JPH08101196A - Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬 - Google Patents
Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬Info
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- JPH08101196A JPH08101196A JP17296295A JP17296295A JPH08101196A JP H08101196 A JPH08101196 A JP H08101196A JP 17296295 A JP17296295 A JP 17296295A JP 17296295 A JP17296295 A JP 17296295A JP H08101196 A JPH08101196 A JP H08101196A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 １分子の高分子化合物（例えばアルブミン）
にホスホリルコリンを２分子以上結合した高分子化合物
を含む組成物からなるＣ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）測定
用試薬。 【効果】 １段階反応で正確なＣＲＰの定量ができ、ま
た更に抗ＣＲＰ抗体を共存させればプロゾーン現象も回
避できる。
にホスホリルコリンを２分子以上結合した高分子化合物
を含む組成物からなるＣ−反応性蛋白質（ＣＲＰ）測定
用試薬。 【効果】 １段階反応で正確なＣＲＰの定量ができ、ま
た更に抗ＣＲＰ抗体を共存させればプロゾーン現象も回
避できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｃ−反応性蛋白質測定
用試薬に関するものである。
用試薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】一般に、Ｃ−反応性蛋白質（C-reactive
protein、以下ＣＲＰという）は各種感染症や炎症性疾
患の患者血中には正常人と比較して多量に含まれている
ため、臨床検査の分野では、これら病気の診断によく測
定される項目の一つになっている。
protein、以下ＣＲＰという）は各種感染症や炎症性疾
患の患者血中には正常人と比較して多量に含まれている
ため、臨床検査の分野では、これら病気の診断によく測
定される項目の一つになっている。
【０００３】また、各種の癌でも血中のＣＲＰ量が増加
することがわかっており、癌の診断、特に手術後の予後
のモニターリングに測定されるようになってきている。
することがわかっており、癌の診断、特に手術後の予後
のモニターリングに測定されるようになってきている。
【０００４】しかしながら、血中のＣＲＰの含量は少な
く、酵素のようにそれ自体の活性により分析できるもの
ではないために、ＣＲＰと特異的に結合する抗体もしく
は抗血清を用いて毛細管法、一次元免疫拡散法、免疫比
濁法、ラテックス凝集反応等で測定されることが多い。
く、酵素のようにそれ自体の活性により分析できるもの
ではないために、ＣＲＰと特異的に結合する抗体もしく
は抗血清を用いて毛細管法、一次元免疫拡散法、免疫比
濁法、ラテックス凝集反応等で測定されることが多い。
【０００５】これらの抗血清を用いた測定法は、理論的
には共通した原理によっている。即ち、抗原であるＣＲ
Ｐと抗体が結合すると大きな免疫複合体となり、肉眼で
も濁りとして確認できる様になる現象を利用して、ＣＲ
Ｐは測定されている。
には共通した原理によっている。即ち、抗原であるＣＲ
Ｐと抗体が結合すると大きな免疫複合体となり、肉眼で
も濁りとして確認できる様になる現象を利用して、ＣＲ
Ｐは測定されている。
【０００６】この濁りの量は、抗原の量に依存し、ある
特定の領域では抗原の量が増すにつれて濁り度合いも増
す。この濁りの量を沈殿物として、沈殿物の量を毛細管
中の高さで判断するのが毛細管法である。また、この濁
