JPH07506813A

JPH07506813A - ホリニン酸の立体異性体を分離する方法

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Publication number: JPH07506813A
Application number: JP5514507A
Authority: JP
Inventors: リパ　ジオルジオ; ピヴァ　ロドルフォ; フェルダー　アーンスト
Original assignee: ブラッコ　エッセ．ピ．ア．
Priority date: 1992-02-20
Filing date: 1993-02-16
Publication date: 1995-07-27
Anticipated expiration: 2016-04-25
Also published as: IT1254635B; KR100256929B1; DE69319420T2; ES2065299T1; ITMI920367A0; DE626965T1; ATE167864T1; WO1993017022A1; EP0626965B1; EP0626965A1; ITMI920367A1; DE69319420D1; KR950700300A; GR940300096T1; JP3162073B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ホリニン酸の立体異性体を分離する方法本発明は、ホリニン酸（ｆｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）の立体異性体を分離する方法に関する。

ホリニン酸、すなわちＮ−（５−ホルミル−（６足、旦）　−５，６，７，８− テトラヒドロプテロイル）−Ｌ−グルタミン酸は、化学合成によって得たときは、その２つの（６Ｒ）および（６Ｓ）ジアステレオマー形の等モル混合物によりて形成されている。

（６Ｓ）ｌ！４性体のみがカルシウム塩として生成物の周知の薬理学的活性を有し、不斉合成により（６旦）異性体を合成するために種々の試みがなされたが、これらは工業的見地から完全には好結果をもたらさなかうた。

その等モル混合物からの両ジアステレオマーの分解に関する限り、たとえこれらがまだこの問題に対する理想的な解決を与えなかったとしても、ＵＳ特許２６８８０１８および特許出願Ｗ０　８８１０３８４４を挙げることが価値がある。

今や、葉酸から出発して化学合成によって生成された等モルジアステレオマー混合物から、遊離およびアルカリ土類金属イオンとの塩の両方の、２つの光学的に純粋な（６足）および（６旦）形のホリニン酸を好収率で分離および単離することを可能にする方法が発見された。

本発明のもう一つの顕著な具体化は、上記のジアステレオマー等モル混合物から、各々優れた光学純度（０，Ｐ、　）によって特徴づけられる（６旦）−ホリニン酸、（６旦）−ホリニン酸の適当な少なくとも二塩基有機アミン類（これらは脂肪族、直鎖、環式および／または複素環式である）との塩誘導体を製造および単離する方法に関する。

本発明のもう一つの顕著な具体化は、新規な（６Ｋ）−ホリニン酸および／または（６旦）−ホリニン酸の上記アミン類との塩によって表される。

ホリニン酸は通常、葉酸から出発する合成によって製造されるが、この葉酸は分子の（Ｓ）−グルタミン酸に相当する部分に（Ｓ）キラル中心を含んでいる。

プテリン残基の５−および６−位間の二重結合を水素化することにより、６−位ン類との塩を過烏な溶媒または好ましくは溶媒の二元または三元混合物から結晶化させることにより、使用するアミンに従ってその（６Ｋ）または（６旦）形に富む上記の塩の混合物を得ることができることがわかった。

上記の光学的に富む混合物は、１回以上の再結晶によって優勢な異性体形にさらに富ませて、相当する各々（６Ｋ）−ホリニン酸、（６旦）−ホリニン酸の上記アミンとの塩を、少な（とも９９％、通常は９９％よりも高い光学純度で得ることができる。

これらの塩から、同じ光学純度をもつ相当するアルカリ土類金属イオンとの塩への変換は、非常に容易である。

例えば、その（６旦）−形に富む混合物から、（６旦）−ホリニン酸のカルシウム塩（または相当するアルカリ土類金属イオンとの塩）は、９９％より高い光学純度で製造することができる。この結果は好ましくは、下記の方法の１つに従って達成することができる。

ａ）　（６Ｓ）に富むジアミノホリネートの水溶液から、中性ｐＨでそして場合により沈殿溶媒の存在においてアルカリ土類金属塩化物で処理することにより、望のアルカリ土類金属のホリニン酸塩となる。

ｂ）　光学的に純粋な（６互）形を得るために、（６互）に富むジアミノホリネートを適当な溶媒混合物から再結晶させる。相当するアルカリ土類金属イオンとの塩を、次にａ）に記載した通りの交換によって得る。

（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸およびその光学的に純粋なジアステレオマー形を塩化するのに好ましい金属陽イオンは、アルカリ土類金属、特にＣａ、　Ｍｇ、　Ｓｒ。

Ｂａ、の陽イオンである。Ｃａ”イオンが特に好ましい。

（６Ｒ，’Ｅ＋＞−ホリニン酸の塩化に適する少なくとも二塩基有機アミンは、少なくとも１つ置換されているかまたは非置換の少なくとも２または３個のＣ原子より成る炭化水素鎖によって相互に結合している少な（とも２個のアミノ基を含有する。直鎖、環式または複素環式、置換または非置換、ラセミまたはキラル、脂肪族ジーまたはポリアミン類から選択することができる。

