JPH07505887A - タキソール誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、植物から得られる化学療法化合物に関する。特に、本発明＋１　、Ｔ 　ｓ　ｘ　ｍ　ｒ　ｃ　＊　ｎ　ａ　ｄ　ｅ　Ｉｌ＋口から単離される天然物質 の９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■およびそれから合成されるタキソ ールの新規類似体に関する。

テルペンのタキサン類であるタキソールは、広範囲の癌に対する化学療法剤とし て興味深い。タキソールは、臨床試験で進行した乳癌および卵巣癌に対して有効 であることが示されており、予備的研究では、他の多くの癌に対しても有望な活 性を示した。タキソールの研究、開発および臨床テストの現状をまとめたものは 、　Ｂｏ＋ｍｓｎ、Ｃｈｅｍｉｃｓｌ　＆　Ｅｎ（ｉｎｅｅ＋ｉＢ　Ｈｅｗｓ　 （Ｓｅｐｌｅａｂｅｔ　２．　１９９１）、ｌｌ−１８にあり、タキソール分野 の合成研究に関しては、Ｄ、Ｇ、ｌ　にｉｎｇ＋ｌｏｎ　ｉｎ　Ｐｈ！＋１ｔｅ １．　Ｔｈｅ口ｐ、（１９９２）。

印刷中に見い出される。

下記構造式。

を有するタキソールは、主にＴ！ｘａ＋属の木皮、ならびに量は少ないがＴｒｘ ＋＋ｓ　＠の高木および低木の葉からの抽出によって得られるので、現在は供給 が制限されている。タキソールの主要源である　ｔｈｅ　Ｐｓｃｉｌｉｃ　ｙｓ ｖ　Ｔ！！ＩＩ　）ｕｅｖｉｌｏｌｉ＊は、成長の遅０常緑樹であり、地理的分 布が限定されており、ますます減少している。さらに、木皮の４００ｐｐｍ未満 であるタキソールを単離する方法は困難であり、収率が低く、高コストである。

イチイを長期的または大規模に採集することは、環境および経済的理由により、 受は入れられる選択とは考えられない。その結果、臨床上の用途および試験のた めのタキソールをさらに供給するための差し迫った必要がある。

他の７１１１１種の針葉樹もタキソールおよびその前駆体の再生可能源として探 査されているが、他の研究者らは、タキソールを組織および細胞培養において産 生ずることを試みている。その化合物およびその関連類似体の全化学合成は試み られているが、まだ達成されていない。バッカチン■およびセファロマンニンな どの天然に存在するタキソール前駆体の化学的変換が報告されているが、潜在的 に活性なタキソールおよび関連化合物を産生ずるための別の方法がさらに必要で ある。

天然に存在するタキソールより水溶性が大きいタキソールプロドラッグまたは誘 導体も探究されている。潜在的に溶解性が高められた新規誘導体の研究では、注 目されている分子上の部位の一つがＣ−９位のケトン官能基である。タキソール は非常に還元されに＜＜、特にＣ−９カルボニル基は、たとえ種々の水素化物試 薬を用いても、還元されにくい。Ｃ−９位にカルボニル基以外の官能基を有する 化合物の開示例は多くない。米国特許Ｎｏ、５．０１５，７４４およびＮｏ、４ ，９７６．３９９　（ｌｏｔｉｏｎら）には、Ｃ−７、Ｃ−９およびＣ−１０位 がアセチル化されたタキソール誘導体が一般的に開示されている。しかし、７４ ４特許は、Ｃ−９フル力ツイルオキシ誘導体の製造法を提供するものではない。

３９９特許は、Ｃ−９およびＣ−１０位の両方に０−アセチル基を有する７−デ オキシ化合物の例を含む。これらの化合物は、恐らくタクスシン合成を経て合成 することができるタキソール類似体であり、合成中はビシナールヒドロキシ基が アセトニド基で保護される。しかし、遊離のＣ−７、Ｃ−９ジオールが合成でき たという示唆はない。さらに、Ｃ−９に遊離のヒドロキシ基を有するタキソール の類似体の合成を可能にする方法は何も提案されていない。すなわち、タキソー ルおよびバッカチン■の９−ジヒドロ誘導体は合成物質として得られておらず、 タキソールおよびバッヵチン系の９−ジヒドロ化合物は、天然源からもこれまで 単離されたことがない。

潜在的に優れた薬効を有する９−ジヒドロタキソール化合物を合成することがで きれば、化学者および薬理学者にはかなり有利であると考えられる。９−ジヒド ロ誘導体は改善された水溶性を有することが期待される。さらに、そのような誘 導体の９−ヒドロキシ基は、さらに誘導したり、プロドラッグを合成するための 別の官能性を付与するであろう。さらに、この位置にカルボニル基の代わりにヒ ドロキシ基が存在すると、分子の安定性がより大きくなり、化合物の活性を低下 させるＣ−７位のエビ化が起こりにくくなる。

発明の要旨 本発明の一発明では、カナダイチイ　Ｔｌ１ｌｌ　ｃｓｕ＊ｄｅａｓ口の今まで は未知の構成成分である、下記構造式（１）を有する化合物の９−ジヒドロ−１ ３−アセチルバラ力チン■を開示する。式（＋）において、ｒＰｈＪおよびｒＡ ｃＪは、各々、アセチルおよびフェニルラジカルを表す。

本発明の別の発明では、全体として９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチン■ と共通する、下記構造式（■）：を有する９−ジヒドロタキソール類似体および ９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■から該化合物を合成する方法を開示 する。式（ＩＩ）のＲ１は、下記式：［式中、Ｒ８は水素、アルキル、ツーニル 、置換フェニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、フェノキ シまたは置換フェノキシであり；Ｒ９は水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、 アルコキシアルキル、アミノアルキル、フェニルまたは置換フェニルであり；Ｒ １０は水素、アルカノイル、置換アルカノイルまたはアミノアルカノイルである 。］を有する基である。

式（ｎ）のＲ、Ｒ’、Ｒ”およびＲ７は、独立して、水素、アルキル、アルカノ イルまたはアミノアルカノイルである。

式（ｎ）のＲ３は水素、アルキルまたはアミノアルカノイルである。

式（■）のＲ６は水素、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルまたはフ ェニルカルボニル（−Ｃ（０）−フェニル）である。

あるいは、式（ｎ）のＲは、Ｒ２またはＲ４のいずれかと一緒になって、下記式 。

［式中、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素、アルキル、フェニルまたは置 換フェニルであるか、あるいは、Ｒ１１およびＲ１２が一緒になって、酸素およ び硫黄から成る群から選択される単一の原子であるか；あるいは、ＲおよびＲ１ ２の一方が水素、アルキル、フェニルまたは置換フェニルであり、他方が−ＯＲ または−ＮＲ１３Ｒ１４（Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、アルキル、アルカ ノイル、置換アルカノイル、フェニルまたは置換フェニルである。）である。］ を有する環を形成してもよい。

