CN101616688B - 单纯疱疹病毒联合亚单位疫苗及其使用方法 - Google Patents

单纯疱疹病毒联合亚单位疫苗及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供疫苗，所述疫苗包含两种或多种重组单纯疱疹病毒(HSV)蛋白质，所述蛋白质选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；并提供对对象进行抗HSV免疫接种的方法和用于治疗、阻止、抑制、压制HSV感染或其症状或表现或降低其发生率的方法，所述方法包括施用本发明的疫苗。

Description

单纯疱疹病毒联合亚单位疫苗及其使用方法
发明领域
本发明提供疫苗，所述疫苗包含两种或多种重组单纯疱疹病毒(HSV)蛋白质，所述蛋白质选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；并提供对对象进行抗HSV免疫接种以阻止其免疫逃避的方法和用于治疗、阻止、抑制、压制HSV感染或其症状或表现和/或降低其发生率的方法，所述方法包括施用本发明的疫苗。
发明背景
1型单纯疱疹病毒(HSV-1)和2型单纯疱疹病毒(HSV-2)是常见的人类病原体，引起多种临床疾病，包括口腔面部感染、生殖器疱疹、眼部感染、疱疹性脑炎和新生儿疱疹。HSV-1与非生殖器感染更加相关，且最常见的是在儿童期通过非性接触获得的。不过，在过去十年间，其已经成为生殖器疱疹的重要病因。HSV-2是绝大多数生殖器疱疹的病因。估计其在美国每年造成500,000人感染。尽管有多种治疗HSV疾病的抗病毒剂，但生殖器HSV-2感染仍旧是一个长期的问题，在美国，14-49岁个体中的血清阳性率为大约17％，而在南美洲和非洲的部分地区，血清阳性率更高。
现在迫切需要预防HSV-1和HSV-2原发性(初次)感染和预防HSV-1和HSV-2复发的方法。
单纯疱疹病毒还是人免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要风险因素。HSV-2血清阳性个体感染HIV的风险增加2倍。初次HSV-2感染之后的得病率最高，此时HSV-2的再活化最为频繁。以降低HSV感染为目的的治疗和疫苗策略可预防HIV的传播、获得以及疾病进展。
发明内容
本发明提供疫苗，其包含两种或多种重组单纯疱疹病毒(HSV)蛋白质，所述蛋白质选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用于对对象进行抗HSV免疫接种和治疗、阻止、抑制、压制HSV感染或其症状或表现或降低其发生率的方法，所述方法包括施用本发明的疫苗。在一个实施方式中，所述疫苗额外地包含佐剂。
在一个实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV gD蛋白或其片段；(b)重组HSV gC蛋白或其片段；(c)重组HSV gE蛋白或其片段；和(d)佐剂。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV gD蛋白或其片段；(b)重组HSV gC蛋白或其片段；和(c)佐剂。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV gD蛋白或其片段；(b)重组HSV gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。
在一个实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV gC蛋白或其片段；(b)重组HSV gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。
在一个实施方式中，每一所述重组HSV蛋白是重组HSV-1蛋白。在另一实施方式中，每一所述重组HSV蛋白是重组HSV-2蛋白。在另一实施方式中，所述重组HSV蛋白是重组HSV-1蛋白和重组HSV-2蛋白的混合物。
在另一实施方式中，本发明提供一种在对象中诱导抗HSV免疫应答的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供一种治疗、压制、抑制对象的HSV感染或降低HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在一个实施方式中，所述HSV感染是HSV-1感染。在一个实施方式中，所述HSV感染是HSV-2感染。在一个实施方式中，所述HSV感染是原发性HSV感染。在一个实施方式中，所述HSV感染是原发性HSV感染之后的潮红(flare)、复发(recurrence)或HSV唇疱疹(HSV labialis)。在一个实施方式中，所述HSV感染是HSV脑炎。在一个实施方式中，所述HSV感染是HSV新生儿感染。在一个实施方式中，所述对象感染了HIV。
附图说明
图1：玫瑰花结形成试验(Rosetting assay)检测阻断C3b结合HSV-1感染的细胞上的gC的抗体。(A)上方：测定C3b结合gC-1的玫瑰花结形成试验的示意图。HSV-1感染的Vero细胞在细胞表面表达gC，并结合C3b包被的绵羊红细胞，从而在感染的Vero细胞周围形成玫瑰花结。下方：阻断玫瑰花结形成的抗体的示意图。存在抗gC抗体时，C3b包被的红细胞不能结合gC，因此无玫瑰花结形成。(B)使用来自假免疫或gC-1免疫的小鼠的血清阻断C3b包被的红细胞形成玫瑰花结(+/-标准误)。
图2：对以侧腹部感染致死量的WT病毒进行攻击的gC-1免疫的小鼠进行疾病评分。小鼠被假免疫或以0.1、1或10μg的gC-1进行免疫。攻击后3至7天对免疫的小鼠的接种部位和带状疱疹样部位(zosteriform sites)的疾病严重程度进行评分。
图3：对免疫后再以侧腹部感染致死量的WT病毒进行攻击的小鼠进行疾病评分。小鼠被假免疫或以gD-1单独免疫或以gD-1和gC-1免疫。攻击后3至14天对小鼠的接种部位和带状疱疹样部位的疾病严重程度进行评分。
图4：免疫后再以致死量的WT病毒进行攻击的小鼠的存活率。小鼠被假免疫或以gD-1单独免疫或以gD-1和gC-1免疫。监测攻击后3-15天的存活率。
图5：自DRG回收病毒。小鼠被假免疫或以gD-1单独免疫或以gD-1和gC-1免疫。然后以致死量的HSV-1对各组进行攻击。收集后根神经节(DRG)并测定感染性病毒。
图6：抗gC-1IgG不中和HSV-1。通过3次肌肉注射(IM)5μg的gC-1与CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)的混合物免疫小鼠。第三次免疫后2周获取血清，在蛋白G柱上自小鼠血清纯化IgG并测试中和抗体活性。作为对照，使用抗gD1单克隆抗体DL11、抗gC-1单克隆抗体1C8(其结合gC-1上的与C3b相互作用并阻断C3b与HSV-1感染的细胞形成玫瑰花结的结构域)、和非免疫鼠IgG进行中和。将大约80PFU的HSV-1NS株与获取自免疫的小鼠的抗gC-1IgG或与DL11、1C8或非免疫鼠IgG温育1小时，37℃。通过在Vero细胞上进行噬斑分析而确定病毒效价。
图7：侧腹部感染5×105HSV-1之前24小时，对补体完好的小鼠(C57B1/6)或C3敲除小鼠(C3KO)用抗gC-1IgG(200μg小鼠)、1C8(200μg/小鼠)、或非免疫鼠IgG(200μg/小鼠)进行被动免疫。评价小鼠接种和带状疱疹样部位的疾病，评价进行11天。
图8：(A)免疫印迹分析HSV-2野生型和gC2-null感染的细胞的提取物中的gC2表达。以兔抗gC2抗体R81或作为上样对照的兔抗VP5对膜进行探测。(B至E)用正常人血清(NHS)中和HSV-1(NS)和HSV-2(G、333、和2.12)野生型和gC-null株。病毒与PBS(对照)或作为补体来源的指定浓度的NHS温育1小时，37℃。结果表示为PFU/ml(对照的％)并如下计算：(加NHS的PFU/加PBS的PFU)X 100。对于毒株G，结果代表4次独立实验的平均效价±标准差，对于毒株333、2.12和NS，结果代表3次实验的平均效价±标准差。比较野生型和gC-null病毒的曲线下面积(AUC)：毒株G为P＜0.0001，毒株333为P＜0.002，毒株2.12为P＜0.001，NS毒株为P＜0.05。
图9：(A)NHS、耗竭C1q的NHS(C1q耗竭)、和以C1q重建的耗竭C1q的血清(C1q耗竭+C1q)的总溶血补体活性。EA(包被IgM的绵羊红细胞)与血清温育并确定溶解的EA的百分数。(B)通过经典补体途径中和gC1-null和gC2-null病毒。以C1q耗竭的或C1q重建的20％NHS进行中和实验。所示结果代表三次独立实验的平均效价±标准差。比较热灭活的NHS与NHS或C1q-恢复血清之间的NS-gC1null和G-gC2null，P＜0.02。与此不同，比较热灭活的NHS与耗竭C1q的血清之间的NS-gC1null和G-gC2null，P＜0.23和0.86，没有显著性。
图10：在无针对HSV的特异性抗体的情况下，用来自4个供者的NHS中和HSV-1和HSV-2gC-null病毒。在与PBS、热灭活的NHS(无活性NHS)、或20％NHS温育的病毒上进行中和实验。4份血清样品标记为1到4。所示结果代表三次独立实验的平均效价±标准差。对于全部4份血清，比较PBS与NHS之间的NS-gC1null均P＜0.001，而对于G-gC2null病毒，P范围在0.006至＜0.001。与此不同，PBS与热灭活的NHS相比没有显著区别。
图11：对HSV-1和HSV-2gC-null病毒的中和依赖于C3活化。在使用PBS、20％NHS、或以无活性Compstatin(NHS+线性)或活性Compstatin(NHS+4W9A)处理的NHS处理的病毒上进行中和实验。对于NS-gC1null和G-gC2null，结果均代表三次独立实验的平均效价±标准差。对于这两种病毒，PBS与NHS之间(P＜0.01)和PBS与以无活性Compstatin处理的NHS之间(P＜0.05)均有显著区别。不过，在PBS与以活性Compstatin处理的NHS之间没有检测到显著的区别。
图12：(A)NHS、耗竭C5的NHS(C5耗竭)和C5-恢复血清(C5耗竭+C5)的总溶血补体活性。(B)gC1-null和gC2-null病毒的中和需要C5。病毒与PBS、20％NHS、20％耗竭C5的NHS(C5耗竭)、或C5-恢复血清(C5耗竭+C5)温育。结果表示为4次独立实验(NS-gC1null)和2次独立实验(G-gC2null)的平均效价±标准差。对于这两种病毒，NHS和C5-恢复的NHS与PBS相比，均P＜0.005。PBS与耗竭C5的NHS之间没有检测到显著区别。(C)NHS、耗竭C6的NHS(C6耗竭)、和C6-恢复血清(C6耗竭+C6)的总溶血补体活性。(D)对gC1-null或gC2-null病毒的中和不依赖于C6。在以PBS、20％NHS、耗竭C6的NHS(C6耗竭)、和C6-恢复血清(C6耗竭+C6)处理的病毒上进行中和测定。结果代表三次独立实验(NS-gC1null)和7次实验(G-gC2null)的平均效价±标准差。对于这两种病毒，PBS与NHS、耗竭C6的血清和C6重建的血清相比，均P＜0.01。
图13：(A)NHS和耗竭IgM的NHS(IgM耗竭)的总溶血补体活性。使用抗体包被的绵羊红细胞进行溶血试验来证明耗竭IgM的血清中的完全的经典补体途径。(B)中和HSV-1和HSV-2gC-null病毒需要天然IgM抗体。gC-null病毒与20％NHS、热灭活的NHS(无活性NHS)、20％耗竭IgM的NHS(IgM耗竭)、和IgM-恢复血清(IgM耗竭+IgM)温育。所示结果代表4次独立实验的平均效价±标准差。P＜0.05，比较IgM耗竭的血清与IgM重建的血清的NS-gC1null和G-gC2null。与此不同，比较PBS与耗竭IgM的血清之间的NS-gC1null和G-gC2null没有显著区别，P分别为0.83和0.31。(C至F)ELISA检测天然IgM抗体与gC2-null病毒的结合。将来自4个供者的热灭活的20％NHS系列稀释并加至微孔板的以G-gC2null包被的空或对照孔中。实验进行了两次，结果相似。给出了实验1的结果。
图14：鼠侧腹部模型的NS-gE264疾病。以5×105PFU的NS-gE264或拯救(rescue)NS-gE264感染小鼠，并在感染后3-7天对带状疱疹样疾病进行评分。(A)无被动转移IgG：NS-gE264引起与拯救病毒相当的疾病。(B)被动转移人抗HSV IgG：NS-gE264疾病评分显著低于拯救株(P＜.001)。(C)被动转移人非免疫IgG：NS-gE264与拯救株之间没有显著区别。N＝每组5只小鼠，例外是，对无IgG的NS-gE264，N＝10。
图15：感染后3和4天DRG的病毒效价。Balb/C在侧腹部接种105PFU的NS(WT)或5×105PFU的NS-gCδελταC3。分别测定来自各小鼠的DRG的效价。结果代表每组3只小鼠的平均值±SE。线代表检测下限(2PFU)。
图16：(A)在补体完好的小鼠中，2.12-gCnull的毒力低于2.12。HSV-2毒株2.12和2.12-gCnull以5×105PFU刮擦接种于补体完好的C57B1/6小鼠的侧腹部(n＝10)，感染后3-7天对疾病进行评分。2.12-gCnull在接种部位(左侧)和带状疱疹样部位(右侧)引起明显更少的疾病(P＜.001)。(B)在C3KO小 鼠中，2.12-gCnull的毒力与2.12一样。在C3KO小鼠中进行了相同的实验(n＝4)。在2.12-gCnull和2.12中没有检测到差异。误差线代表SD。
图17：在小鼠血清中测定到的针对诱导免疫原的抗体。结果代表以bac-gE片段免疫的5只小鼠或3只假免疫小鼠的平均值±标准误。
图18：结合gE并阻断生物素标记的非免疫人IgG结合于FcγR的鼠抗体和兔抗体。(A)感染的细胞与来自免疫的小鼠(n＝5/组)或假免疫对照(n＝3)的血清温育。通过流式细胞术评价血清(1∶10稀释)与感染细胞上的gE的结合。(B)将血清(未稀释)加至感染的细胞以阻断10μg生物素标记的非免疫人IgG的结合。短棒表示各组的中位值。
图19：对gD/gC免疫接种的抗gD抗体应答。单独用gD(前三个条形)或一起用gC与gD(置于同一注射器中)(后两个条形)免疫小鼠3次。结果显示，同时施用gC和gD减弱了对50ng gD的抗体应答。
图20：(A)如图19所示免疫小鼠，且对接受50ng gD和10μg gC的小鼠用50ng gD进行加强。对gD的抗体应答增强(最后一个条形)。(B)抗血清抑制C3b包被的红细胞形成玫瑰花结的能力。
图21：(A)对gC与佐剂CpG和铝盐的混合物进行免疫的ELISA抗体应答。(B)抗血清抑制C3b包被的红细胞形成玫瑰花结的能力。
图22：gC-2免疫的小鼠在侧腹部暴露于HSV-2后的存活率。Balb/C小鼠以0.5、1、2、或5μg的gC-2与CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)的混合物腓肠肌注射免疫或以CpG和铝盐但无gC-2假免疫，注射3次，间隔为两周。第三次免疫后14天，用4×105PFU的HSV-2毒株2.12在剔毛并化学脱毛的侧腹部刮擦接种对小鼠进行攻击。记录0-14天的存活率。
图23：gC-2免疫的小鼠侧腹部暴露于HSV-2之后在接种部位和带状疱疹样部位的疾病严重程度。如图22所示进行实验。以4×105PFU的HSV-2毒株2.12刮擦接种攻击之后，在3-14天对动物接种部位和带状疱疹样部位的疾病严重程度进行评分(N＝5只小鼠/组)。
图24：gC-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小鼠以腓肠肌注射CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)进行假免疫或注射1、2、或5μg的gC-2与CpG和铝盐的混合物进行免疫，间隔为两周。除了一组以5μg剂量免疫2次[标记为5μg(2x)]而另一组5只小鼠免疫3次[标记为5μg(3x)]之外，各组5只小鼠均免疫3次。第三次免疫后9天或5μg(2x)免疫之后23天，给小鼠腹腔内注射(IP)
Figure G2007800518606D00061
(2mg/小鼠)以同步化发情周期。5天后，通过阴道内施用2×105PFU的HSV-2毒株2.12对小鼠进行攻击。观察动物从0-14天的死亡率。
图25：gC-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的平均疾病评分。如图24所示进行实验。2×105PFU的HSV-2毒株2.12阴道内攻击之后，对动物在3-14天的疾病严重程度进行评分。
图26：gC-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的阴道HSV-2病毒效价。如图24所示进行实验。攻击后1-11天每日获取阴道拭子，并确定病毒效价。
图27：gD-2免疫的小鼠侧腹部暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小鼠被假免疫或以10、25、50、或100ng的gD-2与CpG(50μg小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)的混合物腓肠肌IM免疫3次。通过侧腹部接种4×105PFU/10ml的HSV-2毒株2.12攻击小鼠。
图28：gD-2免疫的小鼠侧腹部暴露于HSV-2之后的平均疾病评分。如图27所示进行实验。侧腹部接种4×105PFU/10ml的HSV-2毒株2.12之后，在3-14天对动物接种部位和带状疱疹样部位的疾病严重程度进行评分。
图29：gD-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小鼠以50、100、或250ng(3x)的gD-2IM免疫3次(3x)或以250ng的gD-2IM免疫2次(2x)。gD-2与CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)混合，然后如图24就gC-2所描述的那样接种。如图24就gC-2免疫所描述的那样用
Figure G2007800518606D00071
Figure G2007800518606D00072
处理小鼠并以2×105PFU的HSV-2毒株2.12进行攻击，并评价存活率和疾病严重程度。
图30：gD-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的平均疾病评分。如图29所示进行实验。以2×105PFU的HSV-2毒株2.12进行阴道内攻击之后，在3-14天对动物的疾病严重程度评分。
图31：gD-2免疫的小鼠阴道暴露于HSV-2之后的阴道HSV-2病毒效价。如图29所示进行实验。攻击后1-11天每日获取阴道拭子，各组3只小鼠。
图32：(A)维持HIV/HSV-1+/2-共感染的对象的补体水平。测定CD4T-细胞计数＜200/μl、200-500/μl、和＞500/μl的HIV阳性对象的血清总溶血补体活性(CH50)以及来自未感染HIV的对照的血清总溶血补体活性(CH50)。所示结果代表平均值+/-标准误(SE)。(B)仅抗体或抗体与补体中和HSV-1WT和gC/gE突变体病毒。WT或gC/gE突变体病毒与PBS、以EDTA处理以灭活补体的1％血清(标记为Ab)、或含有活性补体的1％血清(标记为Ab&C)温育1小时，37℃。
图33：gC/gE突变体病毒在病毒体表面表达的HSV-1糖蛋白的浓度类似于WT病毒或较其略高。通过免疫印迹和光密度分析法评价纯化的gC/gE突变体和WT病毒的VP5、gB、gC、gD、gE、gH/gL、和gI表达，以比较相对的糖蛋白浓度。
图34：HSV-1FcγR在抗体中和中的作用。(A)用于解释gC/gE突变体病毒更易被抗体单独中和的可能的模型。在WT病毒模型左侧，gE结合IgG的Fc结构域，防止F(ab′)2与抗原(在此显示的是gD)结合。在WT病毒模型的右侧，显示了抗体双极桥连(bipolar bridging)，其中Fab结构域结合gD，而同一IgG分子的Fc结构域结合gE。如果抗体的结合如所示的那样出现于WT病毒模型的左侧而非右侧，则HSV-1FcγR(由gE/gI组成)可防止某些F(ab′)2结构域与它们的靶抗原相互作用。在gC/gE突变体病毒的模型中，ΔgE不能结合IgG Fc结构域，使得F(ab′)2结构域结合抗原(显示为gD)并中和病毒。(B)无功能病毒FcγR无法解释为何gC/gE突变体病毒更易被抗体中和。病毒与来自HIV阴性供者的集合人IgG温育并确定中和的量。
图35：gC和gE免疫逃避结构域遮蔽关键的中和表位。(A)WT和gC/gE突变体病毒与针对gB，、gC、gD、gH/gL、或gL。所示结果代表以每一单独的抗体进行2-3次测定的中和(Log10)+/-SE。(B)WT和gC/gE突变体病毒与针对每一单独的糖蛋白的兔血清温育。所示结果代表对每一抗体进行2-3测定的中和+/-SE。
图36：抗糖蛋白免疫球蛋白结合HSV-1WT和gC/gE突变体病毒。(A)比较抗gD与gC/gE突变体和WT病毒的结合。(B)比较抗gB与gC/gE突变体和WT病毒的结合。(C)比较抗gH/gL与gC/gE突变体和WT病毒的结合。图A-C代表三次独立实验的平均值。误差线代表标准差。(D)鸡抗gD免疫球蛋白的结合。图D进行一次。
图37：表位遮掩模型。左侧，gC阻断gD上的表位，防止中和IgG抗体结合于WT病毒。右侧，突变体病毒上的gC不能阻断gD的表位，使得中和抗体能够结合。gE的表位遮蔽在图中没有显示；我们的发现支持类似的gE模型。
发明详述
本发明提供疫苗，其包含两种或多种重组单纯疱疹病毒(HSV)蛋白质，所述蛋白质选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用于对对象进行抗HSV免疫接种和治疗、阻止、抑制、压制HSV感染或其症状或表现或降低其发生率的方法，所述方法包括施用本发明的疫苗。在一个实施方式中，所述疫苗额外地包含佐剂。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含重组单纯疱疹病毒(HSV)gD蛋白和选自HSV gC蛋白和HSV gE蛋白中的至少一种的重组蛋白。在一个实施方式中，所述疫苗额外地包含佐剂。
在一个实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组单纯疱疹病毒-1(HSV-1)gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-1gC蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-1gC抗体，所述抗体阻断相应于所述重组HSV-1gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC和gD、或其片段联合免疫限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC或其片段免疫限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gD抗体。
在另一实施方式中，″HSV蛋白″指的是HSV-1或HSV-2蛋白。在另一实施方式中，″HSV蛋白″指的是HSV-1蛋白。在另一实施方式中，″HSV蛋白″指的是HSV-2蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gD蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gD蛋白的片段。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gC蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gC蛋白的片段。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gE蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-1gE蛋白的片段。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gD蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gD蛋白的片段。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gC蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gC蛋白的片段。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gE蛋白。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2gE蛋白的片段。在一个实施方式中，在此所提及的片段是免疫原性片段。在一个实施方式中，″免疫原性片段″指的是寡肽、多肽或蛋白质的一部分，其具有免疫原性且当施用于对象后引发保护性免疫应答。
在一个实施方式中，″免疫原性″或″具有免疫原性的″在此指的是当蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体被施用于动物时所述蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体在所述动物内引发免疫应答的固有能力。因此，在一个实施方式中，″增强免疫原性″指的是提高当蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体被施用于动物时所述蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体在所述动物内引发免疫应答的固有能力。在一个实施方式中，可通过如下方面衡量蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体引发免疫应答的能力的提高：更大量的针对蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体的抗体、更具多样性的针对抗原或生物体的抗体、更大量的特异于蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体的T细胞、针对蛋白质、肽、核酸、抗原或生物体的更强的细胞毒T细胞应答或辅助T细胞应答，等等。
在一个实施方式中，在此所使用的″功能性″一词在本发明中的含义是指蛋白质、肽、核酸、片段或其变体展现出生物学活性或功能的固有能力。在一个实施方式中，所述生物学功能是其与相互作用配偶体例如膜相关受体结合的结合特性，而在另一实施方式中，是其三聚化特性。对于本发明的功能性片段和功能性变体，这些生物学功能实际上可以改变，例如在其特异性或选择性方面发生改变，但保留基本的生物学功能。
从相关技术领域可获知众多用于测定蛋白质、多肽或分子的生物学活性的方法，例如蛋白质测定法，其使用标记的底物，通过层析法进行底物分析例如HPLC或薄层色谱、分光光度法等等。(见，例如，Maniatis et al.(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。
在一个实施方式中，在此所使用的术语″片段″指的是与全长蛋白质或多肽相比较短的或包含较少氨基酸的蛋白质或多肽。在另一实施方式中，片段指的是与全长核酸相比较短的或包含较少核苷酸的核酸。在另一实施方式中，所述片段是N-末端片段。在另一实施方式中，所述片段是C-末端片段。在一个实施方式中，所述片段是所述蛋白质、肽或核酸的内部序列节段。在另一实施方式中，所述片段是所述蛋白质、肽或核酸的免疫原性内部序列节段。在另一实施方式中，所述片段是所述蛋白质、肽或核酸的功能性内部序列节段。在另一实施方式中，所述片段是N-末端免疫原性片段。在一个实施方式中，所述片段是C-末端免疫原性片段。在另一实施方式中，所述片段是N-末端功能性片段。在另一实施方式中，所述片段是C-末端功能性片段。
因此，在一个实施方式中，本发明所述的蛋白质(例如gC-1、gC-2、gE-1、gE-2、gD-1、gD-2等等)的″免疫原性片段″指的是所述蛋白质的部分，在一个实施方式中，其具有免疫原性，而在另一实施方式中，当施用于对象后其引发保护性免疫应答。
在一个实施方式中，本发明的组合物和方法中所提及的任何HSV，在一个实施方式中，指的是HSV-1，而在另一实施方式中，指的是HSV-2，而在另一实施方式中，指的是HSV-1和HSV-2两者，而在另一实施方式中，指的是HSV-1或HSV-2。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组单纯疱疹病毒-2(HSV-2)gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-2gC蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-2gC抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-2gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC和gD、或其片段联合免疫限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gD抗体。
本发明所提供的gC-1亚单位疫苗可保护抵抗HSV-1感染(图2)。此外，在一个实施方式中，联合gC-1/gD-1疫苗赋予了比含有仅gD-1(图3)或仅gC-1的疫苗更优越的保护并减轻或预防后根神经节感染(图5)。此外，gC-2亚单位疫苗可保护抵抗HSV-2感染(图22-26)，且联合gC-2/gD-2疫苗赋予比含有仅gD-2或仅gC-2的疫苗更优越的保护。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-1gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-1gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-1gE抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-1gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gE片段包括gE的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gE和gD、或其片段联合免疫限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gE或其片段免疫，限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gD抗体。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-2gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-2gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-2gE抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-2gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gE片段包括gE的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gE和gD、或其片段联合免疫限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gE或其片段免疫，限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gD抗体。
本发明所提供的gE-1亚单位疫苗可保护抵抗HSV-1感染。此外，联合gE-1/gD-1疫苗赋予了比含有仅gD-1或仅gE-1的疫苗更优越的保护。此外，gE-2亚单位疫苗可保护抵抗HSV-2感染，而联合gE-2/gD-2疫苗赋予了比含有仅gD-2或仅gE-2的疫苗更优越的保护。
在另一实施方式中，gC和gE一起的免疫增效效应强于任一单独的效应。在另一实施方式中，gC和gE的免疫增效效应表现出协同性。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组单纯疱疹病毒-1(HSV-1)gC蛋白或其片段；(b)重组HSV-1gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-1gC抗体，所述抗体阻断相应于所述重组HSV-1gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC和gE、或其片段联合免疫限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主抗gE免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gE或其片段免疫，限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主抗gC免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gC抗体。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gE抗体。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组单纯疱疹病毒-2(HSV-2)gC蛋白或其片段；(b)重组HSV-2gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-2gC抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-2gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC和gE、或其片段联合免疫限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主抗gE免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gE或其片段免疫，限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主抗gC免疫应答的能力。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gC抗体。在另一实施方式中，所提及的宿主免疫应答包括由所述疫苗诱导的抗gE抗体。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-1gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-1gC蛋白或其片段；(c)重组HSV-1gE蛋白或其片段；和(d)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-1gC抗体，所述抗体阻断相应于所述重组HSV-1gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，施用所述疫苗引发抗HSV-1gE抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-1gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gE片段包括gE的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC、gD和gE、或其片段联合免疫限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了HSV-1在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，宿主免疫应答包含由所述疫苗诱导的抗gD抗体。在另一实施方式中，gC和gE、或其片段一起的免疫增效效应强于任一单独的效应。在另一实施方式中，gC和gE的免疫增效效应表现为协同性。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-2gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-2gC蛋白或其片段；(c)重组HSV-2gE蛋白或其片段；和(d)佐剂。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-2gC抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-2gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，给人类对象施用所述疫苗引发抗HSV-2gE抗体，所述抗体阻断相应于重组HSV-2gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一实施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gE片段包括gE的免疫逃避结构域。在另一实施方式中，以gC、gD和gE、或其片段联合免疫限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主免疫应答的能力。在另一实施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了HSV-2在后续攻击过程中逃避宿主抗gD免疫应答的能力。在另一实施方式中，宿主免疫应答包含由所述疫苗诱导的抗gD抗体。在另一实施方式中，gC和gE、或其片段一起的免疫增效效应强于任一单独的效应。在另一实施方式中，gC和gE、或其片段的免疫增效效应展现出协同性。
在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-1gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-1gC蛋白或其片段；或(c)重组HSV-1gE蛋白或其片段。在另一实施方式中，本发明提供疫苗，其包含：(a)重组HSV-2gD蛋白或其片段；(b)重组HSV-2gC蛋白或其片段；或(c)重组HSV-2gE蛋白或其片段。在一个实施方式中，所述疫苗还包含佐剂。
在另一实施方式中，本发明的疫苗包括重组HSV-1gD蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-1gD蛋白的片段。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gD蛋白片段是免疫原性片段。在另一实施方式中，gD免疫保护性抗原不需要是整个蛋白。在另一实施方式中，保护性免疫应答通常包括抗体应答。在另一实施方式中，gD的突变体、序列保守性变体、和功能保守性变体可用于本发明的方法和组合物，条件是所有此类变体保留了所需的免疫保护效应。
在另一实施方式中，免疫原性片段可包含来自任何HSV毒株的免疫保护性gD抗原。在另一实施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列变体，如被感染个体中的那些变体。
