JPH07229885A - 試料の自動分離装置 - Google Patents
試料の自動分離装置Info
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- JPH07229885A JPH07229885A JP6019705A JP1970594A JPH07229885A JP H07229885 A JPH07229885 A JP H07229885A JP 6019705 A JP6019705 A JP 6019705A JP 1970594 A JP1970594 A JP 1970594A JP H07229885 A JPH07229885 A JP H07229885A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 １台の試料の自動分離装置で多数の分離分析
モードが選択して出来るように試料を分離する。 【構成】前処理の第一カラムＣ１と、濃縮用の第二カラ
ムＣ２と、分析用の第三カラムＣ３をそれぞれ配管（ｔ
１〜ｔ２０）を介して接続し、これら配管に流路切替用
の６台の六方バルブ（Ｖ１〜Ｖ６）を介設し、かつ、上
記カラムに移動相を送液するポンプ（Ｐ１〜Ｐ３）を設
け、該ポンプと上記バルブを自動制御することにより多
数の分離分析モードを選択して行えるようにしている。
モードが選択して出来るように試料を分離する。 【構成】前処理の第一カラムＣ１と、濃縮用の第二カラ
ムＣ２と、分析用の第三カラムＣ３をそれぞれ配管（ｔ
１〜ｔ２０）を介して接続し、これら配管に流路切替用
の６台の六方バルブ（Ｖ１〜Ｖ６）を介設し、かつ、上
記カラムに移動相を送液するポンプ（Ｐ１〜Ｐ３）を設
け、該ポンプと上記バルブを自動制御することにより多
数の分離分析モードを選択して行えるようにしている。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、試料の自動分離装置に
関し、生体試料中の薬物および代謝物の分析、環境測定
あるいは天然物、発酵生産物、食品中の目的物を分離分
析するのに用いられるもので、詳しくは、１ないし複数
個のカラムを分析モードに応じて連通状態を切り替える
カラムスイッチングを全自動的に行う分離装置で、該分
離装置にクロマトグラフィー検出器を付設して液体クロ
マトグラフィー装置（ＬＣ）として、あるいは、質量分
析計（ＭＳ）を付設して液体クロマトグラフィーと質量
分析計を直結した装置（ＬＣ／ＭＳ）として好適に用い
られ、分析する対象物に応じて選択して採用される１な
いし複数の分析モードを、その前処理および分離分析工
程を含めて、１台の装置において、オンラインでスイッ
チを切り替えることにより、全自動で行えるようにする
ものである。
関し、生体試料中の薬物および代謝物の分析、環境測定
あるいは天然物、発酵生産物、食品中の目的物を分離分
析するのに用いられるもので、詳しくは、１ないし複数
個のカラムを分析モードに応じて連通状態を切り替える
カラムスイッチングを全自動的に行う分離装置で、該分
離装置にクロマトグラフィー検出器を付設して液体クロ
マトグラフィー装置（ＬＣ）として、あるいは、質量分
析計（ＭＳ）を付設して液体クロマトグラフィーと質量
分析計を直結した装置（ＬＣ／ＭＳ）として好適に用い
られ、分析する対象物に応じて選択して採用される１な
いし複数の分析モードを、その前処理および分離分析工
程を含めて、１台の装置において、オンラインでスイッ
チを切り替えることにより、全自動で行えるようにする
ものである。
【０００２】
【従来の技術】高速液体クロマトグラフィー装置は、高
性能なカラム充填剤と高感度な検出器が開発されたこと
により、試料の分離分析手段として汎用されており、特
に生体試料において、複雑なマトリックス中の微量の薬
物、およびその代謝物を定量する有力な手段となってい
る。
性能なカラム充填剤と高感度な検出器が開発されたこと
により、試料の分離分析手段として汎用されており、特
に生体試料において、複雑なマトリックス中の微量の薬
物、およびその代謝物を定量する有力な手段となってい
る。
【０００３】しかしながら、例えば、逆相系ＨＰＬＣカ
ラムに血漿などの生体試料を直接注入した場合には、タ
ンパクの吸着によりカラム圧が上昇し、カラム効率の減