これらの化合物は、癌および白血病の治療に関して、または治療用のタキソール 誘導体の合成において有用であることが期待される。

発明の詳細な説明 本発明は、９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■およびその誘導体く構造 式（ｎ）を有する９−ジヒドロタキソールなど）［式中、ＲＩ、Ｒ１２は上記で 定義した通りである。］を含む。本発明の化合物には、−ＯＲ’がタキソールの 側鎖である下記式： を有する基である化合物が含まれる。また、Ｒ３が水素である化合物、すなわち 、タキソールの９−ジヒドロ類似体も含まれる。

下記の定義は、これらの化合物および本発明の記載全体に当てはまる。

本明細書で使用する「アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐 鎖飽和炭化水素から１個の水素原子を除去して得られる１価の基を意味し、例え ば、それらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−およびイソ−プロピル、ｎ −１ｓｅｃ−、イソ−およびｔ−ブチル、ペンチルならびにヘキシルが挙げられ る。

本明細書で使用する「アルカノイル」は、上記で定義したアルキル基にカルボニ ル基が結合した基を意味し、例えば、それらに限定されないが、アセチル、プロ ピオニル、ブタノイルおよびイソブタノイルが挙げられる。

本明細書で使用する「アルコキシ」は、上記で定義したアルキル基に酸素原子が 結合した基を意味し、例えば、それらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、 イソプロポキシ、ブトキシおよびｔ−ブトキシが挙げられる。

本明細書で使用する「アミノアルカノイル」は、１〜３個のアミノ置換基を有す る上記で定義したアルカノイル基を意味し、例えば、それらに限定されないが、 ２−アミノプロパノイル、４−アミノブタノイルおよび６−アミノヘキサノイル が挙げられる。さらに、アミノ基は、所望により、天然に存在するアミノ酸のペ プチジル残基ならびにそれがら形成されるジーおよびトリーペプチド残基で置き 換わってもよい。

本明細官で使用する「アミノアルキル」は、アミノ置換基または置換アミノ置換 基を有する上記で定義したアルキル基を意味する。

本明細書で使用する「ハロゲン」は、ブロモ（Ｂｒ）、クロロ（ＣＩ）、フルオ ロ（Ｆ）およびヨード（＋）から選択される基を意味する。

本明細書で使用する「ハロアルキル」は、１〜３個のハロゲン原子置換基を有す る上記で定義したアルキル基を意味し、例えば、それらに限定されないが、フル オロメチル、トリフルオロメチルおよびフルオロエチルが挙げられる。

本明細書で使用する「Ｎ−保護された」および「Ｎ−保護の」は、合成中にアミ ノ基またはアミノ酸もしくはペプチドのＮ−末端を望ましくない反応から保護し たり、エキソペプチダーゼがその化合物を攻撃するのを防いだり、その化合物の 溶解性を増加したりするための基の使用を意味し、例えば、それらに限定されな いが、スルホニル；アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルなどのアシル；ｔ− ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）など のアルコキシカルボニル；ならびにＬ−またはＤ−アミ７／アシル残基（それら 自身もＮ−保護されていてもよい）の使用が挙げられる。他の例は、Ｔｈｅ　Ｐ ｅｐｔｉｄｅｓ、Ｅ、　Ｇ「ｏＩｓ　ｉｎｄ　１．　Ｍｅｉｅｎｈｏｌｅ＋、　 Ｖｏｌ、３゜＾ｔ＊ｄｅａｉ＋　Ｐ＋ｅ＋＋　（１９８１）に記載されており、 これは、参考文献として本明細書に挿入する。

本明細書で使用する「プロドラッグ」は、例えば血液中での加水分解により、ｉ ｎ　ｖｉｖｏで急速に変換されて式（１）の親代合物になる化合物を意味する。

プロドラッグ概念の完全な論文は、Ｔ、ｔｌｉＨｃｈｉ　ｉｎｄ　Ｙ、５ｌｅｌ ｌｔが、’Ｐ＋ｏｄ＋ｗ（＋　＊ｓ　ＨｏｔｅｌＤｅｌｉｗｅ＋７　Ｓ７＋ｌｅ ｍ＋’、Ａ　Ｃ，Ｓ、Ｓ７ｍｐｏｓｉｗｓ　Ｓ＠＋ｉ！＋、Ｖｏｌ、１４゜＾ｍ ｓ＋１ｃＩｎ　Ｃｈｃｍｉｃｓｌ　５ｏｃｉｅ１７　（１９７５）に載せており 、これは、参考文献として本明細書に挿入する。カルボキシ基を含む化合物に対 するプロドラッグとして有用なエステルの例は、’Ｂｉｏ＋ｅｖｔ＋＋ｉｂｌ＠ Ｃ＊ｔｔ１ｅｔｓ　ｉｎ　Ｄｒａｇ　Ｄｅ＋ｉ（ｏ：　Ｔｈｔｏ＋７　＊ｎｄ＾ ｐｐｌｉｃｘｌｉｏｎ’、　ｓｄ、　Ｅ、　Ｂ、　Ｒｏｃｈｅ、　ＰｅＢｌｍｏ ｎ　Ｐ＋ｅ＋ｓ　（１９Ｂ７１の１４〜２１頁に記載されており、これを参考文 献として本明細書に挿入する。

本明細書で使用する「プロドラッグエステル基」は、生理条件下で加水分解され るいくつかのエステル形成基のいずれかを意味する。プロドラッグエステル基の 例としては、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、インダ ニルおよびメトキシメチルならびに他の公知の基が挙げられる。

本明細書で使用する「保護基」はその分野では周知であり、化学変換を受ける化 合物の官能基上の置換基であって、合成中の望ましくない反応および分解を防ぐ 基を意味する。例えば、Ｔ、Ｈ，Ｇｒｔｅｎｅ、’Ｐ＋ｏｌｔｃｌｉｔｃ　Ｇｒ ｏＩｌｐｓ　ｉｎ　ＯＢ＊ｎｉｃ　５７ｎｌｈｅ＋ｉｓ’。

Ｊｏｈｎ　ＷｉｌＢ　＆　５ｏｎｓ　（１９ｇ＋）　（参考文献として本明細書 に挿入する。）参照。

本明細書で使用する「置換アルカノイル」は、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ア ルコキシ、カルボキシおよびハロゲンなどの１〜３個の置換基を有する上記で定 義したアルカノイル基を意味する。

本明細書で使用する「置換アルコキシ」は、ヒドロキシ、スルフヒドリル、アル コキシ、チオアルコキシ、カルボキシ、アミノおよびハロゲンなどの１〜３個の 置換基を有する上記で定義したアルコキシ基を意味する。

本明細書で使用する「置換アミノ」は、１または２個のアルキル置換基を有する アミノ基を意味し、例えば、それらに限定されないが、ｔ−プチルアミハベンジ ルアミノおよびＮ、Ｎ−ジメチルアミノが挙げられる。

本明細書て使用する「置換フェニル」は、独立してアルキル、ハロゲン、ハロア ルキル、アルコキシ、ペンジルオキシ、チオアルコキシ、ヒドロキシ、アルカノ イル、カルボキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロおよび 一０３Ｏ３Ｈから選択される１〜３個の置換基を有するフェニル基を意味する。

