CN108329362B - 一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法 - Google Patents

一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法，属于糖化学领域。本发明以葡糖糖为糖基供体，获得目标β‑的糖苷键，然后通过氧化还原的葡萄糖C‑2号位的方法成功合成二糖砌块，接着以该二糖砌块为重复单元合成目标的寡糖结构，例如革兰氏阳性菌细胞壁荚膜多糖结构衍生物[→3)‑α‑D‑Manp‑(1→4)‑β‑D‑Rhap‑(1→]5‑Linker。十糖的还原端接有连接臂用于将来与蛋白质连接制成糖缀合物，用于免疫学研究。本发明提供的方法简单、省时、省力且成本低廉，所得革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物有可能用作与自闭症相关的医药的开发制备。

Description

一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法，属于糖化学领域。
背景技术
自闭症(autism)，又称孤独症，最早由美国的精神病学家坎纳(Leo Kanner)在临床医学中发现并于上世纪三十年代末提出这一概念。自闭症的主要表现为儿童的社会化障碍、语言沟通障碍和行为习惯障碍。根据当前国际普遍引用标准，每160名儿童中有1名患自闭症。据此推算，中国自闭症儿童数在2012年时约为164万人，而且每年在以10％到17％的比例增长，已达到人口比例的千分之一。在世界范围内，自闭症日益受到广泛的关注和重视。从2008年起，联合国大会指定4月2日为“世界提高自闭症意识日(WorldAutismAwareness Day)”。鼓励每年以适当方式举办世界提高自闭症意识日活动，以便提高公众对自闭症的认识，包括在家庭层面采取措施，提高全社会对自闭症儿童的认识。
C.bolteae是一种厌氧性革兰氏阳性菌，其生存最佳环境温度为37℃，恰好是人体的正常温度。C.bolteae在肠道中的大量繁殖会导致较高比例包含便秘和腹泻在内的胃肠不适，而这些不适对自闭症患者行为习惯的影响可能与糖类物质被细菌代谢所产生的短链脂肪酸，如丙酸(PPA)等有关，而PPA代谢物能够使胃运动减弱、增加肠道收缩的频率，这些都可能与ASD患者的肠胃不适有直接关系。在对伴随有慢性、持续性腹泻的重症ASD患儿口服使用万古霉素(一种糖肽类抗生素，用来预防和治疗革兰氏阳性菌所造成的感染)的治疗中研究人员发现，80％患儿的自闭症症状得到了短期缓解，但是一旦停药效果就会消失，这表明万古霉素只是对菌群失调起到了抑制作用而未消除，但同时也说明，对相应的革兰氏阳性菌生长的抑制确实能够缓解自闭症症状。然而，长期服用万古霉素会使细菌产生耐药性，因此亟需研究开发能够控制肠道中主要致病菌如C.bolteae繁殖的其他治疗方案。
2013年，加拿大基辅大学的研究人员提纯并表征了C.bolteae细胞壁荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)的结构，免疫研究表明这种多糖结构可在兔子体内产生免疫性。这一研究立刻引起了广泛关注，大家普遍认为这为研发控制自闭症症状的疫苗迈出了重要一步。
目前市场上还没有能防止C.bolteae感染或者治疗C.bolteae的疫苗存在。糖类疫苗作为疫苗开发的新的目标分子，越来越被科学家们重视，细菌表面的多糖结构往往对于细菌的致病性以及人体内免疫识别具有重要的作用。迄今为止，尚未见关于化学合成的C.bolteae细胞壁荚膜多糖作为疫苗进行研究，而通过生物法提取和纯化多糖结构主要有以下缺点：1)提取、纯化过程耗时长、成本高，且每次提取的量较小；2)很难得到纯度高、结构单一的产品，产品中存在的杂质可能会给后期疫苗制备带来一系列的问题和困难。而化学合成制备寡/多糖结构则能够实现产品的大量制备，并且合成得到的产物结构单一、没有杂质，解决了生物法提纯中存在的主要问题。所以通过化学方法合成C.bolteae表面寡多糖用于开发C.bolteae疫苗具有非常重要的意义。
发明内容
本发明以制备一种能够减轻细菌对自闭症患者肠胃刺激的疫苗为主要目标，着眼于一种与迟发性自闭症相关的肠道革兰氏阳性菌Clostridium bolteae，以其细胞壁表面的细胞壁荚膜多糖结构为研究对象，通过设计、利用化学方法合成其结构并制备糖-蛋白缀合物，用以后续对所合成的缀合物在小鼠体内进行免疫学研究，一方面希望可以将这种细胞壁荚膜多糖(CPS)结构应用于对患者的临床诊断，从而确立相应的治疗方案；另一方面，希望使用这种多糖开发疫苗，以实现通过对自闭症患儿肠道内C.bolteae菌群数量的控制，减轻自闭症患者的痛苦，预防与迟发性自闭症相关的症状表现，帮助他们更有效地接受康复训练。
C.bolteae表面荚膜多糖由一个重复的二糖片段构成，该二糖片段由一个D-甘露糖和一个D-鼠李糖组成，其结构可以表征为[→3)-α-D-Manp-(1→4)-β-D-Rhap-(1→]n。根据质谱数据分析，这一多糖结构由9个重复片段构成(n＝9)。
本发明设计以一个二糖片段为合成单元，通过糖基化反应将二糖单元逐个相连，合成不同长度的寡糖结构，构建一个包含有从一个二糖片段到五个二糖片段(即一个十糖)的合成糖抗原库。然后，将合成得到的不同长度的寡糖结构进一步与载体蛋白缀合，用以开展后期免疫学研究，为此，在化学合成过程中需对目标寡糖结构中引入连接臂，本发明选择氨戊基连接臂用作寡糖还原端修饰。
本发明解决的第一个问题是合成C.bolteae荚膜多糖结构中β-D-鼠李糖糖苷键。D-鼠李糖，即6-脱氧-D-甘露糖，在糖苷键合成中无论是端基效应还是空间效应都易形成占优势的α-D-吡喃鼠李糖苷键；而且由于C-2号位会有邻基参与效应，会立体选择性生成1,2-trans-糖苷键，同样是容易得到α-D-吡喃鼠李糖苷键。β-D-吡喃甘露糖苷键的合成一直都是糖合成化学中研究的热点，同时也是糖化学的主要挑战之一，该糖苷键可以认为是最难构建的端基糖苷键之一。本发明采用C-2号位氧化还原的方法合成目标的寡糖结构。
本发明提供的合成β-D-鼠李糖糖苷键的方法，是首先合成6-脱氧-D-吡喃葡萄糖糖苷，把目标化合物的C-2号位用酰基类保护基进行保护，利用邻基参与效应，立体选择性生成β-D-吡喃葡萄糖糖苷，然后，选择性脱除葡萄糖C-2号位酰基类保护基，在C-2号位用磺酰基等保护基经过SN2机理的亲核取代，将C-2号位的平伏键转位生成直立键，即得到β-D-吡喃鼠李糖糖苷；或者利用氧化还原法，先把C-2号位氧化成酮，然后再用氢化铝锂或硼氢化钠等还原剂还原得到C-2号位为直立键的化合物，即得到β-D-吡喃鼠李糖糖苷。
基于所述合成β-D-鼠李糖糖苷键的方法，本发明得到了一个包含有从两个二糖片段(即二糖)到五个二糖片段(即十糖)的合成糖的库。
其中，十糖的结构如下式I所示：
Figure BDA0001602297090000031
其中，R6为氨基连接臂[-(CH2)n-N-Y1Y2，n＝1～10]，用于和蛋白质相连接，制备糖蛋白用于免疫学研究，其中n代表连接臂可以为不同的碳链长度，Y1和Y2为氨基的保护基，其中Y1/2为H或者为卞基(Bn)，Y2/1为H或者卞甲氧羰基(Cbz)；R2，R3，R4，R5基为氢(H)，或者乙酰基(Ac)，或者苯甲酰(Bz)，或者新戊酰基(Piv)，或者氯乙酰(ClAc)，或者乙酰丙酰基(Lev)，或者烯丙氧羰酰基(Alloc)，或者苄基(Bn)，或者2-萘甲基(Nap)，或者烯丙基(All)，或者苯亚甲基缩醛，或者异亚丙基缩酮等；R7，R12基为氢(H)，或者乙酰基(Ac)，或者苯甲酰(Bz)，或者新戊酰基(Piv)，或者氯乙酰(ClAc)，或者乙酰丙酰基(Lev)，或者烯丙氧羰酰基(Alloc)等，R8基为H或者为卞基(Bn)，或者烯丙基(All)等；R13，R14基为或者苄基(Bn)，或者2-萘甲基(Nap)，或者烯丙基(All)，或者苯亚甲基缩醛，或者异亚丙基缩酮等。
二糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000032
其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8参见式I。
三糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000041
其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I。
四糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000042
其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R12、R13、R14参见式I。
五糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000043
其中，R6、R7、R8、R12、R13、R14参见式I。六糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000044
其中，R2、R3、R4、R5、R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I。
七糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000045
其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8、R9参见式I。
八糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000051
其中，R2、R3、R4、R5、R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I。
九糖的结构如下式所示：
Figure BDA0001602297090000052
其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I。
所述目标分子十糖的合成具体包括以下步骤：
步骤一，甘露糖糖砌块1的合成：
Figure BDA0001602297090000053
其中，糖砌块1如式II，其端基位R1为糖基供体可以是卤代糖、硫糖苷、三氯乙酰胺亚胺酯糖苷、磷酸酯糖苷、亚砜糖苷、N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷等，如R1基为氟(F)或者氯(Cl)或者溴(Br)或者三氯乙酰亚胺酯(CCl3C(＝NH)O-)或者N-苯基三氟乙酰亚胺酯(CF3C(＝NPh)O-)或者乙硫基(SEt)或者苯硫基(SPh)或者对甲苯硫基(STol)或者乙硫基(SEt)或者二丁基膦酸基(-P(＝O)-(OBu)2)等；其端基位α或者β构型；其余取代基Rn参见式I。
步骤二，鼠李糖砌块2的合成：
Figure BDA0001602297090000054
糖砌块2如式III所示，取代基Rn参见式I。
步骤三，鼠李糖糖砌块4的合成：
Figure BDA0001602297090000061
糖砌块4如式IV，其端基位R10为糖基供体可以是卤代糖、硫糖苷、三氯乙酰胺亚胺酯糖苷、磷酸酯糖苷、亚砜糖苷、N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷等，如R10基为氟(F)或者氯(Cl)或者溴(Br)或者三氯乙酰亚胺酯(CCl3C(＝NH)O-)或者N-苯基三氟乙酰亚胺酯(CF3C(＝NPh)O-)或者乙硫基(SEt)或者苯硫基(SPh)或者对甲苯硫基(STol)或者乙硫基(SEt)或者二丁基膦酸基(-P(＝O)-(OBu)2)等；其端基位α或者β构型；R9基为2-萘甲基(Nap)，其余取代基Rn参见式I。
步骤四，甘露糖糖砌块5的合成：
Figure BDA0001602297090000062
糖砌块5如式V，其端基位R10为糖基供体可以是卤代糖、硫糖苷、三氯乙酰胺亚胺酯糖苷、磷酸酯糖苷、亚砜糖苷、N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷等，如R11基为氟(F)或者氯(Cl)或者溴(Br)或者三氯乙酰亚胺酯(CCl3C(＝NH)O-)或者N-苯基三氟乙酰亚胺酯(CF3C(＝NPh)O-)或者乙硫基(SEt)或者苯硫基(SPh)或者对甲苯硫基(STol)或者乙硫基(SEt)或者二丁基膦酸基(-P(＝O)-(OBu)2)等；其端基位α或者β构型；其余取代基Rn参见式I。
步骤五，甘露糖糖砌块6的合成：
Figure BDA0001602297090000063
糖砌块6如式VI，取代基Rn参见式IV和式V。
步骤六，如式VII，一种与自闭症相关革兰氏阳性菌(Clostridium bolteae)表面荚膜多糖寡糖片段如二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、十糖的组装：利用糖砌块1，2，4，5，6，寡多糖的组装的反应步骤如下述步骤所示：
(1)以3摩尔的糖砌块1为糖基供体，以1摩尔的糖砌块2为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入
Figure BDA0001602297090000071
分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出1,4-α-连接的目标二糖片段3；
(2)以1摩尔的糖砌块4为糖基供体，以1.5摩尔的糖砌块5为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入活化好的
Figure BDA0001602297090000072
分子筛然后再用路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出1,3-β-连接的二糖砌块6；