少、カラムライフの減少を生じるため、定量に先立って
タンパク成分の除去、妨害成分の除去を目的とした前処
理の分離が必要となる。上記タンパク成分の除去には有
機溶媒あるいは酸による除タンパク法が用いられてい
る。また、生体試料以外のサンプルにおいても、夾雑物
の除去や目的成分の濃縮を目的とした前処理が必要であ
り、液ー液抽出法などが選択される。しかし、いずれの
前処理法においても、時間と労力が必要であり、また、
精度および再現性の低下の原因となっている。
ラムに血漿などの生体試料を直接注入した場合には、タ
ンパクの吸着によりカラム圧が上昇し、カラム効率の減
少、カラムライフの減少を生じるため、定量に先立って
タンパク成分の除去、妨害成分の除去を目的とした前処
理の分離が必要となる。上記タンパク成分の除去には有
機溶媒あるいは酸による除タンパク法が用いられてい
る。また、生体試料以外のサンプルにおいても、夾雑物
の除去や目的成分の濃縮を目的とした前処理が必要であ
り、液ー液抽出法などが選択される。しかし、いずれの
前処理法においても、時間と労力が必要であり、また、
精度および再現性の低下の原因となっている。
【０００４】そのため、生体試料分析をはじめとする多
くの分析では、試料を直接注入し、不要成分の除去ある
いは濃縮といった前処理を自動的に行うカラムスイッチ
ング法が開発されている。上記カラムスイッチング法
は、試料および分析目的に応じて、前処理分離用カラ
ム、分離及び／或いは濃縮用カラム、分離分析用カラム
からなる複数のカラムの相互の接続状態を切り替えるも
ので、該カラムスイッチング法として、ハートカット法
（以下、ＨＣ法と略称する）とバックラッシュ法（以
下、ＢＦ法と略称する）の二種の方法が多用されてい
る。上記ＨＣ法は前処理カラムで目的成分のピークのみ
をカッテイングし、第一移動相で分析用カラムへ目的成
分を導入する方法であり、上記ＢＦ法は、前処理カラム
に目的成分を吸着させ、第二移動相で逆方向から溶出さ
せて分析カラムに目的成分を導入する方法である。ま
た、化合物の質量分析は有機化合物の分子量と構造に関
する分析であり、目的化合物の分離装置と直結して用い
ることが好ましく、この種のＬＣ／ＭＳ装置は従来より
提案されている（特開平３−１７５３５３号）。しか
し、異種のカラムスイッチングモードを連続的に自動切
替する技術は未だ開発されていない。
くの分析では、試料を直接注入し、不要成分の除去ある
いは濃縮といった前処理を自動的に行うカラムスイッチ
ング法が開発されている。上記カラムスイッチング法
は、試料および分析目的に応じて、前処理分離用カラ
ム、分離及び／或いは濃縮用カラム、分離分析用カラム
からなる複数のカラムの相互の接続状態を切り替えるも
ので、該カラムスイッチング法として、ハートカット法
（以下、ＨＣ法と略称する）とバックラッシュ法（以
下、ＢＦ法と略称する）の二種の方法が多用されてい
る。上記ＨＣ法は前処理カラムで目的成分のピークのみ
をカッテイングし、第一移動相で分析用カラムへ目的成
分を導入する方法であり、上記ＢＦ法は、前処理カラム
に目的成分を吸着させ、第二移動相で逆方向から溶出さ
せて分析カラムに目的成分を導入する方法である。ま
た、化合物の質量分析は有機化合物の分子量と構造に関
する分析であり、目的化合物の分離装置と直結して用い
ることが好ましく、この種のＬＣ／ＭＳ装置は従来より
提案されている（特開平３−１７５３５３号）。しか
し、異種のカラムスイッチングモードを連続的に自動切
替する技術は未だ開発されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記カラムスイッチン
グ法を用いた分析では、前処理カラムに直接試料を注入
できる利点はあるが、従来、異種のカラムスイッチング
法を行うにはカラムの装着部位や配管の組みかえが必要
な装置しか提供されておらず、１台の装置で複数のカラ
ムスイッチング法が自動的に連続して適用できる装置は
提供されていない。しかしながら、対象物の分析におい
ては、対象物の種類に応じて上記ＨＣ法、ＢＦ法、これ
らＨＣ法あるいはＢＦ法にさらに分離及び／或いは濃縮
過程を加えて分析（ＨＣ法→ＢＦ法、ＢＦ法→ＢＦ法）
を行うことが好ましい場合があり、目的対象物に応じて
分析モードが異なる。よって、従来は、採用する分析モ