本明細書で使用する「置換フェノキシ」は、独立してアルキル、ハロゲン、ハロ アルキル、アルコキシ、ペンジルオキシ、チオアルコキシ、ヒドロキシ、アルカ ノイル、カルボキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロおよ び一０３０３Ｈから選択される１〜３個の置換基を有するフェノキシ基を意味す る。

本明細書で使用する「チオアルコキシ」は、上記で定義したアルコキン基におい て酸素原子が硫黄原子で置き換わった基を意味する。

本発明はまた、式（１）の化合物の９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■ （化合物１）から式（ＩＩ）の上記化合物を合成する方法も包含する。この方法 は、下記工程：（ａ）化合物１のＣ−７およびＣ−９ヒドロキシ基をアセタール 形成により保護する工程。

（ｂ）保護された中間体を一般的に脱エステル化（脱アセチル化）する工程： （Ｃ）Ｃ−１３位に適当な側鎖を付加する工程：ならびに（ｄ）選択的に保護基 を脱離して所望の物質を得る工程を含む。

本発明の化合物１は、Ｔｌ１ｌｌｌ　ｃｉｎｉｄｅｎｓ口の針状葉および小枝を 押し砕いてアルコール抽出することにより得られることが見い出された。この抽 出物は、次いで、アセトン、メタノール、ヘキサン、ヘプタンおよび水から成る 溶媒系の間で分配して脂質を除去することから始まる通常の分離法を使用して精 製する。

脂質を取り除いた粗抽出物はさらに、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム 、酢酸エチルおよび水から成る溶媒系の間で数段階で分配する。塩化メチレンが らら成る溶媒系またはクロロホルムおよび酢酸エチルから成る溶媒系に可溶な抽 出物画分が化合物１を含む。

上記画分はさらに、ヘキサン、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、トル エンおよび水または適切な水性緩衝液から成る溶媒系を使用して、プラネットコ イル向流クロマトグラフィー（ｐｃｃｃ）により精製することができる。種々の 両分は、タキソール、セファロマンニンおよびパツカチン■などのいくつかのタ キサン誘導体を含む。化合物１を含む画分から溶媒を除去し、メタノールまたは エタノールおよび水から再結晶すると、純粋な化合物が白色結晶として得られる 。所望により、タキソール、バソカチンおよび他の関連化合物もクロマトグラフ ィーによる種々の両分から単離することができる。

一般に、式（ｎ）の化合物は、次いで、保護、反応および脱保護の一連の工程に より化合物１から合成することができる。

そのような方法の一つでは、下記反応図１に示すように、まず、化合物１の７− および９−ヒドロキシ基を、少量の酸の存在下、例えばアセトンなどのアルデヒ ドまたはケトンとの反応により保護して、アセトニドなどの１．３−ジオキサン または同様の保護中間体（化合物２）を得る。この化合物は次に、例えば塩基と の反応または微生物加水分解によりＣ−１３位の脱アセチル化を行い、化合物３ を得る。あるいは、化合物１を保護する前に直接、ブチルリチウム、メチルリチ ウムまたはトリエチル水素化ホウ素リチウムなどの試薬により脱アセチル化し、 次いで、トリエチルンリルなどの種々のシリル基を使用して７−および９−ヒド ロキシ基のいずれかまたは両方を保護することもできる。

次いで、化合物３は、適切に保護した側鎖誘導体、例えば（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ− ベンゾイル−０−（１−エトキシエチル）−３−フェニルイソセリンまたは（３ Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−０−（１−エトキシエチル）−４−フェニル −２−アゼチジノンと反応させて、化合物４　（Ｒは保護されたタキソール側鎖 または類似部分である。）を得ることができる。Ｃ−１０酢酸エステルの選択的 な脱アセチル化を、温和な加水分解条件を使用してこの時点で行うと、水溶性の 大きい化合物を得ることかできる。次いで、保護基を、例えば０．５％ＭＣＩ／ エタノールまたはメタノールなどの温和な酸により脱離すると、式（■）［式中 、ＲおよびＲはアセチルであり、Ｒ３、Ｒ４およびＲは水素であり、Ｒ６はフェ ニルカルボニルである。

］の所望の９−ジヒドロタキソールを得ることができる。

旦は瓜ｍ立江 別の反応図を反応図２．３および４に示す。反応図２によれば、脱アセチル化を 化合物１に対して直接行い、次いで、シリル化試薬などの種々の基を使用してＣ −７を選択的に保護する。

化合物６をアシル化および脱保護すると化合物９が得られ、次いで前述のように 脱保護すると化合物１０が得られる。あるいは、Ｃ−１０位の脱アセチル化およ び脱保護により化合物１１などの物質が得られ、これは、改善された水溶解性を 有することが期待される。

化合物１０はまた、反応図１に記載したように、酸の存在下でアルデヒドおよび ケトンと直接反応させることにより化合物１２（反応図３）を得ることができる 。あるいは、同様に、化合物１を３−ブチナールなどと反応させると化合物１３ （Ｗ＝Ｈ；Ｚ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨ２）が得られ、ソレニ反応図１のうクタム７を前 述のように付加させると、化合物１４が得られる。

酸化および脱保護により化合物１２ｃが得られる。化合物１を炭酸、硫酸、リン 酸または同様の酸誘導体および塩基と反応させると、化合物１３（ＷおよびＺは ともに硫黄である。）などの物質が得られる。

標準条件下で化合物１のＣ−７位をアリル化すると、化合物１５（反応図４）が 得られる。前述のようにｎ−ブチルリチウムで処理してラクタム７で処理すると 化合物１６が得られ、これは、酸化して化合物１９および２０にするか、脱保護 して化合物１７にすることができる。さらに、アルデヒド２０を還元条件下で種 々のアミン、次いで酸と反応させると化合物２１が得られる。水素化ホウ素ナト リウムなどの種々の試薬で還元すると化合物２２が得られ、一方、この還元物質 をアセチル化した後、脱保護すると化合物２３が得られる。

比忠凹ｍユ 旦は旦ｍ免ユ 旦は巴ｍ これらの合成で使用される特定の試薬および条件は、下記実施例で詳細に述べる 。また、当業者であれば理解されるように、バッカチン■構造のいくつかのヒド ロキシ基に影響を及ぼす選択的保護および脱保護の工程は、工程の順序および数 を変えて行ってもよく、反応図１〜４は、そのような変化を包含するものである 。

本発明は、以下の実施例によりさらに理解することができるが、以下の実施例は 説明のためのものであり、それにより本発明が限定されるものではない。

実施例１ ９−′／ヒドロー１３−アセチルバッ力チン■の単離および構造解析 Ｔｘｒｏ＋　＋＋ｎｘｄｅｎ＋ｉ＋ｆＰｅｌａｇｉｃ　Ｌ＋ｂｏ＋＋ｔｏ＋７． 　Ｉｎｃ、、Ｐｏ「ｔ−１１＋ｎｉ＋ｌ。

