JP2022506246A

JP2022506246A - 葉酸塩

Info

Publication number: JP2022506246A
Application number: JP2021523460A
Authority: JP
Inventors: ウルマン，マルティン; ビースラー，ゲルト; ボーデンミュラー，アーサー; ミュラー，マルクス
Original assignee: アプロフォルアクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2019-10-31
Publication date: 2022-01-17
Also published as: US20210403471A1; BR112021008325A2; EP3646873A1; EP3873475A1; US11787808B2; US20230416253A1; CA3117575A1; AU2019370731A1; WO2020089443A1; CN113056273A

Abstract

本発明は、結晶構造の葉酸塩に関するものである。この葉酸塩は、葉酸アニオンと有機カチオンから成る。この葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、この有機カチオンは、コリン、Ｎ－メチルアミノエタノール、２－アミノ－２－メチルプロパノール、及び、２－ジメチルアミノエタノールから成る群から選択されたアルカノールアミンである有機化合物である。

Description

本発明は、葉酸塩、葉酸塩製剤及び葉酸塩を含む組成物に関するものである。

うつ病と、認知症、自閉症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）及びアルツハイマー症等のその他の精神障害と、１型及び２型糖尿病、血管障害及び癌等の慢性的な非伝染性疾病（ＮＣＤｓ）とは、特に老齢人口の観点から、患者と医療制度にとって増大する負担である。これらの疾病には様々な別々の理由があるが、共通の危険因子として、全身の葉酸状態又は特定の組織の葉酸状態が準最適であることが発見されている。

ビタミンＢ複合体群が、例えば、炭水化物を、エネルギーを生成するために代謝されるブドウ糖に変換する等の、体の代謝プロセスの多くに関与していることは、良く知られている。これらのビタミンは、更に、脂肪及びタンパク質の分解に必須であり、消化管の内壁に沿った筋緊張の維持、及び、神経系の健康の増進、例えば、眼、皮膚、毛髪、肝臓及び腎臓の健康増進に重要な役割を果たしている。

更に、葉酸（ｆｏｌａｔｅ）は、新しい細胞の生成及び維持に必須であることが知られている。特に、幼児期や妊娠期のように、細胞の分裂と増殖が急速に行われる時期には重要である。葉酸はＤＮＡを複製するために必要である。従って、葉酸の欠乏はＤＮＡ合成と細胞分裂を妨げ、細胞交代（ターンオーバー）の速い部位である骨髄に、臨床的に最も影響を及ぼす。ＲＮＡとタンパク質の合成は妨げられないから、大きな赤血球、即ち、巨大赤芽球が生成され、その結果、セリアック病及び栄養に起因する貧血にみられるような、即ち、妊娠期、幼児期又は小児期に見られるような、巨赤芽球性貧血のような大赤血球性貧血になる。従って、成人、特に高齢者、及び、小児は、正常な赤血球を作り、貧血を防ぐために、葉酸を必要とする。葉酸は、又、癌の原因になるかも知れないＤＮＡの変化を妨げるのを助ける。

様々なテトラヒドロ葉酸誘導体のような葉酸誘導体は、又、薬剤又は他の誘導体を作成するための基礎物質としても使用することができる。更に、テトラヒドロ葉酸及びその誘導体は、特にその酸化に対する感受性のために、極度の不安定性を有することで知られている。特に、５－ホルミルテトラヒドロ葉酸（フォリン酸、ロイコボリン）及びその生理学的に活性な５－ホルミル－（６Ｓ）型は、主に腫瘍学上の薬剤成分として、メトトレキサート及び５－フルオロウラシルを用いる併用治療に、また、妊娠に伴う葉酸欠乏症貧血の治療や、抗生物質治療等に重要である。葉酸及び還元葉酸の間では、そのカルシウム塩が相対的に最も安定した誘導体と言うことができる。すなわち、ＵＳ５，８１７，６５９及びＵＳ６，４４１，１６８は、前記酸の当量あたり少なくとも１当量の結晶水を有する、５－メチル－（６Ｒ，Ｓ）－、（６Ｓ）－又は（６Ｒ）－テトラヒドロ葉酸の結晶塩、好ましくはカルシウム塩を開示する。５－メチルテトラヒドロ葉酸は、更なる代謝なしに血液脳関門を直接透過することができる、唯一の市販されている葉酸誘導体である。天然に存在する５－メチルテトラヒドロ葉酸は、もっぱら６Ｓ型である。その６Ｒ型は生化学的に不活性とみなされ、腎臓を通って排出される。更に、様々な型の葉酸及び／又は還元型葉酸を含むヒト及び動物向けの幾つかの組成物が、種々の形態で、また、ビタミン、アルギニン、リジン、チアミン及び／又は他の活性成分と共に、栄養補助食品として、或いは、神経疾患、病態生理学的疾患、循環器疾患、関節炎及び炎症状態等の様々な疾患の治療及び予防用として、発表されている。

