BR112021008325A2

BR112021008325A2 - sais de folato

Info

Publication number: BR112021008325A2
Application number: BR112021008325-1A
Authority: BR
Inventors: Martin Ulmann; Gerd WIESLER; Arthur Bodenmüller; Markus Müller (Falecido)
Original assignee: Aprofol Ag
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2019-10-31
Publication date: 2021-08-03
Also published as: EP3873475A1; CA3117575A1; US20210403471A1; EP3646873A1; CN113056273A; US11787808B2; US20230416253A1; JP2022506246A; WO2020089443A1; AU2019370731A1

Abstract

SAIS DE FOLATO. A presente invenção refere-se a sais de folato cristalinos. Os sais consistem em um ânion de folato e um cátion orgânico. O ânion de folato é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico, e o cátion é um composto orgânico que é uma alcanolamina selecionada do grupo consistindo em colina, N-metilaminoetanol, 2-amino-2-metilpropanol e 2-dimetilaminoetanol.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "SAIS DE FOLATO".

[0001] A presente invenção refere-se a sais de folato, sua prepa- ração e composições compreendendo os mesmos.

[0002] Depressão e outros transtornos de saúde mental, tais como demência, autismo, TDAH e Alzheimer, bem como doenças crônicas não transmissíveis (NCDs), tais como diabetes tipos 1 e 2, doenças vasculares e câncer, são um fardo crescente para os pacientes e os sistemas de saúde, especialmente tendo em vista a população que envelhece. Existem várias razões para essas doenças diferentes; en- tretanto, como um fator de risco comum, foi encontrado um estado subótimo de folato, em todo o corpo ou em tecidos específicos.

[0003] É bem conhecido que vitaminas do grupo do complexo B estão envolvidas em vários processos metabólicos do corpo, por exemplo, na conversão de carboidratos em glicose, que é metaboliza- da para produzir energia. Essas vitaminas são ainda essenciais na quebra de gorduras e proteínas e desempenham um papel importante na manutenção do tônus muscular ao longo do revestimento do trato digestivo e promoção da saúde do sistema nervoso e, por exemplo, olhos, pele, cabelo, fígado e rins.

[0004] Ainda, sabe-se que folato é obrigatório na produção e ma- nutenção de células novas. Especialmente importante em tempos de divisão e crescimento celular rápidos, tais como na infância e na gravi- dez. O folato é necessário para replicar DNA. Portanto, a deficiência de folato dificulta a síntese de DNA e a divisão celular, afetando sobre- tudo clinicamente a medula óssea, um sítio de renovação celular rápi- da. Devido ao fato da síntese de RNA e proteínas não ser prejudicada, grandes glóbulos vermelhos, ou seja, megaloblastos, são produzidos, resultando em anemia macrocítica, tal como anemia megaloblástica, como pode ser visto em doença celíaca e em anemias de origem nu-

tricional, ou na gravidez, primeira infância ou infância. Desta maneira, ambos adultos, especialmente os idosos, e crianças precisam de folato para produzir glóbulos vermelhos normais e prevenir a anemia. O fola- to também ajuda a prevenir alterações no DNA que podem levar a câncer.

[0005] Derivados de folato, tais como diversos derivados do ácido tetra-hidrofólico, também podem ser usados como fármaco ou como substância básica para a preparação de outros derivados. Ainda, ácido tetra-hidrofólico e seus derivados são também conhecidos por possui- rem uma instabilidade extrema, particularmente devido à sua suscetibi- lidade à oxidação. Em particular, ácido 5-formiltetra-hidrofólico (ácido folínico, leucovorina) e sua forma biologicamente ativa 5-formil-(6S) têm importância como ingrediente de fármaco principalmente em onco- logia, como terapia concomitante com metotrexato e tratamento com B-fluorouracila, e no tratamento de anemia por deficiência de folato as- sociada à gravidez, terapia com antibióticos, etc. Dentre folatos e fola- tos reduzidos, os sais de cálcio podem ser mencionados como os deri- vados mais relativamente estáveis: a US 5.817.659 e a US 6.441.168 revelam sais cristalinos, preferivelmente sais de cálcio, de ácido 5- metil-(6R,S)-, (6S) - ou (6R)-tetra-hidrofólico tendo uma água de crista- lização de pelo menos um equivalente por equivalente do dito ácido. O b-Metiltetraidrofolato é o único derivado de ácido fólico no mercado que pode penetrar diretamente na barreira sangue-cérebro sem meta- bolismo adicional. O ácido 5-metiltetra-hidrofólico de ocorrência natural está apenas na forma 68; a forma 6R é considerada bioquimicamente inativa e é excretada pelo rim. Além disso, várias composições para consumos humano e animal, compreendendo ou folatos e/ou folatos reduzidos, foram reportadas, em várias formas e junto com vitaminas, arginina, lisina, tiamina e/ou outros ingredientes ativos, ou como um suplemento nutricional ou para o tratamento e prevenção de várias doenças tais como, por exemplo, doenças neurológicas, fisiopatológi- cas, cardiovasculares, condições artríticas e inflamatórias.

[0006] Vários sais de folato são conhecidos. Em geral, esses sais compreendem um folato e um cátion inorgânico, tais como cálcio e magnésio. Esses cátions de metal alcalino-terroso são inertes, na me- dida em que eles próprios não apresentam nenhum efeito farmacológi- co em humanos. A solubilidade escassa em soluções aquosas de tais sais foi amplamente relatada. Composições aquosas com solubilidade e estabilidade melhoradas de folatos foram reveladas, por exemplo, na US 9.301.922 e na US 9.642.853.