Ｑ＋ｕｂ＋ｃ、Ｃ＋ｎｇｄｘから入手）の針状葉および小枝を押し砕いてアルコ ール抽出した３０ｇのサンプルを２１の９：１メタノール：水に溶解し、８００ ｍ１のヘキサンで４回抽出した。水相を水（４００ｍｌ）で希釈し、８００ｍ１ の四塩化炭素で４回抽出した。水相をさらに水（５００ｍｌ）で希釈し、８００ ｍ１の塩化メチレンで４回抽出した後、プールした塩化メチレン両分を蒸発させ て残渣を得た。

塩化メチレン可溶画分（１，０ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２：ＣＣＩ　：　Ｍ　ｅ　ＯＨ ：　Ｈ２０（５：　５　：　１０　：　６　）を使用するｐｃｃｃで分離した。

この有機相を移動相として使用し、画分を薄層クロマトグラフィー（Ｔ　Ｌ　Ｃ ）によりモニターした。

ｐｃｃｃ分離により得た９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■を含む両分 を一緒にしてメタノール／水から再結晶すると、３５ｍｇの純粋な化合物が白色 結晶として得られた（収率：抽出物の０．３７％）。この化合物の構造は、スペ クトル分析で決定し、単結晶Ｘ線回折により確認した。

物理データ：メタノールから透明な棒状晶として結晶化ン融点、２２１℃１分子 量（ＦＡＢＨＲＭＳ、ＭＨ）計算値（Ｃ３３Ｈ４３０１２として）、３６１．２ ７５４．実験値、３６１゜２７７１；ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）、３５００，１ ７２５゜１７２０．１３７５．１２２０，１０６０．１０１１０１Ｏ’；−次元 および二次元のプロトンおよび１３ＣＮＭＨにより得られるＮＭＲ帰属は図１お よび下記表１に示す。

単結晶Ｘ線回折　線源　ＣｕＫα：対称性：単斜晶系：単位格子定数：　ａ＝８ ．５１３　（３）、ｂ＝１６．１６４　（２）。

ｃ＝１２．７７２　（２）人、β＝１００．１６　（２）度１回折計で測定した ２５個の２θ値により決定：規則的消滅および密度から、空間群はＰ２．であり 、対称単位１個につき組成物Ｃ３３１１４２０１２を１分子含む：全反射：１６ ０５　；直接法により得た溶液：図２に示す構造を有する。最終モデルでの、非 水素原子異方性、水素原子等方性、不一致指数Ｒ＝０．０５５表１ （、−３３，０５（ｄ）　４９．８３ Ｃ−４８２，８５ Ｃ−５４，９５（ｄ）　８４．８３ Ｃ−８４５，５０ Ｃ−１６１，６７（ｓ）　２３．３４ 実施例２ ９−ジヒドロバッカチンｍ−７．９−ア七トニド工程１：１３−アセチル−９− ジヒドロバラ力チンｌ１ｌ−７，９−アセトニド 上記実施例１からの９−ジヒドロ−１３−アセチルーバツカチン■の試料１０ｍ ｇを、０．５ｍ’ｌのアセトンおよび０．５ｍ１の２，２−ジメトキンブロバン を入れた乾燥フラスコに入れ、その溶液を２５℃で攪拌した。樟脳スルホン酸結 晶片を添加し、反応の経過をＴＬＣで追跡した。反応の完了がＴＬＣにより示さ れると、２５ｍｇのＮ　ａ　ＨＣＯ３，固体および０．１５ｍ１のＮ　ａ　ＨＣ Ｏ３飽和水溶液を添加し、その混合物を数分間攪拌した。固体の硫酸ナトリウム を添加し、混合物を濾過して、固体を塩化メチレンで洗浄した。溶媒を蒸発除去 し、得られた物質をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて３％メタノール／塩 化メチレンで溶離すると、１０ｍｇの標記化合物が油状物として得られた。ＭＳ 　Ｍ／Ｚ（ＤＣＩ／ＮＨａ）：６７１（Ｍ＋Ｉ−（）、６８８　（Ｍ＋ＮＨ）、 ＨＮＭＲ（Ｃ’ＤＣＩ３）δ：１．２　（ｓ、３Ｈ）、１．４８　（ｓ、３Ｈ） 、１．５５　（、ｓ、３Ｈ）、１．６　（ｓ、３Ｈ）、１．’　８　（ｓ、３’ Ｈ）。

２、　１２　（ｂｒｓ、３Ｈ）、２．　１５　（ｓ、３Ｈ）、２．　２（ｓ、３ Ｈ）、２．３　（ｓ、３Ｈ）、２．５１　（ｍ、ＩＨ）。

３、　１５　（ｄ、ＩＨ）、４．　２２　（ｔ、ＬＨ）、４．　２５（ＡＢｑ、 ２Ｈ）、４．　５３　（ｄ、ＬＨ）、４．　９１　（ｄ、ＩＨ）、５．　８７　 （ｄ、ＩＨ）、６．　１４　（ｔ、ＩＨ）、６．　５（ｄ、ＩＨ）、７．５　（ ｔ、２Ｈ）、７．６２　（ｔ、ＩＨ）。

８、　１　（ｄ、２Ｈ） 工程２：９−ジヒドロバラ力チンｍ−７．９−アセトニド工程１の生成物の試料 ２５ｍｇを１ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、不活性雰囲気下で攪拌した。

ｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液（９０、μｍ、１・、６Ｍ）を−４４℃で１ ０分かけて添加した。塩化アンモニウムの飽和水溶液（１ｍ　ｌ）を添加し、溶 媒を蒸発除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて５％メタノ ール／塩化メチレンで溶離すると、１１ｍｇの標記化合物が得られた。’ＨＮＭ Ｒ（ＣＤＣ１３’）δ（一部）＋１．０３　（ｓ、３Ｈ）、１．４　（ｓ、３Ｈ ）。

１、　５　（ｓ、３Ｈ）、１．　５２　（Ｓ、３Ｈ）／、１．　８６　（８゜３ Ｈ）、２．　０７　（ｓ、３Ｈ）、２．　１　（ｄ、３Ｈ）。

２、　２１　（ｓ、３Ｈ）、２．　３〜２．　５　（ｍ、２．８）、３．　２（ ｄ、ＩＨ）、４．　２　（ＡＢｑ、２Ｈ）、４．　２５　（ｔ。

ＬＨ）、４．　５　（ｄ、ＬＨ）、４．　７１　（ｍ、ＬＨ）、４．　９（ｄ、 ＩＨ）、５．　８　（ｄ、ＬＨ）、６．　５　（ｄ、ＬＨ）。

７、　５　（ｔ、２Ｈ）、７．　６２　（ｔ、ＬＨ）、８．　１　（ｄ、２Ｈ） 実施例３ ９−ジヒドロタキソール 工程１：２′　−エトキンエチル−９−ジヒドロタキソール−７，９−アセトニ ド 実施例２の生成物の試料を、トルエン中で、６当量の光学的に純粋な（２Ｒ，２ Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−〇−（１−エトキンエチル）−３−フェニルイソセリン ［Ｄ！ｎ口ら、Ｉ、　Ａｍｅｔ。