種々の葉酸塩が知られている。一般に、これらの塩は、葉酸と、カルシウム及びマグネシウムのような無機カチオンを含む。これらのアルカリ土類金属カチオンは、それ自体が人間に薬学的効果を示さないという限りにおいては、不活性である。このような塩の水溶液中における乏しい溶解度は広く発表されている。葉酸の溶解度と安定性が改良された含水組成物は、例えば、ＵＳ９，３０１，９２２及びＵＳ９，６４２，８５３に開示されている。

ＵＳ５，３８２，５８１は、アンモニウム塩を使用した５－メチル－テトラヒドロ葉酸のジアステレオマー分離を開示する。ＷＯ２０１８／１７８１４２は、ナトリウムと有機塩基を含む５－メチル－テトラヒドロ葉酸の２成分塩を記述する。ＵＳ２０１６／０２０７９２５は、Ｌ－アルギニン及びＬ－アスパラギンのようなアミノ酸を含有するＬ－メチル－葉酸の塩を開示する。この塩は凍結乾燥され、非晶性のようである。ＵＳ５，７１０，２７１は、葉酸の（６Ｓ）及び（６Ｒ）ジアステレオマーの生成、分離及び精製のプロセスを記述する。更に、ＷＯ２００９／１０３３３４は、凍結乾燥又は噴霧乾燥された、Ｌ－メチル－テトラヒドロ葉酸のグルコサミン塩及びガラクトサミン塩を開示する。ＷＯ２００９／１０３３３３は、純粋で安定したジアステレオマーを得るために、フェニルエチル－アミン化合物又はナフチルエチル－アミン化合物の形態の有機塩基を用いて、５－メチル－テトラヒドロ葉酸の（６Ｒ）及び（６Ｓ）ジアステレオマーを分離するプロセスを記述する。ＣＮ１０７３０４２１２は、非晶性のＬ－メチル－テトラヒドロ葉酸アミノ酸塩を生成するためのプロセスを開示する。ＷＯ９３／１７０２２は、フォリン酸の立体異性体の分離のためのプロセスを開示する。この分離は、ジアミン又はポリアミンを用いて（Ｒ／Ｓ）フォリン酸を塩化し、次いで、この
フォリン酸の（６Ｓ）ジアステレオマーを選択的に結晶化することにより、達成される。

更に、葉酸と、例えば、ビタミン、リジン、チアミン及びその他の活性成分等の追加的な化合物と含む、非常に多数の葉酸塩化合物が記述されている。しかし、水にも有機溶媒にも良好な溶解度を有する、安定した葉酸の塩は、医薬組成物により広い用途を与えるであろう。

ＵＳ５，８１７，６５９ＵＳ６，４４１，１６８ＵＳ９，３０１，９２２ＵＳ９，６４２，８５９ＵＳ５，３８２，５８１ＷＯ２０１８／１７８１４２ＵＳ２０１６／０２０７９２５ＵＳ５，７１０，２７１ＷＯ２００９／１０３３３４ＷＯ２００９／１０３３３３ＣＮ１０７３０４２１２ＷＯ９３／１７０２２

本発明の目的は、追加的な活性化合物に化学結合する葉酸塩であって、良好な安定性と、水にも無極性溶媒にも良好な溶解度を示す、葉酸塩を提供することである。

この目的は、請求項１に記載された本発明による葉酸塩によって達成される。更なる好ましい実施形態は、従属請求項に従う。

特定の有機又は無極性溶媒中の特定の葉酸塩の溶解度が、その溶液の全重量の２重量パーセント（ｗ／ｗ）より大きい場合は、無極性溶媒中の溶解度が高いとみなされる。溶解度は２０℃で測定されている。無極性溶媒又はその混合物は、例えば、グリセロール、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）である。無極性溶媒は、如何なる水分も含有しない乾燥した溶媒と理解される。無極性溶媒は、単一種の無極性溶媒を含む純粋溶媒であるか、又は、前記無極性溶媒を少なくとも二種類混合したものであることができる。極性は、水の極性と比較される。