ードに応じて、その都度、カラムの交換、これらカラム
を接続する配管を組み替える煩雑な作業が必要となって
いる。さらに、高速液体クロマトグラフの検出器の部分
を質量分析計（ＭＳ）と直結して分析を行う方法（ＬＣ
／ＭＳ）を用いた場合、脱塩操作を行う必要があるた
め、その場合においても、クロマトグラフィー装置にお
ける配管およびカラムを組み替えが必要となる。
グ法を用いた分析では、前処理カラムに直接試料を注入
できる利点はあるが、従来、異種のカラムスイッチング
法を行うにはカラムの装着部位や配管の組みかえが必要
な装置しか提供されておらず、１台の装置で複数のカラ
ムスイッチング法が自動的に連続して適用できる装置は
提供されていない。しかしながら、対象物の分析におい
ては、対象物の種類に応じて上記ＨＣ法、ＢＦ法、これ
らＨＣ法あるいはＢＦ法にさらに分離及び／或いは濃縮
過程を加えて分析（ＨＣ法→ＢＦ法、ＢＦ法→ＢＦ法）
を行うことが好ましい場合があり、目的対象物に応じて
分析モードが異なる。よって、従来は、採用する分析モ
ードに応じて、その都度、カラムの交換、これらカラム
を接続する配管を組み替える煩雑な作業が必要となって
いる。さらに、高速液体クロマトグラフの検出器の部分
を質量分析計（ＭＳ）と直結して分析を行う方法（ＬＣ
／ＭＳ）を用いた場合、脱塩操作を行う必要があるた
め、その場合においても、クロマトグラフィー装置にお
ける配管およびカラムを組み替えが必要となる。
【０００６】このように、一つの分析モードから他の一
つの分析モードに変える場合、装置の配管、カラムを取
り替える必要があり、極めて煩雑な手順と労力と時間と
が必要となり、コスト面およびスペース面から問題であ
った。
つの分析モードに変える場合、装置の配管、カラムを取
り替える必要があり、極めて煩雑な手順と労力と時間と
が必要となり、コスト面およびスペース面から問題であ
った。
【０００７】本発明は、上記した問題に鑑みてなされた
もので、複数の分析モードにおける前処理−分離分析、
あるいは、前処理−分離／濃縮−分離分析をオンライン
で自動的に切り替えて行え、多種のカラムスイッチング
法を用いる場合に好適に利用できる試料の自動分離装置
（名称「ＦＡＭＡＳ」）を提供することを目的としてい
る。
もので、複数の分析モードにおける前処理−分離分析、
あるいは、前処理−分離／濃縮−分離分析をオンライン
で自動的に切り替えて行え、多種のカラムスイッチング
法を用いる場合に好適に利用できる試料の自動分離装置
（名称「ＦＡＭＡＳ」）を提供することを目的としてい
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明は、請求項１で、第一カラム、第二カラムお
よび第三カラムと、上記第一カラム、第二カラム及び第
三カラムを異なる流路で接続する複数の配管と、上記配
管に介設した複数のバルブと、上記第一カラム、第二カ
ラム、第三カラムのうちの少なくとも１つのカラムに移
動相を送液するポンプと、上記バルブの動作を制御する
制御手段とを備え、複数の分析モードのうちから選択さ
れた分析モードとなるように上記第一カラム、第二カラ
ム、第三カラムの連通流路を自動切り替える構成として
いることを特徴とする試料の自動分離装置を提供してい
る。上記第一カラムは主として前処理及び／或いは分離
用として用い、第二カラムは分離及び／或いは濃縮用と
して用い、第三カラムは分離分析用カラムとして用いて
いる。
め、本発明は、請求項１で、第一カラム、第二カラムお
よび第三カラムと、上記第一カラム、第二カラム及び第
三カラムを異なる流路で接続する複数の配管と、上記配
管に介設した複数のバルブと、上記第一カラム、第二カ
ラム、第三カラムのうちの少なくとも１つのカラムに移
動相を送液するポンプと、上記バルブの動作を制御する
制御手段とを備え、複数の分析モードのうちから選択さ
れた分析モードとなるように上記第一カラム、第二カラ
ム、第三カラムの連通流路を自動切り替える構成として
いることを特徴とする試料の自動分離装置を提供してい
る。上記第一カラムは主として前処理及び／或いは分離
用として用い、第二カラムは分離及び／或いは濃縮用と
して用い、第三カラムは分離分析用カラムとして用いて
いる。
【０００９】また、請求項２で、上記第一カラム、第二