[0007] O documento US 5 382 581 revela separação de diastereô- meros de ácido 5-metil-tetra-hidrofólico usando sais de amônio. O WO 2018/178142 descreve sais binários de ácido 5-metil-tetra-hidrofólico compreendendo sódio e uma base orgânica. A US 2016/0207925 revela sais de L-metil-folato compreendendo aminoácidos tais como L-ar- ginina e L-asparagina. Os sais são liofiizados e parecem ser amorfos. A US 5 710 271 descreve um processo para a preparação, separação e purificação de diastereômeros (6S) e (6R) de ácido folínico. Além disso, o documento WO 2009/103334 revela sais de glucosamina e galactosamina liofilizados ou secos por pulverização de L-metil-tetra- hidrofolato. O WO 2009/103333 descreve um processo para a separa- ção de diastereômeros (6R) e (6S) de ácido 5-metil-tetra-hidrofólico usando uma base orgânica na forma de um composto de feniletil- amina ou naftiletil-amina para obter diastereômeros puros e estáveis. A CN 107304212 revela um processo para a preparação de sais amor- fos de aminoácidos L-metil-tetra-hidrofolato. O WO 93/17022 descreve um processo para a separação de estereoisômeros de ácido folínico. A separação é obtida através da salificação de ácido (R/S) folínico com uma di- ou poliamina e subsequente cristalização seletiva do diaste- reômero (6S) de ácido folínico.

[0008] Ainda, várias composições de folatos compreendendo fola- tos e compostos adicionais, tais como vitaminas, lisina, tiamina e ou- tros ingredientes ativos, foram descritas. No entanto, sais estáveis de folatos com uma boa solubilidade em água e também em solventes orgânicos permitiriam composições farmacêuticas mais versáteis.

[0009] O objetivo da presente invenção é prover sais de folato combinando com um outro composto ativo e apresentando uma boa estabilidade e uma boa solubilidade em água e também em solventes apolares.

[0010] O objetivo é alcançado por um sal de folato de acordo com a presente invenção como definido na reivindicação 1. Outras modali- dades preferidas estão sujeitas às reivindicações dependentes.

[0011] Como uma solubilidade alta em um solvente apolar é con- siderada uma solubilidade de mais de 2% em peso (p/p) de um sal de folato particular em um solvente orgânico ou apolar particular com ba- se no peso total da solução. A solubilidade foi determinada a 20 ºC. Os solventes apolares ou misturas dos mesmos são, por exemplo, glice- rol, metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol e dimetilsulfóxido (DMSO). Os solventes apolares são compreendidos como solventes secos, isto é, sem qualquer teor de água. Os solventes apolares podem ser sol- ventes puros, compreendendo apenas um tipo de solvente apolar ou podem ser uma mistura de pelo menos dois dos solventes apolares mencionados acima. A polaridade é em comparação com a polaridade de água.

[0012] Um grau de cristalinidade alto significa que o teor cristalino do sal de folato é maior do que 40% com base na quantidade total do sal de folato. Portanto, um sal de folato cristalino é compreendido co- mo um sal de folato tendo teor cristalino de mais de 40%. O grau de cristalinidade é determinado através de análise de difração de raios X (XRD).

[0013] Um sal de folato de acordo com a presente invenção con- siste em um ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico. O ânion é um folato, preferivelmente ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico. Além disso, o cátion é um composto orgânico em que o composto or- gânico é uma alcanolamina que é selecionada do grupo que consiste em colina, N-metilaminoetanol, 2-amino-2-metilpropanol ou 2-dimetila- minoetanol.

[0014] Um sal de folato cristalino de acordo com a reivindicação 1, em que os sais de folato têm uma solubilidade alta em solventes orgâà- nicos. Uma solubilidade alta em solventes orgânicos é compreendida como uma solubilidade de mais de 2% em peso com base no peso to- tal da solução.

[0015] Em uma modalidade adicional, o ânion do sal de folato também pode ser ácido 5-formil-(6S)-tetra-hidrofólico. Os cátions or- gânicos possíveis são selecionados do mesmo grupo, isto é, do grupo que consiste em colina, N-metil-aminoetanol, 2-dimetil-aminoetanol e 2-amino-2-metil-propanol.

[0016] Sais de folato cristalinos de acordo com a presente inven- ção mostram uma alta estabilidade e também uma alta solubilidade em água e em solventes apolares.

[0017] Um contraíon adicional para os ânions do sal de folato, áci- do 5-formil-(6S)-tetra-hidrofólico ou ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico, pode ser o cátion orgânico arginina.

[0018] Em uma modalidade preferida, o sal de folato cristalino consiste em ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico. O ânion é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico. O cátion é dicolina.

[0019] Em outra modalidade, o sal de folato cristalino consiste em ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico, em que o ânion é ácido 5-metil- (6S)-tetra-hidrofólico e em que o cátion é mono-2-dime- tilaminoetanol.

[0020] Em outra modalidade, o sal de folato cristalino consiste em ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico, em que o ânion é ácido 5-metil- (6S)-tetra-hidrofólico e em que o cátion é N-metil amino- etanol.