高い結晶化度とは、葉酸塩の結晶質の含量が葉酸塩の総量の４０％より多いことを意味する。従って、結晶性の葉酸塩は、４０％より多くの結晶質を含有する葉酸塩と理解される。結晶化度は、Ｘ線回折分析（ＸＲＤ）によって決定される。

本発明の葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成る。このアニオンは、葉酸塩であり、好ましくは、５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸塩である。更に、このカチオンは、有機化合物であり、この有機化合物は、コリン、Ｎ－メチルアミノエタノール、２－アミノ－２－メチルプロパノール又は２－ジメチル－アミノエタノールからなる群から選択されたアルカノールアミンである。

請求項１に記載された結晶性葉酸塩の葉酸塩は、有機溶媒中で高い溶解度を有する。有機溶媒中における高い溶解度とは、溶液全重量の２重量パーセントより高い溶解度と理解される。

更なる実施形態では、この葉酸塩のアニオンは、また、５－ホルミル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸塩でも良い。実施可能な有機カチオンは同じ群、即ち、コリン、Ｎ－メチル－アミノエタノール、２－ジメチル－アミノエタノール、及び、２－アミノ－２－メチル－プロパノールから成る群から選択される。

本発明による結晶性葉酸塩は、高い安定性を示し、かつ、また、水中と無極性溶媒中で高い溶解性を示す。

この葉酸塩のアニオン、５－ホルミル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸又は５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸の更なる対イオンは、有機カチオン・アルギニンであることができる。

好ましい実施形態では、結晶性葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成る。このアニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸である。このカチオンはジ－コリンである。

他の実施形態では、この結晶性葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このアニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、このカチオンはモノ－２－ジメチルアミノエタノールである。

他の実施形態では、この結晶性葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このアニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、このカチオンはＮ－メチルアミノエタノールである。

更に他の実施形態では、この結晶性葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このアニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、このカチオンは２－アミノ－２－メチルプロパノールである。

更に他の実施形態では、この結晶性葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このテトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、この有機カチオンはジ－コリンであり、ここで、重水中の^１Ｈ－ＮＭＲシフトは、表１のとおりである。

更に他の実施形態では、この結晶性テトラヒドロ葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このテトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、この有機カチオンはジ－２－ジメチルアミノエタノールであり、ここで、重水中における^１Ｈ－ＮＭＲシフトは、表２のとおりである。

更に他の実施形態では、この結晶性テトラヒドロ葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このテトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、この有機カチオンはモノ－２－ジメチルアミノエタノールであり、ここで、重水中における^１Ｈ－ＮＭＲシフトは、表３のとおりである。

更に他の実施形態では、この結晶性テトラヒドロ葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このテトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、この有機カチオンはジＮ－メチルアミノエタノールであり、ここで、重水中における^１Ｈ－ＮＭＲシフトは、表４のとおりである。

更に他の実施形態では、この結晶性テトラヒドロ葉酸塩はテトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンから成り、このテトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸塩であり、有機カチオンはジ２－アミノ－２－メチルプロパノールであり、ここで、重水中における^１Ｈ－ＮＭＲシフトは、表５のとおりである。

更なる好ましい実施形態においては、医薬組成物が、本発明による少なくとも一つの葉酸塩を主要な活性化合物として含む。この組成物は、更に、少なくとも薬理学的に許容できる賦形剤を含有する。この組成物は、例えば、緩衝化合物を含むことができる。緩衝化合物として適当で好ましいのは、トロメタモールとＨＥＰＥＳである。更に、この組成物中に抗酸化化合物が存在することができる。好ましい抗酸化化合物は、チオグリセロール、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及び、システインである。

更に、前述の本発明による少なくとも一つの葉酸塩は、葉酸塩の投与により良い影響を受ける欠乏症又は障害の予防及び／又は治療用の薬剤、食品添加物又は栄養補助食品を生成するために使用される。葉酸塩を含有する組成物により良い影響を受ける病態は多い。このような疾病は、例えば、病態生理学的疾病、神経疾患、及び、炎症性疾患である。