Ｃｂｃ−５ｏｃ、１１０＋５９１Ｈ１９８８１に記載の方法で合成。該文献は参 考文献として本明細書に挿入する。］、６当量のジー２−ピリジルカーボネート および２当量の４−（ジメチルアミノ）ピリジンと混合し、１００時間、または ＴＬＣが反応の完了を示すまで加熱還流する。溶媒を除去し、エステルをシリカ ゲルクロマトグラフィーで精製する。

あるいは、実施例２の生成物を、Ｇ＠ｏＢら、　ＢｉｏｏＢｓｎｉｃ　＆Ｍｅ＋ １ｉｃｉｎｉｌ　Ｃｈｅｍｉ＋ｌ＋７　Ｌｃｌｌｃ＋＋　２（４１：２９５　（ １９９２１ま　た　は０目１ら、１．　Ｏ＋ｇ、Ｃｈｅｗ、５６：１６８１Ｎ９ ９１１　Ｃ各々、参考文献として本明細書に挿入する。〕の記載に従って、塩基 の存在下で（３Ｒ，４ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−０−（ｌ−エトキシエチル） −４−フェニル−２−アゼチジノンと反応させる。工程２９−ジヒドロタキソー ル 工程１の生成物の試料を、０℃で、樟脳スルポン酸または０．５％ＭＣＩ／エタ ノールなどの酸と反応させることにより、保護基を脱離する。得られる標記化合 物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。

実施例４ ９−ジヒドロバラ力チン■ 実施例１の生成物１ｇを一７８℃でＴＨＦに入れ、これに３〜６当量のブチルリ チウムまたはメチルリチウムを、１３−酢酸エステルの脱アセチル化が完了する まで滴下した。脱アセチル化の完了は、薄層クロマトグラフィー（Ｔ　Ｌ　Ｃ） 分析により確認した。その混合物を緩衝液および塩化メチレンに分配し、有機層 を硫酸ナトリウムで脱水して蒸発させた。粗生成物をメタノール／塩化メチレン を使用して精製すると、０．７ｇの９−ジヒドロパラ力チン■が得られた。なお 、本実施例および以下の実施例での精製は全て、フラッシュ力ラムまたは分取薄 層クロマトグラフィーのいずれかによるシリカゲルクロマトグラフィーにより行 った。

実施例５ ７−０−１−リエチルンリルー９−ジヒドロバッカチン■実施例４の生成物１． ９ｇを０℃で６ｍｌのピリジンに入れ、これに１．５当量の塩化トリエチルシリ ルを添加した。１６時間後に反応を停止し、濃縮して、上記と同様に処理した。

（本実施例および他の全実施例において、反応を停止するために使用した緩衝液 は、ｐ　Ｈ７のリン酸塩緩衝液であった。）酢酸エチル：ヘキサンを使用して精 製すると、１．３ｇの７−０−トリエチルシリル−９−ジヒドロバツカチン■が 得られた。

実施例６ ２′　−〇−二ドキンエチルー７−０−トリエチルシリル−９−ジヒドロタキソ ール 実施例５の生成物０．２４ｇを一７８℃でＴ　ＨＦに入れ、これに３当量のリチ ウム　へキサメチルジンラジド（ＬｉＨＭＤＳ）または５〜４０当量の水素化ナ トリウムを添加した。この混合物に反応図２のラクタム（化合物７、Ｒ＋フェニ ル）を３当量添加し、反応物を１〜１２時間、０〜２５℃に温めた後、反応停止 し、酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製すると、０．２５ｇの２′−〇−二ト キシエチルー７−０−１−リエチルシリルー９−ジヒドロタキソールが得られた 。

実施例７ ２’　−０−エトキシエチル−９−ジヒドロタキソール実施例６の生成物０．２ ５ｇを０℃でメタノールに入れ、これに同量のトリエチルアミンを含む過剰のフ ッ化水素／ピリジン溶液を、反応の完了がＴＬＣ分析により確認されるまで添加 した。その混合物を緩衝液により反応停止し、酢酸エチル：ヘキサンを使用して 精製すると、０．１６ｇの２’　−〇−二ヒトキシエチル−９−ジヒドロタキソ ール得られた。

実施例８ ９−ジヒドロタキソール 実施例７の生成物６０ｍｇを０〜２５℃でエタノールに溶解し、これに過剰の１ ％ＭＣＩを添加した。４時間後、その反応混合物をｐＨ７の緩衝液および塩化メ チレンで反応停止した。

有機層を蒸発させ、酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製すると、２８ｍｇの９ −ジヒドロタキソールが得られた。標記化合物は、この処理により、実施例６の 生成物からも直接得られた。

実施例９ １０−デアセチル−９−ジヒドロタキソール実施例７の生成物０．２２ｇを０℃ でメタノールに入れ、これに過剰のＩＮ　ＫＯＨを、反応の完了がＴＬＣ分析に より確認されるまで添加した。その反応を緩衝液および塩化メチレンで停止した 。有機層を分離し、蒸発させ、実施例８と同様に１％ＨＣＩで直接処理すると、 （酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製した後に）０．１６４ｇの１０−デアセ チル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例１０ ９−ジヒドロタキソール−７，９−インプロピリデン　ケタール 実施例３の工程１の生成物１０ｍｇを先の実施例と同様に１％ＨＣＩで処理する と、メタノール／塩化メチレンにより精製した後、５ｍｇの９−ジヒドロタキソ ール−７，９−イソプロピリデン　ケタール（反応図３、化合物１２、Ｘ＝Ｙ＝ Ｃ）（３）が得られた。

実施例１１ ９−ジヒドロタキソール−７，９−プロピリデン　アセタール実施例８の生成物 ４ｍｇを０．５ｍｌのプロピオンアルデヒドに入れ、これに触媒量のｐ−トルエ ンスルホン酸（トシル酸）を添加して、混合物を４時間攪拌した。残渣を塩化メ チレンおよび重炭酸ナトリウム水溶液に分配し、有機層を蒸発させた。

酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製すると、２．６ｍｇの９−ジヒドロタキソ ール−７，９−プロピリデン　アセタール（反応図３、化合物１２、Ｘ＝Ｙ＝Ｃ Ｈ２ＣＨ３’Ｉが得られた。

実施例１２ ９−ジヒドロタキソール−７，９−ベンジリデン　アセタール実施例８の生成物 １５ｍｇをベンズアルデヒド（０，１ｍ１）／塩化メチレフ　（０，６ｍ１）で 処理して、１．１ｍｇの９−ジヒドロタキソール−７，９−ベンジリデン　アセ タール（反応図３、化合物１２、Ｘ＝ＨＳＹ＝Ｐｈ）を得た。

