JPH0824593B2 - 抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４βおよびイオタ - Google Patents

抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４βおよびイオタ

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JPH0824593B2
JPH0824593B2 JP4114181A JP11418192A JPH0824593B2 JP H0824593 B2 JPH0824593 B2 JP H0824593B2 JP 4114181 A JP4114181 A JP 4114181A JP 11418192 A JP11418192 A JP 11418192A JP H0824593 B2 JPH0824593 B2 JP H0824593B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明はＬＬ−Ｃ２３０２４α,β及びイ
オタと呼ばれる抗菌及び抗コクシジウム剤、およびその
ための新規微生物アクチノマズラユマエンス新種（Acti
nomadura yumaense sp.nov.）またはその突然変異体の
利用に関するものである。
【０００２】本発明は更に、新規微生物アクチノマズラ
ユマエンス新種の制御した条件下の醗酵による、抗生物
質ＬＬ−Ｃ２３０２４α,β及びイオタの製造のための
新規方法に関するものである。
【０００３】抗生物質ＬＬ−Ｃ２３２０４αは、下記の
構造を有している：
【０００４】
【化１】
【０００５】本発明の抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４β
は、そのミクロ分析値、旋光度、赤外スペクトル、13Ｃ
核磁気共鳴スペクトル及び1Ｈ核磁気共鳴スペクトルに
限られないが、しかしそれらを包含する物理的及び化学
的特性によつて、公知の化合物と区別することができ
る。
【０００６】抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４βは、下記の
推定構造を有している：
【０００７】
【化２】
【０００８】上式中で、Ｒ1及びＲ2は異なるものであり
且つそれぞれＨ及びＣＨ3から成るグループから選択す
る。
【０００９】上記の推定構造は、実施例中に詳記し且つ
図面に示すように、元素分析、旋光度、フイールドデソ
ープシヨン質量分析分子量、融点、赤外（ＩＲ）スペク
トル、13Ｃ核磁気共鳴（13Ｃ−ＮＭＲ）スペクトル、及
びプロトン磁気共鳴（1Ｈ−ＮＭＲ）スペクトルに基づ
いている。
【００１０】
【表１】 ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタは、きわめて強力な抗コクシ
ジウム活性を有する新規ポリエーテル抗生物質である。
これは大部分の他の公知のポリエーテルよりも少なくと
も１０倍は強力である。フイールドデソープシヨン質量
分析のデータは、これが９３０の分子量を有することを
示し、それはその炭素１３核磁気共鳴（13Ｃ−ＮＭＲ）
スペクトルと共にＣ48Ｈ82Ｏ17という仮の分子式の提案
をもたらす。ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタは、４メトキシ
基、ポリエーテル抗生物質Ｘ−１４８６８Ａ［米国特許
第４,２７８,６６３号］中に認められるものと同一の
糖、及び／カルボキシル基を有するものと思われる。９
３０の分子量を有する唯一の他の公知のポリエーテル抗
生物質は、抗生物質Ａ２８６９５Ｂ（ヒドロキシセプタ
マイシン）（J.Antibiotics ３３（２）、２５２（１９
８０）］であるが、これは構造と生物学的性質が著るし
く異なつている。上記の観察は、実施例中に詳記し且つ
図面に示すように、元素分析、旋光度、フイールドデソ
ープシヨン質量分析による計算分子量、赤外（ＩＲ）ス
ペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトル及びプロトン核磁気
共鳴（1Ｈ−ＮＭＲ）スペクトルに基づいている。
【００１１】ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの13Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルは、２０ＭＨｚの磁場強度で重水素化クロロ
ホルム（ＣＤＣｌ3）中で得た。テトラメチルシラン
（ＴＭＳ）に対するｐｐｍで表わしたそれぞれのケミカ
ルシフトを有するピーク及び各ピーク当りの推定炭素数
を第２表に示す。クロロホルムに対しては７５.４、７
７.０及び７８.６ｐｐｍにピークが認められた。
【００１２】
【表２】 抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４α,β及びイオタは有機カ
ルボン酸であり、それ故、無毒の製薬学的に受容しうる
陽イオンによる塩を生成させることができる。すなわ
ち、望ましくは中性の溶剤中で、抗生物質遊離酸を理論
量の陽イオンと混合することによつて生成せしめる塩
は、たとえばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム及びアンモニウムのような陽イオン、並びにた
とえばトリ（低級アルキル）アミン（たとえばトリエチ
ルアミン、トリエタノールアミン）、プロカインなどの
ような有機アミン陽イオンによつて生成せしめることが
できる。抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４βの陽イオン塩
は、一般に、結晶性の固体で、比較的水に不溶性であり
且つたとえばメタノール、酢酸エチル、アセトン、クロ
ロホルム、ヘプタン、エーテル及びベンゼンのような大
部分の通常の有機溶剤中に可溶である。本発明の目的に
対しては、抗生物質遊離酸は、製薬学的に許容しうるそ
の無毒性塩類と同等である。
【００１３】抗生物質ＬＬ−２３０２４β及びイオタは
標準的な寒天希釈方法によつて試験するとき、グラム陽
性菌に対して試験管内試験において活性である。第３表
及び第４表中では結果をｍｃｇ／ｍｌ単位での最低禁止
濃度として示す。抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４β及びイ
オタは、２５６ｍｃｇ／ｍｌ以下の濃度では、グラム陰
性菌に対しては活性でない。
【００１４】
【表３】
【００１５】
【表４】 上記のデータが示すように、抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２
４α,β及びイオタは、ある種のグラム陽性菌の生長の
抑制を示し、かくして皮膚、器具、壁、床などのための
洗浄液中の局所または表面消毒剤として有用である。
【００１６】抗菌剤ＬＬ−Ｃ２３０２４α,β及びイオ
タは、下記の試験によつて示すように、家禽用の抗コク
シジウム剤として生体内で活性であることが認められて
いる。
【００１７】接種の２日前に、種々の濃度の薬剤を添加
した飼料を、生後１日の試験ひな鳥のいくつかのグルー
プに与えた。試験の間に用いた飼料は、次のようにして
調製する： ビタミン−アミノ酸予備混合物 0.5 % 微量無機物 0.1 % 塩化ナトリウム 0.3 % リン酸二カルシウム 1.2 % 粉砕石灰石 0.5 % 安定化脂肪 4.0 % 脱水アルフアルフア、蛋白質 17 % 2.0 % とうもろこしグルテン粉、蛋白質 41 % 5.0 % ニシン粉、蛋白質 60 % 5.0 % 大豆油かす粉、蛋白質44 % 30.0 % 粉砕黄とうもろこしを加えて 100 % 上記の飼料組成物中のビタミン−アミノ酸予備混合物
