JP7358359B2 - グラム陽性菌表面莢膜多糖構造誘導体の製造方法 - Google Patents

グラム陽性菌表面莢膜多糖構造誘導体の製造方法 Download PDF

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Description

本発明は、グラム陽性菌表面莢膜多糖構造誘導体の製造方法に関し、糖化学分野に属する。
自閉症（ａｕｔｉｓｍ）は孤独症とも呼ばれ、最も早くアメリカの精神科医カナー（Ｌｅｏ Ｋａｎｎｅｒ）によって臨床医学で発見され且つ１９３０年代末に提案されている概念である。自閉症の主な症状は、子供の社会化障害、言語コミュニケーション障害、及び行為習慣障害である。現在国際的に広く引用されている基準によれば、１６０名の子供につき１人が自閉症を患う。これによって推算すると、中国の自閉症児の数は２０１２年に約１６４万人であり、かつ毎年１０％～１７％の割合で増加しており、人口割合の１０００分の１になった。世界的には、自閉症はますます広く注目・重視されている。２００８年から、国連総会は４月２日を「世界自閉症啓発デー（Ｗｏｒｌｄ Ａｕｔｉｓｍ Ａｗａｒｅｎｅｓｓ Ｄａｙ）」に指定した。自閉症に対する公衆の意識を高めるために、毎年適切な方法で世界自閉症啓発デーの活動を行うことが奨励され、家庭レベルでの措置をとりつつ社会全体で自閉症児に対する意識を高めることを含む。
Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅは嫌気性グラム陽性菌であり、その生存に最適な環境温度は３７℃であり、ちょうど人体の正常な温度である。Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅは腸内で大量に増殖すると、便秘や下痢などを含む胃腸の不快感が高い割合で発生しまうが、これらの不快感が自閉症患者の行為習慣に及ぼす影響は、糖類物質が細菌により代謝されて生じる短鎖脂肪酸、例えばプロピオン酸（ＰＰＡ）などに関連している可能性がある。ＰＰＡ代謝物は、胃運動を低下させ、腸収縮の頻度を増加させることができ、これらはＡＳＤ患者の胃腸の不快感に直接関係し得る。慢性持続性下痢を伴う重症ＡＳＤ患児にバンコマイシン（グラム陽性菌による感染を予防と治療するための糖ペプチド系抗生物質）を経口投与する治療において、８０％の患児の自閉症の症状が短期間で緩和されたが、薬物投与を止めると効果が消えることを、研究者らは発見した。これは、バンコマイシンが細菌フローラの不均衡を抑制したに過ぎず、その不均衡を解消できなかったことを示しているとともに、対応するグラム陽性菌の成長阻害が、自閉症の症状を確実に緩和できることも示している。しかし、バンコマイシンを長期服用すると、細菌耐性を引き起こすことがあるため、腸内のＣ．ｂｏｌｔｅａｅのような主要な病原菌の増殖を制御できる他の治療案を研究および開発することが急務である。
２０１３年、カナダのキエフ大学の研究者たちは、Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅ細胞壁莢膜多糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ， ＣＰＳ）の構造を精製して特性決定した。免疫学的研究により、この多糖構造がウサギ体内に免疫を生じさせることができることが明らかになった。この研究はすぐに広範な注目を集め、これは自閉症の症状を制御するワクチンの研究開発のために重要な一歩を踏み出しましたと広く考えられている。
現在、Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅ感染を予防する、またはＣ．ｂｏｌｔｅａｅを治療するためのワクチンは市場にまだない。糖類ワクチンはワクチン開発の新たな標的分子として、ますます科学者に重視されてきており、細菌表面の多糖構造は、細菌の病原性および人体内免疫認識に対して重要な役割を果たしている。化学的に合成されたＣ．ｂｏｌｔｅａｅ細胞壁莢膜多糖はこれまで、ワクチンとしては研究されておらず、生物学的方法による多糖構造の抽出と精製には、主に次の欠点がある。１）抽出と精製の過程には時間がかかり、コストが高く、かつ毎回抽出の量が少ない；２）高純度で単一の構造を有する製品を得るのは難しく、製品に存在する不純物は、後のワクチン製造に一連の問題と困難をもたらす可能性がある。化学的合成によりオリゴ／多糖構造を製造すると、生成物の大量製造を実現でき、かつ合成された産物の構造は単一であり、不純物がないため、生物学的方法による精製における主な問題は解決された。そのため、化学的方法によるＣ．ｂｏｌｔｅａｅ表面オリゴ多糖の合成は、Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅワクチンの開発に非常に重要な意味を持っている。
本発明は、自閉症患者の胃腸に対する細菌の刺激を軽減できるワクチンの製造を主な目的として、遅発性自閉症に関連する腸内グラム陽性菌Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｌｔｅａｅに着眼し、その細胞壁表面の細胞壁莢膜多糖構造を研究対象とし、化学的方法を設計および使用してその構造を合成して糖－タンパク質コンジュゲートを製造し、後は合成されたコンジュゲートに対してマウス体内での免疫学的研究を行うようになる。一方、このような細胞壁莢膜多糖（ＣＰＳ）構造を患者への臨床診断に適用して対応する治療策を確立することが希望される。他方で、この多糖を使用してワクチンを開発し、自閉症患児の腸内Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅフローラ数を制御することで、自閉症患者の苦痛を軽減し、遅発性自閉症に関連する症状の発現を予防し、患者たちを助けてリハビリテーショントレーニングがより効果的に受けられるようになる。
Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅ表面莢膜多糖は、一つの繰り返した二糖フラグメントから構成され、この二糖フラグメントは、一つのＤ－マンノースと一つのＤ－ラムノースから構成され、その構造は［→３］－α－Ｄ－Ｍａｎｐ－（１→４）－β－Ｄ－Ｒｈａｐ－（１→］ｎとして特徴付けることができる。質量分析データの分析によると、この多糖構造は９つの繰り返しフラグメントで構成される（ｎ＝９）。
本発明は以下のように設計される。二糖フラグメントを合成ユニットとして、二糖ユニットをグリコシル化反応により１つずつ連結し、長さの異なるオリゴ糖構造を合成し、１つの二糖フラグメント～５つの二糖フラグメント（すなわち、１つの十糖）を含む合成糖抗原ライブラリーを構築する。そして、免疫学的研究については後述するが、合成された長さの異なるオリゴ糖構造を担体タンパク質とさらにコンジュゲートする。そこで、化学的合成の過程で標的のオリゴ糖構造に結合手を導入する必要がある。本発明は、アミノペンチル結合手をオリゴ糖の還元末端修飾として選択して用いる。
本発明が解決しようとする一つ目の問題は、Ｃ．ｂｏｌｔｅａｅ莢膜多糖構造におけるβ－Ｄ－ラムノースグリコシド結合を合成することである。Ｄ－ラムノース、すなわち、６－デオキシ－Ｄ－マンノースは、グリコシド結合の合成において、末端基効果でも立体効果でも優勢のあるα－Ｄ－ラムノピラノシド結合を形成しやすい。そして、Ｃ－２位は隣接基関与効果があるため、１，２－ｔｒａｎｓ－グリコシド結合が立体選択的に生成され、同様にα－Ｄ－ラムノピラノシド結合も容易に得られる。β－Ｄ－マンノピラノシド結合の合成は、糖合成化学における研究のホットスポットであり、同時に糖化学における主なチャレンジの一つでもある。このグリコシド結合は、最も構築が困難な末端グリコシド結合の一つと考えられる。本発明は、Ｃ－２位レドックス法を使用して標的のオリゴ糖構造を合成する。
本発明によって提供されるβ－Ｄ－ラムノースグリコシド結合を合成する方法は、まず、６－デオキシ－Ｄ－グルコピラノシドを合成し、標的化合物のＣ－２位をアシル系保護基で保護し、隣接基関与効果によりβ－Ｄ－グルコピラノシドを立体選択的に生成し、そして、グルコースのＣ－２位のアシル系保護基を選択的に除去し、Ｃ－２位ではスルホニル基などの保護基を用いてＳＮ２メカニズムの求核置換により、Ｃ－２位のエクアトリアル結合を転位してアキシアル結合を形成して、β－Ｄ－ラムノピラノシドを得る、または、レドックス法を使用して、まずＣ－２位をケトンに酸化し、そして水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤で還元してＣ－２位がアキシアル結合である化合物を得て、β－Ｄ－ラムノピラノシドを得るというものである。
上記β－Ｄ－ラムノースグリコシド結合を合成する方法に基づいて、本発明は、２つの二糖フラグメント（すなわち、四糖）～５つの二糖フラグメント（すなわち、十糖）を含む合成糖のライブラリーを得る。
そのうち、十糖の構造は下記式Ｉに示す通りである。
Figure 0007358359000001
式中、Ｒ６は、タンパク質と結合するためのアミノ基結合手［－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ－Ｙ１Ｙ２、ｎ＝１～１０］であり、免疫学的研究のために糖タンパク質を製造するものであり、ｎは、結合手が異なる炭素鎖長であってもよいことを表し、Ｙ１とＹ２はアミノ基の保護基であり、Ｙ１、Ｙ２はそれぞれＨ、ベンジル基（Ｂｎ）、またはベンジルメトキシカルボニル（Ｃｂｚ）である；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５基は水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）、またはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールなどである；Ｒ７、Ｒ１２基は水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）などであり、Ｒ８基はＨまたはベンジル基（Ｂｎ）、またはアリル基（Ａｌｌ）などである；Ｒ１３、Ｒ１４基はまたはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールなどである。
二糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000002
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８については、式Ｉを参照する。
三糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000003
式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８については、式Ｉを参照する。
四糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000004
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４については、式Ｉを参照する。
五糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000005
式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４については、式Ｉを参照する。
六糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000006
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８については、式Ｉを参照する。
七糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000007
式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９については、式Ｉを参照する。
八糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000008
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８については、式Ｉを参照する。
九糖の構造は下記式に示す通りである。
Figure 0007358359000009
式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８については、式Ｉを参照する。
上記標的分子十糖の合成は具体的には下記のステップを含む。
＜ステップ１＞ マンノース糖ブロック１の合成
Figure 0007358359000010
糖ブロック１は式ＩＩに示すとおりであり、その末端位Ｒ１はグリコシル供与体であり、ハロゲン化糖、チオグリコシド、トリクロロアセトイミデートグリコシド、グリコシドリン酸エステル、スルホキシドグリコシド、Ｎ－フェニルトリフルオロアセトイミデートグリコシドなどであってもよく、例えば、Ｒ１基はフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）または臭素（Ｂｒ）またはトリクロロアセトイミデート（ＣＣｌ３Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ－）またはＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデート（ＣＦ３Ｃ（＝ＮＰｈ）Ｏ－）またはエチルチオ基（ＳＥｔ）またはフェニルチオ基（ＳＰｈ）またはｐ－トルエンチオ基（ＳＴоｌ）またはエチルチオ（ＳＥｔ）またはジブチルホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）－（ＯＢｕ）２）などであり、その末端位はαまたはβ配位であり、残りの置換基Ｒｎについては、式Ｉを参照する。
＜ステップ２＞ ラムノース糖ブロック２の合成
Figure 0007358359000011
糖ブロック２は式ＩＩＩに示すとおりであり、置換基Ｒｎについては、式Ｉを参照する。
＜ステップ３＞ ラムノース糖ブロック４の合成
Figure 0007358359000012
糖ブロック４は式ＩＶに示すとおりであり、その末端位Ｒ１０はグリコシル供与体であり、ハロゲン化糖、チオグリコシド、トリクロロアセトイミデートグリコシド、グリコシドリン酸エステル、スルホキシドグリコシド、Ｎ－フェニルトリフルオロアセトイミデートグリコシドなどであってもよく、例えば、Ｒ１０基はフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）または臭素（Ｂｒ）またはトリクロロアセトイミデート（ＣＣｌ３Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ－）またはＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデート（ＣＦ３Ｃ（＝ＮＰｈ）Ｏ－）またはエチルチオ基（ＳＥｔ）またはフェニルチオ基（ＳＰｈ）またはｐ－トルエンチオ基（ＳＴоｌ）またはエチルチオ（ＳＥｔ）またはジブチルホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）－（ＯＢｕ）２）などであり、その末端位はαまたはβ配位であり、Ｒ９基は２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）であり、その他の置換基Ｒｎについては、式Ｉを参照する。
＜ステップ４＞ マンノース糖ブロック５の合成
Figure 0007358359000013
糖ブロック５は式Ｖに示すとおりであり、その末端位Ｒ１１はグリコシル供与体であり、ハロゲン化糖、チオグリコシド、トリクロロアセトイミデートグリコシド、グリコシドリン酸エステル、スルホキシドグリコシド、Ｎ－フェニルトリフルオロアセトイミデートグリコシドなどであってもよく、例えば、Ｒ１１基はフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）または臭素（Ｂｒ）またはトリクロロアセトイミデート（ＣＣｌ３Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ－）またはＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデート（ＣＦ３Ｃ（＝ＮＰｈ）Ｏ－）またはエチルチオ基（ＳＥｔ）またはフェニルチオ基（ＳＰｈ）またはｐ－トルエンチオ基（ＳＴоｌ）またはエチルチオ（ＳＥｔ）またはジブチルホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）－（ＯＢｕ）２）などであり、その末端位はαまたはβ配位であり、残りの置換基Ｒｎについては、式Ｉを参照する。
＜ステップ５＞ マンノース糖ブロック６の合成
Figure 0007358359000014
糖ブロック６は式ＶＩに示すとおりであり、置換基Ｒｎについては、式ＩＶと式Ｖを参照する。
＜ステップ６＞ 式ＶＩＩに示すように、自閉症に関連するグラム陽性菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｌｔｅａｅ）表面莢膜多糖オリゴ糖フラグメント、例えば、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、十糖のアセンブリ
糖ブロック１、２、４、５、６、オリゴ多糖を使用したアセンブリの反応ステップは下記の通りである。
（１）３モルの糖ブロック１をグリコシル供与体とし、１モルの糖ブロック２をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて１，４－α－結合の標的二糖フラグメント３を製造する；
（２）１モルの糖ブロック４をグリコシル供与体とし、１．５モルの糖ブロック５をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、活性化された４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて１，３－β－結合の二糖ブロック６を製造する；
（３）１．５モルの二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、１モルの糖ブロック２をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて三糖フラグメント７を製造する；Ｒ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である三糖８を得て、３モルの糖ブロック１をグリコシル供与体とし、１モルの三糖ブロック８をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて標的四糖フラグメント９を製造する；
（４）１．５モルの二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、１モルの糖ブロック８をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて五糖フラグメント１０を製造する；Ｒ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である五糖１１を得て、３モルの糖ブロック１をグリコシル供与体とし、１モルの五糖ブロック１１をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて標的六糖フラグメント１２を製造する；