実施例１３ ９−ジヒドロタキソール−７，９−（３，４−ジヒドロキシ）ブチリデン　アセ クール 工程１ 実施例１の生成物０．２５ｇを５ｍｌの塩化メチレンに入れ、これにＬ　ｍ　ｌ の３−ブチナール　ジエチルアセタールおよび２．３ｍｇの１−シル酸を添加し 、上記と同様に攪拌した。粗反応混合物を酢酸エチル、ヘキサンを使用して精製 すると、７７ｍｇの９−ジヒドロ−１３−アセチルバソカチンｌｌｌ７，９−（ ３，４−ジヒドロキシ）ブチリデン　アセタールが得られた。

工程２ 工程１の生成物３９ｍｇを一７８℃で３ｍｌのテトラヒドロフラン（Ｔ　ＨＦ　 ）に入れ、５．３当量のブチルリチウムを滴下して、混合物を一４４℃に温めた 。これに反応図２のラクタム（化合物７、Ｒ＝フェニル）を１１ｇ当量添加し、 その混合物を１時間、０℃に再び温めて、緩衝液により反応停止した。

反応混合物を酢酸エチルおよび水に分配して、有機層を脱水蒸発乾固し、酢酸エ チル・ヘキサンを使用して精製すると、１１．３ｍｇの２′　−〇−二ドキンエ チルー９−ジヒドロバツ力チンｍ　７．！Ｊ−（３，４−ジヒドロキシ）ブチリ デン　アセタールがジアステレオマーの混合物として得られた。

工程３ 工程２の生成物５．３ｍｇを０．８ｍｌのＴＨＦ：水（５：１）に入れ、これに ２当量のＮ−メチルモルホリン　Ｎ−オキシドおよび触媒量の四酸化オスミウム を添加した。反応混合物を２時間攪拌し、過剰のチオ硫酸ナトリウムおよびセラ イト濾過助剤を添加して反応を停止し、濾過して、エタノール／塩化メチレンに より洗浄し、蒸発させた。残渣をエタノールに溶解し、過剰の１％ＨＣＩで４時 間処理し、緩衝液で反応停止して、メタノール／塩化メチレンにより精製すると 、１ｍｇの９−ジヒドロキシール−７，９−（３，４−ジヒドロキシ）ブチリデ ン　アセタールが得られた。

実施例１４ ９−ジヒドロタキソール−７，９−チオノカーボネート工程１ 実施例１の生成物５０ｍｇをトルエンに入れ、これに３当量のチオカルボニルジ イミダゾールおよび触媒量のジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。

混合物を１時間加熱還流し、ｐ　Ｉ（７の緩衝液で洗浄し、上記と同様に処理し た。メタノール　塩化メチレンを使用して精製すると、４９．５ｍｇの９−ジヒ ドロバラ力チン■　７，９−チオノカーボネートが得られた。

工程２ 工程１の生成物４７ｍｇをブチルリチウムおよび反応図２のラクタム試薬（化合 物７、Ｒ＝フェニル）および上記実施例８と同様のＭＣＩで処理すると、メタノ ール：塩化メチレンを使用して精製した後に、１２ｍｇの９−ジヒドロタキソー ル−７，９−チオノカーボネートが得られた。

実施例１５ ９−ジヒドロタキソール−７−０−アリルエーテル工程１ 実施例１の生成物０．１９ｍｇを０℃でＴ　ＨＦに入れ、これにｇ当量の水素化 ナトリウム、触媒量のヨウ化テトラブチルアンモニウムおよび１．１当量の臭化 アリルを添加した。１２時間後、反応を緩衝液および酢酸エチルで停止した。有 機層を脱水蒸発乾固し、粗残渣を酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製すると、 ６１ｍｇの９−ンヒドロバッ力チンＩ［［７−０−アリルエーテルが得られた。

工程２ 工程１の生成物６１ｍｇを一７８℃でＴ　ＨＦに入れ、これに６当量のブチルリ チウムを滴下し、反応図２のラクタム試薬（化合物７、Ｒ；フェニル）を２当量 添加した。その混合物を１時間、０℃に温め、上記と同様に反応停止した。酢酸 エチル：へキサンを使用して精製した後、２５ｍｇの粗生成物が得られた。この 物質を実施例８と同様に１％のＨＣＩで処理すると、９−ジヒドロタキソール− ７−０−アリルエーテルが得られた。

実施例１６ ９−ジヒドロタキソール　？−０−（２，３−ジヒドロキシプロピル）エーテル 実施例１５工程２の生成物４ｍｇをＴＨＦ：水（５：　１）に入れ、これに２当 量のＮ−メチルモルホリン　Ｎ−オキシドおよび触媒量の四酸化オスミウムを添 加した。２時間後、過剰の千オ硫酸ナトリウムおよびセライト濾過助剤を添加し て反応を停止し、濾過して、蒸発させると、組物質が得られた。この物質を上記 と同様に１％ＨＣＩで直接処理すると、３．５ｍｇの９−ジヒドロタキソール　 ７−０−　（２，３−ジヒドロキシプロピル）エーテルが得られた。

実施例１７ ９−ジヒドロタキソール　７−０−　（２−ジメチルアミノエチ実施例１５工程 ２の粗生成物２７ｍｇを一７８℃でメタノール・塩化メチレンに入れ、この中に 、出発物質がなくなるまで過剰のオゾンを入れた。反応物を窒素でパージし、２ ５℃で過剰の硫化ジメチルを添加することにより反応を停止した。粗生成物を酢 酸エチル：ヘキサンを使用して上記と同様に精製すると、２２ｍｇの９−ジヒド ロタキソール−７−０−（２−メチレンカルボキシアルデヒド）が得られた。

工程２ 上記工程１の生成物８ｍｇをエタノールに入れ、これに１０当量のジエチルアミ ンおよび１０当量の酢酸、次いで過剰のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し た。２時間後、反応物を上記と同様に１％ＨＣＩで直接処理すると、５．４ｍｇ の９−ジヒドロタキソール　７−０−　（２−ジメチルアミノエチル）エーテル が得られた。

実施例１８ ９−ジヒドロタキソール　７−０−　（２−ヒドロキシエチル）エーテル 実施例１７エ程１の生成物５ｍｇをメタノールに入れ、これに過剰の水素化ホウ 素ナトリウムを添加し、１時間後、上記と同様にｐＨ７の緩衝液で反応を停止し た。粗残渣を上記と同様に１％ＨＣＩで直接処理すると、（５％メタノール／塩 化メチレンを使用して精製した後に）２．２ｍｇの９−ジヒドロタキソール　７ −Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）エーテルが得られた。

実施例１９ ９−ジヒドロタキソール　？−０−（２−アセトキシエチル）エーテル 実施例１８の生成物も、過剰の無水酢酸／ピリジンで３時間処理することにより 直接アセチル化した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を実施例８と同様に１％Ｍ ＣＩで処理し、メタノール／塩化メチレンを使用して精製すると、９−ジヒドロ タキソール　７−０−　（２−アセトキシエチル）エーテルが得られた。

