JPH09313174A - 耐熱性グルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】補酵素ＮＡＤＰに対する特異性が高く、耐熱性
の優れた新規なグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−
ゼを得ること。 【解決手段】ペディオコッカス属に属し、補酵素ＮＡＤ
Ｐに対する特異性が高く耐熱性の優れたグルコ−ス−６
−リン酸デヒドロゲナ−ゼ生産能を有する微生物を栄養
培地に接種培養して、該培養物より該酵素を分離採取す
る。 【効果】従来補酵素ＮＡＤＰに対する特異性の高いグル
コ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼは耐熱性を示さ
ず、反対に耐熱性を示すものは補酵素ＮＡＤＰと共に補
酵素ＮＡＤに対しても特異性が高いため、反応系に測定
誤差を招来する副産物ＮＡＤＨが生成する欠点を有して
いる。本酵素はＮＡＤＰに対してのみ特異性を有するた
め反応系にＮＡＤＨの副産がなく、また耐熱性を有する
ため温度による利用範囲の制限を受けることもない。そ
して、臨床検査の分野で生体成分であるグルコ−ス、グ
ルコ−ス−６−リン酸、ヘキソキナ−ゼ、クレアチンキ
ナ−ゼ等を精度よく分析することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規かつ有用なグル
コ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ（以下、Ｇ６ＰＤ
Ｈということがある）、特に酸化型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドホスフェイト（以下ＮＡＤＰとい
う）に特異的であるが酸化型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド（以下ＮＡＤという）には作用しない性質
を有し、しかも耐熱性を有するグルコ−ス−６−リン酸
デヒドロゲナ−ゼ（以下本酵素ということがある）及び
その製造法に関する。本酵素は、臨床分野において生体
成分であるグルコ−ス、グルコ−ス−６−リン酸、ヘキ
ソキナ−ゼ、クレアチンキナ−ゼ等の定量分析試薬、診
断試薬として有用である。

【０００２】

【従来の技術】グルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−
ゼは動植物界に広く分布し、動物組織では副腎皮質、
脾、授乳中等に、また微生物では酵母、ロイコノストッ
ク・メセンテロイデス、アゾトバクタ・ビネランジ−、
シュ−ウドモナス・フルオレッセンス等にその存在が知
られている（「酵素ハンドブック」、赤堀四郎監修、朝
倉書店、１９８２年１２月１日）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら従来知ら
れているグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼはそ
の殆どが耐熱性がなく、４５℃、３０分間処理において
は、処理前の酵素活性に対して半分以下の残存活性とな
り、５０℃、３０分間処理においては、その殆どが失活
してしまうため、利用温度範囲が限定される欠点を有し
ている。一方６０℃、３０分間処理において、処理前の
酵素活性に対し８０％以上の残存活性を有する耐熱性グ
ルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼが知られている
（特公平３−９９５）が、この酵素は、ＮＡＤＰと共に
ＮＡＤに対しても特異性が高いため、以下に詳述するよ
うに反応系に測定誤差を招来する副産物が生成する欠点
を有している。