りの発生量をアガロースゲル中で、濁りの量の広がりで
見るのが一次元免疫拡散法（ＳＲＩＤ法）である。ま
た、キューベット中の濁りの量を透過する光の減少で測
定するのが免疫比濁法であり、濁りにより乱反射する光
の量の増加量を測定するのがネフェロメトリーである。
特定の領域では抗原の量が増すにつれて濁り度合いも増
す。この濁りの量を沈殿物として、沈殿物の量を毛細管
中の高さで判断するのが毛細管法である。また、この濁
りの発生量をアガロースゲル中で、濁りの量の広がりで
見るのが一次元免疫拡散法（ＳＲＩＤ法）である。ま
た、キューベット中の濁りの量を透過する光の減少で測
定するのが免疫比濁法であり、濁りにより乱反射する光
の量の増加量を測定するのがネフェロメトリーである。
【０００７】また、ラテックス凝集反応は、直径数μｍ
〜０．１μｍ程度のポリスチレン等の微粒子に抗体を感
作させて、抗源と結合した場合の濁りの発生量が、抗体
だけを用いた場合よりも大巾に増大する測定感度の高い
方法であるが、原理的には同様である。
〜０．１μｍ程度のポリスチレン等の微粒子に抗体を感
作させて、抗源と結合した場合の濁りの発生量が、抗体
だけを用いた場合よりも大巾に増大する測定感度の高い
方法であるが、原理的には同様である。
【０００８】これら抗原体反応による濁りを測定する反
応には原理的にどうしても解決しえない欠点がある。１
つは、プレゾーン現象と呼ばれ、もう一つはプロゾーン
現象と呼ばれるものである。
応には原理的にどうしても解決しえない欠点がある。１
つは、プレゾーン現象と呼ばれ、もう一つはプロゾーン
現象と呼ばれるものである。
【０００９】プレゾーン現象とは抗原量が低濃度の場
合、免疫複合体が小さすぎて濁りとして検出しえない現
象をいうが、このことは低濃度の抗原は測定できないこ
とを意味している。さらに大きな問題であるプロゾーン
現象とは、抗体の等量以上の高濃度の抗原では、抗原量
が増えるにつれ逆に濁りが減少してゆく現象である。こ
のことは、ＣＲＰの血中濃度測定に際して、ＣＲＰ濃度
が高く、すぐにでも適切な処置を必要とする患者でも、
実際よりかなり低い測定値しか得られないことがあるこ
とを意味し、濁りによるＣＲＰ免疫反応測定の最大の欠
点となっている。
合、免疫複合体が小さすぎて濁りとして検出しえない現
象をいうが、このことは低濃度の抗原は測定できないこ
とを意味している。さらに大きな問題であるプロゾーン
現象とは、抗体の等量以上の高濃度の抗原では、抗原量
が増えるにつれ逆に濁りが減少してゆく現象である。こ
のことは、ＣＲＰの血中濃度測定に際して、ＣＲＰ濃度
が高く、すぐにでも適切な処置を必要とする患者でも、
実際よりかなり低い測定値しか得られないことがあるこ
とを意味し、濁りによるＣＲＰ免疫反応測定の最大の欠
点となっている。
【００１０】そこでプロゾーン現象を解決する目的で種
々の試みがなされている。たとえば、濁り度を測定し終
った反応混液中にさらに抗原であるＣＲＰを追加し、濁
りがさらに上昇するのか逆に減少するのかによってプロ
ゾーン現象であるのかどうかを判断するといった方法が
あるが、かなり繁雑であり、一般的ではない。
々の試みがなされている。たとえば、濁り度を測定し終
った反応混液中にさらに抗原であるＣＲＰを追加し、濁
りがさらに上昇するのか逆に減少するのかによってプロ
ゾーン現象であるのかどうかを判断するといった方法が
あるが、かなり繁雑であり、一般的ではない。
【００１１】さらに抗体は、ＣＲＰを動物に免疫投与し
て得るものであるから動物個体差によって品質もまちま
ちであり、プレゾーン現象、プロゾーン現象の表れ方も
まちまちで、測定値自体も大巾に変動するし、また同じ
個体でも抗体の採取時によっても性能が変化するなどの
欠点がある。そこで、濁り度を測定する試薬の組成を組
み立てる際には、目的に合った抗体の選択から始まって
かなり繁雑な操作を必要とする欠点もあるのである。
て得るものであるから動物個体差によって品質もまちま
ちであり、プレゾーン現象、プロゾーン現象の表れ方も