(3)以1.5摩尔二糖砌块6为糖基供体，以1摩尔的糖砌块2为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出三糖片段7；选择性脱除R9，得到4号位为游离羟基的三糖8，以3摩尔的糖砌块1为糖基供体，以1摩尔的三糖砌块8为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入
Figure BDA0001602297090000075
分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出目标四糖片段9；
(4)以1.5摩尔二糖砌块6为糖基供体，以1摩尔的糖砌块8为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出五糖片段10；选择性脱除R9，得到4号位为游离羟基的五糖11，以3摩尔的糖砌块1为糖基供体，以1摩尔的五糖砌块11为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入
Figure BDA0001602297090000074
分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出目标六糖片段12；
(5)以1.5摩尔二糖砌块6为糖基供体，以1摩尔的糖砌块11为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出七糖片段13；选择性脱除R9，得到4号位为游离羟基的七糖14，以3摩尔的糖砌块1为糖基供体，以1摩尔的七糖砌块14为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入
Figure BDA0001602297090000073
分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出目标八糖片段15；
(6)以1.5摩尔二糖砌块6为糖基供体，以1摩尔的糖砌块14为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出九糖片段16，选择性脱除R9，得到4号位为游离羟基的九糖17，以3摩尔的糖砌块1为糖基供体，以1摩尔的七糖砌块17为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入
Figure BDA0001602297090000082
分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出目标十糖片段18；
(7)用上述类似的方法，以二糖砌块6为重复单元也可以合成更大的多糖如十二糖、十四糖、十六糖、十八糖等。
Figure BDA0001602297090000081
步骤七，一种与自闭症相关革兰氏阳性菌(Clostridium bolteae)表面荚膜寡糖片段如二糖、四糖、六糖、八糖、十糖的脱保护。
Figure BDA0001602297090000091
其中R为-(CH2)5-NH2，保护十糖在碱性条件下脱去酰基，经过硅胶柱纯化后，使用Pd/C，H2脱去反应3天脱去芳香基团，待芳香基团全脱保护后，用反相C18柱纯化，最后得到目标寡糖片段，如式VIII。
本发明的目的在于以廉价易得原料，提供一种步骤简单、省时、省力且成本低廉的、有可能用作医药的一种与自闭症相关革兰氏阳性菌(Clostridium bolteae)表面荚膜寡糖片段的合成方法。
附图说明
图1：糖砌块3的合成。反应条件:(a)(1)NaOAc,Ac2O,90℃,2h；(2)BF3·Et2O,TMSOTf,EtSH(86％,α:β＝5:1),DCM,0℃to r.t.,48h；(b)MeOH,NaOMe,r.t.,48h；(c)NaH,BnBr(85％over two steps),DMF,0℃to r.t.,7h.
图2：糖砌块4的合成。反应条件:(a)NaH,BnBr,DMF(99％),0℃to r.t.,7h；(b)H+resin,CH3COCH3,H2O,60℃,48h；(c)Py.,Ac2O,(85％,over two steps),0℃to r.t.,10h；(d)TolSH,DCM,BF3·Et2O(59％),0℃to r.t.,31h；(e)NaOMe,MeOH,r.t.,15h；(f)NPCH[OCH2CH(CH3)2]2,CH3CN,TsOH(87％,over two steps),r.t.,4h；(g)Cu(OTf)2,BH3·THF,BF3·Et2O(95％),0℃,6h；(h)TsCl,Py.(86％),r.t.,12h；(i)LiAlH4,THF(55％),r.t.,7h；(j)DCC,LevOH,DMAP,DCM,(98％),r.t.,3h.
图3：糖砌块5的合成。反应条件:(a)PhCH(OMe)2,p-TsOH,60℃,36h(59％)；(b)CH3C(OEt)3,p-TsOH,r.t.,3h；(c)80％AcOH,r.t.,1h(83％,over two steps).
图4：糖砌块6的合成。反应条件:(a)HO(CH2)5N(Bn)Cbz,NIS,TMSOTf,DCM 0℃,5h(96％,βonly)；(b)H2NNH2/HOAc,DCM/MeOH＝20:1,r.t.,3h(95％)；(c)(COCl)2,DMSO,Et3N,DCM,-78℃to r.t.,20h(91％)；(d)NaBH4,EtOH,0℃,7h(88％)；(e)Ac2O,Py,r.t.,12h(95％).；(f)DDQ,H2O,DCM,r.t.,10h(86％).
图5：二糖砌块30的合成。反应条件:(a)(1)NBS,THF/H2O,7h；(2)Cl3CCN,DBU,3h(78％,over two steps)；(b)TMSOTf,DCM,-40℃,4h(72％,βonly)；(c)H2NNH2/HOAc,5h(88％)；(b)(1)(COCl)2,DMSO,Et3N,DCM,-78℃,3h；(2)NaBH4,EtOH,0℃,5h；(3)Py.,AC2O,12h(88％).
图6：寡糖片段的合成。Reaction conditions:(a)NIS,TMSOTf,DCM,Et2O,0℃,8h(53-80％)；(b)(1)MeONa,THF/MeOH＝1:1,r.t.,12h；(2)80％AcOH,70℃,8h；(3)H2,Pd/C,DCM,t-Butanol,H2O,r.t.,48h(72％over three steps)；(c)NIS,TMSOTf,DCM,0℃,8h(50-72％)；(d)DDQ,H2O,DCM,r.t.,5h(50-70％).
具体实施方式
实验通用方法
实验所用干燥溶剂采用德国布劳恩公司生产的有机溶剂净化系统干燥和纯化得到。
1H NMR、13C NMR、1H-1H COSY、1H-13C HSQC均由Bruker AVANCEШ400型、AVANCE700MHz型、核磁共振仪测定，TMS为内标，25℃下测定，用单峰(s)、双峰(d)、三重峰(t)、四重峰(dd)、多重峰(m)等表示不同的峰型，化学位移(δ)单位记为ppm，耦合常数(J)单位记为Hz。
高分辨质谱由MALDI SYNAPT MS型质谱在正离子模式下测定，质谱由ThermoScientific TSQ Quantum Ultra质谱在正负离子全扫描模式下测定。红外谱图由NICOLETIS5型红外光谱仪，KBr压片法测定。柱层析和薄层层析(TLC)是由山东青岛海洋化工厂生产的200-300目的柱层析硅胶和薄层层析硅胶GF254型硅胶板，实验检测的显色方法采用5％(v/v)硫酸-乙醇溶液和紫外灯光显色。
实施例1糖砌块3的合成如图1：
具体试验操作和步骤：
化合物8：在氩气保护下，将商品化的D-甘露糖(40g，222mmol)，溶于醋酸酐(228mL)，加入醋酸钠(24g，288.6mmol)，80℃下搅拌两个小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，得到棕色糖浆，直接投下一步反应。将全乙酰化甘露糖溶于无水的二氯甲烷(1000mL)中，加入
Figure BDA0001602297090000101
分子筛，加入乙硫醇(25mL)，冷却到0℃，逐滴加入三氟化硼乙醚溶液(55mL)，冰浴下搅拌反应30分钟，升至室温搅拌反应32小时，随后补加0.5个当量的三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(TMSOTf)，TLC监测原料反应完全后，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入一层硅藻土，过滤除分子筛，旋蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→5:1)得到白色固体8(74.9g，191mmol，86％(2步反应总产率)，α:β＝5:1)。Rf＝0.57(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.35(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H,2-H),5.32～5.35(m,1H,4-H),5.30(d,J＝1.6Hz,1H,1-H),5.26(dd,J＝9.9,3.3Hz,1H,3-H),4.41(ddd,J＝9.4,5.3,2.2Hz,1H,5-H),4.33(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H,6-H),4.10(dd,J＝12.2,2.3Hz,1H,6'-H),2.65(m,2H,-CH2),2.00,2.06,2.10,2.18(4s,3H each,4OAc),1.31(t,J＝7.4Hz,3H,Me)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:171.1,170.4,170.2,170.282.7,71.6,69.9,69.3,66.7,62.8,25.9,21.4,21.2,21.2,21.1,15.2；IR(KBr)ν:2980,1744,1374,1251,712cm-1；HRMS ESI-TOF:[M+Na]+calcd for C16H24O9SNa 415.1039；found 415.1052.
化合物3：在氩气保护下，将化合物8(14g，35.6mmol)溶于甲醇(90mL)，加入催化量的甲醇钠，室温下反应2小时，TLC监测原料反应完全后，加入氢离子交换树脂调节pH至5～6，用滤纸过滤除树脂，旋蒸除溶剂，得到棕色糖浆，直接投到下一步反应。将所得糖浆溶于二甲基甲酰胺(120mL)，冷却到0℃，加入氢化钠(11.4g,284.8mmol)，逐滴加入溴化苄(26mL)，冰浴反应30分钟，升至室温反应7小时，TLC监测原料反应完全后，加入冰水终止反应，用二氯甲烷萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1→10:1)得到白色固体3(17.7g，30.3mmol，85％(2步反应总产率))。Rf＝0.63(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.63～7.01(m,20H,4Ph),5.40(d,J＝1.3Hz,1H,1-H),5.03～4.45(m,8H,4PhCH2),4.13(ddd,J＝9.9,4.8,1.9Hz,1H,5-H),4.03(td,J＝10.1,1.3Hz,1H,3-H),3.86～3.78(m,3H,2,6,6'-H),3.71(dd,J＝10.9,1.9Hz,1H,4-H),2.70～2.47(m,2H,SEt-CH2),1.24(t,J＝7.4Hz,3H,SEt-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:138.7,138.5,138.4,138.3,128.5,128.5,128.4,128.4,128.0,128.0,127.9,127.8,127.8,127.7,127.6,82.0,80.5,76.5,75.2,75.2,73.4,72.2,72.1,72.1,69.3,25.4,15.1.
实施例2糖砌块4的合成如图2：
具体试验操作和步骤：
化合物11：在氩气保护下，将商品化的二丙酮葡萄糖10(50g，191mmol)，溶于二甲基甲酰胺(490mL)，冷却到0℃，分多次加入氢化钠(15.4g,382mmol)，逐滴加入溴化苄(35mL)，冰浴反应30分钟，升至室温反应5小时，TLC监测原料反应完全后，加入冰水终止反应，用二氯甲烷萃取(3×250mL)，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，得到糖浆11(66.2g，189.1mmol，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.61～7.08(m,5H,Ph),5.90(d,J＝3.7Hz,1H,1-H),4.68(d,J＝11.8Hz,1H,PhCH),4.63(d,J＝11.8Hz,1H,PhCH),4.58(d,J＝3.7Hz,1H,2-H),4.37(dt,J＝7.7,6.1Hz,1H,5-H),4.15(dd,J＝7.8,3.2Hz,1H,6-H),4.11(dd,J＝9.1,6.7Hz,1H,6'-H),4.01(dd,J＝8.1,2.7Hz,1H,4-H),3.99(m,1H,3-H),1.49(s,3H,CH3),1.43(s,3H,CH3),1.37(s,3H,CH3),1.31(s,3H,CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:137.8,128.5,128.0,127.8,111.9,109.1,105.4,82.8,81.8,81.5,72.7,72.5,67.5,27.0,26.9,26.4,25.6.
