ）。したがって、ＩｇＭはｇＣ２欠損Ｇウイルスに結合する。

実施例１２：Ｆｃ受容体活性に関与するｇＥドメインの同定

ＦｃγＲ（ＩｇＧＦｃ受容体）活性およびウイルスの伝播は、ｇＥの２つの機能によるものであり、それらは、重複する個別のｇＥドメインにより実行される。ＨＳＶ−１ｇＥは、１つの上皮細胞から別の上皮細胞へのウイルスの伝播、およびニューロン内の輸送を媒介する。ＨＳＶＦｃγＲの再発性感染への寄与を明らかにするために、ＦｃγＲ活性に関して欠陥があるが、伝播機能については無傷である変異ウイルス、つまり、ｇＥの２６４のアミノ酸後に４アミノ酸（ＡＡ）（ＡＬＥＧ）を挿入したＨＳＶ−１ｇＥ変異ウイルスを利用した（ＮＳ−ｇＥ２６４）。

マウス側腹部モデルにおけるＮＳ−ｇＥ２６４変異体：マウスＩｇＧＦｃはＨＳＶ−１ＦｃγＲに結合しないため、マウス側腹部モデルは、ＦｃγＲ機能を考慮せずにウイルス伝播を測定することに用いられる。したがって、ＨＳＶ−１ＦｃγＲ表現型は、マウスにおけるウイルス毒性に影響しない。ヒトおよびウサギＩｇＧのＦｃドメインはＨＳＶ−１ＦｃγＲに結合するため、ヒトまたはウサギからのＩｇＧでマウスを受動的に免疫することにより、ＦｃγＲ機能を判定するようにマウス側腹部モデルを改変した。受動的免疫を行わなかった場合、帯状ヘルペス疾患をウイルス伝播の表現型の指標として使用することができる。したがって、ＮＳ−ｇＥ２６４がＷＴウイルスと同様の帯状ヘルペス疾患を引き起こすならば、その伝播表現型は無傷であるということになる。ＮＳ−ｇＥ２６４感染細胞の周囲にＩｇＧで被覆された赤血球によるロゼットが形成されないことから分かるように、ＮＳ−ｇＥ２６４は、ＦｃγＲ陰性である。マウス側腹部モデルにおいてＮＳ−ｇＥ２６４の伝播表現型を評価した。

マウスの側腹部に、５×１０^５ＰＦＵのＮＳ−ｇＥ２６４またはＷＴｇＥ遺伝子を回復するレスキューＮＳ−ｇＥ２６４を接種した。感染後（ｐｉ）３〜７日目に、各病変部につき１点を１日当たり最高１０まで与えて、帯状ヘルペス疾患について動物を点数化した。帯状ヘルペス疾患点数は変異体およびレスキュー株において同様であったため、ＮＳ−ｇＥ２６４は、完全な伝播表現型を示した（図１４Ａ）。ＦｃγＲ活性を評価するため、ヒト免疫（抗ＨＳＶ）ＩｇＧ（Ｆ（ａｂ’）_２ドメインでＨＳＶ抗原に、ＦｃドメインでＨＳＶ−１ＦｃＲ（ＩｇＧのＦｃ活性を阻害する）に結合することができ）、または対照として非免疫ヒトＩｇＧ（ＦｃドメインによってのみＦｃγＲに結合することができる）でマウスを受動免疫した。１６時間後、マウスを感染させ、感染後３〜７日目に、帯状ヘルペス疾患について評価した。ヒト抗ＨＳＶＩｇＧで受動免疫したマウスのうち、ＮＳ−ｇＥ２６４に感染させたマウスの方がレスキューＮＳ−ｇＥ２６４に感染させたマウスよりも、疾患が少なかった（図１４Ｂ）。したがって、ＨＳＶ抗体は、レスキュー株よりも、ＦｃγＲ変異体に対してより有効である。非免疫ヒトＩｇＧは、いずれのウイルスに対しても効果がなかった（図１４Ｃ）。

したがって、ＮＳ−ｇＥ２６４は完全な伝播を示すが、ＦｃγＲ表現型に関して欠陥を示し、ＦｃγＲの欠如により、ＨＳＶ抗体による排除にウイルスが影響されやすくなる。

実施例１３：ｇＣ−１は生体内毒性に寄与する

マウス側腹部モデルにおいて、ウイルスは、接種部位からＤＲＧ内のニューロンに伝播し、複製し、隣接ニューロンに伝播し、その後皮膚に戻り、帯様（帯状ヘルペス）に分布した病変部を引き起こす。補体が完全なマウスにおいて、Ｃ３ｂ結合において不完全なＨＳＶ−１変異体株（ＮＳ−ｇＣΔＣ３、Δ２７５−３６７）は、側腹部の接種および帯状ヘルペス部位において、ＷＴウイルスよりも少ない疾患を生じさせ、その一方、Ｃ３ＫＯマウスにおいて、該疾患は、接種および帯状ヘルペスの両方の部位において、ＷＴウイルスに匹敵するものであった。

一次（急性）感染の間のＤＲＧのウイルス感染へのｇＣの寄与を確認するために、５×１０^５ＰＦＵのＷＴウイルス（ＮＳ）またはＮＳ−ｇＣΔＣ３（ｇＣ−１（ＡＡ２７５−３６７）を欠きＣ３ｂに結合しないＨＳＶ−１変異ウイルス）を、側腹部の掻爬による接種により、ＢＡＬＢ／ｃマウスを感染させた。感染後３日目および４日目に、マウスを安楽死させ、ＤＲＧを収穫し、感染性ウイルスの力価を測定した（図１５）。４日目までには、ＤＲＧから３ｌｏｇ_１０のＷＴウイルスを回収したが、ｇＣ変異ウイルスは検出されなかった。ＮＳ−ｇＣΔＣ３の接種力価を３×１０^６ＰＦＵまでに増加させ、５日目に５×１０^５ＰＦＵ（接種時）のＮＳと比較した。より高い接種量では、ＤＲＧ中にＮＳ−ｇＣΔＣ３が検出されたが、その力価はやはりＮＳのものより１０００倍低く、ウイルスのＤＲＧ感染において、ｇＣが、少なくとも３桁の防御を提供することを示している。

したがって、使用した条件下では、補体がＤＲＧ感染の減少の原因であり、ｇＣ媒介性免疫回避がｇＣ−１の毒性の原因である。

実施例１４：ｇＣ−２は生体内ＨＳＶ−２毒性に寄与する

生体内でウイルスを補体攻撃から防御するＨＳＶ−２ｇＣの役割を確認するために、５×１０^５ＰＦＵの２．１２株（ＷＴのＨＳＶ−２）または２．１２−ｇＣｎｕｌｌ株（ｇＣ−２欠損変異体）で、補体が完全なＣ５７Ｂｌ／６またはＣ３ＫＯマウスの側腹部を掻爬により接種し、その後、感染後３〜７日目まで、接種および帯状ヘルペス部位の疾患について点数化した。ＨＳＶ−２は、ＨＳＶ−１よりもより重度の側腹部疾患を引き起こすため、点数化システムを、疾患スペクトルの重度側端部の動物を区別するように修正した。接種部位では、点数は、０〜３の範囲であり、０は疾患がなく、１は赤みまたは単独病変部、２は潰瘍、３は組織壊死を伴う部分を表す。帯状ヘルペス部位では、点数は０〜４の範囲であり、０は疾患がなく、１は単独病変部、２は融合性病変部、３は潰瘍、４は組織壊死を伴う部分である。補体が完全なマウスにおける２．１２−ｇＣｎｕｌｌの疾患点数を２．１２のものと比較したところ、著しく減少したが（図１６Ａ）、Ｃ３ＫＯマウスにおけるＷＴウイルスに匹敵するものであった（図１６Ｂ）。

