JPH09271282A - 根端培養によるコチョウラン苗の製造法 - Google Patents
根端培養によるコチョウラン苗の製造法Info
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- JPH09271282A JPH09271282A JP8104743A JP10474396A JPH09271282A JP H09271282 A JPH09271282 A JP H09271282A JP 8104743 A JP8104743 A JP 8104743A JP 10474396 A JP10474396 A JP 10474396A JP H09271282 A JPH09271282 A JP H09271282A
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 コチョウランのＰＬＢ誘導における不安定性
を解消して、実用的で安定的なコチョウランのＰＬＢ誘
導方法を提供すること。 【解決手段】 無菌的に調製したコチョウランの成長中
の根を先端より、１〜５ｍｍの長さに切断して培養用根
端を作成し、当該培養用根端をＰＬＢ誘導培地にて無菌
的に培養してＰＬＢを誘導せしめ、当該ＰＬＢを増殖培
地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再分化させ
ることを特徴とするコチョウラン苗の製造法。
を解消して、実用的で安定的なコチョウランのＰＬＢ誘
導方法を提供すること。 【解決手段】 無菌的に調製したコチョウランの成長中
の根を先端より、１〜５ｍｍの長さに切断して培養用根
端を作成し、当該培養用根端をＰＬＢ誘導培地にて無菌
的に培養してＰＬＢを誘導せしめ、当該ＰＬＢを増殖培
地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再分化させ
ることを特徴とするコチョウラン苗の製造法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、根端培養によるコ
チョウラン苗の製造法に関し、詳しくはコチョウランク
ローン苗を大量、かつ安定的に製造する方法に関する。
チョウラン苗の製造法に関し、詳しくはコチョウランク
ローン苗を大量、かつ安定的に製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】コチョウランは、ラン科の植物の中で最
も注目されている園芸植物の一つである。近年、植物を
栽培するにあたり、クローン増殖による苗の大量生産が
盛んになってきている。クローン苗生産の初期段階であ
るプロトコーム様球体（ＰＬＢ）の誘導は、従来より行
われている葉片培養法の他、花茎腋芽培養法や根端培養
法（各方法については以下を参照：M.TANAKA 1987. STU
DIES ON THE CLONAL PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THR
OUGH IN VITRO CULTURE. MEMOIRS OF FACULTY OFAGRICU
LTURE, KAGAWA UNIVERSITY. NO.49: 1-85; S.ICHIHASHI
1992. MICROPROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH TH
E CULTURE OF LATERAL BUDS FROM YOUNGFLOWER STALKS.
LINDLEYANA. 7(4): 208-215; 小林光子，小松田美津
留，米内貞夫 1990.ファレノプシスの根端培養による大
量増殖、園芸学雑誌59別2: 664-671）が現在行われてい
る。
も注目されている園芸植物の一つである。近年、植物を
栽培するにあたり、クローン増殖による苗の大量生産が
盛んになってきている。クローン苗生産の初期段階であ
るプロトコーム様球体（ＰＬＢ）の誘導は、従来より行
われている葉片培養法の他、花茎腋芽培養法や根端培養
法（各方法については以下を参照：M.TANAKA 1987. STU
DIES ON THE CLONAL PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THR
OUGH IN VITRO CULTURE. MEMOIRS OF FACULTY OFAGRICU
LTURE, KAGAWA UNIVERSITY. NO.49: 1-85; S.ICHIHASHI
1992. MICROPROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH TH
E CULTURE OF LATERAL BUDS FROM YOUNGFLOWER STALKS.