（５）１．５モルの二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、１モルの糖ブロック１１をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて七糖フラグメント１３を製造する；Ｒ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である七糖１４を得て、３モルの糖ブロック１をグリコシル供与体とし、１モルの七糖ブロック１４をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて標的八糖フラグメント１５を製造する；
（６）１．５モルの二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、１モルの糖ブロック１４をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて九糖フラグメント１６を製造する；Ｒ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である九糖１７を得て、３モルの糖ブロック１をグリコシル供与体とし、１モルの七糖ブロック１７をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて標的十糖フラグメント１８を製造する；
（７）上記に類似した方法を使用して、二糖ブロック６を繰り返し単位として、十二糖、十四糖、十六糖、十八糖などのより大きい多糖を合成することもできる。
Figure 0007358359000015
＜ステップ７＞ 自閉症に関連するグラム陽性菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｌｔｅａｅ）表面莢膜オリゴ糖フラグメント、例えば、二糖、四糖、六糖、八糖、十糖の脱保護。
Figure 0007358359000016
式中、Ｒは－（ＣＨ２）５－ＮＨ２であり、保護された十糖は、アルカリ性条件下で脱アシル化し、シリカゲルカラムにより精製された後、Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２を用いて脱着反応を３日間行って芳香族基を除去し、芳香族基が完全に脱保護された後、逆相Ｃ１８カラムで精製して最終的に式ＶＩＩＩに示すような標的オリゴ糖フラグメントを得る。
本発明の目的は、安価で入手しやすい原料を用いて、簡単なステップで時間と労力を節約し、且つ低コストで医薬として使用される可能性がある、自閉症に関連するグラム陽性菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｌｔｅａｅ）表面莢膜オリゴ糖フラグメントの合成方法を提供することにある。
糖ブロック３の合成を示す図である。反応条件：(a) (1) NaOAc, Ac2O, 90°C, 2h; (2) BF3・Et2O, TMSOTf, EtSH (86%, α : β = 5 : 1), DCM, 0°C to r.t., 48h; (b) MeOH, NaOMe, r.t., 48h; (c) NaH, BnBr (85% over two steps), DMF, 0°C to r.t., 7h。 糖ブロック４の合成を示す図である。反応条件：(a) NaH, BnBr, DMF (99%), 0°C to r.t., 7h; (b) H+ resin, CH3COCH3, H2O, 60°C, 48h ; (c) Py., Ac2O, (85%, over two steps), 0°C to r.t., 10h; (d) TolSH, DCM, BF3・Et2O (59%), 0°C to r.t., 31h; (e) NaOMe, MeOH, r.t., 15h; (f) NPCH[OCH2CH(CH3)2]2, CH3CN, TsOH (87%, over two steps), r.t., 4h; (g) Cu(OTf)2, BH3・THF, BF3・Et2O (95%), 0°C, 6h; (h) TsCl, Py. (86%), r.t., 12h; (i) LiAlH4,THF (55%), r.t., 7h; (j) DCC, LevOH, DMAP, DCM, (98%), r.t., 3h。 糖ブロック５の合成を示す図である。反応条件：(a) PhCH(OMe)2, p-TsOH, 60°C, 36h (59%) ; (b) CH3C(OEt)3, p-TsOH, r.t., 3h; (c) 80% AcOH, r.t., 1h (83%, over two steps)。 糖ブロック６の合成を示す図である。反応条件：(a) HO(CH2)5N(Bn)Cbz, NIS, TMSOTf, DCM 0°C, 5h (96%, β only); (b) H2NNH2/HOAc, DCM/MeOH = 20 : 1, r.t., 3h (95%); (c) (COCl)2, DMSO, Et3N, DCM, -78°C to r.t., 20h (91%); (d) NaBH4, EtOH, 0°C, 7h (88%); (e) Ac2O, Py, r.t., 12h (95%).; (f) DDQ, H2O, DCM, r.t., 10h (86%)。 二糖ブロック３０の合成を示す図である。反応条件：(a) (1) NBS, THF/H2O, 7h; (2) Cl3CCN, DBU, 3h (78%, over two steps); (b) TMSOTf, DCM, -40°C, 4h (72%, β only); (c) H2NNH2/HOAc, 5h (88% ); (b) (1) (COCl)2, DMSO, Et3N, DCM, -78°C, 3h; (2) NaBH4, EtOH, 0°C, 5h; (3) Py., AC2O, 12h ( 88%)。 オリゴ糖フラグメントの合成を示す図である。反応条件：(a) NIS, TMSOTf, DCM, Et2O, 0°C, 8h (53-80%); (b) (1) MeONa, THF/MeOH = 1:1, r.t., 12h; (2) 80% AcOH, 70°C, 8h; (3) H2, Pd/C, DCM, t-Butanol, H2O, r.t., 48h (72% over three steps); (c) NIS, TMSOTf, DCM, 0°C, 8h (50-72%); (d) DDQ, H2O, DCM, r.t., 5h (50-70%)。
一般的な実験方法
実験に使用した乾燥溶媒は、独国ブラウン社製の有機溶媒浄化システムを用いて乾燥精製して得られたものである。
１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、１Ｈ－１Ｈ ＣＯＳＹ、１Ｈ－１３Ｃ ＨＳＱＣはいずれもＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ４００タイプ、ＡＶＡＮＣＥ ７００ ＭＨｚタイプ、核磁気共鳴装置で測定され、ＴＭＳは内部標準であり、２５℃で測定され、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、トリプレット（ｔ）、ダブレットのダブレット（ｄｄ）、マルチプレット（ｍ）などを用いて異なるピークタイプを表し、化学シフト（δ）の単位はｐｐｍとして記し、カップリング定数（Ｊ）の単位はＨｚとして記す。
高分解能質量分析はＭＡＬＤＩ ＳＹＮＡＰＴ ＭＳタイプの質量分析計により正イオンモードで測定され、質量分析はＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｕｌｔｒａ質量分析計により正負イオン全スキャンモードで測定された。赤外スペクトルは、ＮＩＣＯＬＥＴ ＩＳ５タイプ赤外分光計により、ＫＢｒタブレット法で測定された。カラムクロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、山東省青島海洋化学工場によって製造された２００～３００メッシュのカラムクロマトグラフィーシリカゲルおよび薄層クロマトグラフィーシリカゲルＧＦ２５４タイプシリカゲルプレートであり、実験検出で使用した発色法では、５％（ｖ／ｖ）硫酸－エタノール溶液と紫外線ランプを採用して発色した。
実施例１ 糖ブロック３の合成は図１に示す。
具体的な試験操作とステップは下記の通りである。
化合物８：アルゴンガスの保護下で、市販のＤ－マンノース（４０ｇ、２２２ｍｍоｌ）を無水酢酸（２２８ｍL）に溶解し、酢酸ナトリウム（２４ｇ、２８８．６ｍｍоｌ）を加え、８０℃で２時間撹拌し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して茶色のシロップを得て、直接次の反応に仕込んだ。全アセチル化されたマンノースを無水ジクロロメタン（１０００ｍＬ）に溶解し、４Åのモレキュラーシーブを加え、エタンチオール（２５ｍＬ）を加えて０℃に冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル溶液（５５ｍＬ）を滴加し、氷浴で３０分間撹拌反応し、室温に昇温して３２時間撹拌反応してから、０．５当量のトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）を追加し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、一層の珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、ジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→５：１）、白い固体８（７４．９ｇ、１９１ｍｍоｌ、８６％（２ステップ反応の総収率）、α：β＝５：１）を得た。Rf = 0.57 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.35 (dd, J＝3.2, 1.5 Hz, 1H, 2-H), 5.32~5.35 (m, 1H, 4-H), 5.30 (d, J＝1.6 Hz, 1H, 1-H), 5.26 (dd, J＝9.9, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 4.41 (ddd, J＝9.4, 5.3, 2.2 Hz, 1H, 5-H), 4.33 (dd, J＝12.2, 5.3 Hz, 1H, 6-H), 4.10 (dd, J＝12.2, 2.3 Hz, 1H, 6'-H), 2.65 (m, 2H, -CH2), 2.00, 2.06, 2.10, 2.18 (4s, 3H each, 4 OAc), 1.31 (t, J＝7.4 Hz, 3H, Me); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 171.1, 170.4, 170.2, 170.2 82.7, 71.6, 69.9, 69.3, 66.7, 62.8, 25.9, 21.4, 21.2, 21.2, 21.1, 15.2; IR (KBr) ν: 2980, 1744, 1374, 1251, 712 cm-1; HRMS ESI-TOF: [M + Na]+ calcd for C16H24O9SNa 415.1039; found 415.1052。
化合物３：アルゴンガスの保護下で、化合物８（１４ｇ、３５．６ｍｍоｌ）をメタノール（９０ｍL）に溶解し、触媒量のナトリウムメトキシドを加え、室温で２時間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、水素イオン交換樹脂を加えてｐＨを５～６に調整し、ろ紙でろ過して樹脂を除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して茶色のシロップを得て、直接次の反応に仕込んだ。得られたシロップをジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）に溶解して０℃に冷却し、水素化ナトリウム（１１．４ｇ、２８４．８ｍｍоｌ）を加え、臭化ベンジル（２６ｍＬ）を滴加し、氷浴で３０分間反応させ、室温に昇温して７時間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、氷水を加えて反応を停止させ、ジクロロメタンで抽出し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１００：１→１０：１）、白い固体３（１７．７ｇ、３０．３ｍｍоｌ、８５％（２ステップ反応の総収率））を得た。Rf = 0.63 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.63 ~ 7.01 (m, 20H, 4 Ph ), 5.40 (d, J = 1.3 Hz, 1H, 1-H), 5.03 ~ 4.45 (m, 8H, 4 PhCH2), 4.13 (ddd, J = 9.9, 4.8, 1.9 Hz, 1H, 5-H), 4.03 (td, J = 10.1, 1.3 Hz, 1H, 3-H), 3.86 ~ 3.78 (m, 3H, 2, 6, 6'-H), 3.71 (dd, J = 10.9, 1.9 Hz, 1H, 4-H), 2.70 ~ 2.47 (m, 2H, SEt-CH2), 1.24 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SEt-CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 138.7, 138.5, 138.4, 138.3, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 82.0, 80.5, 76.5, 75.2, 75.2, 73.4, 72.2, 72.1, 72.1, 69.3, 25.4, 15.1。
実施例２ 糖ブロック４の合成は図２に示す。
具体的な試験操作とステップは下記の通りである。
化合物１１：アルゴンガスの保護下で、市販のジアセトングルコース１０（５０ｇ、１９１ｍｍоｌ）をジメチルホルムアミド（４９０ｍL）に溶解し、０℃に冷却し、水素化ナトリウム（１５．４ｇ、３８２ｍｍоｌ）を数回に分けて加え、臭化ベンジル（３５ｍＬ）を滴加し、氷浴で３０分間反応させ、室温に昇温して５時間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、氷水を加えて反応を停止させ、ジクロロメタン（３×２５０ｍＬ）で抽出し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去して、シロップ１１（６６．２ｇ、１８９．１ｍｍоｌ、９９％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.61 ~ 7.08 (m, 5H, Ph ), 5.90 (d, J = 3.7 Hz, 1H, 1-H), 4.68 (d, J = 11.8 Hz, 1H, PhCH), 4.63 (d, J = 11.8 Hz, 1H, PhCH), 4.58 (d, J = 3.7 Hz, 1H, 2-H), 4.37 (dt, J = 7.7, 6.1 Hz, 1H, 5-H), 4.15 (dd, J = 7.8, 3.2 Hz, 1H, 6-H), 4.11 (dd, J = 9.1, 6.7 Hz, 1H, 6'-H), 4.01 (dd, J = 8.1, 2.7 Hz, 1H, 4-H), 3.99 (m, 1H, 3-H), 1.49 (s, 3H, CH3), 1.43 (s, 3H, CH3), 1.37 (s, 3H, CH3), 1.31 (s, 3H, CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 137.8, 128.5, 128.0, 127.8, 111.9, 109.1, 105.4, 82.8, 81.8, 81.5, 72.7, 72.5, 67.5, 27.0, 26.9, 26.4, 25.6。
化合物１３：アルゴンガスの保護下で、化合物１１（６６．２ｇ、１８９．１ｍｍоｌ）をアセトン（４５ｍL）と脱イオン水（４２５ｍＬ）、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０水素イオン交換樹脂（８５ｇ）に溶解し、６０℃に加熱して２日間凝縮還流させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、室温に冷却し、ろ紙でろ過して樹脂を除去し、メタノールで樹脂を洗い流し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて溶液のｐＨを中性に調整し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して茶色のシロップを得て、トルエンに溶解して、ロータリーエバポレーションにより共沸して除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きして、直接次の反応に仕込んだ。得られたシロップを無水ピリジン（４２５ｍＬ）に溶解して０℃に冷却し、無水酢酸（８０ｍＬ）を滴加し、氷浴で３０分間反応させ、室温に昇温して１０時間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出し、順に１ｍｍоｌ Ｌ－１塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１００：１→２：１）、茶色のシロップ１３（７０．５ｇ、１６０．７ｍｍоｌ、８５％（２ステップ反応の総収率、α：β＝１：３））を得た。Rf = 0.32 (PE : EA = 7 : 3). α型：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.36 ~ 7.19 (m, 5H, Ph), 6.31 (d, J = 3.6 Hz, 1H, 1-H), 5.16 (t, J = 9.8 Hz, 1H, 4-H), 5.05 (dd, J = 10.0, 3.7 Hz, 1H, 2-H), 4.71 (d, J= 11.8 Hz, 1H, Ph-CH), 4.63 (d, J = 11.8 Hz, 1H, Ph-CH), 4.24 ~ 4.16 (m, 1H, 6-H), 4.09 ~ 3.92 (m, 3H, 3, 5, 6'-H), 2.16 (s, 3H, OAc), 2.07 (s, 3H, OAc), 1.99 (s, 3H, OAc), 1.97 (s, 3H, OAc); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.6, 170.5, 169.5, 169.2, 168.7, 137.9, 128.4, 127.7, 127.4, 89.4, 76.9, 74.8, 71.5, 70.2, 69.1, 69.1, 61.8, 20.8, 20.7, 20.6, 20.5。