[0021] Em uma modalidade adicional, o sal de folato cristalino consiste em ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico, em que o ânion é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e em que o cátion é 2-amino-2-metilpropanol.

[0022] Em uma modalidade adicional, o sal de folato cristalino consiste no ânion de ácido tetra-hidrofólico que é ácido 5-metil-(6S)- tetra-hidrofólico e no cátion orgânico que é dicolina em que os desvios de *H-RMN em D2O são

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[0023] Em uma modalidade adicional, o sal de ácido tetra-hidrofó- lico cristalino consiste no ânion de ácido tetra-hidrofólico que é ácido

B5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e no cátion orgânico que é di-2-dimetila- minoetanol em que os desvios de *H-RMN em D2O são o o ÔÕOO ss

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[0024] Em uma modalidade adicional, o sal de ácido tetra-hidrofó- lico cristalino consiste no ânion de ácido tetra-hidrofólico que é ácido B5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e no cátion orgânico que é mono-2-dime- tilaminoetanol em que os desvios de *H-RMN em D2O são e Rs a E a

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[0025] Em uma modalidade adicional, o sal de ácido tetra-hidrofó- lico cristalino consiste no ânion de ácido tetra-hidrofólico que é ácido B5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e no cátion orgânico que é di-N-metilami- noetanol em que os desvios de *'H-RMN em D2O são ss o gg

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[0026] Em uma modalidade adicional, o sal de ácido tetra-hidrofó- lico cristalino consiste no ânion de ácido tetra-hidrofólico que é ácido B5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e no cátion orgânico que é di-2-amino-2- metilpropanol em que o desvio de *H-RMN em D2O são zm qa CÔO Lo e A a AR a a

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[0027] Em uma modalidade preferida adicional, uma composição farmacêutica compreende pelo menos um sal de folato de acordo com a presente invenção como o composto ativo principal. A composição compreende ainda pelo menos um excipiente farmaceuticamente acei- tável. A composição pode, por exemplo, compreender um composto tampão. Os compostos tampão adequados e preferidos são trometa- mol e HEPES. Além disso, um composto antioxidante pode estar pre- sente na composição. Compostos antioxidantes preferidos são tioglice- rol, ditiotreitol (DTT) e cisteína.

[0028] Além disso, o pelo menos um sal de folato de acordo com a presente invenção é usado para a preparação de um medicamento, um aditivo alimentar ou um suplemento nutricional, para a prevenção e/ou tratamento ou de deficiências ou distúrbios que são positivamente afetados por a administração de um sal de folato. Existem várias con- dições de doença que são influenciadas positivamente por composi- ções compreendendo sais de folato. Tais doenças são, por exemplo, doenças fisiopatológicas, neurológicas e inflamatórias.

[0029] Além disso, um método para preparação do sal de folato cristalino de acordo com a presente invenção, o dito sal de ácido tetra- hidrofólico consistindo em um ânion ácido de folato e um cátion orgâ- nico compreende a etapa de adição de ácido oxálico, alternativamente um sal de fluoreto ou diretamente a partir dos compostos livres a uma composição aquosa de sais de metal alcalino-terroso de folato ou áci- do de folato livre.

[0030] Surpreendentemente, cristalização foi obtida a partir de sol- ventes orgânicos, tal como 1-propanol, compreendendo uma quanti- dade limitada de água, por exemplo, menos de 12% em peso de água, preferivelmente menos de 10% em peso de água. A % em peso de água é baseada no peso total do solvente orgânico e água. A quanti- dade mínima de água é uma quantidade correspondendo a 0,2% em peso de água em solvente orgânico. Isso corresponde a 1 a 170 equi- valentes de água cristalina com base na quantidade molar de folato. Nos sais de folato isolados 1,5 a 2 água de cristalização são detecta- dos. Os solventes orgânicos ou apolares são compreendidos serem secos, isto é, não compreendem água. Sem a água adicionada aos solventes orgânicos nas quantidades mencionadas acima, todos os sais de folato precipitam em forma amorfa.

[0031] Os sais de folato cristalinos de acordo com a presente in- venção são descritos adicionalmente nas figuras, em que: a Fig. 1 mostra o difractograma de raios X do sal de dicolina do ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico do exemplo 1; a Fig. 2 mostra o difractograma de raios X do sal de mono-

2-dimetilaminoetanol do ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico do exemplo 3; a Fig. 3 mostra o difractograma de raios X do sal de di-2-di- metilaminoetanol do ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico do exemplo 4; a Fig. 4 mostra o difractograma de raios X de sal di-N-me- tilaminoetanol do ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico do exemplo 5; e a Fig. 5 mostra o difractograma de raios X de sal de di-2- amino-2-metil propanol de ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico do exemplo 6. Exemplos Exemplo 1 Preparação de sal de dicolina de ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico

[0032] 7,00 g (15,23 mmol) de ácido Levomefólico foram suspen- sos sob argônio em 70 mL de 1-propanol e levados para refluxo. En- tão, 7,71 mL (31,99 mmol) de uma solução aquosa de hidróxido de colina 47% foram adicionados e a mistura foi agitada sob refluxo até ser formada uma solução transparente. Então, mais 80 mL de 1- propanol foram adicionados resultando em uma concentração de água em 1-propanol de 3,2% em p/p e a solução semeada com uma amos- tra cristalina de produto. Após cristalização ter início a 65 ºC, a sus- pensão foi esfriada lentamente de 65 ºC para 2-8 ºC. A suspensão foi agitada lentamente a 2-8 ºC por mais 2 h. Os cristais granulados foram filtrados, lavados com 1-propanol resfriado e secos para prover 7,29 g do composto do título em cristalino bruto branco. Recristalização sob argônio de 7,29 g de composto do título bruto dissolvendo em cerca de 130 ml de metanol a 60 ºC e evaporado a 60 ºC a vácuo. O restante foi retomado em cerca de 60 ml de 1-propano!l e dissolvido a 60 ºC se- guido por concentração até a massa final de 40 g de solução. Na tem- peratura de 70 ºC do banho de óleo, a solução foi diluída sob argônio com 22 ml de uma mistura de 1-propanol e água (20:2% v/v) a 70 ºC

(cerca de 4,0% de água em 1-propanol) enquanto a partir da solução amarelo pálido após a semeadura a cristalização começou. A tempera- tura da suspensão foi reduzida gradualmente para 20 ºC e a cristaliza- ção completada através da agitação lenta a 2-8 ºC. Os cristais isola- dos foram secos a 60 ºC/<1 mbar e proveu 5,76 g de dicolina MTHF. Dados analíticos:

A A LEE AR

LE ER Rotação óptica: a2ºº + 33,6º (c=1 H2O) Água de cristal em dicolina de MTHF: 1,6 calculado (análise de água através de Karl Fischer (KF) & microanalysis) Ponto de fusão: 232-233º C (Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC)) Análise de difração de raio X:

Lista de pico do difractograma

17,6149 5,8155 5088,65 | 0,2764 | so | 1878,05 | 5,8216 111,04551 9,2958 320,35 0,3760 | 6 131,19 9,2905 8,9627 11,4563 2097,97 | 0,3840 936,77 | 11,4556 7,5765 13,5529 202,00 |18,7226 99,96 16,5607 7,2373 14,1992 460,41 0,8508 | 8| 210,93 | 14,1994 16] 7,0149 14,6342 431,98 0,2524 | 8| 158,36 | 14,6520 6,5167 15,8216 1653,76 | 0,6104 1058,96 | 15,7790 18] 6,2150 16,5491 642,99 0,4488 283,29 | 16,5503 je] 5,9229 17,3469 1017,17 | 0,5232 528,76 | 17,3726 5,4527 18,8774 4992,44 0,422 E 2396,55 | 18,8837 5,0753 20,3057 4352,89 | 0,4341 2195,14 | 20,3023 4,8661 21,1764 3407,01 | 0,5204 | 6o | 1822,80 | 21,1853 4,5973 22,4387 5633,15 | 0,4240 2708,02 | 22,4395 4,3384 23,7939 3535,90 | 0,4618 1925,41 | 23,7973 4,1694 24,7637 1239,98 | 0,4101 541,98 | 24,7769 4,0087 25,7760 831,56 0,4382 402,18 | 25,7869 3,8590 26,8120 4491,21 | 0,6178 | so | 2982,56 | 26,8056 3,7175 27,8443 1414,54 | 0,4184 694,71 | 27,8460 3,5012 29,6028 1823,55 | 0,5013 1058,01 | 29,6045 3,3931 30,6227 412,39 0,4148 168,97 | 30,5706 3,2818 31,6322 1712,11 | 0,4989 981,56 | 31,6337 3,1495 32,9955 320,51 0,5653 | 6 172,45 | 33,0000 3,0569 34,0194 898,90 0,4588 452,57 | 34,0292 2,9605 35,1572 336,68 8,2202 | 6 108,43 | 35,1733 2,9049 35,8675 545,60 1,0527 461,69 | 35,8695 2,8069 37,2239 258,37 0,6132 138,86 | 37,1657 2,6910 38,8121 270,28 0,4102 111,54 | 38,8293 2,5469 41,0925 600,58 0,8281 485,46 | 41,1230 2,5010 41,8533 371,98 0,4503 268,17 | 41,9128 2,3851 43,9497 172,63 0,5625 88,56 44,0533 2,2799 46,1501 262,73 1,2852 291,03 | 46,2000 2,2304 47,2739 338,31 0,9782 | 6 625,42 | 47,2871 2,0761 50,9480 174,51 0,6686 106,27 | 510446

Solubilidades:

[0033] A solubilidade da dicolina cristalina em solventes orgânicos mostra um quadro bastante diferenciado e parece ser dependente do grau de cristalinidade. Se o sal de folato de dicolina for altamente cris- talino ou em outras palavras tem um teor cristalino alto, a solubilidade do sal de folato de dicolina em etanol é baixa, 0,3% em peso com base no peso total da solução. Em um teor amorfo alto, a solubilidade do sal de folato de dicolina em etanol é muito alta (38,8% em peso). Ainda, em misturas de solventes orgânicos, por exemplo, etanol com 5% em peso de metanol ou glicerol com base no peso total da solução, a so- lubilidade do sal de folato de dicolina altamente cristalino é aumenta- da, e aumenta até 25% em peso (com base no peso total da solução). Um grau alto de cristalinidade significa que o teor cristalino do sal de folato é maior do 40% com base na quantidade total do sal de folato. Uma solubilidade alta em um solvente significa que o sal de folato é solúvel em uma quantidade de mais de 2% em peso com base no pe- so total da solução. Exemplo 2 Preparação de sal de dicolina de ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico

[0034] 13,72 g (28,9 mmol) de ácido Levomefólico foram suspen- sos sob argônio em 70 mL de metanol a 20-22 ºC. Então, 160 ml (57,6 mmol, 0,360 mol/l em 1-propanol) de solução de hidróxido de colina foram adicionados a 20-22 ºC durante cerca de 3 minutos, enxagua- dos com 4 ml de 1-propanol e a mistura agitada a 20-22 “C até uma solução transparente ser formada. Então mais 13,5 mL de 1-propanol foram adicionados e a mistura de reação evaporada a 50 ºC/50 mbar seguido por coevaporação duas vezes com 11 mL de 1-propano!l resul- tando em 43,6 g restantes. O restante foi diluído com 140 ml de 1-

propanol sob argônio e aquecido para uma temperatura externa de 65 ºC. Adição de semente de cristais e 5,25 ml de água foram adiciona- dos lentamente a 65 ºC até a turvação durar (cerca de 3,7% em p/p de água) enquanto a cristalização começa. A mistura foi agitada e a tem- peratura reduzida durante 20 minutos para 50 ºC, depois foi deixada a arrefecer até 30 “C e a suspensão espessa formada agitada por 70 minutos a 2-8 ºC. Os cristais foram isolados, lavados com 4 ml de uma mistura de 1-propanol/água 31:1 (v/v) e 24 ml de 1-propanol e secos a 45-60 ºC/50-5 mbar rendendo 16,1 g de dicolina de L-MTHF. Dados analíticos: o

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ERES Água de cristal em dicolina de L-MTHF: 2.0 calculado (KF & microa- nalysis) Ponto de fusão: 232-233ºC (DSC)

Exemplo 3 Preparação de sal de mono-2-dimetilaminoetanol de ácido 5-metil- (6S)-tetra-hidrofólico

[0035] 2,00g (4,353 mmol) de ácido Levomefólico foram postos sob argônio em 20 ml de água com uma quantidade pequena de ciste- Ína e aquecidos para 70 ºC. Esta suspensão foi então tratada com 876 ul (8,706 mmol, 2 equivalentes) de 2-dimetilaminoetano!l e agitada a 70 ºC até uma solução transparente ser formada. Isopropanol é então adicionado gradualmente a 70 ºC para um total de 150 ml. Quando turvação é atingida, mais 70 ml de 2-propanol foram adicionados, e a mistura foi tratada com cristais de semeadura para iniciar a cristaliza- ção em cerca de 60 ºC (cerca de 10,4% de água em 2-propanol). À mistura foi então lenta e gradualmente resfriada de 60 ºC para 2-8 “ºC. Os cristais foram filtrados, lavados com 2-propanol resfriado e secos sob vácuo a 50 ºC para prover 1,96 g do composto do título como cris- tais brancos. Dados analíticos: ze a TR so a ar Lar o ao

BB AR BB ag Bag ao ae sa |

Rotação óptica: a2ºº +11,0º (c=1 H2O) Água de cristal em mono dimetilaminoetanol de L-MTHF (mono deanol de L-MTHF): 1,5 (Termogravimetria (TG)), KF & microanalysis) Ponto de fusão: 194ºC (DSC) Análise de difração de raio X: Lista de pico de difractograma 13,6684 7,5233 9470,26 | 0,2310 2894,68 | 7,5046 9,9307 10,3232 710,95 | 0,9077 | 8 | 391,22 | 10,3357 9,5756 10,6907 607,82 | 0,3026 | 6 | 223,97 | 10,7202 6,8805 14,9391 2380,98 | 0,4596 1418,01 | 14,9399 6,4302 15,9944 3163,04 | 1,4612 1670,67 | 15,9927 1 6 6,2593 16,4307 3578,72 |1,1601 1774,58 | 16,4324 6,0417 17,0682 5216,61 | 0,7659 3394,07 | 17,0285 18 5,6543 18,1396 688,23 |0,5915 386,13 | 18,2046 | e 5,2111 19,7680 5319,67 | 0,4234 2626,57 | 19,7678 5,0039 20,5988 3591,46 | 0,9940 2626,87 | 20,5952 4,7911 21,5345 3548,03 | 2,5379 2461,35 | 21,5206 4,5649 22,6170 5248,67 | 0,9850 3189,16 | 22,6006 4,5039 22,8777 4508,99 | 0,3774 1819,76 | 22,9112 4,2998 24,0040 1881,06 | 0,7021 1387,73 | 24,0146 3,8953 26,5510 6463,28 | 0,4562 | 68 | 3957,98 | 26,5512 3,7459 27,6194 4178,32 | 0,4823 2546,21 | 27,6310 3,5812 28,9363 828,80 | 0,5346 | e | 337,51 | 28,9290 3,5247 29,4240 1073,85 | 1,0007 464,63 | 29,4025 3,4418 30,1524 2737,43 |0,7015 1965,10 | 30,1279 3,3365 31,1067 2846,76 | 0,6751 1995,56 | 31,1023 3,2373 32,1615 1268,85 | 0,8297 1096,14 | 32,0799 3,0986 33,5359 1322,74 | 0,6567 887,70 | 33,5578 30,,74 34,2707 429,00 | 0,4830 206,19 | 34,2540 2,9597 35,1596 638,14 | 0,4725 307,71 | 35,1834 2,9488 36,5824 366,65 | 0,7606 242,21 | 36,5996 2,8112 37,1123 320,16 |7,7613 147,22 | 37,1069 2,7396 38,0825 844,44 | 0,8266 | e | 555,29 | 39,1133 2,6887 38,8946 861,16 |0,8635 | e | 742,31 | 38,8641 2,5774 40,5869 709,09 | 0,6395 470,99 | 40,6144 2,4903 42,0647 537,66 |0,7464 | 6 | 413,92 | 42,1022