LINDLEYANA. 7(4): 208-215; 小林光子，小松田美津
留，米内貞夫 1990.ファレノプシスの根端培養による大
量増殖、園芸学雑誌59別2: 664-671）が現在行われてい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、既知の根端培
養法（小林光子，小松田美津留，米内貞夫 1990.ファレ
ノプシスの根端培養による大量増殖、園芸学雑誌59別2:
664-671）あるいは他の培養法を用いてＰＬＢを誘導す
る過程では、品種，交配種あるいは材料等によって誘導
率が低かったり、誘導できなかったりすることがある。
このようなＰＬＢ誘導率の不安定性のため、しばしば大
量に生産できない品種がある。したがって、ＰＬＢの誘
導効率を向上させるためには、品種間差と材料間差を克
服する初期培養方法の確立が必要である。既知の根端培
養法におけるＰＬＢ誘導の不安定性の原因は、主に材料
のＰＬＢ形成源である根端分裂組織の表面殺菌によるダ
メージの他、培養方法や条件の不適切さのために細胞分
裂能が十分発揮されず、ＰＬＢの形成能が低下するため
であると考えられている。本発明の目的は、上記課題を
解決し、根端培養による実用上安定的なコチョウランの
ＰＬＢ誘導方法を提供することである。
養法（小林光子，小松田美津留，米内貞夫 1990.ファレ
ノプシスの根端培養による大量増殖、園芸学雑誌59別2:
664-671）あるいは他の培養法を用いてＰＬＢを誘導す
る過程では、品種，交配種あるいは材料等によって誘導
率が低かったり、誘導できなかったりすることがある。
このようなＰＬＢ誘導率の不安定性のため、しばしば大
量に生産できない品種がある。したがって、ＰＬＢの誘
導効率を向上させるためには、品種間差と材料間差を克
服する初期培養方法の確立が必要である。既知の根端培
養法におけるＰＬＢ誘導の不安定性の原因は、主に材料
のＰＬＢ形成源である根端分裂組織の表面殺菌によるダ
メージの他、培養方法や条件の不適切さのために細胞分
裂能が十分発揮されず、ＰＬＢの形成能が低下するため
であると考えられている。本発明の目的は、上記課題を
解決し、根端培養による実用上安定的なコチョウランの
ＰＬＢ誘導方法を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、コチョウラ
ンの根端培養法について鋭意検討した結果、根の先端か
ら特定の長さに切断した根端を用いることによって、Ｐ
ＬＢ形成率を向上できることを見出し、さらに当該根端
の処理方法、ＰＬＢ誘導培地、前培養条件等について検
討を重ね、実用的なコチョウランのＰＬＢ誘導方法を開
発し、本発明を完成させたのである。
ンの根端培養法について鋭意検討した結果、根の先端か
ら特定の長さに切断した根端を用いることによって、Ｐ
ＬＢ形成率を向上できることを見出し、さらに当該根端
の処理方法、ＰＬＢ誘導培地、前培養条件等について検
討を重ね、実用的なコチョウランのＰＬＢ誘導方法を開
発し、本発明を完成させたのである。
【０００５】本発明は、無菌的に調製したコチョウラン
の成長中の根を先端より、１〜５ｍｍの長さに切断して
培養用根端を作成し、当該培養用根端をＰＬＢ誘導培地
にて無菌的に培養してＰＬＢを誘導せしめ、当該ＰＬＢ
を増殖培地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再
分化させることを特徴とするコチョウラン苗の製造法に
関する。
の成長中の根を先端より、１〜５ｍｍの長さに切断して
培養用根端を作成し、当該培養用根端をＰＬＢ誘導培地
にて無菌的に培養してＰＬＢを誘導せしめ、当該ＰＬＢ
を増殖培地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再
分化させることを特徴とするコチョウラン苗の製造法に
関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に用いるコチョウランの品種は特に限定されず、
例えばドリテノプシス属のDtps. Odoriko, Dtps. Zuma
Headliner, Dtps. White Wondern等やファレノプシス属
のPhal. Orchid World, Phal. Zuma's Pixie, Phal. Al
fenso Morenon等の品種が挙げられる。本発明によれ
ば、上記のいずれの品種、また他の多数のコチョウラン
品種や原種を用いた場合でも、良好なＰＬＢ形成が得ら
れる。
