JPH09165333A - カプサイシン様応答のための可変スペクトルを有する化合物を含有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】神経性炎症、化学的および熱的に誘導される痛
み、Ｃ線維等の知覚求心性経路、視床下部温度制御領域
を含む応答の脱感作を引き起こす化合物の提供。 【解決手段】脱感作のための式ＩＩの化合物（チンヤト
キシン等）の治療有効量と薬学的に許容され得る担体か
らなる組成物。 【化１】 〔式中、Ｒ₃ ＝Ｈ，ＯＨ，ＯＣＯＲ”、Ｒ₄ ＝Ｈ，ＯＣ
ＯＲ”’、Ｒ’，Ｒ”，Ｒ”’の一つ以上が芳香族基，
残りが（ＣＨ₂ ）_n'−ＣＨ₃ （ｎ’＝０−１４）、Ｒ₁
＝ホモバニリン酸等の基〕

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カプサイシン様応
答のための活性の可変スペクトルを有する化合物を含有
する組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】レジニフェラトキシン（ＲＴＸ）はトウ
ダイグサ（Euphorbia ）属の種々の構成員の乳液中に存
在する極めて刺激性のジテルペンである（Hergenhahn
等, Tetrahedron Lett., Vol. 19, p. 1595 (1975); Sc
hmidt 等, Phytochemistry, Vol.15, p. 1778 (1976)
）。それは、典型的なホルボルエステル、ホルボル１
２−ミリステート１３−アセテート（Hecker等, Carcin
ogenesis, Vol. 2, p. 11,ラーベン・プレス，ニューヨ
ーク(1978); Adolph等, J. Nat. Prod., Vol. 45, p.34
7 (1982) ）の最大活性より１０００倍強力であること
が見出されたマウス耳紅斑アッセイにおける異常な活性
に基づいて単離された（Hergenhahn等, Tetrahedron Le
tt., Vol. 19, p. 1595 (1975)）。その刺激性を除い
て、ＲＴＸは典型的なホルボルエステル作用〔例えば、
ＥＢウイルスの活性促進または活性化（zur Hausen等,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 76, p. 782 (197
9)）〕、フィブロネクチンの放出（Driedger等, Cancer
Res., Vol. 40, p. 1400 (1980a) 、プロテインキナー
ゼＣに結合するホルボルエステルに対する競合（Driedg
er等,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 77, p. 567
(1980b) ）を誘導しなかったが、これは異なる経路を介
してその刺激を発揮することを示す。

【０００３】ＲＴＸは、それがＣ２０位でホモバニリン
酸とエステル化されている点において、腫瘍促進性であ
るレジニフェロノール誘導体と異なる。構造−活性分析
により、この置換がその激しい刺激活性に重要であり
（Adolph等, J. Nat. Prod., Vol. 45, p. 347 (1982);
Schmidt等, Inflammation, Vol. 3, p. 273 (1979)
）、一方遊離Ｃ２０のヒドロキシル基が典型的なホル
ボルエステルの活性促進に必要であることが示された
（Hecker等, Carcinogenesis, Vol. 2, p. 11,ラーベン
・プレス，ニューヨーク(1978)）。驚くべきことに、ホ
モバニリル置換基はまた、トウガラシおよびトウガラシ
（Capsium ）属のその他の種の主な刺激成分であるカプ
サイシンの刺激性の決定に実質的な役割を演じている
（Jancso, Pharmacology of Pain, Vol. 9, p. 33,パー
マモン・プレス，オックスフォード(1968);Szolcsanyi
およびJancso-Gabor, Arzneim.-Forsch. (Drug Res.),
Vol. 25, p.1877(1975)）。

【０００４】近年、ＲＴＸはカプサイシンの非常に有力
な類似体として作用し（Szallasi等, Neuroscience（印
刷中，1989）；ＲＴＸは興奮させ、次いで多様侵害受容
器ニューロンを脱感作することが示された。これらの知
覚ニューロンは背根およびガッサー神経節に局在してい
る。それらは中枢神経系に痛覚を伝達し、そして末梢に
おいて刺激の神経伝達物質（例えばＰ物質）の放出を仲
介する（Buck等, Pharmacol. Rev., Vol. 38, p. 179
(1986) ）。ＲＴＸはその種類の最も活性な公知同族体
であるカプサイシンに比べ３−４桁強力だった（Szalla
si等, Neuroscience（印刷中，1989））。

【０００５】これらの結果は、ジテルペンのその他の２
０−ホモバニリルエステルもまた強力な知覚神経モジュ
レータ剤であるかもしれない可能性を高めた。カプサイ
シンの作用機序（Marsch等, Neuroscience, Vol. 23,
p. 275 (1987); Wood等, J. Neuroscience, Vol. 8, p.
3208 (1988) ）およびその可能な治療学的意味（Goppe
tti等, Br. J. Pharmacol., Vol. 93, p. 509 (1988);
Levine 等, J. Neuroscience, Vol. 6, p. 3423 (1986)
）に新たな興味が与えられたとすれば、そのようなジ
テルペンの構造−活性分析は仮想されたカプサイシンレ
セプター（SzolcsanyiおよびJancso-Gabor, Arzneim.-F
orsch. (Drug Res.), Vol. 25, p. 1877(1975)）での相
互作用のための必要条件に関する有用な情報を与えるか
もしれない。さらに、その化合物は、ＲＴＸの特異な活
性により強く暗示されるように（Szallasi等, Neurosci
ence（印刷中，1989）、カプサイシン応答のサブクラス
を分析するための別の手段を提供するかもしれない。