化合物13：在氩气保护下，将化合物11(66.2g，189.1mmol)溶于丙酮(45mL)和去离子水(425mL)，Amberlite IR120氢离子交换树脂(85g)，加热到60℃，冷凝回流2天，TLC监测原料反应完全后，冷却至室温，用滤纸过滤除树脂，用甲醇冲洗树脂，加入饱和的碳酸氢钠溶液，调节溶液的pH至中性，旋蒸除溶剂，得到棕色糖浆，用甲苯溶解，旋蒸共沸除水，放到油泵上过夜抽真空，直接投到下一步反应。将所得糖浆溶于干燥的吡啶(425mL)，冷却到0℃，逐滴加入醋酸酐(80mL)，冰浴下反应30分钟，升至室温搅拌反应10小时，TLC监测原料反应完全后，旋蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取(3×200mL)，依次用1mmol·L-1盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1→2:1)得到棕色糖浆13(70.5g,160.7mmol，85％(2步反应总产率，α:β＝1:3)。Rf＝0.32(PE:EA＝7:3).α构型：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.36～7.19(m,5H,Ph),6.31(d,J＝3.6Hz,1H,1-H),5.16(t,J＝9.8Hz,1H,4-H),5.05(dd,J＝10.0,3.7Hz,1H,2-H),4.71(d,J＝11.8Hz,1H,Ph-CH),4.63(d,J＝11.8Hz,1H,Ph-CH),4.24～4.16(m,1H,6-H),4.09～3.92(m,3H,3,5,6'-H),2.16(s,3H,OAc),2.07(s,3H,OAc),1.99(s,3H,OAc),1.97(s,3H,OAc)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.6,170.5,169.5,169.2,168.7,137.9,128.4,127.7,127.4,89.4,76.9,74.8,71.5,70.2,69.1,69.1,61.8,20.8,20.7,20.6,20.5.
化合物14：在氩气保护下，将化合物13(70.5g，161mmol)和预先活化的
Figure BDA0001602297090000121
分子筛混合，加入无水二氯甲烷(610mL)，加入对甲基苯硫酚(30g，242mmol)，冷却至0℃，搅拌1小时，逐滴加入三氟化硼乙醚(70mL，484.6mmol)，升至室温搅拌反应30小时，TLC检测原料反应完全，冷却至0℃，加入三乙胺淬灭反应，用硅藻土过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1→10:1)得到白色固体14(52.6g,104.7mmol，65％)。Rf＝0.42(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45～6.91(m,9H,Ph),5.03(dt,J＝15.0,9.6Hz,2H,2,4-H),4.64～4.51(m,3H,4-H,Ph-CH2),4.16(t,J＝3.4Hz,2H,6,6'-H),3.71(t,J＝9.2Hz,1H,3-H),3.60(ddd,J＝9.9,5.0,3.1Hz,1H,5-H),2.33(d,J＝1.8Hz,3H,STol-CH3),2.07(s,3H,OAc),2.04(s,3H,OAc),1.95(s,3H,OAc)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.8,170.7,169.4,169.3,138.5,138.5,137.9,137.8,133.4,133.4,129.7,128.7,128.7,128.6,128.5,128.0,127.9,86.5,81.7,77.6,77.3,76.9,76.2,74.4,74.3,71.5,71.5,69.8,69.8,62.7,21.3,21.1,20.9,20.9,20.8.
化合物16：在氩气保护下，将化合物14(40.7g，81mmol)溶于甲醇(300mL)，加入催化量的甲醇钠，室温下反应15小时，待不溶物全部溶解变澄清溶液，TLC监测原料反应完全后，加入阳离子交换树脂调节pH至5～6，用滤纸过滤除树脂，旋蒸除溶剂，得到化合物15，不经过纯化，直接用于下一步反应，将化合物15溶于干燥的乙腈(450mL)中，加入2-(异丁甲氧基)-甲基萘(46g，162mmol)和对甲苯磺酸(769mg，4mmol)，室温下搅拌，溶液慢慢变澄清后，又迅速凝结成白色固体，室温下搅拌4小时，TLC监测原料反应完全后，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用二氯甲烷萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1→10:1)得到白色固体16(37.3g，70.5mmol，87％(2步反应总产率))。Rf＝0.39(PE:EA＝4:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.17～6.86(m,16H,Ph),5.72(s,1H,Np-CH),4.97(d,J＝11.6Hz,1H,Ph-CH),4.83(d,J＝11.6Hz,1H,Ph-CH),4.59(d,J＝9.7Hz,1H,1-H),4.44(dd,J＝10.5,5.0Hz,1H,6-H),3.85(t,J＝10.3Hz,1H,6'-H),3.71(dd,J＝7.1,4.5Hz,2H,3,4-H),3.53(ddt,J＝14.9,5.5,3.7Hz,2H,2,5-H),2.59(d,J＝2.2Hz,1H,2-OH),2.36(s,3H,STol-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:138.9,138.4,134.7,1340,133.8,133.0,130.0,128.6,128.5,128.2,128.2,128.0,127.8,127.4,126.6,126.3,125.6,123.8,101.6,88.8,81.8,81.4,77.4,75.0,72.4,70.9,68.9,21.3.
化合物17：在氩气保护下，将化合物16(20.3g，38.4mmol)溶于硼烷四氢呋喃溶液(425mL)，冷却至0℃，搅拌30分钟，加入三氟甲磺酸铜(4.1g，11.5mmol)和三氟化硼乙醚(0.5mL)，冰浴下搅拌反应6小时，TLC监测原料反应完全后，逐滴加入冰水，除去过量的硼烷，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用二氯甲烷萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝50:1→5:1)得到白色固体17(18.8g，36.5mmol，95％)。Rf＝0.27(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.13～7.05(m,16H,Ph),5.17～4.66(m,4H,Ph-CH2),4.51(d,J＝9.7Hz,1H,1-H),3.93(ddd,J＝12.0,5.9,2.5Hz,1H,6-H),3.74(ddd,J＝12.1,7.6,4.7Hz,1H,6'-H),3.65(t,J＝8.7Hz,1H,3-H),3.58(t,J＝9.2Hz,1H,4-H),3.47(ddd,J＝10.1,8.1,2.3Hz,2H,2,5-H),2.50(d,J＝2.2Hz,1H,2-OH),2.35(s,3H,STol-CH3),1.99(dd,J＝7.5,6.0Hz,1H,6-OH)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:138.8,138.6,135.5,133.7,133.4,133.2,130.0,128.6,128.4,128.1,128.1,127.9,127.8,127.7,126.9,126.3,126.1,126.0,88.5,85.9,79.8,77.5,75.5,75.3,73.0,62.4,21.3.
化合物18：在氩气保护下，将化合物17(3.9g，7.7mmol)溶于干燥的吡啶(40mL)，加多次入对甲基苯磺酰氯(2,9g，15.4mmol)，室温下搅拌反应12小时，TLC监测原料反应完全后，逐滴加入冰水，终止反应，用二氯甲烷萃取，依次用1mmol·L-1盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，收集有机相，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝50:1→8:1)得到糖浆18(4.5g，6.6mmol，85％)。Rf＝0.33(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.10～6.84(m,20H,Ph),5.05～4.55(m,4H,Ph-CH2),4.35(d,J＝9.6Hz,1H,1-H),4.29(dd,J＝10.6,1.9Hz,1H,6-H),4.14(dd,J＝10.6,4.6Hz,1H,6'-H),3.58(t,J＝8.6Hz,1H,3-H),3.53(ddd,J＝9.8,4.6,1.9Hz,1H,5-H),3.46(dd,J＝9.8,8.5Hz,1H,4-H),3.37(dd,J＝9.7,8.6Hz,1H,2'-H),2.33(d,J＝2.2Hz,6H,STol-CH3,Ts-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:145.0,138.8,138.4,135.1,133.9,133.4,133.2,132.9,130.0,129.9,128.7,128.4,128.1,128.1,128.0,127.8,127.1,127.0,126.3,126.2,126.0,88.1,85.7,77.4,76.9,76.5,75.5,75.3,72.4,68.6,21.7,21.3.
化合物19：在氩气保护下，将化合物18(2.9g，4.5mmol)溶于干燥的四氢呋喃(33mL)，加多次入氢化铝锂(837mg，22.5mmol)，室温下搅拌反应7小时，TLC监测原料反应完全后，逐滴加入冰水，终止反应，除去过量的氢化铝锂，用二氯甲烷萃取，依次用1mmol·L-1盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝50:1→10:1)得到白色固体18(1.3g,2.5mmol，55％)。Rf＝0.53(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.04～6.83(m,16H,Ph),5.10～4.69(m,4H,Ph-CH2),4.43(d,J＝9.7H·z,1H,1-H),3.59(t,J＝8.8Hz,1H,3-H),3.51～3.40(m,2H,2,5-H),3.20(t,J＝9.1Hz,1H,4-H),2.33(s,3H,STol-CH3),1.36(d,J＝6.1Hz,3H,6-H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:138.7,138.5,135.7,133.6,133.4,133.1,129.9,128.6,128.3,128.1,128.0,128.0,127.9,127.8,126.8,126.2,126.1,88.4,85.9,83.0,76.0,75.5,75.4,73.1,21.3,18.5.
化合物4：在氩气保护下，将化合物19(1.6g，3.3mmol)溶于干燥的二氯甲烷(17mL)，加二环己基碳二亚胺(867mg，4.2mmol)，乙酰丙酸(488mg，4.2mmol)，二甲基氨基吡啶(475mg，3.9mmol)，室温下搅拌反应3小时，TLC监测原料反应完全后，过滤除去不溶的白色固体，用二氯甲烷萃取，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝50:1→10:1)得到白色固体4(1.9g,3.2mmol，96％)。Rf＝0.53(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:7.77～6.79(m,16H,Ph),5.00～4.94(m,2H,2-H,Ph-CH2),4.83～4.68(m,3H,Ph-CH2),4.54(d,J＝10.1Hz,1H,1-H),3.68(t,J＝9.0Hz,1H,3-H),3.45(dq,J＝9.4,6.1Hz,1H,5-H),3.29(t,J＝9.2Hz,1H,4-H),2.73(td,J＝6.7,6.3,3.0Hz,2H,Lev-CH2),2.54(qt,J＝17.2,6.7Hz,2H,Lev-CH2),2.32(s,3H,STol-CH3),2.16(s,3H,Lev-CH3),1.35(d,J＝6.1Hz,3H,6-H)；13CNMR(101MHz,CDCl3)δ:206.2,171.5,138.3,138.2,135.5,133.3,133.1,129.7,129.2,128.5,128.3,128.0,128.0,127.8,127.8,126.9,126.2,126.1,126.1,86.4,84.3,83.2,75.9,75.5,75.3,72.7,38.0,30.0,28.3,21.3,18.3.