本発明に用いるコチョウランの品種は特に限定されず、
例えばドリテノプシス属のDtps. Odoriko, Dtps. Zuma
Headliner, Dtps. White Wondern等やファレノプシス属
のPhal. Orchid World, Phal. Zuma's Pixie, Phal. Al
fenso Morenon等の品種が挙げられる。本発明によれ
ば、上記のいずれの品種、また他の多数のコチョウラン
品種や原種を用いた場合でも、良好なＰＬＢ形成が得ら
れる。
【０００７】本発明における無菌的に調製したコチョウ
ランの成長中の根としては、例えば通常の無菌的に培養
する実生苗や通常の無菌的に培養する花茎腋芽由来苗、
あるいは温室株の成長中の根が用いられる。無菌培養苗
の成長中の根は表面殺菌を行わずに用いられるので、表
面殺菌によるダメージはなく、温室株より好ましい材料
であり、また温室株の根の場合は、既知の方法（小林光
子，小松田美津留，米内貞夫 1990.ファレノプシスの根
端培養による大量増殖、園芸学雑誌59別2: 664-665）に
より根を表面殺菌してから用いる。
ランの成長中の根としては、例えば通常の無菌的に培養
する実生苗や通常の無菌的に培養する花茎腋芽由来苗、
あるいは温室株の成長中の根が用いられる。無菌培養苗
の成長中の根は表面殺菌を行わずに用いられるので、表
面殺菌によるダメージはなく、温室株より好ましい材料
であり、また温室株の根の場合は、既知の方法（小林光
子，小松田美津留，米内貞夫 1990.ファレノプシスの根
端培養による大量増殖、園芸学雑誌59別2: 664-665）に
より根を表面殺菌してから用いる。
【０００８】このようにして得られたコチョウランの根
を、その先端より１〜５ｍｍ、好ましくは２〜４ｍｍの
位置で滅菌メスで切断して、培養用根端を作成する。根
の長さが下限未満であると、枯死するものが多くなり、
生存率が低下する。一方、長すぎると、生存率は高いけ
れども、ＰＬＢ形成率が低くなる。この培養用根端の真
上から、培養用根端の長さに応じて０．５〜２．０ｍ
ｍ、好ましくは培養用根端長の１／２程度の深さに切り
込みを入れる（図１）と、ＰＬＢ形成率をさらに向上さ
せる効果がある。次いで、このように処理して得た培養
用根端を、切断面が培地に接するようにＰＬＢ誘導培地
に置床する。
を、その先端より１〜５ｍｍ、好ましくは２〜４ｍｍの
位置で滅菌メスで切断して、培養用根端を作成する。根
の長さが下限未満であると、枯死するものが多くなり、
生存率が低下する。一方、長すぎると、生存率は高いけ
れども、ＰＬＢ形成率が低くなる。この培養用根端の真
上から、培養用根端の長さに応じて０．５〜２．０ｍ
ｍ、好ましくは培養用根端長の１／２程度の深さに切り
込みを入れる（図１）と、ＰＬＢ形成率をさらに向上さ
せる効果がある。次いで、このように処理して得た培養
用根端を、切断面が培地に接するようにＰＬＢ誘導培地
に置床する。
【０００９】ＰＬＢ誘導培地としては、通常の植物組織
培養用培地が用いられ、例えばＭＳ培地，１／３ＭＳ培
地等を用いる。ＰＬＢ誘導培地には、糖類として多糖，
単糖類，糖アルコール（例えば、蔗糖やソルビトール
等）を添加するとよい。蔗糖の場合は、０．５〜３％、
好ましくは０．５％添加する。ソルビトールの場合は、
０．０５〜０．５％、好ましくは０．１％添加する。ソ
ルビトールを添加すると、ＰＬＢ形成率および生存率の
向上が認められる。さらに、ＰＬＢ誘導培地に植物ホル
モンを添加すると、より効果的である。植物ホルモンと
しては、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン
類を０．００５〜０．０５ｐｐｍ、好ましくは０．０１
ｐｐｍ、ベンジルアデニン（ＢＡ）のようなサイトカイ
ニン類を１〜１５ｐｐｍ、好ましくは５ｐｐｍ添加すれ
ばよい。なお、本発明の方法では、培地の支持体として
通常ジェランガムや寒天のようなゲル化剤を用いる。ジ
ェランガムの場合は、０．２〜０．４％、好ましくは
０．２５〜０．３％添加する。
培養用培地が用いられ、例えばＭＳ培地，１／３ＭＳ培
地等を用いる。ＰＬＢ誘導培地には、糖類として多糖，
単糖類，糖アルコール（例えば、蔗糖やソルビトール
等）を添加するとよい。蔗糖の場合は、０．５〜３％、
好ましくは０．５％添加する。ソルビトールの場合は、
０．０５〜０．５％、好ましくは０．１％添加する。ソ
ルビトールを添加すると、ＰＬＢ形成率および生存率の
向上が認められる。さらに、ＰＬＢ誘導培地に植物ホル