カラム、第三カラムのうちの少なくとも１つのカラムか
らの溶出液を検出する検出手段を備えている請求項１に
記載の試料の自動分離装置を提供している。
カラム、第三カラムのうちの少なくとも１つのカラムか
らの溶出液を検出する検出手段を備えている請求項１に
記載の試料の自動分離装置を提供している。
【００１０】上記検出手段として、上記溶出液のクロマ
トグラムを検出する検出器を用い、上記自動分離装置を
液体クロマトグラフィー装置の試料分離装置として用い
ることが好ましい。（請求項３） 上記検出器としては、液体クロマトグラムを検出できる
ものなら全て適用でき、例えば、紫外可視検出器、蛍光
検出器、示差屈折計、赤外線分光光度計、原子吸光光度
計、光散乱検出器、旋光度検出器、化学発光検出器、誘
導プラズマ発光光度計、電気化学検出器、電導度検出
器、水素炎イオン化検出器、エレクトロンキャプチャー
検出器、磁気共鳴分光器、差圧計のうち少なくとも１つ
を用いることが出来る。（請求項４）
トグラムを検出する検出器を用い、上記自動分離装置を
液体クロマトグラフィー装置の試料分離装置として用い
ることが好ましい。（請求項３） 上記検出器としては、液体クロマトグラムを検出できる
ものなら全て適用でき、例えば、紫外可視検出器、蛍光
検出器、示差屈折計、赤外線分光光度計、原子吸光光度
計、光散乱検出器、旋光度検出器、化学発光検出器、誘
導プラズマ発光光度計、電気化学検出器、電導度検出
器、水素炎イオン化検出器、エレクトロンキャプチャー
検出器、磁気共鳴分光器、差圧計のうち少なくとも１つ
を用いることが出来る。（請求項４）
【００１１】また、上記検出手段として、質量分析計を
用い、ＬＣ／ＭＳに直結した試料分離装置として用いる
こともできる。（請求項５）
用い、ＬＣ／ＭＳに直結した試料分離装置として用いる
こともできる。（請求項５）
【００１２】請求項１に記載の試料の自動分離装置は、
具体的には、上記ポンプとして、上記第一カラムに送ら
れ、該第一カラムで試料を目的成分を含む画分と不要成
分とに分離して溶出させる第一移動相を送液する第一ポ
ンプを備えている。（請求項６） また、上記ポンプとして、上記第二カラムに送られて該
第二カラムで目的成分を含む画分を分離及び／或いは濃
縮する第二移動相、あるいは上記第三カラムに送られて
第三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を分離して
溶出させる分離分析用第二移動相を送液する第二ポンプ
を備えている。（請求項７） また、上記ポンプとして、上記第三カラムに送られ、第
三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を分離する第
三移動相を送液する第三ポンプを備えている。(請求項
８) さらに、上記第二カラム及び第三カラムの入口にマニュ
アルインジェクターなどの試料注入装置を付設すること
が好ましい。（請求項９、請求項１０）
具体的には、上記ポンプとして、上記第一カラムに送ら
れ、該第一カラムで試料を目的成分を含む画分と不要成
分とに分離して溶出させる第一移動相を送液する第一ポ
ンプを備えている。（請求項６） また、上記ポンプとして、上記第二カラムに送られて該
第二カラムで目的成分を含む画分を分離及び／或いは濃
縮する第二移動相、あるいは上記第三カラムに送られて
第三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を分離して
溶出させる分離分析用第二移動相を送液する第二ポンプ
を備えている。（請求項７） また、上記ポンプとして、上記第三カラムに送られ、第
三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を分離する第
三移動相を送液する第三ポンプを備えている。(請求項
８) さらに、上記第二カラム及び第三カラムの入口にマニュ
アルインジェクターなどの試料注入装置を付設すること
が好ましい。（請求項９、請求項１０）
【００１３】本装置では、簡単な構成で、かつ、全自動
でカラムスイッチング法により、１ないし複数の分離分
析モードを選択して行うため、上記分離装置で使用する
バルブとして、複数の６方バルブを用いている。（請求
項１１） 上記バルブとして、上記第一カラムと第一ポンプを接続
