JPH08245678A - 二糖モノマー及びそのオリゴマーとオリゴマーの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 分子内にＮ−アセチルグルコサミンユニット
を有し、キチンおよびその加水分解物と同様の特性を備
えるオリゴマー及びその製造方法並びにその原料として
有用な２糖モノマーを提供する。 【構成】 二糖モノマーであるフッ化４−Ｏ−（２−ア
セトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−β−Ｄ−グルコピラノシルを開発した。該二糖モ
ノマーにアセトニトリルと緩衝液との混合液中でセルラ
ーゼを作用させることによってオリゴマーを得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な二糖モノマー及
びこの二糖モノマーを出発原料とし、これにセルラーゼ
を作用させることによって得られるオリゴマー（オリゴ
糖）とその製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来より、フッ化β−Ｄ−セロビオシル
（次の式中Ｉで示したもの）については、久保らの方法
（日本大学獣医学部学術研究報告書，４１，９，１９８
４）が知られている。また、このフッ化β−Ｄ−セロビ
オシルを出発原料として、これにセルラーゼを作用させ
ることにより、セルロースオリゴマーが得られることも
知られている（特願平１−２３９６１１号）。

【化３】

【０００３】一方、キチンはＮ−アセチルグルコサミン
ユニットが、１，４結合した天然多糖で、甲殻類、昆虫
等の生物体に広く分布しており、キチン及びキチンを脱
アセチル化したキトサン及びこれらを加水分解して得ら
れるオリゴ糖類は、安全性、生分解性、生体との親和性
に優れており、医療分野、化粧品分野への応用が期待さ
れている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかし、工業的に生産
されるキチンは、カニやエビの殻を原料にしているた
め、１）少量のキチンを得るのに大量の殻を必要とす
る、２）一定の品質を有するキチンを得るためには、同
質の原料つまり同種のエビ又はカニを集める必要があ
る、３）エビやカニは繁殖期があり、漁獲量が周期的に
増減し、安定供給が望めない等、主として原料確保の面
で問題が多い。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記問題
点を解決すべく、鋭意検討した結果、二糖モノマーであ
るフッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−
β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシ
ルの合成に成功した。さらにこれを酵素触媒重合するこ
とにより新規なオリゴマーを得ることに成功し、本発明
に至ったものである。なお、このオリゴマーは、キチン
およびその加水分解物であるオリゴマーそのものではな
いが、分子内にＮ−アセチルグルコサミンユニットを有
し、同様の特性を示すと考えられる。

【０００６】すなわち、本発明は、下記構造式で示され
る新規二糖モノマーであるフッ化４−Ｏ−（２−アセト
アミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−
β−Ｄ−グルコピラノシルを提供するものである。

【化４】

【０００７】また本発明は、別の側面として下記構造式
で示される新規オリゴマー（II）

【化５】 及びその製造法を提供するものである。

【０００８】この新規オリゴマーはグルコースユニット
とＮ−アセチルグルコサミンユニットとを交互に有する
もので、キチン及びその加水分解物であるオリゴ糖に近
い特性を示す。

【０００９】新規二糖モノマーであるフッ化４−Ｏ−
（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシル（１）は、Ｎ−
アセチル−Ｄ−グルコサミン（２ａ）及びグルコース
（４ａ）を出発原料として以下の反応式Ａで示される経
路により、合成することができる。

【化６】 この反応経路Ａは、合成経路の概要を示すものであり、
後述する実施例１の記述に沿って詳細に説明される。し
かし、この実施例１は最良の実施形態を提供するもの
の、各中間体を得るための溶媒、反応温度、反応時間、
中間体に化合させる反応物等の諸要素は、当業者に公知
の技術を勘案して置き換え可能であり、このように諸要
素を変化させて得られる各種態様は全て本発明の技術的
思想の範囲に含まれる。

【００１０】また、下記構造式を有する新規オリゴマー
（II）

【化７】 は、フッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ
−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１）をアセトニトリルと緩衝液（例えば酢酸緩衝
液）の混合液に溶解したものにセルラーゼを緩衝液（例
えば酢酸緩衝液）に溶かしたものに加え、攪拌下で反応
させ、反応終了後、反応液に過剰量のアセトニトリルを
加え、加熱することにより、セルラーゼを失活させ、次
いで溶媒を除去したものを精製・分離することにより得
ることができる。なお、反応条件を適宜設定することに
より、４糖、６糖から任意の糖数のオリゴマーを得るこ
とができる。