モンを添加すると、より効果的である。植物ホルモンと
しては、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン
類を０．００５〜０．０５ｐｐｍ、好ましくは０．０１
ｐｐｍ、ベンジルアデニン（ＢＡ）のようなサイトカイ
ニン類を１〜１５ｐｐｍ、好ましくは５ｐｐｍ添加すれ
ばよい。なお、本発明の方法では、培地の支持体として
通常ジェランガムや寒天のようなゲル化剤を用いる。ジ
ェランガムの場合は、０．２〜０．４％、好ましくは
０．２５〜０．３％添加する。
【００１０】ＰＬＢ誘導培養は、常法により実施すれば
よく、通常は２０〜２８℃、好ましくは２５℃で、連続
もしくは１６時間照射（照度５００〜５０００ｌｕｘ、
好ましくは３０００ｌｕｘ）下で、３０〜６０日間培養
する。ＰＬＢの誘導に際して、培養の初期段階で低温培
養を行うことが好ましく、例えば通常培養の前に、５〜
１５℃、好ましくは１０℃の低温下、８〜７２時間、好
ましくは１２時間程度で照明は上記培養と同様な条件の
前培養を行うと、より効果的である。このＰＬＢ誘導培
養によりＰＬＢが形成される。なお、ＰＬＢ形成能は、
品種間で差があるので、培養を適切な期間続けるべきで
ある。
よく、通常は２０〜２８℃、好ましくは２５℃で、連続
もしくは１６時間照射（照度５００〜５０００ｌｕｘ、
好ましくは３０００ｌｕｘ）下で、３０〜６０日間培養
する。ＰＬＢの誘導に際して、培養の初期段階で低温培
養を行うことが好ましく、例えば通常培養の前に、５〜
１５℃、好ましくは１０℃の低温下、８〜７２時間、好
ましくは１２時間程度で照明は上記培養と同様な条件の
前培養を行うと、より効果的である。このＰＬＢ誘導培
養によりＰＬＢが形成される。なお、ＰＬＢ形成能は、
品種間で差があるので、培養を適切な期間続けるべきで
ある。
【００１１】次に、この培養により根端から誘導された
ＰＬＢを用いてコチョウランの植物体を再生させる場合
は、通常の無菌播種用培地に移植すればよく、容易に苗
などの幼植物に発達する。なお、通常は１ＰＬＢから１
個体しか得られないので、幼植物を量産するためには、
ＰＬＢの増殖が必要である。その際、ＰＬＢから幼植物
体へ容易に再分化するためには、ＰＬＢの増殖時に培養
環境、例えば明るさと通気性を一定に保つ必要がある。
ＰＬＢを用いてコチョウランの植物体を再生させる場合
は、通常の無菌播種用培地に移植すればよく、容易に苗
などの幼植物に発達する。なお、通常は１ＰＬＢから１
個体しか得られないので、幼植物を量産するためには、
ＰＬＢの増殖が必要である。その際、ＰＬＢから幼植物
体へ容易に再分化するためには、ＰＬＢの増殖時に培養
環境、例えば明るさと通気性を一定に保つ必要がある。
【００１２】本発明では、根端から誘導されたＰＬＢを
増殖培地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再分
化させ、コチョウランの苗を製造する。本発明に用いる
ＰＬＢ増殖培地としては通常ＰＬＢ増殖培地に用いられ
る培地が挙げられ、具体的にはＭＳ培地等があり、田中
のＶ＆Ｗ修正培地（M.TANAKA,1987, STUDIES ON THE CL
ONAL PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH IN VITROC
ULTURE, MEMOIRS OF FACULTY OF AGRICULTURE, KAGAWA
UNIVERSITY, NO.49: 1-85) が好ましい。ＰＬＢを増殖
する培養条件としては、２０〜２８℃、好ましくは２３
〜２６℃、８〜２４時間、好ましくは１６時間の照明、
照度は２００〜１００００ｌｕｘ、好ましくは２０００
ｌｕｘである。また、本発明に用いる再分化培地として
は、通常再分化培地に用いられる培地が挙げられ、具体
的にはＭＳ培地等があり、本発明者のＶ＆Ｗ修正培地
（T.S. Zhou, 1995, In vitro culture of Doritaenops
is: comparison between formation of hyperhydric pr
otocorm-like-body (PLB) and the normal PLB. Plant
Cell Reports, 15: 181-185)が好ましい態様として挙げ
られる。再分化の培養条件は上記と同様である。
増殖培地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再分