特に好ましいアミンは、一般式夏ないし■：（式中、Ｒ１ないしＲＩＩは、同一であるかまたは異なっていて、Ｈであるか、または、１−４個のＯＨ基および／または１−４個のアルコキシまたはヒドロキシアルコキシ基によって置換されていてもよい、直鎖または分枝鎖状のＣ３−、アルキル基であり。

Ｒ７ないしＲ１゜は、同一であるかまたは異なっていて、Ｒ１またはＯＨであり。

ｎは、０−６であり：ｍは、２−８である）のジアミンである。

非限定例として、特に好ましいジアミンは：エチレンジアミン、１．２−ジアミノ−プロパン、１．３−ジアミノ−プロパン、１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン、（シス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、（トランス）− １，２−ジアミノ−シクロヘキサン、ピペラジン、１．４−ジメチル−ピペラジン、２−メチル−ピペラジン、２．５−ジメチル−ピペラジンから選択することができる。

同等に好ましいアミンはまた、３ないし６個のＮ原子を含有するポリアミノ直鎖誘導体またはマクロ環状化合物であることもできる。

例としてこれらの最後のもののなかでは、１．４．７．　１０−テトラアザ−シクロドデカンおよび、そのエチレン橋上および窒素原子上の両方で置換された誘導体類を挙げることができる。

ホリニン酸の」１記アミンとの塩のジアステレオマー混合物の結晶化に適する溶媒は好ましくは、二元または三元の水／双極性非プロトン性有機溶媒混合物および／または水／双極性中性（ａｐｒｏｔｉｃ）有機溶媒／プロトン性有機溶媒の混合物である。

好ましいプロトン性有機溶媒は、すなわちメタノール、エタノール、ロープロバノール、イソプロパツール、エチレングリコール、１．２−プロピレングリコール、１，３−プロピレングリコール、ホルムアミド、Ｎ−メチル−ホルムアミドである。

好ましい双極性中性有機溶媒は、すなわちジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）　、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）　、Ｎ−メチル−ピロリドン（ＮＭＰ）　、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＴ）である。

本発明の方法を、非限定例として出発物質として（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸のカルシウム塩を用いて本明細書【Ｎ：この後に説明するが、この方法は下記の段階に従って行われる・段階１０ないし２５℃の範囲の温度で鉱酸を用いてｐＨを１と３との間に調整することによる、そのカルシウム塩の水溶液からの（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸の沈殿。

段階２酸の双極性中性溶媒中への溶解。

ｂ）温度５ないし３５℃での、■＝５ないし１　：　５０　（Ｗ／Ｖ）の範囲の比率で同じ双極性中性溶媒中に、または１・５　（Ｗ／Ｖ）ないし１　：１５　（Ｗ／Ｖ）の範囲の比率でプロトン性有機溶媒中に、溶解させた化学量論量または２０％以下のモル過剰の所望のアミンとの反応。

ｃ）２５℃ないし５℃の範囲の温度の反応媒質を、所望の塩が完全に沈殿するまで徐冷すること。沈殿は、双極性中性溶媒に比較して０．１：１ないし２：ｌ（Ｖ／Ｖ）の範囲の体積比のプロトン性有機溶媒を加えることによって容易にすることができる：によって固体として得られる。

上記の塩化反応はまた、水中で懸濁液相で実施することもでき、続いて得られる水溶液を、沈殿剤として作用する水溶性プロトン性有機溶媒を用いるかまたはこの溶媒中で希釈することができる。

段階３その上記アミンとの塩の、場合により有機プロトン性溶媒を添加した、水／双極性中性水溶性溶媒からの結晶化または不溶化によるホリニン酸ジアステレオマーの部分分離。

塩／溶媒混合物の重量／体積（Ｗ／Ｖ）比はｌ：２ないし１：６０、好ましくは１４ないし１：４５、の範囲であることができる。

混合物　水／双極性中性溶媒の組成（ｖ　／　ｖ　）は、１：０．５ないし１：２０、好ましくは１：ｌないし１：１５、の範囲であることができ；このような混合物はまた、上記のプロトン性有機溶媒が必要な場合には体積で７０％まで、好ましくは５０％までの量のプロトン性有機溶媒を含有することもできる。

（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン階の上述のアミンとの塩は、温度２５℃ないし７０℃、好ましくは３０℃ないし５０℃、の所望の溶媒の混合物に直接溶解させることができる。

他方で、これらは水に溶解させることもできる。続いて所望の量の双極性中性溶媒を、場合により必要な追加量のプロトン性有機溶媒とともに、上記の水溶液に加える。

その後１．：れらの溶液をほぼ０℃まで徐冷すると、この間に結晶化が起こる。

得られる固体成分はアミノーホリネートの（６足）および（６互）異性体の混合物より成り、この混合物は溶解度の小さい方の形（すなわち、塩化剤として使用したアミノ化合物により旦または旦）に富んでいる。