2,3835 44,0766 910,34 | 0,6219 622,66 | 44,0852 2,2878 45,8070 416,47 | 1,0787 430,76 | 46,0321 2,1983 48,0532 495,68 |0,7232 503,50 | 48,0218 2,1442 49,1828 301,25 | 0,4741 266,76 | 49,3120 2,0995 50,4760 322,22 |0,5887 205,42 | 50,4360 1,9899 53,4212 165,35 | 0,5816 83,60 | 53,4250 1,9451 54,7129 268,96 |0,7281 192,90 | 54,7570 1,9033 56,0921 150,49 |1,1681 106,89 | 56,0650 1,8676 57,1017 325,25 /0,9212 353,38 | 57,2340 Solubilidades: Mono deanol de Metanol Etanol 1-Propanol DMSO Glicerol L-MTHF Exemplo 4 Preparação de sal de di-2-dimetilaminoetano de ácido 5-metil-(6S)- tetra-hidrofólico

[0036] 2,00 g (4,353 mmol) de ácido Levomefólico foram postos sob argônio em 20 ml de 1-propanol e aquecidos para refluxo enquan- to 800 ul de água eram adicionados. Essa suspensão foi então tratada com 876 ul (8,706 mmol, 2 equivalentes) de 2-dimetilaminoetanol, dilu- ída com 3,2 ml de água e agitada a 100 ºC até formar uma solução transparente. 1-Propanol (7 mL) é então adicionado e o solvente eva- porado a 40 ºC a vácuo. O restante (3,68 g) é dissolvido em 30 ml de 2-propanol/10 ml de água e concentração através de destilação do solvente a 40 ºC em vácuo até cristalização iniciar. Os cristais são ul- trassonificados em 1-propanol por 5 minutos a 20-25 ºC, filtrados por sucção, lavados 3x com 1-propanol e secos a 60 ºC/<1 mbar para prover 2,34 g do composto do título como cristais brancos. Dados analíticos: 3 (1H) em ppm Muiltiplicidade Intensidade 8 e O ss 1 = |

3 (1H) em ppm Muiltiplicidade Intensidade

REM a

RE a LC Ts |

A Rotação óptica: a2ºº +31,6º (c=1 H2O) Ponto de fusão: 157ºC (DSC) Análise de difração de raio X: Lista de pico de difractograma 14,0264 7,3221 684,16 | 0,4542 350,96 | 7,3128 10,7387 9,5124 147,39 | 0,3087 99,32 9,5562 8,5793 11,9659 3827,45 | 0,3113 1509,53 | 11,9695 7,3055 14,0683 783,85 | 0,5613 422,23 | 14,0662 6,6092 15,5602 1894,13 | 0,4137 806,64 | 15,5568 1 6 | 6,2563 16,4475 758,74 | 0,2929 252,74 | 16,4401 5,7290 17,9585 914,79 | 0,2678 296,72 | 17,9653 18 | 5,4466 18,9296 4319,49 | 0,4041 1815,47 | 18,9052 | e | 5,3148 19,3540 2143,38 | 0,4838 1060,13 | 19,3785 5,1050 20,1728 2502,44 | 0,4373 1056,43 | 20,1832 4,9607 20,7797 5335,83 | 0,3688 2177,09 | 20,7764 4,7285 21,8488 636,07 /38,2172 269,74 | 21,8091 4,5431 22,7256 5310,18 | 0,7702 | so | 3045,99 | 22,7108 4,4530 23,1802 3462,25 | 0,4717 1346,82 | 23,1766

[e Ta Tags | ra TAN a | Na | ae | [7 | asa | ass ossia | 5 rasas | 257570 | [E 5 | o | ssa [osen | 56 Tamos | sto6 | [E | sem es [om | 5 55 | 555 | [| 55 | sm | ses [os | 5 | ans | usem | [a | srs | ars [oms | 5 | 555 | sumo | Exemplo 5 Preparação de sal de di-N-metilaminoetanol de ácido 5-metil-(6S)-tetra- hidrofólico

[0037] 3,00 g (5,30 mmol) de Levomefolinato de Cálcio foram pos- tos sob argônio em 45 ml de água, com uma quantidade pequena de cisteína e aquecidos para 70 ºC. A suspensão obtida foi então tratada com 848 ul (10,60 mmol) de N-metilaminoetanol e 668 mg (5,30 mmol) de ácido oxálico dissolvidos em 5 ml de água. A suspensão fina foi agi- tada a 70 ºC por mais 5 minutos, então esfriada para 0 ºC e agitada por 50 minutos. A mistura de reação foi filtrada e a solução transparen- te estabilizada com uma quantidade pequena de cisteína e concentra- da a 45 ºC/<200 mbar.