【００１１】

【実施例】

実施例１ フッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β
−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１）の製造方法（上記反応式（Ａ）を参照して説明す
る）

【００１２】２−メチル（３，４，６−トリ−Ｏ−アセ
チル−１，２−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）
〔２，１−ｄ〕−２−オキサゾリン〔反応式Ａの
（３）〕 アルゴン雰囲気下、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
〔反応式Ａの（２ａ）〕（２０．０ｇ，９０．５ｍｍｏ
ｌ）を塩化アセチル（８０ｍｌ）に分散させ、マグネッ
トスターラーにより室温で３日間攪拌させた。ＴＬＣに
より反応終了を確認した後、クロロホルムで希釈した水
（×２）、飽和炭酸ナトリウム（×２）、水（×２）で
分液し集めた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。
硫酸ナトリウムをろ過により除去した後溶媒をエバポレ
ータにより除き減圧乾燥するこにより塩化Ｎ−テトラ−
Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミル〔反応式Ａの（２
ｂ）〕の混合物を得た。さらにアルゴン雰囲気下、混合
物をアセトニトリルに溶かした溶液を塩化テトラエチル
アンモニウム（７．１ｇ，４２．９ｍｍｏｌ）と炭酸水
素ナトリウム（７．１ｇ，８４．５ｍｍｏｌ）に加え３
０分間反応させた。ＴＬＣにて反応終了を確認後ガラス
フィルターで固体を除き、溶媒を濃縮して塩化メチレン
に溶かして分液し集めた有機層を無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。ろ過で無水硫酸ナトリウムを除き濃縮した
後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフ（Ｇｅ
ｌ：Ｍｅｒｃｋ社製 Sirica gel ６０）（展開溶媒；
酢酸エチル／ヘキサン＝５／２）により精製し２−メチ
ル（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１，２−ジデオ
キシ−α−Ｄ−グルコピラノ）〔２，１−ｄ〕−２−オ
キサゾリン〔反応式Ａの（３）〕（１５．３ｇ，４６．
４ｍｍｏｌ，５１．３％）を得た。

【００１３】グルコースペンタアセテート〔反応式Ａの
（４ｂ）〕 グルコース〔反応式Ａの（４ａ）〕（２９．８ｇ，１６
６ｍｍｏｌ）にピリジン（１００ｍｌ）を加えた溶液に
無水酢酸（２００ｍｌ）を滴下し２４時間反応させた。
ＴＬＣにより反応終了を確認した後、エバポレートで溶
液を濃縮し氷水へ投入した。１時間放置した後、ガラス
フィルターろ過にて固体と水を分離しガラスフィルター
上の固体をクロロホルムに溶かし、これが中性になるま
で冷水で分液した。有機層を分離後無水硫酸ナトリウム
により乾燥した。無水硫酸ナトリウムをろ過により除去
した後、クロロホルムをエバポレートにより除き、さら
に減圧乾燥することによりグリコースペンタアセテート
〔反応式Ａの（４ｂ）〕（５８．８ｇ，１５０ｍｍｏ
ｌ，９０．９％）を得た。

【００１４】臭化２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチ
ル−α−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（４ｃ）〕 グルコースペンタアセテート〔反応式Ａの（４ｂ）〕
（５８．６ｇ，１５０ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液に
３０％ＨＢｒ酢酸溶液（１０５ｍｌ）をクロロホルム
（５５ｍｌ）で希釈した混合溶液を０℃で滴下し３時間
反応させた。過剰量のクロロホルムで希釈しこれが中性
になるまで冷水で分液した。有機層を分離後無水硫酸ナ
トリウムにより乾燥した。無水硫酸ナトリウムをろ過に
より除去した後、クロロホルムをエバポレータにより除
く、さらに減圧乾燥することにより臭化２，３，４，６
−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコシル〔反応式
Ａの（４ｃ）〕（５７．６ｇ，１４０ｍｍｏｌ，９３
％）を得た。