【０００４】即ち、臨床検査の分野では、生体成分にデ
ヒドロゲナ−ゼ（脱水素酵素）とＮＡＤＰ（酸化型）を
反応させ、酸化還元反応を利用して、該ＮＡＤＰをＮＡ
ＤＰＨ（還元型）に転換し、該ＮＡＤＰＨを波長３４０
ｎｍにおける吸光度で測定することにより、生体成分を
定量する方法が通常用いられている。例えば生体内に存
在するグルコ−ス−６−リン酸を測定する場合、これに
ＮＡＤＰとグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼを
反応させ、ＮＡＤＰＨの増加を波長３４０ｎｍで測定す
る方法が通常用いられている。しかしながら、この方法
に使用されるグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ
が、ＮＡＤＰに対してばかりでなくＮＡＤ（酸化型）に
対しても特異的である場合には、該デヒドロゲナ−ゼが
生体内に存在するＮＡＤ（酸化型）にも作用して、酸化
還元反応によりＮＡＤＨ（還元型）を副生する。この副
生するＮＡＤＨは、ＮＡＤＰＨと同一波長の吸収を有す
るため、ＮＡＤＰＨの正確な定量ができず、そのため目
的とする生体内のグルコ−ス−６−リン酸の定量誤差を
招来するという欠点を有する。このようなことから、グ
ルコ−ス−６−リン酸の定量にはＮＡＤＰには特異的に
作用するがＮＡＤに対しては作用しない、すなわちＮＡ
ＤＰに特異的な補酵素要求性を有する酵素が望まれてい
た。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこのような
観点から、ＮＡＤＰに特異的で、しかも耐熱性の優れた
性質を有するグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ
を求めて鋭意研究を続けた結果、ペディオコッカス属に
属する１菌株が上記の性質を有するグルコ−ス−６−リ
ン酸デヒドロゲナ−ゼを生産する能力を有することを見
出し、本発明を完成した。即ち、本発明は５０℃、３０
分間処理において、処理前の酵素活性に対して９０％以
上の残存活性を有し、且つ次の理科学的性質（１）〜
（６）を有する耐熱性グルコ−ス−６−リン酸デヒドロ
ゲナ−ゼである。 （１）作用：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸＋ＮＡＤＰ⁺
←→Ｄ−グルコノ−Ｓ−ラ クトン−６−リン酸＋ＮＡ
ＤＰＨ＋Ｈ⁺ （２）基質特異性：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸に特異
的で、またＮＡＤＰに特異的であるがＮＡＤには作用し
ない。 （３）至適ｐＨ：７．５〜９．０ （４）至適温度：６０℃ （５）ｐＨ安定性：６．０〜９．５ （６）分子量：１７８，０００（ゲル濾過法） また本発明はペデイオコッカス属に属し、５０℃、３０
分間処理において、処理前の酵素活性に対して９０％以
上の残存活性を有し、且つ前記した理化学的性質（１）
〜（６）を有する耐熱性グルコ−ス−６−リン酸デヒド
ロゲナ−ゼ生産能を有する微生物を、栄養培地に接種培
養し、該培養物から該グルコ−ス−６−リン酸デヒドロ
ゲナ−ゼを得ることを特徴とする耐熱性グルコ−ス−６
−リン酸デヒドロゲナ−ゼの製造法である。

【０００６】

【発明の実施の態様】以下本発明を詳細に説明する。本
発明に使用する微生物としては、ペデイオコッカス属に
属し、５０℃、３０分間処理において、処理前の酵素活
性に対して９０％以上の残存活性を有し、且つ前記した
理化学的性質（１）〜（６）を有する耐熱性グルコ−ス
−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ生産能を有する微生物で
あれば野性株、変異株のいずれも使用することができ
る。本発明に用いる微生物の好適な例としてはペディオ
コッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）ＩＦＯ ３８９２が挙げられ
る。なお、この菌株は公知微生物であって、財団法人
発酵研究所（ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＦＯＲ ＦＥＲＭＥ
ＮＴＡＴＩＯＮ，ＯＳＡＫＡ）に寄託されている。

【０００７】本発明に使用する培地組成としては使用菌
株が資化しうる炭素源、窒素源、無機物、その他必要な
栄養素を適量含有するものであれば、合成培地、天然培
地、半合成培地等のいずれも使用できる。また公知の培
地、例えば「Ｍ−１７培地」等を用いてもよい。

【０００８】上記培地組成として、炭素源としてはグル
コ−ス、サツカロ−ス、澱粉、グリセロ−ルリン酸２ナ
トリウム等が、窒素源としては塩化アンモニウム、硝酸
ナトリウム、イ−ストエキス、ポリペプトン、肉エキ
ス、トリプトン、ソイトン等が、無機物としてはＭｇＳ
Ｏ₄等が、その他必要な栄養素としては、各種ビタミ
ン、アスコルビン酸等が挙げられる。

【０００９】培養は静置培養あるいは深部攪拌培養など
微生物が生育できる環境であれば良く、好ましくは通気
を抑えた状態が良い。培養温度は通常２３〜４０℃の範
囲、好ましくは３０℃付近、ｐＨは５〜１０の範囲、好
ましくは６．０〜８．５に制御するのが良い。これら以
外の条件でも、菌株が生育すれば実施することができ
る。

【００１０】培養期間は通常１〜４日間行い、菌体内に
耐熱性グルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼが蓄積
される。