[0038] Às sementes restantes, cristais foram adicionados e o pro- duto começou a cristalizar lentamente, o que foi completado a 2-8 ºC. Os cristais foram secos a 50 ºC/<1 mbar rendendo 3,08 g de produto bruto. O produto bruto é dissolvido em 25 ml de metanol, 1,21 ml (3 eq.) de N-metilaminoetanol e 5 ml de 1-propanol. A solução turva foi filtrada, lavada com 10 ml de metano! e o filtrado transparente aqueci- do para 60 ºC. Então 65 ml de 1-propanol, 150 ul de água e 1 equiva- lentes de N-metilaminoetanol foram adicionados à solução. A mistura foi tratada a 60 ºC com semente de cristais para iniciar a cristalização e então lentamente e gradualmente resfriada de 60 ºC para 0 ºC. Os cristais foram filtrados, lavados com 1-propanol/metanol 2:1, então com 1-propanol e com éter. Os cristais isolados foram secos a 50 ºC/<1 mbar para prover 2,60 g do composto do título como cristais es- branquiçados. Dados analíticos: ss O CÔÇS

A

AH a

ERREI AR

3 (1H) em pom Muiltiplicidade Intensidade

E

RE Rotação óptica: a2ºº +41,2º (c=1 H2O) Água de cristal em di-N-metilaminoetanol de L-MTHF (di-NMAE de L- MTHF): 1,5 (KF & microanalysis) Ponto de fusão: 199ºC (DSC) Análise de difração de raio X: Lista de pico de difractograma 15,9239 6,4555 | 3447,22 | 0,2915 1310,88 | 6,4404 13,2430 7,7569 342,13 | 0,2693 | 6 107,43 7,7460 10,6647 9,6216 351,41 | 0,5243 | 6 168,18 9,6227 8,6455 11,8830 | 2065,04 | 0,3935 925,99 | 11,8775 8,0760 12,7075 | 1051,80 | 0,3851 463,22 | 12,7183 16 7,2379 14,1946 | 1692,36 | 0,4019 849,92 | 14,1982 6,4910 15,8352 | 142331 | 0,5448 769,40 | 15,8419 18 6,1912 16,5964 | 1776,39 | 0,3969 792,92 | 16,6144 NE 5,8518 17,5782 | 1574,72 | 0,4159 677,72 | 17,5854 5,7065 18,0117 | 842,39 | 0,2941 320,19 | 18,0368 5,5184 18,6561 | 331,23 | 0,2270 | 6 75,32 18,6568 5,2649 19,5645 | 3100,77 | 0,5100 1789,83 | 19,5639 4,9150 20,8504 | 2849,68 | 0,8527 2518,15 | 20,9719 4,4919 22,9765 | 1560,48 | 0,5605 740,63 | 22,9732 4,3400 23,7913 | 555211 | 0,5205 3197,94 | 23,7886 4,1843 24,6733 | 1784,30 | 0,7474 985,69 | 24,6875 4,0907 25,2464 | 2221,96 | 0,7649 1019,95 | 25,2619 4,0153 257631 | 1954,24 | 54,7000 921,46 | 25,7440 3,9450 26,2167 | 2046,11 | 7,5545 1004,46 | 26,2108

3,8277 | 27,0229 | 2110,05 | 0,3186 1302,24 | 27,0293 3,6080 | 28,7332 | 233117 | 1,1356 1515,86 | 28,7091 3,5644 | 29,0745 | 2481,56 | 0,6321 907,72 | 29,0680 3,5241 29,5119 | 1950,57 | 0,6549 879,22 | 29,4083 3,3363 | 31,1061 | 1592,05 | 04227 764,29 | 31,1042 3,2265 | 321838 | 445,10 | 0,4686 | 8 | 191,02 | 32,1902 3,0955 | 33,5791 | 1288,22 | 0,6295 842,12 | 33,5921 3,0000 | 34,6824 | 424,90 | 0,3412 | 8 | 138,72 | 34,6950 28727 | 36,3015 | 582,88 | 0,9961 502,22 | 36,2851 28013 | 37,1978 | 392,89 | 0,4582 162,25 | 37,2432 2,6370 | 39,6821 | 342,70 | 0,9931 | 6 284,71 | 39,6573 2,5222 | 41,6802 | 376,12 | 0,7416 319,37 | 41,5443 24135 | 436281 | 295,28 | 1,0135 239,40 | 43,5084 2,3135 | 45,3960 | 385,86 | 0,9283 311,87 | 45,4926 2,0336 | 522798 | 182,37 | 0,8020 232,56 | 52,1894 1,8353 | 58,3600 | 257,19 | 0,6312 125,39 | 58,3372 Solubilidades: Exemplo 6 Preparação de sal di-2-amino-2-metil propanol do ácido 5-metil-(6S)- tetra-hidrofólico

[0039] 3,00 g (5,30 mmol) de Levometfolinato de cálcio foram pos- tos sob argônio em 45 ml de água com pequenas quantidades de cis- teína e aquecidos para 70 ºC. Esta suspensão foi então tratada com 1012 ul (10,60 mmol) de 2-amino-2-metilpropanol e 668 mg (5,30 mmol) de ácido oxálico dissolvidos em 5 ml de água. A 70 ºC, a sus- pensão fina foi agitada durante 5 minutos e então resfriada para 0 ºC. A suspensão fina foi filtrada e a solução estabilizada com cisteína e concentrada a 45 ºC/<200 mbar. O restante é tratado com semente de cristais e cristalização completada de um dia para o outro a 2-8 ºC. Os cristais foram secos a 50 ºC/1 mbar. O produto bruto foi dissolvido em 6,5 ml de água e aquecido a 70 ºC. A solução foi diluída com 70 ml de