【００１５】ベンジル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ア
セチル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（４ｄ）〕 暗所、Ａｒ雰囲気下酸化銀（４２．５ｇ，１８３ｍｍｏ
ｌ）と硫酸カルシウム（１６０℃、１時間減圧乾燥、１
５０ｇ）に臭化２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル
−α−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（４ｃ）〕（５７．
６ｇ，１４０ｍｍｏｌ）をベンジルアルコール（１００
ｍｌ）とクロロホルム（１３０ｍｌ）の混合溶媒に溶解
し加え１２０℃で還流させながら約３時間攪拌した。セ
ライトろ過により銀触媒と硫酸カルシウムを取り除き溶
媒を減圧乾燥により除いた後エタノールから再結晶した
ものをろ過により収集しデシケーター乾燥することでベ
ンジル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−グルコシド〔反応式Ａの（４ｄ）〕（２５．９ｇ，５
９．２ｍｍｏｌ，４２．３％）

【００１６】ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａ
の（５）〕 ベンジル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（４ｄ）〕（２５．９ｇ，
５９．１ｍｍｏｌ）を脱気後アルゴン置換し、無水メタ
ノール（４００ｍｌ）に溶解させナトリウムメトキシド
のメタノール溶液（０．０１５Ｍ，３．７ｍｌ）を加え
室温にて３時間反応させた。ＴＬＣにより反応終了を確
認しイオン交換樹脂［Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２
０（Ｈ⁺）］を加え攪拌した。反応溶液が中性になった
のをｐＨ試験紙で確認した後、ろ過によりイオン交換樹
脂を取り除きメタノールをエバポレートにより除去し減
圧乾燥することでベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応
式Ａの（５）〕（１６．０ｇ，５９．２ｍｍｏｌ，１０
０％）を得た。

【００１７】ベンジル４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−
Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（６）〕 アルゴン雰囲気下、ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反
応式Ａの（５）〕（１６．０ｇ，５９．２ｍｍｏｌ）を
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）（３００ｍｌ）に溶解さ
せ、ｐ−トルエンスルホン酸（２．３ｇ，１２．１ｍｍ
ｏｌ）、α，α−ジメトキシトルエン（２０ｍｌ）を投
入し２４時間反応させＴＬＣにて反応の終了を確認した
後、ピリジン（１５ｍｌ）を投入し反応液を中和した後
に濃縮、クロロホルムで希釈後中性になるまで冷水で分
液した。有機層を分離後、無水硫酸ナトリウムにより乾
燥させ濃縮後に得られた固体を減圧乾燥しベンジル４，
６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａ
の（６）〕（２１．０ｇ，５８．５ｍｍｏｌ，９９％）
を得た。

【００１８】ベンジル４，６−Ｏ−ベンジリデン−２，
３−ジ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａ
の（７）〕 アルゴン雰囲気下、ベンジル４，６−Ｏ−ベンジリデン
−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（６）〕（２１．０
ｇ，５８．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１０ｍｌ）に溶か
しＮａＨ（１３ｇ，５４２ｍｍｏｌ）を溶かしたＤＭＦ
溶液に０℃で滴下する。しばらく攪拌した後にベンジル
ブロミド（３０ｍｌ）を滴下した。反応終了をＴＬＣに
て確認した後に過剰のメタノールを反応液に投入し、グ
ラスフィルターでろ過しグラスフィルター上の固体をク
ロロホルムに溶かして分液し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥させた。ろ過にて無水硫酸ナトリウムを除きエバポレ
ートで濃縮した後減圧乾燥させることによりベンジル
４，６−Ｏ−ベンジリデン−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（７）〕（１７．７
ｇ，３２．９ｍｍｏｌ，５６％）を得た。