例えば、エチレンジアミノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートの結晶化では、（６Ｒ）異性体塩に富む混合物となる。

これに反して、ピペラジン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートからは、（６Ｋ）形が優先的に結晶化する。

通常、上記の一つの異性体形に富む固体混合物は、６５ないし９８％の範囲の光学純度を示す。

結晶母液は明らかに、他方の異性体形に富んでおり、通常は６５ないし８０％の範囲の光学純度値を示す。

段階４部分的に光学的に精製した段階３から得たアミノホリネートを、組成が１：１（ｖ　／　ｖ　）から１　：　２０　（ｖ／ｖ）までの範囲の水／双極性中性溶媒の混合物から１１記塩を１回以上再結晶させることによってさらに精製する。この結晶用混合物は場合により、体積で５０％までの量のプロトン性有機溶媒をも含有することができる。所望の光学的に純粋なアミノホリネートは、９９％より高い光学純度をもって得られる。

旦）ホリニン酸カルシウムに変換することができる。

好ましい方法の１つは、０．２ないし５、好ましくは２ないし４部（Ｗ／Ｗ）の水溶性カルシウム塩、好ましくは塩化物または硝酸塩、の存在における水（ｐＨ＝７、温度０−２５℃）からの上記アミノホリネートの結晶化である。

別法として、所望の光学的に純粋なホリニン酸カルシウムを、大過剰のプロトン性水溶性有機溶媒を添加することにより、上述のＣａ”＋含有水溶液から沈殿させることができる。

段階５段階３に記載した結晶化の結果得られる母液中に含まれるホリニン酸の立体異性体もまた、９９％よりも高い光学純度で上記母液から回収される。

これらは、好ましくは本明細書中でこの後に記載する手順の１つに従って、アミノまたはカルシウム塩として得ることができる。

ａ）上述の母液から、もし存在するならば有機プロトン性溶媒を、２５ないし５０℃の温度で減圧蒸留して除去し、続いて水溶性双極性中性溶媒を、混合物を水に不溶性の有機溶媒、好ましくは塩化メチレン（ＣＨｉＣｌり　、で抽出することによって除去する。得られる水溶液に、アミノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートの出発量に関して０．　２ないし５、好ましくは２ないし４重量部（Ｗ／Ｗ）に相当する量のＣａＣＩｇを添加する。次にｐＨを、ＩＮ　ＮａＯＨによって６と７との間の範囲の値に調整し、そしてエタノールを加えることによって温度０−２５ ℃、好ましくは５−２５℃、で操作して所望のカルシウム塩の沈殿を得る。

６５ないし８５％の範囲の光学純度をもつその優勢なジアステレオマーに冨むホリニン酸カルシウムは、濾過によって回収される。光学的に純粋なホリニン酸カルシウム（９９％より高い光学純度）は最終的に、ｐＨ６ないし７で温度０ないし２５℃の１０ないし１００容の水からの１回以上の結晶化によって得られる。

ｂ）段階３から得た母液に、適当な沈殿溶媒、双極性中性またはプロトン性有機溶媒のどちらか、を母液体積に関して等量ないし０．０５−５容で加える。〇− ２０℃に冷却することにより、ジアミノホリネートの優勢な光学異性体を７０％より高い光学純度で選択的に結晶させることができる。

９９％より高い光学純度をもつ所望のアミノホリネートは次に、場合により体積で５０％までの量のプロトン性有機溶媒を加えることにより、１：１ないし１：　２０　（ｖ／ｖ）の範囲の比率をもつ水／双極性中性溶媒混合物から１回以上結晶化させることによって得られる。

ことができる。この溶液に、出発物質のホリニン酸塩と比較して化学量論鳳の、アルカリ土類金属陽イオンと不溶性塩を形成する鉱酸または有機酸（好ましくは硫酸または蓚酸の陰イオン）で塩化した所望のアミンを含有する別の水溶液を添加することができる。この沈殿する不溶性塩、すなわち蓚酸カルシウム、を濾去し、得られる所望のジアミノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートを含む水溶液に、次に適当な鳳の双極性中性溶媒を加えるが、場合により先に記載したようなプロトン性有機溶媒とともに添加する。

結晶化は、Ｏないし２５℃の範囲の温度で実施することができ、中性またはややアルカリ性のｐｌｌで操作することにより１時間から５０まで続く。

段階１に記載した手順はまた、段階４および５に従って得られるその相当する光学的に純粋な塩から出発して、９９％より高い光学純度をもつ遊離のホリニン酸（６Ｒまたは６旦）の光学的に純粋な異性体を得るために採用することもできる。