实施例3糖砌块5的合成如图3：
化合物20：在氩气保护下，将化合物8(11.3g，28.7mmol)溶于甲醇(250mL)，加入催化量的甲醇钠，室温下反应12小时，TLC监测原料反应完全后，加入阳离子交换树脂调节pH至5～6，用滤纸过滤除树脂，旋蒸除溶剂，得到棕色糖浆，直接投到下一步反应。将所得糖浆溶于二甲基甲酰胺(90mL)，在室温下搅拌，加入对甲苯磺酸(735mg，3.9mmol)，苯甲醛二甲缩醛(5mL，32.8mmol)，升温至60℃反应7小时，TLC监测原料反应完全后，加入三乙胺(5mL)终止反应，用二氯甲烷萃取(3×150mL)，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(3×150mL)，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1→1:1)得到白色固体20(5.3g，16.9mmol，59％(2步反应总产率))。Rf＝0.21(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.35～7.54(m,5H,Ph),5.32(s,1H,Ph-CH),5.32(d,J＝1.3Hz,1H,1-H),4.15(m,1H),4.18(m,1H),4.02(dd,J＝3.4,1.3Hz,1H,2-H),3.90(m,1H),3.99(m,1H),3.87(m,1H),2.68(m,2H,SEt-CH2),1.33(s,3H,SEt-CH3)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ:139.3,129.9,129.0127.5,103.4,87.3,80.4,74.3,70.0,69.6,65.7,26.0,15.4；IR(KBr)ν:3434,2937,1750,1224,1045cm-1；HRMS ESI-TOF:[M+Na]+calcd for C15H20O5SNa335.0929；found 335.1031.
化合物5：在氩气保护下，将化合物20(1.03g，3.3mmol)溶于无水二氯甲烷(22mL)，加入原乙酸三乙酯(6mL，32.9mmol)，对甲苯磺酸(113mg，0.6mmol)，室温下反应20分钟，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取(3×50mL)，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(3×50mL)，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，所得粗品不经过纯化，直接投下一步反应，加入80％的醋酸溶液(11mL)，室温下反应30分钟，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取(3×50mL)，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(3×50mL)，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1→4:1)得到糖浆5(971mg，2.7mmol，83％(2步反应总产率))。Rf＝0.61(PE:EA＝1:1).1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.56～7.34(m,5H,Ph),5.60(s,1H,Ph-CH),5.30(dd,J＝3.7,1.3Hz,1H,2-H),5.27(d,J＝1.3Hz,1H,1-H),4.29～4.23(m,2H,5,6-H),4.20～4.16(m,1H,3-H),3.94(t,J＝9.5Hz,1H,4-H),3.89～3.81(m,1H,6'-H),2.65(qq,J＝12.9,7.4Hz,2H,SEt-CH2),2.43(d,J＝4.0Hz,1H,3-OH),2.18(s,3H,OAc),1.30(t,J＝7.4Hz,3H,SEt-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.6,170.6,137.2,129.4,129.4,128.5,128.5,126.4,102.4,83.5,83.4,79.4,77.4,74.0,74.0,68.7,67.9,64.2,64.2,25.8,21.2,21.2,15.0；IR(KBr)ν:3451,1739,1229,902cm-1；HRMS ESI-TOF:[M+Na]+calcd for C17H22O6SNa 337.1035；found 337.1039.
实施例4糖砌块6的合成如图4：
具体试验操作和步骤：
化合物22：在氩气保护下，将化合物4(557mg，0.93mmol)和N-(苄基)-苄氧羰基-5-氨基-1-戊醇(700mg，2.14mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000161
分子筛，加入无水二氯甲烷(2mL)，加入碘代丁二酰亚胺(252mg，1.2mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(20μL)，冰浴下搅拌反应5小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→4:1)得到糖浆22(716g，0.89mmol，96％)。Rf＝0.28(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.18～6.82(m,22H,Ph),5.17(d,J＝3.6Hz,2H,Ph-CH2),4.99(d,J＝3.6Hz,1H,Ph-CH2),4.97(d,J＝1.9Hz,1H,2-H),4.86～4.67(m,3H,Ph-CH2),4.49(d,J＝6.1Hz,2H,Ph-CH2),4.31(d,J＝7.4Hz,1H,1-H),3.78(d,J＝12.3Hz,1H,linker-OCH2),3.66(t,J＝9.2Hz,1H,3-H),3.47～3.35(m,2H,5-H),3.31(t,J＝9.1Hz,1H,4-H),3.27～3.12(m,2H,linker-NCH2),2.77～2.57(m,2H,Lev-CH2),2.47(q,J＝7.0Hz,2H,Lev-CH2),2.11(s,3H,Lev-CH3),1.60～1.46(m,4H,linker-CH2),1.32(d,J＝6.1Hz,3H,6-H),1.28～1.10(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:206.2,171.5,156.8,156.3,138.4,138.1,136.9,135.5,133.4,133.1,128.6,128.6,128.5,128.4,128.3,128.3,128.0,128.0,127.9,127.9,127.8,127.4,127.3,126.9,126.2,126.1,100.8,83.5,82.9,77.4,75.5,75.1,74.0,71.5,69.5,67.2,50.6,50.3,47.2,46.3,37.9,30.0,29.3,28.1,27.5,23.2,18.0.
化合物23：在氩气保护下，将化合物22(716mg，0.89mmol)溶于二氯甲烷(4.8mL)，加入甲醇(0.3mL)，醋酸肼(140mg，1.5mmol)，室温下搅拌反应4小时，TLC检测原料反应完全，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→4:1)得到糖浆23(595mg，0.85mmol，95％)。Rf＝0.37(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.67～7.04(m,22H,Ph),5.20(d,J＝9.3Hz,2H,Ph-CH2),5.10～4.80(m,2H,Ph-CH2),4.86(dd,J＝25.0,11.2Hz,2H,Ph-CH2),4.51(d,J＝8.9Hz,2H,Ph-CH2),4.23(d,J＝8.4Hz,1H,1-H),4.00～3.75(m,1H,linker-OCH2),3.66～3.50(m,2H,2,3-H),3.50～3.35(m,2H,4-H,linker-OCH2),3.35～3.15(m,3H,5-H,linker-NCH2),1.67～1.18(m,9H,6-H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:156.9,156.4,138.9,138.0,136.9,135.8,133.4,133.1,128.6,128.6,128.3,128.1,128.0,128.0,127.9,127.8,127.4,126.8,126.2,126.1,126.0,102.8,84.5,83.3,77.4,75.5,75.2,71.6,70.0,69.8,67.3,50.6,50.4,47.2,46.2,34.1,29.3,28.0,27.5,25.1,23.4,18.2,0.1.
化合物24：在氩气保护下，将草酰氯(4.3mL，50mmol)溶于无水二氯甲烷(15mL)中，在零下78℃搅拌，在氩气保护下，将二甲亚砜(8.6mL，100mmol)溶于无水二氯甲烷(15mL)，逐滴加入，滴加完毕后零下78℃搅拌反应1小时，将糖砌块23(3.5g，5mmol)溶于无水二氯甲烷(14mL)中，在氩气保护下逐滴加入反应体系中，滴加完毕后零下78℃搅拌反应0.5小时，然后在氩气保护下逐滴加入三乙胺(14mL，100mmol)，慢慢出现白色固体，滴加完毕后，由-78℃缓慢升温至室温，搅拌反应12小时，TLC检测原料反应完全，用10％(w/w)的硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，用无水硫酸钠除水干燥，过滤旋干除溶剂，粗产品用硅胶柱层析纯化，(PE:EA＝20:1→3:1)得到产物24(3.2，4.6mmol，91％)。Rf＝0.37(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.85～7.07(m,22H,Ph),5.20～5.07(m,Ph-CH2),5.05～4.97(m,2H,Ph-CH2),4.76(d,J＝11.2Hz,2H,Ph-CH2),4.57(m,2H,Ph-CH2),4.17(d,J＝9.0Hz,1H,1-H),3.87～3.65(m,2H,linker-OCH2,5-H),3.56～3.45(m,2H,3,4-H),3.45～3.35(m,1H,linker-OCH2),3.28～3.10(m,2H,linker-NCH2),1.65～1.15(m,9H,6-H,linker-CH2).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ:200.2,197.5,156.8,156.3,138.0,137.5,137.2,136.9,135.3,135.1,133.3,133.3,133.2,128.6,128.6,128.6,128.6,128.4,128.3,128.3,128.2,128.2,128.1,128.0,128.0,127.9,127.9,127.8,127.4,127.3,127.1,126.9,126.3,126.3,126.2,126.2,126.1,125.9,99.3,85.9,85.4,82.0,77.4,76.8,75.4,73.6,72.7,72.5,72.3,72.1,69.5,67.3,50.6,50.3,47.2,46.2,29.3,28.0,27.5,23.3,19.1,18.2.
化合物25：将化合物24和甲苯共沸3次除水，在氩气保护下将24溶解于无水乙醇(40mL)中，降温至0℃下搅拌，加入硼氢化钠(253mg，6.7mmol)，0℃下搅拌反应30h，TLC检测原料反应完全，过滤掉不溶物，得用饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，用无水硫酸钠除水干燥，过滤旋干除溶剂，粗产品用硅胶柱层析纯化，(PE:EA＝10:1→4:1)得到糖浆25(2.8g，4.0mmol，88％)。Rf＝0.61(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.85～7.12(m,22H,Ph),5.17(m,2H,Ph-CH2),5.09(d,J＝11.1Hz,1H,Ph-CH2),4.82～4.65(m,3H,Ph-CH2),4.49(d,J＝5.8Hz,2H,Ph-CH2),4.34(d,J＝11.2Hz,1H,1-H),4.09(s,1H,2-H),3.83(d,J＝15Hz,1H,linker-OCH2),3.63～3.53(m,2H,3-H,4-H),3.43(d,J＝15Hz,1H,linker-OCH2),3.34(m,1H,5-H),3.30～3.15(m,2H,linker-NCH2),2.42(d,J＝26.4Hz,1H,2-OH),1.65～1.65(m,4H,linker-CH2),1.35(d,J＝6.2Hz,3H,6-H),1.32～1.29(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:156.8,156.3,152.6,138.0,138.0,137.0,136.0,133.4,133.1,128.6,128.6,128.5,128.5,128.4,128.2,128.0,128.0,127.9,127.8,127.8,127.5,127.4,126.9,126.8,126.4,126.3,126.2,126.0,125.9,102.3,101.0,99.7,99.3,81.6,81.3,79.8,77.4,75.6,71.6,71.4,69.6,69.4,69.2,68.9,68.6,67.3,66.7,50.6,50.4,47.2,46.3,29.5,29.3,28.0,27.6,23.4,22.4,18.1.
化合物26：在氩气保护下，将化合物25(2.8g，4mmol)溶于干燥的吡啶(20mL)，冷却到0℃，逐滴加入醋酸酐(1mL)，加入二甲基甲酰胺(DMAP)(96.8mg，0.8mmol)，冰浴下反应30分钟，升至室温搅拌反应10小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取(3×200mL)，依次用1mmol·L-1盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:1)得到棕色糖浆26(2.8g，3.8mmol，95％)。Rf＝0.52(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.85～7.05(m,22H,Ph),5.60(s,1H,2-H),5.17(d,J＝11.8Hz,2H,Ph-CH2),5.07(d,J＝11.0Hz,1H,Ph-CH2),4.77(d,J＝11.1Hz,2H,Ph-CH2),4.52(s,1H,1-H),4.51～4.40(m,3H,Ph-CH2),4.20～4.04(m,1H,linker-OCH2),3.79(ddd,J＝6.9,5.7,3.2Hz,1H,linker-OCH2),3.64(dd,J＝9.1,3.3Hz,1H,3-H),3.47(t,J＝9.2Hz,1H,4-H),3.39(dd,J＝9.4,5.9Hz,1H,5-H),3.30～3.08(m,2H,linker-NCH2),2.18(s,3H,OAc),1.54～1.42(m,4H,linker-CH2),1.39(d,J＝6.0Hz,3H,6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(176MHz,CDCl3)δ:207.1,170.8,170.4,156.9,156.3,138.1,138.0,137.8,137.0,136.9,135.9,135.1,133.4,133.3,133.2,133.2,133.1,129.8,128.7,128.7,128.6,128.4,128.4,128.4,128.3,128.3,128.3,128.1,128.1,128.0,128.0,128.0,127.9,127.8,127.8,127.1,126.9,126.7,126.4,126.2,126.2,126.1,126.0,125.8,98.9,98.4,97.1,81.1,80.3,79.9,75.6,74.9,73.9,73.0,72.9,72.4,72.2,71.9,71.8,71.6,69.6,69.3,69.0,68.4,67.3,50.6,50.3,47.3,46.3,37.2,32.1,31.1,30.2,29.9,29.6,29.5,29.3,28.0,27.6,23.3,22.8,21.3,21.1,18.3,18.2,18.1,14.3.