【０００６】現在の研究において、特許請求されている
化合物の新規種類のうち２種のホモバニリルジテルペン
誘導体、すなわちＲＴＸに類似している１２−デオキシ
ホルボル１３−フェニルアセテート２０−ホモバニレー
トおよびメゼレイン２０−ホモバニレートの効力が試験
されている。レジニフェラトキシンおよびその類似体の
構造がチンヤトキシンとともに下に示されている。

【化５】 活性は母体ジテルペンに対するものと比較され、そして
全ての化合物もまたプロテインキナーゼＣに対する結合
親和性を決定するために試験された。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、神経性炎
症、化学的および熱的に誘導される痛み、カプサイシン
感受性知覚求心性経路を含む応答、および視床下部温度
制御領域を含む応答の主因を脱感作するための化合物を
含有する組成物の提供を課題とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、次式（Ｉ）−
（ＩＶ）：

【化６】 （式中Ｒ₁ は全ての場合において次式：

【化７】 で表される基を表して、チグリアン（Ｉ）、ダフナン
（ＩＩおよびＩＩＩ）およびインゲナン（ＩＶ）類のジ
テルペンの２０−ホモバニリルエステルをもたらす）で
表されるカプサイシン様応答のための活性の可変スペク
トルを有する化合物の新規種類に関する。

【０００９】特定の置換基は以下のとおりである：

【化８】 〔式中、Ｒ’，Ｒ”またはＲ”’の少なくとも１つは芳
香族基を表し、そして残りは（ＣＨ₂ ）_n'−ＣＨ₃ （式
中ｎ’は０−１４を表す）で表される基を表す〕。例え
ば、芳香族基は次式：

【化９】 （式中、Ｒ₆ −Ｒ₁₀は互いに独立してＯＨ、ＯＣＨ₃ ま
たはＨを表してもよく、そしてｎは０−１０を表す）で
表され得る。好ましくは、芳香族基は以下のものであ
る：

【化１０】 （式中ｎは０−１０を表す）。 ＩＩおよびＩＩＩ：Ｒ’は上記の芳香族基を表し、Ｒ₃
はＨ，ＯＨまたは次式：

【化１１】 （式中Ｒ”は上記の芳香族基を表す）を表し、Ｒ₄ はＨ
または次式：

【化１２】 （式中Ｒ”’は上記の芳香族基を表す）を表す。 ＩＶ：

【化１３】 （式中、Ｒ’，Ｒ”またはＲ”’は上記の芳香族基を表
す）。しかしながら、ＲＴＸおよびＴＴＸは式（Ｉ）−
（ＩＶ）で表される化合物の新規種類には含まれない。

【００１０】式（Ｉ）−（ＩＶ）で表される化合物の代
表例は２０−ホモバニリル−メゼレインおよび２０−ホ
モバニリル−１２−デオキシホルボル−１３−フェニル
アセテートを包含する。また、式（ＩＩ）で表される化
合物の例として次式：

【化１４】 で表される化合物を挙げることができる。本発明はさら
に、ホルボル関連ジテルペンとホモバニリン酸とをジテ
ルペンの環外ヒドロキシ基でのエステル化により反応さ
せる方法により製造された化合物に関する。さらに、本
発明は、神経性炎症、化学的および熱的に誘導される痛
み、カプサイシン感受性知覚求心性経路を含む応答、お
よび視床下部温度制御領域を含む応答の主因を脱感作す
るための、ホルボル関連ジテルペンとホモバニリン酸類
似体とのエステル化により製造された化合物の治療に有
効な脱感作量とそれらの薬学的に許容性の担体とを被験
動物に投与することからなる、被験動物を脱感作する方
法に関する。本発明はさらに上記化合物を含有する薬剤
組成物に関する。

【００１１】カプサイシンは知覚求心性Ｃ線維および視
床下部温度制御領域を刺激し、次に脱感作する。誘導さ
れた脱感作は、関節炎、喘息、鼻炎等のアレルギー性応
答、熱、痛み、ガンやヘルペス後の神経痛に伴う痛み
等、Ｐ物質等のタキキニン類により仲介される生物学的
プロセスに適用できる。本明細書はカプサイシン様応答
のための活性の可変スペクトルを有する化合物、その組
成物、上記化合物の製造方法およびその用途を記載して
いる。

【００１２】カプサイシン様応答を有する化合物の新規
種類は上記式（Ｉ）−（ＩＶ）により表される。構造的
に関連するホルボルエステルとは異なるレジニフェラト
キシン（ＲＴＸ）はトウガラシの刺激素因であるカプサ
イシンの非常に強力な類似体として作用する。ホモバニ
リル基はカプサイシンの必須の構造的特徴であり、レジ
ニフェラトキシンを典型的なホルボル関連化合物と区別
する最も顕著な特徴である。ＲＴＸ様活性を有する式
（Ｉ）で表される化合物の代表例はＲＴＸに著しい類似
を有するジテルペン誘導体の２０−ホモバニリルエステ
ル２種を包含する。１２−デオキシホルボル１３−フェ
ニルアセテート２０−ホモバニレート（ｄＰＰ−ＨＶ）
の効力は化学的痛みの局部誘導および脱感作に対してＲ
ＴＸに匹敵するが、しかし試験されたその他のＲＴＸ応
答（例えば神経性炎症および視床下部の刺激および脱感
作）に対して２−４桁低い。メゼレイン２０−ホモバニ
レート（Ｍｅｚ−ＨＶ）は痛み誘導において非常に弱い
活性を示し、そしてその他のアッセイにおいて不活性で
ある。母体誘導体──レジニフェロノールオルトフェニ
ルアセテート、１２−デオキシホルボル１３−フェニル
アセテートおよびメゼレイン──はＲＴＸ様効果の誘導
において不活性である。相互に２０−ホモバニレートエ
ステルの存在はプロテインキナーゼＣへの結合親和性が
それぞれＲＴＸ、ｄＰＰ−ＨＶおよびＭｅｚ−ＨＶに比
べ１１倍、１３０倍および６９０倍低下した。これらの
発見はカプサイシン感受性経路の間の不均一性に対する
別の証拠を提供する。