は、下記の配合によつて調製する。下記に示す量は最終
飼料組成物１ｋｇ当りの単位に関するものである。
【００１８】ブチル化ヒドロキシトルエン 12
5.0 mg ｄｌ−メチオニン 500.0 mg ビタミンＡ 3300.0 I.U. ビタミンＤ3 1100.0 I.C.U. リボフラピン 4.4 mg ビタミンＥ 2.2 I.U. ナイアミン 27.5 mg パントテン酸 8.8 mg 塩化コリン 500.0 mg 葉酸 1.43 mg メナジオン二硫酸ナトリウム 1.1 mg ビタミンＢ12 11.0 mcg 粉砕した黄色とうもろこしを加えて 5.0 mg 次いで、それぞれのひなのグループに、エイメリア ア
セルブリナ（Eimeriaacervulina）の５０００胞子形成
接合子嚢及び未処置対照に８５〜１００％の死亡率を与
えるために充分な数のエイメリア テネラ（Eimeria te
nella）の接合子嚢の混合接種材料を直接に接種した。
ひなは全試験期間にわたつて自由に飼料と水に近付ける
ようにした。接種の７日後に試験を中止して、鳥の重さ
を計り、剖検し且つ腸管を病変について調べた。その結
果を下記第５及び６表に示す。これらの結果は、飼料中
に１０ｐｐｍまたはそれ以下の抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０
２４βまたはイオタを配合するときは、感染させたひな
の生存率が改善されることを示している。またこれらの
結果は、エイメリア テネラ及びエイメリア アセルブ
リナによる腸管の病変の顕著な抑制をも示している。
【００１９】
【表５】 第 ５ 表 ひなの抗コクシジウム剤としての抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４βの評価 飼料中の濃度 鳥の数 生存率 低下した病変を有する鳥の百分率 化 合 物 ppm 開始時 ％ Ｅ.テネラ Ｅ.アセルブリナ LL-C23024β 15 3 100 100 100 LL-C23024β 10 5 100 60 100 LL-C23024β 5 5 80 0 100 NNC* 0 15 46.6 0 0 ──────────────────────────────────── LL-C23024β 120 15 100 100 100 60 15 100 100 100 30 15 100 100 100 0 15 20 0 0 NNC 15 100 -- -- ──────────────────────────────────── LL-C23024β 20 15 100 87 100 15 15 100 60 100 10 15 60 0 0 5 15 47 7 0 0 15 27 0 0 NNC 15 100 -- -- ──────────────────────────────────── ＊ＮＮＣ＝、非処置、非感染対照
【００２０】
【表６】
【００２１】
【実施例】実施例Ａ 自由生活雌雄同体病原性線虫ケノルハブジチスエレガン
スＩＩ（Caenorhabditiselegans II）を用いる殺線虫活
性に対する試験組成物の評価 以下の試験においては、本発明の方法によつて調製した
醗酵プロス及び取り入れたマツシユの線虫駆除活性を調
べるために、ケノルハブジチスエレガンスを用いる。こ
の微生物は、ＬＬ−Ｃ２３０２４α及びＬＬ−Ｃ２３０
２４βの線虫駆除活性を調べるための評価に対しても、
使用する。
【００２２】これらの試験において、醗酵プロスとは、
液体から固体、すなわち取り入れたマツシユ、を分離す
る前に採取した醗酵液体と固体の混合物である。
【００２３】取り入れたマツシユの評価には、マツシユ
固形物を１：１の割合で蒸留水中に分散させる。醗酵プ
ロスはそのままで使用するので、液体と固体の両方を含
有している。
【００２４】この評価においては、ケノルハブシチス
エレガンスをケノルハブシチス ブリツグサエ（briggs
ae）維持培地中に保つ。この培地は、グラント アイラ
ンドビオロジカル カンパニー、グラント アイラン
ド、ニユーヨークから市販しているものであり、下記の
組成を有している。
【００２５】 Ｃ．ブリグサエ維持培地(1) 成 分 mg/L 無機塩類 CaCl2・2H2O 220.50 CuCl2・2H2O 6.50 Fe(NH4)2(SO4)2・6H2O 58.80 KH2PO4 1225.50 KOH (a) MnCl2・4H2O 22.20 ZnCl2 10.20 他の成分 N−アセチルグルコサミン 15.00 アデノシン-3′-(2′)-燐酸・H2O 365.00 シチジン-3′-(2′)-燐酸 323.00 D−グルコース 1315.00 還元グルタチオン 204.00 グアノシン-3′-(2′)-PO4Na2・H2O 363.00 クエン酸マグネシウム・5H2O(二塩基性) 915.00 クエン酸カリウム・H2O 486.00 DL−チオクチン酸 3.75 チミン 126.00 ウリジン-3′-(2′)-燐酸 324.00 アミノ酸 L−アラニン 1395.00 L−アルギニン 975.00 L−アスパルチン酸 1620.00 L−システインHCl・H2O 28.00 L−グルタメート(Na)・H2O 550.00 L−グルタミン 1463.00 グリシン 722.00 L−ヒスチジン 283.00 L−イソロイシン 861.00 L−ロイシン 1439.00 L−リシン・HCl 1283.00 L−メチオニン 389.00 L−フエニルアラニン 803.00 L−プロリン 653.00 L−セリン 788.00 L−トレオニン 717.00 L−トリプトフアン 184.00 L−チロシン 272.00 L−バリン 1020.00 ビタミン類 p−アミノ安息香酸 7.50 ビオチン 3.75 クエン酸二水素コリン 88.50 シアノコバルアミン(B12) 3.75 葉酸塩(Ca) 3.75 ミオ-イノシトール 64.50 ナイアシン 7.50 ナイアシンアミド 7.50 パンテチン 3.75 パントテン酸塩(Ca) 7.50 ブテロリグルタミン酸 7.50 燐酸ピリドキサル 3.75 ピリドキサミン2HCl 3.75 ピリドキシンHCl 7.50 リボフラビン-5′-PO4(Na)・2H2O 7.50 チアミンHCl 7.50 文献：（1） ハンセン・E.L.,Proc.Soc.Exp.Bio.& Me
d.１２１,３０〜３９３（１９６６） 注 ：（a） 必要に応じｐＨを５.９±０.１に調節す
るための必要量 評価には、一連の小さな穴を有するプレートを用いる。
２.５ｍｌの醗酵プロス、１：１水／取り入れマツシユ
懸濁物、または３１.２５〜５００ｐｐｍの試験化合物
を含有するＬＬ−Ｃ２３０２４αまたはＬＬ−２３０２
４βの水／アセトン溶液を、別々の穴中に入れる。次い
で各穴に１０〜２０匹の成虫と種々の年令の幼虫及び卵
を含有する２５ｍｌのケノルハブジチスエレガンス維持
培地を加える。次いでプレートをフード中に入れ、接種
の４８時間後に試験組成物の線虫駆除活性の速度と程度
の評価のためにプレートを調べる。その結果を下表に示
す。醗酵プロスに対して活性が認められた場合には、そ
のプロスを更に１：４のプロスとケノルハブジチスエレ
ガンスの比となるように希釈する。
【００２６】
【表７】 第 ７ 表 組 成 濃度、ppmまたは希釈度(D) 48時間後の殺線虫活性 醗酵プロス D = 1:1 8（運動性なし） D = 1:4 収穫マツシユ LL-23024α 500 ppm 7 250 ppm 7 125 ppm 7 62.5 ppm 6 31.25 ppm 0 LL-23024β 500 ppm 7 250 ppm 0 これらの評価において用いた活性の格付けは、次のとお