実施例２Ｏ Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブトキンカルボニル−９−ジヒド実施例５の生成物 ０．１ｇを実施例６と同様に３当量のリチウム　ヘキサメチルジシラジド（Ｌ　 ｉ　ＨＭ　Ｄ　Ｓ　）または５〜４０当量の水素化ナトリウムで処理し、反応図 ２のラクタム試薬（化合物７、Ｒ＝ｔ−ブトキシ）０．１３２ｇで処理すると、 （アセトン：ヘキサンを使用して精製した後に）０．１４４ｇの７−０−１−ジ エチルシリル−２′−〇−エトキシエチル−Ｎ＝ニブベンゾイル−−ｔ−ブトキ ンカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

工程２ 工程１の生成物４ｍｇを実施例７と同様にＨＦ／ピリジン／トリエチルアミンで 処理し、ＭＣＩで直接処理すると、メタノール／塩化メチレンを使用して精製し た後に、１．５ｍｇのＮ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−ジ ヒドロタキソールが得られた。

実施例２１ １０−デアセチル−Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−ジヒ ドロタキソール 実施例２０工程１の生成物０．２７５ｇを上記と同様にＨＦ／ピリジン／トリエ チルアミンで処理した後、脱シリル化したその物質を実施例９と同様にＫＯＨで 処理し、実施例８と同様に１％ＨＣＩで処理すると９３．３ｍｇの１０−デアセ チル−Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−９−ジヒドロタキソー ルが得られた。

実施例２２ Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブチルアセチル−９−ジヒドロタ実施例５の生成物 Ｉ　Ｑｍｇを実施例２０工程１と同様に反応図２のラクタム試薬（化合物７、Ｒ ＝ｔ−ブチル−ＣＨ２）１６ｍｇで処理すると、（アセトン：ヘキサンを使用し て精製した後に）１０ｍｇの７−０−トリエチルシリル−２’　−０−エトキシ エチル−Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブチルアセチル−９−ジヒドロタキソール が得られた。

工程２ 工程１の生成物１０ｍｇを実施例２０工程２と同様にＨＦ／ピリジン／トリエチ ルアミンおよびＨＣＩで処理することにより脱保護すると、２．２ｍｇのＮ−デ ベンゾイルーＮ−ｔ−ブチルアセチル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例２３ Ｎ−デベンゾイルーＮ−イソブトキシカルボニル−９−ジヒド実施例５の生成物 ２０ｍｇを上記と同様に２９ｍｇのラクタム試薬（Ｒ＝イソブトキン）で処理す ると、（酢酸エチル、ヘキサンを使用して精製した後に）１９．３ｍｇの７−０ −）リエチルンリル−２’　−０−エトキシエチル−Ｎ−デベンゾイルーＮ−イ ソブトキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得上記工程１の生成物１９ｍ ｇを前記と同様にＨＦ／ピリジン／トリエチルアミンおよびＨＣＩで処理するこ とにより脱保護すると、９．２ｍｇのＮ−デベンゾイルーＮ−イソブトキシカル ボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例２４ Ｎ−デベンゾイルーＮ−アダマントキシカルボニル−９−ジヒ実施例５の生成物 １５ｍｇを上記と同様に２６ｍｇのラクタム試薬（Ｒ＝アダマントキシ）で処理 すると、（酢酸エチル：へキサンを使用して精製した後に）２０．８ｍｇの７− ０−トリエチルシリル−２’　−〇−エトキシエチルーＮ−デベンゾイルーＮ− アダマントキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

工程２ 上記工程１の生成物２０ｍｇを前記と同様にＨＦ／ピリジン／トリエチルアミン およびＨＣＩで処理することにより脱保護すると、１１ｍｇのＮ−デベンゾイル ーＮ−アダマントキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例２５ Ｎ−デベンゾイルーＮ−イソプロポキシカルボニル−９−ジヒドロタキソール 工程１ 実施例５の生成物１５ｍｇを上記と同様に２１ｍｇのラクタム試薬（Ｒ＝２−プ ロポキン）で処理すると、（酢酸エチル：ヘキサンを使用して精製した後に）１ ４．１ｍｇの７−０−トリエチルアミンー２′　−〇−二トキシエチルーＮ−デ ベンゾイルーＮ−イソプロポキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られ た。

工程２ 上記工程１の生成物１４ｍｇを前記と同様にＨＦ／ピリジン／トリエチルアミン およびＭＣＩで処理することにより脱保護すると、９．１ｍｇのＮ−デベンゾイ ルーＮ−イソプロポキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例２６ Ｎ−デベンゾイルーＮ−ベンジルオキシカルボニル−９−ジヒ実施例５の生成物 ８４ｍｇを上記と同様に１６０ｍｇのラクタム試薬（Ｒ＝２−ベンジルオキシ） で処理すると、（酢酸エチル、ヘキサンを使用して精製した後に）７６ｍｇの７ −０−トリエチルシリル−２′　−〇−二トキシエチルーＮ−デベンゾイルーＮ −ペンジルオキシカルボニル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

工程２ 上記工程１の生成物７６ｍｇを前記と同様にＨＣＩで処理することにより脱保護 すると、３２ｍｇのＮ−デペンゾイルーＮ−ベンジルオキシカルボニル−９−ジ ヒドロタキソールが得られた。

実施例２７ Ｎ−デベンゾイルー９−ジヒドロタキソール実施例２６の生成物３２ｍｇを２− プロパツールに入れ、これに１６ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを添加し、混合物を水素 下で２日間攪拌した。反応物を濾過し、溶媒を蒸発させると、２７ｍｇの粗アミ ン（Ｎ−デベンゾイルー９−ジヒドロタキソール）が得られた。

実施例２８ Ｎ−デベンゾイルーＮ−ピバロイル−９−ジヒドロタキソール実施例２７の生成 物６ｍｇを０．５ｍｌの塩化メチレンに入れ、これに過剰のトリエチルアミンお よび５当量の塩化ピパロイルを添加した。この混合物をメタノールにより反応停 止し、メタノール／塩化メチレンを使用して精製すると、２．２ｍｇのＮ−デベ ンゾイルーＮ−ピバロイル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例２９ Ｎ−デベンゾイルーＮ−アセチルー９−ジヒドロタキソール先の実施例と同様の 方法で、無水酢酸を、塩基を使用することな〈実施例２７の生成物７ｍｇと反応 させると、（メタノール／塩化メチレンを使用して精製した後に）３ｍｇのＮ− デベンゾイルーＮ−アセチルー９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例３Ｏ Ｎ−デベンゾイルーＮ−ｔ−ブチルカルバミル−９−ジヒドロタキソール 先の実施例と同様の方法で、ｔ−ブチルイソシアネートおよび触媒量の４−ジメ チルアミノピリジンを実施例２７の生成物６ｍｇと反応させると、（メタノール ／塩化メチレンを使用して精製した後に）２．９ｍｇのＮ−デベンゾイルーＮ− ｔ−ブチルカルバミル−９−ジヒドロタキソールが得られた。