したがって、ＨＳＶ−２ｇＣは、生体内において、補体の回避を含む免疫回避を媒介する。

実施例１５：ｇＥ−１による免疫接種は、ｇＥに結合してｇＥの免疫回避ドメインを阻害する抗体を誘発する

材料および実験方法

細胞培養物およびウイルス株

１０％の熱失活ウシ胎児血清と１ｍｌ当たり２０μｇのゲンタマイシンと２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）とを添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、加湿恒温器の中で、５％のＣＯ_２中３７oＣにてＣＯＳ−１細胞を生育した。ＨＳＶ−１野生型株であるＮＳで細胞を感染させた。アフリカミドリザル腎（Ｖｅｒｏ）細胞を使用してウイルスプールを調製した。

ｂａｃ−ｇＥ２４−２２４、ｂａｃ−ｇＥ２２５−３９８、およびｂａｃ−ｇＥ２４−４０９ウイルスの構築

バキュロウイルスであるｂａｃ−ｇＥ２４−２２４、ｂａｃ−ｇＥ２２５−３９８、およびｂａｃ−ｇＥ２４−４０９は、ｐＣＭＶ３−ｇＥからのｇＥＡＡ２４−２２４、２２５−３９８、および２４−４０９をＴｈｅｒｍａｌＡｃｅＤＮＡポリメラーゼ（Invitrogen Corp., Carlsbad, CA）を使用したＰＣＲで増幅することで構築した。６個のヒスチジンタグを、３’プライマーの停止コドンの前に組み込んだ。ＢａｍＨ１およびＰｓｔ１配列を、それぞれ５’および３’プライマーに組み込み、ラピッドＤＮＡライゲーションキット（Roche Diagnostics, Indianapolis, IN）を使用してＢａｍＨ１−Ｐｓｔ１フラグメントをｐＶＴ−Ｂａｃにクローン化した。このサブクローン化方法により、ｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、およびｇＥ２４−４０９配列が、バキュロポリヘドリン（baculopolyhedrin）プロモーターの制御下で、ミツバチのメリチンシグナル配列の３´の直後に置かれた。Ｓｆ９昆虫細胞（Gibco BRL, Grand Island, NY）に、ｐＶＴ−Ｂａｃ構築物およびBaculogold（登録商標）ＤＮＡ（PharMingen, San Diego, CA）を共トランスフェクトし、ｂａｃ−ｇＥ２４−２２４、ｂａｃ−ｇＥ２２５−３９８、およびｂａｃ−ｇＥ２４−４０９ウイルスを作成した。

ｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、およびｇＥ２４−４０９の精製および同定

バキュロウイルスは、最初の３継代まではＳｆ９昆虫細胞中で生育させ、第４継代では、より高収率のタンパク質発現を得るためにＨ５昆虫細胞（Gibco BRL）中で生育させた。１５０ｍｌの感染Ｈ５細胞からの上澄みを、ウエスタンブロット法により、タンパク質発現について試験し、タンパク質精製に使用した。上澄み液は、ニッケルカラム（QIAGEN Inc., Valencia, CA）に通過させ、５０〜２５０ｍＭのイミダゾールで溶出した。溶出したフラグメントを、ウルトラフリー（Ultrafree）−１５（登録商標）遠心濾過デバイス（Millipore Corp., Bedford, MA）を用いて濃縮し、ジェルコード（登録商標）のブルー染色試薬（Pierce）を使用して、４〜１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥで同定した。精製されたタンパク質の試料を４〜１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動し、ニトロセルロース膜に移し、ＡＡ１０３−１２０の間のｇＥ配列を認識する、マウス抗Ｈｉｓタグモノクローナル抗体（ＭＡｂ）、１ＢＡ１０、またはｇＥＡＡ１−４０９に対するウサギポリクローナル抗体Ｒ５７５でプローブした。

ｇＥフラグメントでの免疫化

５匹の８〜９週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Charles River Laboratories, Wilmington, MA）を、１０μｇの精製されたｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、またはｇＥ２４−４０９を腹腔内で免疫接種した。また、対照として、３匹のマウスにＰＢＳを注射した。最初の免疫接種にフロイントの完全アジュバントを使用し、１０から１４日の間隔での追加注射にフロイントの不完全アジュバントを使用した。３回目から５回目の免疫接種の２週間後、血清を収集した。精製されたｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、またはｇＥ２４−４０９（COCALICO Biologicals, Inc., Reamstown, PA）を、それぞれ２匹のウサギに免疫接種し、４回目から６回目の免疫接種後に血清を収集した。

ＥＬＩＳＡによる抗体検出

精製されたｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、およびｇＥ２４−４０９フラグメントを、２μｇ／ｍｌになるようにダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤｕＰＢＳ）（ｐＨ７．１）で希釈し、２００ｎｇのそれぞれのフラグメントを使用してＣｏｖａｌｉｎｋ（登録商標）ＮＨ９６ウェルのマイクロタイタープレート（Nalge Nunc International, Naperville, IL）を被覆した。被覆したプレートを、一晩４℃で培養し、ＤｕＰＢＳ中５％（ｗ／ｖ）の脱脂乳で２時間３７℃にてブロック処理した。２μｇ／１００μｌになるようにＩｇＧ試料をＤｕＰＢＳで希釈し、ＢＳＡを０．１％になるように加えた。西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）が抱合したアフィニティー精製ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）またはヒツジ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Amersham Life Science, Piscataway, NJ）をＤｕＰＢＳで１：１０００倍希釈し、０．０１％になるようにＢＳＡ加えた。この緩衝溶液に１ｍｇ／ｍｌのＡＢＴＳ（Roche, Mannheim, Germany）を加えて室温で１０分間反応させ、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Dynatech, Chantilly, VA）を使用して４０５ｎｍで光学密度（ＯＤ）を測定した。

フローサイトメトリーアッセイ

抗体がＩｇＧＦｃのＨＳＶ−１感染細胞への結合を阻害するかどうかを確認するためのアッセイは、まず抗体がＨＳＶ−１感染細胞に結合するかどうかの測定、そしてその後の、結合された抗体がビオチン標識化非免疫ヒトＩｇＧのＨＳＶ−１ＦｃγＲへの結合を阻害するかどうかの確認の２つの要素を含むものである。抗体結合については、ＭＯＩ２で１６時間、ＣＯＳ−１細胞を野生型ウイルスに感染させ、細胞解離緩衝液（Life Technologies Inc., Rockville, MD）で分散し、ＩｇＧＦｃ結合を促進する０．０５Ｕのノイラミニダーゼ（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO）で処置した。マウスもしくはウサギＩｇＧに、またはウサギＩｇＧＦ（ａｂ’）_２フラグメントに対するフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）抱合Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントを使用して、ＩｇＧ抗体のＨＳＶ−１感染細胞表面への結合を測定した。細胞を１％のパラホルムアルデヒドで固定し、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメトリー（Becton-Dickinson, San Jose, CA）で分析した。抗体結合は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として記録された。ＩｇＧ結合の阻害を測定するためのアッセイについては、ノイラミニダーゼで処置したＨＳＶ−１感染細胞を、ＩｇＧまたはＦ（ａｂ’）_２フラグメントとともに培養し、その後、１０μｇのビオチン標識化非免疫ヒトＩｇＧ添加し、ストレプトアビジン−Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｓｉｇｍａ）を使用して検出した。阻害率は、（（阻害する抗体なしのＭＦＩ−阻害する抗体有りのＭＦＩ）／阻害する抗体なしのＭＦＩ）×１００として計算した。