りである：活性格付け ８＝運動性なし（明白な死亡） ７＝著るしく低下した運動性 ６＝低下した運動性 ０＝種に対する正常な運動性実施例Ｂ 反芻動物線虫の感染性幼虫**に対する線虫駆除剤として
のＬＬ−Ｃ２３０２４αの評価 線虫：ヘモンフムスコントルツス（Haemonhmus contort
us）、オステルタギアシルクムシンクタ（Ostertagia c
ircumcincta）、トリコストロンギルス アクセイ（Tri
chostrongylus axei）、トリコストロンギルスコルブリ
ホルミス（Colubriformis）の感染性幼虫及びスセンチ
ユーの幼虫ツバルバトリツクスアセチ（Turbatrixacet
i）に対する線虫駆除剤としてのＬＬ−Ｃ２３０２４α
の評価を、ケノルハブシチス エレガンスの代りに上記
の線虫種を使用して測定した。
【００２７】取得したデータを下表に示す。**第３齢鞘
翅幼虫
【００２８】
【表８】 第 ８ 表 LL−C23024α 下 記 線 虫 に 対 す る 活 性 の試験濃度a H.コント O.シルクム T.アクセイ T.コルブリ T.アセチ ppm ルツス シンクタ ホルミス 500 8 8b 8b 8 6 250 7 8b 8b 7 6 125 7 7 7 6 6 625 7 6 7 6 6 31.25 6 6 0 6 6 0（対照） 0 0 0 0 0 ──────────────────────────────────── ａ ２回蒸留した水中で用意した９６穴の組織培養プレ
ート、Ｘ１４８６８Ａ、中で行なつた。
【００２９】１つの穴当りに２５μｌのＬＬ−Ｃ２３０
２４α溶液と２５μｌの線虫培養物を加えた。
【００３０】活性格付け： ８＝運動性なし（明白な死亡） ７＝著るしく低下した運動性 ６＝低下した運動性 ０＝種に対する通常の運動性 ｂ ２４時間内実施例Ｃ ハツカネズミ中のネマトスピロイデスズビウス（Nemato
spiroides dubius）及びアスピクラリステトラプテラ
（aspicularis tetraptera）に対する抗生物質ＬＬ−Ｃ
２３０２４αの線虫駆除活性の評価 下記の試験においては、スイス−ウエブスタ−のめすの
白ハツカネズミをネマトスピロイデスズビウスとアスピ
クラリステトラプテラで感染させ且つ３週間保つて感染
を成熟させる。
【００３１】この保持期間後に、ハツカネズミを無作為
に４グループに分け、それらのグループを別々のかごに
入れる。次いで約３１.２５ｐｐｍ乃至４,０００ｐｐｍ
の試験化合物を含有する薬剤添加飼料をハツカネズミに
１週間任意に与える。試験期間中水もまた任意に与え
る。処理期間の間、ハツカネズミのふんを調べて、幼虫
が通過するかどうかを確かめる。全処理群において幼虫
が通過することが認められ、これはすべての化合物濃度
における両線虫に対する駆除活性を示す。１週間の薬剤
添加飼料処理の終りに、ハツカネズミを剖検し、その腸
管内容物を幼虫について調べる。取得したデータを感染
させた薬剤処理しない対照と比較した幼虫の低下百分率
として下表に示す。
【００３２】これらの試験において、マツシユの取り入
れ前に取得した、１,０００ｐｐｍ乃至４０００ｐｐｍ
の線虫駆除抗生物質を含有する粗製醗酵プロスについて
評価した。アセトン／水１：１混合物中に溶解した３
１.２５ｐｐｍ乃至５００ｐｐｍのＬＬ−Ｃ２３０２４
αによつて処理したハツカネズミ飼料をも評価した。
【００３３】
【表９】 活 性 (減少率%)*** 飼料中の濃度、 N.ズビウス A.テトラプテラ 試験組成物 ppm に対して に対して LL-C23034α 4,000 73 - 含有醗酵プロス 2,000 44 53 LL-C23024α 1,000 65 33 500 70 低活性** 250 63 低活性 125 61 低活性 62.5 29 低活性 31.25 32 低活性 *＝ＬＬ−Ｃ２３０２４αの量未決定 **＝ふんの検査において回収したギヨウ虫の量増大 ***＝薬剤処置しない感染対照に対する比較 本発明の新規抗菌及び抗コクシジウム剤は、アクチノマ
ズラ ユマエンス新種の制御した条件下の培養の間に生
成する。
【００３４】この微生物の代表的な菌株は、アリゾナ州
ユマ群で採集した土壌試料から単離して、培養菌番号Ｌ
Ｌ−Ｃ２３０２４としてニユーヨーク州、パールリバ
ー、アメリカン シアナミド カンパニー、レダリー研
究所支社の培養菌収集中に保存されている。この代表的
な菌株の生長可能な培養物は、イリノイ州６１６０４、
ペリア米国農務省、北部センター、培養物収集所に預託
され且つ受入れ番号ＮＲＲＬ１２５１５として同所の永
久収蔵品に加えられている。
【００３５】ＮＲＲＬ１２５１５の分類学的特性 菌株ＮＲＲＬ１２５１５は、アクチノマズラユマエンス
新種（Actinomadura yumaense sp.nov.）として識別す
べきアクチノマズラ属の新種の菌株として、特性付け及
び同定される。
【００３６】シヤーリング及びゴツトリーブ［E.B.Shir
ling,D.Gottlieb,“マトレプトマイセス種のキヤラクタ
リゼーシヨン方法”、Internat.J.Syst.Bacteriol.１
６、３１３〜３４０（１９６６）］、及びゴードンら
［R.E.Gordon etal.,“ノカルジアコエリアカ（Nocardi
a coeliaca）ノカルジアオートトロフイカ（Nocardia a
utotrophica）及びノカルジン菌株”、Internat.J.Sys
t.Bacteriol.２４，５４〜６３（１９７４）］が詳記し
ている方法を用いて、代表的な菌株ＮＲＲＬ１２５１５
の培養、生理学及び形態学的特徴についての観察を行な
つた。この研究において用いた培地は、プリダムら［T.
G.Pridham etal,“マトレプトマイセテスの保存と分類
学的研究のための培地の選択”、Anntibiotics Ann.,９
４７〜９５３（１９５６／１９５７）］；ゴーズら［G.
F.Gauze etal,“拮抗性放線菌類の分類における問
題”、State Publishing House for Medical Literatur
e，メドギズ、モスコー（１９５７）；及びゴードンら
の前記文献中で放線菌と土壌菌の分類学的研究に対して
推称されているものから選択した。微生物の細胞膜の化
学的組成はレケバリールら［（H.A.Lechevalier etal,
“アクチノマイセテスの分類における基準としての化学
的組成”、Adv.Appl.Microbiol.１４，４７〜７２（１
９７１）］の方法を用いて決定した。燐脂質パターン
は、レケバリールら［“好気性放線菌類の化学的分類
学：燐脂質組成”、Bio chem.Syst.Ecol.５，２４９〜
２６０（１９７７）］の方法を用いて測定した。詳細は
第４〜９表中に示されており、且つ培養の一般的な記述
は後段に記す。下線を施した記述的な色は、ケリー（K.
L.Kelly）及びジヤツド（D.B.Judd）、“色。名称の普
遍的言語及び辞書”、U.S.Nat.Bur.Stand.,Spec.Publ.
４４０，ワシントンＤ.Ｃ.（１９７６）及び付随する I
nter-Society Color Council,Natl.Bur.Stand.Centroid
色表から取つている。
【００３７】菌株ＮＲＲＬ１２５１５によつて表わされ
るものとしてのこの新種に対して認められるデータをア
クチノマズラ属の既知の種に対して公表されているデー
タ［ゴツドフエロー（M.Goodfellow）ら、“アクチノマ
ズラ及び関連放線菌の数的分類学”、J.Gen.Microbiol.