【００１３】さらに、ホルボル関連ジテルペンとホモバ
ニリン酸とのエステル化は特有の活性を有するカプサイ
シン類似体を生じ得る。従って、本発明はホルボル関連
ジテルペンとホモバニリン酸とをジテルペンの環外ヒド
ロキシ基でのエステル化により反応させる方法により製
造された化合物に関する。ホルボル含有ジテルペンの代
表例は以下のものである：

【化１５】

【００１４】ホルボル関連ジテルペンはチグリアン、ダ
フナンおよびインゲナンからなる群から選択され得る。
ホモバニリン酸および同族体の代表例は以下のものであ
る：

【化１６】 ホモバニリン酸それ自体またはカプサイシン様構造中に
あったカプサイシン様活性を付与し得る置換基のパター
ンを有する同族体もまた使用され得る。本発明の化合
物、ＲＴＸおよびチンヤトキシンは、J. Nat. Prod., V
ol. 45,p. 347 (1982) に説明されているようなエステ
ル化のための方法論を用いて製造され得る。本発明者は
ＲＴＸとカプサイシンの可能な相同関係を確認し〔すな
わち両方の化合物は交差寛容性に随伴してマウスにおい
て体温の劇的低下を生じた（de Vries等(1988)提案, ラ
イフ・サイエンシズ）〕、そして今、以下において本明
細書で論じるように、ＲＴＸ、ｄＰＰ−ＨＶ、Ｍｅｚ−
ＨＶおよびカプサイシンの効力および生体内での活性を
詳細に比較した。

【００１５】従って、本発明者はカプサイシン様活性を
有する化合物の新規種類を特徴づけた。さらに、ＲＴＸ
はその活性においてカプサイシンに質的に類似している
が、効力において量的に異なり（すなわち１０³ −１０
⁴ 倍高い効力）、そして作用の相対的スペクトルにおい
て量的に異なる。レジニフェラトキシン、チンヤトキシ
ン（ＴＴＸ）および本発明の新規化合物は従って神経性
炎症、化学的および熱的に誘導される痛み、Ｃ線維等の
知覚求心性経路や視床下部温度制御領域を含む応答の脱
感作を引き起こす。誘導された脱感作は、関節炎、喘
息、アレルギー性応答、熱、痛み、ガンやヘルペスウイ
ルス感染に伴う痛み、およびＰ物質またはカプサイシン
治療により激減したその他の神経ペプチドにより仲介さ
れる生物学的プロセスに適用できる。

【００１６】上記したように、レジニフェラトキシンは
カプサイシンに類似の効果を有するが、しかし１０⁴ ま
でのより高い効力において異なり、これは副作用を著し
く減らし、そしてより容易な適用（すなわちより少ない
容量または効果のない経路を介する吸収）を可能にす
る。ＲＴＸ、ＴＴＸおよび本発明の化合物はまた、作用
のいくらか異なるスペクトルを示し、全身的毒性の与え
られたレベルでのより大きい脱感作および痛みの激しい
誘導に関連する大きい脱感作を可能にする。さらに、レ
ジニフェラトキシン、ＴＴＸおよび本発明の化合物は局
部、静脈内、腹膜腔内、経口および皮下投与により活性
化され得る。ＲＴＸ、ＴＴＸおよび本発明の化合物は動
物例えば哺乳類（例えばマウス、ラットまたはヒト）に
投与され得る。

【００１７】さらに、カプサイシンは試験された全ての
動物にその作用を示すが、鳥類およびより下等な脊椎動
物には活性を示さない（Monsereenusorn等, (1982) CRC
Crit. Rev. Toxicol., Vol. 10, p. 321-339 ）。カプ
サイシンの活性における類似性に基づいて、レジニフェ
ラトキシン、ＴＴＸおよび本発明の化合物が本明細書に
おいて報告され、ＲＴＸの効果はラットおよびマウスに
限定されず、ヒトにも同様に拡張されることが推定され
る。ＲＴＸ、ＴＴＸおよび本発明の化合物は、適当な医
学的担体または希釈剤との組合せにより薬剤組成物に製
造され得る。例えば、ＲＴＸ、ＴＴＸまたは本発明の化
合物は油、プロピレングリコールまたは注射液を調製す
るために通常使用されるその他の溶媒に溶解され得る。
適当な担体は生理食塩水、ポリエチレングリコール、エ
タノール、ゴマ油、クレモホルおよびミリスチル酸イソ
プロピルを包含する。局部施用のために、ＲＴＸ、ＴＴ
Ｘおよび本発明の化合物は軟膏またはクリームとして製
剤化され得る。