結果

バキュロウイルス中のフラグメントの生成。ｇＥ免疫接種が、Ｆ（ａｂ’）_２ドメインでｇＥに結合する抗体を誘発することができるかどうかを確認するために、ｇＥ細胞外ドメインのほとんど全体に及ぶ３つのｇＥフラグメント（ｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、およびｇＥ２４−４０９）を調製した。ｇＥ２２５−３９８フラグメントは、ＩｇＧＦｃドメインのほとんど、あるいは恐らく全てに及ぶ。ｇＥ２４−４０９は、より小さなフラグメントのそれぞれに含まれる配列を含有する。

バキュロウイルス感染細胞の上澄み液は、６〜８ｍｇ／Ｌのフラグメント（ｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、およびｇＥ２４−４０９）を含んでおり、これらをニッケルカラムで精製し、１ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥでのジェルコードブルー（GelCode Blue）（登録商標）染色により示された純度は、?９５％であった。ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２４−４０９フラグメントは、抗ＨｉｓＭａｂ、抗ｇＥＭＡｂ１ＢＡ１０、およびウサギポリクローナル抗体Ｒ５７５と反応した。フラグメントｇＥ２２５−３９８は、抗ＨｉｓＭａｂ、ウサギポリクローナル抗体Ｒ５７５と反応したが、予想通り、１０３と１２０との間のＡＡ配列を認識するＭＡｂ１ＢＡ１０とは反応しなかった。

マウスにおけるバキュロウイルスｇＥの免疫接種。誘起された抗体がＩｇＧＦｃのＨＳＶ−１ＦｃγＲへの結合を阻害するかどうかを決定するために、マウスをｇＥ２４−２２４、ｇＥ２２５−３９８、ｇＥ２４−４０９で免疫接種し、または対照として偽免疫接種を施した。ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２２５−３９８での５回目の免疫化、またはｇＥ２４−４０９での３回目の免疫化の後、マウス血清を収集し、対応する免疫原に対して、ＥＬＩＳＡにより抗体力価を試験した。免疫化マウスは、免疫化抗原と反応する抗体を生成したが、偽免疫化マウスはしなかった。抗体値は、ｇＥ２４−４０９フラグメントに関するものが最も高かった（図１７）。

マウス抗体を使用したＨＳＶ−１ＦｃγＲの阻害。感染の１６時間後、フローサイトメトリーアッセイを行い、抗体がＨＳＶ−１感染細胞上に発現されたｇＥに結合するかどうかを評価した。ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２４−４０９免疫化マウスからの抗体は、ｇＥに結合したが（図１８Ａ）、その一方、ｇＥ２２５−３９８免疫化マウスからの抗体は、低レベルの結合を示した。ヒトまたはウサギＩｇＧとは異なり、マウスＩｇＧＦｃはＨＳＶ−１ＦｃγＲには結合せず、したがって、マウス抗体による結合は、ＩｇＧＦ（ａｂ’）_２ドメインによってのみ媒介され得る。したがって、感染細胞に発現されたｇＥは、ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２４−４０９、そしてより低い程度でｇＥ２２５−３９８により誘起される抗体の、Ｆ（ａｂ’）_２ドメインに結合する。利用される条件下で、感染細胞上に発現されたｇＥ２２５−３９８エピトープの立体構造は、バキュロウイルスフラグメント中のｇＥの立体構造とは異なるか、あるいは、このエピトープは感染細胞上に隠れているかのいずれかである。

免疫化マウスからの無希釈血清を、ビオチン標識化非免疫ヒトＩｇＧのＨＳＶ−１ＦｃγＲへの結合を阻害する能力について試験した。ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２４−４０９により誘起された抗体は、ＨＳＶ−１ＦｃγＲを阻害した（阻害中央値は、それぞれ７６％および８０％）が、その一方、ｇＥ２２５−３９８に対する抗体はほとんど阻害を示さなかった（阻害中央値１７％）（図１８Ｂ）。したがって、ｇＥ２４−２２４およびｇＥ２４−４０９に対する抗体は、それらのＦ（ａｂ’）_２ドメインでｇＥに結合し、ＩｇＧＦｃのＨＳＶ−１ＦｃγＲへの結合を阻害する。

実施例１６：ＨＳＶ−１ｇＤおよびｇＣの効果的な免疫接種用量およびスケジュールの確定

材料および実験方法

Ｂａｌｂ／Ｃマウスの腹腔内にｇＤを３回接種した。各接種の際には、１０ｎｇ／１回のｇDと１０マイクログラム（μｇ）／１回のｇCとを接種し、または１０ｎｇ／１回のｇDのみを接種し、または５０ｎｇ／１回のｇDと１０マイクログラム（μｇ）／１回のｇCとを接種し、または５０ｎｇ／１回のｇDのみを接種した。最初の接種は、フロイントの完全アジュバントを用い、その後の２回の接種には、フロイントの不完全アジュバントを用いた。偽ワクチン接種マウス（０ｇＤまたは０ｇＣ）は、アジュバントのみを受けた。３回の接種後、血清を回収し、抗ｇＤおよび抗ｇＣ抗体応答について、ＥＬＩＳＡで分析した。実施例１に記載の通り、ロゼット阻害アッセイを行った。

結果

ｇＣの非存在下で５０ｎｇのｇＤを３回接種したところ、強い抗ｇＤ抗体応答が産生され、これは、１０μｇのｇＣがｇＤと共に投与されると減少した（図１９）。抗ｇＤ応答を向上させるために、ｇＣの非存在下で５０ｎｇのｇＤをさらにもう１回（４回目）マウスに接種した。２週間後、血清を収集し、ｇＤおよびｇＣへの抗体応答を分析した。４回目のｇＤの接種により、抗ｇＤ抗体応答が有意に増加した（図２０Ａ、一番右のバー）。さらに、４回目の接種の後に誘発されたｇＣ抗体は、偽群と比較してロゼット形成の８５〜９０％が阻害されたことから明らかなように（図２０Ｂ）、Ｃ３ｂ結合を阻害することができた。これは、本ワクチン投与計画の有効性を裏付けるものである。

したがって、組換えｇＣ＋第２のＨＳＶ抗原の接種、そしてその後の第２の抗原のみでの接種は、抗ＨＳＶ抗体応答を誘発する効果的な方法である。あるいは、ｇＣタンパク質および第２の抗原を、別個の部位または別個の時間に投与することができる。

実施例１７：ｇＤ＋ｇＣのためのアジュバントとしてのＣｐＧ＋ミョウバンの使用

材料および実験方法

１４日間間隔で３回、１接種当たり２μｇのｇＣ（上記フロイントのアジュバントでの使用よりも５倍低濃度）、１接種当たり５０μｇのＣｐＧ（ＯＤＮ番号１８２６）、および接種されるタンパク質１μｇ当たり２５μｇのミョウバン（アルハイドロゲル（Alhydrogel）（登録商標）（Accurate Chemical and Scientific Co.社製の水酸化アルミニウムゲルアジュバント）（最終量５０μｇのミョウバン）をマウスに接種した。２回目および３回目の接種後、血清を採取した。

結果

ｇＣ＋ミョウバン＋ＣｐＧオリゴヌクレオチドワクチンの、抗ｇＣ抗体を誘起する能力を試験した。該ワクチンは、２回目および３回目の両方の接種後の測定に見られるように、強い抗体応答を誘起した（図２１Ａ）。さらに、抗血清は、Ｃ３ｂ結合部位のロゼット化を強力に阻害する能力を示した（図２１Ｂ）。