【００１９】ベンジル２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル
−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（８）〕 アルゴン雰囲気下、ベンジル４，６−Ｏ―ベンジリデン
―２，３―ジ−ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式
Ａの（７）〕（１７．７ｇ，３２．９ｍｍｏｌ）水素化
シアノホウ素ナトリウム（１８ｇ，２７２ｍｍｏｌ）及
び粉末モレキュラーシーブス（３Ａ）（３５ｇ）を含む
ＴＨＦ（１５０ｍｌ）溶液に０℃にてエーテルの飽和無
水塩酸溶液を徐々に滴下する。ＴＬＣにて反応の終了を
確認した後、水で水素化シアノホウ素ナトリウムを殺し
濃縮したものをエーテルで希釈し中性になるまで飽和食
塩水で分液する。有機層を分離後無水硫酸ナトリウムで
乾燥させる。ろ過にて固体を除去し、エバポレータによ
り濃縮後クロロホルムで希釈し分液して無水硫酸ナトリ
ウムを加えて乾燥させさらに濃縮する。残留物を展開溶
媒が酢酸エチル／ヘキサン＝２／９のフラッシュカラム
クロマトグラフィーにて単離精製してベンジル２，３，
６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式
Ａの（８）〕（９．３ｇ，１７．２ｍｍｏｌ，５２．４
％）を得た。

【００２０】ベンジル４−Ｏ−（２−アセトアミド−
３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−
Ｄ−グルコピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベン
ジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（９）〕 アルゴン雰囲気下、２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−
β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの（８）〕（１９５ｍ
ｇ，０．３６０ｍｍｏｌ）の１，２ジクロロエタン（３
ｍｌ）溶液にｐ−トルエンスルホン酸（３４ｍｇ，０．
２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．４ｍｌ）に溶かした溶液と
２−メチル（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１，２
−ジデオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ）〔２，１−ｄ〕
−２−オキサゾリン〔反応式Ａの（３）〕（３６６ｍ
ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を１，２ジクロロエタン（２．５
ｍｌ）に溶かした溶液をオイルバス上６０℃において４
日間反応させた。反応液をクロロホルムで希釈し分液し
た後、集めた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。
ろ過で無水硫酸ナトリウムを除き濃縮した後、混合物を
シリカゲルカラムクロマトグラフ（Ｇｅｌ：Ｍｅｒｃｋ
社製 Sirica gel ６０）（展開溶媒；酢酸エチル／ヘ
キサン＝５／２）により精製しベンジル４−Ｏ−（２−
アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−
デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，３，６−
トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコシド〔反応式Ａの
（９）〕（５５．０ｍｇ，０．０６３２ｍｍｏｌ，１
７．６％）を得た。

【００２１】４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６
−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ―グルコ
ピラノシル）−β−Ｄ−グルコース〔反応式Ａの（１０
ａ）〕 パラジウム−カーボン（１０％）（０．３０４ｇ）とＴ
ＨＦ（３ｍｌ）の混合物を約３０秒間脱気し、水素置換
を行った。この操作を５回繰り返した後、水素雰囲気下
ベンジル４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−ト
リ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−
グルコシド〔反応式Ａの（９）〕（６４２ｍｇ，０．７
３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１５ｍｌ）を加え２４時
間反応させた。ＴＬＣにて反応終了を確認後、セライト
ろ過によりパラジウムを取り除きエバポレータで溶媒を
除去し４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ
−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル）−β−Ｄ−グルコース〔反応式Ａの（１０ａ）〕
（３７７ｍｇ，０．７４０ｍｍｏｌ，ｑｕａｎｔ．）を
得た。

【００２２】１−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−（２−アセト
アミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキ
シ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，３，６−トリ−
Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコース〔反応式Ａの（１０
ｂ）〕 ４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）
−β−Ｄ−グルコース〔反応式Ａの（１０ａ）〕（３７
７ｍｇ，０．７４０ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（４ｍ
ｌ）溶液に無水酢酸（６ｍｌ）を０℃で滴下した。室温
で２４時間反応させ、ＴＬＣにより反応終了を確認後、
エバポレートによりトルエンとの共沸で溶媒を除去し、
さらに減圧乾燥することで１−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−
（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル
−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，
３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコース〔反
応式Ａの（１０ｂ）〕（４７３ｍｇ，０．６９８ｍｍｏ
ｌ，９４．３％）を得た。

【００２３】臭化４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，
４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−
グルコピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル
−β−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（１０ｃ）〕 １−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，
４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−
グルコピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル
−β−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（１０ｂ）〕（４７
３ｍｇ，０．６９４ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液（６
ｍｌ）に３０％ＨＢｒ酢酸溶液（１．２ｍｌ）をクロロ
ホルムで希釈した混合溶液を０℃で滴下し４時間反応さ
せた。ＴＬＣにより反応終了を確認した後、クロロホル
ムで希釈し、これが中性になるまで冷水で分液した。有
機層を分離後、無水硫酸ナトリウムにより乾燥した。無
水硫酸ナトリウムを除いた後、クロロホルムをエバポレ
ータにより除去しさらに減圧乾燥することにより臭化４
−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−ア
セチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−
２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコシル
〔反応式Ａの（１０ｃ）〕（４８８ｍｇ，０．６９４ｍ
ｍｏｌ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