【００１１】本酵素の精製法は一般に使用される精製法
を用いればよい。例えば、培養後、遠心分離により菌体
を回収した後、この菌体を緩衝液に懸濁した後、本酵素
の抽出操作を行なう。抽出操作は、超音波、ガラスビ−
ズ、フレンチプレス等を用いる機械的な破砕処理、界面
活性剤処理、リゾチ−ムなどによる溶菌処理を行い、本
酵素を菌体外に抽出して粗酵素溶液を得、精製操作を行
なう。精製操作は、粗酵素溶液を公知の硫酸アンモニウ
ムや芒硝等のを用いる塩析法、塩化マグネシウムや塩化
カルシウム等を用いる金属凝集法、プロタミン等の凝集
法、ＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）セルロ−ス、Ｃ
Ｍ（カルボキシメチル）セルロ−ス等のイオン交換クロ
マト法及びゲル濾過法（ＨＰＬＣ）などを、単独で又は
組合わせて行なう。

【００１２】このようにして得られる本酵素の理化学的
性質及び活性測定法は、以下に示す通りである。 （理化学的性質）５０℃、３０分間処理において、処理
前の酵素活性に対して９０％以上の残存活性を有し、且
つ次の理科学的性質（１）〜（６）を有する耐熱性グル
コ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ （１）作用：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸＋ＮＡＤＰ⁺
←→Ｄ−グルコノ−Ｓ−ラ クトン−６−リン酸＋ＮＡ
ＤＰＨ＋Ｈ⁺ （２）基質特異性：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸に特異
的で、またＮＡＤＰに特異的であるがＮＡＤには作用し
ない。 （３）至適ｐＨ：７．５〜９．０ （４）至適温度：６０℃ （５）ｐＨ安定性：６．０〜９．５ （６）分子量：１７８，０００（ゲル濾過法）

【００１３】（活性測定法） （試薬） Ａ ５５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．８
（３．３ｍＭのＭｇＣｌ₂を含む） Ｂ ６００μＭ ＮＡＤＰ水溶液 Ｃ ０．１Ｍグルコ−ス−６−リン酸水溶液 Ｄ 酵素希釈液（０．１％牛血清アルブミンを含む５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液 ｐＨ７．８）

【００１４】（手順） １ 下記反応混液をキュベット（ｄ＝１．０ｃｍ）に調
製し、３０℃で約５分間予備加温する。 ２．７ｍｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．８） ０．１ｍｌ ＮＡＤＰ水溶液 ０．１ｍｌ グルコ−ス−６−リン酸水溶液 ２ 酵素溶液０．１ｍｌを添加し、混和後水を対照に３
０℃に制御された分光光度計で３４０ｎｍの吸光度変化
を４〜５分間記録し、その初期直線部分から１分間当り
の吸光度変化を求める（△ｔｅｓｔ）。盲検は酵素溶液
の代わりに酵素希釈液を０．１ｍｌ加え、上記と同様に
操作を行なって１分間当りの吸光度変化を求める（△ｂ
ｌａｎｋ）。

【００１５】（計算式） Ａ＝６．２２×１．０×０．１（ｍｌ） Ｂ＝△ＯＤ／ｍｉｎ（△ｔｅｓｔ−△ｂｌａｎｋ）×
３．０（ｍｌ）×希釈倍数

【００１６】本酵素はＮＡＤＰに対する特異性が高く、
かつ優れた耐熱性と溶液安定性を示し、臨床分野におい
て生体成分であるグルコ−ス、グルコ−ス−６−リン
酸、ヘキソキナ−ゼ、クレアチンキナ−ゼ等の定量分析
試薬、診断試薬として好適に用いることができる。

【００１７】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に示
す。 実施例 １ （「Ｍ−１７培地」の調製）β−グリセロ−ルリン酸２
ナトリウム ２０ｇ、Ｄ−グルコ−ス １０ｇ、トリプ
トン ５ｇ、ソイトン ５ｇ、肉エキス ５ｇ、イ−ス
トエキス ２．５ｇ、アスコルビン酸 ０．５ｇ、Ｍｇ
ＳＯ₄７Ｈ₂Ｏ ０．２５ｇ、を水に溶解、５Ｎ−ＨＣｌ
又は５Ｎ−ＮａＯＨにてｐＨ７．０に調整し、水で１ｌ
に調製した。同培地４０ｍｌを綿栓付き太試験管に移
し、オ−トクレ−ブにて１２０℃、２０分間の加熱殺菌
を行ない、室温まで放冷し、培地を調製した。