在一个实施方式中，免疫原性多肽也具有抗原性。″抗原性″指的是，在另一实施方式中，能够与免疫系统的抗原识别分子，如免疫球蛋白(抗体)或T细胞抗原受体，特异性相互作用的肽。在另一实施方式中，抗原性肽含有表位，其长度为至少大约8个氨基酸(AA)。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约9个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约10个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约11个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约12个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约15个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约20个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约25个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约30个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约40个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约50个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约70个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约100个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约150个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约200个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约250个AA。在另一实施方式中，该术语所指的肽具有至少大约300个AA。在某些实施方式中，所述肽的上限为20、25、30、40、50、70、100、150、200、250或300个AA。多肽的抗原性部分在此也称为表位，在一个实施方式中，其可以是对抗体或T细胞受体识别具有免疫显性的部分，或其可以是用于产生针对该分子的抗体的部分，可通过将所述抗原性部分缀合于载体多肽进行免疫而产生所述抗体。具有抗原性的分子其本身不一定具有免疫原性，具有免疫原性是指能够在无载体的情况下引发免疫应答。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的所述gD蛋白片段是gD-1片段。在另一实施方式中，所述gD-1片段由gD-1胞外结构域(ectodomain)组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段包含gD-1胞外结构域。在另一实施方式中，所述gD-1片段由gD-1胞外结构域的片段组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段包含gD-1胞外结构域的片段。在另一实施方式中，所述gD-1片段是本领域已知的任何其他gD-1片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gD-1蛋白具有以下序列：
MGGAAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKLADPNRFRRKDLPVLDQLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGASEDVRKQPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPPSACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPELSETPNATQPELAPEAPEDSALLEDPVGTVAPQIPPNWHIPSIQDAATPYHPPATPNNMGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMRRRTQKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPLFY(SEQ ID No：1)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gD-1是SEQ ID No：1的同源物。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是SEQ ID No：1的异构体。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是SEQ ID No：1的变体。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是SEQ ID No：1的片段。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是SEQ ID No：1的异构体的片段。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是SEQ ID No：1的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gD-1的核酸序列在GenBank条目中给出，登录号如下：NC_001806、X14112、E03111、E03023、E02509、E00402、E00401、E00395、AF487902、AF487901、AF293614、L09242、J02217、L09244、L09245、和L09243。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述gD-1蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-306位氨基酸(AA)组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第36-296位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第46-286位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第56-276位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第66-266位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第76-256位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第86-246位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第96-236位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第106-226位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第116-216位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第126-206位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第136-196位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-286位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-266位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-246位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-206位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-166位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-126位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第26-106位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第46-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第66-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第86-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第106-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第126-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第146-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第166-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第186-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-1片段由大约第206-306位AA组成。在替代性实施方式中，所述gD-1片段包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中使用HSV-1gD AA序列。在另一实施方式中，使用HSV-1gD蛋白或肽。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的所述gD蛋白片段是gD-2片段。在另一实施方式中，所述gD-2片段由gD-2胞外结构域组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段包含gD-2胞外结构域。在另一实施方式中，所述gD-2片段由gD-2胞外结构域的片段组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段包含gD-2胞外结构域的片段。在另一实施方式中，所述gD-2片段本领域已知的任何其他gD-2片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gD-2具有以下序列：
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRVVCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVLDQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQIVRGASDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPPAACLTSKAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPELSDTTNATQPELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPGLIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHQPLFY(SEQ ID No：2)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gD-2是SEQ ID No：2的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：2的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：2的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：2的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ IDNo：2的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：2的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gD-2的核酸序列在GenBank中给出，登录号如下：NC_001798、E00205、Z86099、AY779754、AY779753、AY779752、AY779751、AY779750、AY517492、AY155225、和K01408。在另一实施方式中，所述gD-2蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第36-296位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第46-286位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第56-276位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第66-266位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第76-256位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第86-246位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第96-236位AA组成。在另一实施方式中，所述片段由大约第106-226位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第116-216位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第126-206位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第136-196位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-286位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-266位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-246位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-206位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-166位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-126位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第26-106位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第46-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第66-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第86-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第106-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第126-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第146-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第166-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第186-306位AA组成。在另一实施方式中，所述gD-2片段由大约第206-306位AA组成。在替代性实施方式中，所述gD-2片段包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述重组gD蛋白或其片段引发的抗体抑制gD与细胞受体的结合。在另一实施方式中，所述受体是疱疹病毒进入介导物A(HveA/HVEM)。在另一实施方式中，所述受体是柄蛋白-1(HveC)。在另一实施方式中，所述受体是柄蛋白-2(HveB)。在另一实施方式中，所述受体是修饰型的硫酸乙酰肝素。在另一实施方式中，所述受体是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。在另一实施方式中，所述受体是本领域已知的任何其他gD受体。
在另一实施方式中，所述重组gD蛋白或其片段包括AA 26-57。在另一实施方式中，因纳入这些残基而引发的抗体抑制与HVEM的结合。在另一实施方式中，所述gD蛋白或片段包括Y63。在另一实施方式中，所述gD蛋白或片段包括R159。在另一实施方式中，所述gD蛋白或片段包括D240。在另一实施方式中，所述gD蛋白或片段包括P246。在另一实施方式中，所述重组gD蛋白或片段包括选自Y63、R159、D240、和P246的残基。在另一实施方式中，因纳入这些残基之一而引发的抗体抑制与柄蛋白-1的结合。
上述对gD AA残基的命名法包括信号序列的残基。因此，成熟蛋白质的第一个残基称为第″26″位。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中使用HSV-2gD AA序列。在另一实施方式中，使用HSV-2gD蛋白或肽。
每一重组gD-1和gD-2蛋白或其片段代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明的疫苗包括重组HSV-1gC蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-1gC蛋白的片段。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-1具有以下序列：
MAPGRVGLAVVLWGLLWLGAGVAGGSETASTGPTITAGAVTNASEAPTSGSPGSAASPEVTPTSTPNPNNVTQNKTTPTEPASPPTTPKPTSTPKSPPTSTPDPKPKNNTTPAKSGRPTKPPGPVWCDRRDPLARYGSRVQIRCRFRNSTRMEFRLQIWRYSMGPSPPIAPAPDLEEVLTNITAPPGGLLVYDSAPNLTDPHVLWAEGAGPGADPPLYSVTGPLPTQRLIIGEVTPATQGMYYLAWGRMDSPHEYGTWVRVRMFRPPSLTLQPHAVMEGQPFKATCTAAAYYPRNPVEFDWFEDDRQVFNPGQIDTQTHEHPDGFTTVSTVTSEAVGGQVPPRTFTCQMTWHRDSVTFSRRNATGLALVLPRPTITMEFGVRHVVCTAGCVPEGVTFAWFLGDDPSPAAKSAVTAQESCDHPGLATVRSTLPISYDYSEYICRLTGYPAGIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQVIEAIEWVGIGIGVLAAGVLVVTAIVYVVRTSQSRQRHRR(SEQ ID No：3)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-1是SEQ ID No：3的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：3的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：3的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：3的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ IDNo：3的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：3的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gC-1的核酸序列在GenBank中给出，登录号如下：NCJ301806、X14112、AJ421509、AJ421508、AJ421507、AJ421506、AJ421505、AJ421504、AJ421503、AJ421502、AJ421501、AJ421500、AJ421499、AJ421498、AJ421497、AJ421496、AJ421495、AJ421494、AJ421493、AJ421492、AJ421491、AJ421490、AJ421489、AJ421488、和AJ421487。在另一实施方式中，所述gC-1蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-2蛋白具有以下序列：
MALGRVGLAVGLWGLLWVGVVVVLANASPGRTITVGPRGNASNAAPSASPRNASAPRTTPTPPQPRKATKSKASTAKPAPPPKTGPPKTSSEPVRCNRHDPLARYGSRVQIRCRFPNSTRTEFRLQIWRYATATDAEIGTAPSLEEVMVNVSAPPGGQLVYDSAPNRTDPHVIWAEGAGPGASPRLYSVVGPLGRQRLIIEELTLETQGMYYWVWGRTDRPSAYGTWVRVRVFRPPSLTIHPHAVLEGQPFKATCTAATYYPGNRAEFVWFEDGRRVFDPAQIHTQTQENPDGFSTVSTVTSAAVGGQGPPRTFTCQLTWHRDSVSFSRRNASGTASVLPRPTITMEFTGDHAVCTAGCVPEGVTFAWFLGDDSSPAEKVAVASQTSCGRPGTATIRSTLPVSYEQTEYICRLAGYPDGIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQVIRAVEGAGIGVAVLVAVVLAGTAVVYLTHASSVRYRRLR(SEQ ID NO：4)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-2蛋白是SEQ ID No：4的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：4的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：4的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：4的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：4的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：4的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gC-2蛋白的核酸序列在GenBank中给出，登录号如下：NC_001798、Z86099、M 10053、AJ297389、AF021341、U12179、U12177、U12176和U12178。在另一实施方式中，所述gC-2蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC蛋白片段是免疫原性片段。在另一实施方式中，gC免疫保护性抗原不需要是整个蛋白。在另一实施方式中，保护性免疫应答通常包括抗体应答。在另一实施方式中，gC的突变体、序列保守性变体、和功能保守性变体可用于本发明的方法和组合物，条件是所有此类变体保留了所需的免疫保护效应。
在另一实施方式中，免疫原性片段可包含来自任何HSV毒株的免疫保护性gC抗原。在另一实施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列变体，如被感染个体中的那些变体。
在另一实施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避结构域的一部分。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是gC免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是gC免疫逃避结构域的一部分。在另一实施方式中，使用HSV-1gC AA序列。在另一实施方式中，使用HSV-1gC蛋白或肽。
在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是C3b结合结构域。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是C3b结合结构域的一部分。在另一实施方式中，″C3b结合结构域″指的是介导gC与宿主C3b分子结合的结构域。在另一实施方式中，该术语指的是介导gC与宿主C3b分子相互作用的结构域。
在另一实施方式中，(例如在gC-1的情况中)，所述gC结构域大致由AA26-457组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 46-457组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 66-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 86-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 106-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 126-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 146-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 166-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 186-457。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 206-457。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 226-457组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 246-457组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-447。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-437。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-427。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-417。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-407。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-387。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-367。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-347。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-327。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-307。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-287。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 26-267。在另一实施方式中，所述范围大致为AA26-247。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 36-447。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 46-437。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 56-427。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 66-417。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 76-407。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 86-397。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 96-387。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 106-377。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 116-367。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 126-357。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 136-347。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 147-337。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 124-366组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 124-137组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA223-246。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 276-292。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 339-366。在替代性实施方式中，所述gC结构域包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述范围大致为AA 124-246。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 124-292。在另一实施方式中，所述范围大致为AA223-292。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 223-366。在另一实施方式中，所述gC结构域选自AA 124-137、223-246、276-292和339-366。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 124-137和223-246。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 124-137和276-292。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 124-137和339-366。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 223-246和276-292。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 223-246和339-366。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 276-292和339-366。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 124-137、223-246和276-292。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 124-137、223-246和339-366。在另一实施方式中，所述gC结构域选自AA 124-137、276-292和339-366。在另一实施方式中，所述gC结构域选自AA 223-246、276-292和339-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 164-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 204-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 244-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 124-326。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 124-286。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 124-246。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 204-326。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 244-326。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 204-286。在替代性实施方式中，所述范围包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述gC-1蛋白以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，上述gC-1片段之一以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，所述标签是组氨酸(″His″)标签。在另一实施方式中，所述His标签由5个组氨酸残基组成。在另一实施方式中，所述His标签由6个组氨酸残基组成。在另一实施方式中，所述His标签由另一数量的组氨酸残基组成。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-1片段是以His标签修饰的AA 26-457。