１２２，９５〜１１１（１９７９）；フアン（L.H.Huan
g）、アクチノマズラマクラ新種、抗生物質ＣＰ−４７,
４３３及びＣＰ−４７,４３４生産菌”、Internat.J.Sy
st.Bacteriol．３０，５６５〜５６８（１９８０）；メ
ーヤー（J.Meyer）、“アクチノマズラ属の新種”Z.All
gem.Mikrobiol.１９，３７〜４４（１９７９）；ノムラ
及びオーハラ、“土壌中の放線菌の分布ＸＩ．アクチノ
マズラ属のいくつかの新種、レケバリールら、“J.Ferm
ent.Technol.４９，９０４〜９１２（１９７１）；及び
プレオブラズヘンスカヤ（T.P.Preobrazhenskaya）ら、
“アクチノマズラ属の種の同定のための手引”、The Bi
oligy of Actinomycetes and Related Organisms １
２，３０〜３８（１９７７）］と比較した。培養物ＮＲ
ＲＬ１２５１５は、アクチノマズラペレチエリ（A.pell
etieri）との僅かな類似点を有しているが、その他の既
知の種とは類似点がなく且つ多くの特性においてＡ.ペ
レチエリとは異なつている。それ故、菌株ＮＲＲＬ１２
５１５は、この代表菌種を単離した土壌試料の採取地に
よつて名付けた、アクチノマズラ ユマエンス新種とし
て識別すべき新種の代表菌種を示すものである。
【００３８】ミクロ形態学 胞子は分岐した、ほとんど輪生の気生担胞子体上の短か
いらせん状の連鎖として生成する（１連鎖当りの最高の
長さ約２０胞子）。胞子は、滑らかな表面を有する、
０.６〜０.８ミクロン×１.０〜１.４ミクロンの卵形で
ある。
【００３９】細胞膜組成 この培養物の全細胞加水分解物は、マズロース（３−Ｏ
−メチル−Ｄ−ガラクトース）及びジアミノピメリン酸
（ＤＡＰ）のメソ異性体を含有する。この培養物はＰ−
１型燐脂質パターンを有し、いくつかのホスフアチジル
グリセリン以外は他の特徴的な燐脂質を有していない。
これらの特徴はすべてアクチノマズラ属の部類のものに
きわめて典型的である。
【００４０】生長の量 良好な生長は、ベネツトの培養基、ゴーズ２号培養基、
ＮＺ−アミン−殿粉−グルコース培養基（ＡＴＣＣ培地
１７２）、トマトペースト−オートミール培養基、及び
酵母エキス−麦芽エキス培養基上で認められ、中等度の
生長はベネデイクトの培養基、ザペツクのスクロース培
養基、グリセリン−アスパラギン培養基、ヒツキー−ト
レスナー培養基、及びオートミール培養基上で認めら
れ；不十分な生長はマレイン酸カルシウム、ゴーズ１号
培養基、及び無機塩−殿粉培養基上で認められる。
【００４１】栄養菌糸 良好な生長が生じる培地上では、栄養菌糸の盛上りと回
旋が認められ且つ一般に黄色がかつた灰色の色調を有し
ている。
【００４２】気生菌糸及び胞子の色 気生菌糸及び／または胞子体の色は白乃至２６４淡灰色
である。気生菌糸生産物は大部分の培地上で淡色であ
る。
【００４３】可溶性色素 多くの培地上で存在しない；ベネデイクトの培養基及び
グリセリン−アスパラギン培養基上では黄色色素；ＮＺ
−アミン−殿粉−グルコース培養基上では縁がかつた褐
色の色素；ベネツトの培養基及び酵母エキス−麦芽エキ
ス培養基上では橙色の色素。
【００４４】生理学的反応 ペプトン−鉄培養基及びチロシン培養基（ＩＳＯ−７）
上ではメラニン色素なし；リトマスミルクの強いペプト
ン化；栄養ゼラチンの強い蛋白質加水分解；硝酸塩の緩
徐な還元；アデニンまたはグアニンの加水分解なし；ヒ
ポキサンチン、チロシン及びキサンチンの強い加水分
解；殿粉の弱い加水分解；エスクリンの加水分解；尿素
の一定しない加水分解。４℃、１０℃または５５℃にお
いて生長なし；２５℃及び４５℃において緩徐な生長；
３２℃及び３７℃において良好な生長。プリダム（T.G.
Pridham）及びゴツドリーブ（D.Gottlieb）［“種の決
定に対する手段としての数種の放線菌類による炭素化合
物の利用”、J.Bacteriol.５６，１０７〜１１４（１９
４８）］の方法による炭水化物の利用：グルコース、グ
リセリン及びトレハロースの良好な利用；マルトース及
びスクロースの中等度の利用；フルクトース、ガラクト
ース、イノシトール、マンノース及びメレチトースの不
十分な利用；アドニトール、アラビノース、ズルシトー
ル、ラクトース、マンニトール、メリビオース、ラフイ
ノース、ラムノース、サリシン、ソルビトール及びキシ
ロースの利用なし。前記ゴードンらの方法による加水分
解からの酸の生産：グルクトース、グリセリン、マルト
ース、スクロース及びトレハロースからの良好な酸の生
産；ガラクトース、イノシトール及びマンノースからの
弱い酸の生産。前記ゴードンらの方法による有機酸の利
用：酢酸、マレイン酸、プロピオン酸、ピブリン酸、ス
クシン酸及び酒石酸塩類の利用；安息香酸、クエン酸、
乳酸、粘液酸及び修酸塩類の利用なし。
【００４５】
【表１０】
【００４６】
【表１１】
【００４７】
【表１２】
【００４８】
【表１３】
【００４９】
【表１４】 ＋＋＋＝強い陽性の応答 ＋＋＝中等度の陽性の応答 ＋＝僅かな陽性の応答 −＝陰性の応答
【００５０】
【表１５】 アクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５という術
語は、菌株アクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１
５または上記の生長及び顕微鏡的特性に完全に符合する
菌株に限定されることはなく、これらは単に例証の目的
のために示したものであることを了解すべきである。本
明細書中に記すアクチノマズラユマエンスは抗生物質Ｌ
Ｌ−Ｃ２３０２４α，β及びイオタを生産し且つアクチ
ノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５及び突然変異体
と変株を包含するその二次培養物から明確に区別するこ
とができないアクチノマズラユマエンスのすべての菌株
を包含する。“突然変異体”という術語は、この有機体
の自然（自発）突然変異体並びに、たとえばＸ線照射、
紫外線、ナイトロジエンマスタード、アクチノフアー
ジ、ニトロサミン類などへの暴露のような、この技術分
野に精通しているものでは公知の種々の突然変異誘発性
の手段によつてこの有機体から生じる誘導突然変異体を
包含する。たとえば、接合、形質導入及び遺伝子工学技
術のような、この分野に精通しているものには公知の遺
伝子技術によつて生じた異種間及び種内部遺伝子組換え
生成物をも包含することが望ましく且つそれを意図して
いる。
【００５１】アクチノマズラユマエンスの培養は広い種
類の固体または液体培養基を用いて行なうことができ
る。抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４α，β及びイオタの生
産に対して有用な培地は、たとえば蛋白質、蛋白質加水
分解物、ポリペプチド、アミノ酸、とうもろこし浸出液
などのような同化性の窒素源及び、たとえばカリウム、
ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、硫酸、炭酸、
燐酸、塩素などのような無機陰イオン及び陽イオンを含
有する。たとえばホウ素、モリブデン、銅、などのよう
な微量元素は、培地の他の成分の不純物として供給され
る。タンク及びびん中への通気は、醗酵培地の表面中ま