化合物１４：アルゴンガスの保護下で、化合物１３（７０．５ｇ、１６１ｍｍоｌ）と予め活性化された４Åのモレキュラーシーブとを混合し、無水ジクロロメタン（６１０ｍＬ）を加えてｐ－トルエンチオール（３０ｇ、２４２ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却して１時間撹拌し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（７０ｍＬ、４８４．６ｍｍоｌ）を滴加し、室温に昇温して３０時間撹拌反応し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、０℃に冷却し、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土でろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１００：１→１０：１）、白い固体１４（５２．６ｇ、１０４．７ｍｍоｌ、６５％）を得た。Rf = 0.42 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.45 ~ 6.91 (m, 9H, Ph), 5.03 (dt, J = 15.0, 9.6 Hz, 2H, 2, 4-H), 4.64 ~ 4.51 (m, 3H, 4-H, Ph-CH2), 4.16 (t, J = 3.4 Hz, 2H, 6, 6'-H), 3.71 (t, J = 9.2 Hz, 1H, 3-H), 3.60 (ddd, J = 9.9, 5.0, 3.1 Hz, 1H, 5-H), 2.33 (d, J = 1.8 Hz, 3H, STol-CH3), 2.07 (s, 3H, OAc), 2.04 (s, 3H, OAc), 1.95 (s, 3H, OAc); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.8, 170.7, 169.4, 169.3, 138.5, 138.5, 137.9, 137.8, 133.4, 133.4, 129.7, 128.7, 128.7, 128.6, 128.5, 128.0, 127.9, 86.5, 81.7, 77.6, 77.3, 76.9, 76.2, 74.4, 74.3, 71.5, 71.5, 69.8, 69.8, 62.7, 21.3, 21.1, 20.9, 20.9, 20.8。
化合物１６：アルゴンガスの保護下で、化合物１４（４０．７ｇ、８１ｍｍоｌ）をメタノール（３００ｍL）に溶解し、触媒量のナトリウムメトキシドを加え、室温で１５時間反応させ、不溶物が完全に溶解して清澄な溶液になった後、原料が反応し終わったことをＴＬＣでモニタリングしてから、カチオン交換樹脂を加えてｐＨを５～６に調整し、ろ紙でろ過して樹脂を除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して化合物１５を得て、精製をせずに次の反応に直接に用いた。化合物１５を無水アセトニトリル（４５０ｍＬ）に溶解し、２－（イソブチルメトキシ）－メチルナフタレン（４６ｇ、１６２ｍｍоｌ）とｐ－トルエンスルホン酸（７６９ｍｇ、４ｍｍоｌ）を加え、室温で撹拌し、溶液が徐々に清澄になった後、すぐに白色の固体に凝固した。室温で４時間撹拌し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１００：１→１０：１）、白い固体１６（３７．３ｇ、７０．５ｍｍоｌ、８７％（２ステップ反応の総収率））を得た。Rf = 0.39 (PE : EA = 4 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.17 ~ 6.86 (m, 16H, Ph), 5.72 (s, 1H, Np-CH), 4.97 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Ph-CH), 4.83 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Ph-CH), 4.59 (d, J = 9.7 Hz, 1H, 1-H), 4.44 (dd, J = 10.5, 5.0 Hz, 1H, 6-H), 3.85 (t, J = 10.3 Hz, 1H, 6'-H), 3.71 (dd, J = 7.1, 4.5 Hz, 2H, 3, 4-H), 3.53 (ddt, J= 14.9, 5.5, 3.7 Hz, 2H, 2, 5-H), 2.59 (d, J = 2.2 Hz, 1H, 2-OH), 2.36 (s, 3H, STol-CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 138.9, 138.4, 134.7, 1340, 133.8, 133.0, 130.0, 128.6, 128.5, 128.2, 128.2, 128.0, 127.8, 127.4, 126.6, 126.3, 125.6, 123.8, 101.6, 88.8, 81.8, 81.4, 77.4, 75.0, 72.4, 70.9, 68.9, 21.3。
化合物１７：アルゴンガスの保護下で、化合物１６（２０．３ｇ、３８．４ｍｍоｌ）をボランテトラヒドロフラン溶液（４２５ｍL）に溶解し、０℃に冷却して３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸銅（４．１ｇ、１１．５ｍｍоｌ）と三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（０．５ｍＬ）を加え、氷浴で６時間撹拌反応し、原料が反応し終わったことをＴＬＣでモニタリングしてから、氷水を滴加して過剰のボランを除去した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１→５：１）、白い固体１７（１８．８ｇ、３６．５ｍｍоｌ、９５％）を得た。Rf = 0.27 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.13 ~ 7.05 (m, 16H, Ph), 5.17 ~ 4.66 (m, 4H, Ph-CH2), 4.51 (d, J= 9.7 Hz, 1H, 1-H), 3.93 (ddd, J = 12.0, 5.9, 2.5 Hz, 1H, 6-H), 3.74 (ddd, J = 12.1, 7.6, 4.7 Hz, 1H, 6'-H), 3.65 (t, J = 8.7 Hz, 1H, 3-H), 3.58 (t, J = 9.2 Hz, 1H, 4-H), 3.47 (ddd, J = 10.1, 8.1, 2.3 Hz, 2H, 2, 5-H), 2.50 (d, J = 2.2 Hz, 1H, 2-OH), 2.35 (s, 3H, STol-CH3), 1.99 (dd, J = 7.5, 6.0 Hz, 1H, 6-OH); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 138.8, 138.6, 135.5, 133.7, 133.4, 133.2, 130.0, 128.6, 128.4, 128.1, 128.1, 127.9, 127.8, 127.7, 126.9, 126.3, 126.1, 126.0, 88.5, 85.9, 79.8, 77.5, 75.5, 75.3, 73.0, 62.4, 21.3。
化合物１８：アルゴンガスの保護下で、化合物１７（３．９ｇ、７．７ｍｍоｌ）を無水ピリジン（４０ｍＬ）に溶解し、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（２．９ｇ、１５．４ｍｍоｌ）を数回に分けて加え、室温で１２時間撹拌反応し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、氷水を滴加して反応を停止させた。ジクロロメタンで抽出し、順に１ｍｍоｌ Ｌ－１塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を収集し、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１→８：１）、シロップ１８（４．５ｇ、６．６ｍｍоｌ、８５％）を得た。Rf = 0.33 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.10 ~ 6.84 (m, 20H, Ph), 5.05 ~ 4.55 (m, 4H, Ph-CH2), 4.35 (d, J = 9.6 Hz, 1H, 1-H), 4.29 (dd, J = 10.6, 1.9 Hz, 1H, 6-H), 4.14 (dd, J = 10.6, 4.6 Hz, 1H, 6'-H), 3.58 (t, J = 8.6 Hz, 1H, 3-H), 3.53 (ddd, J = 9.8, 4.6, 1.9 Hz, 1H, 5-H), 3.46 (dd, J = 9.8, 8.5 Hz, 1H, 4-H), 3.37 (dd, J = 9.7, 8.6 Hz, 1H, 2'-H), 2.33 (d, J = 2.2 Hz, 6H, STol-CH3, Ts-CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 145.0, 138.8, 138.4, 135.1, 133.9, 133.4, 133.2, 132.9, 130.0, 129.9, 128.7, 128.4, 128.1, 128.1, 128.0, 127.8, 127.1, 127.0, 126.3, 126.2, 126.0, 88.1, 85.7, 77.4, 76.9, 76.5, 75.5, 75.3, 72.4, 68.6, 21.7, 21.3。
化合物１９：アルゴンガスの保護下で、化合物１８（２．９ｇ、４．５ｍｍоｌ）を無水テトラヒドロフラン（３３ｍＬ）に溶解し、水素化アルミニウムリチウム（８３７ｍｇ、２２．５ｍｍоｌ）を数回に分けて加え、室温で７時間撹拌反応し、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、氷水を滴加して反応を停止させた。過剰な水素化アルミニウムリチウムを除去し、ジクロロメタンで抽出し、順に１ｍｍоｌ Ｌ－１塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１→１０：１）、白い固体１９（１．３ｇ、２．５ｍｍоｌ、５５％）を得た。Rf = 0.53 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.04 ~ 6.83 (m, 16H, Ph), 5.10 ~ 4.69 (m, 4H, Ph-CH2), 4.43 (d, J= 9.7 H・z, 1H, 1-H), 3.59 (t, J = 8.8 Hz, 1H, 3-H), 3.51 ~ 3.40 (m, 2H, 2, 5-H), 3.20 (t, J = 9.1 Hz, 1H, 4-H), 2.33 (s, 3H, STol-CH3), 1.36 (d,J = 6.1 Hz, 3H, 6-H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 138.7, 138.5, 135.7, 133.6, 133.4, 133.1, 129.9, 128.6, 128.3, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 126.8, 126.2, 126.1, 88.4, 85.9, 83.0, 76.0, 75.5, 75.4, 73.1, 21.3, 18.5。
化合物４：アルゴンガスの保護下で、化合物１９（１．６ｇ、３．３ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１７ｍＬ）に溶解し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（８６７ｍｇ、４．２ｍｍоｌ）、レブリン酸（４８８ｍｇ、４．２ｍоｌ）、ジメチルアミノピリジン（４７５ｍｇ、３．９ｍｍоｌ）を加え、室温で３時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ろ過して不溶の白い固体を除去し、ジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１→１０：１）、白い固体４（１．９ｇ、３．２ｍｍоｌ、９６％）を得た。Rf = 0.53 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ: 7.77 ~ 6.79 (m, 16H, Ph), 5.00 ~ 4.94 (m, 2H, 2-H, Ph-CH2), 4.83 ~ 4.68 (m, 3H, Ph-CH2), 4.54 (d, J = 10.1 Hz, 1H, 1-H), 3.68 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 3-H), 3.45 (dq, J = 9.4, 6.1 Hz, 1H, 5-H), 3.29 (t, J= 9.2 Hz, 1H, 4-H), 2.73 (td, J = 6.7, 6.3, 3.0 Hz, 2H, Lev-CH2), 2.54 (qt, J = 17.2, 6.7 Hz, 2H, Lev-CH2), 2.32 (s, 3H, STol-CH3), 2.16 (s, 3H, Lev-CH3), 1.35 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6-H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 206.2, 171.5, 138.3, 138.2, 135.5, 133.3, 133.1, 129.7, 129.2, 128.5, 128.3, 128.0, 128.0, 127.8, 127.8, 126.9, 126.2, 126.1, 126.1, 86.4, 84.3, 83.2, 75.9, 75.5, 75.3, 72.7, 38.0, 30.0, 28.3, 21.3, 18.3。
実施例３ 糖ブロック５の合成は図３に示す。
化合物２０：アルゴンガスの保護下で、化合物８（１１．３ｇ、２８．７ｍｍоｌ）をメタノール（２５０ｍL）に溶解し、触媒量のナトリウムメトキシドを加え、室温で１２時間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、カチオン交換樹脂を加えてｐＨを５～６に調整し、ろ紙でろ過して樹脂を除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して茶色のシロップを得て、直接次の反応に仕込んだ。得られたシロップをジメチルホルムアミド（９０ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌し、ｐ－トルエンスルホン酸（７３５ｍｇ、３．９ｍｍоｌ）とベンズアルデヒドジメチルアセタール（５ｍＬ、３２．８ｍｍоｌ）を加え、６０℃に昇温して７時間反応させた。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミン（５ｍＬ）を加えて反応を停止させ、ジクロロメタン（３×１５０ｍＬ）で抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１→１：１）、白い固体２０（５．３ｇ、１６．９ｍｍоｌ、５９％（２ステップ反応の総収率））を得た。Rf = 0.21 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.35 ~ 7.54 (m, 5H, Ph), 5.32 (s, 1H, Ph-CH), 5.32 (d, J＝1.3 Hz, 1H, 1-H), 4.15 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.02 (dd, J＝3.4, 1.3 Hz, 1H, 2-H), 3.90 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 2.68 (m, 2H, SEt-CH2), 1.33 (s, 3H, SEt-CH3); 13C NMR (101MHz, CD3OD) δ: 139.3, 129.9, 129.0 127.5, 103.4, 87.3, 80.4, 74.3, 70.0, 69.6, 65.7, 26.0, 15.4; IR (KBr) ν: 3434, 2937, 1750, 1224, 1045 cm-1; HRMS ESI-TOF: [M + Na]+ calcd for C15H20O5SNa 335.0929; found 335.1031。
化合物５：アルゴンガスの保護下で、化合物２０（１．０３ｇ、３．３ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（２２ｍL）に溶解し、オルト酢酸トリエチル（６ｍＬ、３２．９ｍｍоｌ）とｐ－トルエンスルホン酸（１１３ｍｇ、０．６ｍｍоｌ）を加え、室温で２０分間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去した。得られた粗生成物を精製せずに直接次の反応に仕込んだ。８０％酢酸溶液（１１ｍＬ）を加え、室温で３０分間反応させ、原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｍＬ）で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１→４：１）、シロップ５（９７１ｍｇ、２．７ｍｍоｌ、８３％（２ステップ反応の総収率））を得た。Rf = 0.61 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.56 ~ 7.34 (m, 5H, Ph), 5.60 (s, 1H, Ph-CH), 5.30 (dd, J = 3.7, 1.3 Hz, 1H, 2-H), 5.27 (d, J = 1.3 Hz, 1H, 1-H), 4.29 ~ 4.23 (m, 2H, 5, 6-H), 4.20 ~ 4.16 (m, 1H, 3-H), 3.94 (t, J = 9.5 Hz, 1H, 4-H), 3.89 ~ 3.81 (m, 1H, 6'-H), 2.65 (qq, J = 12.9, 7.4 Hz, 2H, SEt-CH2), 2.43 (d, J = 4.0 Hz, 1H, 3-OH), 2.18 (s, 3H, OAc), 1.30 (t, J = 7.4 Hz, 3H, SEt-CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.6, 170.6, 137.2, 129.4, 129.4, 128.5, 128.5, 126.4, 102.4, 83.5, 83.4, 79.4, 77.4, 74.0, 74.0, 68.7, 67.9, 64.2, 64.2, 25.8, 21.2, 21.2, 15.0; IR (KBr) ν: 3451, 1739, 1229, 902 cm-1; HRMS ESI-TOF: [M + Na]+ calcd for C17H22O6SNa 337.1035; found 337.1039。
実施例４ 糖ブロック６の合成は図４に示す。
具体的な試験操作とステップは下記の通りである。