【００１８】（微生物の培養・菌体の回収）この培地
に、ペディオコッカス・ペントサセウス ＩＦＯ ３８
９２株を、一白金耳接種し、３０℃で２日間静置培養し
て、同微生物の種培養液を調製した。一方、容量２５リ
ットルのガラス容器に前記で調製した培地１８リットル
を入れ、１２０℃、２０分間の加熱殺菌を行い、室温ま
で放冷したものを２個用意し、それぞれに、前記で調製
した種培養液４０ｍｌを接種し、３０℃で２日間静置培
養した。培養後、遠心分離により菌体を回収した後、こ
の菌体を緩衝液Ａ（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液
ｐＨ７．８、５ｍＭ ＥＤＴＡ含有）にて菌体を洗浄し
た。この洗浄菌体を、再び緩衝液Ａに懸濁し、菌体懸濁
液を得た。

【００１９】（本酵素の精製） （第一精製工程）上記菌体懸濁液に、終濃度が６．２５
重量％となるようにリゾチ−ムを添加し、室温にて２時
間放置後、リン酸アンモニウムを終濃度で０．２５Ｍと
なるように加え、さらに２時間放置し、菌体を溶菌させ
た。溶菌処理後の懸濁液を８０００ｒｐｍで３０分遠心
分離し、上澄液を回収することにより、粗酵素液８３５
ｍｌ（活性１．３９ｕ／ｍｌ、総活性約１１６０ｕ、蛋
白量２７５０ｍｇ）を得た。

【００２０】（第二精製工程）上記粗酵素液全量に４６
８．４ｇの硫酸アンモニウムを徐々に加え、完全に溶解
させた後、４℃で一晩静置した。沈殿を遠心分離で回収
し、前述の緩衝液Ａに溶解させ、ホロファイバ−（旭メ
ディカル社製）を用いて濃縮しながら、緩衝液Ａにて希
釈し、混在する硫酸アンモニウムを除去した酵素液６４
０ｍｌ（活性１．６６ｕ／ｍｌ、総活性１０６０ｕ、蛋
白量２２６０ｍｇ、回収率９１％）を得た。

【００２１】（第三精製工程）緩衝液Ａであらかじめ平
衡化したイオン交換カラム（Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅｆ
ａｓｔ ｆｌｏｗ；ファルマシア社製）に上記酵素液を
通じ、緩衝液Ａでカラムを洗浄後、塩化ナトリウムの０
〜０．５Ｍの直線濃度勾配により、目的のグルコ−ス−
６−リン酸デヒドロゲナ−ゼの活性画分を溶出した。こ
の活性画分をホロファイバ−で濃縮後、緩衝液Ａを用い
脱塩し、酵素液１０１０．０ｍｌ（活性０．３７０ｕ／
ｍｌ、総活性３７０ｕ、蛋白量９７．８ｍｇ、回収率３
２％）を得た。

【００２２】（第四精製工程）脱塩処理後の酵素液を緩
衝液Ａで平衡化したＢｌｕｅ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（フ
ァルマシア社製）カラムに供した。カラムを緩衝液Ａに
て洗浄後、塩化ナトリウムの０〜０．６Ｍの直線濃度勾
配により吸着画分を溶出した。溶出液を分画し、本酵素
の活性画分を回収し、前述と同様に濃縮、脱塩して、酵
素液２０４ｍｌ（活性２．１７ｕ／ｍｌ、総活性４４１
ｕ、蛋白量４．５９ｍｇ、回収率３８％）を得た。

【００２３】（第五精製工程）上記酵素液を緩衝液Ａで
平衡化した２’５’ＡＤＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ（ファル
マシア社製）カラムに供し、５ｍＭのＡＭＰを含む緩衝
液Ａにて洗浄後、０．４４ ｍＭのＮＡＤＰを含む緩衝
液Ａにて吸着画分を溶出した。溶出液を分画し、本酵素
の活性画分をホロ ファイバ−及びセントリコン−１０
（アミコン社製）を用いて濃縮し、酵素液５３ｍｌ（活
性２．９７ｕ／ｍｌ、総活性１５７ｕ、蛋白量０．７２
ｍｇ、回収率１４％）を得た。

