JPH08506799A - 流動化腸粘膜下組織および注射可能な組織移植体としてのその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 流動化された注射可能な組織移植組成物が開示されている。その組成物は粉砕された腸粘膜下組織またはプロテアーゼ分解した腸粘膜下組織を含んでいる。注射可能な組織移植組成物を調製し、また使用する方法が記載されている。好ましくは、温血脊椎動物の腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含む腸粘膜下組織から組織移植材料が調製される。内在性組織の形成を誘発することによる組織欠陥の修復を促進するために、有効量の流動化移植組成物を注射することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 流動化腸粘膜下組織および注射可能な組織移植体としてのその使用背景技術及び発明の開示 本発明は、注射可能な組織移植組成物およびその調製と使用のための方法に関 する。より詳細には本発明は、腸粘膜下組織から得た注射可能で免疫原性のない 組織移植組成物に関する。生体内において組織欠陥を有する部位に処置を行うに あたり、本発明による流動化組織移植組成物は、欠陥を修復する内在性組織の成 長を促進させる。 温血脊椎動物の腸の粘膜下組織や粘膜の基底部を含有する組成物をシート状に 形成したものを組織移植材料として用い得るという報告がある。米国特許第４９ ０２５０８号を参照されたい。この米国特許に記載され請求されている好ましい 三層構造シート用組成物は、高応諾性、高破断点および効果的な有孔指数を有す るなど、優れた機械的性質を示すため、血管への移植構成体として用いられその 利便性を発揮している。当該特許に開示された移植材料はまた、腱やじん帯の代 替物としての応用分野においても有用である。これらの分野で用いる場合には、 上記三層構造の移植構成体の好ましいものは、移植構成体で置換された組織を再 成長させるためのマトリックスとして機能するものと思われる。この性質は、腸 組織由来の移植構成体がユニークな三層シート構造を取っていることによるもの と信じられていた。 驚くべきことに、腸の粘膜下組織は、これを粉砕および／またはプロテアーゼ 分解することによって見かけの生体親和性を低下させることなく流動化させるこ とができ、修復が必要なホストの組織に対しより非侵襲的な投与方法（例えば注 射あるいは外用）に用い得ることが見いだされた。 本発明は、注射可能で非侵襲的な組織移植用組成物を提供するものである。本 発明の一態様においては、上記組成物は粉砕された大小の腸粘膜下組織を好まし くは水性懸濁液中において含有するものである。本発明は、別の観点からは、プ ロテアーゼ分解された腸粘膜下組織を含有する組成物を提供するものである。 この流動化組成物は、温血脊椎動物において筋肉や結合組織などの軟組織およ び骨を含む内在性組織を形成させる方法に有利に用いられる。この方法は、粉砕 された腸粘膜下組織やそのプロテアーゼ分解物の懸濁液を含有する組成物を脊椎 動物に注射する段階を包含するものであって、その注射の量は、前記流動化組織 移植組成物が注射された場所において内在性の組織成長を誘導するのに充分な量 をもってするものである。本発明において成長が促進される内在性結合組織とし ては、コラーゲン、エラスチン、および筋肉が挙げられる。 より具体的な観点から述べると、本発明は温血脊椎動物の括約筋機能を増強さ せるための方法を提供するものであって、この方法は、粉砕腸粘膜下組織の水性 懸濁液を含有する組織移植組成物の有効量を括約筋形成組織に注射する段階を包 含する。本発明をさらに別の観点から述べると、本発明は、注射可能な組成物と してプロテアーゼ分解された腸粘膜下組織を含有する組成物を用いる、括約筋機 能の増強方法を提供するものである。 本発明における注射可能な若しくは「流動化」された組成物は、広範な組織修 復、組織再構築という種々の応用分野に利用できる。これらの組成物は単独であ るいは米国特許第４９０２３０８号に記載された移植材料と共に用いることがで きる。例えば本発明組成物は関節骨同士の界面におけるコラーゲン性の半月を外 科的に再構築するために用い得る。そのような再構築においては、第一の組織移 植組成物のシート（これは温血脊椎動物の腸の粘膜下組織を含有することが好ま しい）が密閉された小袋の形態に作成され、この小袋には本発明の流動化組織移 植組成物が充填される。 