化させ、コチョウランの苗を製造する。本発明に用いる
ＰＬＢ増殖培地としては通常ＰＬＢ増殖培地に用いられ
る培地が挙げられ、具体的にはＭＳ培地等があり、田中
のＶ＆Ｗ修正培地（M.TANAKA,1987, STUDIES ON THE CL
ONAL PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH IN VITROC
ULTURE, MEMOIRS OF FACULTY OF AGRICULTURE, KAGAWA
UNIVERSITY, NO.49: 1-85) が好ましい。ＰＬＢを増殖
する培養条件としては、２０〜２８℃、好ましくは２３
〜２６℃、８〜２４時間、好ましくは１６時間の照明、
照度は２００〜１００００ｌｕｘ、好ましくは２０００
ｌｕｘである。また、本発明に用いる再分化培地として
は、通常再分化培地に用いられる培地が挙げられ、具体
的にはＭＳ培地等があり、本発明者のＶ＆Ｗ修正培地
（T.S. Zhou, 1995, In vitro culture of Doritaenops
is: comparison between formation of hyperhydric pr
otocorm-like-body (PLB) and the normal PLB. Plant
Cell Reports, 15: 181-185)が好ましい態様として挙げ
られる。再分化の培養条件は上記と同様である。
【００１３】
【実施例】以下に、本発明を実施例により説明するが、
本発明はこれらによって制限されるものではない。 実施例１ 供試材料として、 Dtps. Odorikoの花茎腋芽培養苗由来
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、田中法（M.TANAKA,1987, STUDIES ON THE CLONAL
PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH IN VITRO CULT
URE, MEMOIRS OF FACULTY OF AGRICULTURE, KAGAWA UNI
VERSITY, NO.49: 1-85) を用いた。根を先端より１ｍ
ｍ，２ｍｍおよび５ｍｍの位置で切断し、培養用根端を
作成した。また、別に２ｍｍ長の根端を作成し、真上か
ら約１．０ｍｍの深さの切り込み処理をした。根端培養
用培地として、１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％、ジェラ
ンガム０．４％を加えたものを調製した。該培地に各培
養用根端を置床し、２５℃で３０００ｌｕｘの１６時間
照明下で培養し、２ヶ月後に調査を行った。その結果を
第１表に示した。
本発明はこれらによって制限されるものではない。 実施例１ 供試材料として、 Dtps. Odorikoの花茎腋芽培養苗由来
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、田中法（M.TANAKA,1987, STUDIES ON THE CLONAL
PROPAGATION OF PHALAENOPSIS THROUGH IN VITRO CULT
URE, MEMOIRS OF FACULTY OF AGRICULTURE, KAGAWA UNI
VERSITY, NO.49: 1-85) を用いた。根を先端より１ｍ
ｍ，２ｍｍおよび５ｍｍの位置で切断し、培養用根端を
作成した。また、別に２ｍｍ長の根端を作成し、真上か
ら約１．０ｍｍの深さの切り込み処理をした。根端培養
用培地として、１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％、ジェラ
ンガム０．４％を加えたものを調製した。該培地に各培
養用根端を置床し、２５℃で３０００ｌｕｘの１６時間
照明下で培養し、２ヶ月後に調査を行った。その結果を
第１表に示した。
【００１４】
【表１】
【００１５】第１表に示したように、根端長２ｍｍ区
は、生存率が５０％程度であるが、ＰＬＢ形成率は上昇
しており、特に切り込み処理によりＰＬＢ形成率は著し
く向上した。
は、生存率が５０％程度であるが、ＰＬＢ形成率は上昇
しており、特に切り込み処理によりＰＬＢ形成率は著し
く向上した。
【００１６】実施例２ 供試材料として、 Dtps. Odorikoの花茎腋芽培養苗由来
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、実施例１と同様である。根を先端より２ｍｍの位