化合物２２：アルゴンガスの保護下で、化合物４（５５７ｍｇ、０．９３ｍｍоｌ）およびＮ－（ベンジル）－ベンジルオキシカルボニル－５－アミノ－１－ペンタノール（７００ｍｇ、２．１４ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（２ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（２５２ｍｇ、１．２ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（２０μＬ）を滴加し、氷浴で５時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、ジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→４：１）、シロップ２２（７１６ｇ、０．８９ｍｍоｌ、９６％）を得た。Rf = 0.28 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.18 ~ 6.82 (m, 22H, Ph), 5.17 (d, J = 3.6 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.99 (d, J = 3.6 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.97 (d, J = 1.9 Hz, 1H, 2-H), 4.86 ~ 4.67 (m, 3H, Ph-CH2), 4.49 (d, J = 6.1 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.31 (d, J = 7.4 Hz, 1H, 1-H), 3.78 (d, J= 12.3 Hz, 1H, linker-OCH2), 3.66 (t, J = 9.2 Hz, 1H, 3-H), 3.47 ~ 3.35 (m, 2H, 5-H), 3.31 (t, J = 9.1 Hz, 1H, 4-H), 3.27 ~ 3.12 (m, 2H, linker-NCH2), 2.77 ~ 2.57 (m, 2H, Lev-CH2), 2.47 (q, J= 7.0 Hz, 2H, Lev-CH2), 2.11 (s, 3H, Lev-CH3), 1.60 ~ 1.46 (m, 4H, linker-CH2), 1.32 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6-H), 1.28 ~ 1.10 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 206.2, 171.5, 156.8, 156.3, 138.4, 138.1, 136.9, 135.5, 133.4, 133.1, 128.6, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 128.3, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.4, 127.3, 126.9, 126.2, 126.1, 100.8, 83.5, 82.9, 77.4, 75.5, 75.1, 74.0, 71.5, 69.5, 67.2, 50.6, 50.3, 47.2, 46.3, 37.9, 30.0, 29.3, 28.1, 27.5, 23.2, 18.0。
化合物２３：アルゴンガスの保護下で、化合物２２（７１６ｍｇ、０．８９ｍｍоｌ）をジクロロメタン（４．８ｍL）に溶解し、メタノール（０．３ｍＬ）と酢酸ヒドラジン（１４０ｍｇ、１．５ｍｍоｌ）を加え、室温で４時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→４：１）、シロップ２３（５９５ｍｇ、０．８５ｍｍоｌ、９５％）を得た。Rf = 0.37 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.67 ~ 7.04 (m, 22H, Ph), 5.20 (d, J = 9.3 Hz, 2H, Ph-CH2), 5.10 ~ 4.80 (m, 2H, Ph-CH2), 4.86 (dd, J = 25.0, 11.2 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.51 (d, J = 8.9 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H, 1-H), 4.00 ~ 3.75 (m, 1H, linker-OCH2), 3.66 ~ 3.50 (m, 2H, 2, 3-H), 3.50 ~ 3.35 (m, 2H, 4-H, linker-OCH2), 3.35 ~ 3.15 (m, 3H, 5-H, linker-NCH2), 1.67 ~ 1.18 (m, 9H, 6-H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 156.9, 156.4, 138.9, 138.0, 136.9, 135.8, 133.4, 133.1, 128.6, 128.6, 128.3, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.4, 126.8, 126.2, 126.1, 126.0, 102.8, 84.5, 83.3, 77.4, 75.5, 75.2, 71.6, 70.0, 69.8, 67.3, 50.6, 50.4, 47.2, 46.2, 34.1, 29.3, 28.0, 27.5, 25.1, 23.4, 18.2, 0.1。
化合物２４：アルゴンガスの保護下で、塩化オキサリル（４．３ｍＬ、５０ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、－７８℃で撹拌した。アルゴンガスの保護下で、ジメチルスルホキシド（８．６ｍＬ、１００ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に滴加して溶解し、滴加終了後、－７８℃で１時間撹拌反応した。糖ブロック２３（３．５ｇ、５ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１４ｍＬ）に溶解し、アルゴンガスの保護下で反応系に滴加し、滴加終了後、－７８℃で０．５時間撹拌反応した。そして、アルゴンガスの保護下でトリエチルアミン（１４ｍＬ、１００ｍｍоｌ）を滴加し、白い固体が徐々に現れた。滴加終了後、－７８℃から室温までゆっくりと昇温し、１２時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで除水して乾燥させ、ろ過してスピンドライして溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：１）、生成物２４（３．２ｇ、４．６ｍｍоｌ、９１％）を得た。Rf = 0.37 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.85 ~ 7.07 (m, 22H, Ph), 5.20 ~ 5.07 (m, Ph-CH2), 5.05 ~ 4.97 (m, 2H, Ph-CH2), 4.76 (d, J = 11.2 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.57 (m, 2H, Ph-CH2), 4.17 (d, J= 9.0 Hz, 1H, 1-H), 3.87 ~ 3.65 (m, 2H, linker-OCH2, 5-H), 3.56 ~ 3.45 (m, 2H, 3, 4-H), 3.45 ~ 3.35 (m, 1H, linker-OCH2), 3.28 ~ 3.10 (m, 2H, linker-NCH2), 1.65 ~ 1.15 (m, 9H, 6-H, linker-CH2).13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 200.2, 197.5, 156.8, 156.3, 138.0, 137.5, 137.2, 136.9, 135.3, 135.1, 133.3, 133.3, 133.2, 128.6, 128.6, 128.6, 128.6, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.4, 127.3, 127.1, 126.9, 126.3, 126.3, 126.2, 126.2, 126.1, 125.9, 99.3, 85.9, 85.4, 82.0, 77.4, 76.8, 75.4, 73.6, 72.7, 72.5, 72.3, 72.1, 69.5, 67.3, 50.6, 50.3, 47.2, 46.2, 29.3, 28.0, 27.5, 23.3, 19.1, 18.2。
化合物２５：化合物２４とトルエンを共沸して３回除水し、アルゴンガスの保護下で、この化合物２４を無水エタノール（４０ｍＬ）に溶解し、温度を０℃に下げて撹拌し、水素化ホウ素ナトリウム（２５３ｍｇ、６．７ｍｍоｌ）を加え、０℃で３０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ろ過して不溶物を除去し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集して無水硫酸ナトリウムで除水して乾燥させ、ろ過してスピンドライして溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１→４：１）、シロップ２５（２．８ｇ、４．０ｍｍоｌ、８８％）を得た。Rf = 0.61 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.85 ~ 7.12 (m, 22H, Ph), 5.17 (m, 2H, Ph-CH2), 5.09 (d, J= 11.1 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.82 ~ 4.65 (m, 3H, Ph-CH2), 4.49 (d, J = 5.8 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.34 (d, J = 11.2 Hz, 1H, 1-H), 4.09 (s, 1H, 2-H), 3.83 (d, J = 15 Hz, 1H, linker-OCH2), 3.63 ~ 3.53 (m, 2H, 3-H, 4-H), 3.43 (d, J = 15 Hz, 1H, linker-OCH2), 3.34 (m, 1H, 5-H), 3.30 ~ 3.15 (m, 2H, linker-NCH2), 2.42 (d, J= 26.4 Hz, 1H, 2-OH), 1.65 ~ 1.65 (m, 4H, linker-CH2), 1.35 (d, J= 6.2 Hz, 3H, 6-H), 1.32 ~ 1.29 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 156.8, 156.3, 152.6, 138.0, 138.0, 137.0, 136.0, 133.4, 133.1, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.2, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.5, 127.4, 126.9, 126.8, 126.4, 126.3, 126.2, 126.0, 125.9, 102.3, 101.0, 99.7, 99.3, 81.6, 81.3, 79.8, 77.4, 75.6, 71.6, 71.4, 69.6, 69.4, 69.2, 68.9, 68.6, 67.3, 66.7, 50.6, 50.4, 47.2, 46.3, 29.5, 29.3, 28.0, 27.6, 23.4, 22.4, 18.1。
化合物２６：アルゴンガスの保護下で、化合物２５（２．８ｇ、４ｍｍоｌ）を乾燥下ピリジン（２０ｍL）に溶解して０℃に冷却し、無水酢酸（１ｍＬ）を滴加し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＡＰ）（９６．８ｍｇ、０．８ｍｍоｌ）を加え、氷浴で３０分間反応させ、室温に昇温して１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出し、順に１ｍｍоｌ Ｌ－１塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：１）、茶色のシロップ２６（２．８ｇ、３．８ｍｍоｌ、９５％）を得た。Rf = 0.52 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.85 ~ 7.05 (m, 22H, Ph), 5.60 (s, 1H, 2-H), 5.17 (d, J = 11.8 Hz, 2H, Ph-CH2), 5.07 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.77 (d, J = 11.1 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.52 (s, 1H, 1-H), 4.51 ~ 4.40 (m, 3H, Ph-CH2), 4.20 ~ 4.04 (m, 1H, linker-OCH2), 3.79 (ddd, J = 6.9, 5.7, 3.2 Hz, 1H, linker-OCH2), 3.64 (dd, J= 9.1, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 3.47 (t, J = 9.2 Hz, 1H, 4-H), 3.39 (dd, J= 9.4, 5.9 Hz, 1H, 5-H), 3.30 ~ 3.08 (m, 2H, linker-NCH2), 2.18 (s, 3H, OAc), 1.54 ~ 1.42 (m, 4H, linker-CH2), 1.39 (d, J = 6.0 Hz, 3H, 6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ:207.1, 170.8, 170.4, 156.9, 156.3, 138.1, 138.0, 137.8, 137.0, 136.9, 135.9, 135.1, 133.4, 133.3, 133.2, 133.2, 133.1, 129.8, 128.7, 128.7, 128.6, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.1, 126.9, 126.7, 126.4, 126.2, 126.2, 126.1, 126.0, 125.8, 98.9, 98.4, 97.1, 81.1, 80.3, 79.9, 75.6, 74.9, 73.9, 73.0, 72.9, 72.4, 72.2, 71.9, 71.8, 71.6, 69.6, 69.3, 69.0, 68.4, 67.3, 50.6, 50.3, 47.3, 46.3, 37.2, 32.1, 31.1, 30.2, 29.9, 29.6, 29.5, 29.3, 28.0, 27.6, 23.3, 22.8, 21.3, 21.1, 18.3, 18.2, 18.1, 14.3。
化合物６：アルゴンガスの保護下で、化合物２６（２．７ｇ、３．７ｍｍоｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、順に脱イオン水（１０ｍＬ）、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）（１．２ｇ、５．５ｍｍоｌ）を加え、室温で１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→７：３）、茶色のシロップ６（１．９ｇ、３．２ｍｍоｌ、８６％）を得た。Rf = 0.18 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.42 ~ 7.12 (m, 15H, Ph), 5.59 (s, 1H, 2-H), 5.18 (d, J = 11.5 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.78 (d, J = 11.1 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.52 ~ 4.42 (m, 3H, 1-H, Ph-CH2), 4.39 (d, J = 11.1 Hz, 1H, Ph-CH2), 3.91 ~ 3.70 (m, 1H, linker-OCH2), 3.52 (td, J= 9.3, 2.2 Hz, 1H, 4-H), 3.48 ~ 3.40 (m, 1H, linker-OCH), 3.38 (dd, J = 9.2, 3.1 Hz, 1H, 3-H), 3.33 (dd, J = 9.2, 6.1 Hz, 1H, 5-H), 3.30 ~ 3.15 (m, 2H, linker-NCH2), 2.32 (d, J = 2.2 Hz, 1H, 2-OH), 2.15 (s, 3H, OAc), 1.62 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.38 (d, J = 6.1 Hz, 3H, 6-H), 1.34 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.7, 170.5, 156.8, 156.3, 138.1, 137.4, 136.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.4, 98.9, 97.1, 79.9, 77.5, 77.4, 77.2, 76.8, 76.3, 73.1, 72.1, 71.7, 71.6, 71.3, 71.0, 70.1, 69.8, 68.7, 67.6, 67.3, 50.6, 50.3, 47.2, 46.3, 31.0, 29.3, 29.2, 28.0, 27.6, 23.3, 23.3, 21.2, 21.1, 18.1, 17.8。
実施例５ 二糖ブロック３０の合成は図５に示す。
具体的な試験操作とステップは下記の通りである。