化合物6：在氩气保护下，将化合物26(2.7g，3.7mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，逐依次加入去离子水(10mL)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(1.2g，5.5mmol)，室温下搅拌反应10小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用10％(w/w)硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→7:3)得到棕色糖浆6(1.9g,3.2mmol，86％)。Rf＝0.18(PE:EA＝7:3).1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.42～7.12(m,15H,Ph),5.59(s,1H,2-H),5.18(d,J＝11.5Hz,2H,Ph-CH2),4.78(d,J＝11.1Hz,1H,Ph-CH2),4.52～4.42(m,3H,1-H,Ph-CH2),4.39(d,J＝11.1Hz,1H,Ph-CH2),3.91～3.70(m,1H,linker-OCH2),3.52(td,J＝9.3,2.2Hz,1H,4-H),3.48～3.40(m,1H,linker-OCH),3.38(dd,J＝9.2,3.1Hz,1H,3-H),3.33(dd,J＝9.2,6.1Hz,1H,5-H),3.30～3.15(m,2H,linker-NCH2),2.32(d,J＝2.2Hz,1H,2-OH),2.15(s,3H,OAc),1.62～1.45(m,4H,linker-CH2),1.38(d,J＝6.1Hz,3H,6-H),1.34～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.7,170.5,156.8,156.3,138.1,137.4,136.9,128.8,128.7,128.6,128.5,128.4,128.4,128.3,128.2,128.1,128.0,127.9,127.4,98.9,97.1,79.9,77.5,77.4,77.2,76.8,76.3,73.1,72.1,71.7,71.6,71.3,71.0,70.1,69.8,68.7,67.6,67.3,50.6,50.3,47.2,46.3,31.0,29.3,29.2,28.0,27.6,23.3,23.3,21.2,21.1,18.1,17.8.
实施例5二糖砌块30的合成如图5：
具体试验操作和步骤：
化合物28：将化合物4(100mg，0.17mmol)溶于四氢呋喃(1mL)，加入去离子水(1mL)，加入溴代丁二酰亚氨(72.6mg，0.41mmol)，室温下搅拌反应7小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用1mmol·L-1饱和碳酸氢钠溶液和10％(w/w)的硫代硫酸钠洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，旋蒸除溶剂，得到C-1号位是羟基的中间体，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1→1:1)，将得到的化合物溶于二氯甲烷(1.5mL)中，加入三氯乙腈(300μL)，在冰浴中加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(15μL)，然后室温下搅拌反应3小时，TLC监测原料反应完全后，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝100:1→10:1(加入1％三乙胺))，得到化合物27(84mg，0.13mmol，78％(2步反应总反应))。在氩气保护下，将化合物27(84mg，0.13mmol)和5(92mg，0.26mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000191
分子筛，溶于无水二氯甲烷(1.5mL)，零下40℃下搅拌15分钟，加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(3μL)，继续在零下40℃下搅拌反应4小时，TLC监测原料反应完全后，加入三乙胺(1mL)淬灭反应，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:1)，得到目标的二糖化合物28(77mg,0.09mmol,72％)。Rf＝0.39(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.16～6.87(m,17H,Ph),5.60(s,1H,Ph-CH),5.17(d,J＝1.5Hz,1H,Man1-H),5.17～5.15(m,1H,Man2-H),4.97(dd,J＝9.2,7.6Hz,1H,Rha2-H),4.92～4.60(m,4H,Ph-CH2),4.47(d,J＝7.7Hz,1H,Rha1-H),4.20～4.14(m,2H,Man4-H,Man6-H),4.10～4.03(m,2H,Man3-H,Man4-H),3.87～3.79(m,1H,Man6'-H),3.58(t,J＝9.0Hz,1H,Rha3-H),3.41～3.33(m,1H,Rha5-H),3.29(t,J＝9.1Hz,1H,Rha4-H),2.74～2.43(m,6H,Lev-CH2,SEt-CH2),2.11(m,6H,Lev-CH3,OAc),1.29～1.22(m,3H,SEt-CH3)1.21(t,J＝6.4Hz,3H,Rha6-H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:206.5,171.4,171.4,170.4,138.3,138.2,138.1,137.5,137.5,137.3,135.7,135.5,134.3,134.1,133.4,133.1,132.2,132.0,130.3,129.0,129.0,128.8,128.5,128.5,128.4,128.4,128.3,128.2,128.1,128.1,128.1,128.0,127.8,127.8,127.8,127.7,127.6,127.4,127.3,127.0,126.9,126.8,126.7,126.6,126.5,126.4,126.3,126.3,126.2,126.1,125.8,122.9,122.7,101.7,101.6,101.5,83.6,83.5,83.4,83.2,82.9,82.9,82.9,77.8,77.4,76.1,76.0,75.5,75.3,75.2,75.0,75.0,74.9,74.1,72.8,72.8,71.8,71.7,71.7,68.5,64.9,38.0,30.0,28.2,25.7,21.1,18.0,18.0,18.0,17.9,15.1.
化合物29：在氩气保护下，将化合物29(3.5g，4.2mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，加入甲醇(6mL)，醋酸肼(581mg，6.3mmol)，室温下搅拌反应7小时，TLC检测原料反应完全，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→4:1)得到糖浆23(2.8g，3.9mmol，95％)。Rf＝0.38(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.90～7.20(m,17H,Ph),5.67(s,1H,Ph-CH),5.46(dd,J＝3.2,1.5Hz,1H,Man2-H),5.27(d,J＝1.3Hz,1H,Man1-H),5.14～4.92(m,2H,Ph-CH2),4.85～4.73(m,2H,Ph-CH2),4.40(td,J＝6.2,2.6Hz,1H,Rha1-H),4.34～4.21(m,3H,Man3-H,Man5-H,Man6-H),4.09(td,J＝9.6,3.0Hz,1H,Man4-H),3.90(m,1H,Man6'-H),3.66(d,J＝2.2Hz,1H,Rha2-OH),3.64～3.56(m,2H,Rha2-H,Rha3-H),3.47(dt,J＝9.1,6.1Hz,1H,Rha5-H),3.33～3.18(m,1H,Rha4-H),2.65(m,3H,SEt-CH2),2.21(s,3H,OAc),1.37～1.25(m,6H,SEt-CH3,Rha6-H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:171.4,138.9,138.8,137.7,137.2,137.2,136.2,134.4,134.1,132.3,132.0,130.3,129.2,128.7,128.5,128.5,128.4,128.2,128.2,128.2,128.2,128.1,127.8,127.8,127.7,127.7,127.7,127.6,127.5,127.4,127.3,126.9,126.8,126.6,126.5,126.3,126.3,126.2,126.2,126.0,125.9,123.0,122.5,104.8,104.7,101.8,84.2,84.2,84.1,83.6,83.3,83.2,82.9,77.6,77.4,75.8,75.7,75.5,75.4,75.3,75.3,75.2,75.2,74.4,73.9,73.9,72.0,72.0,68.6,65.0,25.6,21.4,18.3,18.3,18.2,18.2,15.0.
化合物30：在氩气保护下，将草酰氯(1mL，11mmol)溶于无水二氯甲烷(13mL)中，在零下78℃搅拌，在氩气保护下，将二甲亚砜(1.7mL，22mmol)溶于无水二氯甲烷(4.5mL)，逐滴加入，滴加完毕后零下78℃搅拌反应1小时，将糖砌块30(1.6g，2.2mmol)溶于无水二氯甲烷(14mL)中，在氩气保护下逐滴加入反应体系中，滴加完毕后零下78℃搅拌反应0.5小时，然后在氩气保护下逐滴加入三乙胺(3.1mL，22mmol)，慢慢出现白色固体，滴加完毕后，在零下78℃，搅拌反应3小时，TLC检测原料反应完全，二氯甲烷萃取，用10％(w/w)的硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，用无水硫酸钠除水干燥，过滤，旋干除溶剂，不经分离纯化直接投入下一步反应，将粗品与甲苯共沸3次除水，在氩气保护下，溶解于无水乙醇(16mL)中，降温至0℃下，加入硼氢化钠(125mg，3.3mmol)，0℃下搅拌反应30h，TLC检测原料反应完全，过滤掉不溶物，得用饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，用无水硫酸钠除水干燥，过滤旋干除溶剂，粗产品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1→4:1)得到糖浆，将产物溶于干燥的吡啶(11mL)，冷却到0℃，逐滴加入醋酸酐(1mL)，加入二甲基甲酰胺(DMAP)(54mg，0.44mmol)，冰浴下反应30分钟，升至室温搅拌反应10小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，依次用1mmol·L-1盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:1)得到棕色糖浆31(1.5g，1.9mmol，88％)。Rf＝0.38(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35～7.20(m,17H,Ph),5.59(d,J＝1.8Hz,1H,Ph-CH),5.52(d,J＝2.8Hz,1H,Rha2-H),5.39(dt,J＝3.7,2.0Hz,1H,Man2-H),5.24(d,J＝1.5Hz,1H,Man1-H),5.23～4.68(m,4H,Rha1-H,Ph-CH2),4.47(dd,J＝13.7,11.1Hz,1H,Ph-CH2),4.33～4.18(m,3H,Man3-H,Man5-H,Man6-H),4.04(t,J＝9.7Hz,1H,Man4-H),3.92～3.83(m,1H,Man6'-H),3.63(ddd,J＝8.9,5.3,3.3Hz,1H,Rha3-H),3.53～3.42(m,1H,Rha4-H),3.37(m,1H,Rha5-H),2.74～2.50(m,2H,SEt-CH2),2.19(s,3H,OAc),2.07(s,3H,OAc),1.39～1.36(m,3H,Rha6-H),1.30(td,J＝7.4,0.9Hz,3H,SEt-CH3)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.8,170.4,170.4,137.9,137.8,137.8,137.7,137.6,136.3,136.0,134.3,134.1,133.4,133.1,132.3,132.0,130.3,130.0,129.1,128.7,128.6,128.5,128.5,128.4,128.3,128.3,128.3,128.2,128.2,128.0,127.9,127.9,127.8,127.8,127.7,127.5,127.4,127.3,127.1,127.0,126.8,126.8,126.6,126.6,126.5,126.3,126.2,126.0,125.9,123.0,122.6,101.8,96.7,96.7,96.7,83.6,80.2,80.2,80.1,80.0,79.9,79.8,79.7,78.1,78.0,77.4,75.5,75.3,75.2,74.9,72.2,72.2,72.1,71.6,71.6,71.5,71.3,71.2,68.7,68.0,67.9,67.9,64.7,31.0,25.7,21.2,21.1,21.1,18.2,18.1,18.1,15.0.