置で切断し、真上から約１．０ｍｍの深さの切り込み処
理をして培養用根端を作成した。根端培養用培地とし
て、培地ａ：１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％，ジェラン
ガム０．４％を加えたもの、培地ｂ：１／３ＭＳ培地に
蔗糖０．５％，ソルビトール０．１％，ジェランガム
０．４％を加えたもの、培地ｃ：１／３ＭＳ培地に蔗糖
０．５％，ソルビトール０．１％，ＮＡＡ ０．０１ｐ
ｐｍ，ＢＡ ５ｐｐｍおよびジェランガム０．４％を加
えたものを調製した。各培地に培養用根端を置床し、２
５℃で３０００ｌｕｘの１６時間照明下で培養し、２ヶ
月後に調査を行い、その結果を第２表に示した。
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、実施例１と同様である。根を先端より２ｍｍの位
置で切断し、真上から約１．０ｍｍの深さの切り込み処
理をして培養用根端を作成した。根端培養用培地とし
て、培地ａ：１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％，ジェラン
ガム０．４％を加えたもの、培地ｂ：１／３ＭＳ培地に
蔗糖０．５％，ソルビトール０．１％，ジェランガム
０．４％を加えたもの、培地ｃ：１／３ＭＳ培地に蔗糖
０．５％，ソルビトール０．１％，ＮＡＡ ０．０１ｐ
ｐｍ，ＢＡ ５ｐｐｍおよびジェランガム０．４％を加
えたものを調製した。各培地に培養用根端を置床し、２
５℃で３０００ｌｕｘの１６時間照明下で培養し、２ヶ
月後に調査を行い、その結果を第２表に示した。
【００１７】
【表２】
【００１８】第２表に示したように、培地にソルビトー
ルの他にＮＡＡ，ＢＡといった植物ホルモンを添加する
と、生存率が高くなり、ＰＬＢ形成率も著しく向上し
た。
ルの他にＮＡＡ，ＢＡといった植物ホルモンを添加する
と、生存率が高くなり、ＰＬＢ形成率も著しく向上し
た。
【００１９】実施例３ 供試材料として、 Dtps. Odorikoの花茎腋芽培養苗由来
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、実施例１と同様である。根を先端より２ｍｍの位
置で切断し、真上から約１．０ｍｍの深さの切り込み処
理をして培養用根端を作成した。根端培養用培地とし
て、１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％，ソルビトール０．
１％，ＮＡＡ ０．０１ｐｐｍ，ＢＡ ５ｐｐｍおよび
ジェランガム０．４％を加えたものを調製した。該培地
に培養用根端を置床し、各種の条件（５〜１５℃、１２
〜７２時間）で３０００ｌｕｘの照明下で前培養した
後、２５℃で３０００ｌｕｘの１６時間照明下で通常培
養を行い、２ヶ月後に調査した。得られた結果を第３表
に示した。なお、対照区は、前培養せずに直接２５℃、
３０００ｌｕｘの１６時間照明下で培養し、２ヶ月後に
調査を行った。
の成長中の根を用いた。なお、花茎腋芽の調製、培養方
法は、実施例１と同様である。根を先端より２ｍｍの位
置で切断し、真上から約１．０ｍｍの深さの切り込み処
理をして培養用根端を作成した。根端培養用培地とし
て、１／３ＭＳ培地に蔗糖０．５％，ソルビトール０．
１％，ＮＡＡ ０．０１ｐｐｍ，ＢＡ ５ｐｐｍおよび
ジェランガム０．４％を加えたものを調製した。該培地
に培養用根端を置床し、各種の条件（５〜１５℃、１２
〜７２時間）で３０００ｌｕｘの照明下で前培養した
後、２５℃で３０００ｌｕｘの１６時間照明下で通常培
養を行い、２ヶ月後に調査した。得られた結果を第３表
に示した。なお、対照区は、前培養せずに直接２５℃、
３０００ｌｕｘの１６時間照明下で培養し、２ヶ月後に
調査を行った。
【００２０】
【表３】
【００２１】第３表に示したように、１０℃で１２時間
の前培養（低温処理）を行った区では、ＰＬＢ形成率と
生存率が他の区に比べて向上した。
の前培養（低温処理）を行った区では、ＰＬＢ形成率と
生存率が他の区に比べて向上した。
【００２２】
【発明の効果】本発明により、コチョウランのＰＬＢ形
成率と生存率を共に向上させることができ、植物体を効
率よく再生させることができる。また、コチョウランの
クローン苗生産における品種間差の克服に大きく貢献す
ることが期待される。
成率と生存率を共に向上させることができ、植物体を効
率よく再生させることができる。また、コチョウランの