更に、本発明による結晶性葉酸塩と、葉酸アニオンと有機カチオンから成るテトラヒドロ葉酸塩の生成方法は、シュウ酸を、その代わりにフッ化物塩を、又は、そのフリー・コンパウンドから直接、葉酸アルカリ土類金属塩又はフリー葉酸の水性の組成物に加える工程を含む。

驚いたことに、結晶化は、１－プロパノールのような、限定された量の水を含む、例えば１２重量％より少ない水を含む、好ましくは１０重量％より少ない量の水を含む、有機溶媒から達成された。水の重量％は、この有機溶媒と水の総重量に基づく。水の最小限度量は、有機溶媒中の０.２重量％の水に相当する量である。これは、葉酸のモル量に基づく結晶水当量１乃至１７０に相当する。この分離された葉酸塩中に１.５乃至２の結晶水が検出されている。この有機溶媒又は無極性溶媒はドライであると理解され、即ち、無水であると理解される。前述した種々の量で有機溶媒に水を加えることなく、全ての葉酸塩は非晶形で沈澱する。

本発明による結晶性葉酸塩は、更に、図で説明される。

図１は、実施例１の５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジコリン塩のＸ線ディフラクトグラムを示す。図２は、実施例３の５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸モノ２－ジメチルアミノエタノール塩のＸ線ディフラクトグラムを示す。図３は、実施例４の５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジ－２－ジメチルアミノエタノール塩のＸ線ディフラクトグラムを示す。図４は、実施例５の５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジＮ－メチルアミノエタノール塩のＸ線ディフラクトグラムを示す。図５は、実施例６の５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジ２－アミノ－２－メチルプロパノール塩のＸ線ディフラクトグラムを示す。

５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジコリン塩の生成

アルゴン下で、７.００ｇ（１５.２３ｍｍｏｌ）のレボメフォリック酸が７０ｍｌの１－プロパノール中に懸濁され、還流された。次に、７．７１ｍｌ（３１．９９ｍｍｏｌ）のコリンヒドロキシドの４７％水溶液が加えられ、還流下で、透明な溶液になるまでかき混ぜられた。次に、１－プロパノール中の水分濃度３．２％ｗ／ｗになるように、追加の８０ｍｌの１－プロパノールが加えられ、溶液に製品の結晶サンプルの種ができた。６５℃で結晶化が始まった後、懸濁液は、６５℃から２乃至８℃までゆっくりとクールダウンされた。懸濁液は、更に２時間、２乃至８℃でゆっくりとかき混ぜられた。粒状の結晶体が吸引され、冷却された１－プロパノールで洗浄され、乾燥され、７．２９ｇの白い結晶質の未精製の表題の化合物を得た。７．２９ｇの未精製の表題の化合物のアルゴン下での再結晶化は、約１３０ｍｌのメタノールに６０℃で溶かし、６０℃の真空で気化することによって行われる。その残渣は、約６０ｍｌの１－プロパノール中に取り込まれ、６０℃で溶かされ、最終質量４０gの溶液に濃縮された。７０℃のオイルバスで、溶液は、アルゴン下、７０℃で、１－プロパノールと水（２０：２％ｖ／ｖ）の混合物（１－プロパノール中約４.０％の水）で希釈され、一方、結晶化は、種の形成後、淡黄色の溶液から開始された。懸濁液の温度は段階的に２０℃まで下げられ、結晶化は、２乃至８℃でゆっくりかき混ぜることにより完了した。分離された結晶は６０℃／＜１ｍｂａｒで乾燥され、５．７６gのＭＴＨＦジ－コリンを生じた。分析データは、次のとおりである。

旋光度は、α^２０Ｄ＋３３．６°（ｃ＝１Ｈ_２Ｏ）である。
ＭＴＨＦジコリン中の結晶水は、（ＫａｒｌＦｉｓｃｈｅｒ（ＫＦ）による水分析及び微量分析）により、１．６と算出された。
融点は、（示差走査熱量測定（ＤＳＣ）)により、２３２乃至２３３℃と検出された。
Ｘ線回折分析は、表７のとおりである。