下記の実施例は、本発明の最も顕著な特徴をよりよ（説明することを目的としており、習熟した技術者に対してこのものに限定するものではない。

実施例１ｇ、および０．５Ｎ塩酸６７０−を、かくはんしなから５−２０℃で、水３００耐に同時に滴加する。次に、得られる（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸を含有する懸濁液を、かくはんしながら１時間５−２５℃に保つ。その後、沈殿を濾過し、水でＨＰ　Ｌ　Ｃタイター（Ｌｉｔｒｅ）　二＞９９％　下記のクロマトグラフィー条件下で実施：カラム　ハイパー（Ｈｉｂａｒ”）リヒロスフエア−（Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ）ＲＰ１８−５μｍ　［メルク（Ｍｅｒｃｋ）］：長さ２５０ｍｍ；直径４ｍｍ移動相：Ａ＝ニリン塩緩衝液ｐＨ７，８；Ｂ；２５％　リン酸塩緩衝液ｐＨ７，８中のメタノール（Ｖ／Ｖ）流１１：　１．　２＋ｄ／分：カラム温度　３５℃ ：ＵＶ２５４ｎｍ検出器勾配、　０ないし２分　Ｂ＝１２％、２ないし２０分　Ｂ＝８０％までの直線勾配次に３分間保持、その後２３ないし３５分　Ｂ＝１２％までの逆勾配同じ手順に従って下記の遊離酸化合物を得たニー実施例６の（６旦）−ホリニン酸カルシウムから出発して、９９％より高い光実施ｆ！４２ −に溶解させる。同じ溶媒４００ＴＩｌｉに溶解させたエチレンジアミン１０．５ｇを温度５−３５℃で添加する。沈殿した塩の懸濁液を約１時間かくはんしなから５）ＩＰＬＣタイター：２９８．５％　実施例１のクロマトグラフィー法に従う。

実施例３温度２５−４０℃でか（はんしながら、ＤＭＡＣ９２０−を添加する。次に温度を５℃まで下げ、２４時間かくはんすると生成物が結晶化する。その後、沈殿をを含むエチレンジアミノホリネート４０．２ｇを得る。（６Ｋ）形の含量は下記の条件下でキラルＨＰＬＣを行うことにより測定する：カラム　長さ２５０ｍｍ；直径４ｍｍ；キラル（ｃｈｉｒａｌ）Ｓｉ　３００ＢＳＡ　（ＳＥＲＶＡ）を手で供給する、５μｍ固定相。

移動相：　０．　２５　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｈ＊　Ｐ　Ｏａ水溶液流鍛：１．０１Ｌｔ／分：カラム温度４０’Ｃ；検出器：ＵＶ２８０ｎｍ　（３１０ｎｍ）濾過稜の母液は６０％ジアステレオマー過剰のエチレンジアミノ（６Ｓ）−ホリネートを含有する（上述の条件下でキラルＨＰＬＣで測定した）。

実施例１および３に記載したクロマトグラフィー条件を賎りの実施例における操作および測定にも使用する。

実施例４エチレンジアミノ（６Ｒ）−ホリネートの単離および精製実施例３に記載した結晶化から得た、６０％ジアステレオマー過剰のエチレンジアミノ（６旦）−ホリネートを主として含有する母液に１７０−のＤＭＡＣを添加する。この溶液をかくはんしながら４８時間１０℃に保つ。得られる沈殿を濾過し、エタノールで洗浄し、乾燥させる。１５ｇのエチレンジアミノ（６旦）−ホリネートが、９９％より高い光学純度で得られる（キラルＨＰＬＣ操作は実施例３に従って実施した）。

ＨＰＬＣタイター：＞９８．５；　［ｆｆ］’；＝−１４，ｓｏ　（Ｃ＝２．１％Ｈ，０）実施例５エチレンジアミノ（６Ｓ）−ホリネートからの（６Ｓ）−ホリニン酸カルシウムの製造水１００−に溶解させたエチレンジアミノ（６Ｓ）−ホリネート（実施例４に記載したようにして得た）１０ｇに、塩化カルシウム１０ｇおよびエタノール４００ｔｆを、５−２５℃でか（はんしながら添加する。分離する沈殿を濾過し、エタノール水溶液（９５％）で洗浄し、乾燥させる。次に生成物を５０−６０℃でｐＨ６−６，５の水に再溶解させる。１／２の重量の塩化カルシウムを加え、ＩＮのＮａＯＨでｐＨを７に調整する。所望の化合物は０−２５℃で１６時間で結晶する。

沈殿した結晶生成物を濾過し、冷水およびエタノール水溶液で洗浄し、乾燥させる。約２０％の結晶水を含む（６互）−ホリニン酸カルシウムｌ１ｇを、９９％より高い光学純度（キラルＨＰＬＣによる）で得る。