实施例6寡糖片段的合成如图6：
具体试验操作和步骤：
化合物31：在氩气保护下，将化合物3(86.6mg，0.15mmol)和化合物6(59.8mg，0.1mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000211
分子筛，加入无水二氯甲烷(1mL)和无水乙醚(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(26.7mg，0.12mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(3.6μL)，冰浴下搅拌反应5小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→4:1)得到糖浆31(89.5mg，0.08mmol，80％)。Rf＝0.44(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.40～7.10(m,35H,Ph),5.58(s,1H,Rha2-H),5.31(d,J＝2.0Hz,1H,Man1-H),5.20～5.11(m,2H,Ph-CH2),4.87～4.35(m,10H,R1-H,Ph-CH2),4.30～4.16(m,3H,Ph-CH2),4.01(t,J＝9.5Hz,1H,Man5-H),3.90～3.73(m,4H,Man3-H,Man4-H,Man6-H),3.71～3.62(m,3H,Man2-H,Rha4-H,linker-OCH),3.47(dd,J＝9.3,2.9Hz,1H,Rha3-H),3.40(d,J＝18.3Hz,1H,linker-OCH),3.31(dd,J＝9.2,6.1Hz,1H,Rha4-H),3.22(d,J＝23.8Hz,2H,linker-NCH2),2.15(s,3H,OAc),1.53(s,4H,linker-CH2),1.39(d,J＝6.1Hz,3H,Rha6-H),1.32～1.19(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.6,156.8,156.3,138.9,138.8,138.5,138.5,138.1,137.5,137.0,128.6,128.5,128.5,128.4,128.4,128.3,128.2,128.2,128.1,128.0,127.9,127.9,127.9,127.8,127.8,127.7,127.6,127.6,127.5,127.4,127.2,100.3,100.0,98.7,98.4,95.4,80.7,80.2,79.9,78.7,77.4,76.4,76.1,75.2,74.9,74.6,74.5,74.2,73.5,72.9,72.5,72.1,72.0,71.5,71.4,71.1,69.8,69.3,69.1,67.6,67.3,65.1,50.6,50.3,47.2,46.3,29.8,29.2,28.0,27.6,23.3,21.1,21.0,18.6.
化合物32：在氩气保护下，将化合物30(286.6mg，0.37mmol)和化合物6(187.2mg，0.31mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000221
分子筛，加入无水二氯甲烷(5mL)，加入碘代丁二酰亚胺(104.6mg，0.47mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(12μL)，冰浴下搅拌反应6小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:1)得到糖浆32(257.1mg，0.20mmol，63％)。Rf＝0.21(PE:EA＝7:3).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35～7.12(m,32H,Ph),5.60(s,1H,Rha2c-H),5.57(s,1H,Ph-CH),5.52(d,J＝2.9Hz,1H,Rha2a-H),5.42(td,J＝3.2,1.5Hz,1H,Man2-H),5.30(d,J＝1.5Hz,1H,Man1-H),5.25～4.65(m,8H,Rha1a-H,Ph-CH2),4.55～4.35(m,4H,Rha1c-H,Ph-CH2),4.24～4.15(m,2H,Man3-H,Man6-H),3.99～3.88(m,2H,Man4-H,linker-OCH),3.80(t,J＝9.7Hz,2H,Man5-H,Man6'-H),3.70～3.55(m,3H,Rha3a-H,Rha3c-H,linker-OCH),3.53～3.30(m,4H,Rha4a-H,Rha4c-H,Rha5a-H,Rha5c-H,),3.30～3.13(m,2H,linker-NCH2),2.12(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.37(m,6H,Rha6a-H,Rha6c-H),1.36～1.17(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.9,170.8,170.6,170.5,170.0,170.0,156.8,156.3,138.1,137.9,137.8,137.7,137.6,137.5,137.0,136.2,136.0,134.3,134.1,133.4,133.1,132.3,130.3,130.0,129.0,129.0,128.8,128.8,128.7,128.7,128.6,128.5,128.5,128.5,128.4,128.3,128.3,128.2,128.2,128.1,128.1,128.0,128.0,127.9,127.9,127.8,127.8,127.7,127.5,127.5,127.4,127.3,127.0,126.8,126.8,126.7,126.6,126.3,126.2,126.0,125.9,122.9,122.7,101.5,100.2,98.8,98.4,96.6,96.5,80.2,80.1,80.0,79.8,79.7,78.3,77.4,75.7,75.5,75.2,73.2,72.1,72.0,72.0,71.9,71.4,71.3,71.2,70.9,70.9,69.8,69.1,69.1,68.6,68.0,67.9,67.6,67.3,64.8,50.6,50.4,47.2,46.3,29.4,29.2,28.0,27.6,23.3,21.1,21.1,21.1,21.0,20.9,18.7,18.2,18.2,18.2,17.8.
化合物33：在氩气保护下，将化合物32(61.7mg，0.047mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，逐依次加入去离子水(0.5mL)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(15.7mg，0.07mmol)，室温下搅拌反应5小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用10％(w/w)硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→1:1)得到棕色糖浆33(38.5mg,0.033mmol，70％)。Rf＝0.21(PE:EA＝3:2).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.58～7.12(m,25H,Ph),5.61(d,J＝3.1Hz,1H,Rha2c-H),5.58(s,1H,Ph-CH),5.49(d,J＝3.1Hz,1H,Rha2a-H),5.42(dd,J＝3.6,1.2Hz,1H,Man2-H),5.31(d,J＝1.5Hz,1H,Man1-H),5.25～4.65(m,5H,Rha1a-H,Ph-CH2),4.55～4.35(m,5H,Rha1c-H,Ph-CH2),4.24～4.10(m,2H,Man3-H,Man6-H),3.99～3.88(m,2H,Man4-H,linker-OCH),3.85～3.77(m,2H,Man5-H,Man6'-H),3.68～3.55(m,2H,Rha3c-H,linker-OCH),3.55～3.30(m,4H,,Rha3c-H,Rha4a-H,Rha4c-H,Rha5a-H),3.30～3.13(m,3H,Rha5c-H,linker-NCH2),2.25(d,J＝2.2Hz,1H,Rha4a-OH),2.13(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.06(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.41(d,J＝6.1Hz,1H,Rha6a-H),1.35(d,J＝6.1Hz,1H,Rha6c-H),1.33～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.8,170.6,170.0,156.3,138.1,137.6,137.5,137.0,129.0,128.9,128.7,128.7,128.6,128.5,128.4,128.2,128.1,128.0,128.0,127.4,126.2,101.5,100.2,98.8,96.6,80.1,79.7,77.6,77.4,72.3,72.0,71.5,71.2,71.1,70.9,69.8,69.1,68.6,67.7,67.3,67.2,64.8,50.6,50.4,47.3,46.3,29.3,28.0,27.6,23.3,21.1,21.0,21.0,18.7,17.8.
化合物34：在氩气保护下，将化合物33(38.5mg，0.033mmol)和化合物3(28.7mg，0.049mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000231
分子筛，加入无水二氯甲烷(1mL)和无水乙醚(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(8.9mg，0.04mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(1.2μL)，冰浴下搅拌反应5小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→7:3)得到糖浆34(29.5mg，0.017mmol，53％)。Rf＝0.43(PE:EA＝3:2).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.58～7.05(m,45H,Ph),5.62(s,1H,Rha2d-H),5.58(s,1H,Ph-CH),5.49(d,J＝3.1Hz,1H,Rha2b-H),5.42(dd,J＝3.6,1.2Hz,1H,Man2c-H),5.31(d,J＝1.5Hz,1H,Man1a-H,Man1c-H),5.25～4.10(m,20H,Rha1b-H,Rha1d-H,Ph-CH2),4.30～4.10(m,6H,Man3c-H,Man6c-H),4.05～3.76(m,10H),3.75～3.58(m,7H),3.52～3.35(m,3H,Rha5b-H),3.32～3.15(m,4H,Rha5d-H,linker-NCH2),2.14(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.07(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.42(d,J＝6.1Hz,3H,Rha6b-H),1.37(d,J＝6.1Hz,3H,Rha6d-H),1.34～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ:207.0,192.5,170.8,170.6,170.6,170.2,170.1,170.0,156.3,138.9,138.8,138.8,138.8,138.6,138.5,138.5,138.4,138.1,137.5,137.3,137.0,134.6,129.9,129.1,129.0,128.7,128.7,128.6,128.5,128.5,128.4,128.4,128.3,128.3,128.2,128.1,128.1,128.0,127.9,127.9,127.8,127.8,127.8,127.7,127.7,127.6,127.5,127.3,127.2,126.3,126.1,101.4,100.2,100.1,100.0,99.5,98.7,96.9,96.2,80.4,80.2,80.2,80.1,79.9,78.7,78.4,77.9,77.6,77.4,77.2,77.2,76.9,76.0,75.3,75.0,73.5,73.0,72.9,72.6,72.1,72.1,72.0,71.8,71.6,71.5,71.2,71.1,71.0,70.9,70.8,69.8,69.4,69.4,68.9,68.6,68.6,67.6,67.3,67.2,67.2,66.2,64.8,62.6,50.6,50.3,47.2,46.3,31.1,29.2,28.1,28.0,27.6,23.3,21.1,21.0,21.0,20.7,18.9,18.7,18.6,18.5.
化合物35：在氩气保护下，将化合物30(488.6mg，0.63mmol)和化合物33(619.7mg，0.53mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000241
分子筛，加入无水二氯甲烷(10mL)，加入碘代丁二酰亚胺(179mg，0.8mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(23.6μL)，冰浴下搅拌反应5小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→7:3)得到糖浆35(720.2mg，0.38mmol，72％)。Rf＝0.44(PE:EA＝3:2).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35～7.05(m,42H,Ph),5.60(s,1H,Rha2e-H),5.58(s,1H,Ph-CH),5.56(s,1H,Ph-CH),5.52(d,J＝2.2Hz,1H,Rha2a-H),5.48(d,J＝2.6Hz,1H,Rha2c-H),5.41(dd,J＝3.8,1.9Hz,2H,Man2b-H,Man2d-H),5.28(d,J＝2.0Hz,2H,Man1b-H,Man1d-H),5.25～4.62(m,9H,Rha1a-H,Rha1c-H,Ph-CH2),4.56～4.34(m,6H,,Rha1e-H,Ph-CH2),4.26～4.12(m,4H,Man3b-H,Man3d-H,Man6b-H,Man6d-H),3.99～3.85(m,4H,Man4b-H,Man4d-H,linker-OCH2),3.84～3.72(m,3H),3.70～3.34(m,9H),3.31(dd,J＝7.9,6.2Hz),3.28～3.12(m,2H,linker-NCH2),2.12(s,3H,OAc),2.10(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,9H,Rha6-H),1.34～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:177.1,170.9,170.7,170.6,170.1,170.0,138.1,137.9,137.7,137.5,137.5,137.0,137.0,136.2,136.0,134.1,133.4,133.1,132.3,132.0,130.3,129.1,129.0,128.9,128.7,128.6,128.6,128.5,128.3,128.3,128.3,128.2,128.2,128.1,128.0,128.0,127.9,127.8,127.8,127.7,127.5,127.4,127.3,126.9,126.8,126.7,126.6,126.2,126.2,126.0,125.8,122.9,122.6,101.6,101.5,100.3,100.2,100.1,98.8,96.4,96.3,96.1,80.2,80.2,80.0,79.7,79.5,77.7,77.4,77.3,75.5,75.3,75.2,72.1,72.0,71.9,71.5,71.4,71.2,71.0,70.9,70.9,69.8,69.1,68.8,68.6,68.0,67.9,67.6,67.3,64.8,50.6,50.4,47.2,46.3,29.7,29.2,28.0,27.6,23.3,21.1,21.1,21.0,21.0,20.9,18.7,18.7,18.2,18.2,18.2.