【００１８】

【発明の実施の形態】以下の方法および賦形剤が説明の
ためだけに例示されるが、本発明を限定するものではな
い。薬学的投与形態にある本発明の化合物（ＲＴＸおよ
びＴＴＸを包含する）は単独で、または適当な群で、な
らびにその他の薬学的に活性な化合物との組合せで使用
され得る。本発明の化合物は、それらを水性溶媒例えば
通常の食塩水、デキストロース５％、または非水性溶媒
例えば植物油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエ
ステルまたはプロピレングリコール中に；および所望す
る場合には慣用の添加剤例えば可溶化剤、等張化剤、懸
濁化剤、乳化剤、安定剤および防腐剤と共に溶解、懸濁
または乳化することにより注射用調剤に製剤化され得
る。本発明の化合物は所望の効果を有するその他の化合
物と組み合わせてもよい。本発明の化合物の所望の投与
量は被験対象、薬剤形態、投与方法および投与期間で変
化する。しかしながら、所望の効果を得るために、単一
適用の場合、本発明の化合物０．１×１０^-3ないし１０
mg／kg体重、好ましくは０．１×１０^-3ないし０．１mg
／kg体重を投与するか、または多回適用の場合、より少
なく投与することが一般に推奨される。組成物の場合、
上記化合物は０．０００１ないし１０重量％、好ましく
は０．０００１ないし１重量％存在すべきである。

【００１９】

【実施例】以下の実施例は特許請求された本発明を説明
するためのものであり、そして当業者が本発明をより完
全に理解することを可能にするであろう。しかしなが
ら、本発明はこれらの代表的な実施例だけに限定される
ものであると理解されるべきではない。

【００２０】実施例１ 代表的プロトコル エタノール中のホモバニリン酸５０マイクロモルをＮ₂
雰囲気下で乾燥するまで蒸発させ、アセトニトリル中に
３回溶解させ、そして乾燥するまで蒸発させ痕跡量のエ
タノールを除去する。ジテルペンエステル、例えば１２
−デオキシホルボル１３−フェニルアセテート（５０マ
イクロモル）を無水ピリジン中に溶解させ、そして乾燥
するまでの蒸発を３回行う。塩化メチレン（５ml，Ｐ₂
Ｏ₅ から蒸留）の溶液０．２５mlおよびトリエチルアミ
ン（フェニルイソシアネートから蒸留）０．１４mlに加
えて、Ｎ−メチルフルオロピリジニウムトシレート（２
５mg）を添加する。１．５時間後混合物を乾燥するまで
蒸発させ、フラスコを隔膜で覆い、Ｎ₂ を通し、そして
ベンゼン（２ml，Ｎａから蒸留）およびトリエチルアミ
ン（０．１７ml）の溶液０．２５mlを添加し、次いでア
セトン（モレキュラーシーブで乾燥）０．２５ml中のホ
モバニリン酸を添加する。６０℃で１．５時間攪拌した
後、混合物をリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）中に採取し、
そして酢酸エチルで５回抽出する。一緒にした抽出物を
Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥させ、ろ過しそして蒸発させる。乾
燥抽出物のＳｉＯ₂ カラム上でのクロマトグラフィーを
行う。第１画分（Ｅｔ₂ Ｏ−ヘキサン，４：１）を蒸発
させ、そして残渣をマグナム−Ｃ１８ＨＰＬＣカラム
（７０％ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ）中に注入する。生成物ピー
クを集め、そして溶媒を除去する。

【００２１】実施例２ ２０−ホモバニリン−１２−デオキシホルボル１３−フ
ェニルアセテート（ｄＰＰ−ＨＶ）

【化１７】 ホモバニリン酸（１ｇ，０．００３Ｍ）およびジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．３ｇ，０．０
０１５Ｍ）をＣＨ₃ ＣＮ−ＣＨ₂ Ｃｌ₂ （１：１）２０
ml中１時間攪拌した。溶液をろ過し、蒸発させ、酢酸エ
チル中に溶解し、そして再びろ過した。蒸発の後、残渣
を数ミリリットルのベンゼンに溶解させ、そして一晩放
置した。結晶をろ過した。融点１１１−１１４℃。上記
ホモバニリン酸無水物（６０mg，過剰）をピリジン無水
物（５ml）中で１２−デオキシホルボル１３−フェニル
アセテート（２５mg）と一晩攪拌した。溶媒を蒸発さ
せ、そして残渣を酢酸エチル中に溶解させ、クエン酸水
溶液で２回洗浄し、次に炭酸水素ナトリウム水溶液で洗
浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして蒸発
させた。ＳｉＯ₂ でのクロマトグラフィーによりごく少
量の物質がクロロホルムと共に溶離され、次に大量の物
質が３％ＣＨ₃ ＯＨ−ＣＨＣｌ₃ と共に溶離されたが、
これは質量分析法により出発物質であると考えられた。
全ての画分を一緒にし、ピリジンの反復蒸発により乾燥
させ、そして少量のＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジ
ン）を添加して、反応時間を２日としたことを除いて、
上記のようにアシル無水物と再び反応させた。上記のよ
うに仕上げおよびクロマトグラフィーの後、かなりの量
の未反応出発物質が再び単離され、それは４日間の反応
に再び供された。生成物を生じる画分の仕上げおよびク
ロマトグラフィー単離の後、全ての粗製生成物を一緒に
し、そして７０％ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏで溶離させるマグナ
ムＣ−１８カラム上での調製ＨＰＬＣにより精製した。
５０ml／分で５．３分後に主要ピークを集めた。蒸発に
より、質量分析法およびＮＭＲで良好であると考えられ
る生成物１４mgが得られた。