したがって、ミョウバン＋ＣｐＧオリゴヌクレオチドワクチンと組み合わせた組換えＨＳＶタンパク質のワクチン接種は、抗ｇＣ抗体を誘起する効果的な手段である。さらに、組換えＨＳＶタンパク質を、ミョウバン＋ＣｐＧオリゴヌクレオチドと組み合わせることにより、他のアジュバントと共に使用される場合よりも低い抗原用量で、効果的なワクチン接種が可能になる。

実施例１８：ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチンはｇＤ−２のみを含有するワクチンより優れた防御を付与する

材料および実験方法

実施例２〜３でｇＣ−１／ｇＤ−１ワクチンについて記載の通り、ｇＣ−２およびｇＤ−２（例えば、Ｃ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２７−４２６のｇＣ−２、およびＣ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２６−３０６のｇＤ−２）を含有する複合ワクチンをマウスに投与する。実施例１４に記載の通り、毒性を判定する。２５０ｎｇのｇＤ−２および５μｇのｇＣ−２を、５ｘ１０^５のＨＳＶ−２の２．１２株に感染したマウスの膣内に投与する。生存率および膣部の疾患について、マウスを点数化する。チャレンジ後１〜１１日目に、ウイルス力価について、膣スワブを行い、チャレンジ後５日目に、免疫接種によって神経節のＨＳＶ−２感染が低下するかどうかを評価する。

結果

ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチンを、ＨＳＶ−２に対する防御を付与する能力について、ｇＤ−２のみまたはｇＣ−２のみを含有するワクチンと比較した。複合ワクチンにより付与される防御は、ｇＤ−２またはｇＣ−２ワクチンに勝るものであった。

実施例１９：ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンはＨＳＶ−１に感染した対象における再発性感染を防止する

マウス側腹部モデルにおいて、ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチン（例えば、実施例２〜３に記載のもの）の、再発性ＨＳＶ−１感染（例えば、発赤の出現により判定される）を防止するそれらの能力について判定する。感染後、マウスを、ｇＣ−１／ｇＤ−１ワクチン、またはｇＣ−１もしくはｇＤ−１のみを含有するワクチンで最高５回免疫接種し、または偽免疫接種し、その後、再発性感染を監視する。ｇＣ−１／ｇＤ−１複合ワクチンは、ｇＣ−１またはｇＤ−１ワクチンに勝る防御を付与すると考えられる。

実施例２０：ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチンはＨＳＶ−２に感染した対象における再発性感染を防止する

ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチン（例えば実施例２〜３に記載のもの）の、再発性ＨＳＶ−２感染（例えば、発赤の出現により判定される）を防止する能力について判定する。感染後、マウスを、ｇＣ−２／ｇＤ−２ワクチン、またはｇＣ−２もしくはｇＤ−２のみを含有するワクチンで最高５回免疫接種し、または偽免疫接種し、その後、再発性感染を監視する。ｇＣ−２／ｇＤ−２複合ワクチンは、ｇＣ−２またはｇＤ−２ワクチンに勝る防御を付与すると考えられる。

実施例２１：ｇＥ−１／ｇＤ−１ワクチンは免疫原性であり、ＨＳＶ−１感染を防御する

材料および実験方法

ｇＥ−１／ｇＤ−１複合ワクチン（例えば、Ｃ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２４−４０９のｇＥ−１、およびＣ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２６−３０６のｇＤ−１）をマウスに投与し、実施例２〜３および１３でｇＣ−１／ｇＤ−１ワクチンについて記載の通り、免疫原性を判定する。

結果

ｇＥ−１／ｇＤ−１複合ワクチンを、ｇＥ−１のみまたはｇＤ−１のみを含有するワクチンと、免疫原性について比較する。複合ワクチンの免疫原性は、ｇＥ−１またはｇＤ−１ワクチンに勝ると考えられる。次に、ＨＳＶ−１に対する防御を付与するワクチンの能力について比較する。複合ワクチンにより付与される防御は、ｇＥ−１またはｇＤ−１ワクチンに勝ると考えられる。

次に、ｇＥ−１／ｇＤ−１／ｇＣ−１複合ワクチンを、免疫原性について、ｇＥ−１／ｇＤ−１およびｇＤ−１／ｇＣ−１ワクチンと比較する。ｇＥ−１／ｇＤ−１／ｇＣ−１複合ワクチンの免疫原性は、ｇＥ−１／ｇＤ−１およびｇＤ−１／ｇＣ−１ワクチンに勝ると考えられる。次に、ＨＳＶ−１に対する防御を付与するワクチンの能力について比較する。ｇＥ−１／ｇＤ−１／ｇＣ−１複合ワクチンにより付与される防御は、ｇＥ−１／ｇＤ−１およびｇＤ−１／ｇＣ−１ワクチンに勝ると考えられる。

実施例２２：ｇＥ−２／ｇＤ−２サブユニットワクチンはＨＳＶ−２感染を防御する

ｇＥ−２／ｇＤ−２複合ワクチン（例えば、Ｃ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２４−４０９のｇＥ−２、およびＣ末端側に６Ｈｉｓタグを有するＡＡ２６−３０６のｇＤ−２）を、免疫原性について、ｇＥ−２のみまたはｇＤ−２のみを含有するワクチンと比較する。複合ワクチンの免疫原性は、ｇＥ−２またはｇＤ−２ワクチンに勝ると考えられる。次に、ＨＳＶ−２に対する防御を付与するワクチンの能力について比較する。複合ワクチンにより付与される防御は、ｇＥ−２またはｇＤ−２ワクチンに勝ると考えられる。

次に、ｇＥ−２／ｇＤ−２／ｇＣ−２複合ワクチンを、免疫原性について、ｇＥ−２／ｇＤ−２およびｇＤ−２／ｇＣ−２ワクチンと比較する。ｇＥ−２／ｇＤ−２／ｇＣ−２複合ワクチンの免疫原性は、ｇＥ−２／ｇＤ−２およびｇＤ−２／ｇＣ−２ワクチンに勝ると考えられる。次に、ＨＳＶ−２に対する防御を付与するワクチンの能力について比較する。ｇＥ−２／ｇＤ−２／ｇＣ−２複合ワクチンにより付与される防御は、ｇＥ−２／ｇＤ−２およびｇＤ−２／ｇＣ−２ワクチンに勝ると考えられる。

実施例２３：ＨＳＶ−２ｇＣ−２サブユニットワクチンはマウスの側腹部および膣部ＨＳＶ−モデルにおけるＨＳＶ−２感染を防御する

側腹部モデル

ミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と混合したＣｐＧ（５０μｇ／マウス）を使用して、２週間間隔で３回、０．５、１、２、または５μｇのｇＣ−２を、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの腓腹筋に筋肉内（ＩＭ）免疫接種、またはＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇ）、但しｇＣ−２なしで、偽免疫接種した。３回目の免疫接種の１４日後、剪毛し、化学的に剥皮したマウスの側腹部を掻爬することで４ｘ１０^５ＰＦＵのＨＳＶ−２の２．１２株を接種してチャレンジさせた。０〜１４日目の生存率を記録し、３〜１４日目の間、接種および帯状ヘルペス部位の疾患重症度について、動物を点数化した（１群当たりＮ＝５マウス）。接種および帯状ヘルペス部位の疾患についての点数化システムは、抗ｇＣ−１受動的伝達実験で記載した通りであった。