まちまちで、測定値自体も大巾に変動するし、また同じ
個体でも抗体の採取時によっても性能が変化するなどの
欠点がある。そこで、濁り度を測定する試薬の組成を組
み立てる際には、目的に合った抗体の選択から始まって
かなり繁雑な操作を必要とする欠点もあるのである。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
欠点のない新規にして有用なＣＲＰ測定用試薬を開発す
ることを目的とするものである。
欠点のない新規にして有用なＣＲＰ測定用試薬を開発す
ることを目的とするものである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
抗体以外でＣＲＰと特異的に結合する物質としてリン脂
質の前駆体であるホスホリルコリン（Phosphorylcholin
e, 以下、ＰＣと略記することもある）に着目した。Ｐ
Ｃはカルシウムイオンの存在下ＣＲＰと特異的に結合す
ることが知られており、ＰＣを多数結合した水溶性高分
子化合物は、ＣＲＰと結合して濁りを発生することが知
られている（Oliveira, E. B. et al. J. Immunol., 12
4, p.1396 (1980))。
抗体以外でＣＲＰと特異的に結合する物質としてリン脂
質の前駆体であるホスホリルコリン（Phosphorylcholin
e, 以下、ＰＣと略記することもある）に着目した。Ｐ
Ｃはカルシウムイオンの存在下ＣＲＰと特異的に結合す
ることが知られており、ＰＣを多数結合した水溶性高分
子化合物は、ＣＲＰと結合して濁りを発生することが知
られている（Oliveira, E. B. et al. J. Immunol., 12
4, p.1396 (1980))。
【００１４】本発明者らは、ＰＣを多数結合した水溶性
高分子化合物を、抗体の代りとしてＣＲＰの定量に活用
し、上記の問題点を解決すべく鋭意研究した結果、ＰＣ
を多数結合した水溶性高分子化合物は、ＣＲＰの量に応
じて濁りを発生し、ＣＲＰの定量に用いうること、及
び、抗体と共存させた場合プロゾーン現象が回避できる
こと、そして、反応は一段階で行われること（換言すれ
ば、第１液、第２液等に試薬を分ける必要がなく、１液
系試薬とすることができること）、少量のＣＲＰの存在
でも充分に濁りを生じるために試薬を乳化・ミセル状態
にしたり、染料を共存させたりする必要がなく、しかも
測定が短時間に行われることをはじめて見出し、本発明
を完成した。
高分子化合物を、抗体の代りとしてＣＲＰの定量に活用
し、上記の問題点を解決すべく鋭意研究した結果、ＰＣ
を多数結合した水溶性高分子化合物は、ＣＲＰの量に応
じて濁りを発生し、ＣＲＰの定量に用いうること、及
び、抗体と共存させた場合プロゾーン現象が回避できる
こと、そして、反応は一段階で行われること（換言すれ
ば、第１液、第２液等に試薬を分ける必要がなく、１液
系試薬とすることができること）、少量のＣＲＰの存在
でも充分に濁りを生じるために試薬を乳化・ミセル状態
にしたり、染料を共存させたりする必要がなく、しかも
測定が短時間に行われることをはじめて見出し、本発明
を完成した。
【００１５】すなわち本発明は、１分子中の高分子化合
物にホスホリルコリンを２分子以上結合した高分子化合
物を含有する組成物からなるＣＲＰ測定用試薬、及び該
ＰＣ結合高分子化合物に更にＣＲＰに対する特異抗体を
配合してなる組成物からなるＣＲＰ測定用試薬に関する
ものである。
物にホスホリルコリンを２分子以上結合した高分子化合
物を含有する組成物からなるＣＲＰ測定用試薬、及び該
ＰＣ結合高分子化合物に更にＣＲＰに対する特異抗体を
配合してなる組成物からなるＣＲＰ測定用試薬に関する
ものである。
【００１６】本発明に係る試薬は、該組成物と検体中の
ＣＲＰとが反応して濁りを生成せしめ、この濁りを測定
するものであって、多数のＰＣを高分子化合物に結合し
た結合物を抗体の代りに用い、ＣＲＰとこの結合物との
複合体を濁り度合いで測定するものであり、さらには、
多数のＰＣを高分子化合物に結合した結合物を抗体と共