たは表面上への滅菌空気の送風によつて与えられる。タ
ンク中におけるそれ以上の動遥は、機械的な羽根車によ
つて与えられる。必要に応じ、たとえばラード油または
シリコーン消泡剤のような消泡剤を加える。
【００５２】アクチノマズラユマエンスは斜面培地、た
とえばベネツトの培養基、酵母麦芽培養基、またはＡＴ
ＣＣ培地＃１７２上で生長し且つ保たれる。ＡＴＣＣ培
地＃１７２が好適である。斜面培地にアクチノマズラユ
マエンスの培養物を接種して、２８〜３７℃、好ましく
は約３２℃において、たとえば約７日にわたり培養す
る。これらの原料培養物は新しい斜面培地への順次の移
送によつて維持してもよいし、または十分に生長した斜
面培地からの菌糸含有培養基のプラグを液状培地の接種
に用いてもよい。
【００５３】アクチノマズラユマエンスの振とうフラス
コ接種物を、５００ｍｌのフラスコ中の１００ｍｌの滅
菌した液体培地に、培養物の斜面培地からの胞子のかき
集めまたは洗浄物を接種することによつて、調製する。
適当なシード培地の例は以下のとおりである。
【００５４】培地Ａ 牛肉エキス 0.3 % バクトトリプトン1 0.5 % グルコース 1.0 % 酵母エキス 0.5 % 水を加えて 100 % ［1ミシガン州デトロイトのデイフコ研究所の登録商標
ペプトン］希アルカリ、たとえば水酸化ナトリウムでｐ
Ｈを６.８〜７.２に調節する。
【００５５】培地Ｂ グルコース 1 % 殿粉 2 % 酵母エキス 0.5 % Ｎ−ＺアミンＡ2 0.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 水を加えて 100 % ［2ニユーヨーク州、ノーウイツチ、シエフイールドケ
ミカルカンパニー、ナシヨナルデアリープロダクツコー
ポレーシヨン支社の登録商標カゼイン消化物］培地Ｂが
好適である。
【００５６】フラスコを２５〜３５℃、好ましくは３２
℃の温度で培養し且つ回転振とう機上で１〜４日間激し
く振とうする。次いでこのシード培養物を用いて醗酵培
養物の接種に用いるか、またはこの培養物を後のシード
培養物に対する接種物とするために凍結し且つ貯蔵して
もよい。
【００５７】下記の培地は、抗生物質ＬＬ＝Ｃ２３０２
４α,β及びイオタを生産するためのアクチノマズラユ
マエンスの醗酵のために適するものの例である。
【００５８】培地Ｃ グルコース 1.5 % グリセリン 1.5 % 大豆粉3 1.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 塩化ナトリウム 0.3 % 水を加えて 100 % ［3綿実粉または肉可溶物で置き換えても同じ効果を達
成できる］培地Ｄ グルコース 3 % 大豆粉 1.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 塩化ナトリウム 0.3 % 水を加えて 100 %培地Ｅ 殿粉 1 % 糖蜜 2 % 大豆粉 1.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 水を加えて 100 %培地Ｆ グルコース 3 % 肉可溶物 2.5 % 塩化ナトリウム 0.2 % 炭酸カルシウム 0.1 % 水を加えて 100 %培地Ｇ グルコース 3 % 大豆粉 0.5 % 硫酸アンモニウム 0.3 % 塩化ナトリウム 0.2 % 炭酸カルシウム 0.1 % 水を加えて 100 %培地Ｈ グルコース 3 % 硫酸アンモニウム 0.3 % 二塩基性リン酸カリウム 0.1 % 炭酸カルシウム 0.2 % 塩化ナトリウム 0.1 % 水を加えて 100 % 培地Ｄが好適である。
【００５９】醗酵は、上記のようにして調製した３〜１
０％（容量／容量）のシード培養物を接種し且つ２５〜
３５℃、好ましくは約３２℃で通気と共に２４〜７２時
間培養した、５００ｍｌのフラスコ中の１００ｍｌの培
地中で行なうことができる。醗酵培養物の試料は、シー
ド培養物に対する接種物として後に使用するために、凍
結し且つ保存することができる。
【００６０】別法として、通気及び振とう手段を備えた
大きな醗酵槽中で醗酵を行なつてもよい。各槽を３〜１
０％（容量／容量）の上記のようにして調製した接種物
で接種する。通気は１分当り１ｌのブロスについて０.
５〜２.０ｌの滅菌空気の速度で供給し且つ醗酵培地を
２００〜４００回転／分で駆動する羽根車によつて撹拌
する。温度は２５〜３５℃、好ましくは３２℃に保つ。
醗酵培地中に抗生物質が蓄積するまで、通常は１００〜
１５０時間後まで、醗酵を継続し、その時点で抗生物質
を収穫する。
【００６１】抗生物質は、前記米国特許第４,２７８,６
６３号に記す方法に従つて、または下記の手順に従つ
て、収穫し且つ精製することができる：上記のようにし
て調製した全細胞を含有する粗製醗酵ブロスを同容量の
非炭化水素性の水と混合しない有機溶剤と混合する。塩
化メチレンまたは酢酸エチルが好適である。有機相を分
離して減圧下に油状のシロツプとなるまで濃縮する。
【００６２】油状のシロツプを塩化メチレン中に溶解し
て、シリカゲル、アルミナ、セフアデツクスＬＨ−２０
R（ニユージヤージー州、ピスカツタウエー、フアーマ
シアインコーポレーテツドのフアーマシアフアインケミ
カルス支社）または珪酸マグネシウムアルミニウムのカ
ラムに加える。カラムの展開に対して適する溶剤の例
は、ジエチルエーテル、酢酸エチル、塩化メチレン：エ
チルエーテルの１：１乃至１：７（容量／容量）混合
物、塩化メチレン中の１０〜４０％アセトン、塩化メチ
レン中の２〜１０％の低級アルコール（メタノールが好
適である）、塩化メチレン中の２〜１５％アセトニトリ
ルまたは塩化メチレン中の２〜１５％ジオキサンであ
る。塩化メチレン：酢酸エチル１：１（容量／容量）が
好適である。画分を集めて、感受性の有機体、たとえば
枯草菌（Bacillus subtilis）に対する生物検定によつ
て抗菌活性の存在について検査する。活性の画分を合わ
せて、減圧下に乾固するまで濃縮する。この残留物を有
機溶剤、たとえばｔ−ブタノール（好適）、ベンゼンま
たはｐ−ジオキサン中に溶解し且つ凍結乾燥する。
【００６３】凍結乾燥した固体を適当な有機溶剤、たと
えば塩化メチレン、ヘキサン、塩化メチレン：酢酸エチ
ル、ジエチルエーテル、ヘキサン：酢酸エチル、ヘキサ
ン：クロロホルム、またはヘキサン：エーテル中に溶解
する。ジエチルエーテルが好適である。この溶液を水と
共に振とうし且つ希鉱酸によつてｐＨを１.５〜４.０、
好ましくは約２.５に調節する。有機相を分離し、水洗
して過剰の酸を除き、適当な乾燥剤上で乾燥し、濾過し
たのち、減圧下に蒸発乾固させる。
【００６４】この残留物を適当な溶剤中に溶解し、その
溶液を徐々に、好ましくは約４℃において、蒸発させ
る。適当な溶剤の例は塩化メチレン、ヘキサン、塩化メ
チレン：酢酸エチル、ジエチルエーテル、ヘキサン：酢
酸エチル、ヘキサン：クロロホルムまたはヘキサン：エ
ーテルである。ヘキサン：エーテル５：２（容量／容
量）が好適である。かくして得た結晶を集め、好ましく
は約４０℃において、たとえばヘキサンまたはヘプタン
のような適度な沸点の炭化水素で洗浄したのち、風乾し
て、最終生成物として遊離酸の形態にある抗生物質Ｘ−
１４８６８Ａを取得する。
【００６５】生成物が塩の形態であることが望ましい場