溶解度は、表８のとおりである。

有機溶媒中の結晶性ジコリンの溶解度は、極めて多様な様相を呈し、結晶度によって決まるように思われる。ジコリン葉酸塩が高度に結晶化した場合、換言すれば、結晶質の含有量が多い場合には、エタノール中のジコリン葉酸塩の溶解度は低く、溶液全重量の０．３重量％である。非晶質の含有量が多い場合は、エタノール中のジコリン葉酸塩の溶解度は極めて高い（３８．８重量％）。更に、有機溶媒の混合物中では、例えば、溶液全重量の５重量％のメタノール又はグリセロールとエタノールの混合物中では、高度に結晶化したジコリン葉酸塩の溶解度が増進され、２５重量％に至る（全溶液重量の）。結晶化度が高いとは、葉酸塩の結晶質含有量が、葉酸塩全重量の４０％より多いことを意味する。また、溶媒中の溶解度が高いとは、葉酸塩が全溶液重量の２重量％より多く溶解できることを意味する。

１３．７２ｇ（２８．９ｍｍｏｌ）のレボメフォリック酸が、アルゴン下で、２０乃至２２℃で、７０ｍｌのメタノール中に懸濁された。次に、１６０ｍｌ（５７．６ｍｍｏｌ、１－プロパノール中０．３６０ｍｏｌ／ｌ）の水酸化コリン溶液が、２０乃至２２℃で、約３分間加えられ、４ｍｌの１－プロパノールでリンスされ、透明な溶液になるまで、２０ないし２２℃でかき混ぜられた。次に、追加の１３．５ｍｌの１－プロパノールが加えられ、その反応混合物は５０℃／５０ｍｂａｒで蒸発させられ、次に、１１ｍｌの１－プロパノールとの同時蒸発が二度なされ、４３．６ｇの残渣を生じた。この残渣は、アルゴン下で、１４０ｍｌの１－プロパノールで希釈され、外部温度６５℃まで加熱された。種結晶を添加し、及び、５．２５ｍｌの水が、結晶化が始まる一方で混濁が続く（約３．７％ｗ／ｗの水）まで、ゆっくりと６５℃で加えられた。この混合物は攪拌され、その温度は２０分間にわたり５０℃まで下げられ、次に、放置されて３０℃まで冷却され、そして、こうして形成された濃い懸濁液は、７０分間にわたり、２乃至８℃で撹拌された。その結晶が分離され、４ｍｌの１－プロパノール／水３１：１（ｖ／ｖ）と２４ｍｌの１－プロパノールの混合物で洗浄され、４５乃至６０℃／５０乃至５ｍｂａｒで乾燥され、１６．１ｇのＬ－ＭＴＨＦジ－コリンが生成された。分析データは、つぎのとおりである。

Ｌ－ＭＴＨＦジコリン中の結晶水は、（ＫＦ及び微量分析）により、２．０と算出された。
融点は、（ＤＳＣ）により、２３２乃至２３３℃と検出された。

５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸モノ２－ジメチルアミノエタノール塩の生成

２．００ｇ（４．３５３ｍｍｏｌ）のレボメフォリック酸が、アルゴン下で、２０ｍｌの水の中に、少量のシステインとともに配置され、７０℃まで加熱された。次に、この懸濁液は、８７６μｌ（８．７０６ｍｍｏｌ、２当量）の２－ジメチルアミノエタノールで処理され、透明な溶液になるまで、７０℃で撹拌された。次に、イソプロパノールが、７０℃で、徐々に、全部で１５０ｍｌ加えられた。混濁に達した時、更に７０ｍｌの２－プロパノールが加えられ、この混合物は、結晶化を開始するように、約６０℃で、種結晶によって処理された（２－プロパノール中に約１０．４％の水）。次に、この混合物は、ゆっくりと、徐々に、６０℃から２乃至８℃にクールダウンされた。これらの結晶は吸引され、冷却された２－プロパノールで洗浄され、５０℃で真空乾燥され、１．９６ｇの白色結晶の表題の化合物を得た。分析データは、次のとおりである。

旋光度は、α^２０Ｄ＋１１.０°（ｃ＝１Ｈ_２Ｏ）であった。
Ｌ－ＭＴＨＦモノジメチルアミノエタノール（Ｌ－ＭＴＨＦモノデアノール）中の結晶水は、（熱重量分析法（ＴＧ）、ＫＦ及び微量分析）により、１．５であった。
融点は、（ＤＳＣ）により、１９４℃と計測された。
Ｘ線回折分析は、表１１のとおりである。