存させることにより、抗原抗体結合物を濁り度合いで測
定する際のプロゾーン現象を回避する手段をも提供する
ものである。
ＣＲＰとが反応して濁りを生成せしめ、この濁りを測定
するものであって、多数のＰＣを高分子化合物に結合し
た結合物を抗体の代りに用い、ＣＲＰとこの結合物との
複合体を濁り度合いで測定するものであり、さらには、
多数のＰＣを高分子化合物に結合した結合物を抗体と共
存させることにより、抗原抗体結合物を濁り度合いで測
定する際のプロゾーン現象を回避する手段をも提供する
ものである。
【００１７】本発明の試薬においては、ＰＣ結合高分子
化合物を有効成分として使用するものであるが、高分子
化合物に多数のＰＣを結合せしめることにより、測定感
度を著しく上昇せしめることができる。また、高分子化
合物に結合せしめるＰＣは、抗体等とは異なり一定の品
質のものが常に得られるし、ＰＣと高分子化合物との結
合方法も純粋な化学反応に依るため、常に品質の一定し
たものが得られ、そのため抗体に見られる様なロット間
差はほとんど無視することができる。また、高分子化合
物の分子の大きさは、目的に応じて選択できるのでかな
り低い濃度のＣＲＰの定量から高い濃度のＣＲＰの定量
まで可能となるなど、従来の抗体のもつ欠点をほとんど
カバーすることが可能となるものである。また、試薬の
安定性という点についても、ＰＣは、抗体のような生理
活性蛋白質ではないので、試薬の安定化にすぐれてい
る。したがって２液に分割する必要もない。
化合物を有効成分として使用するものであるが、高分子
化合物に多数のＰＣを結合せしめることにより、測定感
度を著しく上昇せしめることができる。また、高分子化
合物に結合せしめるＰＣは、抗体等とは異なり一定の品
質のものが常に得られるし、ＰＣと高分子化合物との結
合方法も純粋な化学反応に依るため、常に品質の一定し
たものが得られ、そのため抗体に見られる様なロット間
差はほとんど無視することができる。また、高分子化合
物の分子の大きさは、目的に応じて選択できるのでかな
り低い濃度のＣＲＰの定量から高い濃度のＣＲＰの定量
まで可能となるなど、従来の抗体のもつ欠点をほとんど
カバーすることが可能となるものである。また、試薬の
安定性という点についても、ＰＣは、抗体のような生理
活性蛋白質ではないので、試薬の安定化にすぐれてい
る。したがって２液に分割する必要もない。
【００１８】また、プロゾーン現象を回避することがで
きるということにより、誤った測定値を出す心配が無く
なり、この事は、医療ミスを防止しうるという重大な利
点がある。
きるということにより、誤った測定値を出す心配が無く
なり、この事は、医療ミスを防止しうるという重大な利
点がある。
【００１９】本発明に用いる高分子化合物は、生体成分
である蛋白質、多糖体、核酸や、合成高分子化合物であ
るポリスチレン、ポリビニルアルコール、ポリエチレン
イミンなど水溶性のもの、もしくは微粒子として水溶液
中に分散させることの可能なものが用いられるが、ＰＣ
と化学的に結合させるために、分子表面にアミノ基、カ
ルボキシル基、ＯＨ基など化学結合に用いる基があるか
もしくは導入しうるものである必要がある。また、ＰＣ
をこれら高分子化合物に導入する方法についてはすでに
種々報告されておりいづれの方法を用いてもよい（Robe
y, F. A. and Ten-Yung Liu, J. Biol. Chem., 256, p.
969 (1981))。
である蛋白質、多糖体、核酸や、合成高分子化合物であ
るポリスチレン、ポリビニルアルコール、ポリエチレン
イミンなど水溶性のもの、もしくは微粒子として水溶液
中に分散させることの可能なものが用いられるが、ＰＣ
と化学的に結合させるために、分子表面にアミノ基、カ
ルボキシル基、ＯＨ基など化学結合に用いる基があるか
もしくは導入しうるものである必要がある。また、ＰＣ
をこれら高分子化合物に導入する方法についてはすでに
種々報告されておりいづれの方法を用いてもよい（Robe
y, F. A. and Ten-Yung Liu, J. Biol. Chem., 256, p.