膣部モデル

２週間間隔で、腓腹筋にＩＭで、ＣｐＧ（＃１８２６、Coley Pharmaceutical Group）（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）（Accurate Chemicals）でＢａｌｂ／Ｃマウスを偽免疫接種し、またはＣｐＧおよびミョウバンと共に、１、２、または５μｇのｇＣ−２で免疫接種した。１群を５μｇの用量で２回免疫接種し、それ以外の各群５匹の動物に３回免疫接種を施した（３回免疫接種を施した群を５μｇ（３×）と標識したのに対して、２回免疫接種を施した群を５μｇ（２×）と標識した）。３回目に免疫接種した９日後、または５μｇ（２ｘ）で免疫接種した３日後、性周期を同期化するように、マウスにＩＰで、Depo Provera（登録商標）（蓄積注射用の１５０ｍｇの酢酸メドロキシプロゲステロンの水性懸濁液（Pfizer））を注射した（２ｍｇ／マウス）。５日後、２ｘ１０^５ＰＦＵのＨＳＶ−２の２．１２株で、マウスを膣内チャレンジした。

０〜１４日目の間、死亡率、およびチャレンジ後３〜１４日目の疾患点数について、動物を観察した。膣部疾患についての点数化システムでは、赤みもしくは腫脹、滲出液、膣部および肛門部周囲の脱毛、ならびに壊死のそれぞれに対して１点を与えた。１日当たりの最高点数は、４点であった。実験の終了前に死亡した動物には、調査期間中の最終評価時に点数を与えた。１〜１１日目の間毎日、膣スワブを行った。スワブを１ｍｌのＤＭＥＭに置き、ウイルス力価を、Ｖｅｒｏ細胞上のプラークアッセイにより測定した。

結果

側腹部接種について、各ｇＣ−２を免疫接種したマウスは、偽免疫接種したマウスと比較して、死亡から防御された。しかしながら、５μｇ用量においてのみに１００％の生存率が観察され、これは試験された最高の用量であった（図２２）。

図２３は、チャレンジの３〜１４日後において、偽免疫接種したマウスのものに比べて０．５μｇ、１μｇ、２μｇ、および５μｇのｇＣ−２を免疫接種したマウスの接種部位および帯状ヘルペス部位の疾患点数が低下したこと、とりわけ５μｇのｇＣ−２を免疫接種したマウスの帯状ヘルペス部位が著しく低下したこと（接種および帯状ヘルペス部位の、５μｇ用量の曲線下面積を偽免疫化マウスと比較して、Ｐ＜０．０１）を示す。

膣内接種については、偽免疫接種した全てのマウスが死亡したのに対して、ｇＣ−２の５μｇ（３ｘ）を免疫接種したものでは最も著しく死亡が防止された。ｇＣ−２の５μｇ（２ｘ）を免疫接種した全てのマウスは、偽免疫接種したマウスと比較して死亡までの時間はより長かったものの、その全てが死亡した。１または２μｇで３回免疫を与えられたマウスは、偽免疫接種したマウスと比較してわずかに長く生存し、死亡したものはより少なかったが、死亡の防止率は、ｇＣ−２の５μｇ（３ｘ）を免疫接種したものほど良好ではなかった（図２４）。

２ｘ１０^５ＰＦＵのＨＳＶ−２株２．１２で膣内チャレンジした偽免疫接種またはｇＣ−２免疫接種のマウスの疾患点数を図２５に示す。偽免疫接種群では、全てのマウスが８日目までに死亡したので、９〜１４日目に最終評価の点数を与えた。１または２μｇのｇＣ−２の免疫接種をしたものでは、膣部疾患からの防御がほとんど確認されなかったのに対して、５μｇ（３ｘ）のｇＣ−２の免疫接種したものでは、有意な防御が確認された（Ｐ＜０．０１）。

チャレンジ後１〜１１日目の間、毎日膣スワブを回収した（図２６）。示されている結果は、１群当たり３匹のマウスの平均力価である。ｇＣ−２を免疫接種したものでは、チャレンジ後１日目に、膣部の力価が１〜２ｌｏｇ_１０低下したが、その後の日には免疫接種による影響がほとんどなかった。

実施例２４：ＨＳＶ−２ｇＤ−２サブユニットワクチンはマウス側腹部および膣部ＨＳＶ−２モデルにおけるＨＳＶ−２感染を防御する

材料および実験方法

側腹部モデル

ｇＤ−２用量が１０、２５、５０、または１００ｎｇであったことと、ｇＤ−２がＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と組み合わせて投与されたこととを除き、ｇＣ−２についての上記の記載と同様に、腓腹筋にＩＭで３回、Ｂａｌｂ／ＣマウスをｇＤ−２で免疫接種した、または偽免疫接種した。４ｘ１０^５ＰＦＵ／１０ｍｌのＨＳＶ−２の２．１２株で、マウスをチャレンジした。１群当たり５匹のマウスが接種を受けた。

膣部モデル

５０、１００、もしくは２５０ｎｇのｇＤ−２で３回（３ｘ）、または２５０ｎｇのｇＤ−２で２回（２ｘ）、Ｂａｌｂ／ＣマウスをＩＭで免疫接種した。ｇＤ−２は、２ｘ１０^５ＰＦＵのＨＳＶ−２の２．１２株の接種前に、ＣｐＧ（５０μｇ／マウス）およびミョウバン（２５μｇ／μｇタンパク質）と組み合わされた。マウスをDepo Provera（登録商標）で処置し、ｇＣ−２免疫接種についての上記の記載と同様にチャレンジし、生存率および疾患重症度について評価した。各群５匹の動物を含んだ。各群３匹のマウスを用い、チャレンジ後１〜１１日目の間、毎日膣スワブを取得した。

結果

側腹部接種については、最高の生存率が、１００ｎｇのｇＤ−２を免疫接種したマウスにおいて観察され、２番目に最も高い生存率、５０ｎｇを免疫接種したマウスで観察された（図２７）。

１０ｎｇおよび２５ｎｇ用量のｇＤ−２を免疫接種したところ、接種部位または帯状ヘルペス部位の疾患がわずかに防止されたが、５０ｎｇおよび１００ｎｇ用量では、疾患点数は有意に減少した（接種部位および帯状ヘルペス部位に関して偽および５０ｎｇ用量と比較してＰ＜０．０１、接種および帯状ヘルペス部位に関して偽および１００ｎｇ用量と比較してＰ＜０．００１）（図２８）。

膣内接種については、偽免疫接種群において、９日目を越えて生存したマウスはなかった（図２９）。５０ｎｇ、１００ｎｇ、および２５０ｎｇ２ｘのｇＤ−２を免疫接種したところ、マウスはある程度防御された。一方、２５０ｎｇ３ｘのｇＤ−２を投与したマウスでは、死亡が完全に防止された。

２５０ｎｇ３ｘのｇＤ−２で免疫を与えたマウスのみ、膣部疾患から有意に防御された（偽およびｇＤ−２２５０ｎｇ３ｘの曲線下面積を比較して、Ｐ＜０．００１）（図３０）。

２５０ｎｇ３ｘのｇＤ−２を免疫接種したマウスでは、チャレンジ後１〜７日目に、膣部における力価は約１ｌｏｇ_１０減少した（偽免疫接種したマウスと比較してＰ＜０．００１）のに対して、他の用量で接種したマウスでは、偽免疫接種したマウスと比較して効果は低かった（ｐ値に有意な差異なし）（図３１）。

本実験は、ＨＳＶ−２の側腹部および膣部の両方のモデルにおいて、ＨＳＶ−２媒介性の死亡、ならびに接種部位および帯状ヘルペス部位における疾患からマウスを防御することができる免疫接種用のｇＣ−２およびｇＤ−２の用量（それぞれ、５μｇおよび２５０ｎｇ）を示すものである。