在另一实施方式中，(例如对于gC-2)，所述gC结构域大致由AA 27-426组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 47-426组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 67-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 87-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 107-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 127-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA147-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 167-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 187-426。在另一实施方式中，所述范围大致为AA207-426。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 227-426组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 247-426组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-406。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-386。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-346。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-326。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-306。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-286。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-266。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 27-246。在另一实施方式中，所述范围大致为AA37-416。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 47-406。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 57-396。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 67-386。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 77-376。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 87-366。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 97-356。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 107-346。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 117-326。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 127-316。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 137-306。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 147-296。在替代性实施方式中，所述gC结构域包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 102-107组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 222-279组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 307-379组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 94-355。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 222-379。在另一实施方式中，所述gC结构域选自AA 102-107、222-279和307-379。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 102-107和222-279。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 102-107和307-379。在另一实施方式中，所述结构域选自AA 222-279和307-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA122-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 142-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 162-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA182-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 202-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 222-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA242-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-359。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-339。在另一实施方式中，所述范围大致为AA102-319。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-299。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA102-259。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 102-239。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 112-369。在另一实施方式中，所述范围大致为AA122-359。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 132-349。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 142-339。在另一实施方式中，所述范围大致为AA152-329。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 162-319。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 172-309。在另一实施方式中，所述范围大致为AA182-299。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 192-289。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 202-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA232-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 242-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 252-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA262-279。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 222-269。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 222-259。在另一实施方式中，所述范围大致为AA222-249。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 222-239。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 227-274组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 232-269组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 237-264组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 242-259组成。在另一实施方式中，所述结构域大致由AA 307-379组成。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 317-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 327-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 337-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 347-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 357-379。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 307-369。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 307-359。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 307-349。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 307-339。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 307-329。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 312-374。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 317-369。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 322-364。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 327-359。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 332-354。在另一实施方式中，所述范围大致为AA 337-349。在替代性实施方式中，所述gC结构域包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述gC-2蛋白以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，上述gC-2片段之一以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，所述标签是组氨酸(″His″)标签。在另一实施方式中，所述His标签由5个组氨酸残基组成。在另一实施方式中，所述His标签由6个组氨酸残基组成。在另一实施方式中，所述His标签由另一数量的组氨酸残基组成。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gC-2片段是以His标签修饰的AA 27-426。
在另一实施方式中，所述gC结构域是本领域已知的介导gC结合宿主C3b分子或介导与宿主C3b分子的相互作用的任何其他gC结构域。
在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是备解素干扰结构域。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是备解素干扰结构域的一部分。在另一实施方式中，″备解素-干扰结构域″指的是阻断或抑制宿主C3b分子与宿主备解素分子结合的结构域。在另一实施方式中，该术语指的是阻断或抑制宿主C3b分子与宿主备解素分子相互作用的结构域。在另一实施方式中，(例如对于gC-1)，所述gC结构域大致由AA 33-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-73组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-83组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-93组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-103组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-113组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 33-123组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 43-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 53-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 63-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 73-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 83-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 93-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 103-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域大致由AA 43-93组成。在替代性实施方式中，所述gC结构域包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，所述gC结构域是本领域已知的干扰宿主C3b分子与宿主备解素分子结合的任何其他gC结构域。
在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是C5干扰结构域。在另一实施方式中，所述gC蛋白片段是C5干扰结构域的一部分。在另一实施方式中，″C5干扰结构域″指的是干扰宿主C3b分子结合宿主C5分子的结构域。在另一实施方式中，该术语指的是干扰宿主C3b分子与宿主C5分子相互作用的结构域。在另一实施方式中，(例如对于gC-1)，所述gC结构域大致由AA 33-133组成。在另一实施方式中，所述gC结构域是本领域已知的干扰或抑制宿主C3b分子结合或与宿主C5分子相互作用的任何其他gC结构域。
每一重组gC-1或gC-2蛋白或其片段代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明的疫苗包含重组HSV-1gE蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-1gE蛋白的片段。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gE蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-2gE蛋白的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE-1蛋白具有以下序列：
MDRGAVVGFLLGVCVVSCLAGTPKTSWRRVSVGEDVSLLPAPGPTGRGPTQKLLWAVEPLDGCGPLHPSWVSLMPPKQVPETVVDAACMRAPVPLAMAYAPPAPSATGGLRTDFVWQERAAVVNRSLVIYGVRETDSGLYTLSVGDIKDPARQVASVVLVVQPAPVPTPPPTPADYDEDDNDEGEGEDESLAGTPASGTPRLPPSPAPPRSWPSAPEVSHVRGVTVRMETPEAILFSPGEAFSTNVSIHAIAHDDQTYTMDVVWLRFDVPTSCAEMRIYESCLYHPQLPECLSPADAPCAASTWTSRLAVRSYAGCSRTNPPPRCSAEAHMEPFPGLAWQAASVNLEFRDASPQHSGLYLCVVYVNDHIHAWGHITINTAAQYRNAVVEQPLPQRGADLAEPTHPHVGAPPHAPPTHGALRLGAVMGAALLLSALGLSVWACMTCWRRRAWRAVKSRASGKGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDQVPWLAPPERPDSPSTNGSGFEILSPTAPSVYPRSDGHQSRRQLTTFGSGRPDRRYSQASDSSVFW(SEQ ID No：5)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE-1蛋白是SEQ ID No：5的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：5的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：5的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：5的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：5的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：5的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gE-1蛋白的核酸序列在GenBank中给出，登录号如下：NC_001806、X14112、DQ889502、X02138和AJ626469-AJ626498之一。在另一实施方式中，所述gE-1蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE-2蛋白具有以下序列：
MARGAGLVFFVGVWVVSCLAAAPRTSWKRVTSGEDVVLLPAPAERTRAHKLLWAAEPLDACGPLRPSWVALWPPRRVLETVVDAACMRAPEPLAIAYSPPFPAGDEGLYSELAWRDRVAVVNESLVIYGALETDSGLYTLSVVGLSDEARQVASVVLVVEPAPVPTPTPDDYDEEDDAGVTNARRSAFPPQPPPRRPPVAPPTHPRVIPEVSHVRGVTVHMETLEAILFAPGETFGTNVSIHAIAHDDGPYAMDVVWMRFDVPSSCADMRIYEACLYHPQLPECLSPADAPCAVSSWAYRLAVRSYAGCSRTTPPPRCFAEARMEPVPGLAWLASTVNLEFQHASPQHAGLYLCVVYVDDHIHAWGHMTISTAAQYRNAVVEQHLPQRQPEPVEPTRPHVRAPHPAPSARGPLRLGAVLGAALLLAALGLSAWACMTCWRRRSWRAVKSRASATGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDGSLWQDPPERPDSPSTNGSGFEILSPTAPSVYPHSEGRKSRRPLTTFGSGSPGRRHSQASYPSVLW(SEQ ID NO：6)。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE-2蛋白是SEQ ID No：6的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：6的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：6的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：6的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：6的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是SEQ ID No：6的变体的片段。
在另一实施方式中，编码本发明的方法和组合物中所用的gE-2蛋白的核酸序列在GenBank中给出，登录号如下：NC_001798、Z86099、D00026、X04798和M 14886。在另一实施方式中，所述gE-2蛋白由具有上述GenBank条目之一所示序列的核苷酸分子编码。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的同源物。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的异构体的片段。在另一实施方式中，所述蛋白是上述GenBank条目之一所示序列编码的蛋白质的变体的片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE片段包含gE蛋白的IgG Fc结合结构域。在另一实施方式中，所述gE片段包含AA 24-224。在另一实施方式中，所述gE片段包含AA 24-224的一部分。在另一实施方式中，所述部分足以引发阻断gE蛋白的IgG Fc结合结构域造成的免疫逃避的抗体。
在另一实施方式中，所述gE片段包含gE IgG Fc结合结构域的一部分。在另一实施方式中，(例如对于gE-1)，所述gE结构域由大约第24-409位AA组成。在另一实施方式中，所述结构域由大约24-224组成。在替代性实施方式中，所述gE结构域包含或基本上由任何上述氨基酸残基范围组成。
在另一实施方式中，所述范围是大约AA 34-399。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 54-379。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 74-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 94-339。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 114-319。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 134-299。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 154-279。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 54-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 84-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 114-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 144-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 174-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 204-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 234-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-389。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-369。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-349。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-329。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-309。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-289。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-269。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-249。在另一实施方式中，所述范围是大约AA24-229。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-209。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 24-189。在替代性实施方式中，所述gE结构域包含或基本上由任何上述氨基酸残基范围组成。
在另一实施方式中，所述范围是大约223-396。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 230-390。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 245-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 255-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 265-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 275-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 285-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 295-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 305-380。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-370。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-370。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-360。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-350。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-340。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-330。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-320。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-310。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 235-300。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 322-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 327-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 332-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 337-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 322-354。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 322-349。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 322-344。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 327-354。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 332-349。在另一实施方式中，所述gE结构域包括AA 380。在替代性实施方式中，所述gE结构域包含或基本上由任何上述氨基酸残基范围组成。
在另一实施方式中，所述gE蛋白以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，上述gE片段之一以抗原性标签修饰。在另一实施方式中，所述标签是组氨酸(″His″)标签。在另一实施方式中，所述His标签由5-6个组氨酸残基组成。在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE片段大致是AA 24-409，其C末端为6His标签。
在另一实施方式中，(例如对于gE-2)，所述gE结构域大致由AA 218-391组成。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 223-386。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-280。在另一实施方式中，所述范围是大约AA230-375。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 238-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA248-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 258-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 268-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA278-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 288-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 298-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA308-373。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-363。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-353。在另一实施方式中，所述范围是大约AA228-343。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-333。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-323。在另一实施方式中，所述范围是大约AA228-313。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 228-303。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 238-363。在另一实施方式中，所述范围是大约AA248-353。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 258-343。在另一实施方式中，所述gE范围是大约AA 315-352。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 320-352。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 325-352。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 330-352。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 335-352。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 315-347。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 315-342。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 315-337。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 315-332。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 320-347。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 325-347。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 320-342。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 325-342。在另一实施方式中，所述gE结构域包括AA 373。在替代性实施方式中，所述gE结构域包含或基本上由任何上述氨基酸残基范围组成。
在另一实施方式中，所述gE结构域是本领域已知的介导结合IgG Fc的任何其他gE结构域。
在另一实施方式中，所述gE蛋白包含参与细胞间播散的gE结构域。在另一实施方式中，所述gE结构域大致由AA 256-291组成。在另一实施方式中，所述gE结构域大致由AA 348-380组成。在另一实施方式中，所述gE结构域包括AA 380。在另一实施方式中，所述gE结构域是本领域已知的参与细胞间播散的任何其他gE结构域。在另一实施方式中，已知所述gE结构域促进细胞间播散。在另一实施方式中，已知所述gE结构域是细胞间播散所需的。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的gE片段是免疫原性片段。在另一实施方式中，″免疫原性片段″指的是gE的一部分，其具有免疫原性且当施用于对象后引发保护性免疫应答。在另一实施方式中，gE免疫保护性抗原不需要是整个蛋白。在另一实施方式中，保护性免疫应答通常包括抗体应答。在另一实施方式中，gE的突变体、序列保守性变体、和功能保守性变体可用于本发明的方法和组合物，条件是所有此类变体保留了所需的免疫保护效应。
在另一实施方式中，免疫原性片段可包含来自任何HSV毒株的免疫保护性gE抗原。在另一实施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列变体，如被感染个体中的那些变体。
在另一实施方式中，所述gE片段包含免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gE片段包含免疫逃避结构域的一部分。在另一实施方式中，所述gE片段是免疫逃避结构域。在另一实施方式中，所述gE片段是免疫逃避结构域的一部分。在另一实施方式中，使用HSV-1gE AA序列。在另一实施方式中，使用HSV-1gE蛋白或肽。
在另一实施方式中，(例如对于gE-1)，所述gE蛋白片段由大约组成AA21-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 31-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 41-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 61-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 81-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 101-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 121-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 141-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 161-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 181-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 201-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 221-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 241-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 261-419。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-399。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-379。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-339。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-319。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-299。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-279。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-259。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-239。在另一实施方式中，所述范围是大约AA21-219。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-199。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-179。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-159。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 21-139。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 31-409。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 41-399。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 51-389。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 61-379。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 71-369。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 81-359。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 91-349。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 101-339。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 111-329。在另一实施方式中，所述范围是大约AA121-319。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 131-309。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 141-299。在另一实施方式中，所述范围是大约AA151-279。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 161-269。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 171-259。在另一实施方式中，所述范围是大约AA181-249。在另一实施方式中，所述范围是大约AA 191-239。在替代性实施方式中，所述gE蛋白片段包含或基本上由任何所述氨基酸残基组成。
在另一实施方式中，(例如对于gE-2)，所述gE蛋白片段由大约AA 21-416组成。在另一实施方式中，所述范围是前述段落中所提及的任何范围。