【００２２】反応スキームは以下のように表される：

【化１８】

【００２３】実施例３：メゼレインホモバニレート（Ｍ
ｅｚ−ＨＶ）の製造 ホモバニリン酸（０．６１８ｇ，０．００３４Ｍ）およ
びジシクロヘキシルカルボジイミド（０．３８５ｇ，
０．００１９Ｍ）をＣＨ₃ ＣＮ−ＣＨ₂ Ｃｌ₂ （１：
１）２０ml中一晩攪拌した。溶液をろ過し、そして蒸発
させて油状物を得、これをエーテル−ヘキサンで粉末化
した。上澄みを蒸発させ、エーテル−ヘキサンと処理
し、そして冷却すると融点１００−１０５℃の固体を生
じた。ＮＭＲは再結晶により除去できなかった不純物５
−１０％を含有する物質を示す。不純物はおそらくホモ
バニリン酸無水物および／または該酸の自己エステル化
物である。この副反応を防止するために、フェノール性
ＯＨ基をブロックすることが必要であるが、所望のエス
テルを分解せずに除去され得るブロック基を見出すこと
はできなかった。メゼレインホモバニレートを製造する
ために、メゼレイン（３０mg，０．０４６mM）およびホ
モバニリル無水物（１５．９mg，０．０４６mM）をＣａ
Ｈ−乾燥ＣＨ₂ Ｃｌ₂ （約３ml）中でピリジン１滴およ
びジメチルアミノピリジン少量と共に３日間攪拌した。
溶液をクロロホルムで希釈し、クエン酸水溶液で洗浄
し、次いで炭酸水素水溶液で洗浄し、そしてＮａ₂ ＳＯ
₄ で乾燥させた。蒸発させると、ＨＰＬＣにより未反応
のメゼレインを依然として含有していたガラス状物を生
じた。ＣＨＣｌ₃ 中の１．５％ＭｅＯＨを用いるマグナ
ムＳｉＯ₂ カラム（ワットマン・パーチシル１０mg／２
５）上での調製ＨＰＬＣにより生成物を単離した。最初
のピークを集めた。第２のピークがメゼレインだった。
生成物は正常相ＨＰＬＣにより純粋であると考えられる
が、しかし逆相ＨＰＬＣによると、ホモバニリル無水物
中の不純物からおそらく生じた不純物を含有する。１０
％２−Ｃ₃ Ｈ₇ ＯＨ−９０％Ｃ₆ Ｈ₆ を用いる調製薄層
クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂ ）では不純物を除去でき
なかった。最終的に、生成物をＡＬＴＥＸ ＯＤＳカラ
ム（２５cm×１０cm）上でのＨＰＬＣにより８５％Ｍｅ
ＯＨ−Ｈ₂ Ｏ（３ml／分）を用いて精製した。１２分に
溶離する主要ピークを集めた。蒸発によりガラス状物
２．２mgを生じた。質量分析法（ＦＡＢ＋）では正確な
分子イオンピークを示し、そしてＮＭＲでは１個のホモ
バニリル部分の存在を示す。

【００２４】実施例３の反応は下のように示される：

【化１９】

【００２５】実施例４ 材料および方法 ＲＴＸおよびレジニフェロノール９，１３，１４−オル
トフェニルアセテートはケムシム・サイエンス・ラボラ
トリーズ（カンザス州レネクサ）から購入された。メゼ
レイン、ホルボル１２，１３−ジブチレート（ｐＤＢ
ｕ）、およびホスファチジルセリンはシグマ（ミズーリ
州セントルイス）から入手された。ｄＰＰはＬＣサービ
ス（マサチューセッツ州ウオバーン）から得られた。ｄ
ＰＰ−ＨＶおよびＭｅｚ−ＨＶは化学合成および分析実
験室であるＮＣＩ−ＦＣＲＦ（メリーランド州フレデリ
ック）により合成された。〔 ³Ｈ〕ＰＤＢｕ（２０ｃｉ
／ミリモル）はニュー・イングランド・ヌクレアー（マ
サチューセッツ州ボストン）から得られた。

【００２６】生体内での実験はスプラーグ−ドウレイラ
ット（Sprague-Dawley rat）（メス，２５０−３００
ｇ）で行われた。痛み応答は眼払拭試験（Jancso等, Ac
ta Physiol. Acad. Sci. Hung., Vol. 19, p. 113 (196
1)）で測定され；増加する濃度の化合物はラットの眼に
滴下し、そして前足での保護的払拭動作の数を数えた。
溶液は１０％エタノール、１０％ツイーン−８０、８０
％生理食塩水からなる。１０％エタノールを含む溶媒は
それ自体払拭を誘導しなかった。溶媒中のエタノール濃
度が２０％に増加したとき、各化合物により引き起こさ
れた保護的払拭の数から差し引かれた誘発払拭動作にお
いてわずかに活性であることが見出された。相対的痛み
生起効力（ＲＰＰ）は、ＲＴＸの効力を１０００とした
場合に、払拭１０回の同等の応答を誘導する濃度に基づ
いて計算された（SzolcsanyiおよびJancso-Gabor, Arzn
eim-Forsch. (Drug Res.), Vol. 25, p. 1877(1975)
）。不快を最少化するために、完全な投与量応答曲線
は作成されなかった。