本発明の付加的な目的、特徴、および利点は、以下に記載する現在認識されて いる発明を実施するための最良の形態を例示する好ましい態様の詳細な説明を考 慮することにより、当業者にとって明白となろう。発明を実施するための最良の形態 本発明による組成物のための好ましい出発物質の一つは、温血脊椎動物の腸組 織断片の粘膜下組織を粘膜基底部とともに含有するものである。特に、好ましい 出発物質は、小腸の断片の粘膜下組織を粘膜筋板層および細胞層とともに含んで おり、断片の粘膜の筋層および管腔部からそれらの層が層分離される。本明細書 中では、このような材料を“小腸粘膜下組織（“ＳＩＳ”）または“ＳＩＳ三層 ラミネート”と呼ぶ。 小腸の断片からのＳＩＳの調製は米国特許第４９０２５０８号に詳述されてお り、その開示内容は本明細書の一部を構成するものとする。まず腸の断片を長手 方向の擦過運動によって剥離し、外側層（特に、漿膜と筋層）と内側層（粘膜の 管腔部）の両方を除去する。典型的には、ＳＩＳを生理食塩水ですすぎ、使用す るまで下記に述べるように水和状態または脱水状態で保存する。 本発明の流動化組成物は、粘膜下組織を粉砕しおよび／または当該組織を可溶 化しかつ実質的に均質の溶液を形成するのに十分な時間、トリプシンまたはペプ シンなどのプロテアーゼを用いて粘膜下組織を分解することによって、腸粘膜下 組織の溶液または懸濁液として調製する。腸粘膜下組織から成る出発物質は、裂 断、切断、磨砕、剪断などによって粉砕する。冷凍または凍結乾燥状態で粘膜下 組織を磨砕するのが好ましい。しかし、粘膜下組織の破片の懸濁液を高速（高剪 断）の混合器内で処理し、もし必要であれば、過剰な水分を遠心分離するか他の 容器に移すことによって脱水しても良好な結果を得ることができる。粉砕した腸 粘膜下組織を乾燥して粘膜下組織粉末とすることもできる。その後、それを水和 、即ち、水または緩衝化された生理食塩水、および他の任意の薬学的に許容され る賦形剤と混合し、２５゜Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの粘度を有 する流体として組織移植組成物を調製する。粘度が高い移植組成物はゲルまたは ペーストの固さを有する。本発明の組成物は、電離放射線にさらすなどの本技術 分野で知られた殺菌技術を用いて殺菌することができる。 本発明の流動化した腸粘膜下組織組成物は、本技術分野で知られたハイブリド ーマの技術を使用して米国特許第４９０２５０８号に記載された組織移植材料に 対する抗体を生産するために使用できる。ＳＩＳから得た流動化粘膜下組織を免 疫的にコンピテントな動物に注射し、その動物の脾臓内での抗体生成リンパ球の 生成を引き起こす。リンパ球を骨髄腫細胞と融合させハイブリッド細胞（ハイブ リドーマ）を形成し、粘膜下組織抗体生成能を有するものをスクリーニングする 。選択されたハイブリドーマを培養することによって産生されたモノクロール抗 体 を分離し、生体内および試験管内において粘膜下組織を検出するのに使用する。 本発明の流動化粘膜下組織は、骨または軟組織などの修復が必要な組織のため の注射可能な異種移植として、または、最も典型的には外傷または疾病によって 引き起こされた組織の欠陥を修復するための増強移植としても使用できる。また 、本発明の流動化粘膜下組織組成物は、移植構造物のためのフィラーとして使用 するのが有利であり、例えば、そのフィラーは密閉された（縫合された）小袋、 即ち“枕”状に形成された１個またはそれ以上のＳＩＳのシートを含んでおり、 美容外科手術または外傷処置手術に使用される。 実施例１−ＳＩＳ懸濁液 上記のようにして調製したＳＩＳのサンプルを、組織はさみ、単刃の安全かみ そり、または他の好適な切断具を使用して任意の小片に切り刻む。底が平坦なス テンレス製の容器にサンプルを入れ、液体窒素を容器内に導入することによって サンプルを冷凍し、それらを粉砕するための準備を行う。 冷凍したＳＩＳのサンプルを粉砕し、荒いＳＩＳ粉末を調製する。この様な処 理は、例えば、冷凍サンプルの上に置かれた円筒状の真鍮インゴットを具備する 手動式のアーバープレスを用いて行われる。真鍮インゴットは、サンプルとプレ スのアーバーとの間の仲介物として機能する。典型的には、液体窒素をＳＩＳサ ンプルに定期的に加えることによりサンプルを凍結状態に保つ必要がある。 本発明において用いられるＳＩＳ粉末を生産するために、別の方法によってＳ ＩＳサンプルを粉砕してもよい。