【００２４】（第六精製工程）上記酵素液を０．３Ｍの
塩化ナトリウムを含む緩衝液Ａにて平衡化したＴＳＫ−
ｇｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ（東ソ−社製）を用いたゲル
濾過ＨＰＬＣに供し、酵素液８ｍｌ（活性１３．８ｕ／
ｍｌ、総活性１１０ｕ、蛋白量０．３２ｍｇ、回収率
９．４％）を得た。本酵素の収量は０．３２ｍｇであ
り、比活性は約３４５ｕ／ｍｇであった。

【００２５】（本酵素の理化学的性質：単一性）上記の
方法により得られた酵素標品はＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動による分析を行なったところ、電気泳
動的に単一であることが判明した。また、この酵素標品
をＴＳＫ−ｇｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ（東ソ−社製）を
用いたゲル濾過ＨＰＬＣにより分子量を求めたところ１
７８０００であることが判明した。

【００２６】（補酵素要求性）この酵素標品（本酵素）
は、ＮＡＤＰに対しては特異的に作用しそのＫm値は、
７．２×１０^-6Ｍであり 、一方ＮＡＤに対しては作用
しないことが判明した。 また、この酵素標品は、グル
コ−ス−６−リン酸に作用するが、Ｄ−グルコサミン−
６−リン酸、Ｄ−フルクト−ス−６−リン酸、Ｄ−マン
ノ−ス−６−リン酸、Ｄ−グルコ−ス−１−リン酸、Ｄ
−ガラクト−ス−６−リン酸、６−ホスホグルコン酸及
びグルコ−スには作用しない。本酵素はＮＡＤＰに特異
的であるがＮＡＤには作用しないため、反応系にＮＡＤ
が含まれていても、反応系に測定誤差を招来する副産物
の生成がなく、生体成分の定量分析ができるという、酵
素的に非常に有利な特徴を備えている。

【００２７】（至適ｐＨの測定）前述の「活性測定法」
において、「Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液 ｐＨ７．８」を
用いる代わりに「Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液 ｐＨ７．８
〜９．５」、「リン酸緩衝液 ｐＨ６．０〜８．０」、
「ＨＥＰＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０〜８．０」、「ＴＡＰ
Ｓ緩衝液 ｐＨ８．０〜９．０」、「ＭＥＳ緩衝液 ｐ
Ｈ５．５〜７．０」、「Ｂｉｓ Ｔｒｉｓ Ｐｒｏｐａ
ｎｅ緩衝液 ｐＨ６．５〜９．０」、及び「炭酸緩衝液
ｐＨ９．０〜１１．０」を用いる以外は同様にして本
酵素の活性を測定した。その結果を図１に示す。なお、
活性の測定結果は相対値で示した。図１の結果から、本
酵素の至適ｐＨは、７．５〜９．０であることが判る。

【００２８】（ｐＨ安定性）本酵素を、「ＭＥＳ緩衝液
ｐＨ５．５〜７．０」、「Ｂｉｓ Ｔｒｉｓ Ｐｒｏ
ｐａｎｅ緩衝液 ｐＨ６．５〜９．０」、及び「炭酸緩
衝液 ｐＨ９．０〜１１．０」に溶解し３０℃で１時間
保持後、その残存活性を測定した。その結果を図２に示
した。図２の結果から、本酵素のｐＨ安定性は、６．０
〜９．５であることが判る。

【００２９】（熱安定性）本酵素を、酵素希釈液（０．
１％牛血清アルブミンを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝液 ｐＨ７．８）で１０容量倍に希釈溶解し、こ
の溶液を２０℃、３０℃、４０℃、４５℃、５０℃、５
５℃、６０℃の各温度において３０分間熱処理後、その
残存活性を測定した。その結果を図３に示した。図３の
結果から、本酵素は至適ｐＨの緩衝液中５０℃、３０分
間処理において、処理前の酵素活性に対して９０％以上
の残存活性を有していることが判る。