実施例２５：ヒト抗ｇＣ−２抗体のｇＣ−２へのＣ３ｂの結合を破壊する能力の試験

ＥＬＩＳＡを使用して、ｇＣ−２ワクチン（例えば、実施例２〜３に記載のような）により誘起されたヒト抗体が、ｇＣ−２へのＣ３ｂの結合を破壊するかどうかを決定する。４００ｎｇの精製されたＣ３ｂで一晩４℃にて９６ウェルプレートを被覆する。Ｂａｃ−ｇＣ２（４２６ｔ）タンパク質（ｇＣ−２ＡＡ２７−４２６）（３００ｎｇ）を、ｂａｃ−ｇＣ２（４２６ｔ）を免疫接種したヒトからのＩｇＧと共に、１時間４℃でインキュベートした。ＩｇＧ−ｇＣ−２混合物を、Ｃ３ｂで被覆された３連のウェルに添加し、結合されたｇＣ−２を、ウサギ抗ｇＣ−２ＩｇＧを使用して検出する。

実施例２６：ＣｐＧオリゴヌクレオチドを投与すれば組換えＨＳＶ糖タンパク質の必要な用量はより少なくて済む

ＨＳＶ糖タンパク質の必要な用量を低下させることができるかについて、ＣｐＧＯＤＮを試験する。１０μｇのｇＣ−１をマウスに投与し（例えば、前記実施例に記載の通り）、ｇＣ−１による免疫回避を阻害する抗体を誘発する能力について、２μｇのｇＣ−１、１０μｇのｇＣ−１＋ＯＤＮ１８２６、および２μｇのｇＣ−１＋ＯＤＮ１８２６と比較する。ＣｐＧＯＤＮは、免疫回避の阻害に必要とされるＨＳＶのｇＣの用量を減少させると予想される。

実施例２７：ＨＩＶに感染した対象におけるＨＳＶ糖タンパク質ｇＣおよびｇＥ媒介性免疫回避

材料および実験方法

血清の単離

様々な段階のＨＩＶ疾患（ＣＤ４数＜２００／μｌ、２００〜５００／μｌ、＞５００／μｌ）を患うＨＩＶ対象からの血清を、「University of PennsylvaniaのClinical Core Laboratory、Center for AIDS Research」から取得した。型特異的ＩｇＧ抗体を検出することができるｇＧベースのアッセイである、HerpeSelect（登録商標）１および２ＥＬＩＳＡＩｇＧ（Focus Technologies, Cypress, CA）により、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対する抗体について、血清を試験した。対象は、７５％男性で、５６％アフリカ系アメリカ人、３５％白人、７％ラテンアメリカ系アメリカ人、および２％その他であり、平均年齢４１歳であった。ＨＩＶ感染に対する対象の危険性は、男性と性的交渉を持つ男性が５１％、静脈内薬物使用者が５％、異性愛者が４１％、不明が３％を含んだ。ＨＩＶ血清陰性の血清は、グラクソスミスクライン（GlaxoSmithKline）ＨＳＶ−２ｇＤ２ワクチン治験に参加した健常者から取得した。登録された対象は、ｇＤ２ワクチンまたはアジュバントのみ（プラセボ群）のいずれかを受ける前に、ＨＩＶ、ＨＳＶ−１、およびＨＳＶ−２に関して血清陰性であった。

ＩｇＧの精製

ＨｉＴｒａｐ（登録商標）タンパク質Ｇカラムを使用して、製造会社の取扱説明書に従い（Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden）、患者のＩｇＧを血清から精製した。タンパク質を含有する分画を貯え、４℃でＰＢＳで透析し、濃縮し、−２０℃で、一定分量を保存した。免疫前ウサギ血清、または精製されたバキュロウイルスタンパク質ｇＢ、ｇＤ、もしくはｇＨ／ｇＬで接種されたウサギから、ウサギＩｇＧを精製した。

古典的補体経路の溶血活性（ＣＨ _５０）のためのアッセイ

ＣＤ４Ｔ細胞数＜２００／μｌ、２００〜５００／μｌ、および＞５００／μｌを有するＨＩＶ対象、ならびにＨＩＶ非感染対照の、血清の総溶血補体価（ＣＨ_５０）を測定した。血清の段階希釈物を、９６ウェルのマイクロタイタープレート中で、３７℃で１時間、抗体感作ヒツジ赤血球と共に培養した。プレートを３分間１２０×ｇで遠心分離し、上澄みを新しいプレートに移し、４０５ｎｍの分光光度法により溶血の程度を測定した。

抗体および補体中和アッセイ

約１０^５プラーク形成単位（ＰＦＵ）の精製されたウイルスを、ＩｇＧ、ＨＳＶ１＋／２−血清、補体を不活性化するためにＥＤＴＡで処置したＨＳＶ１＋／２−血清、またはＰＢＳと共に、１時間３７℃で培養した。残存するウイルス力価を、Ｖｅｒｏ細胞上のプラークアッセイにより決定した。ＰＢＳおよびＥＤＴＡ処置血清（抗体のみ）でウイルスを培養した場合とＰＢＳおよびＥＤＴＡなしの血清（抗体および補体）でウイルスを培養した場合の力価の差異として、抗体のみによる中和または抗体および補体による中和を計算した。

結果

エイズ研究センター（Center for AIDS Research）の臨床コア（Clinical Core）データベースに登録された最初の１３３人の対象からの血清（これらの対象からの血清およびＣＤ４Ｔ細胞の計数値の両方が入手可能であった）を、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対する抗体について試験してＨＳＶ−１に重感染したＨＩＶ対象（ＨＳＶ１＋／２−）を特定した。全体で、３９％が＞５００／μｌ、２８％が２００〜５００／μｌ、そして３３％が＜２００／μｌのＣＤ４Ｔ細胞数を有した。６９パーセントがＨＳＶ−１血清陽性であり（４１％のＨＳＶ１＋／２＋および２８％のＨＳＶ１＋／２−）、６４％がＨＳＶ−２血清陽性であった（４１％のＨＳＶ１＋／２＋および２３％のＨＳＶ１−／２＋）。対象の８パーセントが、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の両方に関して血清陽性であった。ＨＳＶ１＋／２−対象からの血清を、さらなる調査のために選択した。

ＨＩＶに感染していなかったＨＳＶ１＋／２−対象、または様々な段階のＨＩＶ疾患のＨＩＶ／ＨＳＶ−１重感染対象における総溶血血清補体（ＣＨ５０）価を測定した（図３２Ａ）。血清総溶血補体価は、進行疾患を有するＨＩＶ／ＨＳＶ−１同時感染対象においてさえ、維持された。

次に、補体を不活性化するためにＥＤＴＡで処置された１％の血清を使用して、抗体媒介性中和を測定した。抗体は、全ての段階のＨＩＶ疾患（＜２００／μｌのＣＤ４Ｔ細胞を有する対象を含めて）において、ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの両方を中和した（図３２Ｂ、灰色のバー）。

ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの中和に対する抗体および補体の効果を、１％の血清および活性補体（ＥＤＴＡ処置なし）を使用して比較した。ＨＩＶ陰性対照、および全てのレベルのＣＤ４Ｔ細胞数のＨＩＶ感染対象において、ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの中和は、ＷＴウイルスより高かった（図３２Ｂ、黒色のバー）。先行研究は、ｇＣおよびｇＥが、補体活性化の阻害によりウイルス中和を阻害する（Lubinski et al., Seminars in Cell & Developmental Biology 9:329-37; Nagashunmugam et al., J Virol 72:5351-9）と報告していたため、これらの結果は意外であった。したがって、ｇＣおよびｇＥが免疫回避を媒介するさらなる機序を評価するために、さらに実験を行った。

実施例２８：ウイルス糖タンパク質上のＨＳＶｇＣおよびｇＥエピトープは、ウイルス侵入に関与する糖タンパク質への抗体の接近を阻害することにより、免疫回避の有効性を高める