例えば、ＳＩＳサンプルを凍結乾燥し、それを 手動式アーバープレスまたは他の磨砕手段を用いて磨砕することができる。それ に替え、ＳＩＳを高剪断混合器内で処理し、脱水と乾燥を行うことによってＳＩ Ｓ粉末を生産してもよい。 また、予め低温貯蔵した乳鉢と乳棒を用いてＳＩＳ粉末を磨砕することにより 、均一でより微細に分割された製品を生産できる。この場合も、必要に応じて液 体窒素を使用し、最終磨砕の間、冷凍粒子を固形の状態に維持する。その粉末は 、例えば、緩衝化した生理食塩水を使用して容易に水和させることができ、これ により本発明の流動化組織移植材料を所望の粘度で生産できる。 実施例２−ＳＩＳ溶液 ＳＩＳ粉末を金網を通してふるいにかけ任意の目的に適った容器に入れる。そ して、粉末をタンパク質分解し、実質的に均一な溶液を作成する。ある例では、 ＨＣｌでｐＨを２．５に調整した０．１Ｍの酢酸中において、１ｍｇ／ｍｌのペ プシン（シグマ・ケミカル社、ミズーリ州セントルイス）を用いて室温下４８時 間かけて粉末を分解する。反応培地を水酸化ナトリウムを用いて中和し、ペプシ ン活性を不活化する。可溶化された粘膜下組織を、溶液の塩析出によって濃縮し 、更なる精製および／または凍結乾燥のために分離し、プロテアーゼによって可 溶化された腸粘膜下組織を粉末として調製する。 本発明による流動化粘膜下組織組成物の粘度は、粘膜下組織成分の濃度と水和 の程度とを制御することによって操作できる。粘度は、２５°Ｃにおいて約２ｃ ｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの範囲に調整できる。粘度が低い粘膜下組織組成 物は、関節内への適用または体腔内への適用に適している。ゲルなどの高粘度組 成物は、ＳＩＳ分解溶液のｐＨを約６．０〜約７．０に調整することによって調 製できる。粘膜下組織の懸濁液または粘膜下組織の分解溶液などの本発明による ゲル組成物は、典型的には注射器またはカテーテルを用いて皮下または筋肉内へ 適用するのが好ましい。 実施例３−適用 Ａ．懸濁液としたＳＩＳを５匹のイヌにおいて半月として利用した。即ち、通 常の雑種成犬の内側半月を除去し、新たに構成したＳＩＳ半月によって置き換え た。このＳＩＳ半月は、半円形の枕状に形成したＳＩＳのシート（細胞層を“内 部”に有する）によって構成した。この枕をＳＩＳの懸濁液で充填し、枕の縫合 線を内側側副靭帯に取り付けた。これにより、枕の物質は、内側の大腿関節と脛 骨プラトーとの間において荷重を受ける衝撃吸収体として機能した。５匹の内３ 匹を実験の犠牲にした。１番目のイヌは手術後４カ月と４日が経過した時に犠牲 にした。２番目のイヌは手術後３カ月と２１日が経過した時に犠牲にした。４番 目の動物は手術後４カ月と３日が経過した時に犠牲にした。これら３匹の動物の 何れも結果は類似していた。ＳＩＳ／半月は、組織学的方法では通常の半月の繊 維軟骨と区別できない、部分的に組織化された繊維軟骨材料を形成した。この新 たに形成された半月の形状は通常の半月とは異なるが、本研究の目的は、結合組 織の再構築（remodeling）が起きるか否か、および好ましくない反応が生じるか 否かを見るだけであった。拒絶反応、炎症、もしくは感染の兆候は全く無かった 。３番目と５番目のイヌはまだ生きている。上記の研究では、ブタＳＩＳをイヌ ホストに使用した。 Ｂ．イヌの４つの別々の皮下部位にＳＩＳ溶液を注射した。さらに、溶液（ｐ Ｈ＝８．０）を膣壁の粘膜下組織位置に、また膝の内側側副靭帯領域に注射した 。ホスト動物の拒絶反応、感染、もしくは異常な生理学的反応の兆候はなかった 。注射した部位は肥厚する。注射物質として生理食塩水を使用したコントロール 部位では材料が完全に吸収され、結合組織の肥厚は見られなかった。 Ｃ．３匹のブタの尿道括約筋を増強するためにＳＩＳ懸濁液を使用した。ＳＩ Ｓ材料の懸濁液を、エンドスコピーを介して、またラパロスコピーを介して、ブ タの膀胱の粘膜下組織および漿膜下の位置に注射した。さらに、その材料（約４ ｍｌ）を、尿道口周囲の両側における粘膜下組織位置および膀胱壁に注射した。 最初の注射から９週間経過した後に１匹のブタを実験の犠牲にした。平滑筋運動 が陽性である、紡錘体形の筋繊維芽細胞の浸潤を伴った結合組織の再構築を示し た。この種の結合組織反応は、動脈位置におけるＳＩＳチューブを使用した場合 に見られたものと非常に類似している。