化合物36：在氩气保护下，将化合物35(45.4mg，0.024mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，逐依次加入去离子水(0.5mL)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(8mg，0.036mmol)，室温下搅拌反应10小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用10％(w/w)硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→1:1)得到棕色糖浆33(20.2mg，0.012mmol，50％)。Rf＝0.22(PE:EA＝3:2).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.53～7.10(m,35H,Ph),5.61(s,1H,Rha2e-H),5.57(s,1H,Ph-CH),5.56(s,1H,Ph-CH),5.49(d,J＝3.6Hz,2H,Rha2a-H,Rha2c-H),5.40(dd,J＝3.6,1.6Hz,2H,Man2b-H,Man2d-H),5.29(d,J＝1.6Hz,1H,Man1d-H),5.28(d,J＝1.6Hz,1H,Man1b-H),5.17(d,J＝10.8Hz,2H,Ph-CH2),4.78～4.62(m,5H,Rha1a-H,Rha1c-H,Ph-CH2),4.53～4.33(m,7H,Rha1e-H,Ph-CH2),4.26～4.12(m,4H,Man3b-H,Man3d-H,Man6b-H,Man6d-H),3.99～3.85(m,4H,Man4b-H,Man4d-H,linker-OCH2),3.84～3.72(m,3H),3.70～3.34(m,12H),3.35～3.12(m,4H,,Rha5-H,linker-NCH2),2.12(s,3H,OAc),2.10(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.06(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.41(d,J＝6.1Hz,3H,Rha6e-H),1.36(d,J＝6.1Hz,6H,Rha6a-H,Rha6c-H),1.34～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:170.8,170.7,170.7,170.6,170.6,170.2,170.1,170.1,138.1,137.5,137.4,137.0,137.0,129.1,129.0,128.9,128.9,128.7,128.7,128.6,128.6,128.4,128.4,128.3,128.1,128.0,128.0,127.4,126.2,126.2,101.6,101.5,100.3,100.2,98.8,96.4,96.1,80.2,79.7,79.5,77.7,77.6,77.4,72.4,71.9,71.5,71.2,71.0,70.9,70.9,69.8,69.0,68.8,68.6,67.6,67.3,67.3,67.2,64.8,50.6,50.4,47.2,46.3,29.3,28.0,27.6,23.3,21.1,21.0,21.0,21.0,20.9,18.7,18.7,17.8.
化合物37：在氩气保护下，将化合物36(20.2mg，0.012mmol)和化合物3(33.8mg，0.058mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000251
分子筛，加入无水二氯甲烷(1mL)和无水乙醚(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(13.5mg，0.06mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(0.5μL)，冰浴下搅拌反应8小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→2:1)得到糖浆37(21.1mg，0.009mmol，78％)。Rf＝0.32(PE:EA＝3:2).1H NMR(700MHz,CDCl3)δ:7.53～7.10(m,55H,Ph),5.60(s,1H,Rha2f-H),5.57(s,1H,Ph-CH),5.56(s,1H,Ph-CH),5.48(d,J＝3.2Hz,2H,Rha2b-H,Rha2d-H),5.40(d,J＝3.8Hz,2H,Man2c-H,Man2e-H),5.30(d,J＝2.1Hz,1H,Man1e-H),5.29(d,J＝1.4Hz,1H,Man1c-H),5.27(d,J＝1.5Hz,1H,Man1a-H),5.17(d,J＝11.2Hz,2H,Ph-CH2),4.84(d,J＝10.6Hz,1H,Ph-CH2),4.75～4.58(m,10H),4.55～4.35(m,8H),4.30～4.10(m,9H),4.00(d,J＝9.5Hz,1H),3.95～3.75(m,12H),3.73～3.55(m,9H),3.51～3.35(m,4H),3.32～3.20(m,4H),3.19(s,1H,linker-NCH2),2.12(s,3H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.08(s,3H,OAc),2.06(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.45～1.33(m,9H,Rha6-H),1.34～1.20(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(176MHz,CDCl3)δ:170.6,170.5,170.0,138.7,138.4,137.4,136.9,128.9,128.7,128.6,128.5,128.5,128.4,128.4,128.3,128.2,128.2,128.1,128.0,127.9,127.8,127.7,127.7,127.6,127.4,127.1,126.1,126.0,101.5,101.3,100.1,99.8,98.6,95.9,80.1,79.8,78.5,77.2,77.0,76.8,75.9,75.2,74.8,73.4,72.8,72.0,71.8,71.6,71.3,71.1,70.9,70.8,70.7,69.3,68.8,68.7,68.4,67.5,67.1,64.6,53.4,31.6,29.1,29.1,23.2,22.7,21.0,20.9,20.9,20.8,18.6,18.5,18.5,14.2,14.1,11.4.
化合物38：在氩气保护下，将化合物30(119.1mg，0.15mmol)和化合物36(134.6mg，0.077mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000261
分子筛，加入无水二氯甲烷(5mL)，加入碘代丁二酰亚胺(39.8mg，0.18mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(5μL)，冰浴下搅拌反应10小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→2:1)得到糖浆38(127.6mg，0.052mmol，67％)。Rf＝0.58(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35～7.10(m,52H,Ph),5.60(s,1H,Rha2g-H),5.58(s,1H,Ph-CH),5.56(s,2H,Ph-CH),5.53(d,J＝2.9Hz,1H,Rha2a-H),5.49(d,J＝2.4Hz,2H,Rha2c-H,Rha2e-H),5.40(m,3H,Man2-H),5.29(d,J＝1.5Hz,2H,Man1d-H,Man1f-H),5.27(d,J＝1.5Hz,1H,Man1b-H),5.18(m,2H,Ph-CH2),4.80～4.62(m,7H,Rha1a-H,Rha1c-H,Rha1e-H,Ph-CH2),4.55～4.33(m,7H,Rha1g-H,Ph-CH2),4.28～4.18(m,6H,Man3-H,Man6-H),4.05～3.85(m,6H,Man4-H,linker-OCH2),3.84～3.73(m,6H),3.70～3.55(m,8H),3.55～3.12(m,10H,,Rha5-H,linker-NCH2),2.13～2.00(m,21H,7OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,12H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:177.2,170.9,170.7,170.6,170.1,170.1,170.1,138.1,137.9,137.8,137.7,137.5,137.5,137.1,137.0,136.2,136.0,134.3,134.1,133.4,133.1,132.3,131.0,130.3,129.1,129.0,129.0,128.9,128.8,128.6,128.6,128.5,128.5,128.3,128.3,128.3,128.3,128.2,128.2,128.1,128.0,127.9,127.9,127.8,127.7,127.5,127.4,127.3,126.9,126.8,126.6,126.6,126.2,126.2,126.0,125.8,122.9,122.6,101.6,101.6,100.2,98.8,96.4,96.3,96.0,95.9,93.7,80.2,80.2,80.1,80.0,79.7,79.7,79.5,77.8,77.6,77.4,75.5,75.2,72.1,72.0,71.9,71.8,71.4,71.3,71.2,71.0,70.9,69.8,69.0,68.8,68.7,68.6,68.0,67.9,67.6,67.3,65.7,64.7,50.4,47.2,46.3,30.7,29.7,29.3,28.0,23.3,21.1,21.0,20.9,19.3,18.7,18.7,18.6,18.2,18.1,13.8.
化合物39：在氩气保护下，将化合物38(127.6mg，0.052mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，逐依次加入去离子水(0.5mL)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(17.4mg，0.078mmol)，室温下搅拌反应9小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用10％(w/w)硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:2)得到棕色糖浆39(78.5mg，0.034mmol，65％)。Rf＝0.42(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.53～7.12(m,45H,Ph),5.60(s,1H,Rha2g-H),5.58(s,1H,Ph-CH),5.57(s,1H,Ph-CH),5.56(s,1H,Ph-CH),5.49(m,3H,Rha2-H),5.43～5.38(m,3H,Man2-H),5.31～5.25(m,3H,Man1-H),5.21～5.12(m,2H,Ph-CH2),4.78～4.62(m,7H,Rha1-H,Ph-CH2),4.53～4.34(m,7H,Rha1g-H,Ph-CH2),4.26～4.13(m,6H,Man3-H,Man6-H),4.05～3.86(m,6H,Man4-H,linker-OCH2),3.85～3.73(m,5H,Man5-H),3.68～3.55(m,6H,Rha3-H),3.55～3.12(m,10H,Rha5-H,linker-NCH2),2.27(d,J＝2.1Hz,1H,Rha4a-OH),2.12(s,3H,OAc),2.10(s,6H,OAc),2.09(s,3H,OAc),2.06(s,3H,OAc),2.04(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,12H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:
化合物40：在氩气保护下，将化合物39(16.1mg，0.007mmol)和化合物3(20.3mg，0.035mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000271
分子筛，加入无水二氯甲烷(1mL)和无水乙醚(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(7.9mg，0.035mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(0.3μL)，冰浴下搅拌反应8小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:2)得到糖浆40(13.8mg，0.005mmol，69％)。Rf＝0.65(PE:EA＝1:1).1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:8.35～7.10(m,65H,Ph),5.60(s,1H,Rha2h-H),5.57(s,1H,Ph-CH),5.57(s,1H,Ph-CH),5.56(s,1H,Ph-CH),5.48(m,3H,Rha2-H),5.43～5.37(m,3H,Man2-H),5.30(d,J＝1.9Hz,1H,Man1-H),5.29(d,J＝1.4Hz,1H,Man1-H),5.26(d,J＝1.5Hz,1H,Man1-H),5.17(d,J＝20.03Hz,3H,Ph-CH2),4.90～4.10(m,33H,Rha1-H,Ph-CH2),4.05～3.57(m,26H),3.50～3.10(m,10H,Rha5-H,linker-NCH2),2.12(s,3H,OAc),2.10(s,6H,OAc),2.09(s,6H,OAc),2.07(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),2.03(s,3H,OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,12H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ:192.5,170.8,170.7,170.6,170.1,170.1,170.1,138.9,138.9,138.6,138.6,138.1,137.5,137.5,137.1,137.0,134.6,129.9,129.1,129.1,129.0,129.0,128.9,128.8,128.8,128.7,128.7,128.6,128.6,128.5,128.5,128.4,128.4,128.3,128.3,128.2,128.1,128.1,128.1,128.0,128.0,127.8,127.8,127.7,127.7,127.5,127.5,127.3,127.2,126.2,126.2,126.1,101.6,101.5,101.4,100.4,100.3,100.2,100.0,98.8,96.1,96.0,95.9,80.3,80.2,79.9,79.7,79.6,78.7,77.8,77.7,76.1,75.3,75.0,73.6,73.0,72.1,72.0,71.8,71.7,71.5,71.2,71.0,70.9,70.9,70.9,69.4,69.0,68.8,68.8,68.6,68.6,67.6,67.3,64.7,64.7,64.7,50.7,50.3,47.2,46.3,29.3,28.0,27.6,23.3,21.1,21.1,21.0,21.0,21.0,18.9,18.7,18.7,18.7,18.7.