【００２７】化学的誘導痛み応答に対する局部脱感作は
試験化合物の点眼２時間後にラットの眼内に刺激濃度
（１％）のカプサイシンを滴下することにより試験され
た（Jancso等, Acta Physiol. Acad. Sci. Hung, Vol.
19, p. 113 (1961) ）。脱感作の程度は対照および処理
前のラットにおけるカプサイシンにより誘導された払拭
数から計算された。炎症性応答は試験化合物の局所適用
により誘導されたエバンスブルー浸出を測定することに
より定量された（Saria 等, J. Neurosci. Meth., Vol.
8, p. 141(1983)）。１％エバンスブルー溶液（１００
IU／mlヘパリンを含有する生理食塩水中に２０mg／kg）
を静脈内に深いエーテル麻酔下で注射し、次いで５分
後、アセトンに溶解した化合物５０μｌを後ろ足に局部
的に注入した。３０分後、最大ＲＴＸ誘導エバンスブル
ー浸出（Szallasi等, Neuroscience（印刷中，1989））
の時点でラットを殺し、後ろ足の皮膚を除去し、そして
迅速に重量を測定した。浸出したエバンスブルーは熱
（５０℃）ホルムアミド中での一晩保温により組織から
抽出され、次に６２０ｎｍでの分光分析法で測定され
た。全身的脱感作を調べるために、化合物は上記溶媒中
のものが皮下注射された。化学的に誘導された痛み応答
の脱感作は上記のように決定された。神経性炎症に対す
る脱感作は、対照および処理前ラットにおいて局部的に
注入したキシレンに応答したエバンスブルー浸出を比較
することにより決定された（Jancso等, Br.J. Pharmaco
l. Chemother, Vol. 31, p. 138 (1967) ）。全身的脱
感作は試験化合物の投与６時間後試験された。プロテイ
ンキナーゼＣに結合する〔 ³Ｈ〕ＰＤＢｕの阻害は、Ｄ
ＥＡＥセルロースクロマトグラフィー段階を介して精製
したプロテインキナーゼＣ（Jeng等,Cancer Res., Vol.
46, p. 1966 (1986)）を用いる以外、上記のように（S
harkey 等, Cancer Res., Vol. 45, p. 19 (1985)）決
定された。

【００２８】結果 眼払拭アッセイは限定された量で利用可能な化合物の多
様侵害受容器での効力の評価を可能にする。ＲＴＸおよ
びｄＰＰ−ＨＶはこのアッセイにおいて同等な活性を示
した（図１参照）。図１において、試験された化合物は
次のように表される：ＲＴＸ（○），ｄＰＰ−ＨＶ
（△）およびＭｅｚ−ＨＶ（●）。各々の値は２−３回
の試験における１０−１５匹の動物に対する平均値±Ｓ
ＥＭである。これに対し、Ｍｅｚ−ＨＶは約４桁低い効
力であり、そして相当する母体化合物はそれらの溶解度
（１−５×１０^-3ｇ／ml）により許容される最高の濃度
まで活性を示さなかった。ＲＴＸ誘導眼払拭動作は以前
報告されたように点眼５−１０秒後に始まり（Szallasi
等, Neuroscience（印刷中，1989））、ｄＰＰ−ＨＶ滴
下に続く遅延はより長かった（２０−３０秒）。これら
の化合物の相対的痛み生起効力（ＲＰＰ）は表１にまと
められている。

【００２９】

【表１】

【００３０】多様侵害受容器により仲介される試験され
た第２の応答は神経性炎症の刺激である。神経性炎症は
エバンスブルー浸出を測定することにより定量され得る
（Jancso等, Br. J. Pharmacol. Chemother, Vol. 31,
p. 138 (1967); Saria等, J.Neurosci. Meth., Vol. 8,
p. 41 (1983)）。局部ＲＴＸ処置の場合、エバンスブ
ルー浸出は適用３０分後そのピーク値に達する（Szalla
si等, Neuroscience（印刷中，1989））。ｄＰＰ−Ｈ
Ｖ、Ｍｅｚ−ＨＶまたは母体ジテルペンではこの期間に
わたって浸出は見られなかった（表１参照）。

【００３１】観察時間が３時間まで延長される場合、わ
ずかな浸出がメゼレインおよびｄＰＰ処置に対して観察
された。これらの実験において、ＲＴＸ、ｄＰＰ−Ｈ
Ｖ、およびＭｅｚ−ＨＶは同じ投与量で使用された。後
者２種の化合物の限定された量のために、より高い投与
量での活性を評価することができなかった。それにもか
かわらず、ＲＴＸは３×１０^-6ｇ／足で検出可能な応答
を与えるから（Szallasi等, Neuroscience（印刷中，19
89））、我々の結果はｄＰＰ−ＨＶおよびＭｅｚ−ＨＶ
の両方が当該応答に対してＲＴＸに比べ少なくとも３０
倍低い効力であることを示唆する。

【００３２】カプサイシン同族体の特異な特徴は、その
他の神経性刺激と異なり、初期刺激相の後に多様侵害受
容器を脱感作することである（Jancso等, 1968）。化学
的に誘導された痛み応答の局部的および全身的脱感作な
らびに神経性炎症経路の全身的脱感作の両方が試験され
た。ＲＴＸと同様にｄＰＰ−ＨＶは化学的に誘導された
痛みおよび神経性炎症を脱感作することができた（上記
表１参照）。局部投与の際の痛みの脱感作のために、ｄ
ＰＰ−ＨＶはその効力がＲＴＸの１０倍以内だった。全
身的脱感作におけるその相対的効果は低かった。以前の
試験において得られたＲＴＸに対する投与量応答曲線に
基づいて（Szallasi等, Neuroscience（印刷中，198
9））、化学的に誘導された痛みを脱感作するｄＰＰ−
ＨＶの相対的効力は約３０００倍低く、そしてキシレン
誘導化エバンスブルー浸出の阻害に対しては３００倍低
かった（上記表１参照）。利用可能なｄＰＰ−ＨＶの量
がさらに進んだ分析を妨げた。Ｍｅｚ−ＨＶまたは母体
ジテルペンには活性が見出されなかった。