実施例３１ 本発明化合物の物理的特性 本発明化合物のプロトンＮＭＲおよび質量スペクトルを下記表２に示す。

表２ 実施例３２ ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞毒性の測定本発明化合物のｉｎ　ｖｉｔｒｏでの 細胞毒性活性を、腫瘍細胞系Ａ３４９　（ヒトの乳癌）およびＰ−３８８（マウ スの白血病）に対してテストした。培養細胞に対する細胞毒性活性として、ＩＣ ５［＋を下記に述べるプロトコルに従って熱量測定法で測定した。

３日間のマイクロタイター測定法を使用して、一連の濃度の薬剤にさらした培養 細胞の増殖抑制を測定した。当該細胞が、テトラゾリウム色素であるＭＴＴ　（ 臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテト ラゾリウム）を、可視域の５７０ｎｍに吸収がある定量可能な着色最終産物に還 元する力を代謝活性として測定した。生き残っている細胞は、ＭＴＴ色素を還元 する。

被験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、最初にアールの平衡 塩類溶液、次いで培養培地により、テストすべき化合物最高濃度の２倍にまで希 釈した。この濃縮ストックから、逐次２倍希釈液を９６ウエルのマイクロタイタ ートレイ中に調製した。各ウェルには、所望の最終濃度の２倍の化合物を含む。

各濃度は３回テストし、薬剤を含まない３検体のコントロールと比較した。

細胞の増殖は、化合物の希釈に使用したものと同じ培地中で行い、次いでトリプ シン処理により集菌した。この処理は、培地を吸引により除去し、細胞単分子層 をアールの平衡塩類溶液で２回洗浄し、トリプシン（０，０５％）／ＥＤＴＡ（ ０，５３ｍＭ　；各２５０ｍ２に対して約０．２ｍ１）を添加し、単分子層を覆 うよう傾けた後、薄膜溶液のみを残してトリプシンを回収し；細胞単分子層が分 離するまで（目視および／または顕微鏡観察により確認）室温でインキュベート し、牛胎児血清を含む培地を添加してトリプシンの作用を停止し、細胞を再懸濁 し；細胞群の解離を助けるために摩砕し；電気的細胞計数器（例えば、Ｃｏｕｌ ｌｓ＋計数器）により、または細胞懸濁物のアリコートをトリパンブルー（０， ４９６の標準生理的食塩水）と混合し、生きた細胞を血球針により計数すること により、１ｍ１当たりの細胞数を測定することを含む。

集菌し、生きた細胞数を測定した後、細胞密度を２５．０００個／ｍｌに調整し た。次いで、その細胞を含む接種物（０，１ｍ１）を各ウェルに添加し、最終濃 度を各ウェルにつき２，５００個の細胞とした。接種物の添加により、被験化合 物は所望の最終濃度に希釈される。

次いで、マイクロタイタートレイを、５％の二酸化炭素を含む加湿雰囲気中、３ ６℃で３日間インキュベートした。３日後、２０マイクロタイターの５ｍｇ／ｍ １ＭＴＴ／リン酸塩緩衝塩水溶液を各ウェルに添加した。トレイを２〜４時間、 インキュベーターに戻し、生き残った細胞による色素の還元を行った。

培地および還元されていない色素を吸引除去した。各ウェルにＤＭＳＯを添加し 、分光光度計にょる５７０ｎｍでの測定が可能になるように、色素が還元されて 生じた、水に不溶の着色最終産物を溶解した。ＩＣ５ｏを、５７０ｎｍでの吸収 を薬物処理していないコントロール値の５０％に低下させるのに必要なテスト化 合物の濃度として測定した。

下記表３に示すテスト結果は、本発明化合物の細胞毒性活性を示す。

９　０．０１１　０．１４ １０　０．０２５　０．０４２ １１　０．０２３　０．０２２ １２　１．０　１．０ １３０．３０．１８ 理解されるように、上記の詳細な説明および実施例は、単に説明のためのもので あり、請求の範囲およびそれと均等のもののみで定義される本発明の範囲を限定 するものではない。開示した態様に対する種々の変形および改良は、当業者であ れば明らかであり、本発明の精神および範囲を逸脱しないならば行うことができ る。

図面の簡単な説明 図１は、９−ジヒドロ−１３−アセチルバラ力チン■のＣＤＣｌ３における水素 ＮＭＲスペクトルである。

図２は、９−ジヒドロ−１３−アセチルバッヵチン■の三次元構造の推定図であ る。

旦四氏ユ 旦親１２　、 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、ＳＥ ）、　ＡＵ、　ＣＡ、ＪＰ、　ＫＲ（７２）発明者　マカルパイン、ジエイムズ ・ビーアメリカ合衆国、イリノイ・６００４８、リバテイピル、ウェスト・ロッ クランド・ロード・２１１

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１は、下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ８は水素、アルキル、フェニル、置換フェニル、アルコキシ、置換ア ルコキシ、アミノ、置換アミノ、フェノキシおよび置換フェノキシから成る群か ら選択され；Ｒ９は水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル 、アミノアルキル、フエニルおよび置換フェニルから成る群から選択され；Ｒ１ ０は水素、アルカノイル、置換アルカノイルおよびアミノァルカノイルから成る 群から選択される。］を有する基であり； Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、独立して、水素、アルキル、アルカノイルおよ びアミノアルカノイルから成る群から選択され； Ｒ３は水素、アルキルおよびアミノアルカノイルから成る群がら選択され； Ｒ６は水素、アルキル、アルカノイル、アミノアルカノイルおよびフェニルカル ボニルから成る群から選択され；あるいは、Ｒ３は、Ｒ２およびＲ４の一方と一 緒になって、下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１１およびＲ１２は、（ｉ）各々が、独立して、水素、アルキル、フ ェニルおよび置換フェニルから成る群から選択されるか；（ｉｉ）Ｒ１１および Ｒ１２が一緒になって、酸素および硫黄から成る群から選択される単一の原子で あるか；あるいは、（ｉｉｉ）Ｒ１１およびＲ１２の一方が水素、アルキル、フ ェニルおよび置換フェニルから成る群から選択され、他方が−ＯＲ１３または− ＮＲ１３Ｒ１４（Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、アルキル、アルカノイル、 置換アルカノイル、フェニルおよび置換フェニルから成る群から選択される。） であるように選択される。］を有する環を形成してもよい。］を有する化合物。
2. ２．Ｒ１が下記式： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
3. ３．Ｒ３が水素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
4. ４．（ａ）９−ジヒドロ−１３−アセチルバッカチンＩＩＩおよび（ｂ）９−ジ ヒドロタキソールから成る群から選択される化合物。
5. ５．下記工程： （ａ）９−ジヒドロ−１３−アセチルパッカチンＩＩＩのＣ−７およびＣ−９ヒ ドロキシ基を保護する工程；（ｂ）工程（ａ）の生成物を脱エステル化する工程 ；（ｃ）工程（ｂ）の生成物のＣ−１３位に適当な側鎖を付加する工程；ならび に （ｄ）工程（ｃ）の生成物を選択的に再エステル化する工程を含むタキソール誘 導体の製造方法。
6. ６．Ｃ−７およびＣ−９ヒドロキシ基を、アセタール生成により保護することを 特徴とする請求項５に記載の方法。