1-propanol (10,4% de água em 1-propanol), tratada com semente de cristais e lentamente e gradualmente resfriada para 20-23 ºC. Os cris- tais foram isolados e lavados com 1-propanol/água 20:1 (v/v), 1- propanol e éter e secos a 50 ºC/<1 mbar para dar 2,79 g do composto do título como cristais esbranquiçados. Dados analíticos: e a TF Lo RR

A a a

RES

RE o AR Rotação óptica: a2ºº +34,6º (c=1 H2O) Água de cristal em di-2-amino-2-metilpropanol de L-MTHF: 1,5 (KF & microanalysis) Análise de difração de raio X: Lista de pico do difractograma: [ET [ee] ma TARA Te Ts 37 |

16 6,3851 16,0496 | 1711,61 | 0,7491 842,29 | 16,1064 6,2391 16,4806 | 1858,51 | 0,4576 838,10 | 16,4859 18 5,7750 17,8155 | 2430,06 | 0,7075 1790,36 | 17,8211 NE 5,4350 18,9458 | 1719,22 | 0,4026 745,79 | 18,9460 5,1688 19,9140 | 1561,56 | 0,4133 699,72 | 19,9315 4,9968 20,6591 1530,23 | 1,9946 776,03 | 20,6246 4,8365 21,3238 | 3675,038 | 1,4192 2664,97 | 21,3161 4,6770 22,0378 | 3176,73 | 0,779 1761,55 | 22,0522 4,5111 22,8596 | 4898,09 | 0,7549 3428,98 | 22,8737 4,3934 234643 | 2400,39 | 0,4554 1223,98 | 23,4953 4,0694 254175 | 1303,78 | 0,4489 651,63 | 25,3961 3,8398 26,8492 | 129238 | 0,9049 1144,63 | 26,9426 3,6304 28,5953 514,86 | 0,9570 345,40 | 28,5279 3,4132 30,1026 964,08 | 1,3324 1230,83 | 30,3861 3,2554 31,9288 | 1299,61 | 0,7547 1160,53 | 31,8976 3,1203 33,3269 752,36 | 1,0566 744,16 | 33,3176 2,9704 35,0505 339,01 | 0,6687 226,11 | 35,0518 2,8466 36,5760 999,03 | 1,1577 1112,09 | 36,6287 2,6992 38,6950 656,44 | 0,6515 430,95 | 38,7063 2,5723 40,7894 540,59 | 0,8748 421,04 | 40,6993 2,4455 42,9257 322,63 | 0,8876 229,25 | 42,9106 2,3190 45,3614 400,77 | 1,0942 | 8 | 474,93 | 45,3788 2,1088 50,1810 404,87 | 1,2316 18 | 398,23 | 50,1977 Solubilidades: di-AMP de L-MTHF 1-Propanol | DMSO Exemplo 7 Preparação de solução de hidróxido de colina usada no Exemplo 2

[0040] 10,39 g (74,42 mmol) de cloreto de colina foram postos sob argônio em uma solução de 110 ml de 1-propanol e 3,02 g (74,42 mmol) de hidróxido de sódio a 20-25 ºC. A mistura foi aquecida para 70-72 ºC durante cerca de 70 minutos e aquecida para 70 ºC. Esta suspensão foi então resfriada para 0-5 ºC durante 45 minutos. A sus- pensão branca foi filtrada através de um leito de sílica e o filtrado en-

chido em um balão volumétrico até 200 ml com 1-propanol. A concen- tração de hidróxido de colina era 0,36 mol/l (conforme medido por titu- lação)

[0041] Esta solução foi usada como forma de armazenamento de colina usada para preparação de sais de colina de folatos altamente puros.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sal de folato cristalino consistindo em um ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico, caracterizado pelo fato de que o ânion é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e o cátion é um compos- to orgânico em que o composto orgânico é uma alcanolamina seleci- onada do grupo consistindo em colina, 2-dimetilaminoetanol, N- metilaminoetanol e 2-amino-2-metilpropanol.

2. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os sais de folato têm uma solubilidade alta em solventes orgânicos.

3. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto orgânico é dicolina.

4. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto orgânico é mono-2- dimetilaminoetanol.

5. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto orgânico é di-2- dimetilaminoetanol.

6. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto orgânico é di-N- metilaminoetanol.

7. Sal de folato cristalino, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto orgânico é di-2- amino-2-metilpropanol.

8. Sal ácido de folato cristalino, de acordo com a reivindica- ção 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o ânion de ácido tetra- hidrofólico é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e o cátion orgânico é dicolina.

9. Sal ácido de folato cristalino, de acordo com a reivindica- ção 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o ânion de ácido tetra-

hidrofólico é ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico e o cátion orgânico é mono-2-dimetilaminoetanol.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um sal de folato, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, como um composto ativo principal, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

11. Sal de folato, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações | a 9, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medicamento, um aditivo alimentar ou um suplemento nutricional, pa- ra a prevenção e/ou tratamento ou de deficiências ou de distúrbios que são afetados positivamente pela administração de sal de ácido tetra-hidrofólico.

12. Método para preparação do sal de folato cristalino, co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, consistindo em um ânion de ácido tetra-hidrofólico e um cátion orgânico, caracte- rizado pelo fato de que compreende a etapa de cristalização do sal de um solvente orgânico compreendendo água na faixa de 0,2% em peso a 12% em peso com base no peso total da mistura de solvente orgânico/água.