材料および実験方法

細胞およびウイルス

アフリカミドリザル腎細胞（Ｖｅｒｏ）を、１０％の熱失活ウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、２０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、および１μｇ／ｍｌのファンギゾン（Fungizone）（Life Technologies, Rockville, MD）を添加したダルベッコ変法イーグル培地中で生育した。Ｖｅｒｏ細胞を感染多重度２〜５で感染させて精製ウイルスのプールを調製した。感染の２４時間後、無細胞ウイルスを得るために上澄み液を収穫し、５％から７０％のショ糖勾配で遠心分離した。ウイルス含有分画を単離し、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含むダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で透析し、分割し、−７０℃で保存した。

ＷＴ株であるＨＳＶ−１ＮＳは、感染した子供から得られた低継代臨床単離株である。ＮＳ株から誘導される変異ウイルスであるＮＳ−ｇＣｄΔＣ３、ＮＳ−ｇＥ３３９、および２重変異体であるＮＳ−ｇＣΔＣ３，ｇＥ３３９については既に記載した。ｇＣ変異ウイルスであるＮＳ−ｇＣΔＣ３は、２７５から３６７までのアミノ酸が欠失しており、そのためにＣ３ｂに結合することができない。ｇＥ変異ウイルスであるＮＳ−ｇＥ３３９は、ｇＥの３３９番目のアミノ酸に４個のアミノ酸が挿入されており、そのためにＩｇＧＦｃに結合できない。ｇＣ／ｇＥ２重変異ウイルスであるＮＳ−ｇＣΔＣ３，ｇＥ３３９は、単一ウイルス中にｇＣおよびｇＥの両方に変異を含む。

抗体および補体中和アッセイ

約１０^５プラーク形成単位（ＰＦＵ）の精製ウイルスを、プールしたヒトＩｇＧ（Michigan State Health Laboratories）、または精製バキュロウイルスタンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬ、もしくはｇＩに対するウサギ抗体と共に培養した。尚、ｇＩに対する抗体は、バキュロウイルスが発現したｇＩアミノ酸２４−２６４を抗原として使用してウサギ内で生成させた（ＨＭＦ、未公開）。

ウエスタンブロットおよび濃度測定分析

約２×１０^６ＰＦＵの精製ウイルスに対して４〜１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を実行し、イモビロン（Immobilon）−Ｐ透過膜（Millipore Corp., Bedford, MA）に移し、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ、ｇＨ／ｇＬ、ｇＩ、およびＶＰ５に対するポリクローナルウサギ抗体を使用して検出した。一次抗体を可視化するために、西洋わさびペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ウサギＩｇＧおよび増感化学発光（Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ）を使用した。タンパク質レベルを比較するために、スキャンメーカー（ScanMaker）ｉ９００（Microtek Lab Inc., Carson, CA）を使用して、濃度測定分析を行った。

ウイルスＥＬＩＳＡ

約１０^６ＰＦＵの精製ＷＴまたはＮＳ−ｇＣΔＣ３，ｇＥ３３９ウイルスを５０μｌのＰＢＳで希釈し、Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）の高結合性９６ウェルプレートに添加し、一晩４℃で培養した。対照として、一部のウェルにウイルスを含まない５０μｌのＰＢＳを加えて培養した。室温で２時間、ＰＢＳ中の５％の牛乳および０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で、ウェルをブロック処理した。ｇＢ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬに対する精製ウサギＩｇＧ、または免疫前ウサギＩｇＧの段階希釈物をブロック用緩衝液中で調製し、濃度が２μｇ〜０．０１５μｇ／５０μｌ（ブロック用緩衝液）に低下する範囲でこの段階希釈物をプレートに加えた。抗体を室温で１時間培養し、ＰＢＳ中の０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、ブロック用緩衝液中で３０分間、１：１，０００希釈の西洋わさびペルオキシダーゼ抱合ロバ抗ウサギＩｇＧ（Amersham Bioscience）と共に培養した。ＰＢＳ中の０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で２回、そしてＰＢＳのみで１回、プレートを洗浄し、その後ＡＢＴＳ基質（Ｒｏｃｈｅ）を添加し、２５分後、４０５ｎｍで読み取った。実験の一部については、ウイルスＥＬＩＳＡにおいてニワトリからの抗ｇＤ血清を使用した。ニワトリにバキュロウイルス−ｇＤ構築物を免疫接種し、さらに追加の免疫接種を４回施した。得られた血清を、ＩｇＹ抗体の抗体源として使用した。ｇＤを被覆したプレートに対して行ったＥＬＩＳＡの測定から、血清がｇＤに対して高い抗体力価を有していたことが確認された。

結果

精製されたＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスのウエスタンブロット法による濃度測定分析を行って、ウイルス侵入に必須である、ｇＢ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬを含む糖タンパク質の相対濃度を評価した。ゲルにローディングされたＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルス粒子の量が同程度であることを確証するために、ＨＳＶ−１カプシドタンパク質ＶＰ５の分析も行った。ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスで発現されたＨＳＶ−１糖タンパク質の相対濃度において、いくらか差異が検出されたが（図３３）、ｇＢ、ｇＤ、およびｇＨ／ｇＬの濃度は、ＷＴウイルスよりもｇＣ／ｇＥ変異体においてわずかに高かった。これは、変異ウイルスに関する高い中和活性が、変異ウイルス上の標的糖タンパク質の濃度が低下したことによってもたらされたものではないことを示している。

図３４Ａは、ＨＳＶ−１ＦｃγＲが抗体中和に干渉し得る、考え得る機序を描写している。ＷＴウイルス上のＨＳＶ−１ＦｃγＲは、ＩｇＧのＦｃドメインを結合することにより、Ｆ（ａｂ’）_２ドメインがその標的抗原と相互作用するのを防ぎ得る（ＷＴモデルの左側）。対照的に、ｇＣ／ｇＥウイルスでは、ｇＥ変異によってＦｃγＲの活性がなくなることで、Ｆ（ａｂ’）_２ドメインがより容易に抗体標的と相互作用し、それ故に抗体の中和活性が上がり得る。

この可能性を評価するために、ＨＩＶ陰性ヒト提供者からプールされたＩｇＧを使用して、ＦｃγＲ活性が不完全であるｇＥ変異ウイルス（ＮＳ−ｇＥ３３９）と、完全なＦｃγＲを有するがもののｇＣにおいて変異を有する変異ウイルス（ＮＳ−ｇＣΔＣ３）とをそれらの中和に関して比較した。ウイルスを、ＰＢＳまたはＨＳＶ抗体源としての１００μｇのプールされたヒトＩｇＧと共に培養した。その結果、抗体は、ＦｃγＲが完全なウイルスおよびＦｃγＲに欠陥を有するウイルスのそれぞれ中和に関して同様に有効であり、ｇＣ／ｇＥ２重変異ウイルス（ＮＳ−ｇＣΔＣ３、ｇＥ３３９）に対してはさらに高い中和活性があることが示された（図３４Ｂ）。ｇＣ／ｇＥ２重変異ウイルスは、そのウイルスの由来源であるいずれかの単一変異ウイルスよりも容易に中和されるため、我々は、ｇＣおよびｇＥの両方における変異が、ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスの中和抗体への感受性の増加に寄与すると結論付ける。

次に、ｇＣおよびｇＥ変異によって、他のウイルス糖タンパク質上で元来は遮蔽されているエピトープが中和抗体に暴露されるかどうか（恐らくビリオンエンベロープ上の糖タンパク質立体構造が変化したことによって）を評価した。ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスを、Ｂ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬ、またはｇＩと選択的に相互作用するウサギ抗体と共に培養した後、それぞれのウイルスの中和を比較するアッセイを行った。ｇＢ、ｇＤ、ｇＨ／ｇＬの糖タンパク質はウイルス侵入に必要とされるため、これらのタンパク質に対する抗体は、予想通りウイルスを中和したが、ウイルス間の差異は有意ではなかった。侵入に必要とされないｇＣおよびｇＩに対する抗体は、いずれのウイルスの中和もできなかった。