ＨＰＬＣタイター・〉９９％；　［ｄｌ”：＝−１５°　（ｃ＝１％Ｈ，０）実施例６エチレンジアミノ（６Ｒ）−ホリネートの精製光学純度８０％のエチレンジアミノ（６足）−ホリネート（実施例３に記載したようにして得た）３５ｇを、体積比１／１．２５＋７）水／ＤＭＡＣ５００−から再結晶させる。温度および結晶時間は次の通りである：　０−２５℃および４８時間。結晶した生成物を濾過し、エタノールで洗浄し、乾燥させる。光学純度が９９％より高い（キラルＨＰＬＣ）エチレンジアミノ（６Ｒ）−ホリネート２５ｇが得られる。［ｆｆ］　ｏ＝＋４４．４’　（ｃ＝２．１％Ｈ，Ｏ）実施例７（６互）−異性体に富むエチレンジアミノホリネート混合物からの（６旦）−ホリニン酸カルシウム単離および精製実施例３に記載した結晶化から得られる、６０％ジアステレオマー過剰のエチレンジアミノ（６旦）−ホリネートを主として含有する母液を、塩化メチレン５× ４００−で抽出する。得られる水溶液に、ｏ−２５℃でか（はんしながら塩化カルシウム５０ｇを加え、次にＩＮ　ＮａＯＨでｐＨを７に調整し、エタノール２５０■ｌを加える。固体の分離生成物を濾過し、エタノール水溶液で洗浄し、乾燥させる。得られる生成物を、ｐＨ７，０−２５℃で、重量３／４の塩化カルシウムの存在において水から２回再結晶させるが、このとき各回毎に、濾過した生成物を最初は冷水で、そして次にはエタノールで、洗浄する。

光学純度が９９％より高く（キラルＨＰＬＣによる）、約２０％の結晶水含量の（６旦）−ホリニン酸カルシウムが１７ｇ得られる。

ＨＰＬＣタイター・〉９９％；　［ａ］、＝−１５’　（ｃ＝１％Ｈ，Ｏ）実施例８ピペラジノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートの製造実施例１に記載したようにして製造した（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸８０ｇを、ＤＭＡＣ９５０■ｌに溶解させる。エタノール２０００−に溶解させたピペラジン１７．５ｇを、温度５−３０℃でかくはんしながらこれに添加する。得られる懸濁液をかくはんしながら３時間室温に保った後、濾過する。湿った生成物をエタノールで洗浄してから、乾燥させる。９０．５ｇのピペラジノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートを得る。

１１　Ｐ　Ｌ　Ｃタイター二〉９９％実施例９ＡＣ（１：　１０．５ｖ／ｖ）に懸濁させる。固体化合物が完全に溶解するまで、温度を３５℃に」−げろ。結晶化には、かくはんしながら５℃で３日を要する。得実施例１０ｇを、実施例６の手順に従って混合物　水／ＤＭＡＣ（１：　１０．５ｖ／ｖ）からＩＶ＃結晶させる。結晶生成物を濾過し、洗浄し、乾燥させた後、９９％より高い光学純度（キラルＨＰＬＣ操作）をもつピペラジノ（６互）−ホリネート８ｇが得られる。

実施例１１して含有する母液に、エタノール１８００−を加える。結晶化は５℃で６４時間る。

次に上記の塩を、実施例６の手順に従って、混合物　水／ＤＭＡＣ／エタノール（１：　１０　：　５Ｖ／Ｖ／Ｖ）から再結晶させて、９９％より高い光学純度をもつ所望の生成物を得る。

実施例１２ピペラジノ（６互）−ホリネートからの（６旦）−ホリニン酸カルシウムの製造 −ホリネートから、９９％より高い光学純度をもつ（６旦）−ホリニン酸カルシウムを８０％の収率で得る。

実施例１３１．４−ジメチルピペラジノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートの製造実施例１に記載したようにして製造した（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸８０ｇを、ＤＭＡＣ８００−に溶解させる。ＤＭＡＣ４６０に溶解させた１、４−ジメチル−ピペラジン２１ｇを、温度５−２５℃でかくはんしながら添加した後、エタノール７００■ｌを加える。この溶液をかくはんしながら５日間５℃に保つと沈殿が得られるので、これを濾過し、エタノールで洗浄し、乾燥させる。

９０ｇの１．４−ジメチルピペラジン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートが得られる。

（ＨＰＬＣタイター：〉９９％）実施例１４１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートの製造実施例１に記載したようにして製造した（６Ｒ，Ｓ）−ホリニン酸８０ｇを、ＤＭＡＣ８００ｄにｍ解さセル。ＤＭＡＣ４２０ｄｌ：溶解させた１、３−ジ’７ミノー２−ヒドロキシープロパン１６．８ｇを温度５−２５℃でかくはんしながら加える。溶液をかくはんしながら１．５時間、同じ温度に保って、沈殿を得て、これを濾過し、最初にＤＭＡＣで、そして次にエタノールで洗浄した後、乾燥させる。１．　３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートが８９ｇ得られる（ＨＰＬＣタイター〉９９％）。