する流路に介設し、第一移動相の第一カラムへの導入を
制御している第一６方バルブを備えている。（請求項１
２） また、上記バルブとして、上記第一カラム、第二カラム
および第三カラムと第二ポンプを接続する流路に介設
し、第二移動相のこれらカラムに選択的に導入している
第二６方バルブを備えている。（請求項１３） また、上記バルブとして、上記第一カラム、第二カラム
および第三カラムを夫々接続する流路に介設し、第一カ
ラム、第二カラム、第三カラムの連通を制御する第三６
方バルブを備えている。（請求項１４） また、上記バルブとして、上記第三カラムおよび第二カ
ラムと第三ポンプとを接続する流路に介設して、第三移
動相を第三カラムあるいは第二カラムに選択的に導入す
る第四６方バルブを備えている。（請求項１５） また、上記バルブとして、上記第一、第二、第三ポンプ
と第三カラムとを接続する流路に介設し、第三カラムへ
の移動相の導入を制御している第五６方バルブを備えて
いる。（請求項１６） また、上記バルブとして、第三カラムを検出器および廃
棄部に接続する流路に介設している第六６方バルブを備
えている。（請求項１７）
でカラムスイッチング法により、１ないし複数の分離分
析モードを選択して行うため、上記分離装置で使用する
バルブとして、複数の６方バルブを用いている。（請求
項１１） 上記バルブとして、上記第一カラムと第一ポンプを接続
する流路に介設し、第一移動相の第一カラムへの導入を
制御している第一６方バルブを備えている。（請求項１
２） また、上記バルブとして、上記第一カラム、第二カラム
および第三カラムと第二ポンプを接続する流路に介設
し、第二移動相のこれらカラムに選択的に導入している
第二６方バルブを備えている。（請求項１３） また、上記バルブとして、上記第一カラム、第二カラム
および第三カラムを夫々接続する流路に介設し、第一カ
ラム、第二カラム、第三カラムの連通を制御する第三６
方バルブを備えている。（請求項１４） また、上記バルブとして、上記第三カラムおよび第二カ
ラムと第三ポンプとを接続する流路に介設して、第三移
動相を第三カラムあるいは第二カラムに選択的に導入す
る第四６方バルブを備えている。（請求項１５） また、上記バルブとして、上記第一、第二、第三ポンプ
と第三カラムとを接続する流路に介設し、第三カラムへ
の移動相の導入を制御している第五６方バルブを備えて
いる。（請求項１６） また、上記バルブとして、第三カラムを検出器および廃
棄部に接続する流路に介設している第六６方バルブを備
えている。（請求項１７）
【００１４】上記第一６方バルブから第六６方バルブは
いずれか１つを用いて、他のバルブは６方バルブに限定
せずに、他の種類のバルブを組み合わせても、上記した
１ないし複数の分離分析モードを選択して行うことは可
能である。よって、本発明の分離装置で使用するバルブ
は、６個の６方バルブに限定されない。
いずれか１つを用いて、他のバルブは６方バルブに限定
せずに、他の種類のバルブを組み合わせても、上記した
１ないし複数の分離分析モードを選択して行うことは可
能である。よって、本発明の分離装置で使用するバルブ
は、６個の６方バルブに限定されない。
【００１５】しかしながら、上記６個の６方バルブを用
いると、バルブの個数を少なくして、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを、効率の良いカラムスイ
ッチング法で選択して行うことができる。即ち、上記分
離装置に用いるバルブとして、第一、第二、第三、第
四、第五および第六６方バルブからなる６台のバルブを
備え、上記第一６方バルブのポートは、第一ポンプ、第
一カラム、第二６方バルブおよび第三６方バルブと配管
を介して夫々接続し、上記第二６方バルブのポートは、
第二ポンプ、第二カラム、第一６方バルブ、第四６方バ
ルブと配管を介して夫々接続し、上記第三６方バルブの
ポートは、第一６方バルブ、第四６方バルブ、第五６方
バルブと配管を介して夫々接続し、上記第四６方バルブ
のポートは、第三ポンプ、第二ポンプ、第二カラム、第
三６方バルブ、第五６方バルブ、廃棄部と配管を介して
夫々接続し、上記第五６方バルブのポートは、第三カラ
ムの両端ポート、第三６方バルブ、第四６方バルブ、第
六６方バルブと配管を介して夫々接続し、上記第六６方