合には、この分野に精通しているものには公知の手順に
従つて、好ましくは希薄な無機塩基の形態にある、適当
な陽イオンで処理することによつて、遊離酸に転換させ
ることができる。
【００６６】以下の実施例は本発明を例証するものであ
る。培地Ａ、Ｂ、Ｃなどは前記のものである。特に他の
ことわりがない限りは、すべての手順を室温（約２２
℃）で１atmの圧力で行なつた。
【００６７】実施例１ アクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５の斜面培
養基からの洗浄した胞子を用いて、１００ｍｌの殺菌培
地Ｂを含有する５００ｍｌのフラスコに接種した。フラ
スコを回転振とう機上で２８℃で２日間培養した。
【００６８】次いでこの培養物の５％接種物を５００ｍ
ｌのフラスコ中の１００ｍｌの滅菌培地Ｃに移して回転
振とう機上で２８℃で５日間培養した。
【００６９】抗生物質活性の存在を黄色ぶどう球菌（St
aphylococcus aureus）ＡＴＣＣ６５３８Ｐ、枯草菌（B
acillus subtilis）及び糞便連鎖球菌（Streptococcus
faecalis）に対する生物検定によつて毎日検査し、且つ
駆虫活性を自由生活線虫ケノルハブジチスエレガンスに
対する生物検定によつて検査した。
【００７０】実施例２ それぞれ１００ｍｌずつの下記の滅菌培地を含有する、
７個の５００ｍｌフラスコを用意した： フラスコ１：１００ｍｌの培地Ｃ フラスコ２：大豆粉の代りに１.５％の綿実粉を用いた
１００ｍｌの培地Ｃ フラスコ３：大豆粉の代りに１.５％の肉可溶物を用い
た１００ｍｌの培地Ｃ フラスコ４：１００ｍｌの培地Ｄ フラスコ５：１００ｍｌの培地Ｅ フラスコ６：１００ｍｌの培地Ｆ フラスコ７：１００ｍｌの培地Ｇ これらのフラスコを、それぞれ培地Ｂ中で生長させたア
クチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５の５％接種
物で接種した。次いでフラスコを回転振とう機上で２８
℃で４〜６日間培養した。
【００７１】上記の各培養物は、実施例１におけるよう
にして抗生物質活性について検定するとき、及びひなの
腎臓組織培養物中でエイメリアテネラ（Eimeria tenell
a）に対する抗カイガラムシ活性について検定するとき
に活性が認められた。
【００７２】実施例３ アクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５の凍結し
た醗酵培養細胞を用いて１００ｍｌの滅菌培地Ｂを含有
する５００ｍｌのフラスコに接種した。次いでフラスコ
を回転振とう機上で３２℃で４日間培養した。
【００７３】次いでこの培養物の５％接種物を５００ｍ
ｌのフラスコ中の１００ｍｌの滅菌培地Ｈに移した。
【００７４】実施例１と同様にして抗菌活性を確かめ、
また実施例２と同様にして抗コクシジウム活性を確かめ
た。
【００７５】抗生物質活性の存在をも、酢酸エチル：ク
ロロホルム７０：３０（容量／容量）で展開させたシリ
カゲルプレート上の薄層クロマトグラフイーによつて、
検定した。
【００７６】実施例４ ５００ｍｌのフラスコ中の１００ｍｌの滅菌培地Ａにア
クチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５の斜面培養
基からの洗浄した胞子を接種した。このフラスコを回転
振とう機上で３２℃で２日間培養した。
【００７７】次いでこの培養物の５％接種物を５００ｍ
ｌのフラスコ中の１００ｍｌ滅菌培地Ｈに移して回転振
とう機上で３２℃で２日間培養した。
【００７８】次いでこの培養物の５％接種物を１００ｍ
ｌの新鮮な滅菌培地Ｈを含有する５００ｍｌのフラスコ
に移して回転振とう機上で２８℃で６日間培養した。
【００７９】実施例１と同様にして抗菌活性を確かめ
た。
【００８０】実施例５ それぞれ１００ｍｌの滅菌培地を含有する２個の５００
ｍｌフラスコにアクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２
５１５の凍結したシード培養物を接種して回転振とう機
上で３２℃において２日間培養した。
【００８１】次いで両フラスコの内容物を合わせ、２０
ｌのびん中の１２ｌの新鮮な滅菌培地Ａに加えた。次い
でこの培養物を通気しながら２８℃で２日間培養した。
【００８２】このびんの内容物を次いで２８８ｌの滅菌
核地Ａを含有する３００ｌのシードタンクに移し且つこ
の培養物を通気と共に３２℃で２５時間撹拌した。
【００８３】２５時間の培養後に、３００ｌのシード培
養物を１２００ｌの滅菌培地Ｃを含有する１５００ｌの
醗酵槽に移した。この培養物を通気及び撹拌と共に２８
℃で１１５時間培養した。
【００８４】醗酵ブロスを、酢酸エチル：クロロホルム
７０：３０（容量／容量）中で展開させたシリカゲルプ
レート上の薄層クロマトグラフイーによつて、抗生物質
活性について検定した。また別に、いくつかの展開した
プレートについて、枯草菌に対する生物検定を行なう
と、抗生物質活性を示した。
【００８５】実施例６ 一次接種物を生長させるために用いる典型的な培地を、
下記の処方に従つて調製した： 牛肉エキス 0.3 % バクトR−トリプトン 0.5 % グルコース 1.0 % 酵母エキス 0.5 % バクトR寒天 0.15% 水を加えて 100 % アクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５の斜面培
養基からの洗浄し且つこすり取つた胞子と菌糸を用い
て、１００ｍｌの上記の滅菌培地を含有する５００ｍｌ
のフラスコに接種した。フラスコを回転振とう機上に置
いて、３２℃で４８時間激しく振とうさせた。このよう
にして得たフラスコ接種物（１００ｍｌ）を用いて２ｌ
のびん中の１ｌの同じ滅菌培地に接種した。この接種物
に滅菌した空気を通じながら２８℃で４８時間生長を続
けた。次いでこの１ｌの培養物を用いて同じ滅菌培地を
含有する３０ｌの醗酵槽に接種し、この槽に滅菌空気を
通じながら２８℃で４２時間培養した。
【００８６】実施例７ 以下の処方に従つて醗酵培地を調製した： デキストロース 1.5 % グリセリン 1.5 % 大豆粉 1.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 塩化ナトリウム 0.3 % 水を加えて 100 % ６Ｎ水酸化ナトリウムによつてｐＨを７.０に調節した
のち、培地を滅菌した。実施例１に記したようにして調
製した接種物の３０ｌの部分を用いて、３００ｌの醗酵
槽中の２５０ｌの上記の培地に接種した。マツシユに無
菌の通気を供給しながら、マツシユを２２０回転／分で
運転する羽根で撹拌した。醗酵を３２℃で９７時間行な
つたのち、マツシユを取り入れた。
【００８７】実施例８ 下記の処方により醗酵培地を調製した： デキストロース 3.0 % 大豆粉 1.5 % 炭酸カルシウム 0.1 % 塩化ナトリウム 0.3 % 水を加えて 100 % ６Ｎ水酸化ナトリウムによりｐＨを７.０に調節したの
ち、培地を滅菌した。実施例１に記すようにして調製し
た接種物の３００ｌの部分を用いて醗酵槽中の３０００
ｌの上記の培地に接種した。無菌の通気をマツシユに供
給した。マツシユを１００回転／分で駆動する羽根によ
つて撹拌した。醗酵を３２℃で１１５時間行なつたの
ち、マツシユを取り入れた。