注射物質として生理食塩水を使用したコ ントロール位置では反応が見られなかった。ＳＩＳは、適切な結合組織の再構築 を促進し、懸濁したＳＩＳ材料を用いることによって膀胱壁および／または膀胱 括約筋を増強できると結論づけられる。 本発明の流動化粘膜下組織組成物は、組織の置換および修復の両面において広 範な用途がある。欠陥が存在する領域内において生来の結合組織または骨の再成 長を誘発するために、流動化粘膜下組織組成物を本発明の方法に従って使用する 。治癒すべき組織欠陥または負傷の在る場所に有効量の粘膜下組織組成物を注射 することにより、より侵襲的な外科手術を行うことなく、移植組成物の生体親和 性を簡単に利用することができる。 恐らく本発明組成物の最も顕著な面は、影響を受けた領域内の生来の組織の再 成長を誘発する能力である。治癒すべき組織欠陥または負傷の在る場所に有効量 の流動化粘膜下組織組成物を注射することにより、大きな侵襲的手術を行うこと なく、この驚くべき特性を簡単に利用できる。 特定の好ましい例を参照して本発明を詳細に説明したが、下記の請求の範囲に 記載され定義された発明の範囲および精神の範囲で種々の変化および変更が存在 する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年６月１０日 【補正内容】 請求の範囲 １．組織移植組成物を調製する方法であって、腸粘膜下組織を含む腸組織を粉砕 する工程と、得られた粉砕腸組織を水和して２５°Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００， ０００ｃｐｓの粘度を有する流体として前記組織移植構造体を提供する工程とを 含む方法。 ２．粉砕工程が、腸組織を冷凍し、冷凍した腸粘膜下組織を磨砕する工程を含む 請求項１に記載の方法。 ３．粉砕工程が、腸組織を凍結乾燥し、凍結乾燥した腸組織を磨砕する工程を含 む請求項１に記載の方法。 ４．粉砕工程が、腸組織を高剪断混合器内で処理する工程を含む請求項１に記載 の方法。 ５．組織移植組成物を殺菌する工程を更に含む請求項１に記載の方法。 ６．腸組織が粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでおり、前記粘膜下組織と粘膜基 底部は、温血脊椎動物の腸粘膜の筋層および管腔部から分層されるものである請 求項１に記載の方法。 ７．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層か らなるものである請求項６に記載の方法。 ８．粉砕した腸組織を、組織を可溶化して組織移植組成物を実質的に均質な溶液 として提供するのに十分な時間、プロテアーゼを用いて分解する工程を更に含む 請求項１に記載の方法。 ９．実質的に均質な溶液を中和してプロテアーゼを不活化する工程を更に含む請 求項８に記載の方法。 １０．腸組織が粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでおり、前記粘膜下組織と粘膜 基底部は、温血脊椎動物の腸粘膜の筋層および管腔部から分層されるものである 請求項８に記載の方法。 １１．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項１０に記載の方法。 １２．実質的に均質な溶液から可溶化した組織を分離する工程を更に含む請求項 １０に記載の方法。 １３．組織移植組成物を調製する方法であって、腸粘膜下組織を、この粘膜下組 織を可溶化して実質的に均質な溶液を形成するのに十分な時間、水溶液中におい てプロテアーゼを用いて分解する工程を含む方法。 １４．実質的に均質な溶液を中和してプロテアーゼを不活化する工程を更に含む 請求項１３に記載の方法。 １５．実質的に均質な溶液から可溶化した組織を分離する工程を更に含む請求項 １３に記載の方法。 １６．腸組織が粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでおり、前記粘膜下組織と粘膜 基底部は、脊椎動物の腸粘膜の筋層および管腔部から分層されるものである請求 項１３に記載の方法。 １７．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項１６に記載の方法。 １８．腸粘膜下組織を含む粉砕した腸組織を水溶性の媒体に懸濁した懸濁液を含 む組織組成物。 １９．