実施例１５１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートジアステレオマーの部分分離１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｒ，Ｓ）−ホリネート８７ｇを、水６００ｍ１．ｍ溶解させる。ＤＭＡＣ７８０ｓｆを、温ｆｆ２５−４０℃ ｍ’か＜はんしながら加える。生成物は２１１間かくはんを続けた溶液から５℃ で結晶するので、これを濾過する。湿った生成物をエタノールで洗浄する。乾燥させた後、約７０％のジアステレオマー（６−Ｒ）（キラルＨＰＬＣ）を含む１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシープロパンーホリネート５０ｇを得る。銭りの結晶母液中には、（６ミ）シアステ【／オマーが約５５％ジアステレオマー過剰に存在する。

実施例１６１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｓ）−ホリネートの単離および精製実施例１５に記載した分別結晶から得られる、１．３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６Ｓ）−ホリネートを５５％ジアステレオマー過剰に含有するｆｌｉ液に、ＤＭＡＣ１６０−を加える。この溶液をかくはんしながら３０時間５ ℃に保持すると、沈殿が得られるので、これを濾過し、エタノールで洗浄する。

乾燥後に、１．３−ジアミノ−２−ヒト０キシ−プロパン（６旦）−ホリネート２０ｇが９５％丸学純度で得られる。この生成物を、体積比１／１．５の水／ＤＭ八Ｃへ合物３００■ｒから０−２５℃の４度で＋Ｍ結晶させる。得られる沈殿を濾過し、エタノールで洗浄する。乾燥後に、１．　３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン（６ト）−ホリネーＮ６ｇを５）９％より高い光学純度（キラルＨＰＬＣ