每一重组gE-1或gE-2蛋白或其片段代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，″免疫逃避结构域″指的是结构域干扰或降低抗HSV抗体(例如抗gD抗体)的体内抗HSV效力。在另一实施方式中，所述结构域干扰或降低抗HSV免疫应答的体内抗HSV效力。在另一实施方式中，所述结构域在后续感染过程中降低HSV蛋白(例如gD)的免疫原性。在另一实施方式中，所述结构域在后续攻击过程中降低HSV蛋白的免疫原性。在另一实施方式中，所述结构域在后续攻击过程中降低HSV的免疫原性。在另一实施方式中，所述结构域在正在发生的HSV感染中降低HSV蛋白的免疫原性。在另一实施方式中，所述结构域在正在发生的HSV感染中降低HSV的免疫原性。
本发明还提供HSV蛋白或多肽或其片段的类似物。类似物与天然存在的蛋白或肽的不同之处在于保守性氨基酸序列取代或不影响序列的修饰或两者。
例如，可进行保守性氨基酸改变，所述改变虽然改变了蛋白或肽的初级序列，但不改变其功能。保守性氨基酸取代典型地包括以下各组中的取代：(a)甘氨酸、丙氨酸；(b)缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；(c)天冬氨酸、谷氨酸；(d)天冬酰胺、谷氨酰胺；(e)丝氨酸、苏氨酸；(f)赖氨酸、精氨酸；(g)苯丙氨酸、酪氨酸。
修饰(通常不改变初级序列)包括多肽的体内或体外的化学衍生化例如，乙酰化或羧化。还包括糖基化修饰，例如，通过在多肽的合成和加工或进一步的加工步骤中改变多肽的糖基化模式而形成的修饰；例如，通过将多肽暴露于影响糖基化的酶，例如，哺乳动物糖基化酶或去糖基化酶。还包括具有磷酸化氨基酸残基的序列，例如，磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸、或磷酸苏氨酸。
还包括采用普通分子生物学技术修饰的多肽，以便提高其对蛋白降解的抗性或优化其溶解性或使之更适合于作为治疗剂。此类多肽的类似物包括那些含有不同于天然存在的L-氨基酸的残基的多肽，例如，D-氨基酸或非天然存在的合成氨基酸。本发明的肽不限于本文所列的具体示例性方法的产物。
在一个实施方式中，本发明的疫苗包含佐剂，而在另一实施方式中，所述疫苗包含佐剂。在另一实施方式中，″佐剂″指的是这样的化合物，当其被施用于个体或在体外测试时，其在施用抗原的所述个体或测试系统中增强对所述抗原的免疫应答。在另一实施方式中，免疫佐剂增强针对如下抗原的免疫应答，所述抗原当单独施用时具有弱免疫原性，即所述抗原不诱导或诱导弱抗体效价或细胞介导的免疫应答。在另一实施方式中，所述佐剂升高对抗原的抗体效价。在另一实施方式中，所述佐剂降低在个体中有效产生免疫应答的抗原的量。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物中所用的佐剂是含CpG的核苷酸序列。在另一实施方式中，所述佐剂是含CpG的寡核苷酸。在另一实施方式中，所述佐剂是含CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)。在另一实施方式中，所述佐剂是ODN 1826，在一个实施方式中，其获自Coley PharmaceuticalGroup。
在另一实施方式中，″含CpG的核苷酸″、″含CpG的寡核苷酸″、″CpG寡核苷酸″和类似术语指的是长度为8-50个核苷酸的核苷酸分子，其含有非甲基化的CpG部分。在另一实施方式中，其意欲包括所述术语在本领域已知的任何其他定义。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的含CpG的寡核苷酸是修饰的寡核苷酸。在另一实施方式中，″修饰的寡核苷酸″指的是其中至少两个其核苷酸通过合成的核苷间连键(即，5’端的一个核苷酸和3’端的另一个核苷酸之间的不同于磷酸二酯键的连键)共价相连的寡核苷酸。在另一实施方式中，将通常不与核酸相关联的化学基团共价附着于所述寡核苷酸。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是硫代磷酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是膦酸烷基酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是二硫代磷酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是磷酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是烷基硫代磷酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是氨基磷酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是氨基甲酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是碳酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是磷酸三酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是乙酰亚胺酯连键(acetamidatelinkage)。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是甲基羧酸酯键。在另一实施方式中，所述合成的核苷间连键是肽键.
在另一实施方式中，术语″修饰的寡核苷酸″指的是具有共价修饰的碱基和/或糖的寡核苷酸。在另一实施方式中，修饰的寡核苷酸包括具有在3’位置共价附着于除羟基以外的其他低分子量有机基团而在5’位置共价附着于除磷酸基团以外的其他低分子量有机基团的主链糖的寡核苷酸。在另一实施方式中，修饰的寡核苷酸包括′-O-烷基化核糖基。在另一实施方式中，修饰的寡核苷酸包括非核糖的糖，例如阿拉伯糖。在另一实施方式中，修饰的寡核苷酸包括鼠TLR9多肽连同药用可接受载体。
在另一实施方式中，所述含CpG的寡核苷酸是双链的。在另一实施方式中，所述含CpG的寡核苷酸是单链的。在另一实施方式中，″核酸″和″寡核苷酸″指的是多个核苷酸，即，包含连接于磷酸基团和可替换的有机碱基的糖(例如核糖或脱氧核糖)的分子，所述有机碱基是取代的嘧啶(例如胞嘧啶(C)，胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))或取代的嘌呤(例如腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G))或修饰的碱基。在另一实施方式中，所述术语指的是寡核糖核苷酸以及寡脱氧核糖核苷酸。在另一实施方式中，所述术语包括多核苷(即，多核苷酸去掉磷酸)和其他任何含有机碱基的聚合物。在另一实施方式中，所述术语涵盖本文所述的具有共价修饰的碱基和/或糖的核酸或寡核苷酸。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的含CpG的寡核苷酸包含取代的嘌呤和嘧啶。在另一实施方式中，所述寡核苷酸包含标准的嘌呤和嘧啶例如胞嘧啶以及碱基类似物，例如C-5丙炔取代的碱基。Wagner R W et al，NatBiotechnol 14：840-844(1996)。在另一实施方式中，嘌呤和嘧啶包括但不限于腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、次黄嘌呤、和其他天然存在的和非天然存在的核碱基、取代的和非取代的芳香族部分。在另一实施方式中，含CpG的寡核苷酸连接于碱基或核苷酸的聚合物。在另一实施方式中，″连接″指的是通过任何物理化学方式彼此结合的两个实体。
在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是7909，在一个实施方式中，其是5′TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2216，在一个实施方式中，其是5′GGGGGACGATCGTCGGGGGG。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是8916。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是1826。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2007。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是10104。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2395。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2336。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2137。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2138。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是2243。在一个实施方式中，上文提及的CpG核苷酸分子获自Coley Pharmaceutical Group。在另一实施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列是CTAGACGTTAGCGT(SEQ ID NO：7)。在另一实施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列是TCAACGTT(SEQ ID No：8)。在另一实施方式中，所述序列是TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT(SEQ IDNo：9)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是TCG TCGTTT CGT CGT TTT GTC GTT(SEQ ID No：10)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是TCG TCG TTG TCG TTT TGT CGT T(SEQ IDNo：11)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是TCG TCGTTT TCG GCG CGC GCC G(SEQ ID No：12)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是TGC TGC TTT TGT GCT TTT GTG CTT(SEQ IDNo：13)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是TCC ATGAGC TTC CTG AGC TT(SEQ ID No：14)(完全的硫代磷酸酯主链)。在另一实施方式中，所述序列是G*G*G GAC GAC GTC GTG G*G*G*G*G*G(SEQ IDNo：15)(在本序列和下面的序列中，*指的是硫代磷酸酯键；其他为磷酸二酯键)。在另一实施方式中，所述序列是G*G*G GGA GCA TGC TGG*G*G*G*G*G(SEQ ID No：16)。在另一实施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列是本领域已知的任何其他含CpG的序列。在另一实施方式中，所述CpG核苷酸分子是本领域已知的任何其他含CpG的核苷酸分子。
在另一实施方式中，CpG寡核苷酸的剂量是10微克(微克)。在另一实施方式中，所述剂量是15微克。在另一实施方式中，所述剂量是20微克。在另一实施方式中，所述剂量是30微克。在另一实施方式中，所述剂量是50微克。在另一实施方式中，所述剂量是70微克。在另一实施方式中，所述剂量是100微克。在另一实施方式中，所述剂量是150微克。在另一实施方式中，所述剂量是200微克。在另一实施方式中，所述剂量是300微克。在另一实施方式中，所述剂量是500微克。在另一实施方式中，所述剂量是700微克。在另一实施方式中，所述剂量是1mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5mg。在另一实施方式中，所述剂量是2mg。在另一实施方式中，所述剂量是3mg。在另一实施方式中，所述剂量是5mg。在另一实施方式中，所述剂量是大于5mg。
在另一实施方式中，所述CpG寡核苷酸的剂量是10-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是10-30微克。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克。在另一实施方式中，所述剂量是100-250微克。在另一实施方式中，所述剂量是50-250微克。在另一实施方式中，所述剂量是150-300微克。在另一实施方式中，所述剂量是200-400微克。在另一实施方式中，所述剂量是250-500微克。在另一实施方式中，所述剂量是300-600微克。在另一实施方式中，所述剂量是500-1000微克。在另一实施方式中，所述剂量是700-1500微克。在另一实施方式中，所述剂量是0.25-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是0.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是2-3mg。在另一实施方式中，所述剂量是3-5mg。在另一实施方式中，所述剂量是5-8mg。
CpG寡核苷酸的使用方法是本领域熟知的并可参见，例如，Sur S et al.(Long term prevention of allergic lung inflammation in a mouse model of asthmaby CpG oligodeoxynucleotides.J Immunol.1999 May 15；162(10)：6284-93)；Verthelyi D.(Adjuvant properties of CpG oligonucleotides in primates.MethodsMoI Med.2006；127：139-58)；和Yasuda K et al.(Role of immunostimulatoryDNA and TLR9 in gene therapy.Crit Rev Ther Drug Carrier Syst.2006；23(2)：89-110)。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，″核酸″或″核苷酸″指的是一串至少两个碱基-糖-磷酸的组合。在另一实施方式中，所述术语包括DNA和RNA。在一个实施方式中，″核苷酸″指的是核酸聚合物的单体单元。在一个实施方式中，RNA的形式为tRNA(转移RNA)、snRNA(小核RNA)、rRNA(核糖体RNA)、mRNA(信使RNA)、反义RNA、小抑制性RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)和核酶。siRNA和miRNA的用途已经公开(Caudy AA et al.，Genes&Devel 16：2491-96和其中引用的文献)。在其他实施方式中，DNA的形式可以是质粒DNA、病毒DNA、线性DNA、或染色体DNA或这些组的衍生物。此外，这些形式的DNA和RNA可以是单链、双链、三链或四链的。在另一实施方式中，所述术语还包括人工核酸，其含有其他类型的主链，但碱基相同。在一个实施方式中，所述人工核酸是PNA(肽核酸)。PNA含有肽主链和核苷酸碱基，且在一个实施方式中，其能够结合DNA和RNA分子。在另一实施方式中，所述核苷酸被环氧丙烷修饰。在另一实施方式中，所述核苷酸通过以硫代磷酸酯键置换一或多个磷酸二酯键而修饰。在另一实施方式中，所述人工核酸含有任何其他本领域已知的天然核酸磷酸主链的变体。硫代磷酸酯核酸和PNA的用途是本领域已知的并可参见，例如，Neilsen PE，Curr Opin Struct Biol 9：353-57；和Raz NK et al.Biochem Biophys Res Commun.297：1075-84。核酸的制备和用途是本领域已知的并可参见，例如，Molecular Cloning，(2001)，Sambrook andRussell，eds和Methods in Enzymology：Methods for molecular cloning ineukaryotic cells(2003)Purchio and G.C.Fareed。每一核酸衍生物代表了本发明的一个单独的实施方式。
每一类型的修饰的寡核苷酸代表了本发明的一个单独的实施方式。
制备具有修饰主链的核酸的方法是本领域已知的并可参见例如Hutcherson等的美国专利No.5,723,335和5,663,153以及相关的PCT出版物WO95/26204。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，所述佐剂是铝盐佐剂。在另一实施方式中，所述铝盐佐剂铝盐沉淀疫苗。在另一实施方式中，所述铝盐佐剂铝盐吸附疫苗。铝盐佐剂是本领域已知的并可参见，例如，Harlow，E.和D.Lane(1988；Antibodies：A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory)和Nicklas，W.(1992；Aluminum salts.Research in Immunology 143：489-493)。在另一实施方式中，所述铝盐是水合氧化铝。在另一实施方式中，所述铝盐是水化氧化铝。在另一实施方式中，所述铝盐是三水合氧化铝(ATH)。在另一实施方式中，所述铝盐是铝的水合物。在另一实施方式中，所述铝盐是铝的三水合物。在另一实施方式中，所述铝盐是铝胶。在另一实施方式中，所述铝盐是Superfos。在另一实施方式中，所述铝盐是Amphogel。在另一实施方式中，所述铝盐是氢氧化铝(III)。在另一实施方式中，所述铝盐是无定形氧化铝。在另一实施方式中，所述铝盐是三水合氧化铝。在另一实施方式中，所述铝盐是氢氧化铝。在另一实施方式中，所述铝盐是任何其他本领域已知的铝盐。
在另一实施方式中，使用商品化的Al(OH)3(例如铝胶或Superfos，来自Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co.，Westbury，NY)以50-200g蛋白/mg氢氧化铝的比率来吸附蛋白质。在另一实施方式中，蛋白质的吸附取决于所述蛋白质的pi(等电点pH)和基质的pH。具有较低pi的蛋白质对带正电荷的铝离子的吸附强于具有较高pi的蛋白质。在另一实施方式中，铝盐建立起缓慢释放达2-3周以上的Ag库、巨噬细胞非特异性活化和补体活化。
在另一实施方式中，所述铝盐的剂量是10微克。在另一实施方式中，所述剂量是15微克。在另一实施方式中，所述剂量是20微克。在另一实施方式中，所述剂量是25微克。在另一实施方式中，所述剂量是30微克。在另一实施方式中，所述剂量是50微克。在另一实施方式中，所述剂量是70微克。在另一实施方式中，所述剂量是100微克。在另一实施方式中，所述剂量是150微克。在另一实施方式中，所述剂量是200微克。在另一实施方式中，所述剂量是300微克。在另一实施方式中，所述剂量是500微克。在另一实施方式中，所述剂量是700微克。在另一实施方式中，所述剂量是1mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5mg。在另一实施方式中，所述剂量是2mg。在另一实施方式中，所述剂量是3mg。在另一实施方式中，所述剂量是5mg。在另一实施方式中，所述剂量是大于5mg。在一个实施方式中，上述铝盐的剂量以每微克重组蛋白计。
在另一实施方式中，所述铝盐的剂量是10-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克。在另一实施方式中，所述剂量是150-300微克。在另一实施方式中，所述剂量是200-400微克。在另一实施方式中，所述剂量是300-600微克。在另一实施方式中，所述剂量是500-1000微克。在另一实施方式中，所述剂量是700-1500微克。在另一实施方式中，所述剂量是1-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是2-3mg。在另一实施方式中，所述剂量是3-5mg。在另一实施方式中，所述剂量是5-8mg。在一个实施方式中，上述铝盐的剂量以每微克重组蛋白计。
在另一实施方式中，所述佐剂是Montanide ISA佐剂。在另一实施方式中，所述佐剂是补体成分C3d的三聚体。在另一实施方式中，所述三聚体共价连接于蛋白质免疫原。在另一实施方式中，所述佐剂是MF59。在另一实施方式中，所述佐剂是粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)蛋白。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括GM-CSF蛋白。在另一实施方式中，所述佐剂是编码GM-CSF的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括编码GM-CSF的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述佐剂是皂角苷QS21。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括皂角苷QS21。在另一实施方式中，所述佐剂是单磷酰脂质A(MPL)。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括MPL。在另一实施方式中，所述佐剂是SBAS2。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括SBAS2。在另一实施方式中，所述佐剂是非甲基化的含CpG的寡核苷酸。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括非甲基化的含CpG的寡核苷酸。在另一实施方式中，所述佐剂是免疫刺激细胞因子。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括免疫刺激细胞因子。在另一实施方式中，所述佐剂是编码免疫刺激细胞因子的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括编码免疫刺激细胞因子的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括quill glycoside。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括细菌有丝分裂原。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括细菌毒素。在另一实施方式中，所述佐剂是混合物，所述混合物包括本领域已知的任何其他佐剂。在另一实施方式中，所述佐剂是2种上述佐剂的混合物。在另一实施方式中，所述佐剂是3种上述佐剂的混合物。在另一实施方式中，所述佐剂是3种以上上述佐剂的混合物。在另一实施方式中，所述佐剂是MPL与500μg铝盐的混合物。
在另一实施方式中，通过本发明的疫苗所引发的抗gC或抗gE抗体阻断免疫逃避使得能够降低引发有效抗gD免疫应答所需的佐剂剂量。在另一实施方式中，本发明的疫苗引发有效抗HSV免疫应答所需的佐剂的剂量较低。在另一实施方式中，当使用佐剂时引发有效抗HSV免疫应答所需的疫苗的剂量较低。
在另一实施方式中，所述佐剂是载体多肽。在另一实施方式中，″载体多肽″指的是可缀合或结合于本发明的HSV蛋白以增强所述多肽的免疫原性的蛋白质或其免疫原性片段。载体蛋白的实例包括但绝不限于钥孔血蓝蛋白(KLH)、白蛋白、霍乱毒素、不耐热肠毒素(LT)等等。在另一实施方式中，所述两个组分被制备为嵌合构建体，以表达融合多肽。在另一实施方式中，采用化学交联将HSV蛋白连接于载体多肽。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的疫苗包含重组HSV-1蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组HSV-2蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含HSV-1和HSV-2蛋白两者。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的含有重组HSV-1-蛋白的疫苗还包含重组HSV-2蛋白。在另一实施方式中，所述重组HSV-2蛋白是gD2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述重组HSV-2蛋白是gC2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述重组HSV-2蛋白是gE2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述含有重组HSV-1-蛋白的疫苗还包含gD2蛋白和gC2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gD2蛋白和gE2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gD2蛋白、gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的含有重组HSV-2-蛋白的疫苗还包含重组HSV-1蛋白。在另一实施方式中，所述重组HSV-1蛋白是gD1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述重组HSV-1蛋白是gC1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述重组HSV-1蛋白是gE1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述含有重组HSV-2-蛋白的疫苗还包含gD1蛋白和gC1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gD1蛋白和gE1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gE1蛋白和gC1蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述疫苗还包含gD1蛋白、gE1蛋白和gC1蛋白或其片段。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-1gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gD蛋白和HSV-2gD蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gC蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gE蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-1gC蛋白或其片段或(b)重组HSV-1gE蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-1gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gE蛋白和HSV-2gE蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gC蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gD蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-1gC蛋白或其片段或(b)重组HSV-1gD蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-1gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gC蛋白和HSV-2gC蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gD蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-1gE蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-1gD蛋白或其片段或(b)重组HSV-1gE蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-2gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gD蛋白和HSV-2gD蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gC蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gE蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-2gC蛋白或其片段或(b)重组HSV-2gE蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-2gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gE蛋白和HSV-2gE蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gC蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gD蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-2gC蛋白或其片段或(b)重组HSV-2gD蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种包括初始免疫接种所使用的重组HSV-2gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接种中的其他重组蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种同时含有HSV-1gC蛋白和HSV-2gC蛋白。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gD蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含初始免疫接种中的重组HSV-2gE蛋白或其片段。在另一实施方式中，所述加强免疫接种不包含(a)重组HSV-2gD蛋白或其片段或(b)重组HSV-2gE蛋白或其片段，这两者均存在于初始免疫接种中。
在一个实施方式中，上述任一加强免疫接种在初始免疫接种之后施用，所述初始免疫接种包含一或多个HSV-1蛋白或其免疫原性片段。在另一实施方式中，上述任一加强免疫接种在初始免疫接种之后施用，所述初始免疫接种包含一或多个HSV-2蛋白或其免疫原性片段。
在另一实施方式中，本发明的疫苗方案还包括给所述对象施用加强免疫接种的步骤，其中所述加强免疫接种基本上由重组HSV-1gD蛋白或其免疫原性片段组成。在另一实施方式中，所述加强免疫接种由重组HSV-1gD蛋白或其免疫原性片段和佐剂组成。在一个实施方式中，所述HSV gD蛋白或其免疫原性片段是HSV-1gD蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-2gD蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-1和HSV-2gD蛋白两者。在另一实施方式中，所述加强免疫接种基本上由重组HSV gE蛋白或其免疫原性片段组成。在另一实施方式中，所述加强免疫接种由重组HSV gE蛋白或其免疫原性片段和佐剂组成。在一个实施方式中，所述HSV gE蛋白或其免疫原性片段是HSV-1gE蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-2gE蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-1和HSV-2gE蛋白两者。在另一实施方式中，所述加强免疫接种基本上由重组HSV gC蛋白或其免疫原性片段组成。在另一实施方式中，所述加强免疫接种由重组HSV gC蛋白或其免疫原性片段和佐剂组成。在一个实施方式中，所述HSV gC蛋白或其免疫原性片段是HSV-1gC蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-2gC蛋白，而在另一实施方式中，其是HSV-1和HSV-2gC蛋白两者。
在另一实施方式中，所述加强免疫接种在单次初始免疫接种之后进行。在另一实施方式中，″初始免疫接种″指的是包含以下(a)与(b)的混合物的免疫接种：(a)gD蛋白，(b)gC蛋白、gE蛋白、或其混合物。在另一实施方式中，初始免疫接种指的是包含选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白的两种或多种重组HSV蛋白的免疫接种。在另一实施方式中，该术语指的是最初施用的疫苗。在另一实施方式中，在加强免疫接种之前施用2次初始免疫接种。在另一实施方式中，在加强免疫接种之前施用3次初始免疫接种。在另一实施方式中，在加强免疫接种之前施用4次初始免疫接种。
在另一实施方式中，在初始免疫接种之后施用单次加强免疫接种。在另一实施方式中，在初始免疫接种之后施用2次加强免疫接种。在另一实施方式中，在初始免疫接种之后施用3次加强免疫接种。
在一个实施方式中，在单一注射器中将gD和gE施用至同一部位，而在另一实施方式中，在分开的注射器中将gD和gE施用至分开的部位，或在另一实施方式中，gD和gE被同时施用至单一部位并继以加强剂量的gD，而没有gE。
在一个实施方式中，在单一注射器中将gD和gC施用至同一部位，而在另一实施方式中，在分开的注射器中将gD和gC施用至分开的部位，或在另一实施方式中，gD和gC被同时施用至单一部位并继以加强剂量的gD，而没有gC。
在一个实施方式中，在单一注射器中将gE和gC施用至同一部位，而在另一实施方式中，在分开的注射器中将gE和gC施用至分开的部位，或在另一实施方式中，gE和gC被同时施用至单一部位并继以加强剂量的gE，而没有gC，或者在另一实施方式中，继以加强剂量的gC，而没有gE。
在一个实施方式中，在单一注射器中将gD、gC、和gE施用至同一部位，而在另一实施方式中，在分开的注射器中将gD、gC、和gE施用至分开的部位，或在另一实施方式中，gD、gC、和gE被同时施用至单一部位并继以加强剂量的gD，而没有gC和gE。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gD-1的剂量是，例如对于人类对象，20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-50微克/接种。
每一剂量的gD-1代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gD-2剂量是10纳克/接种，在一个实施方式中，其是用于人类对象的剂量。在另一实施方式中，所述剂量是25纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是750纳克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是500纳克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是1.25微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是2.5微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是12.5微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-50微克/接种。
每一剂量的gD-2代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gC-1剂量是，例如对于人类对象，20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是10-100纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-250纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-250纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-500纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-500微克/接种。
每一剂量的gC-1代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gC-2剂量是，例如对于人类对象，20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是0.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-500微克/接种。
每一剂量的gC-2代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gE-1剂量是，例如对于人类对象，20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是0.5-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是0.5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2.5-7.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-500微克/接种。
每一剂量的gE-1代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，免疫接种或加强免疫接种中使用的重组HSV gE-2剂量是，例如对于人类对象，20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-500微克/接种。
每一剂量的gE-2代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，所述加强免疫接种包含佐剂。在另一实施方式中，所述佐剂包含a CpG寡核苷酸。在另一实施方式中，所述佐剂包含铝盐。在另一实施方式中，所述佐剂包含CpG寡核苷酸和铝盐两者。在另一实施方式中，所述佐剂包含任何其他上述佐剂。在另一实施方式中，所述佐剂包含上述佐剂的任意组合。