２５°Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの粘度を有する請求項１ ８に記載の組成物。 ２０．腸組織か温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでお り、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、小腸の前記断片の粘膜の筋層および管腔部 から分層されるものである請求項１８に記載の組成物。 ２１．腸組織か本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項２０に記載の方法。 ２２．プロテアーゼ分解した、粘膜下組織を含む腸組織を水溶性キャリア中に含 有する組成物。 ２３．２５°Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの粘度を有する請求項２ ２に記載の組成物。 ２４．腸組織か温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでお り、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、小腸の前記断片の粘膜の筋層および管腔部 から分層されるものである請求項２２に記載の組成物。 ２５．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項２４に記載の方法。 ２６．プロテアーゼを実質的に含有しない請求項２２に記載の組成物。 ２７．関節運動する骨同士の界面におけるコラーゲン半月を外科的に再構築する 方法てあって、その方法は、粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでいる第一の組織 移植組成物のシートを含む組織移植構成体を外科的に界面に移植する工程を含み 、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、温血脊椎動物の腸断片の粘膜の筋層および管 腔部から分層されるものであり、前記シートは密閉された小袋の形態に作成され ると共に、粘膜下組織を含む粉砕された腸組織または粘膜下組織を含むプロテア ーゼ分解された腸組織を含む第二の組織移植組成物によって充填されるものであ る方法。 ２８．第一および第二の組織職組成物か本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織 、粘膜筋層および細胞層からなるものである請求項２７に記載の方法。 ２９．傷の治癒を促進する方法であって、粉砕された腸組織を水溶性の媒体に懸 濁した懸濁液または、水溶性キャリア内のプロテアーゼ分解した腸組織の溶液を 含む有効量の組織移植組成物を治癒すべき傷に適用する工程を含み、これにおい て前記腸組織は粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでおり、この粘膜下組織と粘膜 基底部は、温血脊椎動物の腸粘膜の筋層および管腔部から分層されるものである 方法。 ３０．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項２９に記載の方法。 ３１．密閉された小袋の形態に作成され、粉砕された腸組織またはプロテアーゼ 分解された腸組織の懸濁液を含む流動化された組織移植組成物を含有し、これに おいて前記腸組織が粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでおり、この粘膜下組織と 粘膜基底部は、温血脊椎動物の腸粘膜の筋層および管腔部から分層されるもので ある組織移植構成体。 ３２．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項３１に記載の方法。 ３３．粉末形態である、乾燥腸粘膜下組織。 ３４．粉末形態である、乾燥プロテアーゼ可溶化腸粘膜下組織。 ３５．内在性の組織の形成が必要な場所において温血脊椎動物の内在性組織の形 成を誘導する方法であって、粘膜下組織を含む粉砕された腸組織またはそのプロ テアーゼ分解物を含む組織移植組成物を、その場所において内在性の組織成長を 誘導するのに充分な量提供する工程を含む方法。 ３６．