化合物２８：化合物４（１００ｍｇ、０．１７ｍｍоｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍL）に溶解し、脱イオン水（１ｍＬ）を加え、ブロモスクシンイミド（７２．６ｍｇ、０．４１ｍｍоｌ）を加え、室温で７時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１ｍｍоｌ Ｌ－１飽和炭酸水素ナトリウム溶液と１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去して、Ｃ－１位がヒドロキシルである中間体を得て、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１→１：１）。得られた化合物をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、トリクロロアセトニトリル（３００μＬ）を加え、氷浴に１，８－ジアザビシクロウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（１５μＬ）を加えてから、室温で３時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１００：１→１０：１（１％トリエチルアミンを加えた））、化合物２７（８４ｍｇ、０．１３ｍｍоｌ、７８％（２ステップ反応の総収率））を得た。アルゴンガスの保護下で、化合物２７（８４ｍｇ、０．１３ｍｍоｌ）および５（９２ｍｇ、０．２６ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、－４０℃で１５分間撹拌した。トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（３μＬ）を加え、引き続き－４０℃で４時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミン（１ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：１）、標的二糖化合物２８（７７ｍｇ、０．０９ｍｍоｌ、７２％）を得た。Rf = 0.39 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.16 ~ 6.87 (m, 17H, Ph), 5.60 (s, 1H, Ph-CH), 5.17 (d, J= 1.5 Hz, 1H, Man1-H), 5.17 ~ 5.15 (m, 1H, Man2-H), 4.97 (dd, J = 9.2, 7.6 Hz, 1H, Rha2-H), 4.92 ~ 4.60 (m, 4H, Ph-CH2), 4.47 (d, J = 7.7 Hz, 1H, Rha1-H), 4.20 ~ 4.14 (m, 2H, Man4-H, Man6-H), 4.10 ~4.03 (m, 2H, Man3-H, Man4-H), 3.87 ~ 3.79 (m, 1H, Man6'-H), 3.58 (t, J = 9.0 Hz, 1H, Rha3-H), 3.41 ~ 3.33 (m, 1H, Rha5-H), 3.29 (t, J = 9.1 Hz, 1H, Rha4-H), 2.74 ~2.43 (m, 6H, Lev-CH2, SEt-CH2), 2.11 (m, 6H, Lev-CH3, OAc), 1.29 ~ 1.22 (m, 3H, SEt-CH3)1.21 (t, J= 6.4 Hz, 3H, Rha6-H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 206.5, 171.4, 171.4, 170.4, 138.3, 138.2, 138.1, 137.5, 137.5, 137.3, 135.7, 135.5, 134.3, 134.1, 133.4, 133.1, 132.2, 132.0, 130.3, 129.0, 129.0, 128.8, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.1, 128.0, 127.8, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 127.4, 127.3, 127.0, 126.9, 126.8, 126.7, 126.6, 126.5, 126.4, 126.3, 126.3, 126.2, 126.1, 125.8, 122.9, 122.7, 101.7, 101.6, 101.5, 83.6, 83.5, 83.4, 83.2, 82.9, 82.9, 82.9, 77.8, 77.4, 76.1, 76.0, 75.5, 75.3, 75.2, 75.0, 75.0, 74.9, 74.1, 72.8, 72.8, 71.8, 71.7, 71.7, 68.5, 64.9, 38.0, 30.0, 28.2, 25.7, 21.1, 18.0, 18.0, 18.0, 17.9, 15.1。
化合物２９：アルゴンガスの保護下で、化合物２９（３．５ｇ、４．２ｍｍоｌ）をジクロロメタン（３０ｍL）に溶解し、メタノール（６ｍＬ）と酢酸ヒドラジン（５８１ｍｇ、６．３ｍｍоｌ）を加え、室温で７時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→４：１）、シロップ２９（２．８ｇ、３．９ｍｍоｌ、９５％）を得た。Rf = 0.38 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.90 ~ 7.20 (m, 17H, Ph), 5.67 (s, 1H, Ph-CH), 5.46 (dd, J = 3.2, 1.5 Hz, 1H, Man2-H), 5.27 (d, J = 1.3 Hz, 1H, Man1-H), 5.14 ~4.92 (m, 2H, Ph-CH2), 4.85 ~ 4.73 (m, 2H, Ph-CH2), 4.40 (td, J= 6.2, 2.6 Hz, 1H, Rha1-H), 4.34 ~ 4.21 (m, 3H, Man3-H, Man5-H, Man6-H), 4.09 (td, J= 9.6, 3.0 Hz, 1H, Man4-H), 3.90 (m, 1H, Man6'-H), 3.66 (d, J= 2.2 Hz, 1H, Rha2-OH), 3.64 ~ 3.56 (m, 2H, Rha2-H, Rha3-H), 3.47 (dt, J = 9.1, 6.1 Hz, 1H, Rha5-H), 3.33 ~ 3.18 (m, 1H, Rha4-H), 2.65 (m, 3H, SEt-CH2), 2.21 (s, 3H, OAc), 1.37 ~ 1.25 (m, 6H, SEt-CH3, Rha6-H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 171.4, 138.9, 138.8, 137.7, 137.2, 137.2, 136.2, 134.4, 134.1, 132.3, 132.0, 130.3, 129.2, 128.7, 128.5, 128.5, 128.4, 128.2, 128.2, 128.2, 128.2, 128.1, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.3, 126.9, 126.8, 126.6, 126.5, 126.3, 126.3, 126.2, 126.2, 126.0, 125.9, 123.0, 122.5, 104.8, 104.7, 101.8, 84.2, 84.2, 84.1, 83.6, 83.3, 83.2, 82.9, 77.6, 77.4, 75.8, 75.7, 75.5, 75.4, 75.3, 75.3, 75.2, 75.2, 74.4, 73.9, 73.9, 72.0, 72.0, 68.6, 65.0, 25.6, 21.4, 18.3, 18.3, 18.2, 18.2, 15.0。
化合物３０：アルゴンガスの保護下で、塩化オキサリル（１ｍＬ、１１ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１３ｍＬ）に溶解し、－７８℃で撹拌した。アルゴンガスの保護下で、ジメチルスルホキシド（１．７ｍＬ、２２ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（４．５ｍＬ）に滴加して溶解し、滴加終了後、－７８℃で１時間撹拌反応した。糖ブロック３０（１．６ｇ、２．２ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１４ｍＬ）に溶解し、アルゴンガスの保護下で反応系に滴加し、滴加終了後、－７８℃で０．５時間撹拌反応した。そして、アルゴンガスの保護下でトリエチルアミン（３．１ｍＬ、２２ｍｍоｌ）を滴加し、白い固体が徐々に現れた。滴加終了後、－７８℃で３時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで除水して乾燥させ、ろ過してスピンドライして溶媒を除去し、分離精製せずに直接次の反応に仕込んだ。粗生成物とトルエンを共沸して３回除水し、アルゴンガスの保護下で無水エタノール（１６ｍＬ）に溶解し、温度を０℃に下げて水素化ホウ素ナトリウム（１２５ｍｇ、３．３ｍｍоｌ）を加え、０℃で３０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ろ過して不溶物を除去し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集して無水硫酸ナトリウムで除水して乾燥させ、ろ過してスピンドライして溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１→４：１）シロップを得た。生成物を無水ピリジン（１１ｍＬ）に溶解して０℃に冷却し、無水酢酸（１ｍＬ）を滴加し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＡＰ）（５４ｍｇ、０．４４ｍｍоｌ）を加え、氷浴で３０分間反応させ、室温に昇温して１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、順に１ｍｍоｌ Ｌ－１塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：１）、茶色のシロップ３１（１．５ｇ、１．９ｍｍоｌ、８８％）を得た。Rf = 0.38 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.20 (m, 17H, Ph), 5.59 (d, J = 1.8 Hz, 1H, Ph-CH), 5.52 (d, J= 2.8 Hz, 1H, Rha2-H), 5.39 (dt, J = 3.7, 2.0 Hz, 1H, Man2-H), 5.24 (d, J= 1.5 Hz, 1H, Man1-H), 5.23 ~ 4.68 (m, 4H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.47 (dd, J = 13.7, 11.1 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.33 ~ 4.18 (m, 3H, Man3-H, Man5-H, Man6-H), 4.04 (t, J= 9.7 Hz, 1H, Man4-H), 3.92 ~ 3.83 (m, 1H, Man6'-H), 3.63 (ddd, J = 8.9, 5.3, 3.3 Hz, 1H, Rha3-H), 3.53 ~ 3.42 (m, 1H, Rha4-H), 3.37 (m, 1H, Rha5-H), 2.74 ~ 2.50 (m, 2H, SEt-CH2), 2.19 (s, 3H, OAc), 2.07 (s, 3H, OAc), 1.39 ~ 1.36 (m, 3H, Rha6-H), 1.30 (td, J = 7.4, 0.9 Hz, 3H, SEt-CH3); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ:170.8, 170.4, 170.4, 137.9, 137.8, 137.8, 137.7, 137.6, 136.3, 136.0, 134.3, 134.1, 133.4, 133.1, 132.3, 132.0, 130.3, 130.0, 129.1, 128.7, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.5, 127.4, 127.3, 127.1, 127.0, 126.8, 126.8, 126.6, 126.6, 126.5, 126.3, 126.2, 126.0, 125.9, 123.0, 122.6, 101.8, 96.7, 96.7, 96.7, 83.6, 80.2, 80.2, 80.1, 80.0, 79.9, 79.8, 79.7, 78.1, 78.0, 77.4, 75.5, 75.3, 75.2, 74.9, 72.2, 72.2, 72.1, 71.6, 71.6, 71.5, 71.3, 71.2, 68.7, 68.0, 67.9, 67.9, 64.7, 31.0, 25.7, 21.2, 21.1, 21.1, 18.2, 18.1, 18.1, 15.0。
実施例６ オリゴ糖フラグメントの合成は図６に示す。
具体的な試験操作とステップは下記の通りである。
化合物３１：アルゴンガスの保護下で、化合物３（８６．６ｍｇ、０．１５ｍｍоｌ）および化合物６（５９．８ｍｇ、０．１ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）と無水ジエチルエーテル（１ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（２６．７ｍｇ、０．１２ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（３．６μＬ）を滴加し、氷浴で５時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→４：１）、シロップ３１（８９．５ｍｇ、０．０８ｍｍоｌ、８０％）を得た。Rf = 0.44 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.40 ~ 7.10 (m, 35H, Ph), 5.58 (s, 1H, Rha2-H), 5.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H, Man1-H), 5.20 ~ 5.11 (m, 2H, Ph-CH2), 4.87 ~ 4.35 (m, 10H, R1-H, Ph-CH2), 4.30 ~ 4.16 (m, 3H, Ph-CH2), 4.01 (t, J = 9.5 Hz, 1H, Man5-H), 3.90 ~ 3.73 (m, 4H, Man3-H, Man4-H, Man6-H), 3.71 ~ 3.62 (m, 3H, Man2-H, Rha4-H, linker-OCH), 3.47 (dd, J = 9.3, 2.9 Hz, 1H, Rha3-H), 3.40 (d, J = 18.3 Hz, 1H, linker-OCH), 3.31 (dd, J = 9.2, 6.1 Hz, 1H, Rha4-H), 3.22 (d, J = 23.8 Hz, 2H, linker-NCH2), 2.15 (s, 3H, OAc), 1.53 (s, 4H, linker-CH2), 1.39 (d, J = 6.1 Hz, 3H, Rha6-H), 1.32 ~ 1.19 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.6, 156.8, 156.3, 138.9, 138.8, 138.5, 138.5, 138.1, 137.5, 137.0, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.6, 127.6, 127.5, 127.4, 127.2, 100.3, 100.0, 98.7, 98.4, 95.4, 80.7, 80.2, 79.9, 78.7, 77.4, 76.4, 76.1, 75.2, 74.9, 74.6, 74.5, 74.2, 73.5, 72.9, 72.5, 72.1, 72.0, 71.5, 71.4, 71.1, 69.8, 69.3, 69.1, 67.6, 67.3, 65.1, 50.6, 50.3, 47.2, 46.3, 29.8, 29.2, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.0, 18.6。
化合物３２：アルゴンガスの保護下で、化合物３０（２８６．６ｍｇ、０．３７ｍｍоｌ）および化合物６（１８７．２ｍｇ、０．３１ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（５ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（１０４．６ｍｇ、０．４７ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１２μＬ）を滴加し、氷浴で６時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：１）、シロップ３２（２５７．１ｍｇ、０．２０ｍｍоｌ、６３％）を得た。Rf = 0.21 (PE : EA = 7 : 3). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.12 (m, 32H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2c-H), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.52 (d, J = 2.9 Hz, 1H, Rha2a-H), 5.42 (td, J = 3.2, 1.5 Hz, 1H, Man2-H), 5.30 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1-H), 5.25 ~ 4.65 (m, 8H, Rha1a-H, Ph-CH2), 4.55 ~ 4.35 (m, 4H, Rha1c-H, Ph-CH2), 4.24 ~ 4.15 (m, 2H, Man3-H, Man6-H), 3.99 ~ 3.88 (m, 2H, Man4-H, linker-OCH), 3.80 (t, J = 9.7 Hz, 2H, Man5-H, Man6'-H), 3.70 ~ 3.55 (m, 3H, Rha3a-H, Rha3c-H, linker-OCH), 3.53 ~ 3.30 (m, 4H, Rha4a-H, Rha4c-H, Rha5a-H, Rha5c-H,), 3.30 ~ 3.13(m, 2H, linker-NCH2), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.37 (m, 6H, Rha6a-H, Rha6c-H), 1.36 ~ 1.17 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.9, 170.8, 170.6, 170.5, 170.0, 170.0, 156.8, 156.3, 138.1, 137.9, 137.8, 137.7, 137.6, 137.5, 137.0, 136.2, 136.0, 134.3, 134.1, 133.4, 133.1, 132.3, 130.3, 130.0, 129.0, 129.0, 128.8, 128.8, 128.7, 128.7, 128.6, 128.5, 128.5, 128.5, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.5, 127.5, 127.4, 127.3, 127.0, 126.8, 126.8, 126.7, 126.6, 126.3, 126.2, 126.0, 125.9, 122.9, 122.7, 101.5, 100.2, 98.8, 98.4, 96.6, 96.5, 80.2, 80.1, 80.0, 79.8, 79.7, 78.3, 77.4, 75.7, 75.5, 75.2, 73.2, 72.1, 72.0, 72.0, 71.9, 71.4, 71.3, 71.2, 70.9, 70.9, 69.8, 69.1, 69.1, 68.6, 68.0, 67.9, 67.6, 67.3, 64.8, 50.6, 50.4, 47.2, 46.3, 29.4, 29.2, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.1, 21.1, 21.0, 20.9, 18.7, 18.2, 18.2, 18.2, 17.8。