溶解度は、表１２のとおりである。

５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジ２－ジメチルアミノエタノール塩の生成

２．００ｇ（４．３５３ｍｍｏｌ）のレボメフォリック酸が、アルゴン下で、２０ｍｌの１－プロパノールの中に配置され、８００μｌの水を加えながら、還流させるように加熱された。次に、この懸濁液は、８７６μｌ（８．７０６ｍｍｏｌ、２当量）の２－ジメチルアミノエタノールで処理され、３．２ｍｌの水で希釈され、そして、透明な溶液になるまで１００℃で撹拌された。次に、１－プロパノール（７ｍｌ）が加えられ、その溶媒は、真空中で、４０℃で気化された。その残渣（３．６８ｇ）は、３０ｍｌの２－プロパノール／１０ｍｌの水に溶解され、結晶化が始まるまで、真空中で、４０℃で、溶媒を蒸留によって取り除くことにより濃縮される。これらの結晶は、１－プロパノール中で、５分間、２０乃至２５℃で超音波処理され、吸引濾過され、１－プロパノールで３回洗浄され、６０℃／＜１ｍｂａｒで乾燥され、２．３４ｇの白色結晶の表題の化合物を得た。分析データは、次のとおりである。

旋光度は、α^２０Ｄ＋３１.６°（c＝１Ｈ_２Ｏ）であった。
融点は、（ＤＳＣ）により、１５７℃と計測された。
Ｘ線回折分析は、次のとおりである。

５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジＮ－メチルアミノエタノール塩の生成

３．００g（５．３０ｍｍｏｌ）のレボメフォリネートカルシウムが、アルゴン下で、少量のシステインと共に、４５ｍｌの水の中に配置され、７０℃まで加熱された。得られた懸濁液は、次に、５ｍｌの水に溶解された、８４８μｌ（１０．６０ｍｍｏｌ）のＮ－メチルアミノエタノールと６６８ｍｇ（５．３０ｍｍｏｌ）のシュウ酸で処理された。この希薄な懸濁液は、更に、５分間、７０℃で撹拌され、次に０℃まで冷却され、５０分間かき混ぜられた。この反応混合物は濾過され、そして、その透明な溶液は、少量のシステインで安定化され、４５℃／＜２００ｍｂａｒで濃縮された。その残渣に種結晶が加えられ、その生成物はゆっくりと結晶化を始め、その結晶化は２乃至８℃で完了した。これらの結晶は５０℃／＜１ｍｂａｒで乾燥され、３.０８ｇの粗生成物を生じた。この粗生成物は、２５ｍｌのメタノール、１.２１ｍｌ（３当量）のＮ－メチルアミノエタノール及び５ｍｌの１－プロパノールに溶解される。この混濁液は、濾過され、１０ｍｌのメタノールで洗浄され、その透明な濾過液は６０℃まで加熱された。次に、この溶液に、６５ｍｌの１－プロパノール、１５０μｌの水及び１当量のＮ－メチルアミノエタノールが加えられた。この混合物は、結晶化を開始させるために、６０℃で、種結晶と共に処理され、次に、ゆっくりと、徐々に、６０℃から０℃までクールダウンされた。これらの結晶は吸引され、１－プロパノール／メタノール２：１で洗浄され、次いで、１－プロパノールとエーテルで洗浄された。これらの分離された結晶は、５０℃／＜１ｍｂａｒで乾燥され、２.６０ｇのオフホワイトの結晶である表題の化合物を生じた。分析データは、次のとおりである。

旋光度は、α^２０Ｄ＋４１.２°（c＝１Ｈ_２Ｏ)であった。
Ｌ－ＭＴＨＦジＮ－メチルアミノエタノール（Ｌ－ＭＴＨＦｄｉＮＭＡＥ）中の結晶水は、（ＫＦと微量分析）により、１．５であった。
融点は、（ＤＳＣ）により、１９９℃と計測された。
Ｘ線回折分析は、表１６のとおりである。