腸組織が温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでお り、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、前記断片の粘膜の筋層および管腔部から分 層されるものである請求項３５に記載の方法。 ３７．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項３６に記載の方法。 ３８．成長が促進される内在性の組織は、コラーゲン、エラスチンもしくは筋肉 を含む結合組織または骨である請求項３５に記載の方法。 ３９．組織移植組成物が温血脊椎動物の括約筋を形成する組織内に注射され、成 長が誘導される組織が括約筋を形成する組織である請求項３５に記載の方法。 ４０．温血脊椎動物において括約筋の機能を増強するための方法であって、粘膜 下組織を含む粉砕された腸組織または粘膜下組織を含む腸組織のプロテアーゼ分 解物を含む有効量の組織移植組成物を括約筋を形成する組織内に注射する工程を 含む方法。 ４１．腸組織か温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでお り、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、前記断片の粘膜の筋層および管腔部から分 層されるものである請求項４０に記載の方法。 ４２．腸組織が本質的に脊椎動物の腸断片の粘膜下組織、粘膜筋層および細胞層 からなるものである請求項４１に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (71)出願人 メソディスト ホスピタル オブ インデ ィアナ，インコーポレイテッド アメリカ合衆国・インディアナ州 46202・インディアナポリス ノース セ ネート ブルバード 1701 (71)出願人 ナップ，ピーター，エム．，ジュニア アメリカ合衆国・インディアナ州 46032・カーメル・ローレルウッド 1009 (72)発明者 バディラック，ステファン，エフ. アメリカ合衆国・インディアナ州 47906・ウェストラファイエット・ノッテ ィンガム プレイス 2610 (72)発明者 ハイルズ，マイケル アメリカ合衆国・インディアナ州 46208・インディアナポリス・コロン コ ート 3817 (72)発明者 ヴォイテック，シェリー アメリカ合衆国・インディアナ州 47906・ウェスト ラファイエット・アパ ートメント 33・サウス リバー ロード 271 (72)発明者 ディメーター，ロバート，ジェイ. アメリカ合衆国・インディアナ州 46158・ムーアーズヴィル・コットンウッ ド ドライブ 360 (72)発明者 ナップ，ピーター，エム．，ジュニア アメリカ合衆国・インディアナ州 46032・カーメル・ローレルウッド 1009

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．組織移植組成物を調製する方法であって、腸粘膜下組織を含む腸組織を粉砕 する工程と、得られた粉砕腸組織を水和して２５゜Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００， ０００ｃｐｓの粘度を有する流体として前記組織移植構造体を提供する工程とを 含む方法。 ２．粉砕工程が、腸組織を冷凍し、冷凍した腸粘膜下組織を磨砕する工程を含む 請求項１に記載の方法。 ３．粉砕工程が、腸組織を凍結乾燥し、凍結乾燥した腸組織を磨砕する工程を含 む請求項１に記載の方法。 ４．粉砕工程が、腸組織を高剪断混合器内で処理する工程を含む請求項１に記載 の方法。 ５．組織移植組成物を殺菌する工程を更に含む請求項１に記載の方法。 ６．腸組織が本質的に温血脊椎動物の腸粘膜の粘膜下組織と粘膜基底部からなる ものである請求項１に記載の方法。 ７．粉砕した腸組織を、組織を可溶化して組織移植組成物を実質的に均質な溶液 として提供するのに十分な時間、プロテアーゼを用いて分解する工程を更に含む 請求項１に記載の方法。 ８．実質的に均質な溶液を中和してプロテアーゼを不活化する工程を更に含む請 求項７に記載の方法。 ９．腸組織が本質的に温血脊椎動物の腸粘膜の粘膜下組織と粘膜基底部とからな るものである請求項７に記載の方法。 １０．実質的に均質な溶液から可溶化した組織を分離する工程を更に含む請求項 ９に記載の方法。 １１．組織移植組成物を調製する方法であって、腸粘膜下組織を、この粘膜下組 織を可溶化して実質的に均質な溶液を形成するのに十分な時間、水溶液中におい てプロテアーゼを用いて分解する工程を含む方法。 １２．実質的に均質な溶液を中和してプロテアーゼを不活化する工程を更に含む 請求項１１に記載の方法。 １３．実質的に均質な溶液から可溶化した組織を分離する工程を更に含む請求項 １１に記載の方法。 １４．腸組織が本質的に温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを 含んでいる請求項１１に記載の方法。 １５．粉砕した腸粘膜下組織を水溶性の媒体に懸濁した懸濁液を含む注射可能で 非侵襲的な組織移植用組成物。 １６．２５°Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの粘度を有する請求項１ ５に記載の組成物。 １７．腸組織が温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含んでお り、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、小腸の前記断片の粘膜の筋層および管腔部 から分層されるものである請求項１５に記載の組成物。 １８．水溶性キャリア中のプロテアーゼ分解した腸粘膜下組織を含む注射可能で 非侵襲的な組織移植用組成物。 １９．２５°Ｃで約２ｃｐｓ〜約３００，０００ｃｐｓの粘度を有する請求項１ ８に記載の組成物。 ２０．腸粘膜下組織が温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含 んでおり、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、小腸の前記断片の粘膜の筋層および 管腔部から分層されるものである請求項１８に記載の組成物。 ２１．プロテアーゼを実質的に含有しない請求項１８に記載の組成物。 ２２．関節運動する骨同士の界面におけるコラーゲン半月を外科的に再構築する 方法であって、その方法は、温血脊椎動物の腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部と を含んでいる第一の組織移植組成物のシートを含む組織移植構成体を外科的に界 面に移植する工程を含み、前記シートは密閉された小袋の形態に作成され、粉砕 された腸粘膜下組織またはプロテアーゼ分解された腸粘膜下組織を含む第二の組 織移植組成物によって充填されるものである方法。 ２３．傷の治癒を促進する方法であって、粉砕された腸粘膜下組織を水溶性の媒 体に懸濁した懸濁液または、水溶性キャリア内のプロテアーゼ分解した腸粘膜下 組織の溶液を含む有効量の組織移植組成物を治癒すべき傷に適用する工程を含む 方法。 ２４．密閉された小袋の形態に作成され、粉砕された腸粘膜下組織またはプロテ アーゼ分解された腸粘膜下組織の懸濁液を含む流動化された組織移植組成物を含 有する組織移植構成体。 ２５．粉末形態である、乾燥腸粘膜下組織。 ２６．粉末形態である、乾燥プロテアーゼ可溶化腸粘膜下組織。 ２７．内在性の組織の形成が必要な場所において温血脊椎動物の内在性組織の形 成を誘導する方法であって、粉砕された腸粘膜下組織またはそのプロテアーゼ分 解物を含む組織移植組成物を、その場所において内在性の組織成長を誘導するの に充分な量提供する工程を含む方法。 ２８．粘膜下組織が温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含ん でおり、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、前記断片の粘膜の筋層および管腔部か ら分層されるものである請求項２７に記載の方法。 ２９．成長が促進される内在性の組織は、コラーゲン、エラスチンもしくは筋肉 を含む結合組織または骨である請求項２７に記載の方法。 ３０．組織移植組成物が温血脊椎動物の括約筋を形成する組織内に注射され、成 長が誘導される組織が括約筋を形成する組織である請求項２７に記載の方法。 ３１．温血脊椎動物において括約筋の機能を増強するための方法であって、粉砕 された腸粘膜下組織または腸粘膜下組織のプロテアーゼ分解物を含む有効量の組 織移植組成物を括約筋を形成する組織内に注射する工程を含む方法。 ３２．腸粘膜下組織が温血脊椎動物の小腸断片の粘膜下組織と粘膜基底部とを含 んでおり、前記粘膜下組織と粘膜基底部は、前記断片の粘膜の筋層および管腔部 から分層されるものである請求項３１に記載の方法。