在另一实施方式中，本发明的免疫接种或加强免疫接种中的CpG寡核苷酸的剂量是10微克(微克)。在另一实施方式中，所述剂量是15微克。在另一实施方式中，所述剂量是20微克。在另一实施方式中，所述剂量是30微克。在另一实施方式中，所述剂量是50微克。在另一实施方式中，所述剂量是70微克。在另一实施方式中，所述剂量是100微克。在另一实施方式中，所述剂量是150微克。在另一实施方式中，所述剂量是200微克。在另一实施方式中，所述剂量是300微克。在另一实施方式中，所述剂量是500微克。在另一实施方式中，所述剂量是700微克。在另一实施方式中，所述剂量是1mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5mg。在另一实施方式中，所述剂量是2mg。在另一实施方式中，所述剂量是3mg。在另一实施方式中，所述剂量是5mg。在另一实施方式中，所述剂量是大于5mg。
在另一实施方式中，所述CpG寡核苷酸的剂量是10-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克。在另一实施方式中，所述剂量是150-300微克。在另一实施方式中，所述剂量是200-400微克。在另一实施方式中，所述剂量是300-600微克。在另一实施方式中，所述剂量是500-1000微克。在另一实施方式中，所述剂量是700-1500微克。在另一实施方式中，所述剂量是1-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是2-3mg。在另一实施方式中，所述剂量是3-5mg。在另一实施方式中，所述剂量是5-8mg。
在另一实施方式中，加强免疫接种中的铝盐的剂量是10微克。在另一实施方式中，所述剂量是15微克。在另一实施方式中，所述剂量是20微克。在另一实施方式中，所述剂量是30微克。在另一实施方式中，所述剂量是50微克。在另一实施方式中，所述剂量是70微克。在另一实施方式中，所述剂量是100微克。在另一实施方式中，所述剂量是150微克。在另一实施方式中，所述剂量是200微克。在另一实施方式中，所述剂量是300微克。在另一实施方式中，所述剂量是500微克。在另一实施方式中，所述剂量是700微克。在另一实施方式中，所述剂量是1mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5mg。在另一实施方式中，所述剂量是2mg。在另一实施方式中，所述剂量是3mg。在另一实施方式中，所述剂量是5mg。在另一实施方式中，所述剂量是大于5mg。
在另一实施方式中，所述铝盐的剂量是10-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克。在另一实施方式中，所述剂量是150-300微克。在另一实施方式中，所述剂量是200-400微克。在另一实施方式中，所述剂量是300-600微克。在另一实施方式中，所述剂量是500-1000微克。在另一实施方式中，所述剂量是700-1500微克。在另一实施方式中，所述剂量是1-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是2-3mg。在另一实施方式中，所述剂量是3-5mg。在另一实施方式中，所述剂量是5-8mg。
在另一实施方式中，所述铝盐的剂量是10微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是20微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是700微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是1mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5mg。在另一实施方式中，所述剂量是2mg。在另一实施方式中，所述剂量是3mg。在另一实施方式中，所述剂量是5mg。在另一实施方式中，所述剂量是大于5mg。
在另一实施方式中，所述铝盐的剂量是10-100微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是20-100微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是30-100微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是150-300微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是200-400微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是300-600微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是500-1000微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是700-1500微克/微克重组蛋白。在另一实施方式中，所述剂量是1-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是1.5-2mg。在另一实施方式中，所述剂量是2-3mg。在另一实施方式中，所述剂量是3-5mg。在另一实施方式中，所述剂量是5-8mg。
在另一实施方式中，本发明的疫苗引发的抗体抑制gD与细胞受体的结合。在另一实施方式中，所述受体是疱疹病毒进入介导物A(HveA/HVEM)。在另一实施方式中，所述受体是柄蛋白-1(HveC)。在另一实施方式中，所述受体是柄蛋白-2(HveB)。在另一实施方式中，所述受体是修饰型的硫酸乙酰肝素。在另一实施方式中，所述受体是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。在另一实施方式中，所述受体是本领域已知的任何其他gD受体。
在另一实施方式中，在所述疫苗中纳入本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂增加由所述疫苗引发的抗gD抗体的功效。在另一实施方式中，纳入本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂升高引发抑制gD与细胞受体结合的抗体的所需的重组gD的剂量(图19)。在另一实施方式中，当与gC蛋白(图20A)或gE蛋白分开施用一剂gD时，本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂降低引发抑制gD与细胞受体结合的抗体所需的重组gD的剂量。
在另一实施方式中，在所述疫苗中纳入本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂增强先天性免疫应答的作用。在另一实施方式中，所述先天性免疫应答是抗体介导的免疫应答。在另一实施方式中，所述先天性免疫应答是非抗体介导的免疫应答。在另一实施方式中，所述先天性免疫应答是NK(天然杀伤)细胞应答。在另一实施方式中，所述先天性免疫应答本领域已知的任何其他先天性免疫应答。
在一个实施方式中，在所述疫苗中纳入gC-1蛋白、和/或佐剂有助于抵抗疾病和死亡，而在另一实施方式中，在所述疫苗中纳入gC-2蛋白有助于抵抗疾病和死亡(例如，图22-26)。在一个实施方式中，接种和带状疱疹样部位疾病评分降低的最大降幅是使用5微克的剂量而得到的。在另一实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用2微克的剂量而得到的。在一个实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用1微克的剂量而得到的。在另一实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用0.5微克的剂量而得到的。在一个实施方式中，所述用于人类的疫苗中的gC-2的剂量是如现有技术所知的那样根据小鼠实验数据估计的。
在一个实施方式中，在所述疫苗中纳入gD-1蛋白、和/或佐剂有助于抵抗疾病和死亡，而在另一实施方式中，在所述疫苗中纳入gD-2蛋白有助于抵抗疾病和死亡(例如，图27-31)。在一个实施方式中，接种和带状疱疹样部位疾病评分降低的最大降幅是使用250ng的剂量而得到的。在一个实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用100ng的剂量而得到的。在另一实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用50ng的剂量而得到的。在一个实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用25ng的剂量而得到的。在另一实施方式中，所述接种和带状疱疹样部位疾病评分的降幅是使用10ng的剂量而得到的。在一个实施方式中，所述用于人类的疫苗中的gD-2的剂量是如现有技术所知的那样根据小鼠实验数据估计的。
在另一实施方式中，本发明的疫苗还包含另一种参与细胞结合和/或细胞进入的HSV糖蛋白。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gH。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gL。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gB。
在另一实施方式中，本发明的疫苗还包含额外的HSV糖蛋白。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gM。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gN。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gK。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gG。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gI。在另一实施方式中，所述糖蛋白是gJ。
在一个实施方式中，本发明的疫苗和组合物包含单一的重组HSV糖蛋白，在一个实施方式中，其是gC、gE、或gD，以及任选地，佐剂。在一个实施方式中，所述HSV糖蛋白是HSV-1糖蛋白，而在另一实施方式中，所述HSV糖蛋白是HSV-2糖蛋白。在另一实施方式中，本发明提供重组疫苗载体，其编码重组HSV糖蛋白。
在另一实施方式中，在所述疫苗中纳入本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂增加针对上述糖蛋白之一的疫苗引发的抗体的功效。在另一实施方式中，当一剂所述糖蛋白之一与其他糖蛋白分开施用时(图20A)，本发明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐剂降低引发抑制所述糖蛋白结合于其细胞受体的抗体所需的上述糖蛋白之一的剂量(图19)。
在另一实施方式中，本发明的疫苗是重组核苷酸疫苗。在另一实施方式中，所述疫苗是重组DNA疫苗。在另一实施方式中，所述DNA疫苗编码HSVgC蛋白和HSV gD蛋白。在另一实施方式中，所述DNA疫苗编码HSV gE蛋白和HSV gD蛋白。在另一实施方式中，所述DNA疫苗编码HSV gE蛋白、HSV gC蛋白、和HSV gD蛋白。在另一实施方式中，所述重组蛋白是HSV-2蛋白。在另一实施方式中，所述重组蛋白是HSV-1蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白包含HSV-1和HSV-2蛋白两者。
在另一实施方式中，本发明的疫苗包含加载了本发明的HSV抗原的树突细胞(DC)。在另一实施方式中，所述DC已经被暴露于本发明的HSV抗原。在另一实施方式中，所述DC加载了编码本发明的HSV抗原的核苷酸。在另一实施方式中，所述DC已经被活化。
在另一实施方式中，本发明提供免疫原性组合物包含本发明的重组HSV蛋白的组合。在另一实施方式中，本发明提供免疫原性组合物，其包含编码本发明的重组HSV蛋白的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述免疫原性组合物还包含佐剂。
在另一实施方式中，本发明提供重组疫苗载体，其编码本发明的重组HSV蛋白。在另一实施方式中，本发明提供重组疫苗载体，其包含本发明的重组HSV蛋白。
在另一实施方式中，本发明提供重组疫苗载体，其包含本发明的核苷酸分子。在另一实施方式中，所述表达载体是质粒。在另一实施方式中，本发明提供用于将本发明的核苷酸分子引入细胞的方法。构建和使用重组载体的方法是本领域已知的并可参见，例如，Sambrook et al.(2001，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，New York)和Brent et al.(2003，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，New York)。在另一实施方式中，所述载体是细菌载体。在其他实施方式中，所述载体选自沙门菌属、志贺菌属、BCG、单核增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)和格氏链球菌(S.gordonii)。在另一实施方式中，所述重组HSV蛋白由重组细菌载体输送，所述载体被改良以逃避吞噬溶酶体融合并在细胞的细胞质中存活。在另一实施方式中，所述载体是病毒载体。在其他实施方式中，所述载体选自牛痘病毒、鸟痘病毒、腺病毒、AAV、牛痘病毒NYVAC、改良的牛痘Ankara株(MVA)、西门利克森林病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、疱疹病毒和反转录病毒。在另一实施方式中，所述载体是裸DNA载体。在另一实施方式中，所述载体本领域已知的任何其他载体。
在另一实施方式中，本发明的核苷酸可操纵地于在载体所引入的细胞中驱动所编码的肽表达的启动子/调节序列。可用于驱动基因组成型表达的启动子/调节序列是本领域熟知的，包括但不限于，例如，巨细胞病毒立即早期启动子/增强子序列、SV40早期启动子和劳斯肉瘤病毒启动子。在另一实施方式中，通过将编码肽的核酸置于诱导型或组织特异性启动子/调节序列控制下可实现本发明的编码肽的核酸的诱导型和组织特异性表达。可用于此目的的组织特异性或诱导型启动子/调节序列的实例包括但不限于MMTV LTR诱导型启动子和SV40晚期增强子/启动子。在另一实施方式中，使用应答于诱导剂而被诱导的启动子，所述诱导剂例如例如为金属、糖皮质激素等等。因此，可以理解，本发明包括使用能够驱动与之可操纵地连接的所需蛋白质的表达的任何启动子/调节序列，无论是已知的还是未知的。
在另一实施方式中，本发明提供包含本发明的载体的细胞。用于产生包含载体和/或外来核酸的细胞的方法是本领域熟知的。见例如，Sambrook et al.(1989，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，New York)和Ausubel et al.(1997，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley&Sons，New York)。
在其他实施方式中，上述任何方法的所述疫苗均具有本发明的疫苗和组合物的任何特征。每一特征代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明提供抑制对象的原发性HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供治疗对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV感染发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供抑制对象的原发性HSV感染之后的潮红的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在一个实施方式中，″潮红″或″复发″指的是在潜伏的神经元HSV感染之后皮肤组织再次感染。在另一实施方式中，所述术语指的是潜伏期过后HSV再活化。在另一实施方式中，所述术语指的是无症状潜伏期之后的症状性HSV病变。
在另一实施方式中，本发明提供抑制HSV播散的方法。在一个实施方式中，从DRG到皮肤的播散被抑制。在一个实施方式中，细胞间HSV播散被抑制。在一个实施方式中，顺行播散被抑制。在一个实施方式中，逆行播散被抑制。在一个实施方式中，″DRG″指的是神经元细胞体，而在另一实施方式中，其含有神经纤维的神经元细胞体。在另一实施方式中，该术语指的是本领域所使用的″DRG″的任何其他定义。在另一实施方式中，抑制HSV播散至神经组织。
在另一实施方式中，本发明提供抑制对象的原发性HSV感染之后的复发的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供预防对象的原发性HSV感染之后的复发的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供抑制对象的原发性HSV感染之后的HSV唇疱疹的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供预防HSV感染复发的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供减轻HSV感染复发的严重程度的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供降低HSV感染复发的频率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在一个实施方式中，本发明给感染HIV的对象提供任一上述方法。
在另一实施方式中，本发明提供治疗对象的HSV脑炎的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV脑炎的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在一个实施方式中，″HSV脑炎″指的是由单纯疱疹病毒-1(HSV)引起的脑炎。在另一实施方式中，该术语指的是HSV相关性脑炎。在另一实施方式中，该术语指的是本领域已知的任何其他类型的HSV介导的脑炎。
在另一实施方式中，本发明提供治疗或减轻对象的HSV新生儿感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
应该理解，在此提到HSV时，在一个实施方式中，其指的是HSV-1，而在另一实施方式中，指的是HSV-2，而在另一实施方式中，指的是HSV-1和HSV-2。
在另一实施方式中，″HSV-1″指的是单纯疱疹病毒-1。在另一实施方式中，该术语指的是KOS毒株。在另一实施方式中，该术语指的是F毒株。在另一实施方式中，该术语指的是NS毒株。在另一实施方式中，该术语指的是CL101毒株。在另一实施方式中，该术语指的是″17″毒株。在另一实施方式中，该术语指的是″17+syn″毒株。在另一实施方式中，该术语指的是MacIntyre毒株。在另一实施方式中，该术语指的是MP毒株。在另一实施方式中，该术语指的是HF毒株。在另一实施方式中，该术语指的是本领域已知的任何其他HSV-1毒株。
在另一实施方式中，″HSV-2″指的是单纯疱疹病毒-2。在另一实施方式中，该术语指的是HSV-2333毒株。在另一实施方式中，该术语指的是2.12毒株。在另一实施方式中，该术语指的是HG52毒株。在另一实施方式中，该术语指的是MS毒株。在另一实施方式中，该术语指的是G毒株。在另一实施方式中，该术语指的是186毒株。在另一实施方式中，该术语指的是本领域已知的任何其他HSV-2毒株。
在另一实施方式中，本发明提供给对象进行抗HSV感染免疫接种的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供压制对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供阻止对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供阻止对象的原发性HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供阻止对象的神经元HSV播散的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，所述术语″阻止HSV感染″和″阻止原发性HSV感染″指的是将感染性病毒的效价降低90％。在另一实施方式中，所述效价被降低50％。在另一实施方式中，所述效价被降低55％。在另一实施方式中，所述效价被降低60％。在另一实施方式中，所述效价被降低65％。在另一实施方式中，所述效价被降低70％。在另一实施方式中，所述效价被降低75％。在另一实施方式中，所述效价被降低80％。在另一实施方式中，所述效价被降低85％。在另一实施方式中，所述效价被降低92％。在另一实施方式中，所述效价被降低95％。在另一实施方式中，所述效价被降低96％。在另一实施方式中，所述效价被降低97％。在另一实施方式中，所述效价被降低98％。在另一实施方式中，所述效价被降低99％。在另一实施方式中，所述效价被降低超过99％。
在另一实施方式中，所述术语指的是将病毒复制的程度降低90％。在另一实施方式中，复制被降低50％。在另一实施方式中，复制被降低55％。在另一实施方式中，复制被降低60％。在另一实施方式中，复制被降低65％。在另一实施方式中，复制被降低70％。在另一实施方式中，复制被降低75％。在另一实施方式中，复制被降低80％。在另一实施方式中，复制被降低85％。在另一实施方式中，复制被降低92％。在另一实施方式中，复制被降低95％。在另一实施方式中，复制被降低96％。在另一实施方式中，复制被降低97％。在另一实施方式中，复制被降低98％。在另一实施方式中，复制被降低99％。在另一实施方式中，复制被降低超过99％。
确定HSV复制和HSV感染程度的方法是本领域熟知的，并可参见例如，Lambiase A et al.(Topical treatment with nerve growth factor in an animal modelof herpetic keratitis.Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.2007 May 4)、Ramaswamy M et al.(Interactions and management issues in HSV and HIVcoinfection.Expert Rev Anti Infect Ther.2007 Apr；5(2)：231-43)和Jiang C et al.(Mutations that decrease DNA binding of the processivity factor of the herpessimplex virus DNA polymerase reduce viral yield，alter the kinetics of viral DNAreplication，and decrease the fidelity of DNA replication.J Virol.2007 Apr；81(7)：3495-502)。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV介导的疱疹性眼病的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供治疗对象的HSV-1角膜感染或疱疹角膜炎的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV-1角膜感染或疱疹角膜炎的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
用于确定疱疹性眼病、角膜感染、疱疹角膜炎的存在和程度的方法是本领域熟知的，并可参见例如，Labetoulle M et al.(Neuronal propagation of HSVlfrom the oral mucosa to the eye.Invest Ophthalmol Vis Sci.2000 Aug；41(9)：2600-6)和Majumdar S et al(Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs fortreating HSV-1-induced corneal epithelial and stromal keratitis：in vitro and invivo evaluations.J Ocul Pharmacol Ther.2005 Dec；21(6)：463-74)。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明提供用于治疗、压制或抑制HSV生殖道感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供用于治疗、压制或抑制复发性HSV感染的任何表现的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV介导的生殖道溃疡疾病的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供阻止对象发生潜伏HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象的HSV介导的脑炎的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明的方法所治疗或预防的疱疹介导的脑炎是局灶疱疹性脑炎。在另一实施方式中，所述疱疹介导的脑炎是新生儿疱疹性脑炎。在另一实施方式中，所述疱疹介导的脑炎是本领域已知的任何其他类型的疱疹介导的脑炎。
在另一实施方式中，本发明提供治疗对象的HSV介导的脑炎相关性或继发性疾病、疾患或症状或降低其发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供治疗对象的单纯疱疹病毒(HSV)感染、降低其发病、改善其症状、改善其继发症状、降低其发生率、延长到其复发的潜伏期的方法，包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
根据本发明的任一方法，在一个实施方式中，所述对象是人。在另一实施方式中，所述对象是鼠，在一个实施方式中，其是小鼠，而在另一实施方式中，其是大鼠。在另一实施方式中，所述对象是犬、猫、牛、羊或猪。在另一实施方式中，所述对象是哺乳动物。在另一实施方式中，所述对象是任何易于被HSV感染的生物体。
在另一实施方式中，本发明提供保护对象免于人类对象形成带状疱疹样病灶或类似爆发的方法。在另一实施方式中，本发明提供抑制人类对象形成HSV带状疱疹样病灶或类似爆发的方法。
在一个实施方式中，″带状疱疹样″指的是HSV感染、尤其是再活化感染过程中的皮肤病灶特征，在一个实施方式中，其起初为皮疹，然后在节皮区(dermatome)附近分布，通常以条状或带状形式出现。在一个实施方式中，所述皮疹演变为小水疱或充满浆液的小的大水疱。在一个实施方式中，小鼠因接触HSV之后形成带状疱疹样病灶。在另一实施方式中，人因接触HSV之后形成带状疱疹样病灶。在一个实施方式中，″带状疱疹样播散″指的是HSV感染从神经节播散至节皮区内的继发肌肤部位。在另一实施方式中，该术语指的是在与最初感染部位相同的节皮区内播散。在另一实施方式中，该术语指的是本领域已知的″带状疱疹样播散″的任何其他定义。在另一实施方式中，″爆发″指的是疾病症状或疾病的播散或流行的突然增加，且在一个实施方式中，指的是带状疱疹样病灶突然增加，而在另一实施方式中，″爆发″指的是带状疱疹样病灶突然出现皮疹。
在一个实施方式中，本发明提供阻止对象形成节皮区病变或类似情况的方法。在一个实施方式中，因接触HSV之后形成节皮区病灶。在另一实施方式中，当神经节中潜伏的病毒再次活化时最常出现节皮区病灶，而在一个实施方式中，沿神经向下播散，在一个实施方式中，引起反复感染。
应该理解，本发明的方法可用于治疗、抑制、压制因对象暴露于HSV之后的HSV感染或与这种感染相关的原发或继发症状。在另一实施方式中，所述对象在免疫接种之前已经被HSV感染。在另一实施方式中，所述对象是处于发生HSV感染的风险中。在另一实施方式中，无论免疫接种时对象是否已经感染HSV，通过本发明的方法进行免疫接种均可有效治疗、抑制、压制HSV感染或与这种感染相关的原发或继发症状。
在一个实施方式中，″治疗″指的是治疗或预防或防止措施，其目的是预防或减轻所针对的上述疾病状态或疾患。因此，在一个实施方式中，治疗可包括直接影响或治愈、压制、抑制、预防所述疾病、疾患、病变、或减轻其严重程度、延缓其发作、减轻其相关症状、或其组合，等等。因此，在一个实施方式中，″治疗″指的是延缓进展、加速缓解、诱导缓解、促进缓解、加快恢复、增强各种治疗剂的效力或降低对各种治疗剂的抗药性、或其组合，等等。在一个实施方式中，″预防″指的是延缓症状出现、预防疾病复发、降低复发数量或频率、延长症状发作期之间的潜伏期、或其组合，等等。在一个实施方式中，″压制″或″抑制″指的是减轻症状严重程度、减轻急性发作的严重程度、减少症状的数量、降低疾病相关症状的发生率、减少潜伏症状、改善症状、减少继发症状、减少继发感染、延长患者生存、或其组合，等等。
在一个实施方式中，症状是原发性的，而在另一实施方式中，症状是继发性的。在一个实施方式中，″原发″指的是直接由对象感染病毒所致的症状，在一个实施方式中，″继发″指的是原发因素引起的或导致的症状。在一个实施方式中，用于本发明的所述组合和毒株治疗HSV感染相关性原发或继发症状或继发的并发症。
在另一实施方式中，″症状″可以是HSV感染的任何表现，包括大水疱、溃疡、或女性的尿道、宫颈、大腿、和/或肛门处的病变以及男性的阴茎、尿道、阴囊、大腿和肛门处的病变、炎症、肿胀、发热、流感样症状、口腔疼痛、咽喉疼痛、咽炎、疼痛、舌头、口唇的大水疱、溃疡、唇疱疹(cold sores)、颈部疼痛、淋巴结肿大、发红、出血、搔痒、排尿困难、头痛、肌痛、或其组合。
在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是发热。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是头痛。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是颈强直。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是癫痫发作。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是部分瘫痪。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是木僵。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是昏迷。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是本领域已知的任何其他疱疹介导的脑炎相关性或继发性疾病、疾患或症状。
确定疱疹介导的脑炎的存在和严重程度的方法是本领域熟知的，并可参见例如，Bonkowsky JL et al.(Herpes simplex virus central nervous system relapseduring treatment of infantile spasms with corticotropin.Pediatrics.2006 May；117(5)：e1045-8)和Khan OA，et al.(Herpes encephalitis presenting as mild aphasia：case report.BMC Fam Pract.2006 Mar 24；7：22)。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明提供治疗与对象的HSV感染有关的疾病、疾患或症状或降低其发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，所述继发于HSV感染的疾病、疾患、或症状是口腔病变。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是生殖道病变。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是口腔溃疡。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是生殖道溃疡。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是发热。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是头痛。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是肌痛。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是腹股沟区淋巴结肿大。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是排尿疼痛。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是阴道排出物。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是发水疱。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是流感样不适。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是角膜炎。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是疱疹性甲沟炎。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是贝尔麻痹。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是疱疹性多形红斑。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是腰背部症状(例如麻木、臀部或肛周区域发麻、尿潴留、便秘和阳痿)。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是局部疱疹性湿疹。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是播散性疱疹性湿疹。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是外伤性疱疹。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是疱疹性须疮。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是食道症状(例如吞咽困难或烧心、吞咽时喉部压榨性疼痛、体重下降、吞咽时上胸部或胸骨后疼痛)。在另一实施方式中，所述疾病、疾患、或症状是本领域已知的任何其他疾病、疾患或症状。每一疾病、疾患和症状代表了本发明的一个单独的实施方式。
因此，在一个实施方式中，本发明的组合物和方法本身治疗、压制、抑制感染、或降低其发生率，而在另一实施方式中，本发明的组合物和方法治疗、压制、抑制感染的原发症状、或降低其发生率，而在另一实施方式中，本发明的组合物和方法治疗、压制、抑制感染的继发症状、或降低其发生率。应该理解，本发明的组合物和方法可影响所述感染、感染引起的原发症状和感染相关性继发症状的任何组合。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物治疗或改善的HSV感染是生殖器HSV感染。在另一实施方式中，所述HSV感染是口腔HSV感染。在另一实施方式中，所述HSV感染是眼HSV感染。在另一实施方式中，所述HSV感染是皮肤HSV感染。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象的播散性HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象后代的新生儿HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，本发明提供降低HSV感染从对象传播给其后代的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在另一实施方式中，所述后代是婴儿。在另一实施方式中，所述被降低或抑制的传播是分娩过程中的传播。在另一实施方式中，降低或抑制哺乳过程中的传播。在另一实施方式中，所述被降低或抑制的传播是本领域已知的任何其他类型的母婴传播。
在另一实施方式中，本发明提供降低对象后代的新生儿HSV感染的严重程度的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在一个实施方式中，本发明提供一种在感染HIV的对象中治疗、压制、抑制HSV感染或降低HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用疫苗的步骤，所述疫苗包含：(a)重组HSV gC蛋白或其片段；(b)重组HSV gE蛋白或其片段；和(c)佐剂。在另一实施方式中，本发明提供一种在感染HIV的对象中治疗、压制、抑制HSV感染或降低HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用疫苗的步骤，所述疫苗包含：(a)重组HSV gC蛋白或其片段，其中所述片段包含其C3b结合结构域、其备解素干扰结构域、其C5干扰结构域、或所述C3b结合结构域、备解素干扰结构域、或C5干扰结构域的片段；(b)重组HSV gE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和(c)佐剂。
在另一实施方式中，本发明提供治疗感染了HIV的对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供压制感染了HIV的对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供抑制感染了HIV的对象的HSV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供降低感染了HIV的对象的HSV感染的发生率的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供预防HIV感染的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的HSV疫苗的步骤。在一个实施方式中，HSV感染增加HIV感染的风险，而保护对象免于HSV感染降低HIV感染的风险。因此，在一个实施方式中，本发明提供降低HIV感染风险的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。