バルブのポートは、第五６方バルブ、検出器、廃棄部と
配管を介して夫々接続することが好ましい。（請求項１
８）尚、上記６個の６方バルブを組み合わせて用いる構
成とした場合、上記第三６方バルブには１組の隣接する
２つのポートを常時連通している短絡通路を設けてい
る。（請求項１９）
いると、バルブの個数を少なくして、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを、効率の良いカラムスイ
ッチング法で選択して行うことができる。即ち、上記分
離装置に用いるバルブとして、第一、第二、第三、第
四、第五および第六６方バルブからなる６台のバルブを
備え、上記第一６方バルブのポートは、第一ポンプ、第
一カラム、第二６方バルブおよび第三６方バルブと配管
を介して夫々接続し、上記第二６方バルブのポートは、
第二ポンプ、第二カラム、第一６方バルブ、第四６方バ
ルブと配管を介して夫々接続し、上記第三６方バルブの
ポートは、第一６方バルブ、第四６方バルブ、第五６方
バルブと配管を介して夫々接続し、上記第四６方バルブ
のポートは、第三ポンプ、第二ポンプ、第二カラム、第
三６方バルブ、第五６方バルブ、廃棄部と配管を介して
夫々接続し、上記第五６方バルブのポートは、第三カラ
ムの両端ポート、第三６方バルブ、第四６方バルブ、第
六６方バルブと配管を介して夫々接続し、上記第六６方
バルブのポートは、第五６方バルブ、検出器、廃棄部と
配管を介して夫々接続することが好ましい。（請求項１
８）尚、上記６個の６方バルブを組み合わせて用いる構
成とした場合、上記第三６方バルブには１組の隣接する
２つのポートを常時連通している短絡通路を設けてい
る。（請求項１９）
【００１６】また、本発明の試料の自動分離装置では、
上記第１カラムに試料を注入する装置を備えているが、
全自動化を達成するために、上記第一カラムに試料を注
入するオートサンプラーが好ましい。（請求項２０、請
求項２１）さらに、上記制御手段は、予め選択された１
つの分離分析モードあるいは次々と連続して行うように
選択された分離分析モードの分離手順が入力されたコン
ピュータにより制御され、該コンピュータからの信号に
より上記コントローラを動作して、上記選択された分離
分析モードを全自動で行う構成としている。（請求項２
２）
上記第１カラムに試料を注入する装置を備えているが、
全自動化を達成するために、上記第一カラムに試料を注
入するオートサンプラーが好ましい。（請求項２０、請
求項２１）さらに、上記制御手段は、予め選択された１
つの分離分析モードあるいは次々と連続して行うように
選択された分離分析モードの分離手順が入力されたコン
ピュータにより制御され、該コンピュータからの信号に
より上記コントローラを動作して、上記選択された分離
分析モードを全自動で行う構成としている。（請求項２
２）
【００１７】本発明の分離装置により選択して行える上
記複数の分離分析モードは、 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分を含む画分を試料の導入方向と同一
方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入する
ハートカット法（ＨＣ法）による分離分析モード； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記第三カラムに導入するバックラッシュ法（Ｂ
Ｆ法）による分離分析モード； 上記ＨＣ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加え
る、即ち、ＨＣ法にＢＦを加える分離分析モード； 上記ＢＦ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加え
る、即ち、ＢＦ法にＢＦ法を加える分離分析モード； 上記第一カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第二カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第三カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 複数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分