【００３０】

【実施例２】 （本酵素と市販の酵素の熱安定性の試験例）実施例１で
調製した本酵素と比較のため公知のグルコ−ス−６−リ
ン酸デヒドロゲナ−ゼとを用い、熱安定性の比較試験を
行なった。公知のグルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ
−ゼとしては、ベ−リンガ−社製酵素（ロイコノストッ
ク属由来）、シグマ社製酵素（トルラ属由来）、オリエ
ンタル酵母社製酵素（酵母由来）、同（ロイコノストッ
ク属由来）を用いた。熱安定性の試験は、各種酵素標品
を終濃度で１５００ｕ／ｌになるように１００ｍＭイミ
ダゾ−ル緩衝液（ｐＨ６．６、２．０ｍＭ ＮＡＤＰを
含む）に溶解し、４５℃で所定時間熱処理を行い、２０
分毎にその残存活性を測定した。その結果を図４に示
す。

【００３１】また、本酵素と公知酵素との特徴を比較対
照して、調べた結果を表１に示す。

【００３２】 表１ （本酵素と公知酵素との特徴比較一覧表） 補酵素要求性 耐熱性 特 徴 ＮＡＤＰ ＮＡＤ 耐熱性を有するため 利用温度範囲が広い。 本酵素 ＋ − ＋ 酵素反応系にＮＡＤ が含まれていても利 用できる。 シグマ社製 耐熱性がないため、 酵素（トルラ属由来） ＋ − − 利用温度範囲が制約 を受ける。 オリエンタル酵母社製 酵素（酵母由来） ＋ − − 同上。 ベ−リンガ−社製 酵素（ロイコノス トック属由来） ＋ ＋ − 同上。 オリエンタル酵母社製 酵素（ロイコノス トック属由来） ＋ ＋ − 同上。 特公平３−９９５記載 耐熱性を有するため の酵素（ラクト 利用温度範囲が広い バチルス属由来） ＋ ＋ ＋ 酵素反応系にＮＡＤ 由来 が含まれると利用で きない。

【００３３】図３（本酵素の熱安定性を示す図）、図４
（本酵素と市販酵素の熱安定性を示す図）及び表１（本
酵素と公知酵素との特徴比較一覧表）の結果から、本酵
素は耐熱性を有するため利用温度範囲が広いことが判
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】本酵素の至適ｐＨを示す図。

【図２】本酵素のｐＨ安定性を示す図。

【図３】本酵素の熱安定性を示す図。

【図４】本酵素と市販酵素の熱安定性の比較一覧図。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】５０℃、３０分間処理において、処理前の
   酵素活性に対して９０％以上の残存活性を有し、且つ次
   の理化学的性質（１）〜（６）を有する耐熱性グルコ−
   ス−６−リン酸デヒドロゲナ−ゼ （１）作用：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸＋ＮＡＤＰ⁺
   ←→Ｄ−グルコノ−Ｓ−ラ クトン−６−リン酸＋ＮＡ
   ＤＰＨ＋Ｈ⁺ （２）基質特異性：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸に特異
   的で、またＮＡＤＰに特異的であるがＮＡＤには作用し
   ない。 （３）至適ｐＨ：７．５〜９．０ （４）至適温度：６０℃ （５）ｐＨ安定性：６．０〜９．５ （６）分子量：１７８，０００（ゲル濾過法）
2. 【請求項２】ペデイオコッカス属に属し、５０℃、３０
   分間処理において、処理前の酵素活性に対して９０％以
   上の残存活性を有し、且つ次の理化学的性質（１）〜
   （６）を有する耐熱性グルコ−ス−６−リン酸デヒドロ
   ゲナ−ゼ生産能を有する微生物を、栄養培地で培養し、
   該培養物から該グルコ−ス−６−リン酸デヒドロゲナ−
   ゼを得ることを特徴とする耐熱性グルコ−ス−６−リン
   酸デヒドロゲナ−ゼの製造法。 （１）作用：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸＋ＮＡＤＰ⁺
   ←→Ｄ−グルコノ−Ｓ−ラ クトン−６−リン酸＋ＮＡ
   ＤＰＨ＋Ｈ⁺ （２）基質特異性：Ｄ−グルコ−ス−６−リン酸に特異
   的で、またＮＡＤＰに特異的であるがＮＡＤには作用し
   ない。 （３）至適ｐＨ：７．５〜９．０ （４）至適温度：６０℃ （５）ｐＨ安定性：６．０〜９．５ （６）分子量：１７８，０００（ゲル濾過法）