969 (1981))。
【００２０】更に、本発明に用いる高分子化合物として
は血清アルブミン、卵白アルブミン、カゼインなどの比
較的安価で高純度のものであって多量に入手しうるもの
が好ましい。
は血清アルブミン、卵白アルブミン、カゼインなどの比
較的安価で高純度のものであって多量に入手しうるもの
が好ましい。
【００２１】これら可溶性蛋白質に対し、ホスホリルコ
リンの誘導体でアルデヒド基を有するコリンホスホリル
グリコアルデヒドは、蛋白質のアミノ基と、還元的アミ
ノ化反応により反応し、炭素原子２個分のスペーサのつ
いた形でホスホリルコリンを導入することができる。
リンの誘導体でアルデヒド基を有するコリンホスホリル
グリコアルデヒドは、蛋白質のアミノ基と、還元的アミ
ノ化反応により反応し、炭素原子２個分のスペーサのつ
いた形でホスホリルコリンを導入することができる。
【００２２】そのためには、下記化１で示される一般式
（Ｉ）を有する化合物であるコリンホスホリルグリコア
ルデヒドと可溶性蛋白質、例えば市販の牛血清アルブミ
ン（以下、ＢＳＡと省略することがある）とを緩衝液中
で還元アミノ化反応を行なえばよい。還元剤としては、
ジメチルアミンボラン、シアノ水素化ほう素ナトリウム
などがあるが、シアノ水素化ほう素ナトリウムが一般的
である。反応は３７℃程度に加温し、１０〜３０時間の
反応によって、可溶性蛋白質のアミノ基に式（Ｉ）の化
合物が結合する。
（Ｉ）を有する化合物であるコリンホスホリルグリコア
ルデヒドと可溶性蛋白質、例えば市販の牛血清アルブミ
ン（以下、ＢＳＡと省略することがある）とを緩衝液中
で還元アミノ化反応を行なえばよい。還元剤としては、
ジメチルアミンボラン、シアノ水素化ほう素ナトリウム
などがあるが、シアノ水素化ほう素ナトリウムが一般的
である。反応は３７℃程度に加温し、１０〜３０時間の
反応によって、可溶性蛋白質のアミノ基に式（Ｉ）の化
合物が結合する。
【００２３】
【化１】
【００２４】反応後は、水に対して透析し、未反応低分
子化合物を除去し、透析内液を凍結乾燥し、ホスホリル
コリン誘導体（ＰＣ−誘導体）を粉末で得ることができ
る。
子化合物を除去し、透析内液を凍結乾燥し、ホスホリル
コリン誘導体（ＰＣ−誘導体）を粉末で得ることができ
る。
【００２５】得られたホスホリルコリン誘導体は、適宜
水や緩衝液に溶解して、ＣＲＰの測定試薬に供すること
ができる。
水や緩衝液に溶解して、ＣＲＰの測定試薬に供すること
ができる。
【００２６】また、本発明で使用するＣ−反応性蛋白質
に対する特異抗体としては、抗ＣＲＰ ＩｇＧであれば
その供給源はいずれでもよい。
に対する特異抗体としては、抗ＣＲＰ ＩｇＧであれば
その供給源はいずれでもよい。
【００２７】濁りの判定方法は、従来から免疫反応にて
用いられている毛細管法、免疫比濁法、レーザーネフェ
ロメトリーなどいずれかの方法を用いても達成すること
ができる。
用いられている毛細管法、免疫比濁法、レーザーネフェ
ロメトリーなどいずれかの方法を用いても達成すること
ができる。
【００２８】次に本発明の製造例、実施例及び測定例を
示す。以下に示すのは、高分子化合物にウシ血清アルブ
ミンを用い、そこにホスホリルコリンを多数結合させた
ホスホリルコリン−ＢＳＡ結合物を用いてＣＲＰを測定
するシステムである。
示す。以下に示すのは、高分子化合物にウシ血清アルブ
ミンを用い、そこにホスホリルコリンを多数結合させた
ホスホリルコリン−ＢＳＡ結合物を用いてＣＲＰを測定
するシステムである。
【００２９】
【製造例】５０ｍＭのＬ−グリセロホスホリルコリン水
溶液５２ｍｌにメタ過ヨウ素酸ナトリウムを終濃度１０
０ｍＭとなるように溶解し、室温で３０分間放置するこ
とにより、コリンホスホリルグリコアルデヒドとホルム
アルデヒドの混合生成物を得た。次に、この混合生成物
を氷浴中で２時間冷却し、加えた過ヨウ素酸と等モル量
のエチレングリコールを加え乾固した。得られた白色の
粉末を０．１Ｍの酢酸１０ｍｌに溶解し、０．１Ｍ酢酸
であらかじめ平衝化しておいたセファデックスＧ−７５
（ファルマシア社製）カラムでゲル濾過を行なった。ネ
オカプロイン法で確認したコリンホスホリルグリコアル
デヒド溶出画分を集め、濃縮した。分子内リン酸残基を
定量することによりコリンホスホリルグリコアルデヒド
のＬ−グリセロホスホリルコリンよりの収率を求めたと
ころ８０％であった。