Claims

【特許請求の範囲】

１．下記の段階：ａ）双極性中性有機溶媒、水および水溶性プロトン性有機溶媒から選択される少なくとも１つの成分を含有する液体媒質中で、遊離またはアルカリ土類金属塩としてのラセミ体のホリニン酸を、少なくとも１つ置換されているかまたは非置換のＣ２−Ｃ３炭化水素鎖により結合した少なくとも２個のアミノ基を有する脂肪族直鎖または環式アミンと反応させて、相当するラセミ体のホリニン酸ジアミノ塩を得る；ｂ）上記ジアミノ−塩を、場合により有機水溶性プロトン性有機溶媒を含有する、水と水溶性双極性中性有機溶媒との混合物中の溶液から結晶化させると、冷却により分離する最初の固体が下記（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアステレオマーの第一異性体の大部分を含有し、他方の第二異性体の大部分が結晶化母液に残留する；ｃ）段階（ｂ）からの異性体に富む固体を、この段階で使用した同じ溶媒混合物から、第一ジアステレオマーのジアミノ塩が所望の光学純度で得られるまで１回以上再結晶させることによって精製し、そして場合によりこの塩を相当するアルカリ土類金属塩に変換する；ｄ）段階（ｂ）からの母液中に溶解して残留する固体を、この溶液を双極性中性溶媒および／またはプロトン性有機溶媒で希釈することにより沈殿させて単離すると、得られる固体が主として第二異性体を含有し、そしてこの固体を段階（ｃ）に記載したように再結晶させるか、または上記母液を有機溶媒の蒸発後に過剩の水溶性アルカリ土類金属鉱酸塩で処理して、得られる上記ホリニン酸の第二異性体のアルカリ土類金属塩を所望の光学純度に到達するまで水で１回以上再結晶させる；を含む、ホリニン酸の（６Ｒ）および（６Ｓ）ジアステレオマーを分離し、所望の高光学純度の遊離または塩の形体でこれらを回収する方法。
２．段階（ａ）で使用するアミンが、光学的に活性であるかまたは活性でなくそしてその窒素原子が有機基によって置換されていないかまたは置換されている、直鎖、脂環式または複素環式ジ−またはポリアミンから選択される、請求の範囲第１項の方法。
３．段階（ａ）においてラセミ体ホリニン酸のアルカリ土類金属塩を使用し、ここで上記アルカリ土類金属陽イオンは適当な陰イオンとの反応によって不活性化されて濾去される、請求の範囲第１項の方法。
４．反応混合物を水溶性プロトン性有機溶媒で処理して、ラセミ体のホリニン酸のジアミノ塩を段階（ａ）で沈殿または結晶化することによって単離する、請求の範囲第１項の方法。
５．段階（ｃ）または（ｄ）において結晶化により得られる両異性体に対する所望の光学純度が９９％以上である、請求の範囲第１項の方法。
６．下記の段階：ａ）双極性中性有機溶媒中または該溶媒とプロトン性有機溶媒との混合物中に溶解させるか、または水中に懸濁させた、ラセミ体の遊離ホリニン酸を、少なくとも１つ置換されているかまたは非置換の少なくとも２または３個のＣ原子の炭化水素鎖によって互いに結合されている少なくとも２個のアミノ基を含む直鎖、環式または複素環式の置換または非置換の、ラセミまたはキラルの、脂肪族ジ−またはポリアミンと反応させることによって、下記ラセミ混合物のジアミノ塩を製造するか、またはラセミ体のアルカリ土類金属ホリニン酸塩の水溶液を上記アミンと反応させ、上記金属イオンをその不活性化合物の形成および濾過によって除去することによって上記ジアミノ塩を製造する；ここで得られる上記ジアミノ塩のラセミ混合物は、反応媒質から結晶してくるか、または水溶性プロトン性有機溶媒の添加によりまたは上記反応媒質を上記水溶性プロトン性有機溶媒中で希釈することにより、この反応媒質から沈殿する、ｂ）上記の沈殿したラセミ混合物を、場合によりプロトン性有機溶媒を含有する、水および水溶性双極性中性有機溶媒からできた溶媒中の溶液から結晶化させる；ここで結晶化により分離する固体はジアミンの２つの（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアステレオマー形の一方（この形体は結晶母液中に大部分が溶解して残っている他方の形体よりも溶解性が小さい）の大部分を含有する、ｃ）段階ｂ）で得た異性体に富む固体を、この段階で使用した同種の溶媒から１回以上再結晶させて、９９％より高い光学純度をもつ所望のジアミノ（６Ｒ）または（６Ｓ）−ホリネートを得る；ここで、この光学的に純粋なジアミノ−ホリネートを、引続き水性媒質中の過剰の水溶性アルカリ土類金属鉱酸塩との反応により、同じ光学純度の相当するアルカリ土類金属塩に変換することができる、ｄ）双極性中性溶媒および／またはプロトン性有機溶媒で希釈することによって、段階ｂ）で得た結晶母液から他方の異性体に富むジアミノ塩を沈殿させ、その固体を集めそしてこれを段階ｃ）と同じ条件下で１回以上再結晶させて、ジアミノホリネートの他方の立体異性体形を９９％より高い光学純度で得て、次に場合により相当するアルカリ土類金属塩を、過剰の水溶性アルカリ土類金属鉱酸塩との反応によって同一光学純度で得るか、または上記の段階ｂ）の母液を、すべての有機溶媒の除去後に過剰の水溶性アルカリ土類金属鉱酸塩で直接処理して、得られる異性体に富むアルカリ土類金属ホリニン酸塩を水から１回以上再結晶させて９９％より高い光学純度の相当する金属ホリニン酸塩を得る、を含む、ホリニン酸および／またはそのアルカリ土類金属イオンまたは少なくとも二塩基の有機アミンとの塩の２つのジアステレオマー形、（６Ｒ）および（６Ｓ）を、そのラセミ混合物から出発して、９９％より高い光学純度（０．Ｐ．）水準まで分離および精製するための請求の範囲第１項の方法。
７．段階ａ）中、ラセミ体のホリニン酸とアミン類との反応を、双極性中性有機溶媒中またはこの溶媒とプロトン性有機溶媒との混合物中、または水中懸濁液相で実施し、次に得られる溶液を水溶性有機プロトン性溶媒でまたはこの溶媒中で希釈する、請求の範囲第６項の方法。
８．段階ａ）中、ラセミ体のアルカリ土類金属ホリニン酸塩とアミン類との反応を水中で、無機または有機陰イオン（このものは上記アルカリ土類金属陽イオンと水に不溶性の誘導体を形成し、得られる不溶性化合物は好ましくは硫酸塩または蓚酸塩である）の存在で実施する、請求の範囲第６項の方法。
９．段階ｂ）およびｃ）での結晶化を、各成分範囲が体積比で１：０．５（ｖ／ｖ）ないし１：２０（ｖ／ｖ）、好ましくは１：１（ｖ／ｖ）ないし１：１５（ｖ／ｖ）の水および水溶性双極性中性有機溶媒より成る溶媒混合物中で実施するか、またはこの結晶化をさらに体積で７０％まで、好ましくは５０％（ｖ／ｖ）までの量のプロトン性有機溶媒を加えた上記の水／水溶性双極性中性有機溶媒混合物を含む溶媒中で実施する、請求の範囲第６項の方法。
１０．段階ｂ）に従う、ラセミ体ジアミノホリネート塩およびその塩の結晶化に使用する溶媒混合物の間の重量／体積比が１：２（ｗ／ｖ）ないし１：６０（ｗ／ｖ）、好ましくは１：４（ｗ／ｖ）ないし１：４５（ｗ／ｖ）、の範囲である、請求の範囲第６項の方法。