在一个实施方式中，本发明的方法所使用的疫苗引发针对HSV的免疫应答。在另一实施方式中，本发明的方法所使用的疫苗引发针对HSV-1的免疫应答。在另一实施方式中，本发明的方法所使用的疫苗引发针对HSV-2的免疫应答。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组gD和gC蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组gE和gD蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组gC和gE蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组gE、gD和gC蛋白。在另一实施方式中，所述疫苗包含重组gE、gD或gC蛋白。在另一实施方式中，所述重组蛋白是HSV-1蛋白。在另一实施方式中，所述重组蛋白是HSV-2蛋白。在另一实施方式中，所述蛋白保护HSV-1和HSV-2蛋白两者。
应该理解，在一个实施方式中，根据本文所述的任一实施方式的对象可以是感染HSV的对象，或在另一实施方式中，其易于感染HSV。在一个实施方式中，对象可以是感染至少一种其他病原体的对象，或在另一实施方式中，其易于感染至少一种其他病原体。在一个实施方式中，对象可以是免疫受损的对象。在一个实施方式中，所述对象感染了HSV，而在另一实施方式中，所述对象具有感染HSV的风险，在一个实施方式中，其是新生儿对象，在另一实施方式中，是免疫受损的对象，在另一实施方式中，是老年对象，而在另一实施方式中，是免疫受损的新生儿或免疫受损的老年对象。
在另一实施方式中，本发明的组合物或疫苗及其相关用途可压制、抑制、预防或治疗对象的HIV感染。在一个实施方式中，本发明的组合物或疫苗及其相关用途可治疗HIV感染的继发并发症，在一个实施方式中，所述并发症是机会性感染、肿瘤、神经系统异常、或进行性免疫损害。在另一实施方式中，所述方法包括治疗获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。在另一实施方式中，所述方法包括治疗CD4+T淋巴细胞数量下降。
在另一实施方式中，本发明提供减少HIV-1传播至后代的方法，所述方法包括给对象施用本发明的疫苗的步骤。本领域已知，HSV-2感染增加HIV-1病毒在生殖道分泌物中的脱落(Nagot N et al.，Reduction of HIV-1 RNA levelswith therapy to suppress herpes simplex virus.N Engl J Med.2007 Feb 22；356(8)：790-9)。因此，本发明的抑制HSV-2感染的方法也有效减少HIV-1传播至后代。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-1毒株。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一实施方式中，本发明提供减少HIV-1传播给性伴侣的方法，所述方法包括给对象施用本发明的疫苗的步骤。本领域已知，HSV-2感染增加HIV-1病毒在生殖道分泌物中的脱落。因此，本发明的抑制HSV-2感染的方法也有效减少HIV-1传播给性伴侣。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-1毒株。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一实施方式中，本发明提供降低对HIV-1的易感性的方法，所述方法包括给对象施用本发明的疫苗的步骤。本领域已知，HSV-2感染增加HIV-1复制(Ouedraogo A et al，Impact of suppressive herpes therapy on genital HIV-1RNA among women taking antiretroviral therapy：a randomized controlled trial.AIDS.2006 Nov 28；20(18)：2305-13)。因此，本发明的抑制HSV-2感染的方法也有效降低对HIV-1的易感性。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-1毒株。在另一实施方式中，所述突变体HSV毒株是HSV-2毒株。
因此，在一个实施方式中，本发明提供抑制感染HIV的对象的原发性HSV感染的方法，包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供治疗感染HIV的对象的HSV感染或降低其发生率的方法，包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在另一实施方式中，本发明提供抑制感染HIV的对象的原发性HSV感染之后的潮红、复发或HSV唇疱疹的方法，所述方法包括给所述对象施用本发明的疫苗的步骤。在一个实施方式中，施用本发明的疫苗引发抗HSV免疫应答。
应该理解，在一个实施方式中，根据本文所述的任一实施方式的对象可以是感染HIV的对象，或在另一实施方式中，其易于感染HIV。在另一实施方式中，根据本文所述的任一实施方式的对象是HIV阳性对象。在一个实施方式中，本发明的组合物或疫苗及其相关用途可压制、抑制、预防或治疗感染HIV的对象的HSV感染。在一个实施方式中，所述感染HIV的对象的CD4T-细胞计数可低于200/μl，在另一实施方式中，所述感染HIV的对象的CD4T-细胞计数可在200-500/μl之间，或在另一实施方式中，所述感染HIV的对象的CD4T-细胞计数高于500/μl。在一个实施方式中，感染HIV的对象具有高溶血性血清补体(CH50)水平，而在另一实施方式中，感染HIV的对象具有低CH50水平。
在一个实施方式中，感染HIV的对象可通过特征性的症状和/或病理学被鉴定，且在另一实施方式中，本发明的疫苗和方法可缓解与HIV感染相关的一或多种症状和/或病理学。在一个实施方式中，与HIV感染或病理学(例如，疾病)有关的或其导致的症状非限制性的实例包括发热、乏力、头痛、咽痛、淋巴结肿大、体重下降、皮疹、疖、疣、鹅口疮、带状疱疹、慢性或急性盆腔炎性疾病(PID)、咳嗽和气短、癫痫发作和协调性差、吞咽困难或疼痛、神经心理学症状例如意识模糊和健忘、严重和持续腹泻、发热、视力下降、恶心、腹部绞痛、和呕吐、昏迷、干咳、挫伤、出血、麻木或瘫痪、肌无力、机会性疾病、神经损害、脑病、痴呆和死亡。在另一实施方式中，所述对象还可易于发生各种癌症，特别是那些由病毒引起的癌症，例如Kaposi肉瘤和宫颈癌或淋巴瘤。
在另一实施方式中，与HIV感染或病理学有关的或由其导致的病理学的非限制性的实例包括机会性感染(例如细菌、病毒、真菌和寄生虫感染)，例如支气管、气管、肺或食道的烟曲霉菌病、念珠菌病、白色念珠菌病、宫颈癌、球孢菌病、隐球菌病、新型隐球菌病、隐孢子虫病、杆菌性血管瘤病、巨细胞病毒(CMV)、巨细胞病毒视网膜炎、疱疹病毒、肝炎病毒、乳头瘤病毒、组织胞浆菌病、等孢子球虫病、Kaposi肉瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、鸟分枝杆菌病、结核分枝杆菌病、卡氏肺囊虫肺炎、进行性多病灶脑白质病(PML)、沙门氏菌病、弓形虫病、消耗综合征和淋巴样间质性肺炎/肺淋巴结型。HIV感染或病理学的其他症状和病理学(例如，疾病)是本领域已知的，且本发明提供了对它们的治疗。
在另一实施方式中，本发明的疫苗引发抗gC中和抗体。在另一实施方式中，所述抗体能够抑制玫瑰花结形成。在另一实施方式中，所述抗体抑制玫瑰花结形成。
在另一实施方式中，本发明的疫苗引发的免疫应答相对于仅含有gD的疫苗是增强的。在另一实施方式中，使用本发明的佐剂能够增强抗gD免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合能够增强抗gD免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合可进一步增强抗gD免疫应答。
在一个实施方式中，gC遮蔽了中和抗体所针对的病毒糖蛋白上的表位。在另一实施方式中，gE遮蔽了中和抗体所针对的病毒糖蛋白上的表位。
在另一实施方式中，使用本发明的佐剂能够增强抗HSV免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合能够增强抗HSV免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合能够进一步增强抗HSV免疫应答。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原相组合能够增强抗gD免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原这两者相组合能够进一步增强抗gD免疫应答。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原相组合能够增强抗HSV免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原这两者相组合能够进一步增强抗HSV免疫应答。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原以及诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合能够进一步增强抗gD免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与(a)本发明的佐剂、(b)诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原以及(c)诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合能够进一步增强抗gD免疫应答。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原以及诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合能够进一步增强抗HSV免疫应答。在另一实施方式中，通过将gD与(a)本发明的佐剂、(b)诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原以及(c)诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合能够进一步增强抗HSV免疫应答。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的中所用的重组HSV gD蛋白的剂量是20微克/接种。在一个实施方式中，″蛋白质″指的是重组HSV糖蛋白，或在另一实施方式中，指的是它的片段。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500纳克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是750纳克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是低于0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是500纳克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是1.25微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是2.5微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是12.5微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-50微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.01-0.02微克/kg体重(每次注射)。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03-0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04-0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.1微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.1-0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.2-0.3微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.3-0.4微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.4-0.6微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.5-0.8微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.8-1微克/kg。
在另一实施方式中，通过从动物研究推定出人的数据而确定用于人类免疫接种的gD蛋白的剂量。在另一实施方式中，通过使用在人与小鼠的对比研究中发现的有效的蛋白比率而确定gD蛋白的剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶400(本申请实施例中所用的gD-1蛋白与人类免疫接种所采用的gD-2之间的比率)。在另一实施方式中，所述比率是1∶100。在另一实施方式中，所述比率是1∶150。在另一实施方式中，所述比率是1∶300。在另一实施方式中，所述比率是1∶500。在另一实施方式中，所述比率是1∶600。在另一实施方式中，所述比率是1∶700。在另一实施方式中，所述比率是1∶800。在另一实施方式中，所述比率是1∶900。在另一实施方式中，所述比率是1∶1000。在另一实施方式中，所述比率是1∶1200。在另一实施方式中，所述比率是1∶1500。在另一实施方式中，所述比率是1∶2000。在另一实施方式中，所述比率是1∶3000。在另一实施方式中，所述比率是1∶4000。在另一实施方式中，经验性确定用于人类免疫接种的gD蛋白的剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶5000。
在另一实施方式中，总重组gD蛋白(gD-1蛋白和gD-2蛋白)的剂量是上述量之一。在另一实施方式中，采用本发明的佐剂能够获得较低的gD的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合，能够获得较低的gD的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合，能够获得更为较低的gD的有效剂量。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原相组合，能够获得较低的gD的有效剂量(例如，在人类每剂需要10微克，而非20微克)。在另一实施方式中，需要15微克，而非20微克。在另一实施方式中，需要12微克，而非20微克。在另一实施方式中，需要8微克，而非20微克。在另一实施方式中，需要7微克，而非6微克。在另一实施方式中，需要5微克，而非20微克。在另一实施方式中，需要3微克，而非20微克。在另一实施方式中，所述需要量的降低是在此所述的任何量。
在另一实施方式中，通过将gD与本发明的佐剂和诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原这两者相组合能够获得较低的gD的有效剂量。
在另一实施方式中，通过将gD与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合能够获得较低的gD的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gD与(a)本发明的佐剂、(b)诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原和(c)诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合能够获得更为较低的gD的有效剂量。
在另一实施方式中，在本发明的初始免疫接种中使用上述gD剂量之一。在另一实施方式中，上述gD剂量可指的是gD-1、gD-2、或其组合的剂量。每一可能性和每一剂量的gD代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的中所用的重组HSV gC蛋白的剂量20微克/接种。在一个实施方式中，″蛋白质″指的是重组HSV糖蛋白，或在另一实施方式中，指的是它的片段。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是170微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是270微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是350微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是450微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是0.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是30-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-400微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.01-0.02微克/kg体重(每次注射)。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03-0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04-0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.1微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.1-0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.2-0.3微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.3-0.4微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.4-0.6微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.5-0.8微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.8-1微克/kg。
在另一实施方式中，通过从动物研究推定出人的数据而确定用于人类免疫接种的gC蛋白的剂量。在另一实施方式中，通过使用在人与小鼠的对比研究中发现的有效的蛋白比率而确定用于人类的所述剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶400。在另一实施方式中，所述比率是1∶100。在另一实施方式中，所述比率是1∶150。在另一实施方式中，所述比率是1∶300。在另一实施方式中，所述比率是1∶500。在另一实施方式中，所述比率是1∶600。在另一实施方式中，所述比率是1∶700。在另一实施方式中，所述比率是1∶800。在另一实施方式中，所述比率是1∶900。在另一实施方式中，所述比率是1∶1000。在另一实施方式中，所述比率是1∶1200。在另一实施方式中，所述比率是1∶1500。在另一实施方式中，所述比率是1∶2000。在另一实施方式中，所述比率是1∶3000。在另一实施方式中，所述比率是1∶4000。在另一实施方式中，经验性确定用于人类免疫接种的gC蛋白的剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶5000。
在另一实施方式中，总重组gC蛋白(gC-1蛋白和gC-2蛋白)的剂量是上述量之一。在另一实施方式中，采用本发明的佐剂能够获得较低的总重组gC蛋白的有效剂量。
在另一实施方式中，使用本发明的佐剂能够获得较低的gC的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gC与诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原相组合，能够获得较低的gC的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gC与本发明的佐剂和诱导阻断gE的免疫逃避功能的抗体的gE免疫原这两者相组合，能够获得更为较低的gC的有效剂量。
在另一实施方式中，在本发明的初始免疫接种中使用上述gC剂量之一。在另一实施方式中，上述gC剂量可指的是gC-1、gC-2、或其组合的剂量。每一可能性和每一剂量的gC代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物的中所用的重组HSV gE蛋白的剂量20微克/接种。在一个实施方式中，″蛋白质″指的是重组HSV糖蛋白，或在另一实施方式中，指的是它的片段。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是70微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是90微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是110微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是120微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是130微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是140微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是160微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是170微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是180微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是220微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是250微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是270微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是350微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是400微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是450微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是500微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是25微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是22微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是18微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是16微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是14微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是13微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是12微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是11微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是9微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是7微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1.5微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量小于1微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.1微克/kg体重(每次接种)。在另一实施方式中，所述剂量是0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.13微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.12微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.11微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.09微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.07微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量小于0.02微克/kg。
在另一实施方式中，所述剂量是30-60微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-80微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-100微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是50-150微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是100-200微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是200-300微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是300-400微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是1-2微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-3微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是2-4微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是3-6微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是4-8微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-10微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是5-15微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是10-20微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是20-30微克/接种。在另一实施方式中，所述剂量是30-40微克/蛋白/接种。在另一实施方式中，所述剂量是40-60微克/接种。
在另一实施方式中，所述剂量是0.01-0.02微克/kg体重(每次注射)。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.03微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.02-0.04微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.03-0.06微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.04-0.08微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.1微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.05-0.15微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.1-0.2微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.2-0.3微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.3-0.4微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.4-0.6微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.5-0.8微克/kg。在另一实施方式中，所述剂量是0.8-1微克/kg。
在另一实施方式中，通过从动物研究推定出人的数据而确定用于人类免疫接种的gE蛋白的剂量。在另一实施方式中，通过使用在人与小鼠的对比研究中发现的有效的蛋白比率而确定用于人类的所述剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶400。在另一实施方式中，所述比率是1∶100。在另一实施方式中，所述比率是1∶150。在另一实施方式中，所述比率是1∶300。在另一实施方式中，所述比率是1∶500。在另一实施方式中，所述比率是1∶600。在另一实施方式中，所述比率是1∶700。在另一实施方式中，所述比率是1∶800。在另一实施方式中，所述比率是1∶900。在另一实施方式中，所述比率是1∶1000。在另一实施方式中，所述比率是1∶1200。在另一实施方式中，所述比率是1∶1500。在另一实施方式中，所述比率是1∶2000。在另一实施方式中，所述比率是1∶3000。在另一实施方式中，所述比率是1∶4000。在另一实施方式中，经验性确定用于人类免疫接种的gE蛋白的剂量。在另一实施方式中，所述比率是1∶5000。
在另一实施方式中，总重组gE蛋白(gE-1蛋白和gE-2蛋白)的剂量是上述量之一。在另一实施方式中，采用本发明的佐剂能够获得较低的总重组gE蛋白的有效剂量。
在另一实施方式中，使用本发明的佐剂能够获得较低的gE的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gE与诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合，能够获得较低的gE的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gE与本发明的佐剂和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合，能够获得更为较低的gE的有效剂量。
在另一实施方式中，在本发明的初始免疫接种中使用上述gE剂量之一。在另一实施方式中，上述gE剂量可指的是gE-1、gE-2、或其组合的剂量。每一可能性和每一剂量的gE代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，重组gE蛋白的剂量是上述量之一。在另一实施方式中，使用本发明的佐剂能够获得较低的gE的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gE与诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原相组合，能够获得较低的gE的有效剂量。在另一实施方式中，通过将gE与本发明的佐剂和诱导阻断gC的免疫逃避功能的抗体的gC免疫原这两者相组合，能够获得更为较低的gE的有效剂量。每一可能性和每一剂量的gE代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，糖蛋白的″有效剂量″指的是引发在后续攻击过程中明显阻断HSV病毒的免疫逃避功能的抗体所需的剂量。在另一实施方式中，该术语指的是引发在后续攻击过程中有效阻断HSV病毒的免疫逃避功能的抗体所需的剂量。在另一实施方式中，该术语指的是引发在后续攻击过程中明显降低HSV病毒的感染性的抗体所需的剂量。
每一重组糖蛋白的每一剂量及其各种组合代表了本发明的一个单独的实施方式。
用于(例如在人类对象中)测定免疫原的剂量的方法是本领域熟知的，且包括，例如，剂量升级试验。每一方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，将本文所证实的策略用于另一种病毒和/或另一种病原体。在另一实施方式中，使用联合亚单位疫苗，其既含有在感染中起作用的第一蛋白质，也含有一种(多于一种)具有免疫逃避功能的第二蛋白质，由此，所述疫苗引发的针对所述第二蛋白质的抗体阻断免疫逃避功能。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-1疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gC-1的免疫逃避特性的重组gC-1蛋白与佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-1疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gE-1的免疫逃避特性的重组gE-1蛋白与佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-1疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gC-1和gE-1的免疫逃避特性的重组gC-1蛋白、重组gE-1蛋白和佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-2疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gC-2的免疫逃避特性的重组gC-2蛋白与佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-2疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gE-2的免疫逃避特性的重组gE-2蛋白与佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在另一实施方式中，本发明提供用于改进现有的HSV-2疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(1)筛选能够阻断gC-2和gE-2的免疫逃避特性的重组gC-2蛋白、重组gE-2蛋白和佐剂的组合；和(2)加入重组gD蛋白，并将所得疫苗与仅含有佐剂和gD蛋白的疫苗进行比较。
在一些实施方式中，任何本发明的HSV疫苗和用于本发明的方法的HSV疫苗将包含本文所述的任何形式或实施方式中的本发明的HSV蛋白或HSV蛋白的组合。在一些实施方式中，任何所述HSV疫苗和用于所述方法的HSV疫苗将由本文所述的任何形式或实施方式中的本发明的HSV蛋白或HSV蛋白的组合组成。在一些实施方式中，本发明的HSV疫苗将基本上由本文所述的任何形式或实施方式中的本发明的HSV蛋白或HSV蛋白的组合组成。在一些实施方式中，术语″包含″指的是包括其他重组HSV蛋白以及包括本领域已知的其他蛋白质。在一些实施方式中，术语″基本上由...组成″指的是具有特定HSV蛋白或其片段的疫苗。不过，还可包括不直接参与HSV蛋白的使用的其他肽。在一些实施方式中，术语″由...组成″指的是具有本文所述的任何形式或实施方式中的本发明的具体HSV蛋白或片段或HSV蛋白或片段的组合的疫苗。
在另一实施方式中，本发明提供用于治疗HSV-1或其症状或表现的组合物，所述组合物包含本发明的疫苗。
在另一实施方式中，本发明提供用于治疗HSV-2或其症状或表现的组合物，所述组合物包含本发明的疫苗。
在本发明的方法的另一实施方式中，本发明的疫苗仅施用一次。在另一实施方式中，所述疫苗施用2次。在另一实施方式中，所述疫苗施用3次。在另一实施方式中，所述疫苗施用4次。在另一实施方式中，所述疫苗施用至少4次。在另一实施方式中，所述疫苗施用4次以上。在另一实施方式中，所述疫苗被施用于分开的部位，其中将gD与gC或gE分开。在另一实施方式中，所述疫苗以1周的间隔施用。在另一实施方式中，所述疫苗以2周的间隔施用。在另一实施方式中，所述疫苗以3周的间隔施用。在另一实施方式中，所述疫苗以4周的间隔施用。在另一实施方式中，所述疫苗以1个月的间隔施用。
应该理解，本发明的组合物/疫苗和方法同样可用于非HSV疱疹病毒，在一个实施方式中，所述非HSV疱疹病毒包含gD、gE、或gC蛋白，在一个实施方式中，它们与HSV-1的gD、gE、或gC蛋白，或在另一实施方式中，与HSV-2的gD、gE、或gC蛋白具有70％的同源性，在另一实施方式中，具有80％的同源性，在另一实施方式中，具有85％的同源性，在另一实施方式中，具有90％的同源性，在另一实施方式中，具有95％的同源性，在另一实施方式中，具有98％的同源性，而在另一实施方式中，具有100％的同源性。在一个实施方式中，此类疫苗可用于压制、抑制、预防、或治疗癌症，或在另一实施方式中，可用于压制、抑制、预防、或治疗肿瘤。在一个实施方式中，非HSV疱疹病毒包括水痘带状疱疹病毒(VZV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、EBNA、巨细胞病毒(CMV)、和人疱疹病毒-6(HHV-6)。
在另一实施方式中，本发明的重组蛋白与本文前面给出的序列(无论是直接给出还是引用GenBank登录号)具有同源性。所述术语″同源性″、″同源″等，当其涉及任何蛋白或肽时，在一个实施方式中其指的是，在将序列对齐并在必要时引入缺口以达到最大百分比同源性后，且不将保守性取代视为序列相同性的一部分的情况下，候选序列上与相应的天然多肽的残基相同的AA残基的百分比。用于比对的方法和算法是本领域已知的。
在另一实施方式中，采用本领域熟知的方法通过用于序列比对的计算机算法确定同源性。例如，核酸序列同源性的计算机算法分析包括使用已有的任何软件包，例如，BLAST、DOMAIN、BEAUTY(BLAST Enhanced AlignmentUtility)、GENPEPT和TREMBL软件包。