溶解度は、表１７のとおりである。

５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸ジ２－アミノ－２－メチルプロパノール塩の生成

３.００g（５.３０ｍｍｏｌ）のレボメフォリネートカルシウムが、アルゴン下で、少量のシステインと共に、４５ｍｌの水の中に配置され、７０℃まで加熱された。次に、この懸濁液は、５ｍｌの水に溶解した１０１２μｌ（１０．６０ｍｍｏｌ）の２－アミノ－２－メチルプロパノール及び６６８ｍｇ（５．３０ｍｍｏｌ）のシュウ酸で処理された。この希薄懸濁液は、７０℃で、５分間撹拌され、次いで０℃まで冷却された。この希薄懸濁液は濾過され、その溶液はシステインで安定化され、４５℃／＜２００ｍｂａｒで濃縮された。その残渣は、種結晶と共に処理され、その結晶化は、２乃至８℃で、一晩で完了した。これらび結晶は５０℃／１ｍｂａｒで乾燥された。この粗生成物は６．５ｍｌの水に溶かされ、７０℃に加熱された。溶液は７０ｍｌの１－プロパノール（１－プロパノール中に１０．４％の水）で希釈され、種結晶と共に処理され、ゆっくりと徐々に２０乃至２３℃まで冷やされた。これらの結晶は分離され、１－プロパノール／水２０：１（ｖ／ｖ）、１－プロパノール及びエーテルで洗浄され、５０℃／＜１ｍｂａｒで乾燥され、２．７９ｇのオフホワイトの結晶である表題の化合物を生じた。分析データは、次のとおりである。

旋光度は、α^２０Ｄ＋３４.６°（c＝１Ｈ_２Ｏ)であった。
Ｌ－ＭＴＨＦジ２－アミノ－２－メチルプロパノール中の結晶水は、（ＫＦと微量分析）により、１．５であった。
Ｘ線回折分析は、表１９のとおりである。

溶解度は、表２０のとおりである。

実施例２で使用される水酸化コリン溶液の生成

１０．３９ｇ（７４．４２ｍｍｏｌ）の塩化コリンが、アルゴン下で、１１０ｍｌの１－プロパノール及び３．０２ｇ（７４．４２ｍｍｏｌ）の水酸化ナトリウムの溶液の中に、２０乃至２５℃で配置された。この混合物は、約７０分間、７０乃至７２℃に加熱され、そして７０℃まで加熱された。この懸濁液は、次に、４５分間、０乃至５℃まで冷却された。この白色懸濁液はシリカベッドを通して濾過され、その濾過液は、メスフラスコの中で、２００ｍｌになるまで、１－プロパノールで満たされた。この水酸化コリンの濃度は０．３６ｍｏｌ／ｌであった（滴定により計測された）。

この溶液は、葉酸の高純度のコリン塩を生成するために使用されるコリンの貯蔵形態として使用された。

Claims

テトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンとから成る結晶性葉酸塩において、前記アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、前記カチオンは有機化合物であり、前記有機化合物は、コリン、２－ジメチルアミノエタノール、Ｎ－メチルアミノエタノール、及び２－アミノ－２－メチルプロパノールから成る群から選択されたアルカノールアミンであることを特徴とする、結晶性葉酸塩。
請求項１に記載された結晶性葉酸塩において、前記葉酸塩は、有機溶媒中で高い溶解度を有する、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記有機化合物は、ジ－コリンである、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記有機化合物は、モノ－２－ジメチルアミノエタノールである、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記有機化合物は、ジ－２－ジメチルアミノエタノールである、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記有機化合物は、ジ－Ｎ－メチルアミノエタノールである、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記有機化合物は、ジ－２－アミノ－２－メチルプロパノールである、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記テトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンはジ－コリンであることを特徴とする、前記結晶性葉酸塩。
請求項１又は２に記載された結晶性葉酸塩において、前記テトラヒドロ葉酸アニオンは５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンはモノ－２－ジメチルアミノエタノールであることを特徴とする、前記結晶性葉酸塩。
請求項１乃至９のうちのいずれか一項に記載された少なくとも一つの葉酸塩を主要な活性化合物として含有し、かつ、少なくとも薬学的に許容可能な賦形剤を含有する、医薬組成物。
請求項１乃至９のうちのいずれか一項に記載された葉酸塩であって、前記葉酸塩は、薬剤、食品添加物又は栄養補助食品として使用するための葉酸塩であり、また、テトラヒドロ葉酸の投与によって良い影響を受ける欠乏症や障害の予防及び／又は治療用の葉酸塩である、前記葉酸塩。
テトラヒドロ葉酸アニオンと有機カチオンとから構成される、請求項１乃至９のいずれか一項に記載された結晶性葉酸塩の生成方法において、有機溶媒と水の混合物の全重量の０．２乃至１２重量パーセントの範囲内の水を含有する有機溶媒から、前記葉酸塩を結晶化させる工程を含む、前記生成方法。