【００２４】フッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，
４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−
グルコピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル
−β−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（１０ｄ）〕 暗所アルゴン雰囲気下、微粉砕したフッ化銀（０．４
ｇ，３．１５ｍｍｏｌ，１２０℃，１時間脱気）に臭化
４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）
−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコシ
ル〔反応式Ａの（１０ｃ）〕（４８８ｍｇ，０．６９４
ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（８ｍｌ）を加え、マ
グネットスターラーにより室温で１２時間反応させた。
ＴＬＣにより反応終了を確認した後、セライトろ過によ
り銀触媒を取り除き、次いでエバポレータによりクロロ
ホルムを除去した後シリカゲルカラムクロマトグラフ
（Ｇｅｌ：Ｍｅｒｃｋ社製 Sirica gel ６０）（展開
溶媒；酢酸エチル／ヘキサン＝７／１）により精製しフ
ッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−
Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グル
コシル〔反応式Ａの（１０ｄ）〕（２５１ｍｇ，０．３
９４ｍｍｏｌ，５６．３％）を得た。

【００２５】フッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−２−
デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−グル
コシル〔反応式Ａの（１ｂ）〕 フッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ
−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グ
ルコシル〔反応式Ａの（１０ｄ）〕（２５１ｍｇ，０．
３９４ｍｍｏｌ）を１０分間脱気した後、アルゴン置換
し無水メタノール（１０ｍｌ）に溶解させ、ナトリウム
メトキシドのメタノール溶液（０．０８Ｍ，０．１１ｍ
ｌ）を加えた後０℃にて４５分間反応させた。ＴＬＣに
より反応終了を確認しイオン交換樹脂［Ａｍｂｅｒｌｉ
ｔｅ ＩＲ−１２０（Ｈ⁺ ）］を加え攪拌した。反応溶
液が中性になったのをｐＨ試験紙で確認した後、ろ過に
よりイオン交換樹脂を取り除きメタノールをエバポレー
トにより除去し減圧乾燥することでフッ化４−Ｏ−（２
−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル）−β−Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（１ｂ）〕
（１５１ｍｇ，０．３９４ｍｍｏｌ，ｑｕａｎｔ．）を
得た。

【００２６】得られたフッ化４−Ｏ−（２−アセトアミ
ド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−
Ｄ−グルコシル〔反応式Ａの（１ｂ）〕の ¹Ｈ ＮＭＲ
及び ¹³Ｃ ＮＭＲは次の通りである。¹ Ｈ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，δ） ５．２（ｄ，ｄ；Ｊ_1,F ＝53.01,d;J_1,2＝7.19；１Ｈ） 還元末端のアノメリック プロトン ４．６（ｄ；Ｊ₁ ′_,2′＝８．３６；１Ｈ） 非還元末端ユニットのアノメリック ２．０（ｓ；３Ｈ）アセチル基プロトン¹³ Ｃ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，δ） １７４（１Ｃ） アセチル基のカルボニル ¹³Ｃ １０９（１Ｃ） （ｄ；Ｊ_1,F ＝214.40；１Ｃ）１
（β）−¹³Ｃ １０１（１Ｃ） １′−¹³Ｃ ７６．５（１Ｃ） ４− ¹³Ｃ ７６．０（１Ｃ） ５′−¹³Ｃ ７４．８（１Ｃ）（ｄ；Ｊ_5,F ＝4.59；１Ｃ）５（β）
−¹³Ｃ ７３．５（１Ｃ） ３′−¹³Ｃ ７３．４（１Ｃ）（ｄ；Ｊ_3,F ＝9.68；１Ｃ）３（β）
−¹³Ｃ ７２．８（１Ｃ）（ｄ；Ｊ_2,F ＝19.4；１Ｃ）２（β）
−¹³Ｃ ７０．０（１Ｃ） ４′−¹³Ｃ ６１．０（１Ｃ） ６−¹³Ｃ ６１．５（１Ｃ） ６′−¹³Ｃ ５６．０（１Ｃ） ２′−¹³Ｃ ２０．５〜２３．１（１Ｃ） アセチル基のメチル¹³Ｃ