【００８８】実施例９ １．醗酵マツシユ（１００ｌ）を６Ｎ ＨＣｌによりｐ
Ｈ４.０に調節した。次いで酸性のマツシユを等容量の
塩化メチレンと共に１〜２時間撹拌した。次いでマツシ
ユと塩化メチレンの混合物を濾過助剤として珪藻土を使
用して濾過した。塩化メチレン抽出物を取り出して、約
２ｌの部分的に精製した抗生物質へと減圧濃縮した。
【００８９】２．部分的に精製した抗生物質のシリカゲ
ル上でのクロマトグラフイー ７ｃｍの直径を有するガラスカラムを、ウエルムシリカ
ゲルＴＳＣにより９１ｃｍの高さまで詰めた。約２ｌの
容量を有する粗製濃縮物（上記参照）をシリカゲルのカ
ラム中に浸み込ませた。次いでカラムを、先ず３ｌの塩
化メチレンにより、次いで塩化メチレン：酢酸エチル
（容量で１：１）を用いて展開して、それぞれ８０ｍｌ
の容量を有する、全体で１２６の画分を得た。次いでカ
ラムを更に酢酸エチル−エタノール（７：３）を用いて
展開して、更に８７の画分を得た。Ｃ２３０２４αに富
んでいる画分５８〜８７を合わせて、減圧下に濃縮して
９０.４ｇの残留物を得た。この残留物を６００ｍｌの
ジエチルエーテルと６００ｍｌのヘキサンの混合物中に
溶解した。かくして得た懸濁物を濾過して透明な濾液を
得た。透明な濾液を結晶の生成が始まるまで減圧下に濃
縮した。この懸濁物を終夜放置して熟成させた。結晶状
のＣ２３０２４αを漏斗上に集めて冷エーテルで洗浄し
たのち風乾して、３３.１ｇの結晶状のＣ２３０２４α
を得た。洗液と濾液を合わせた容量を更に低下させるこ
とにより、１２.４ｇの追加のＣ２３０２４αを得た。
【００９０】酢酸エチル−エタノールによる溶出からの
Ｃ２３０２４βに富んでいる画分１７７〜２０３を合わ
せて、減圧下に濃縮して６.７ｇの部分的に精製したＣ
２３０２４βを取得し且つ前記のように処理した。
【００９１】酢酸エチル−エタノールによる溶出からの
ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタに富んだ画分２０４〜２１３
を集めて、減圧下にペースト状に濃縮したのち、繰返し
てメタノールにより抽出した。メタノール抽出物を塩化
メチレンで抽出し、それをウエルムシリカゲルを含有す
るカラム上に仕込んだ。カラムを塩化メチレンで洗浄
し、次いで塩化メチレン：酢酸エチル（２：３）で溶出
した。各画分を薄層クロマトグラフイーによつて検査し
て活性の画分を集め、活性炭で処理し、濃縮したのち、
ヘプタンによつて繰返し抽出した。最終ヘプタン抽出物
を０℃において４８時間保つたのち、濾過によつて結晶
を母液から分離した。
【００９２】この母液を塩化メチレン中に溶解してウエ
ルムシリカゲルを詰めたガラスカラム中に浸入させた。
次いでカラムを、順次、２ｌの塩化メチレン、８ｌの塩
化メチレン：酢酸エチル（１：１）及び４ｌの酢酸エチ
ル：メタノール（９：１）で溶出した。溶出液を分取し
て、各画分を抗生物質の組成について検査した。活性の
画分を集めて、減圧下に濃縮してＬＬ−Ｃ２３０２４イ
オタを含有する残留物を得た。
【００９３】実施例１０ シリカゲル上のクロマトグラフイーからのＣ２３０２４
βのそれ以上の精製 セフアデツクスＬＨ２０をヘキサン−塩化メチレン−メ
タノール（１０：５：１）の混合物中で膨潤させた。５
ｃｍの直径を有するガラスカラムに８６ｃｍの高さまで
ゲルを詰めた。３ｇの精製したＬＬ−Ｃ２３０２４βか
ら成る仕込みを１０ｍｌの塩化メチレン、１ｍｌのメタ
ノール及び１０ｍｌのヘキサン中に溶解して、ゲルのカ
ラム中に浸入させた。次いでカラムをカラム中に抗生物
質を入れるために用いたものと同じ組成を有する溶剤で
展開した。コレクターを用いて多くの画分を得た。最初
の２３の画分はそれぞれ１７ｍｌの容量であつた。薄層
クロマトグラフイーによると画分１７乃至２６はＣ２３
０２４βを含有していた。これらの画分を混合して減圧
下に濃縮して１２６９ｍｇの重量の純粋な無定形のＬＬ
−Ｃ２３０２４βを得た。
【００９４】実施例１１ ナトリウム塩としてのＬＬ−Ｃ２３０２４βの結晶化 Ｂ及びＣ項に記すようにして調製した精製ＬＬ−Ｃ２３
０２４（２.４ｇ）をジエチルエーテル（５００ｍ
ｌ）、ヘキサン（１６０ｍｌ）及び塩化メチレン（２５
ｍｌ）の混合物中に溶解した。かくして得た溶液を３０
０ｍｌの水を含有する分液漏斗中に移した。振とう及び
沈降後に希ＨＣｌ（１Ｎ）を、ｐＨが２.０〜２.５にな
るまで、滴下した。酸性の水層を捨て、酸処理した有機
層を４００ｍｌずつの水で３回洗浄した。洗浄した有機
層を茶さじ一ぱいのダーコＧ６０粉と共に１５分間撹拌
したのち、セライトを通じて濾過した。脱色した有機層
を５００ｍｌの蒸留水上に入れ、振とう後にｐＨが１
１.０〜１１.５に達するまで５ＮＮａＯＨを滴下したの
ち沈降させた。アルカリ性の水相を捨て、残りの有機層
を４００ｍｌずつの水で２回洗浄した。洗浄した有機層
を硫酸ナトリウム上で乾燥したのち、減圧下に１５０ｍ
ｌとなるまで濃縮した。この濃縮物をフード中で数時間
放置した。結晶状のＬＬ−Ｃ２３０２４βを漏斗上に集
め、冷ヘキサンで洗浄したのち風乾して、４０２ｍｇの
ＬＬ−Ｃ２３０２４βの結晶性の塩を得た。この試料に
ついてミクロ分析を行ない、またいくつかのスペクトル
的なデータを求めた。
【００９５】Ｃ46Ｈ77Ｏ17Ｎａに対する計算値：Ｃ、５
９.７０；Ｈ、８.３３；Ｏ、２９.４６；灰分、２４
９。分析値Ｃ、６１.５５、Ｈ、８.７９；灰分、３.３
１；Ｎ,Ｏ。融点（フイツシヤージヨーンズの装置）＝
１７４ ＦＤ質量分析＝９２４。［α］D 26＝＋３.２（メタノー
ル中）実施例１２ ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの精製 ウオーターズプレパラテイブ５００Ａ高性能液体クロマ
トグラフイー装置に、５５０psiの圧力下に、シリカゲ
ルカートリツジを詰めた。実施例３からの５ｇの粗材料
の仕込みを５０ｍｌのヘプタン：酢酸エチル（４５：５
５）中に溶解して、シリカゲルのカラム上に注入した。
次いでカラムを同じ溶剤混合物によつて２００ｍｌ／分
の流速で展開して、２００ｍｌずつの４０画分を得た。
画分２１〜３２を合わせて濃縮し、残留物をヘキサンと
共にすりつぶし且つ蒸発させて、純粋なＬＬ−Ｃ２３０
２４イオタを得た。上記の手順を４回繰返して、全体を
合わせて２８０ｍｇの無定形ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタ
を得た。
【００９６】無定形ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの９０ｍ
ｇの部分を１０ｍｌのジエチルエーテル中に溶解し、１
０ｍｌの水と混合したのち、０.１Ｎ塩酸によつてｐＨ
２.５に調節した。エーテル層を水で洗浄し、０.１Ｎ水
酸化ナトリウムによりｐＨを約１１に調節し、分離し、
再び水で洗浄した。エーテル相を硫酸ナトリウム上で乾
燥し、濾過し且つ濃縮して残留物を得た。この残留物の
エーテル−ヘキサン中の溶液を徐々に蒸発させて、無定
形の白色固体を得た。
【００９７】この無定形の白色固体は下記の性質を有し
ている： 元素分析：Ｃ、６１.７９；Ｈ、８.８４；灰分、０.３
２； ［α］D 26＝＋２７（Ｃ ０.７２４、メタノール）；Ｆ
Ｄ質量分析：（Ｍ＋Ｎａ)+＝ｍ／ｅ ９５３、それ故計