溶液５２ｍｌにメタ過ヨウ素酸ナトリウムを終濃度１０
０ｍＭとなるように溶解し、室温で３０分間放置するこ
とにより、コリンホスホリルグリコアルデヒドとホルム
アルデヒドの混合生成物を得た。次に、この混合生成物
を氷浴中で２時間冷却し、加えた過ヨウ素酸と等モル量
のエチレングリコールを加え乾固した。得られた白色の
粉末を０．１Ｍの酢酸１０ｍｌに溶解し、０．１Ｍ酢酸
であらかじめ平衝化しておいたセファデックスＧ−７５
（ファルマシア社製）カラムでゲル濾過を行なった。ネ
オカプロイン法で確認したコリンホスホリルグリコアル
デヒド溶出画分を集め、濃縮した。分子内リン酸残基を
定量することによりコリンホスホリルグリコアルデヒド
のＬ−グリセロホスホリルコリンよりの収率を求めたと
ころ８０％であった。
【００３０】ここに得られたコリンホスホリルグリコア
ルデヒド１０８ｍｇを０．２Ｍリン酸バッファー（ｐＨ
７．０）の溶液７０ｍｌに溶解し、さらに牛血清アルブ
ミンを４０ｍｇ加えた。次にシアノ水素化ホウ素ナトリ
ウム９０．３ｍｇを加え、３７℃で２０時間インキュベ
ートした。インキュベート後、反応液を水に対して透析
し、透析内液を凍結乾燥することによりホスホリルコリ
ンとＢＳＡの結合物を得た。ＢＳＡ １分子につき平均
５５分子のホスホリルコリンが結合した誘導体であっ
た。この誘導体をＰＣ５５ ＢＳＡとした。
ルデヒド１０８ｍｇを０．２Ｍリン酸バッファー（ｐＨ
７．０）の溶液７０ｍｌに溶解し、さらに牛血清アルブ
ミンを４０ｍｇ加えた。次にシアノ水素化ホウ素ナトリ
ウム９０．３ｍｇを加え、３７℃で２０時間インキュベ
ートした。インキュベート後、反応液を水に対して透析
し、透析内液を凍結乾燥することによりホスホリルコリ
ンとＢＳＡの結合物を得た。ＢＳＡ １分子につき平均
５５分子のホスホリルコリンが結合した誘導体であっ
た。この誘導体をＰＣ５５ ＢＳＡとした。
【００３１】
【実施例１】０．１％のＮaＮ3を含むリン酸バッファー
（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）２ｍｌに、１ｍｇ／ｍｌのＰ
Ｃ５５−ＢＳＡ（製造例により製造）を１００μｌ加え
て、ＣＲＰ測定用試薬を調製した。
（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）２ｍｌに、１ｍｇ／ｍｌのＰ
Ｃ５５−ＢＳＡ（製造例により製造）を１００μｌ加え
て、ＣＲＰ測定用試薬を調製した。
【００３２】
【実施例２】０．１％ＮaＮ3を含むリン酸バッファー
（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）０．５ｍｌに、１０ｍｇ／ｍ
ｌの抗ＣＲＰ ＩｇＧ（ヤギ）の５０μｌ又はリン酸バ
ッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）５０μｌを加え、そ
こに、製造例で製造したＰＣ５５−ＢＳＡ（１、３、１
０、３０ｍｇ／ｍｌ濃度）を２５μｌもしくはリン酸バ
ッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）２５μｌを加えて、
９種のＣＲＰ測定用試薬をそれぞれ調製した。
（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）０．５ｍｌに、１０ｍｇ／ｍ
ｌの抗ＣＲＰ ＩｇＧ（ヤギ）の５０μｌ又はリン酸バ
ッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）５０μｌを加え、そ
こに、製造例で製造したＰＣ５５−ＢＳＡ（１、３、１
０、３０ｍｇ／ｍｌ濃度）を２５μｌもしくはリン酸バ
ッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）２５μｌを加えて、
９種のＣＲＰ測定用試薬をそれぞれ調製した。
【００３３】
【測定例１】実施例１で調製したＣＲＰ測定用試薬を６
本用意する。それぞれに０ｍｇ／ｍｌから０．２４ｍｇ
／ｍｌの種々の濃度のＣＲＰを含む標準血清１００μｌ
を加え、２５℃で８分間反応させた後の３４０ｎｍの吸
光度を測定する。得られた標準曲線は図１に示される
が、ＣＲＰの濃度がきわめて正確に測定できるのが分
る。
本用意する。それぞれに０ｍｇ／ｍｌから０．２４ｍｇ
／ｍｌの種々の濃度のＣＲＰを含む標準血清１００μｌ