【００３３】低体温の誘導はカプサイシン同族体の第３
の典型的応答である（Szolcsanyi,Handbook of Experim
ental Pharmacology, p. 437 (1982)）。生物学的活性
のその他の比較のために、低体温の誘導に対するＲＴＸ
およびｄＰＰ−ＨＶの相対的効力もまた調べられた。神
経性炎症に対する脱感作に対するＥＤ５０より高い投与
量である１０００μｇ／ｋｇの投与量でのｄＰＰ−ＨＶ
の全身的投与は低体温の誘導に全体的に不活性だった。
従って、ｄＰＰ−ＨＶはこの応答に対し、１０^-7ｇ／ｋ
ｇと低い投与量で体温の実質的低下を生じるＲＴＸ（Sz
allasi等, Neuroscience（印刷中，1989））に比べ少な
くとも４桁低い効力だった。ｄＰＰ−ＨＶの量は低体温
試験においてわずか４匹のラットを処置するのに足りた
だけだったけれども、異なるカプサイシン同族体に対す
る応答の不均一性のその他の証拠を提供するからその結
果は重要である。

【００３４】ホルボルエステルおよび関連ジテルペンの
ためのレセプターはＣａ²⁺，リン脂質依存性プロテイン
キナーゼであるプロテインキナーゼＣである（Nishizuk
a, Nature, Vol. 308, p. 693 (1984)）。ホルボルエス
テル上の遊離２０−ヒドロキシル基は活性のために重要
であるから、ｄＰＰ−ＨＶおよびＭｅｚ−ＨＶ上の２０
−ホモバニレート基はカプサイシン類似体としてそれら
の活性を高めるのと同時にプロテインキナーゼＣに対す
るそれらの親和性を低下させるであろうと考えられる。
結合親和性は〔 ³Ｈ〕ホルボル１２，１３−ジブチレー
ト結合の競合により測定された。試験された３対の化合
物の各々に対して、ホモバニリン酸とのエステル化は予
期されたようにプロテインキナーゼＣ結合親和性を低下
させた。親和性の低下の範囲はジテルペンエステルの性
質に実質的に依存した。それはＲＴＸの１１倍からＭｅ
ｚ−ＨＶの６９０倍に及んだ。これらのホモバニリルエ
ステル全てに対する絶対的親和性は８０と４４０ｎＭの
間であり、一方ホルボル１２，１３−ジブチレートでは
０．６ｎＭだった（下の表２参照）。

【００３５】

【表２】

【００３６】考察 カプサイシン同族体の構造−活性分析はほぼ６０年間の
徹底的な研究の対象だった。初期の興味は合成コショウ
風味物質の探索により生起された（Newman, Chem. Pro
d. Chem. News. (London), Vol. 27, p. 467 (195
3)）。カプサイシンが知覚ニューロンに特異な薬学的効
果を有する−最初の刺激の後に逆の作用を発揮する、す
なわち脱感作を誘導する（Jancso, Pharmacology of Pa
in, Vol. 9, p.33,ペルガモン・プレス (1968) ）−と
いう発見以来、構造−活性分析はまた高い脱感作活性や
低い脱感作活性を有するカプサイシン同族体の間の構造
上の相違に拡張された。初期の発見は、アクリルアミド
型結合が脱感作に必須であることが示唆された（Jancs
o, Pharmacology of Pain, Vol. 9, p. 33,ペルガモン
・プレス (1968) ）。さらに、カプサイシノイドに関す
るより詳細な研究は、ＲＴＸに見出されるようなエステ
ル結合がアクリルアミド結合の代わりに相当に耐性であ
ることを示した（Szolcsanyi等, Arzneim-Forsch. (Dru
g Res.), Vol. 25, p.1877(1975) ）。ホモバニリル基
が活性に必須であるけれども、この構造を有するいくつ
かのカプサイシン類似体は不活性であることもまた見出
された（Szolcsanyi等, Arzneim-Forsch. (Drug Res.),
Vol. 25, p. 1877(1975) ）。

【００３７】カプサイシン──知覚ニューロンに作用す
るその他の刺激剤とは異なる──がこれらの侵害受容器
を脱感作する基本的機構は依然として不明である。生体
内での形態学的研究（Jancso等，Brain Res., Vol. 29
5, p. 211 (1984) ）および試験管内での神経生理学的
研究（Marsh 等，Neuroscience, Vol. 23, p. 275 (198
7)）または神経化学的研究（Wood等，J. Neurosci., Vo
l. 8, p. 3208 (1988)）は、非慣用的なカプサイシン感
受性カチオンチャンネルを仲介するカルシウム取込みの
役割を強く示した。この細胞内カルシウム蓄積は新生動
物に観察される神経変質または成熟動物における長期間
続く脱感作を説明し得る（Buck等，Pharmacolo. Rev.,
Vol. 38, p. 179 (1986)）。最近、我々はＲＴＸ、Ｃ２
０位においてホモバニリル置換基でエステル化されたジ
テルペンが非常に有力なカプサイシン類似体のように作
用することを示した（Szallasi等, Neuroscience（印刷
中，1989））。これらの結果はホモバニリルジテルペン
がカプサイシン同族体の新規種類を表すことを示唆す
る。