化合物３３：アルゴンガスの保護下で、化合物３２（６１．７ｍｇ、０．０４７ｍｍоｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、順に脱イオン水（０．５ｍＬ）、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）（１５．７ｍｇ、０．０７ｍｍоｌ）を加え、室温で５時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→１：１）、茶色のシロップ３３（３８．５ｍｇ、０．０３３ｍｍоｌ、７０％）を得た。Rf = 0.21 (PE : EA = 3 : 2). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.58 ~ 7.12 (m, 25H, Ph), 5.61 (d, J = 3.1 Hz, 1H, Rha2c-H), 5.58 (s, 1H, Ph-CH), 5.49 (d, J = 3.1 Hz, 1H, Rha2a-H), 5.42 (dd, J = 3.6, 1.2 Hz, 1H, Man2-H), 5.31 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1-H), 5.25 ~ 4.65 (m, 5H, Rha1a-H, Ph-CH2), 4.55 ~ 4.35 (m, 5H, Rha1c-H, Ph-CH2), 4.24 ~ 4.10 (m, 2H, Man3-H, Man6-H), 3.99 ~ 3.88 (m, 2H, Man4-H, linker-OCH), 3.85 ~ 3.77 (m, 2H, Man5-H, Man6'-H), 3.68 ~ 3.55 (m, 2H, Rha3c-H, linker-OCH), 3.55 ~ 3.30 (m, 4H, , Rha3c-H, Rha4a-H, Rha4c-H, Rha5a-H), 3.30 ~ 3.13(m, 3H, Rha5c-H, linker-NCH2), 2.25 (d, J = 2.2 Hz, 1H, Rha4a-OH), 2.13 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.06 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.41 (d, J = 6.1 Hz, 1H, Rha6a-H), 1.35 (d, J = 6.1 Hz, 1H, Rha6c-H) , 1.33 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.8, 170.6, 170.0, 156.3, 138.1, 137.6, 137.5, 137.0, 129.0, 128.9, 128.7, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.4, 126.2, 101.5, 100.2, 98.8, 96.6, 80.1, 79.7, 77.6, 77.4, 72.3, 72.0, 71.5, 71.2, 71.1, 70.9, 69.8, 69.1, 68.6, 67.7, 67.3, 67.2, 64.8, 50.6, 50.4, 47.3, 46.3, 29.3, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.0, 21.0, 18.7, 17.8。
化合物３４：アルゴンガスの保護下で、化合物３３（２３８．５ｍｇ、０．０３３ｍｍоｌ）および化合物３（２８．７ｍｇ、０．０４９ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）と無水ジエチルエーテル（１ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（８．９ｍｇ、０．０４ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．２μＬ）を滴加し、氷浴で５時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→７：３）、シロップ３４（２９．５ｍｇ、０．０１７ｍｍоｌ、５３％）を得た。Rf = 0.43 (PE : EA = 3 : 2). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.58 ~ 7.05 (m, 45H, Ph), 5.62 (s, 1H, Rha2d-H), 5.58 (s, 1H, Ph-CH), 5.49 (d, J = 3.1 Hz, 1H, Rha2b-H), 5.42 (dd, J = 3.6, 1.2 Hz, 1H, Man2c-H), 5.31 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1a-H, Man1c-H), 5.25 ~ 4.10 (m, 20H, Rha1b-H, Rha1d-H, Ph-CH2), 4.30 ~ 4.10 (m, 6H, Man3c-H, Man6c-H), 4.05 ~ 3.76 (m, 10H), 3.75 ~ 3.58 (m, 7H), 3.52 ~ 3.35 (m, 3H, Rha5b-H), 3.32 ~ 3.15 (m, 4H, Rha5d-H, linker-NCH2), 2.14 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.07 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.42 (d, J = 6.1 Hz, 3H, Rha6b-H), 1.37 (d, J = 6.1 Hz, 3H, Rha6d-H), 1.34 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 207.0, 192.5, 170.8, 170.6, 170.6, 170.2, 170.1, 170.0, 156.3, 138.9, 138.8, 138.8, 138.8, 138.6, 138.5, 138.5, 138.4, 138.1, 137.5, 137.3, 137.0, 134.6, 129.9, 129.1, 129.0, 128.7, 128.7, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.5, 127.3, 127.2, 126.3, 126.1, 101.4, 100.2, 100.1, 100.0, 99.5, 98.7, 96.9, 96.2, 80.4, 80.2, 80.2, 80.1, 79.9, 78.7, 78.4, 77.9, 77.6, 77.4, 77.2, 77.2, 76.9, 76.0, 75.3, 75.0, 73.5, 73.0, 72.9, 72.6, 72.1, 72.1, 72.0, 71.8, 71.6, 71.5, 71.2, 71.1, 71.0, 70.9, 70.8, 69.8, 69.4, 69.4, 68.9, 68.6, 68.6, 67.6, 67.3, 67.2, 67.2, 66.2, 64.8, 62.6, 50.6, 50.3, 47.2, 46.3, 31.1, 29.2, 28.1, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.0, 21.0, 20.7, 18.9, 18.7, 18.6, 18.5。
化合物３５：アルゴンガスの保護下で、化合物３０（４８８．６ｍｇ、０．６３ｍｍоｌ）および化合物３３（６１９．７ｍｇ、０．５３ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（１７９ｍｇ、０．８ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（２３．６μＬ）を滴加し、氷浴で５時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→７：３）、シロップ３５（７２０．２ｍｇ、０．３８ｍｍоｌ、７２％）を得た。Rf = 0.44 (PE : EA = 3 : 2). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.05 (m, 42H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2e-H), 5.58 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 1H, Ph-CH), 5.52 (d, J = 2.2 Hz, 1H, Rha2a-H), 5.48 (d, J = 2.6 Hz, 1H, Rha2c-H), 5.41 (dd, J = 3.8, 1.9 Hz, 2H, Man2b-H, Man2d-H), 5.28 (d, J = 2.0 Hz, 2H, Man1b-H, Man1d-H), 5.25 ~ 4.62 (m, 9H, Rha1a-H, Rha1c-H, Ph-CH2), 4.56 ~ 4.34 (m, 6H, , Rha1e-H, Ph-CH2), 4.26 ~ 4.12 (m, 4H, Man3b-H, Man3d-H, Man6b-H, Man6d-H), 3.99 ~ 3.85 (m, 4H, Man4b-H, Man4d-H, linker-OCH2), 3.84 ~ 3.72 (m, 3H), 3.70 ~ 3.34 (m, 9H), 3.31 (dd, J = 7.9, 6.2 Hz), 3.28 ~ 3.12 (m, 2H, linker-NCH2), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.10 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 9H, Rha6-H), 1.34 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 177.1, 170.9, 170.7, 170.6, 170.1, 170.0, 138.1, 137.9, 137.7, 137.5, 137.5, 137.0, 137.0, 136.2, 136.0, 134.1, 133.4, 133.1, 132.3, 132.0, 130.3, 129.1, 129.0, 128.9, 128.7, 128.6, 128.6, 128.5, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.8, 127.8, 127.7, 127.5, 127.4, 127.3, 126.9, 126.8, 126.7, 126.6, 126.2, 126.2, 126.0, 125.8, 122.9, 122.6, 101.6, 101.5, 100.3, 100.2, 100.1, 98.8, 96.4, 96.3, 96.1, 80.2, 80.2, 80.0, 79.7, 79.5, 77.7, 77.4, 77.3, 75.5, 75.3, 75.2, 72.1, 72.0, 71.9, 71.5, 71.4, 71.2, 71.0, 70.9, 70.9, 69.8, 69.1, 68.8, 68.6, 68.0, 67.9, 67.6, 67.3, 64.8, 50.6, 50.4, 47.2, 46.3, 29.7, 29.2, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.1, 21.0, 21.0, 20.9, 18.7, 18.7, 18.2, 18.2, 18.2。
化合物３６：アルゴンガスの保護下で、化合物３５（４５．４ｍｇ、０．０２４ｍｍоｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、順に脱イオン水（０．５ｍＬ）、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）（８ｍｇ、０．０３６ｍｍоｌ）を加え、室温で１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→１：１）、茶色のシロップ３３（２０．２ｍｇ、０．０１２ｍｍоｌ、５０％）を得た。Rf = 0.22 (PE : EA = 3 : 2). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.53 ~ 7.10 (m, 35H, Ph), 5.61 (s, 1H, Rha2e-H), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 1H, Ph-CH), 5.49 (d, J = 3.6 Hz, 2H, Rha2a-H, Rha2c-H), 5.40 (dd, J= 3.6, 1.6 Hz, 2H, Man2b-H, Man2d-H), 5.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H, Man1d-H), 5.28 (d, J = 1.6 Hz, 1H, Man1b-H), 5.17 (d, J = 10.8 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.78 ~ 4.62 (m, 5H, Rha1a-H, Rha1c-H, Ph-CH2), 4.53 ~ 4.33 (m, 7H, Rha1e-H, Ph-CH2), 4.26 ~ 4.12 (m, 4H, Man3b-H, Man3d-H, Man6b-H, Man6d-H), 3.99 ~ 3.85 (m, 4H, Man4b-H, Man4d-H, linker-OCH2), 3.84 ~ 3.72 (m, 3H), 3.70 ~ 3.34 (m, 12H), 3.35 ~ 3.12 (m, 4H, , Rha5-H, linker-NCH2), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.10 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.06 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.41 (d, J = 6.1 Hz, 3H, Rha6e-H), 1.36 (d, J = 6.1 Hz, 6H, Rha6a-H, Rha6c-H), 1.34 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 170.8, 170.7, 170.7, 170.6, 170.6, 170.2, 170.1, 170.1, 138.1, 137.5, 137.4, 137.0, 137.0, 129.1, 129.0, 128.9, 128.9, 128.7, 128.7, 128.6, 128.6, 128.4, 128.4, 128.3, 128.1, 128.0, 128.0, 127.4, 126.2, 126.2, 101.6, 101.5, 100.3, 100.2, 98.8, 96.4, 96.1, 80.2, 79.7, 79.5, 77.7, 77.6, 77.4, 72.4, 71.9, 71.5, 71.2, 71.0, 70.9, 70.9, 69.8, 69.0, 68.8, 68.6, 67.6, 67.3, 67.3, 67.2, 64.8, 50.6, 50.4, 47.2, 46.3, 29.3, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.0, 21.0, 21.0, 20.9, 18.7, 18.7, 17.8。
化合物３７：アルゴンガスの保護下で、化合物３６（２０．２ｍｇ、０．０１２ｍｍоｌ）および化合物３（３３．８ｍｇ、０．０５８ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）と無水ジエチルエーテル（１ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（１３．５ｍｇ、０．０６ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．５μＬ）を滴加し、氷浴で８時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→２：１）、シロップ３７（２１．１ｍｇ、０．００９ｍｍоｌ、７８％）を得た。Rf = 0.32 (PE : EA = 3 : 2). 1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ: 7.53 ~ 7.10 (m, 55H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2f-H), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 1H, Ph-CH), 5.48 (d, J = 3.2 Hz, 2H, Rha2b-H, Rha2d-H), 5.40 (d, J = 3.8 Hz, 2H, Man2c-H, Man2e-H), 5.30 (d, J = 2.1 Hz, 1H, Man1e-H), 5.29 (d, J = 1.4 Hz, 1H, Man1c-H), 5.27 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1a-H), 5.17 (d, J = 11.2 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.84 (d, J = 10.6 Hz, 1H, Ph-CH2), 4.75 ~ 4.58 (m, 10H), 4.55 ~ 4.35 (m, 8H), 4.30 ~ 4.10 (m, 9H), 4.00 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.95 ~ 3.75 (m, 12H), 3.73 ~ 3.55 (m, 9H), 3.51 ~ 3.35 (m, 4H), 3.32 ~ 3.20 (m, 4H),3.19 (s, 1H, linker-NCH2), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.08 (s, 3H, OAc), 2.06 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.45 ~ 1.33 (m, 9H, Rha6-H), 1.34 ~ 1.20 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ: 170.6, 170.5, 170.0, 138.7, 138.4, 137.4, 136.9, 128.9, 128.7, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.7, 127.6, 127.4, 127.1, 126.1, 126.0, 101.5, 101.3, 100.1, 99.8, 98.6, 95.9, 80.1, 79.8, 78.5, 77.2, 77.0, 76.8, 75.9, 75.2, 74.8, 73.4, 72.8, 72.0, 71.8, 71.6, 71.3, 71.1, 70.9, 70.8, 70.7, 69.3, 68.8, 68.7, 68.4, 67.5, 67.1, 64.6, 53.4, 31.6, 29.1, 29.1, 23.2, 22.7, 21.0, 20.9, 20.9, 20.8, 18.6, 18.5, 18.5, 14.2, 14.1, 11.4。