図３２Ｂおよび３４Ｂで使用されたヒト血清は、複数の糖タンパク質に対する抗体を含有するため、ｇＢ、ｇＤ、およびｇＨ／ｇＬを対象とした抗体の組み合わせを使用して、中和実験を行った（図３５Ｂ）。組み合わせて使用されると、ｇＣ／ｇＥ変異体について、ＷＴウイルスよりも高い中和が検出され、ｇＣおよびｇＥ内の変異が、複数の糖タンパク質上の中和エピトープを曝露することを示唆している。ＷＴとｇＣ／ｇＥ変異ウイルスとの差異は、ｇＨ／ｇＬ抗体が中和反応に含まれるかどうかにかかわらず同程度であり、阻害されたエピトープが、主にｇＢおよびｇＤ上にあることを示している。

ｇＣ／ｇＥ変異ウイルス上の変異が、ｇＢ、ｇＤ、およびｇＨ／ｇＬ上のエピトープを曝露するかどうかをさらに評価するために、ＷＴおよびｇＣ／ｇＥ変異ウイルスを使用して、ウイルスＥＬＩＳＡを行った。ｇＣ／ｇＥ変異ウイルスは、ＷＴウイルスより高濃度のｇＤ（図３６Ａ）、ｇＢ（図３６Ｂ）、およびｇＨ／ｇＬ（図２４Ｃ）抗体に結合した。ニワトリ抗ｇＤ抗体を使用して、さらに実験を行った。ニワトリは、Ｆｃ受容体に結合するドメインを有さないＩｇＹ抗体を生成する。これらの抗体を使用して、ＥＬＩＳＡ実験で、ウイルスＦｃγＲの潜在的な寄与について評価した。ニワトリ抗ｇＤ抗体をＷＴまたはｇＣ／ｇＥ変異ウイルスに添加すると、ＷＴウイルスよりもｇＣ／ｇＥ変異体に対してより強い結合が検出された（図３６Ｄ）。これらの結果は、抗体結合における差異が、ウイルスＦｃγＲのＦｃに対する結合とは独立して生じ、ｇＣおよびｇＥが、侵入に必須であるウイルス糖タンパク質、特にｇＢおよびｇＤ上のエピトープをブロックするという仮説を、支持することを示している。

ｇＣおよびｇＥにおける変異は、ｇＢ、ｇＤ、およびｇＨ／ｇＬを含む、ウイルス糖タンパク質への抗体の接近を可能にし、ＷＴウイルス上のｇＣおよびｇＥが、中和抗体からウイルス糖タンパク質上のエピトープを保護することを示唆している（モデル図３７を参照）。

ＨＩＶ対象は、ＨＩＶ感染過程を通して、高いレベルの中和抗体および補体を維持する。したがって、サブユニットワクチンがｇＣおよびｇＥ上の免疫回避ドメインの阻害することにより、内因性抗体および補体が、ＨＩＶ患者においてはＨＳＶに対してより効果的になり得る。

米国特許第５，７２３，３３５号明細書米国特許第５，６６３，１５３号明細書ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９５／２６２０４号公報

Claims

ワクチンであって、
ａ．組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）またはその免疫原性フラグメントと、
ｂ．組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）フラグメントであって、該フラグメントが、ｇＣのＣ３ｂ結合ドメイン、Ｃ３ｂのプロパージンへの結合を干渉するｇＣのプロパージン干渉ドメイン、若しくは、Ｃ３ｂのＣ５への結合を干渉するｇＣのＣ５干渉ドメイン、又は、前記Ｃ３ｂ結合ドメイン、前記プロパージン干渉ドメイン及び前記Ｃ５干渉ドメインのいずれかのフラグメントを含む、組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）フラグメントと、
アジュバントと
を含み、
ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ又はその免疫原性フラグメントを含まないことを特徴とするワクチン。
ワクチンであって、
ａ．組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）またはその免疫原性フラグメントと、
ｂ．組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）フラグメントであって、該フラグメントが、ｇＣのＣ３ｂ結合ドメイン、Ｃ３ｂのプロパージンへの結合を干渉するｇＣのプロパージン干渉ドメイン、若しくは、Ｃ３ｂのＣ５への結合を干渉するｇＣのＣ５干渉ドメイン、又は、前記Ｃ３ｂ結合ドメイン、前記プロパージン干渉ドメイン及び前記Ｃ５干渉ドメインのいずれかのフラグメントを含む、組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）フラグメントと
ｃ．組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）フラグメントであって、該フラグメントが配列番号５若しくは配列番号６に規定のｇＥの２４〜２２４若しくは２４〜４０９番目のアミノ酸残基を含む、組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）フラグメントと、
アジュバントと
を含み、
ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ又はその免疫原性フラグメントを含まないことを特徴とするワクチン。
ワクチンであって、
ａ．組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）またはその免疫原性フラグメントと、
ｂ．組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）フラグメントであって、該フラグメントが配列番号５若しくは配列番号６に規定のｇＥの２４〜２２４若しくは２４〜４０９番目のアミノ酸残基を含む、組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）フラグメントと、
アジュバントと
を含み、
ＨＳＶ糖タンパク質Ｂ又はその免疫原性フラグメントを含まないことを特徴とするワクチン。
前記組換えＨＳＶｇＣフラグメントが、１用量当たり０．５〜１００マイクログラムの量で存在することを特徴とする請求項１または２に記載のワクチン。
前記組換えＨＳＶｇＥフラグメントが、１用量当たり２〜１００マイクログラムの量で存在することを特徴とする請求項２または３に記載のワクチン。
前記組換えＨＳＶｇＤまたはその免疫原性フラグメントが、１用量当たり２〜５０マイクログラムの量で存在することを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載のワクチン。
前記アジュバントが、ＣｐＧ含有ヌクレオチド分子、アルミニウム塩アジュバント、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載のワクチン。
前記組換えＨＳＶ糖タンパク質が、組換えＨＳＶ−１タンパク質であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のワクチン。
前記組換えＨＳＶ糖タンパク質が、組換えＨＳＶ−２タンパク質であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のワクチン。
抗ＨＳＶ免疫応答を誘発するための組成物を準備するための請求項１〜９の何れかに記載のワクチンを製造するための前記組換えＨＳＶ糖タンパク質またはそのフラグメントと前記アジュバントとの使用。
ＨＳＶ感染を治療、抑制、阻害、または発生低減するための組成物を準備するための請求項１〜９の何れかに記載のワクチンを製造するための前記組換えＨＳＶ糖タンパク質またはそのフラグメントと前記アジュバントとの使用。
前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ−１感染であることを特徴とする請求項１１に記載の使用。
前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ−２感染であることを特徴とする請求項１１に記載の使用。
前記ＨＳＶ感染が、一次ＨＳＶ感染であることを特徴とする請求項１１〜１３のいずれかに記載の使用。
前記ＨＳＶ感染が、一次ＨＳＶ感染後の発赤、再発、または口唇ＨＳＶであることを特徴とする請求項１１〜１３のいずれかに記載の使用。
前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ脳炎であることを特徴とする請求項１１〜１５のいずれかに記載の使用。
前記ＨＳＶ感染が、ＨＳＶ新生児感染であることを特徴とする請求項１１〜１６のいずれかに記載の使用。
前記組成物が、ＨＩＶに感染している対象に使用されることを特徴とする請求項１１〜１７のいずれかに記載の使用。