【００３８】ＲＴＸの母体化合物であるレジニフェロノ
ール９，１３，１４−オルトフェニルアセテートはＲＴ
Ｘの特徴的な生物学的応答に対して全体的に不活性であ
ることが見出された。それがＲＴＸに比べて少なくとも
１０００倍低い効力であるという我々の証拠はマウス耳
紅斑アッセイにおける相対的効力と良好な一致を示す
（Schmidt 等, Inflammation, Vol. 3, p. 273 (1979)
）。同様に、レジニフェロノール９，１３，１４−オ
ルトフェニルアセテートはプロテインキナーゼＣ上のホ
ルボルエステル結合部位への競合においてｄＰＰまたは
メゼレインに比べ１００倍低い活性だった。耳赤色化ア
ッセイにおけるその効力はｄＰＰおよびメゼレインに比
べそれぞれ２５倍および３３倍低いと報告されていた
が、これも同様に一致する（Hergenhahan 等, J. Cance
r Res. Clin. Oncol., Vol. 104, p. 31(1982) ）。眼
払拭試験におけるｄＰＰ−ＨＶはＲＴＸに匹敵したが、
しかしその他の生体内アッセイにおいて２−４桁効力が
低かった。眼払拭試験においてＲＴＸは−おそらくその
薬力学に起因する−生物学的活性に対するその他のアッ
セイにおけるよりも活性が低く（Szallasi等, Neurosci
ence（印刷中，1989））、全身的投与によるＲＴＸとｄ
ＰＰ−ＨＶの効力の比較により、推定上のＲＴＸレセプ
ターに対するより良好な評価または親和性が得られる。
ｄＰＰ−ＨＶはカプサイシンに比べより活性であり、そ
してＲＴＸより活性が低いと結論され得る。眼払拭およ
びエバンスブルー浸出アッセイにおける脱感作に対する
ｄＰＰ−ＨＶの相対的効力の相違はさほど驚異的ではな
い。なぜならば、これまで１００倍の相違が同様のアッ
セイにおいてＲＴＸの相対的活性に見出されていたから
である（Szallasi等, Neuroscience（印刷中，198
9））。

【００３９】ＲＴＸがエバンスブルー浸出の脱感作に対
するよりも低体温の誘導により効果的であることが見出
されたから、低体温の誘導におけるｄＰＰ−ＨＶの弱い
効力が特に興味深い（Szallasi等, Neuroscience（印刷
中，1989））。この発見は、ホモバニリル−ジテルペン
誘導体が異なるＲＴＸ−レセプターサブクラスに対する
特異なプローブのファミリーを与え得るという可能性を
高める。あらゆる場合において、さらに行われる研究は
全身分布および固有の標的親和性に作用する因子を区別
することが必要となるであろう。

【００４０】ｄＰＰ−ＨＶとは対照的にＭｅｚ−ＨＶは
ＲＴＸ類似体として非常に低い効力のものだった。それ
は眼払拭試験において非常に弱い刺激性を有し、そして
脱感作アッセイにおいてＲＴＸ様投与量において不活性
だった。これらの結果は、推定上のＲＴＸレセプターが
ジテルペン部分の性質に高い選択性であることを示唆す
る。

【００４１】以下の実施例は本発明の組成物をさらに説
明し、そして当業者が本発明をより完全に理解すること
を可能にするであろう。本発明は以下の実施例に限定さ
れるものではない。

【００４２】実施例５ 活性成分としてｄＰＰ−ＨＶ２ｍｇを担体としての微結
晶性セルロース１８７ｍｇ、ステアリン酸９ｍｇおよび
コロイド状シリカ２ｍｇと混合する。これらの材料は押
出されて錠剤に成形される。

【００４３】実施例６ まず錠剤を配合し、そして実施例５のように調製する。
この錠剤を患者に経口投与し、そして４−５個の錠剤が
典型的な一日の投与量に相当する。

【００４４】本発明は以上に記載されたものであり、多
くの方法で変更され得ることが明らかである。そのよう
な変更が本発明の精神および範囲から逸脱するとは見な
されるべきではなく、そして当業者に明白であるような
全てのそのような変形が特許請求の範囲の範囲内に包含
されることが意図される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はＲＴＸの点眼に応答する眼払拭の投与量
依存性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/335 Ａ６１Ｋ 31/335 Ｃ０７Ｄ 493/08 Ｃ０７Ｄ 493/08 Ｂ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 神経性炎症、化学的および熱的に誘導さ
   れる痛み、カプサイシン感受性知覚求心性経路を含む応
   答、および視床下部温度制御領域を含む応答の主因を脱
   感作するための次式ＩＩ： 【化１】 〔式中、Ｒ₃ はＨ、ＯＨまたは次式： 【化２】 で表される基を表し、Ｒ₄ はＨまたは次式： 【化３】 で表される基を表し、Ｒ’、Ｒ”およびＲ”’の少なく
   とも１つは芳香族基を表し、そして残りの基は次式：
   （ＣＨ₂ ）_n'−ＣＨ₃ （式中ｎ’は０−１４を表す）で
   表される基を表し、前記芳香族基は次式： 【化４】 （式中、Ｒ₆ −Ｒ₁₀は互いに独立してＯＨ、ＯＣＨ₃ ま
   たはＨを表し、そしてｎは０−１０を表す）で表される
   基を表し；Ｒ₁ はカプサイシン様構造体中にある場合に
   カプサイシン様活性を付与する置換基のパターンを保持
   するホモバニリン酸またはその類似体の基を表すが、た
   だし、レジニフェラトキシンは除外される〕で表される
   化合物の治療有効量と、その薬学的に許容され得る担体
   からなる組成物。
2. 【請求項２】 化合物がチンヤトキシンである請求項１
   記載の組成物。