化合物３８：アルゴンガスの保護下で、化合物３０（１１９．１ｍｇ、０．１５ｍｍоｌ）および化合物３６（１３４．６ｍｇ、０．０７７ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（５ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（３９．８ｍｇ、０．１８ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（５μＬ）を滴加し、氷浴で１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、ジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→２：１）、シロップ３８（１２７．６ｍｇ、０．０５２ｍｍоｌ、６７％）を得た。Rf = 0.58 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.10 (m, 52H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2g-H), 5.58 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 2H, Ph-CH), 5.53 (d, J = 2.9 Hz, 1H, Rha2a-H), 5.49 (d, J = 2.4 Hz, 2H, Rha2c-H, Rha2e-H), 5.40 (m, 3H, Man2-H), 5.29 (d, J = 1.5 Hz, 2H, Man1d-H, Man1f-H), 5.27 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1b-H), 5.18 (m, 2H, Ph-CH2), 4.80 ~ 4.62 (m, 7H, Rha1a-H, Rha1c-H, Rha1e-H, Ph-CH2), 4.55 ~ 4.33 (m, 7H, Rha1g-H, Ph-CH2), 4.28 ~ 4.18 (m, 6H, Man3-H, Man6-H), 4.05 ~ 3.85 (m, 6H, Man4-H, linker-OCH2), 3.84 ~ 3.73 (m, 6H), 3.70 ~ 3.55 (m, 8H), 3.55 ~ 3.12 (m, 10H, , Rha5-H, linker-NCH2), 2.13 ~ 2.00 (m, 21H, 7OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 12H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ: 177.2, 170.9, 170.7, 170.6, 170.1, 170.1, 170.1, 138.1, 137.9, 137.8, 137.7, 137.5, 137.5, 137.1, 137.0, 136.2, 136.0, 134.3, 134.1, 133.4, 133.1, 132.3, 131.0, 130.3, 129.1, 129.0, 129.0, 128.9, 128.8, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.9, 127.8, 127.7, 127.5, 127.4, 127.3, 126.9, 126.8, 126.6, 126.6, 126.2, 126.2, 126.0, 125.8, 122.9, 122.6, 101.6, 101.6, 100.2, 98.8, 96.4, 96.3, 96.0, 95.9, 93.7, 80.2, 80.2, 80.1, 80.0, 79.7, 79.7, 79.5, 77.8, 77.6, 77.4, 75.5, 75.2, 72.1, 72.0, 71.9, 71.8, 71.4, 71.3, 71.2, 71.0, 70.9, 69.8, 69.0, 68.8, 68.7, 68.6, 68.0, 67.9, 67.6, 67.3, 65.7, 64.7, 50.4, 47.2, 46.3, 30.7, 29.7, 29.3, 28.0, 23.3, 21.1, 21.0, 20.9, 19.3, 18.7, 18.7, 18.6, 18.2, 18.1, 13.8。
化合物３９：アルゴンガスの保護下で、化合物３８（１２７．６ｍｇ、０．０５２ｍｍоｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、順に脱イオン水（０．５ｍＬ）、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）（１７．４ｍｇ、０．０７８ｍｍоｌ）を加え、室温で９時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：２）、茶色のシロップ３９（７８．５ｍｇ、０．０３４ｍｍоｌ、６５％）を得た。Rf = 0.42 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.53 ~ 7.12 (m, 45H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2g-H), 5.58 (s, 1H, Ph-CH), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 1H, Ph-CH), 5.49 (m, 3H, Rha2-H), 5.43 ~ 5.38 (m, 3H, Man2-H), 5.31 ~ 5.25 (m, 3H, Man1-H), 5.21 ~ 5.12 (m, 2H, Ph-CH2), 4.78 ~ 4.62 (m, 7H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.53 ~ 4.34 (m, 7H, Rha1g-H, Ph-CH2), 4.26 ~ 4.13 (m, 6H, Man3-H, Man6-H), 4.05 ~ 3.86 (m, 6H, Man4-H, linker-OCH2), 3.85 ~ 3.73 (m, 5H, Man5-H), 3.68 ~ 3.55 (m, 6H, Rha3-H), 3.55 ~ 3.12 (m, 10H, Rha5-H, linker-NCH2), 2.27 (d, J = 2.1 Hz, 1H, Rha4a-OH), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.10 (s, 6H, OAc), 2.09 (s, 3H, OAc), 2.06 (s, 3H, OAc), 2.04 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 12H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ:。
化合物４０：アルゴンガスの保護下で、化合物３９（１６．１ｍｇ、０．００７ｍｍоｌ）および化合物３（２０．３ｍｇ、０．０３５ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）と無水ジエチルエーテル（１ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（７．９ｍｇ、０．０３５ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．３μＬ）を滴加し、氷浴で８時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：２）、シロップ４０（１３．８ｍｇ、０．００５ｍｍоｌ、６９％）を得た。Rf = 0.65 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.10 (m, 65H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2h-H), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.57 (s, 1H, Ph-CH), 5.56 (s, 1H, Ph-CH), 5.48 (m, 3H, Rha2-H), 5.43 ~ 5.37 (m, 3H, Man2-H), 5.30 (d, J = 1.9 Hz, 1H, Man1-H), 5.29 (d, J = 1.4 Hz, 1H, Man1-H), 5.26 (d, J = 1.5 Hz, 1H, Man1-H), 5.17 (d, J = 20.03 Hz, 3H, Ph-CH2), 4.90 ~ 4.10 (m, 33H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.05 ~ 3.57 (m, 26H), 3.50 ~ 3.10 (m, 10H, Rha5-H, linker-NCH2), 2.12 (s, 3H, OAc), 2.10 (s, 6H, OAc), 2.09 (s, 6H, OAc), 2.07 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 2.03 (s, 3H, OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 12H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 192.5, 170.8, 170.7, 170.6, 170.1, 170.1, 170.1, 138.9, 138.9, 138.6, 138.6, 138.1, 137.5, 137.5, 137.1, 137.0, 134.6, 129.9, 129.1, 129.1, 129.0, 129.0, 128.9, 128.8, 128.8, 128.7, 128.7, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.1, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 127.8, 127.8, 127.7, 127.7, 127.5, 127.5, 127.3, 127.2, 126.2, 126.2, 126.1, 101.6, 101.5, 101.4, 100.4, 100.3, 100.2, 100.0, 98.8, 96.1, 96.0, 95.9, 80.3, 80.2, 79.9, 79.7, 79.6, 78.7, 77.8, 77.7, 76.1, 75.3, 75.0, 73.6, 73.0, 72.1, 72.0, 71.8, 71.7, 71.5, 71.2, 71.0, 70.9, 70.9, 70.9, 69.4, 69.0, 68.8, 68.8, 68.6, 68.6, 67.6, 67.3, 64.7, 64.7, 64.7, 50.7, 50.3, 47.2, 46.3, 29.3, 28.0, 27.6, 23.3, 21.1, 21.1, 21.0, 21.0, 21.0, 18.9, 18.7, 18.7, 18.7, 18.7。
化合物４１：アルゴンガスの保護下で、化合物３０（５２．４ｍｇ、０．０６８ｍｍоｌ）および化合物３９（７８．５ｍｇ、０．０３４ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（２ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（１７．６ｍｇ、０．０７８ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．２μＬ）を滴加し、氷浴で１０時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：２）、シロップ４１（５６．５ｍｇ、０．０１９ｍｍоｌ、５５％）を得た。Rf = 0.36 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.35 ~ 7.05 (m, 62H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2i-H), 5.58 ~ 5.54 (m, 4H, Ph-CH), 5.51 (d, J = 2.7 Hz, 1H, Rha2-H), 5.48 (d, J = 2.4 Hz, 3H, Rha2-H), 5.43 ~ 5.37 (m, 4H, Man2-H), 5.31 ~ 5.24 (m, 4H, Man1-H), 5.22 ~ 4.28 (m, 21H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.26 ~ 4.13 (m, 8H, Man3-H, Man6-H ), 3.98 ~ 3.86 (m, 9H), 3.85 ~ 3.70 (m, 6H), 3.69 ~ 3.54 (m, 10H, Rha3-H), 3.53 ~ 3.11 (m, 11H, Rha5-H, linker-NCH2), 2.13 ~ 2.00 (m, 27H, 9OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 15H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ:。
化合物４２：アルゴンガスの保護下で、化合物４１（５６．５ｍｇ、０．０１９ｍｍоｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、順に脱イオン水（０．５ｍＬ）、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）（６．３ｍｇ、０．０２８ｍｍоｌ）を加え、室温で９時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、ジクロロメタンで抽出し、１０％（ｗ／ｗ）チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ紙でろ過して硫酸ナトリウムを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：２）、茶色のシロップ４２（２７．７ｍｇ、０．０１ｍｍоｌ、５３％）を得た。Rf = 0.36 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.55 ~ 7.10 (m, 55H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2i-H), 5.58 ~ 5.54 (m, 4H, Ph-CH), 5.49 (d, J = 2.6 Hz, 4H, Rha2-H), 5.40 (dq, J = 3.8, 1.8 Hz, 4H, Man2-H), 5.28 (t, J = 2.0 Hz, 2H, Man1-H), 5.26 (d, J = 1.6 Hz, 2H, Man1-H), 5.17 (d, J = 10.3 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.78 ~ 4.61 (m, 9H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.54 ~ 4.27 (m, 9H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.26 ~ 4.11 (m, 8H, Man3-H, Man6-H), 3.96 ~ 3.86 (m, 8H), 3.85 ~ 3.70 (m, 6H), 3.69 ~ 3.54 (m, 8H, Rha3-H), 3.53 ~ 3.11 (m, 11H, Rha5-H, linker-NCH2), 2.13 ~ 2.00 (m, 27H, 9OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.33 (m, 15H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ:。