在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于70％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于72％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于75％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ IDNo：1-6的序列的相同性大于78％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQID No：1-6之一的相同性大于80％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQID No：1-6之一的相同性大于82％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于83％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于85％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于87％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于88％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于90％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于92％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于93％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于95％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与选自SEQ ID No：1-6的序列的相同性大于96％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于97％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于98％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性大于99％。在另一实施方式中，″同源性″指的是与SEQ ID No：1-6之一的相同性为100％。
在另一实施方式中，通过确定候选序列的杂交而确定同源性，其中的方法在现有技术中已经公开(见例如，″Nucleic Acid Hybridization″Hames，B.D.，and Higgins S.J.，Eds。(1985)；Sambrook et al.，2001，Molecular Cloning，ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，N.Y.；和Ausubel et al.，1989，Current Protocols in Molecular Biology，Green Publishing Associates and WileyInterscience，N.Y)。在其他实施方式中，在对于编码天然caspase肽的DNA的互补体而言是中等至严格性条件下进行杂交方法。杂交条件为，例如，在以下溶液中温育过夜，42℃，所述溶液包含：10-20％甲酰胺、5X SSC(150mMNaCl，15mM枸橼酸钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5X登哈特溶液、10％硫酸葡聚糖、和20μg/ml变性的剪切的鲑精DNA。
在另一实施方式中，蛋白质和/或肽与本文所述的任何AA序列的同源性可通过本领域熟知的方法确定，这些方法包括免疫印迹分析，或通过计算机算法分析AA序列，采用任何已有软件包以及成熟的方法。这些软件包中的一些包括FASTA、BLAST、MPsrch或Scanps软件包，且在另一实施方式中，例如，使用Smith和Waterman的算法、和/或global/local或BLOCKS算法。每一种用于确定同源性的方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
在一个实施方式中，″变体″指的是如下所述的氨基酸或核酸序列(或在其他实施方式中，指的是生物体或组织)，所述序列不同于群体中的大多数，但仍与共同模式具有足够的相似性，且因此被认为是该群体中的一个，例如剪接变体。在一个实施方式中，所述变体可以是序列保守性变体，而在另一实施方式中，所述变体可以是功能保守性变体。在一个实施方式中，变体可包含1个氨基酸的添加、缺失或取代。在一个实施方式中，变体可包含2个氨基酸的添加、缺失、取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含3个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含4个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含5个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含7个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含10个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含2-15个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含3-20个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。在一个实施方式中，变体可包含4-25个氨基酸的添加、缺失或取代或它们的组合。
在一个实施方式中，″异构体″指的是分子(例如，蛋白质)的这样一种形式，其与同一蛋白质的另一种异构体仅有微小的差异。在一个实施方式中，异构体可由不同但相关的基因产生，或在另一实施方式中，可由同一基因通过替代性剪接而产生。在另一实施方式中，异构体由单核苷酸多态性产生。
在另一实施方式中，本发明的方法和组合物使用嵌合分子，其包含重组HSV蛋白与标签多肽的融合体，所述标签多肽提供被抗标签抗体选择性结合的表位。在其他实施方式中，表位标签被置于该蛋白质的氨基末端或羧基末端，或置于其内部的位置处。在另一实施方式中，使用抗所述标签多肽的抗体来检测此类表位标记形式的重组HSV蛋白的存在。在另一实施方式中，纳入表位标签使得重组HSV蛋白能够通过亲和纯化被容易地纯化，其中使用抗标签抗体或结合表位标签的其他类型的亲和基质。本领域已知多种标签多肽及其相应的抗体。实例包括多组氨酸(poly-his)或多组氨酸甘氨酸(poly-his-gly)标签；流感HA标签多肽及其抗体12CA5(Field et al，MoI.Cell.Biol.，8：2159-2165(1988))；c-myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗体(Evan et al，Molecular and Cellular Biology，5：3610-3616(1985))；和单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky et al，Protein Engineering，3(6)：547-553(1990))。其他标签多肽包括Flag-肽(Hopp et al，BioTechnology，6：1204-1210(1988))；KT3表位肽(Martin et al，Science，255：192-194(1992))；微管蛋白表位肽(Skinner et al，J.Biol.Chem.，266：15163-15166(1991))；和T7基因10蛋白肽标签(Lutz-Freyermuth et al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：6393-6397(1990))。在另一实施方式中，所述嵌合分子包含重组HSV蛋白与免疫球蛋白或免疫球蛋白的特定部分的融合体。构建融合蛋白的方法是本领域熟知的，并可参见例如，LaRochelle et al，J.Cell Biol.，139(2)：357-66(1995)；Heidaran et al，FASEB J.，9(1)：140-5(1995)；Ashkenazi et al，Int.Rev.Immunol.，10(2-3)：219-27(1993)和Cheon et al，PNAS USA，91(3)：989-93(1994)。
在另一实施方式中，本发明提供试剂盒，其包含用于实施本发明的方法的疫苗。在另一实施方式中，本发明提供试剂盒，其包含本发明的疫苗。
在另一实施方式中，″施用″指的是通过注射或其他方式将本发明的组合物直接引入对象。在另一实施方式中，″施用″指的是使对象免疫系统的细胞与疫苗或重组HSV蛋白或它们的混合物相接触。
药物组合物和施用方法
在另一实施方式中，本发明的方法包括施用重组HSV蛋白和药用可接受载体。在另一实施方式中，可通过任何本领域已知的方法将含有疫苗的药物组合物施用于对象，例如通过胃肠外、经粘膜、经皮、肌肉内、静脉内、皮内、鼻内、皮下、腹腔内、脑室内、颅内、或阴道内。在另一实施方式中，通过表皮注射而施用本发明的疫苗，在另一实施方式中，通过肌肉注射，在另一实施方式中，通过皮下注射，而在另一实施方式中，通过呼吸道内粘膜注射。
在本发明的方法和组合物的另一实施方式中，口服施用所述药物组合物，且因此所述药物组合物被配制为适合于口服施用的形式，即，固体或液体制剂。合适的固体口服配制品包括片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、药丸等等。合适的液体口服配制品包括溶液、悬液、分散剂、乳剂、油剂等等。在本发明的另一实施方式中，疫苗被配制为胶囊。在另一实施方式中，本发明的组合物包括硬凝胶化胶囊。
在另一实施方式中，通过静脉、动脉、或肌肉内注射液体制剂而施用所述药物组合物。合适的液体配制品包括溶液、悬液、分散剂、乳剂、油剂等等。在另一实施方式中，所述药物组合物通过静脉施用且因此被配制为适合于静脉施用的形式。在另一实施方式中，所述药物组合物通过动脉内施用且因此被配制为适合于动脉内施用的形式。在另一实施方式中，所述药物组合物通过肌肉内施用且因此被配制为适合于肌肉内施用的形式。
在另一实施方式中，所述药物组合物局部施用于肌体表面且因此被配制为适合于局部施用的形式。合适的局部配制品包括凝胶、软膏、乳膏剂、洗剂、滴剂等等。
在另一实施方式中，所述药物组合物作为栓剂施用，例如直肠栓剂或尿道栓剂。在另一实施方式中，所述药物组合物通过皮下植入药丸而施用。在另一实施方式中，所述药丸在一段时间内提供抗原剂的控制释放。
在另一实施方式中，所述疫苗被置于囊泡例如脂质体内输送。
在其他实施方式中，本发明的方法中使用的载体或稀释剂包括，但不限于，树胶、淀粉(例如玉米淀粉、预胶化淀粉)、糖(例如乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖)、纤维素材料(例如微晶纤维素)、丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸酯)、碳酸钙、氧化镁、滑石粉、或其混合物。
在其他实施方式中，用于液体配制品的药用可接受载体是水性或非水性溶液、悬液、乳剂或油剂。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、和注射用有机酯例如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳剂或悬液，包括盐和缓冲介质。油剂的实例是那些动物、植物或合成来源的油，例如，花生油、大豆油、橄榄油、葵花子油、鱼肝油、其他海鱼油、或来自乳或卵的脂质。
在另一实施方式中，胃肠外载体(用于皮下、静脉、动脉内、或肌肉注射)包括氯化钠溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸盐林格和非挥发性油。静脉载体包括体液和营养补充液、电解质补充液例如那些基于林格葡萄糖的溶液等等。实例为无菌液体，例如水和油，添加或未添加表面活性剂和其他可药用佐剂。通常，水、盐、水性葡萄糖和相关的糖溶液、以及醇例如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体，特别适合于注射用溶液。油剂的实例为那些来自动物、植物或合成来源的油，例如，花生油、大豆油、橄榄油、葵花子油、鱼肝油、其他海鱼油、或来自乳或卵的脂质。
在其他实施方式中，所述组合物还包括粘合剂(例如阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、卡波姆、乙基纤维素、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮)、崩解剂(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸、二氧化硅、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、瓜尔胶、淀粉羟乙酸钠)、各种pH和离子强度的缓冲液(例如Tris-HCl、乙酸、磷酸)、用于防止吸附于表面的添加剂例如白蛋白或明胶、去垢剂(例如吐温20、吐温80、普流尼克F68、胆汁酸盐类)、蛋白酶抑制剂、表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠)、渗透促进剂、增溶剂(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠、丁羟茴醚)、稳定剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、增粘剂(例如卡波姆、胶体二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)、甜味剂(例如阿司帕坦、柠檬酸)、防腐剂(例如硫柳汞、苯甲醇、对羟苯甲酸类)、润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)、助流剂(例如胶体二氧化硅)、成形剂(例如酞酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)、乳化剂(例如卡波姆、羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠)、高分子包衣(例如泊洛沙姆或poloxamines)、包衣和膜形成剂(例如乙基纤维素、丙烯酸盐类、聚甲基丙烯酸酯)和/或佐剂。每一上述赋形药代表了本发明的一个单独的实施方式。
在另一实施方式中，本发明的药物组合物是控释组合物，即，该组合物中的抗原在施用后的一段时间内释放。控释或缓释组合物置于亲脂长效剂(例如脂肪酸、石蜡、油)中的配制品。在另一实施方式中，所述组合物是即时释放组合物，即，该组合物中的所有抗原在施用后立即释放。
在另一实施方式中，所述药物组合物置于控释系统内输送。在另一实施方式中，采用静脉输注、植入型渗透泵、透皮贴剂、脂质体或其他施用方式施用所述药剂。在另一实施方式中，使用泵(参见，Langer，见上；Sefton，CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald et al，Surgery 88：507(1980)；Saudek et al，N.Engl.J.Med.321：574(1989)。在另一实施方式中，使用高分子材料；例如置于微球或置于植入物内。
在另一实施方式中，组合物还包括将活性物质掺入聚合化合物的颗粒制剂内部或上面，例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝胶类等等，或掺入至脂质体、微乳剂、微胶粒、单层或多层囊泡、血影、或球粒体上面。此类组合物将影响物理状态、溶解性、稳定性、体内释放速度、和体内清除速度。
本发明还包括聚合物(例如泊洛沙姆或poloxamines)包衣的颗粒组合物，且化合物偶联于针对组织特异性受体、配体或抗原的抗体，或偶联于组织特异性受体的配体。
本发明还包括通过与水溶性聚合物例如聚乙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚脯氨酸共价附着而修饰的化合物。已知与相应的非修饰的化合物相比，所述修饰的化合物在静脉注射后展现出显著更长的血液半衰期(Abuchowski et al，1981；Newmark et al，1982；和Katre et al，1987)。在另一实施方式中，此类修饰还包括增加所述化合物在水溶液内的溶解性，消除凝集，增强化合物的物理和化学稳定性，并极大地降低化合物的免疫原性和反应性。在另一实施方式中，通过更低频率地施用此类聚合物-化合物加合物或相对于未修饰化合物而言施用较低的剂量，即可实现所需的体内生物学活性。
含有活性成分的药物组合物的制备是本领域熟知的，例如通过混合、粒化、或压片处理。在另一实施方式中，将活性成分在组合物中配制为中性的可药用盐的形式。可药用盐包括酸加成盐(与多肽或抗体分子的游离氨基形成)，其可以是与无机酸形成的，例如盐酸或磷酸，或者是与有机酸形成的，例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等等。所述盐也可以是游离羧基与无机碱和有机碱形成的，无机碱例如氢氧化钠、钾、铵、钙或铁，而有机碱例如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因、等等。
每一上述添加剂、赋形剂、配制品和施用方法代表了本发明的一个单独的实施方式。
应该理解，本发明还涵盖组合物，如本文所述的疫苗那样，其包含一或多种重组单纯疱疹病毒(HSV)蛋白质，所述蛋白质选自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白。
实验详情部分
实施例1：HSV-1gC-1亚单位疫苗可保护抵抗HSV-1感染
材料和方法(实施例1-2)
玫瑰花结抑制试验
用WT HSV-1以感染复数(MOI)为2感染Vero细胞20小时。向感染的细胞加入IgG，1小时，室温。加入C3b包被的绵羊红细胞，1小时，37℃，光学显微镜观察玫瑰花结。计算形成C3b包被的红细胞的玫瑰花结的细胞百分数，如下：(结合了4个或更多个红细胞的细胞数/计数的细胞总数)×100％。C3b包被的玫瑰花结被抑制表明存在阻断C3b结合于gC-1的抗体。
鼠侧腹部模型
5-7周龄的BALB/c或C57B1/6雌性小鼠(Charles River，Wilmington，MA)或C3敲除小鼠被麻醉，将小鼠侧腹部剔毛并化学脱毛。16-20小时后，通过加入10μl含有5×104或5×105PFU的纯化的HSV-1WT病毒并用30号针头的斜面刮擦皮肤而感染小鼠。对接种部位的疾病进行评分：红斑或肿胀但无小水疱为0.5分，而每一单个的小水疱评为1分，最高每日总评分为5。如果病灶融合，则基于病变的大小最高评为5分。带状疱疹样疾病的评分与此类似，不同之处在于最高每日评分为10，因为在更大的受累皮肤面积上能够计数到更多的病灶。对于以HSV-2进行的一些实验(图16A和16B)，评分系统进行了改进，以便区分开疾病谱的严重端的动物，因为HSV-2导致的侧腹部疾病比HSV-1更加严重。在接种部位，评分分为0-3，其中0代表无疾病，1代表发红或孤立的病变，2代表溃疡，而3代表具有组织坏死的区域。在带状疱疹样部位，评分分为0-4，其中0代表无疾病，1代表孤立的病变，2代表融合的病变，3代表溃疡，而4代表具有组织坏死的区域。
疫苗
疫苗含有重组HSV-1 bac-gD-1(306t)(AA 26-306，具有C-末端6His标签)和HSV-1 bac-gC-1片段(AA 26-457，以5His标签修饰)。
结果
gC-1亚单位疫苗的最佳剂量：本实验通过测定抑制C3b结合于gC-1，确定了产生能够阻断免疫逃避的抗gC抗体的gC-1免疫的剂量。小鼠被假免疫或用0.1、1、或10μg的gC-1免疫，并采用玫瑰花结形成试验测试所得血清阻断C3b结合的能力(图1，左侧)。以10μg的gC-1免疫的小鼠产生的抗gC抗体阻断了85％玫瑰花结形成(图1，右侧)。然后以致死量的HSV-1攻击小鼠，并在攻击后3至7天对接种部位和带状疱疹样部位的疾病进行评分(图2A和B)。gC-1免疫每一显著改变接种部位的疾病，但与假免疫小鼠相比带状疱疹样疾病减少(P＜.001)。
攻击后14天对假免疫和gC-1免疫的小鼠的存活率进行评分。10μg gC-1组40％存活，而更低剂量组无存活。因此，以10μg gC-1免疫可产生保护小鼠免于带状疱疹样疾病和死亡的抗体。
实施例2：联合gC-1/gD-1疫苗赋予比仅含gD-1或gC-1的疫苗更优越的保护
gD-1亚单位疫苗的最佳剂量：使用小鼠侧腹部模型来确定部分保护小鼠免于疾病的gD-1剂量，以模拟部分保护性gD-1亚单位疫苗。基于这些研究，选择50ng的gD-1剂量；该剂量在接种部位提供轻微的保护，并提供针对带状疱疹样疾病的中等的保护(结果见图3)。
gD-1和gC-1联合亚单位疫苗：小鼠被假免疫或仅以gD-1(50ng)免疫或以gD-1(50ng)和gC-1(10μg)两者免疫，并以致死量的HSV-1攻击(图3)。在施用gD-1/gC-1联合疫苗的小鼠中，接种部位的疾病严重程度显著降低(P＜0.02)，而带状疱疹样部位疾病被完全预防，与仅gD-1或仅gC-1(图2A和2B)免疫相比，该结果具有显著差异(P＜0.001)。此外，联合疫苗组小鼠的存活率为100％(图4)。
因此，与含有仅gD-1或仅gC-1的疫苗相比，联合gC-1/gD-1疫苗赋予更优越的保护。
实施例3：联合gC-1/gD-1疫苗预防后根神经节感染
材料和方法
感染后5天收集DRG。小鼠被安乐死，并在放大解剖显微镜下鉴定支配接种处皮肤的神经节。取出神经节并在DMEM中匀浆，通过噬斑分析滴定神经节内的病毒。
结果
HSV-1在后根神经节(DRG)内的神经元细胞体内潜伏。为测试以gD-1和gC-1免疫是否预防DRG感染，致死量的HSV-1攻击后5天(峰效价时间)收集DRG。以gD-1和gC-1免疫的小鼠无感染性病毒，而在假免疫或gD-1免疫的小鼠中回收到病毒(图5)。
因此，与仅以gD-1或gC-1免疫相比，联合gC-1/gD-1疫苗更好地保护小鼠免于疾病、死亡和DRG感染。
实施例4：以gD-1和gC-1免疫的小鼠中抗gC-1IgG介导的保护依赖于C3b
材料和方法
侧腹部模型
进行实验证实抗gC-1IgG对小鼠的保护是通过阻断gC-1与C3b之间的相互作用而产生的。通过3次肌注混合了CpG(#1826，Coley PharmaceuticalsGroup)(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)(Accurate Chemicals and ScientificCorp)的5μg的gC-1对小鼠进行免疫。第三次免疫后2周获取血清，免疫印迹显示血清与gC-1蛋白相互作用(结果未显示)，并阻断HSV-1感染的细胞上形成C3b玫瑰花结(见图1)。在蛋白G柱(Hi-TrapTM，Amersham Biosciences，Uppsala，Sweden)上从小鼠血清纯化IgG，并测试其中和抗体活性。抗gD1单克隆抗体DL11(Eisenberg，RJ et al.J.Virol 53：634-644，1985)、抗gC-1单克隆抗体1C8(其结合gC-1上的与C3b相互作用并阻断C3b与HSV-1感染的细胞形成玫瑰花结的结构域)(Judson KA et al.J Virol 77：12639-45，2003)、和非免疫鼠IgG用作对照。将大约80PFU的HSV-1NS株与获取自免疫的小鼠的抗gC-1IgG、或与DL11、1C8或非免疫鼠IgG温育1小时，37℃。然后通过在Vero细胞上的噬斑分析测定病毒效价。
为了测试抗gC-1IgG保护小鼠的能力，以抗gC-1IgG对补体完好的小鼠(C57B1/6)或C3敲除小鼠(C3KO)进行被动免疫，200μg/小鼠，24小时后以5×105HSV-1进行侧腹部感染。评价小鼠的接种部位和带状疱疹样部位的疾病，进行11天。对照包括被动转移1C8(200μg/小鼠)或非免疫鼠IgG(200μg/小鼠)。用于接种部位的疾病的评分系统为：0是无疾病，以及根据接种部位病变的大小评为1-5分。用于带状疱疹样部位的疾病的评分系统为：0是无疾病，每一处病变评为1分，直至最高10分。在实验终点前死亡的动物被赋予研究过程中最后一次评价的分值。
结果
DL11即便在0.1μg/ml仍能高效中和HSV-1，而抗gC-1IgG在100μg/ml(浓度高出3个log10)未能中和HSV-1(图6)。抗gC-1单克隆抗体1C8和非免疫鼠IgG也未能中和HSV-1。小鼠抗gC-1IgG未能中和HSV-1，说明该抗体所提供的保护作用不能归于其中和活性。
图7显示了以抗gC1IgG或单克隆抗gC-11C8对补体完好的C57B1/6小鼠或C3敲除(C3KO)小鼠进行被动免疫的保护作用。以抗gC1IgG或单克隆抗gC-11C8进行被动免疫对接种部位疾病几乎没有影响(与非免疫IgG无统计学差异)；不过，抗gC1IgG或单克隆抗gC-11C8极大减轻了C57B1/6小鼠带状疱疹样部位的疾病(抗gC-1或1C8与非免疫IgG相比，P＜.001)。与此不同，抗gC-1IgG或1C8对C3KO小鼠几乎没有影响(比较抗gC-1或1C8与非免疫IgG的接种部位或带状疱疹样部位，没有统计学差异)。
从这些实验我们得出结论，抗gC-1IgG并不中和HSV-1，在补体完好的小鼠中所检测到的保护作用依赖于补体。这些结果支持图1-5所给出的结果，即，在gD-1免疫中加入gC-1，通过预防gC介导的免疫逃避提高了疫苗的功效。
实施例5：来自多种毒株的gC2保护HSV-2免于受到正常人血清的补体介导的中和作用
材料和方法(实施例5-11)
细胞和病毒
非洲绿猴肾细胞(Vero)生长在DMEM培养基中，补充了10％热灭活的胎牛血清，10mM HEPES(pH 7.3)，2mM L-谷氨酰胺，20μg/ml庆大霉素和1μg/ml两性霉素B(Life Technologies，Rockville，MD)。通过以感染复数0.005感染Vero细胞制备纯化病毒集合物。收集感染后48小时的无细胞病毒上清液，并在5％至70％蔗糖梯度上离心。
HSV-1gC缺失突变体NS-gCnull衍生自NS株，称为NS-gC1null。gC1蛋白编码区被替换为置于HSV-1感染细胞蛋白6(ICP6)早期启动子控制下的β-半乳糖苷酶表达盒(Friedman et al.，1996.J.Virol.70：4253-4260；Goldstein andWeller，1988.J.Virol.62：2970-2977)。野生型HSV-2毒株包括HSV-2(G)、HSV-2(333)、和HSV-2.12，后者是分离自一18岁女性的生殖道病变的低传代HSV-2分离物。HSV-2gC缺失突变体衍生自HSV-2毒株G和毒株333，并分别称为G-gC2null和333-gC2Δ。G-gC2null病毒含有β-半乳糖苷酶基因，其取代了gC2，而333-gC2Δ病毒在gC2中含有130-碱基对的缺失，相应于0.613至0.626图距单位，这导致无gC2蛋白表达。通过以HSV-2.12DNA和表达ICP6::lacZ表达盒的侧翼序列载体共转染Vero细胞而从HSV-2.12构建gC2-null毒株，其中ICP6::lacZ表达盒的侧翼为gC2序列5’端的848bp和gC2序列3’端的738bp，该表达盒取代了gC2蛋白编码区的绝大部分，从起始位点前的-1bp开始并延伸至终止位点前的16bp。产生了重组病毒，并通过蓝斑筛选分离到2.12-gC2null，且在使用前进行三次噬斑纯化。
补体试剂
补体来源是获取自4名健康成年志愿者的HSV-1-非免疫人血清和HSV-2-非免疫人血清(称为正常人血清[NHS])。血液在室温凝固20分钟并在4℃过夜，然后分离血清，分装，-80℃冷冻。通过在Children′s Hospital of Philadelphia的Clinical Virology Laboratory进行HSV酶联免疫吸附测定(ELISA)以及本文所述的病毒中和测定，确认了不存在HSV-1-特异性IgG抗体和HSV-2-特异性IgG抗体。经Hospital of the University of Pennsylvania的Clinical ImmunologyLaboratory测定，来自各供者的血清具有正常的免疫球蛋白浓度。对于供者1，IgA为131mg/dl(正常值为50至500mg/dl)；IgG为984mg/dl(正常值为650至2,000mg/dl)；和IgM为55mg/dl(正常值为40至270mg/dl)。对于供者2，IgA为147mg/dl；IgG为1023mg/dl；和IgM为205mg/dl。对于供者3，IgA为170mg/dl；IgG为905mg/dl；和IgM 237mg/dl。对于供者4，IgA为253mg/dl；IgG为1,140mg/dl；和IgM为155mg/dl。
当指出时，NHS被加热至56℃达30分钟以灭活补体。为了鉴定负责不当中和的补体途径，用10mM EDTA处理NHS以灭活经典途径、甘露聚糖结合型植物凝集素途径(mannan-binding lectin pathway)和替代途径；8mM EGTA和2mM Mg2+处理以灭活经典途径和甘露聚糖结合型植物凝集素途径；以及用100mM D-甘露糖处理以干扰甘露聚糖结合型植物凝集素途径的活化。为了干扰C3活化，用浓度为40μM的小合成肽Compstatin(4W9A；Hook，et al.2006.J.Virol.80：4038-4046；Sahu，et al.1996，J.Immunol.157：884-891；Kase，etal.1999，Immunology 97：385-392；Klepeis，et al.2003，J.Am.Chem.Soc.125：8422-8423)处理NHS，而40μM线性Compstatin用作无活性对照。
耗竭NHS中的IgM和补体成分
通过加入30mM EDTA并将血清通过抗人IgM柱(Sigma，St.Louis，MO)而耗竭NHS中的IgM。IgM纯化重复2次以耗竭90至95％的IgM。用含1mMEDTA的磷酸缓冲盐(PBS)透析血清以降低EDTA浓度，在用于中和实验之前补充1mM Mg2+和2mM Ca2+。
为了耗竭NHS的补体成分C1q、C5、和C6，将针对C1q、C5、或C6制备的绵羊或山羊抗血清的IgG级份以10mg/ml的IgG终浓度偶联于溴化氰-Sepharose(Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)，制备免疫吸附剂柱。浓缩分离的蛋白级份，并用含0.1mM EDTA的PBS透析血清以降低EDTA浓度，并去除叠氮化钠。用透析缓冲液恢复血清的原始体积，使用前补充1mMMg2+和2mM Ca2+。以550μg/ml IgM、100μg/ml C1q、75μg/ml C5、或60μg/mlC6(Sigma，St.Louis，MO)重建补体耗竭的NHS以恢复生理学浓度。
纯化的IgM
用抗IgM柱(Sigma，St.Louis，MO)自NHS纯化IgM。集合含蛋白级份，用PBS在4℃透析，使用50-kDa截断值的膜超速离心进行浓缩，分装后存放于-80℃。
中和测定
纯化的病毒与NHS或与热灭活或EDTA灭活的血清或作为对照的PBS温育1小时，37℃。通过在Vero细胞上进行噬斑分析测定病毒效价。
测定经典补体途径溶血活性
通过将系列成倍稀释的血清与抗体致敏的绵羊红细胞(EA)(Sigma，St.Louis，MO)在96-孔微滴定板内37℃温育45分钟而测定NHS或补体成分耗竭的血清的总溶血补体活性(CH50)。120xg离心3分钟去除完好的EA，上清液转移至新的96-孔板，通过分光光度法在405nm测定溶解EA的百分比。
ELISA测定IgM与G-gC2null病毒的结合
将Dulbecco′s PBS(pH 7.1)中的蔗糖梯度纯化的G-gC2null病毒以2×106PFU/孔加至96-孔High Binding Costar微滴定板(Corning Incorporated，Corning，NY)，温育2小时，室温，以5％(wt/vol)去脂乳4℃过夜封闭。将PBS/0.05％吐温20系列成倍稀释的热灭活的NHS添加至病毒包被的孔或以PBS-吐温中的去脂乳包被的对照孔中，温育1小时，37℃。使用过氧化物酶缀合的山羊F(ab′)2IgG抗人IgMμ-链(Sigma，St.Louis，MO)，以405nm的光密度检测结合的IgM。终点效价为产生大于0.1、且至少是对照孔光密度的2倍的光密度的血清稀释度。
免疫印迹分析
对感染的细胞提取物进行4至15％十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)，转移至Immobilon-P转移膜(Millipore Corp.，Bedford，MA)，与兔抗gC2抗体R81和兔抗VP5抗体反应。
统计学分析
使用曲线下面积(AUC)比较病毒中和百分数。使用Student氏t检验(Microsoft Excel软件)确定P值。概率(P)＜0.05被认为结果具有显著性。
结果
在包括毒株G、333、和2.12在内的多种HSV-2毒株中检查gC2所赋予的保护作用。免疫印迹证实gC2表达于野生型感染的细胞而不是gC2-null感染的细胞(图8A)。将各种病毒与渐增浓度的作为补体来源的NHS温育1小时，37℃，进行中和测定。与PBS的病毒作为对照。与gC2-null病毒相比，所有三种野生型HSV-2病毒均对补体介导的中和作用具有更高的抗性(图8B至D)。用HSV-1野生型和gC1-null病毒得到了类似的结果(图8E)。尽管在NHS浓度为20％时，几乎没有产生或没有产生HSV-2野生型病毒的中和，但333-gCΔ、2.12-gC2null和G-gC2null的效价却分别降低大约25％、75％和85％(图8B至D)。gC2-null病毒对补体中和的升高的易感性在所评价的补体浓度范围内都存在。通常，与gC2-null病毒相比，对野生型病毒的中和要达到类似的水平则需要4倍或更高浓度的NHS。这些结果说明gC2保护病毒免于补体介导的中和作用。
实施例6：gC-null病毒的中和涉及C1q
为了确定C1q，即经典补体途径的第一成分，是否是中和HSV-1或HSV-2gC-null病毒所必需的，自NHS中耗竭C1q，这导致总溶血补体活性降低，而以C1q重建后总溶血补体活性可恢复(图9A)。尽管95％的C1q已经被耗竭，但这种耗竭C1q的血清仍显示出残余的活性，说明相对小量的C1q浓度即足以起始经典补体级联并溶解抗体包被的红细胞。进行中和实验以比较20％NHS、C1q耗竭的NHS、以及C1q重建的C1q耗竭的NHS。作为对照，将病毒与已经被热灭活的20％NHS温育。耗竭C1q的血清没有中和NS-gC1null或G-gC2null，而以C1q重建的血清恢复了中和作用(图9B)。因此，gC-null病毒的中和涉及C1q并通过活化经典补体途径而发生。
实施例7：来自多个供者的NHS中和gC-null病毒
使用4名HSV-1和HSV-2血清阴性的人类供者测定NS-gC1null和G-gC2null的补体中和，以确定对象中的NHS中和是否不同。所有样品在20％NHS均中和了gC-null病毒，而热灭活的NHS未能中和；因此，所有样品显示出补体介导的gC-null病毒中和作用(图10)。
实施例8：gC-null病毒的中和涉及C3活化
C3是所有3种补体途径的成分。高浓度的C3存在于NHS，这使得很难将其耗竭；因此，使用Compstatin抑制C3活化，并确定C3是否是中和gC-null病毒所必需的。Compstatin(4W9A)是小合成肽，其在低浓度即可通过结合C3而干扰补体，防止其活化。在经过20％NHS或以活性(4W9A)或无活性(线性)Compstatin处理的20％NHS处理之后，进行实验以检查中和情况。以未经处理的病毒作为对照。经NHS或以无活性Compstatin处理的NHS处理后，NS-gC1null和G-gC2null病毒被中和(图11)。以活性Compstatin处理的NHS没有降低病毒效价，说明gC-null病毒的中和涉及C3活化。
实施例9：G-gC2nul病毒的中和涉及C5
下一步确定G-gC2null中和是否涉及C5-依赖性的抗体-非依赖性补体中和作用。自NHS耗竭C5降低了总溶血活性，而在C5重建后总溶血活性恢复(图12A)。NS-gC1null和G-gC2null与20％NHS、耗竭C5的血清、和C5重建的血清温育。耗竭C5的血清没有中和病毒，而NHS和重建的血清中和了病毒(图12B)。因此，G-gC2null中和涉及C5。
进一步的研究显示，G-gC1null和G-gC2null病毒的中和不需要活化替代补体途径、甘露聚糖结合型植物凝集素补体途径、或C6(C6结果见图12C和12D)。
实施例10：天然IgM抗体残余中和gC-null病毒
当C1q结合于病毒体表面上的IgM或两个IgG分子时可活化经典补体途径。当C1q直接结合于病毒膜蛋白时也会活化，在人巨细胞病毒和人T细胞亲淋巴病毒中有过这样的报道。研究了天然IgM抗体在介导补体中和中的作用。从NHS中耗竭IgM，这并不导致总溶血补体活性降低，说明经典补体途径成分没有随IgM一起被耗竭(图13A)。在经过20％NHS、耗竭IgM的20％NHS、和IgM-恢复的NHS处理之后，进行实验以比较中和情况。耗竭IgM的血清没有中和NS-gC1null或G-gC2null，而NHS或IgM-重建的NHS中和了这些病毒(图13B)。因此，IgM和补体均残余中和gC-null病毒。
实施例11：IgM抗体结合G-gC2null病毒
采用ELISA测定热灭活的NHS中的IgM与G-gC2null的结合。从20％NHS开始系列成倍稀释的血清与G-gC2null或对照孔温育。检测到来自4个供者中的每一个的NHS中的IgM均结合G-gC2null(图13C-F)。4个供者的终点效价有所不同(供者1，1∶20；供者2和3，1∶320；供者4，1∶80)，这与血清中的IgM浓度有关(供者1，55mg/dl；供者2，205mg/dl；供者3，237mg/dl；供者4，155mg/dl)。因此，IgM结合G-gC2null病毒。
实施例12：鉴定参与Fc受体活性的gE结构域
FcγR(IgG Fc受体)活性和病毒播散是gE的两个功能，这两个功能是由重叠但不同的结构域行使的。HSV-1gE介导病毒在上皮细胞之间播散并在神经元内转移。为了表征HSV FcγR在复发性感染中的作用，使用了一种突变体病毒，其FcγR活性具有缺陷，但播散功能是完好的；即，在gE氨基酸264之后插入了4个AA(ALEG)的HSV-1gE突变体病毒(NS-gE264)。
鼠侧腹部模型中的NS-gE264突变体：鼠侧腹部模型测量病毒播散而不考虑FcγR功能，因为鼠IgG Fc不结合HSV-1FcγR。因此，HSV-1FcγR表型对病毒在小鼠中的毒力没有影响。以来自人或兔的IgG被动免疫小鼠，由此对鼠侧腹部模型加以改进，以便用于评价FcγR功能，这是因为人和兔的IgG的Fc结构域结合HSV-1FcγR。在没有被动免疫的情况下，带状疱疹样疾病可用作病毒播散表型的指标。因此，如果NS-gE264引起类似于WT病毒的带状疱疹样疾病，则播散表型是完好的。NS-gE264没有FcγR，这可由感染NS-gE264的细胞周围没有IgG包被的红细胞形成玫瑰花结这一点证明。在小鼠侧腹部模型中评价NS-gE264的播散表型。
小鼠在侧腹部接种5×105PFU的NS-gE264或拯救NS-gE264，后者恢复了WT gE基因。在感染后(pi)3-7天对动物的带状疱疹样疾病评分，每一病变给予1分，直至每天最高10分。NS-gE264展现出完好的播散表型，因为带状疱疹样疾病评分与突变体和拯救株类似(图14A)。为了评价FcγR活性，以人免疫(抗HSV)IgG(能够通过F(ab′)2结构域结合于HSV抗原，并通过Fc结构域结合于HSV-1FcγR，其阻断IgG Fc活性)或以作为对照的非免疫人IgG(仅能够通过Fc结构域结合于FcγR)对小鼠进行被动免疫。16小时后感染小鼠，并在感染后3-7天评价带状疱疹样疾病。用人抗HSV IgG被动免疫的感染NS-gE264的小鼠出现的疾病少于用人抗HSV IgG被动免疫的感染拯救NS-gE264的小鼠出现的疾病(图14B)。因此，HSV抗体对FcγR突变体比对拯救株更加有效。非免疫人IgG对任一病毒均无作用(图14C)。