化合物41：在氩气保护下，将化合物30(52.4mg，0.068mmol)和化合物39(78.5mg，0.034mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000281
分子筛，加入无水二氯甲烷(2mL)，加入碘代丁二酰亚胺(17.6mg，0.078mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(1.2μL)，冰浴下搅拌反应10小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:2)得到糖浆41(56.5mg，0.019mmol，55％)。Rf＝0.36(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.35～7.05(m,62H,Ph),5.60(s,1H,Rha2i-H),5.58～5.54(m,4H,Ph-CH),5.51(d,J＝2.7Hz,1H,Rha2-H),5.48(d,J＝2.4Hz,3H,Rha2-H),5.43～5.37(m,4H,Man2-H),5.31～5.24(m,4H,Man1-H),5.22～4.28(m,21H,Rha1-H,Ph-CH2),4.26～4.13(m,8H,Man3-H,Man6-H),3.98～3.86(m,9H),3.85～3.70(m,6H),3.69～3.54(m,10H,Rha3-H),3.53～3.11(m,11H,Rha5-H,linker-NCH2),2.13～2.00(m,27H,9OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,15H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:
化合物42：在氩气保护下，将化合物41(56.5mg，0.019mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，逐依次加入去离子水(0.5mL)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(6.3mg，0.028mmol)，室温下搅拌反应9小时，TLC监测原料反应完全后，用二氯甲烷萃取，用10％(w/w)硫代硫酸钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，用滤纸过滤除硫酸钠，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:2)得到棕色糖浆42(27.7mg，0.01mmol，53％)。Rf＝0.36(PE:EA＝1:1).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.55～7.10(m,55H,Ph),5.60(s,1H,Rha2i-H),5.58～5.54(m,4H,Ph-CH),5.49(d,J＝2.6Hz,4H,Rha2-H),5.40(dq,J＝3.8,1.8Hz,4H,Man2-H),5.28(t,J＝2.0Hz,2H,Man1-H),5.26(d,J＝1.6Hz,2H,Man1-H),5.17(d,J＝10.3Hz,2H,Ph-CH2),4.78～4.61(m,9H,Rha1-H,Ph-CH2),4.54～4.27(m,9H,Rha1-H,Ph-CH2),4.26～4.11(m,8H,Man3-H,Man6-H),3.96～3.86(m,8H),3.85～3.70(m,6H),3.69～3.54(m,8H,Rha3-H),3.53～3.11(m,11H,Rha5-H,linker-NCH2),2.13～2.00(m,27H,9OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.33(m,15H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ:
化合物2：在氩气保护下，将化合物42(27.7mg，0.009mmol)和化合物3(26.3mg，0.045mmol)，用甲苯溶解，旋蒸除水3次，放油泵上抽真空过夜，加入预先活化的
Figure BDA0001602297090000291
分子筛，加入无水二氯甲烷(1mL)和无水乙醚(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(10.1mg，0.045mmol)，冷却至0℃，搅拌30分钟，逐滴加入三氟甲磺酸三甲基硅烷酯(0.5μL)，冰浴下搅拌反应8小时，TLC检测原料反应完全，加入三乙胺淬灭反应，在砂芯漏斗中加入硅藻土，过滤除去分子筛，旋蒸除溶剂，粗品用硅胶柱层析纯化(PE:EA＝20:1→3:2)得到糖浆2(21.1mg，0.006mmol，69％)。Rf＝0.55(PE:EA＝1:1).1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:7.55～7.10(m,75H,Ph),5.60(s,1H,Rha2-H),5.58～5.54(m,4H,Ph-CH),5.48(d,J＝2.9Hz,4H,Rha2-H),5.40(m,4H,Man2-H),5.29(t,J＝1.8Hz,2H,Man1-H),5.26(d,J＝1.5Hz,3H,Man1-H),5.17(d,J＝12.4Hz,2H,Ph-CH2),4.88～4.58(m,14H,Rha1-H,Ph-CH2),4.55～4.25(m,12H,Rha1-H,Ph-CH2),4.24～4.13(m,10H,Man3-H,Man6-H),4.01(t,J＝9.5Hz,1H),3.96～3.86(m,8H),3.85～3.70(m,8H),3.72～3.53(m,12H,Rha3-H),3.53～3.11(m,10H,Rha5-H,linker-NCH2),2.15～1.98(m,27H,9OAc),1.63～1.45(m,4H,linker-CH2),1.43～1.32(m,15H,Rha6-H),1.33～1.18(m,2H,linker-CH2)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ:192.5,176.9,170.7,170.7,170.6,170.1,170.1,138.9,138.9,138.8,138.6,138.5,138.1,137.5,137.1,137.1,136.9,136.6,134.6,129.9,129.1,129.1,128.9,128.9,128.8,128.8,128.7,128.7,128.7,128.6,128.6,128.6,128.5,128.5,128.5,128.4,128.4,128.4,128.3,128.3,128.2,128.2,128.1,128.1,128.1,128.0,128.0,127.8,127.7,127.7,127.7,127.6,127.5,127.4,127.2,126.2,126.2,126.1,101.6,101.6,101.4,100.3,100.2,100.0,98.8,96.1,96.0,95.8,80.3,80.2,79.9,79.6,77.9,77.4,77.2,76.9,76.1,75.3,74.9,73.5,72.9,72.6,72.1,72.1,72.1,72.0,71.8,71.6,71.5,71.2,71.0,70.9,70.9,69.8,69.4,68.9,68.8,68.7,68.6,67.6,67.3,67.2,64.7,50.6,50.3,47.2,29.7,29.3,23.3,21.1,21.1,21.0,21.0,21.0,20.7,18.9,18.8,18.8,18.7,18.7,18.6,18.6,18.6.
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1.合成革兰氏阳性菌细胞壁荚膜多糖结构衍生物的方法，其特征在于，所述革兰氏阳性菌细胞壁荚膜多糖结构衍生物包括下式所示的二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、十糖中的一种或多种：
其中，十糖结构如式I所示：
Figure FDA0002570886260000011
其中，R6为氨基连接臂-(CH2)n-N-Y1Y2，n＝1～10，用于和蛋白质相连接，其中n代表连接臂可以为不同的碳链长度，Y1和Y2为氨基的保护基，其中Y1，Y2为H或者为卞基(Bn)或者卞甲氧羰基(Cbz)；R2，R3，R4，R5基为氢(H)，或者乙酰基(Ac)，或者苯甲酰(Bz)，或者新戊酰基(Piv)，或者氯乙酰(ClAc)，或者乙酰丙酰基(Lev)，或者烯丙氧羰酰基(Alloc)，或者苄基(Bn)，或者2-萘甲基(Nap)，或者烯丙基(All)，或者苯亚甲基缩醛，或者异亚丙基缩酮；R7，R12基为氢(H)，或者乙酰基(Ac)，或者苯甲酰(Bz)，或者新戊酰基(Piv)，或者氯乙酰(ClAc)，或者乙酰丙酰基(Lev)，或者烯丙氧羰酰基(Alloc)，R8基为H或者为卞基(Bn)，或者烯丙基(All)；R13，R14基为苄基(Bn)，或者2-萘甲基(Nap)，或者烯丙基(All)，或者苯亚甲基缩醛，或者异亚丙基缩酮；
二糖如式
Figure FDA0002570886260000012
所示，其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8参见式I；
三糖如式
Figure FDA0002570886260000013
所示，其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I；
四糖如式
Figure FDA0002570886260000021
所示，其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R12、R13、R14参见式I；
五糖如式
Figure FDA0002570886260000022
所示，其中，R6、R7、R8、R12、R13、R14参见式I；
六糖如式
Figure FDA0002570886260000023
所示，其中，R2、R3、R4、R5、R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I；
七糖如式
Figure FDA0002570886260000024
所示，其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I；R9为2-萘甲基(Nap)；
八糖如式
Figure FDA0002570886260000025
所示，其中，R2、R3、R4、R5、R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I；
九糖如式
Figure FDA0002570886260000031
所示，其中，R12、R13、R14、R6、R7、R8参见式I；
合成线路为：
Figure FDA0002570886260000041
其中，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R12、R13、R14参见式I；R9为2-萘甲基(Nap)；R10是糖基供体，为卤代糖、硫糖苷、三氯乙酰胺亚胺酯糖苷、磷酸酯糖苷、亚砜糖苷、N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷；R1、R11是糖基供体，为卤代糖、硫糖苷、三氯乙酰胺亚胺酯糖苷、磷酸酯糖苷、亚砜糖苷、N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷；
(1)以糖砌块1为糖基供体，以糖砌块2为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出1,4-α-连接的二糖片段3；
或者，在步骤(1)基础上，
(2)以糖砌块4为糖基供体，以糖砌块5为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再用路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出1,3-β-连接的二糖砌块6；
(3)以二糖砌块6为糖基供体，以糖砌块2为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出三糖片段7；
或者，在步骤(3)基础上，
(4)选择性脱除三糖片段7的R9，得到4号位为游离羟基的三糖砌块8，以糖砌块1为糖基供体，以三糖砌块8为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出四糖片段9；
或者，在步骤(4)基础上，
(5)以二糖砌块6为糖基供体，以三糖砌块8为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出五糖片段10；
或者，在步骤(5)基础上，
(6)选择性脱除五糖片段10的R9，得到4号位为游离羟基的五糖砌块11，以糖砌块1为糖基供体，以五糖砌块11为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出六糖片段12；
或者，在步骤(6)基础上，
(7)以二糖砌块6为糖基供体，以五糖砌块11为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出七糖片段13；
或者，在步骤(7)基础上，
(8)选择性脱除七糖片段13的R9，得到4号位为游离羟基的七糖砌块14，以糖砌块1为糖基供体，以七糖砌块14为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出八糖片段15；
或者，在步骤(8)基础上，
(9)以二糖砌块6为糖基供体，以七糖砌块14为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于二氯甲烷中，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出九糖片段16；
或者，在步骤(9)基础上，
(10)选择性脱除九糖片段16的R9，得到4号位为游离羟基的九糖砌块17，以糖砌块1为糖基供体，以九糖砌块17为糖基受体，将糖基供体与糖基受体溶于干燥的二氯甲烷中，加入分子筛，然后再路易斯酸催化，在一定温度下搅拌，反应2-10小时，制备出目标十糖片段18；
构建β-D-鼠李糖糖苷键：首先合成6-脱氧-D-吡喃葡萄糖糖苷，把目标化合物的C-2号位用酰基类保护基进行保护，利用邻基参与效应，立体选择性生成β-D-吡喃葡萄糖糖苷，然后，选择性脱除葡萄糖C-2号位酰基类保护基，在C-2号位用磺酰基保护基经过SN2机理的亲核取代，将C-2号位的平伏键转位生成直立键，即得到β-D-吡喃鼠李糖糖苷；或者利用氧化还原法，先把C-2号位氧化成酮，然后再用氢化铝锂或硼氢化钠还原剂还原得到C-2号位为直立键的化合物，即得到β-D-吡喃鼠李糖糖苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，R1和R11为氟(F)或者氯(Cl)或者溴(Br)或者碘(I)或者三氯乙酰亚胺酯(CCl3C(＝NH)O-)或者N-苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷(CF3C(＝NPh)O-)或者乙硫基(SEt)或者苯硫基(SPh)或者对甲苯硫基(STol)或者乙硫基(SEt)或者二丁基膦酸酯基(-O-P(＝O)-(OBu)2)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，糖砌块2的R6为氨基连接臂-(CH2)n-N-Y1Y2，n＝1～10，用于和蛋白质相连接，其中n代表连接臂可以为不同的碳链长度，连接臂为α或者β连接，Y1和Y2为氨基的保护基，其中Y1，Y2为H或者为卞基(Bn)或者卞甲氧羰基(Cbz)；R7，R8，R9基为氢(H)或者乙酰基(Ac)，或者苯甲酰(Bz)，或者新戊酰基(Piv)，或者氯乙酰(ClAc)，或者乙酰丙酰基(Lev)，或者烯丙氧羰酰基(Alloc)，或者苄基(Bn)，2-萘甲基(Nap)，或者对甲氧基苄基(pMBn)，或者烯丙基(All)，或者苯亚甲基缩醛，或者异亚丙基缩酮。
4.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述的路易斯酸为三氟化硼乙醚，或者三氟甲磺酸，或者三氟甲磺酸三甲基硅酯，或者银盐。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述银盐为碳酸银、三氟甲磺酸银。
6.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述的在一定温度下搅拌，是在室温25℃、冰浴搅拌，或者是在-5℃至-20℃的冰和盐的混合物中搅拌，或者是在-40℃的乙腈和干冰的混合物中搅拌，或者在-78℃的丙酮和干冰的混合物中搅拌。
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