化合物２：アルゴンガスの保護下で、化合物４２（２７．７ｍｇ、０．００９ｍｍоｌ）および化合物３（２６．３ｍｇ、０．０４５ｍｍоｌ）をトルエンに溶解し、ロータリーエバポレーションにより３回除水し、オイルポンプ上に置いて一晩真空引きした。予め活性化された４Åのモレキュラーシーブを加え、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）と無水ジエチルエーテル（１ｍＬ）を加え、ヨードスクシンイミド（１０．１ｍｇ、０．０４５ｍｍоｌ）を加え、０℃に冷却し、３０分間撹拌し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．５μＬ）を滴加し、氷浴で８時間撹拌反応した。原料の完全反応をＴＬＣでモニターした後、トリエチルアミンを加えて反応をクエンチし、珪藻土をサンドコア漏斗に加え、ろ過してモレキュラーシーブを除去し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１→３：２）、シロップ２（２１．１ｍｇ、０．００６ｍｍоｌ、６９％）を得た。Rf = 0.55 (PE : EA = 1 : 1). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.55 ~ 7.10 (m, 75H, Ph), 5.60 (s, 1H, Rha2-H), 5.58 ~ 5.54 (m, 4H, Ph-CH), 5.48 (d, J = 2.9 Hz, 4H, Rha2-H), 5.40 (m, 4H, Man2-H), 5.29 (t, J= 1.8 Hz, 2H, Man1-H), 5.26 (d, J = 1.5 Hz, 3H, Man1-H), 5.17 (d, J= 12.4 Hz, 2H, Ph-CH2), 4.88 ~ 4.58 (m, 14H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.55 ~ 4.25 (m, 12H, Rha1-H, Ph-CH2), 4.24 ~ 4.13 (m, 10H, Man3-H, Man6-H), 4.01 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 3.96 ~ 3.86 (m, 8H), 3.85 ~ 3.70 (m, 8H), 3.72 ~ 3.53 (m, 12H, Rha3-H), 3.53 ~ 3.11 (m, 10H, Rha5-H, linker-NCH2), 2.15 ~ 1.98 (m, 27H, 9OAc), 1.63 ~ 1.45 (m, 4H, linker-CH2), 1.43 ~ 1.32 (m, 15H, Rha6-H), 1.33 ~ 1.18 (m, 2H, linker-CH2); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 192.5, 176.9, 170.7, 170.7, 170.6, 170.1, 170.1, 138.9, 138.9, 138.8, 138.6, 138.5, 138.1, 137.5, 137.1, 137.1, 136.9, 136.6, 134.6, 129.9, 129.1, 129.1, 128.9, 128.9, 128.8, 128.8, 128.7, 128.7, 128.7, 128.6, 128.6, 128.6, 128.5, 128.5, 128.5, 128.4, 128.4, 128.4, 128.3, 128.3, 128.2, 128.2, 128.1, 128.1, 128.1, 128.0, 128.0, 127.8, 127.7, 127.7, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.2, 126.2, 126.2, 126.1, 101.6, 101.6, 101.4, 100.3, 100.2, 100.0, 98.8, 96.1, 96.0, 95.8, 80.3, 80.2, 79.9, 79.6, 77.9, 77.4, 77.2, 76.9, 76.1, 75.3, 74.9, 73.5, 72.9, 72.6, 72.1, 72.1, 72.1, 72.0, 71.8, 71.6, 71.5, 71.2, 71.0, 70.9, 70.9, 69.8, 69.4, 68.9, 68.8, 68.7, 68.6, 67.6, 67.3, 67.2, 64.7, 50.6, 50.3, 47.2, 29.7, 29.3, 23.3, 21.1, 21.1, 21.0, 21.0, 21.0, 20.7, 18.9, 18.8, 18.8, 18.7, 18.7, 18.6, 18.6, 18.6。
以上、本発明を好ましい実施例により開示したが、これらは本発明を限定するものではなく、この技術に精通した者であれば、本発明の趣旨およびその範囲から逸脱することなく、さまざまな変更と修正が可能であるため、本発明の権利範囲は、特許請求の範囲によって定義されたものに準ずる。

Claims (5)

  1. 下記式で表される二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、及び十糖からなる群より選ばれる一種または複数種を含むことを特徴とする、グラム陽性菌細胞壁莢膜多糖構造誘導体であって、
    十糖は式Ｉに示されたものであり、
    Figure 0007358359000017
    ［式中、Ｒ６は、タンパク質と結合するためのアミノ基結合手［－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ－Ｙ１Ｙ２、ｎ＝１～１０］であり、ｎは、結合手が異なる炭素鎖長であってもよいことを表し、Ｙ１とＹ２はアミノ基の保護基であり、Ｙ１、Ｙ２はそれぞれＨ、ベンジル基（Ｂｎ）、又はベンジルメトキシカルボニル（Ｃｂｚ）である；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５基は水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル基（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）、またはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールである；Ｒ７、Ｒ１２基は水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）であり、Ｒ８基はＨまたはベンジル基（Ｂｎ）、またはアリル基（Ａｌｌ）である；Ｒ１３、Ｒ１４基はＨまたはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールである；］
    二糖は式
    Figure 0007358359000018
    に示す通りであり、［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照する；］
    三糖は式
    Figure 0007358359000019
    に示す通りであり、［式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照する；］
    四糖は式
    Figure 0007358359000020
    に示す通りであり、［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４について式Ｉを参照する；］
    五糖は式
    Figure 0007358359000021
    に示す通りであり、［式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４について式Ｉを参照する；］
    六糖は式
    Figure 0007358359000022
    に示す通りであり、［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照する；］
    七糖は式
    Figure 0007358359000023
    に示す通りであり、［式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照し、Ｒ９基は、２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）である；］
    八糖は式
    Figure 0007358359000024
    に示す通りであり、［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照する；］
    九糖は式
    Figure 0007358359000025
    に示す通りであり［式中、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８について式Ｉを参照する；］、
    合成経路は、
    Figure 0007358359000026
    であり、
    （１）糖ブロック１をグリコシル供与体とし、糖ブロック２をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて１，４－α－結合の二糖フラグメント３を製造すること；
    または、ステップ（１）に加えて、
    （２）糖ブロック４をグリコシル供与体とし、糖ブロック５をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて１，３－β－結合の二糖ブロック６を製造すること；
    （３）二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、糖ブロック２をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて三糖フラグメント７を製造すること；
    または、ステップ（３）に加えて、
    （４）三糖フラグメント７のＲ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である三糖ブロック８を得て、糖ブロック１をグリコシル供与体とし、三糖ブロック８をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて四糖フラグメント９を製造すること；
    または、ステップ（４）に加えて、
    （５）二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、三糖ブロック８をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて五糖フラグメント１０を製造すること；
    または、ステップ（５）に加えて、
    （６）五糖フラグメント１０のＲ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である五糖ブロック１１を得て、糖ブロック１をグリコシル供与体とし、五糖ブロック１１をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて六糖フラグメント１２を製造すること；
    または、ステップ（６）に加えて、
    （７）二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、五糖ブロック１１をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて七糖フラグメント１３を製造すること；
    または、ステップ（７）に加えて、
    （８）七糖フラグメント１３のＲ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である七糖ブロック１４を得て、糖ブロック１をグリコシル供与体とし、七糖ブロック１４をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて八糖フラグメント１５を製造すること；
    または、ステップ（８）に加えて、
    （９）二糖ブロック６をグリコシル供与体とし、七糖ブロック１４をグリコシル受容体として、グリコシル供与体とグリコシル受容体を塩化メチレンに溶解して、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて九糖フラグメント１６を製造すること；
    または、ステップ（９）に加えて、
    （１０）九糖フラグメント１６のＲ９を選択的に除去し、４位が遊離ヒドロキシル基である九糖ブロック１７を得て、糖ブロック１をグリコシル供与体とし、九糖ブロック１７をグリコシル受容体として、無水塩化メチレンにグリコシル供与体とグリコシル受容体を溶解し、モレキュラーシーブを加えて、その後、ルイス酸で触媒させ、一定の温度下で撹拌し、２～１０時間反応させて標的十糖フラグメント１８を製造することを特徴とし、
    Ｒ １ 、Ｒ １０ 及びＲ １１ 基はフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）または臭素（Ｂｒ）またはトリクロロアセトイミデート（ＣＣｌ ３ Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ－）またはＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデート（ＣＦ ３ Ｃ（＝ＮＰｈ）Ｏ－）またはエチルチオ基（ＳＥｔ）またはフェニルチオ基（ＳＰｈ）またはｐ－トルエンチオ基（ＳＴоｌ）またはエチルチオ（ＳＥｔ）またはジブチルホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）－（ＯＢｕ） ２ ）であり、
    糖ブロック１の合成が、
    まず、６－デオキシ－Ｄ－グルコピラノシドを合成し、標的化合物のＣ－２位をアシル系保護基で保護し、隣接基関与効果によりβ－Ｄ－グルコピラノシドを立体選択的に生成し、そして、グルコースのＣ－２位のアシル系保護基を選択的に除去し、Ｃ－２位ではスルホニル基の保護基を用いてＳＮ２メカニズムの求核置換により、Ｃ－２位のエクアトリアル結合を転位してアキシアル結合を形成して、β－Ｄ－ラムノピラノシドを得ること、または、レドックス法を使用して、まずＣ－２位をケトンに酸化し、そして水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムの還元剤で還元してＣ－２位がアキシアル結合である化合物を得て、β－Ｄ－ラムノピラノシドを得ることを特徴とする、
    まず、β－Ｄ－ラムノースグリコシド結合を合成することを含む、
    グラム陽性菌細胞壁莢膜多糖構造誘導体を合成する方法。
  2. グリコシル供与体１と６を製造する場合、グリコシル供与体は、ハロゲン化糖、チオグリコシド、トリクロロアセトイミデートグリコシド、グリコシドリン酸エステル、スルホキシドグリコシド又はＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデートグリコシドであってもよく、Ｒ１基とＲ１１基は水素（Ｈ）またはフッ素（Ｆ）または塩素（Ｃｌ）または臭素（Ｂｒ）またはヨウ素（Ｉ）またはトリクロロアセトイミデート（ＣＣｌ３Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ－）またはＮ－フェニルトリフルオロアセトイミデートグリコシド（ＣＦ３Ｃ（＝ＮＰｈ）Ｏ－）またはエチルチオ基（ＳＥｔ）またはフェニルチオ基（ＳＰｈ）またはｐ－トルエンチオ基（ＳＴоｌ）またはエチルチオ（ＳＥｔ）またはジブチルホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）－（ＯＢｕ）２）であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４基は、エステル系保護基、エーテル系保護基、アセタール及びケタール保護基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５基は、水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）、またはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはｐ－メトキシベンジル基（ｐＭＢｎ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  3. 糖ブロック２のＲ６は、タンパク質と結合するためのアミノ基結合手［－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ－Ｙ１Ｙ２、ｎ＝１～１０］であり、ｎは、結合手が異なる炭素鎖長であることを表し、結合手はαまたはβ結合であり、Ｙ１とＹ２はアミノ基の保護基であり、Ｙ１、Ｙ２はそれぞれＨ、ベンジル基（Ｂｎ）またはベンジルメトキシカルボニル（Ｃｂｚ）である；Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９基は水素（Ｈ）、またはアセチル基（Ａｃ）、またはベンゾイル（Ｂｚ）、またはピバロイル基（Ｐｉｖ）、またはクロロアセチル（ＣｌＡｃ）、またはレブリニル基（Ｌｅｖ）、またはアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）、またはベンジル基（Ｂｎ）、または２－ナフチルメチル基（Ｎａｐ）、またはｐ－メトキシベンジル基（ｐＭＢｎ）、またはアリル基（Ａｌｌ）、またはベンジリデンアセタール、またはイソプロピリデンケタールであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  4. 前記ルイス酸は、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル、またはトリフルオロメタンスルホン酸、またはトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、または炭酸銀やトリフルオロメタンスルホン酸銀のような銀塩であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  5. 前記した一定の温度下で撹拌するとは、室温２５℃、氷浴で撹拌すること、または－５℃～－２０℃の氷と塩との混合物中で撹拌すること、または－４０℃のアセトニトリルとドライアイスとの混合物中で撹拌すること、または－７８℃のアセトンとドライアイスとの混合物中で撹拌することであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108329362B (zh) * 2018-03-20 2020-10-09 江南大学 一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法
CN109627270B (zh) * 2018-12-18 2020-12-29 江南大学 一种绿脓假单胞菌o11血清型o抗原寡糖的化学合成方法
CN111978360B (zh) * 2020-09-02 2022-11-25 华东理工大学 石莼b3s型硫酸寡糖类化合物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150322176A1 (en) 2014-04-16 2015-11-12 University Of Guelph Novel polysaccharide immunogens from clostridium bolteae isolated from autistic subjects and methods and uses thereof
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201108472D0 (en) * 2011-05-19 2011-07-06 Isis Innovation HIV vaccine
CN108329362B (zh) * 2018-03-20 2020-10-09 江南大学 一种革兰氏阳性菌表面荚膜多糖结构衍生物的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150322176A1 (en) 2014-04-16 2015-11-12 University Of Guelph Novel polysaccharide immunogens from clostridium bolteae isolated from autistic subjects and methods and uses thereof
JP2017525714A (ja) 2014-08-22 2017-09-07 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 新規のグリカンコンジュゲート及びその使用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Shouji Hiro, Yoshinosuke Usuki and Hideo Iio，Synthesis of the sugar moiety of TIME-EA4, a glycopeptide isolated from silkworm diapause eggs，Carbohydrate Research，2006年，341，PP.1796-1802

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