１１．ホリニン酸の塩の結晶化を、これらの塩を２５ないし７０℃、好ましくは３０ないし５０℃、の範囲の温度で溶媒混合物に溶解させ、次に得られる溶液を２５−０℃、好ましくは２０−０℃、まで徐冷することによって、段階ｂ）またはｃ）に従って実施する、請求の範囲第６項の方法。
１２．段階ｃ）で得られる光学的に純粋な（６Ｒ）または（６Ｓ）ジアミノホリネートを、０ないし３５℃、好ましくは５ないし２５℃、の範囲の温度で、好ましくは１Ｎ水酸化ナトリウムを添加してＰＨを６と７との間に保持することにより、金属塩対ジアミノ塩の重量比（ｗ／ｗ）で０．２ないし５、好ましくは２ないし４の、アルカリ土類金属の水溶性鉱酸塩の存在において、水中で同じ光学純度の相当するアルカリ土類金属塩に変換する、請求の範囲第６項の方法。
１３．好ましいアルカリ土類金属の陽イオンが、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｓｒ２＋、Ｂａ２＋から選択される、請求の範囲第６項の方法。
１４．好ましい金属イオンがＣａ２＋である、請求の範囲第１３項の方法。
１５．化学量論量または２０％以下のモル過剩で使用される好ましいアミン類が、一般式ＩないしＩＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ、▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ、▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ、（式中：Ｒ１ないしＲ８は、同一であるかまたは異なっていて、Ｈ、または１−４個のＯＨ基および／または１−４個のアルコキシまたはヒドロキシアルコキシ基によって置換されていてもよい直鎖または分枝鎖状Ｃ１−６アルキル基であり、Ｒ９ないしＲ１０は、同一であるかまたは異なっていて、Ｒ１またはＯＨであり、ｎは、０−６であり、ｍは、２−８である）のジアミンの中から選択されるか、またはこれらが３ないし６個のＮ原子より成る直鎖のまたはマクロ環式のポリアミンから選択される、請求の範囲第１項の方法。
１６．好ましいアミンが：エチレンジアミン、１，２−ジアミノプロパン、１，３−ジアミノプロパン、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン、（シス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、（トランス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、ピペラジン、２−メチル−ピペラジン、１，４−ジメチル−ピペラジン、２，５−ジメチル−ピペラジン、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン、その誘導体およびその高級および低級同族体、から選択される、請求の範囲第１５項の方法。
１７．好ましい双極性中性溶媒が：ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチル−ピロリドン、ヘキサメチルホスホルアミド、から選択される、請求の範囲第６項の方法。
１８．好ましいプロトン性有機溶媒が：メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、エチレングリコール、１，２−プロピレングリコール、１，３−プロピレングリコール、ホルムァミド、Ｎ−メチル−ホルムアミド、から選択される、請求の範囲第６項の方法。
１９．段階ｃ）またはｄ）で得られる光学的に純粋なホリニン酸の塩を水に溶解させ、得られる水溶液を０ないし２５℃の範囲の温度で鉱酸を加えることによってＰＨ値１−３まで酸性化して、９９％より高い光学純度の相当する遊離ホリニン酸の（６Ｒ）または（６Ｓ）異性体を沈殿させる、請求の範囲第６項の方法。
２０．水溶性のアルカリ土類金属の鉱酸塩が塩化物および硝酸塩から選択される、請求の範囲第１２項の方法。
２１．塩化用ジアミンが：エチレンジアミン、１，２−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン、（シス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、（トランス）−１，２−ジアミノ −シクロヘキサン、ピペラジン、２−メチル−ピペラジン、１，４−ジメチル− ピペラジン、２，５−ジメチル−ピペラジン、から選択される、ジアミノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネート。
２２．塩化用ジアミンが：エチレンジアミン、１，２−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロパン、（シス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、（トランス）−１，２−ジアミノ −シクロヘキサン、ピペラジン、２−メチル−ピペラジン、１，４−ジメチル− ピペラジン、２，５−ジメチル−ピペラジン、から選択される、９９％より高い光学純度をもつジアミノ（６Ｒ）−ホリネート。
２３．塩化用ジアミンが：エチレンジアミン、１，２−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−プロパン、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロバン、（シス）−１，２−ジアミノ−シクロヘキサン、（トランス）−１，２−ジアミノ −シクロヘキサン、ピペラジン、２−メチル−ピペラジン、１，４−ジメチル− ピペラジン、２，５−ジメチル−ピペラジン、から選択される、９９％より高い光学純度をもつジアミノ（６Ｓ）−ホリネート。
２４．エチレンジアミノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネート；ピペラジノ（６Ｒ，Ｓ）− ホリネート；１，４−ジメチル−ピペラジノ（６Ｒ，Ｓ）−ホリネート：１，３ −ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロピル（６Ｒ，Ｓ）−ホリネートエチレンジアミノ（６Ｒ）−ホリネート；エチレンジアミノ（６Ｓ）−ホリネート；ピペラジノ（６Ｒ）−ホリネート；ピペラジノ（６Ｓ）−ホリネート；１，４−ジメチル−ピペラジノ（６Ｒ）−ホリネート；１，４−ジメチル−ピペラジノ（６Ｓ）−ホリネート；１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロピル（６Ｒ）−ホリネート：１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシ−プロピル（６Ｓ）− ホリネート；から選択されるジアミノ−ホリネート。