算分子量は９３０である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はＫＢｒ中のＬＬ−Ｃ２３０２４βのＩＲ
スペクトルである。
【図２】図２はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
２０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４βの13Ｃ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。
【図３】図３はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
８０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４βの1Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。
【図４】図４はＫＢｒ中のＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの
ＩＲスペクトルである。
【図５】図５はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
８０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの1Ｈ−
ＮＭＲスペクトルである。
【図６】図６はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
２０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの13Ｃ−
ＮＭＲスペクトルである。
【図７】図７はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
２０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの13Ｃ−
ＮＭＲスペクトルである（拡大した尺度：０〜５０ｐｐ
ｍ）。
【図８】図８はＴＭＳを内部標準とするＣＤＣｌ3中の
２０ＭＨｚにおけるＬＬ−Ｃ２３０２４イオタの13Ｃ−
ＮＭＲスペクトルである（拡大した尺度：５０〜１１０
ｐｐｍ）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ 8828−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｐ 19/60 Ｃ１２Ｒ 1:03） (72)発明者 ドナルド・ブルース・ボーダーズ アメリカ合衆国ニユーヨーク州10901サフ アーン・ヒーザーヒルレイン13 (72)発明者 レイモンド・トマス・テスタ アメリカ合衆国ニユージヤージイ州07009 シーダーグローブ・ロツクレツジプレイス 55 (72)発明者 ジヨン・ヘンリー・エドワード・ジエーム ズ・マーテイン アメリカ合衆国ニユーヨーク州10956ニユ ーシテイー・カロライナドライブ14 (72)発明者 シドニー・カンター アメリカ合衆国ニユージヤージイ州08876 サマービル・ブルツクサイドレイン410 (72)発明者 ロバート・エル・ケネツト・ジユニア アメリカ合衆国ニユージヤージイ州08525 ホープウエルタウンシツプ（番地なし) (72)発明者 アーウイン・ビー・ウツド アメリカ合衆国ニユージヤージイ州08534 ペニントン・ボツクス182エイ・アールア ールナンバー１

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 同化しうる炭素、窒素及び無機塩源を含
    有する液体培地中でアクチノマズラユマエンスｓｐ．ｎ
    ｏｖ．を醗酵培地に実質的な抗生物質活性を付与するま
    で好気的に醗酵させ、次いでそれから抗生物質を回収す
    ることを特徴とする、下記の構造式または物理学的特性
    によって特定される抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４α，β
    及びイオタの製造方法。 抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４β （ａ） 元素分析（Ｃ ４６ Ｈ ７７ Ｏ １７ Ｎａとして） 計算値：Ｃ ５９．７０；Ｈ ８．３３；Ｏ ２９．４
    ６ 分析値：Ｃ ６１．５５；Ｈ ８．７９；Ｎ０ （ｂ） ＦＤ質量分析＝９２４ （ｄ） １３ Ｃ−ＮＭＲスペクトル［２０ＭＨｚ，ＴＭ
    Ｓに対するケミ カルシフト（ｐｐｍ）］ １０．５，１１．０、１２．２、１７．０、１７．７、
    １７．９、 ２２．３、２６．１、２６．８、２７．６、３０．２、
    ３２．０、 ３３．３、３３．７、３３．８、３６．５、３６．８、
    ３９．０、 ３９．９、４５．５、５７．１、５９．１、６０．７、
    ６６．９、 ６７．６、７０．２、７１．３、７２．９、７４．９、
    ７５．１、 ７９．９、８０．８、８２．１、８４．５、８４．７、
    ８５．６、 ８６．９、９５．８、９６．９、９７．７、１０７．
    ５、 １７９．２ （図２参照） （ｅ） その他 図１に記載のＩＲスペクトルおよび図３に記載の １ Ｈ−
    ＮＭＲスペクトルを表す。 抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４イオタ （ａ） 元素分析 分析値：Ｃ ６１．７９；Ｈ ８．８４ （ｂ） ＦＤ質量分析：（Ｍ＋Ｎａ） ＋ ＝ｍ／ｅ９５３ （ｄ） １３ Ｃ−ＮＭＲスペクトル［２０ＭＨｚ，ＴＭ
    Ｓに対するケミ カルシフト（ｐｐｍ）］ １０．６、１０．９、１１．７、１６．４、１７．６、
    １８．０、 ２１．７、２２．９、２４．１、２８．２、３１．２、
    ３２．２、 ３３．４、３３．８、３４．２、３６．７、３７．２、
    ３９．４、 ４０．３、４４．５、４５．５、４７．６、５６．８、
    ５９．９、 ６０．８、６８．５、６８．８、７１．３、７２．２、
    ７６．１、 ７６．９、７８．５、８１．０、８１．３、８１．８、
    ８４．８、 ８５．３、８５．６、８６．８、８８．５、９５，９、
    ９７．９、 ９９．６、１０７．２、１７３．０ （図６参照） （ｅ） その他 図４記載のＩＲスペクトルおよび図５記載の １ Ｈ−ＮＭ
    Ｒスペクトルを表す。
  2. 【請求項２】 醗酵培養物の温度を、２４−１５０時間
    にわたり、２５−３５℃に保持する、特許請求の範囲第
    １項記載の方法。
  3. 【請求項３】 該アクチノマズラユマエンスｓｐ．ｎｏ
    ｖ．はアクチノマズラユマエンスＮＲＲＬ１２５１５で
    ある、特許請求の範囲第１または２項記載の方法。
  4. 【請求項４】 同化しうる炭素、窒素及び無機塩源を含
    有する液体培地中でアクチノマズラユマエンスｓｐ．ｎ
    ｏｖ．を醗酵培地に実質的な抗生物質活性を付与するま
    で好気的に醗酵させ、次いでそれから抗生物質を回収す
    ることを特徴とする、特許請求の範囲第１項の記載によ
    る抗生物質ＬＬ−Ｃ２３０２４αの製造方法。
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