を加え、２５℃で８分間反応させた後の３４０ｎｍの吸
光度を測定する。得られた標準曲線は図１に示される
が、ＣＲＰの濃度がきわめて正確に測定できるのが分
る。
【００３４】
【測定例２】実施例２によって調製した各ＣＲＰ測定用
試薬に、リン酸バッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）に
溶解した０〜１．５ｍｇ／ｍｌのＣＲＰ２５μｌをそれ
ぞれ加え、２５℃で１時間反応した後、３４０ｎｍの吸
光度を測定する。結果は図２に示される。図２から、Ｃ
ＲＰの濃度が高くなっても、プロゾーン現象が起ってい
ないのが分る。
試薬に、リン酸バッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．２）に
溶解した０〜１．５ｍｇ／ｍｌのＣＲＰ２５μｌをそれ
ぞれ加え、２５℃で１時間反応した後、３４０ｎｍの吸
光度を測定する。結果は図２に示される。図２から、Ｃ
ＲＰの濃度が高くなっても、プロゾーン現象が起ってい
ないのが分る。
【００３５】
【発明の効果】本発明によって、わずか１段階の反応
で、しかも正確なＣＲＰの定量が可能となり、また、抗
ＣＲＰ抗体を共存させることにより、プロゾーン現象も
回避することができる。
で、しかも正確なＣＲＰの定量が可能となり、また、抗
ＣＲＰ抗体を共存させることにより、プロゾーン現象も
回避することができる。
【図１】測定例１で求めた標準曲線を示す。
【図２】測定例２で求めた標準曲線を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 甲田 誠一 吹田市高浜町９番23号 (72)発明者 高河原 勇 川西市大和東５−７−13
Claims (4)
- 【請求項１】 １分子の高分子化合物にホスホリルコリ
ンを２分子以上結合した高分子化合物を含有することを
特徴とするＣ−反応性蛋白質測定用試薬。 - 【請求項２】 １分子の高分子化合物にホスホリルコリ
ンを２分子以上結合した高分子化合物と、Ｃ−反応性蛋
白質に対する特異抗体と、を含有することを特徴とする
Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬。 - 【請求項３】 高分子化合物がアルブミンであることを
特徴とする請求項１又は請求項２に記載の試薬。 - 【請求項４】 試薬が１液系試薬であることを特徴とす
る請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の試薬。
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|---|---|---|---|
| JP7172962A JP2654932B2 (ja) | 1995-06-16 | 1995-06-16 | Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬 |
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|---|---|---|---|
| JP7172962A JP2654932B2 (ja) | 1995-06-16 | 1995-06-16 | Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬 |
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|---|---|
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| JP2654932B2 JP2654932B2 (ja) | 1997-09-17 |
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ID=15951594
Family Applications (1)
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- 1995-06-16 JP JP7172962A patent/JP2654932B2/ja not_active Expired - Lifetime
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