【００２７】実施例２ 実施例１で得られたフッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド
−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ
−グルコピラノシル１０１ｍｇをアセトニトリル２ｍｌ
と酢酸緩衝液（０．０１Ｍ，ｐＨ５）４ｍｌとの混合液
に溶解させた。別容器にTrichoderma Viride由来のセル
ラーゼ５ｍｇを酢酸緩衝溶液（０．０１Ｍ、ｐＨ５）２
ｍｌに加えたものを調製し、これをフッ化４−Ｏ−（２
−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル）−β−Ｄ−グルコピラノシル溶液に加え温度３０
℃で２時間、マグネチックスターラーにより攪拌した。
反応終了後、反応液に過剰量のアセトニトリルを加え、
１００℃油浴中に１０分間浸すことにより、セルラーゼ
を失活させ、エバポレーターにより溶媒を除去し、粗反
応生成物を高性能液体クロマトグラフィーにより分解
し、４糖オリゴマー２ｍｇと６糖オリゴマー３ｍｇを得
た。４糖オリゴマーの ¹Ｈ ＮＭＲは、図１に示す通り
であり、¹³Ｃ ＮＭＲは後述する通りであった。また、
６糖オリゴマーの ¹Ｈ ＮＭＲは、図２に示す通りであ
った。

【００２８】４糖オリゴマー ¹ Ｈ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，δ）の結果は、図１に示す通り
であり。この４糖オリゴマーの化学式は、以下の通りで
ある。

【化８】

【００２９】図１は以下のように解析される。 ４．５〜４．６ｐｐｍ：非還元末端及び内部グルコース
ユニットのアノメリックプロトン ３．２〜４．２ｐｐｍ：グルコースユニットの２，３，
４，６位プロトン ２．０ｐｐｍ：アセチルのメチルプロトン

【００３０】¹³Ｃ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，δ） １７５（１Ｃ） アセチル基のカルボニル １７４（１Ｃ） アセチル基のカルボニル １０２（３Ｃ） 非還元末端 ９７（１Ｃ） 還元末端アノメリック （α体） ９３（１Ｃ） 還元末端アノメリック （β体） ２３（２Ｃ） アセチル基のメチル

【００３１】６糖オリゴマー ¹ Ｈ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ，δ）の結果は、図２に示す通り
である。この化学式は、以下の通りである。

【化９】 図２は以下のように解析される。 ４．５〜４．６ｐｐｍ：非還元末端グルコース及び内部
グルコースユニットのアノメリック１位プロトン ３．２〜４．２ｐｐｍ：グルコースユニットの２，３，
４，６位プロトン ２．０ｐｐｍ：アセチルのメチルプロトン

【００３２】

【発明の効果】以上のように、本発明によれば、分子内
にＮ−アセチルグルコサミンユニットを有し、キチンお
よびその加水分解物と同様の特性を備えるオリゴマー及
びその原料として有用な２糖モノマーが提供される。提
供されるオリゴマーは、キチン、キトサンと同様に安全
性、生分解性、生体との親和性に優れており、キチン、
キトサンと同様な医療分野、化粧品分野等への幅広い応
用を行うことができる。すなわち、例えば、生体適合性
を活用して、手術用縫合糸、創傷被覆剤として活用する
ことができる。しかも、従来のキチン等に比べ、安定供
給を望むことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明によって得られた４糖オリゴマ
ーの ¹Ｈ ＮＭＲの結果を示すグラフである。

【図２】図２は、本発明によって得られた６糖オリゴマ
ーの ¹Ｈ ＮＭＲの結果を示すグラフである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記構造式で示される二糖モノマーであ
   るフッ化４−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−
   β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシ
   ル。 【化１】
2. 【請求項２】 下記構造式で示されるオリゴマー。 【化２】
3. 【請求項３】 アセトニトリルと緩衝液との混合液中で
   請求項１の二糖モノマーにセルラーゼを作用させること
   を特徴とする請求項２のオリゴマーの製造方法。