クローン苗生産における品種間差の克服に大きく貢献す
ることが期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 コチョウラン培養用根端を調製する手順を示
す流れ図であり、（I)は根の切り方を、(II)は得られた
根端を、(III) は根端の切り込み処理をそれぞれ示す。
す流れ図であり、（I)は根の切り方を、(II)は得られた
根端を、(III) は根端の切り込み処理をそれぞれ示す。
Claims (4)
- 【請求項１】 無菌的に調製したコチョウランの成長中
の根を先端より、１〜５ｍｍの長さに切断して培養用根
端を作成し、当該培養用根端をＰＬＢ誘導培地にて無菌
的に培養してＰＬＢを誘導せしめ、当該ＰＬＢを増殖培
地で培養した後、当該ＰＬＢを再分化培地で再分化させ
ることを特徴とするコチョウラン苗の製造法。 - 【請求項２】 培養用根端が、当該培養用根端の先端を
切り込み処理したものである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ＰＬＢ誘導培地が、ソルビトールあるい
はソルビトールと植物ホルモンを含むものである請求項
１または２記載の方法。 - 【請求項４】 ＰＬＢの誘導に際して、培養の初期段階
で低温培養を行う請求項１〜３のいずれかに記載の方
法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8104743A JPH09271282A (ja) | 1996-04-03 | 1996-04-03 | 根端培養によるコチョウラン苗の製造法 |
| DE69706463T DE69706463T2 (de) | 1996-04-03 | 1997-04-02 | Verfahren zur Erzeugung von Phalaenopsis Klonpflanzen zur Wurzelspitzenwachstum |
| EP97105451A EP0800762B1 (en) | 1996-04-03 | 1997-04-02 | Method for producing phalaenopsis clone plants through root tip culture |
| US08/832,360 US5864985A (en) | 1996-04-03 | 1997-04-02 | Method for producing phalaenosis clone plants through root tip culture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8104743A JPH09271282A (ja) | 1996-04-03 | 1996-04-03 | 根端培養によるコチョウラン苗の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09271282A true JPH09271282A (ja) | 1997-10-21 |
Family
ID=14388985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8104743A Pending JPH09271282A (ja) | 1996-04-03 | 1996-04-03 | 根端培養によるコチョウラン苗の製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5864985A (ja) |
| EP (1) | EP0800762B1 (ja) |
| JP (1) | JPH09271282A (ja) |
| DE (1) | DE69706463T2 (ja) |
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-
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- 1997-04-02 US US08/832,360 patent/US5864985A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-02 DE DE69706463T patent/DE69706463T2/de not_active Expired - Fee Related
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