因此，NS-gE264具有完好的播散表型，但FcγR表型受损，且因缺乏FcγR导致病毒易于被HSV抗体清除。
实施例13：gC-1造成体内的毒力
在鼠侧腹部模型中，病毒从接种部位播散至DRG内的神经元，复制并播散至邻近的神经元，然后回到皮肤产生带状(带状疱疹样)分布病灶。在补体完好的小鼠中，具有C3b结合缺陷的HSV-1突变体毒株(NS-gCΔC3；Δ275-367)引起的侧腹部接种部位和带状疱疹样部位的病变比WT病毒轻，而在C3KO小鼠中，接种部位和带状疱疹样部位的疾病均与WT病毒相当。
为了确定原发性(急性)感染过程中gC在病毒感染DRG中所起的作用，通过在侧腹部刮擦接种5×105PFU的WT病毒(NS)或NS-gCΔC3而感染Balb/C小鼠，其中NS-gCΔC3是HSV-1突变体病毒，其缺乏gC-1(AA 275-367)且不结合C3b。感染后第3和4天，小鼠被安乐死，收集DRG并滴定组织的感染性病毒(图15)。到第4天，从DRG回收到3个log10值的WT病毒，但没有检测到gC突变体病毒。将NS-gCΔC3的接种效价升高至3×106PFU并在第5天与以5×105PFU接种的NS相比。以较大的量接种时，在DRG中检测到了NS-gCΔC3；但其效价仍比NS低1000倍，说明gC至少提供了增大三个数量级的保护作用，使得病毒能够感染DRG。
因此，在所使用的条件下，补体解释了DRG感染的减少，而gC介导的免疫逃避解释了gC-1促成毒力。
实施例14：gC-2促成HSV-2在体内的毒力
为了确定HSV-2gC在体内保护病毒免遭补体攻击中的作用，补体完好的C57B1/6或C3KO小鼠通过侧腹部刮擦接种5×105PFU WT HSV-2毒株2.12或gC-2null突变体2.12-gCnull，然后在感染后3-7天对接种和带状疱疹样部位疾病评分。改进评分系统以区分疾病谱严重端的动物，因为HSV-2引起的侧腹部疾病比HSV-1更加严重。在接种部位，评分范围是0-3，其中0代表无疾病，1代表发红或孤立的病变，2代表溃疡，而3代表具有组织坏死的区域。在带状疱疹样部位，评分范围为0-4，其中0代表无疾病，1代表孤立的病变，2代表融合的病变，3代表溃疡，而4代表具有组织坏死的区域。在补体完好的小鼠中，2.12-gCnull的疾病评分与2.12相比显著降低(图16A)，但在C3KO小鼠中则与WT病毒相当(图16B)。
因此，HSV-2gC在体内介导了免疫逃避，包括逃避补体。
实施例15：以gE-1免疫诱导的抗体结合gE并阻断gE免疫逃避结构域
材料和方法
细胞培养物和病毒株
COS-1生长在DMEM培养基中，37℃，5％CO2的湿化培养箱，培养基补充了10％热灭活的胎牛血清，20μg/ml庆大霉素和20mM HEPES(pH 7.3)。以HSV-1野生型毒株，即NS，感染细胞。使用非洲绿猴肾(Vero)细胞制备病毒集合物。
构建bac-gE24-224、bac-gE225-398和bac-gE24-409病毒
采用ThermalAce DNA聚合酶(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)从pCMV3-gE中PCR扩增gE AA 24-224、225-398和24-409，构建杆状病毒bac-gE24-224、bac-gE225-398和bac-gE24-409。将6组氨酸-标签掺入终止密码子前方的3′引物中。分别在5′和3′引物上引入BamHl和Pstl序列，并使用快速DNA连接试剂盒(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)将BamHl-Pstl片段克隆入pVT-Bac。这一亚克隆策略将gE24-224、gE225-398和gE24-409序列置于蜜蜂毒素信号序列的立即3′处，并处于杆状病毒多角体蛋白(baculopolyhedrin)启动子的控制下。以pVT-Bac构建体和
Figure G2007800518606D01031
DNA(PharMingen，San Diego，CA)共转染Sf9昆虫细胞(Gibco BRL，Grand Island，NY)，产生bac-gE24-224、bac-gE225-398和bac-gE24-409病毒。
gE24-224、gE225-398和gE24-409的纯化和鉴定
杆状病毒首先在Sf9昆虫细胞中生长传代3次，然后生长在H5昆虫细胞(Gibco BRL)中以便在第4代获得更高产量的蛋白表达。通过免疫印迹测定来自被感染的H5细胞的150ml上清液中的蛋白表达，并用于纯化蛋白。使上清液通过镍柱(QIAGEN Inc.，Valencia，CA)，并以50-250mM咪唑洗脱。使用
Figure G2007800518606D01041
离心过滤装置(Millipore Corp.，Bedford，MA)浓缩洗脱的片段，并在4-15％SDS-PAGE上进行鉴定，使用
Figure G2007800518606D01042
Blue Stain Reagent(Pierce)。纯化蛋白的样品在4-15％SDS-PAGE上电泳，转移至硝酸纤维素膜，使用小鼠抗His标签单克隆抗体(MAb)1BA10(该抗体识别gE序列的AA 103-120)或针对gE AA 1-409的兔多克隆抗体R575进行探测。
以gE片段进行免疫
给5只8-9周龄雌性Balb/C小鼠(Charles River Laboratories，Wilmington，MA)腹腔内注射10μg纯化的gE24-224、gE225-398或gE24-409进行免疫，给3只小鼠注射PBS作为对照。初始免疫使用完全弗氏佐剂，而加强注射使用不完全弗氏佐剂，间隔10至14天。第3-5次免疫后2周收集血清。以纯化的gE24-224、gE225-398或gE24-409(COCALICO Biologicals，Inc.，Reamstown，PA)免疫2只兔子，第4-6次免疫后收集血清。
ELISA检测抗体
以Dulbecco磷酸缓冲盐(DuPBS)(pH 7.1)将纯化的gE24-224、gE225-398和gE24-409片段稀释至2μg/ml，使用200ng包被
Figure G2007800518606D01043
NH 96孔-微滴定板(Nalge Nunc International，Naperville，IL)。包被的板在4℃温育过夜并以DuPBS中的5％(w/v)去脂乳在37℃封闭2小时。IgG在DuPBS和0.1％BSA中稀释至2μg/100μl。在DuPBS和0.01％BSA中制备1∶1000稀释的过氧化物酶(HRPO)-缀合的、亲和纯化的驴抗兔IgG(H+L)或绵羊抗小鼠IgG(H+L)(Amersham Life Science，Piscataway，NJ)。通过加入缓冲液中的1mg/ml ABTS(Roche，Mannheim，Germany)在室温反应10分钟，使用ELISA读板器(Dynatech，Chantilly，VA)测定405nm处的光密度(OD)。
流式细胞术测定
确定抗体是否阻断IgG Fc结合于HSV-1感染的细胞的测定法包括两个部分；首先测定抗体是否结合于HSV-1感染的细胞，然后确定该结合的抗体是否阻断生物素标记的非免疫人IgG结合于HSV-1FcγR。对于抗体结合，以M.O.I为2的野生型病毒感染COS-1细胞16小时，使用细胞消化液(LifeTechnologies Inc.，Rockville，MD)分散细胞，并以0.05U神经氨酸酶(SigmaChemical Co.，St.Louis，MO)处理，后者增强IgG Fc的结合。使用抗小鼠或兔IgG或抗兔IgG F(ab′)2片段的异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的F(ab′)2片段测定IgG抗体与HSV-1感染的细胞表面的结合。以1％多聚甲醛固定细胞并以FACScan流式细胞术(Becton-Dickinson，San Jose，CA)分析。以平均荧光强度(MFI)反映抗体的结合。对于测定阻断IgG结合的测定方法，将神经氨酸酶处理的HSV-1感染的细胞与IgG或F(ab′)2片段温育，然后加入10μg的生物素标记的非免疫人IgG，后者可通过使用抗生蛋白链菌素-R-藻红蛋白(PE)(Sigma)来检测。如下计算阻断百分数：((无阻断抗体的MFI-有阻断抗体的MFI)/无阻断抗体的MFI)x100。
结果
在杆状病毒内产生gE片段。为了确定gE免疫是否能够诱导通过F(ab′)2结构域结合于gE的抗体，制备了3个gE片段，gE24-224、gE225-398和gE24-409，它们几乎跨越了整个gE胞外结构域。gE225-398片段跨越IgG Fc结构域的大部分或者或许是全部IgG Fc结构域。gE24-409含有每一较小片段中所包括的序列。
感染杆状病毒的细胞的上清液产生6-8mg/L的片段gE24-224、gE225-398和gE24-409，它们经镍柱纯化，浓缩至1mg/ml。经
Figure G2007800518606D01051
在SDS-PAGE上染色证实，纯度＞95％。gE24-224和gE24-409片段与抗His MAb、抗gE MAb 1BA10和兔多克隆抗体R575反应。片段gE225-398与抗His MAb、兔多克隆抗体R575反应，且如所预期的那样，不与MAb 1BA10反应，后者识别103和120之间的AA序列。
以杆状病毒gE免疫小鼠。为了确定所引发的抗体是否阻断IgG Fc结合于HSV-1FcγR，以gE24-224、gE225-398、gE24-409免疫小鼠，或小鼠被假免疫，作为对照。以gE24-224和gE225-398第5次免疫之后或以gE24-409第3次免疫之后收集小鼠血清，通过ELISA测定针对相应免疫原的抗体效价。免疫的小鼠产生了与免疫用抗原反应的抗体，假免疫的小鼠则没有。针对gE24-409片段的抗体水平最高(图17)。
使用小鼠抗体阻断HSV-1FcγR。感染后16小时进行流式细胞术测定以评价抗体是否结合感染HSV-1的细胞上表达的gE。来自用gE24-224和gE24-409免疫的小鼠的抗体结合于gE(图18A)，而来自用gE225-398免疫的小鼠的抗体展现出较低水平的结合。不同于人类或兔的IgG，鼠IgG Fc不结合HSV-1FcγR；因此，小鼠抗体的结合只能是通过IgG F(ab′)2结构域介导的。因此，感染细胞上表达的gE结合由gE24-224和gE24-409引发的抗体的F(ab′)2结构域，且与gE225-398相比，结合程度较低。在所采用的统条件下，要么是表达于感染细胞上的gE225-398表位的构象不同于杆状病毒片段内的gE构象，要么是该表位在感染的细胞上是隐藏的。
测试来自免疫的小鼠的未稀释血清阻断生物素标记的非免疫人IgG与HSV-1FcγR结合的能力。由gE24-224和gE24-409引发的抗体阻断了HSV-1FcγR(阻断中位值分别为76％和80％)，而针对gE225-398的抗体显示出几乎没有阻断(阻断中位值为17％)(图18B)。因此，针对gE24-224和gE24-409的抗体通过它们的F(ab′)2结构域结合gE，并阻断IgG Fc与HSV-1FcγR的结合。
实施例16：确定HSV-1gD和gC的有效免疫剂量和方案
材料和方法
Balb/C小鼠腹腔接种3剂gD(10纳克/剂)加或不加gC(10微克(μg)/剂)或3剂gD(50纳克/剂)加或不加gC(10μg/剂)，以14天的间隔注射。首次接种使用弗氏完全佐剂，后两次接种使用弗氏不完全佐剂。假接种的小鼠(0gD或0gC)仅接受佐剂。三次接种后取血清，通过ELISA分析抗gD和抗gC抗体应答。如实施例所述进行玫瑰花结抑制试验。
结果
接种50ng的gD但不接种gC产生了强抗gD抗体应答，当10μg的gC与gD一起施用时，应答降低(图19)。为了增强抗gD应答，给小鼠接种第4剂50ng gD，无gC。两周后收集血清，分析针对gD和gC的抗体应答。第4剂gD显著增强了抗gD抗体应答(图20A，最右侧条形图)。此外，第4剂之后诱导的gC抗体能够阻断C3b结合，因为相对于假免疫组而言，对玫瑰花结形成的抑制达到85-90％(图20B)，进一步证实了该疫苗方案的效果。
因此，以重组gC+第二HSV抗原进行接种，继以单独接种第二抗原，是一种诱导抗HSV抗体应答的有效方法。或者，gC蛋白与所述第二抗原可施用于分开的部位或在分开的时间施用。
实施例17：使用CpG+铝盐作为gD+gC的佐剂
材料和实验方法
给小鼠接种3次(间隔14天)，每次接种2μg的gC(浓度比前面使用弗氏佐剂的情况低5倍)，每次接种50μg的CpG(ODN no.1826)，以及铝盐((氢氧化铝凝胶佐剂)Accurate Chemical and Scientific Corp.，Westbury NY，11590)(每μg接种蛋白质使用该铝盐25μg，最终的量为50μg铝盐)。第2和3次接种后收集血清。
结果
测试gC+铝盐+CpG寡核苷酸疫苗引发抗gC抗体的能力。经测定，疫苗在第2和3次接种后均引发强抗体应答(图21A)。此外，抗血清显示出能够有效阻断C3b结合部位形成玫瑰花结(图21B)。
因此，重组HSV蛋白与铝盐+CpG寡核苷酸疫苗相组合的免疫接种是引发抗gC抗体的有效方式。此外，与使用其他佐剂相比，重组HSV蛋白与铝盐+CpG寡核苷酸联合使得能够以较低的抗原剂量实现有效的免疫接种。
实施例18：联合gC-2/gD-2疫苗比仅含有gD-2的疫苗产生更优越的保护
材料和方法
如实施例2-3就gC-1/gD-1疫苗所述的那样，给小鼠施用含有gC-2和gD-2(例如，具有C-末端6His标签的gC-2的AA 27-426和具有C-末端6His标签的gD-2的AA 26-306)的联合疫苗。如实施例14所述评价毒力。给阴道内感染5×105HSV-2毒株2.12的小鼠施用250ng的gD-2和5μg的gC-2。对小鼠的存活率和阴道病变进行评分。攻击后1-11天进行阴道拭子以检查病毒效价，并在攻击后第5天评价免疫是否减少了神经节的HSV-2感染。
结果
比较联合gC-2/gD-2疫苗和仅含有gD-2或仅含有gC-2的疫苗赋予抗HSV-2保护作用的能力。联合疫苗产生的保护作用优于gD-2或gC-2疫苗。
实施例19：联合gC-1/gD-1疫苗预防感染HSV-1的对象的复发性感染
在小鼠侧腹部模型中评价联合gC-1/gD-1疫苗(例如实施例2-3所述的疫苗)预防复发性HSV-1感染(例如通过潮红的出现而评价)的能力。感染后，以gC-1/gD-1疫苗或仅含有gC-1或仅含有gD-1的疫苗对小鼠进行多达5次免疫，或对小鼠进行假免疫，然后监测复发性感染。认为联合gC-1/gD-1疫苗产生的保护作用优于gC-1或gD-1疫苗。
实施例20：联合gC-2/gD-2疫苗预防感染HSV-2的对象的复发性感染
评价联合gC-2/gD-2疫苗(例如实施例2-3所述的疫苗)预防复发性HSV-2感染(例如通过潮红的出现而评价)的能力。感染后，以gC-2/gD-2疫苗或仅含有gC-2或仅含有gD-2的疫苗对小鼠进行多达5次免疫，或对小鼠进行假免疫，然后监测复发性感染。认为联合gC-2/gD-2疫苗产生的保护作用优于gC-2或gD-2疫苗。
实施例21：gE-1/gD-1疫苗具有免疫原性并具有抗HSV-1感染的保护性
材料和方法
如实施例2-3和13就gC-1/gD-1疫苗所述的那样，给小鼠施用联合gE-1/gD-1疫苗(例如，具有C-末端6His标签的gE-1的AA 24-409和具有C-末端6His标签的gD-1的AA 26-306)，并评价其免疫原性。
结果
比较联合gE-1/gD-1疫苗与仅含有gE-1或仅含有gD-1的疫苗的免疫原性。联合疫苗的免疫原性优于gE-1或gD-1疫苗。随后，比较疫苗赋予抗HSV-1的保护作用的能力。认为联合疫苗产生的保护作用优于gE-1或gD-1疫苗。
随后，比较联合gE-1/gD-1/gC-1疫苗与gE-1/gD-1和gD-1/gC-1疫苗的免疫原性。认为gE-1/gD-1/gC-1联合疫苗的免疫原性优于gE-1/gD-1和gD-1/gC-1疫苗。随后，比较疫苗赋予抗HSV-1的保护作用的能力。认为gE-1/gD-1/gC-1联合疫苗产生的保护作用优于gE-1/gD-1和gD-1/gC-1疫苗。
实施例22：gE-2/gD-2亚单位疫苗具有抗HSV-2感染的保护作用
比较联合gE-2/gD-2疫苗(例如，具有C-末端6His标签的gE-2的AA24-409和具有C-末端6His标签的gD-2的AA 26-306)与仅含有gE-2或仅含有gD-2的疫苗的免疫原性。认为联合疫苗的免疫原性优于gE-2或gD-2疫苗。随后，比较疫苗赋予抗HSV-2的保护作用的能力。认为联合疫苗产生的保护作用优于gE-2或gD-2疫苗。
随后，比较联合gE-2/gD-2/gC-2疫苗与gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗的免疫原性。认为gE-2/gD-2/gC-2联合疫苗的免疫原性优于gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗。随后，比较疫苗赋予抗HSV-2的保护作用的能力。认为gE-2/gD-2/gC-2联合疫苗产生的保护作用优于gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗。
实施例23：HSV-2gC-2亚单位疫苗在鼠侧腹部和阴道HSV-2模型中具有抗HSV-2感染的保护作用
侧腹部模型
以0.5、1、2、或5μg的gC-2与CpG(50μg小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)通过腓肠肌肌注(IM)免疫Balb/C小鼠，或以CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg)但无gC-2进行假免疫，IM进行3次，间隔为两周。第3次免疫后14天，通过在剔毛并化学脱毛的侧腹部刮擦接种4×105PFU的HSV-2毒株2.12攻击小鼠。记录0-14天的存活率，并在3-14天对动物接种部位和带状疱疹样部位的疾病严重程度进行评分(N＝5只小鼠/组)。用于接种部位和带状疱疹样部位的疾病的评分系统与抗gC-1被动转移试验中所述一样。
阴道模型
Balb/C小鼠在腓肠肌肌注CpG(#1826，Coley Pharmaceuticals Group)(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)(Accurate Chemicals)进行假免疫，或以1、2、或5μg的gC-2与CpG和铝盐免疫，间隔为两周。各组的5只动物均免疫3次，一组例外，其中以5μg的剂量免疫2次[标记为5μg(2x)，以区别于标记为5μg(3x)的一组]。第3次免疫后第9天或5μg(2x)免疫后第23天，给小鼠IP注射
Figure G2007800518606D01091
(Pfizer提供的150mg注射用长效醋酸甲羟孕酮的水性悬液；2mg/小鼠)以便同步化发情周期。5天后，以2×105PFU的HSV-2毒株2.12阴道内攻击小鼠。
观察动物在攻击后0-14天的死亡率，以及攻击后3-14天的疾病评分。在用于阴道病变的评分系统中，下列各项每项1分：发红或肿胀、排出物、阴道和肛周区域脱毛、和坏死。每日最高的评分为4分。在实验终点前死亡的动物被赋予研究过程中最后一次评价的分值。从1-11天每日进行阴道拭子检查。将拭子置于1ml DMEM中，通过在Vero细胞上进行噬斑分析测定病毒效价。
结果
对于侧腹部接种，各个gC-2免疫剂量与假免疫小鼠相比均保护小鼠抵抗死亡。不过，仅在5μg剂量组(所测试的最大剂量)观察到100％的存活率(图22)。
图23说明，与假免疫小鼠相比，经0.5μg、1μg、2μg和5μg的gC-2免疫的小鼠在攻击后3-14天接种部位和带状疱疹样部位的疾病评分降低，其中5μg剂量组带状疱疹样部位的疾病评分降低最多(比较剂量组与假免疫小鼠接种部位和带状疱疹样部位的曲线下面积，P＜.01)。
对于阴道内接种，假免疫小鼠全部死亡，而以gC-25μg(3x)免疫提供了最佳的抗死亡保护作用。所有以gC-25μg(2x)免疫的小鼠均死亡，不过，与假免疫小鼠相比，死亡的时间倍延迟。与假免疫小鼠相比，以1或2μg免疫3次的小鼠存活时间略长，死亡较少，但保护作用没有gC-25μg(3x)组那么好(图24)。
图25给出了以2×105PFU的HSV-2毒株2.12阴道内攻击的假免疫小鼠或gC-2免疫的小鼠的疾病评分。假免疫组的所有小鼠在第8天时均已经死亡；因此，将末次评价的评分用于第9-14天。以1μg或2μggC-2免疫几乎没有提供对抗阴道疾病的保护作用，而以gC-25μg(3x)免疫提供了明显的保护作用，P＜.01。
攻击后1-11天每日获取阴道拭子(图26)。所示结果为每组3只小鼠的平均效价。以gC-2免疫使得攻击后第1天的阴道效价降低了1-2个log10，但在随后的天数中则几乎没有作用。
实施例24：HSV-2gD-2亚单位疫苗在鼠侧腹部和阴道HSV-2模型中具有抗HSV-2感染的保护作用
材料和方法
侧腹部模型
Balb/C小鼠被假免疫或如前面就gC-2所述的那样通过3次腓肠肌IM进行免疫，不同之处在于gD-2的剂量为10、25、50、或100ng，并与CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)联合。以4×105PFU/10ml的HSV-2毒株2.12攻击小鼠。每组接种5只小鼠。
阴道模型
以50、100、或250ng的gD-2IM 3次(3x)或以250ng的gD-2IM 2次(2x)免疫Balb/C小鼠。gD-2与CpG(50μg/小鼠)和铝盐(25μg/μg蛋白)联合，然后接种2×105PFU的HSV-2毒株2.12。以
Figure G2007800518606D01111
处理小鼠，并如前面就gC-2免疫所述那样进行攻击，评价存活率和疾病严重程度。每一组包括5只动物。攻击后1-11天每日获取阴道拭子，每组3只小鼠。
结果
对于侧腹部接种，在以100ng gD-2免疫的小鼠中观察到最高的存活率，然后是以50ng免疫的小鼠(图27)。
以10ng和25ng剂量的gD-2免疫对接种部位或带状疱疹样部位疾病提供了轻微的保护；但50ng和100ng剂量组的疾病评分显著降低(假免疫组与50ng剂量组在接种部位和带状疱疹样部位相比P＜.01，假免疫组与100ng剂量组在接种部位和带状疱疹样部位相比P＜.001)(图28)。
对于阴道内接种，假免疫组小鼠在第9天后无一存活(图29)。以50ng、100ng和250ng的gD-2免疫2次的组提供了一些保护作用；而250ng 3x提供了完全的抗死亡保护作用。
仅以gD-2250ng 3x免疫的小鼠得到了显著的抗阴道疾病保护作用(假免疫与gD-2250ng 3x的曲线下面积相比P＜0.001)(图30)。
以gD-2250ng 3x免疫使得攻击后1-7天的阴道病毒效价降低了～1log10(P＜0.001，与假免疫小鼠相比)，而其他剂量与假免疫小鼠相比作用较小(p值无显著差异)(图31)。
本实验揭示了能够保护小鼠免于HSV-2介导的死亡以及在HSV-2的侧腹部和阴道模型中保护小鼠免于接种部位和带状疱疹样部位疾病的gC-2(5μg)和gD-2(250ng)免疫剂量。
实施例25：测试人抗gC-2抗体阻断C3b结合于gC-2的能力
采用ELISA方法确定gC-2疫苗(例如实施例2-3所描述的那些)引发的人抗体是否阻断C3b结合于gC-2。以400ng纯化的C3b包被96-孔板过夜，4℃。将Bac-gC2(426t)蛋白(gC-2AA 27-426)(300ng)与来自用bac-gC2(426t)免疫的人的IgG温育1小时，4℃。将IgG-gC-2混合物加至C3b包被的3个复孔中，使用兔抗gC-2IgG检测结合的gC-2。
实施例26：CpG寡核苷酸使得较小剂量的重组HSV糖蛋白成为可能
测试CpG ODN是否能够使得较小剂量的HSV糖蛋白成为可能。给小鼠施用10μg的gC-1(例如按照前面实施例所述)，并与2μg gC-1、10μg gC-1+ODN 1826、和2μg gC-1+ODN 1826比较它们诱导产生阻断gC-1的免疫逃避的抗体的能力。预期CpG ODN降低抑制免疫逃避所需的HSV gC的剂量。
实施例27：在感染HIV的对象中由HSV糖蛋白gC-和gE-介导的免疫逃避
材料和方法
血清分离
从University of Pennsylvania Center for AIDS Research的Clinical CoreLaboratory取得来自不同HIV疾病阶段(CD4计数＜200/μl，200-500/μl，＞500/μl)的HIV对象的血清。HerpeSelectTM 1和2ELISA IgG(Focus Technologies，Cypress，CA)是一种基于gG的测定法，可检测类型特异性IgG抗体，通过该测定法检测血清中针对HSV-1和HSV-2的抗体。对象中75％为男性；56％为非洲裔美国人，35％为高加索人，7％为西班牙人，2％为其他；平均年龄41岁。HIV感染患病风险因素包括：51％为男性同性恋性行为者，5％为静脉吸毒者，41％为异性恋，3％未知。HIV血清阴性血清取自参与GlaxoSmithKlineHSV-2gD2疫苗临床试验的健康志愿者。入选对象为在接受gD2疫苗或仅佐剂(安慰剂组)之前对HIV、HSV-1和HSV-2血清阴性。
IgG纯化
使用HiTrapTM蛋白G柱根据生产商的说明(Amersham Biosciences，Uppsala，Sweden)从血清中纯化患者的IgG。集合含有蛋白质的级份，用PBS透析，4℃，浓缩、分装并存放于-20℃。兔IgG纯化自免疫前(pre-immune)兔血清或纯化自接种了纯化的杆状病毒蛋白gB、gD、或gH/gL的兔。
经典补体途径溶血活性(CHW)测定
测定HIV对象(CD4T-细胞计数＜200/μl、200-500/μl和＞500/μl)和未感染HIV的对照的血清总溶血补体活性(CH50)。将系列稀释的血清与抗体致敏的绵羊红细胞在96-孔微滴定板中温育1小时，37℃。将板120Xg离心3分钟，上清液转移至新的板中，以分光光度法在405nm测定溶血程度。
抗体和补体中和测定
将大约105噬斑形成单位(PFU)的纯化的病毒与IgG、HSV 1+/2-血清、以EDTA处理以便灭活补体的HSV 1+/2-血清、或PBS温育1小时，37℃。通过在Vero细胞上进行噬斑分析来确定残留的病毒效价。根据当病毒与PBS和EDTA处理的血清(仅抗体)、或PBS和无EDTA的血清(抗体和补体)温育时的效价差来计算抗体单独介导的或抗体和补体介导的中和作用。
结果
在入选Center for AIDS Research Clinical Core数据库的前133个对象中测试血清中针对HSV-1和HSV-2的抗体，从这些对象可获得血清和CD4T-细胞计数以便鉴定出共感染HSV-1(HSV 1+/2-)的HIV对象。总体而言，39％的CD4T-细胞计数＞500/μl，28％200-500/μl，33％＜200/μl。69％为HSV-1血清阳性(41％HSV 1+/2+和28％HSV 1+/2-)，而64％为HSV-2血清阳性(41％HSV 1+/2+和23％HSV 1-/2+)。8％的对象为HSV-1和HSV-2两者血清阴性。选择HSV 1+/2-对象的血清进行进一步的研究。
测定了没有感染HIV的HSV 1+/2-对象或具有不同HIV疾病阶段的HIV/HSV-1共感染的对象的总溶血性血清补体(CH50)水平(图32A)。即便是病情严重的HIV/HSV-1共感染的对象也保持了血清总溶血性补体水平。
随后，使用经EDTA处理以灭活补体的1％血清来测定抗体介导的中和作用。在所有HIV疾病阶段，包括CD4T细胞＜200/μl的对象，抗体中和了WT病毒和gC/gE突变体病毒(图32B，灰色条形)。
使用1％血清和活性补体(无EDTA处理)比较了抗体和补体在中和WT病毒和gC/gE突变体病毒方面的作用。在HIV阴性对照和所有CD4T-细胞计数水平的HIV感染对象中，对gC/gE突变体病毒的中和作用均高于WT病毒(图32B，黑色条形)。这些结果是出乎预料的，因为先前的研究报道了gC和gE通过抑制补体活化而抑制病毒的中和(Lubinski et al.，Seminars in Cell&Developmental Biology 9：329-37；Nagashunmugam et al.，J Virol 72：5351-9)。因此，进行了进一步的研究以评价gC和gE通过何种其他机制介导免疫逃避。
实施例28：病毒糖蛋白上的HSV gC和gE表位通过阻断抗体接近参与病毒进入的糖蛋白而之增强免疫逃避效应
材料和方法
细胞和病毒
非洲绿猴肾细胞(Vero)生长在DMEM培养基中，其中补充了10％热灭活的胎牛血清，2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES(pH 7.3)，20μg/ml庆大霉素和1μg/ml两性霉素B(Life Technologies，Rockville，MD)。以2-5的感染复数感染Vero细胞制备纯化的病毒集合物。收集感染后24小时的无细胞病毒上清液离心至5％-70％蔗糖梯度上。分离含病毒级份并以含Ca2+和Mg2+的Dulbecco磷酸缓冲盐(PBS)透析，分装、存放于-70℃。
WT毒株HSV-1NS是低传代临床分离物，得自一名被感染的儿童。先前已经描述了来自该NS毒株的突变体病毒NS-gCΔC3、NS-gE339和双突变体NS-gCΔC3，gE339。gC突变体病毒NS-gCΔC3缺失了氨基酸275至367，导致不能结合C3b。gE突变体病毒NS-gE339在gE氨基酸339处具有4个氨基酸插入，导致不能结合IgG Fc。gC/gE双突变体病毒NS-gCΔC3，gE339在一个病毒中含有gC和gE的两种突变。
抗体和补体中和测定
大约105噬斑形成单位(PFU)的纯化的病毒与集合人IgG(Michigan StateHealth Laboratories)温育或使用针对纯化的杆状病毒蛋白gB、gC、gD、gH/gL、或gI的兔抗体。使用杆状病毒表达的gI氨基酸24-264(HM，未发表)作为抗原在兔中产生抗gI抗体。
免疫印迹和光密度测定法分析
大约2×106PFU的纯化的病毒进行4-15％SDS-PAGE，转移至Immobilon-P转移膜(Millipore Corp.，Bedford，MA)，并使用针对gB、gC、gD、gE、gH/gL、gI和VP5的多克隆兔抗体进行检测。使用过氧化物酶缀合的山羊抗兔IgG和增强化学发光法(Amersham Pharmacia，Piscataway，NJ)显色初级抗体。使用ScanMaker i900(Microtek Lab Inc.，Carson，CA)进行光密度测定法分析来比较蛋白质水平。
病毒ELISA
大约106PFU的纯化的WT或NS-gCΔC3，gE339病毒稀释于50μl PBS，加至
Figure G2007800518606D01151
高结合性96-孔板中，4℃温育过夜。作为对照，一些孔与50μl无病毒的PBS温育。以含5％乳和0.05％吐温20的PBS室温封闭孔2小时。制备封闭缓冲液中的抗gB、gD、gH/gL的纯化兔IgG或免疫前兔IgG系列稀释物，并以逐渐降低的浓度(从2ug至0.015ug，溶于50μl的封闭缓冲液)添加。将抗体在室温温育1小时，以含0.05％吐温20的PBS洗涤3次，与1∶1,000稀释于封闭缓冲液中的过氧化物酶缀合的驴抗兔IgG(Amersham Bioscience)温育30分钟。板用含0.05％吐温20的PBS洗涤两次并用PBS洗涤一次，然后加入ABTS底物(Roche)，25分钟后在405nm读板。在一些实验中，将来自鸡的抗gD血清用于病毒ELISA。用杆状病毒-gD构建体免疫鸡并加强4次，获得的血清作为IgY抗体的来源。通过在gD包被的板上进行ELISA，测定到该血清对gD具有高抗体效价。
结果
在纯化的WT病毒和gC/gE突变体病毒的免疫印迹上进行光密度分析以评价糖蛋白的相对浓度，这些糖蛋白包括病毒进入所必需的gB、gD、gH/gL。将HSV-1壳体蛋白VP5纳入分析，以确保加入到胶上的WT病毒和gC/gE突变体病毒颗粒具有可比性。检测到WT病毒和gC/gE突变体病毒上表达的HSV-1糖蛋白的相对浓度存在一些差异(图33)；不过，gC/gE突变体上的gB、gD和gH/gL的浓度略高于WT病毒，这提示更高的中和活性不是由突变体病毒上较低浓度的靶糖蛋白引起的。
图34A示意了HSV-1FcγR可干扰抗体中和的可能的机制。通过结合IgG的Fc结构域，WT病毒上的HSV-1FcγR可防止F(ab′)2结构域与其靶抗原相互作用(WT模型的左侧)。与此不同，gC/gE病毒中的gE突变消除了FcγR活性，这可促进F(ab′)2结构域与抗体靶的相互作用，导致更高的中和作用。
为了评价这种可能性，从HIV阴性人类供者集合IgG，并用于比较FcγR活性具有缺陷的gE突变体病毒(NS-gE339)和具有完好的FcγR但在gC中具有突变的突变体病毒(NS-gCΔC3)的中和作用。病毒与PBS或100μg集合人IgG(作为HSV抗体的来源)温育。抗体同等有效地中和FcγR完好的病毒和FcγR缺陷型病毒，而且对gC/gE双突变体病毒(NS-gCΔC3，gE339)甚至具有更高的活性(图34B)。由于gC/gE双突变体病毒比任一其从中衍生而来的单突变体病毒被更快地中和，我们认为gC和gE的突变均促成gC/gE突变体病毒中和抗体具有更高的易感性。
我们随后评价了gC和gE突变是否将其他病毒糖蛋白上以前被遮蔽的表位暴露于中和抗体，这可能是由病毒体包膜上的糖蛋白构象改变所导致的。进行实验以比较在与选择性地与gB、gC、gD、gH/gL、或gI相互作用的兔抗体温育后，WT病毒和gC/gE突变体病毒的中和情况。如所预料的那样，针对gB、gD、gH/gL的抗体中和了病毒，因为这些糖蛋白是病毒进入所必需的；不过，这些病毒之间的差异并不显著。针对gC和gI的抗体不是进入所必需的，它们未能中和任一病毒。
由于图32B和34B中所使用的人血清含有针对多种糖蛋白的抗体，我们使用针对gB、gD和gH/gL的抗体的组合来进行中和实验(图35B)。当组合使用时，检测到对gC/gE突变体的中和作用比对WT病毒更强，这提示gC和gE中的突变暴露了多种糖蛋白上的中和表位。无论是否将gH/gL抗体纳入中和反应，WT病毒和gC/gE突变体病毒之间的差异均相当，说明被封闭的表位主要位于gB和gD上。
使用WT病毒和gC/gE突变体病毒进行病毒ELISA以进一步评价gC/gE突变体病毒上的突变是否暴露了gB、gD和gH/gL上的表位。与WT病毒相比，gC/gE突变体病毒结合更高浓度的gD(图36A)、gB(图36B)和gH/gL(图24C)抗体。使用鸡抗gD抗体进行额外的实验。鸡产生的IgY抗体不具有结合Fc受体的结构域。这些抗体被用于评价病毒FcγR在ELISA实验中的潜在影响。将鸡抗gD抗体加至WT病毒或gC/gE突变体病毒后，检测到对gC/gE突变体的结合强于WT病毒(图36D)。这些结果说明抗体结合的差异的产生不依赖于Fc与病毒FcγR的结合，因此支持这样一种假设，即gC和gE阻断病毒糖蛋白上对于进入所必需的表位，特别是gB和gD上的表位。
gC和gE中的突变使得抗体能够接近病毒糖蛋白，包括gB、gD和gH/gL，这提示WT病毒上的gC和gE遮蔽了病毒糖蛋白上表位，使得中和抗体不能接近(见模型图37)。
HIV对象在HIV感染过程中保持高水平的中和抗体和补体。因此，通过亚单位疫苗阻断gC和gE上的免疫逃避结构域可允许内源性抗体和补体更有效地抵抗HIV患者中的HSV。
Figure IYZ000006019438100011
Figure IYZ000006019438100031
Figure IYZ000006019438100041
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Figure IYZ000006019438100111
Figure IYZ000006019438100121

Claims (23)

1.一种疫苗，其具有：
a.重组单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白D(gD)蛋白或其包含SEQ ID NO:1的AA26-306的免疫原性片段；
b.重组HSV糖蛋白，其选自：
(i)糖蛋白C(gC)蛋白或其片段，其中所述片段包含SEQ ID NO:3的AA26-457或SEQ ID NO:4的AA27-426；
(ii)重组HSV糖蛋白E(gE)蛋白或其片段，其中所述片段包含SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:6的AA24-409、AA24-224或AA225-398；或
(iii)(i)和(ii)的组合，
以及佐剂。
2.权利要求1的疫苗，其中所述佐剂包含含CpG的核苷酸分子、铝盐佐剂、或其组合。
3.权利要求1的疫苗，其中所述重组HSV gD蛋白或其免疫原性片段的量为2-50微克/剂。
4.权利要求1的疫苗，其中所述重组HSV gC蛋白或其片段的量为0.5-100微克/剂。
5.权利要求1的疫苗，其中所述重组HSV gE蛋白或其片段的量为2-100微克/剂。
6.权利要求1的疫苗，其中所述重组HSV蛋白是重组HSV-1蛋白。
7.权利要求6的疫苗，还具有重组HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白选自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
8.权利要求1的疫苗，其中所述重组HSV蛋白是重组HSV-2蛋白。
9.权利要求8的疫苗，还具有重组HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白选自gD1蛋白、gC1蛋白、和gE1蛋白。
10.权利要求1的疫苗在制备一种用于在对象中诱导抗HSV免疫应答的试剂盒中的用途。
11.权利要求10的用途，其中所述试剂盒还包括加强疫苗，其中所述加强疫苗(a)包括所述重组HSV gD蛋白或所述的其免疫原性片段；且(b)不包括重组HSV gC蛋白或所述的其片段。
12.权利要求11的用途，其中所述重组HSV gD蛋白或其免疫原性片段在所述加强疫苗中的量是2-50微克/剂。
13.权利要求1的疫苗在制备一种用于治疗、压制、抑制对象的HSV感染或降低HSV感染的发生率的药物中的用途。
14.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
15.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
16.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是原发性HSV感染。
17.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是原发性HSV感染之后的潮红、复发或HSV唇疱疹。
18.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是HSV脑炎。
19.权利要求13的用途，其中所述HSV感染是HSV新生儿感染。
20.权利要求13的用途，其中所述对象感染了HIV。
21.权利要求13的用途，其中所述降低HSV感染的发生率包括预防HSV感染复发。
22.权利要求13的用途，其中所述压制HSV感染包括减轻HSV感染复发的严重程度。
23.权利要求13的用途，其中所述降低HSV感染的发生率包括降低HSV感染复发的频率。
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