離分析モード； 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法にさらに目的成分の分離、濃縮、脱塩のい
ずれかを行って試料分析計へ導入する分離分析モード のうちの少なくとも２以上を有しており、使用に当たっ
ては少なくとも１つ以上のモードを選択して１回あるい
は複数回連続して行える構成としている。（請求項２
３） 尚、上記から10の１０通りの分離分析モードの全部を
行うことができる構成とすることが好ましく、本発明の
試料の自動分離装置は、これら１０通りのモードから選
択した分離分析モードを１回ないし次々と連続して行え
る構成としている。（請求項２４）
記複数の分離分析モードは、 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分を含む画分を試料の導入方向と同一
方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入する
ハートカット法（ＨＣ法）による分離分析モード； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記第三カラムに導入するバックラッシュ法（Ｂ
Ｆ法）による分離分析モード； 上記ＨＣ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加え
る、即ち、ＨＣ法にＢＦを加える分離分析モード； 上記ＢＦ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加え
る、即ち、ＢＦ法にＢＦ法を加える分離分析モード； 上記第一カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第二カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第三カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 複数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分
離分析モード； 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法にさらに目的成分の分離、濃縮、脱塩のい
ずれかを行って試料分析計へ導入する分離分析モード のうちの少なくとも２以上を有しており、使用に当たっ
ては少なくとも１つ以上のモードを選択して１回あるい
は複数回連続して行える構成としている。（請求項２
３） 尚、上記から10の１０通りの分離分析モードの全部を
行うことができる構成とすることが好ましく、本発明の
試料の自動分離装置は、これら１０通りのモードから選
択した分離分析モードを１回ないし次々と連続して行え
る構成としている。（請求項２４）
【００１８】本発明は、さらに、第一カラムおよび第三
カラムと、上記第一カラムと第三カラムとを異なる流路
で接続する複数の配管と、上記配管に介設した複数のバ
ルブと、上記第一カラムおよび／あるいは第三カラムに
移動相を送液するポンプと、上記第一カラムおよび／あ
るいは第三カラムからの溶出液のクロマトグラムを検出
する検出器と、上記バルブの動作を制御する制御手段と
を備え、複数の分析モードのうちから選択された分離分
析モードとなるように上記第一カラムと第三カラムの連
通流路を自動的に切り替える構成としていることを特徴
とする試料の自動分離装置を提供している。（請求項２
５） 上記第一カラムは主として前処理用として用い、第三カ
ラムは主として分離分析用として用いている。
カラムと、上記第一カラムと第三カラムとを異なる流路
で接続する複数の配管と、上記配管に介設した複数のバ
ルブと、上記第一カラムおよび／あるいは第三カラムに
移動相を送液するポンプと、上記第一カラムおよび／あ
るいは第三カラムからの溶出液のクロマトグラムを検出
する検出器と、上記バルブの動作を制御する制御手段と
を備え、複数の分析モードのうちから選択された分離分
析モードとなるように上記第一カラムと第三カラムの連
通流路を自動的に切り替える構成としていることを特徴
とする試料の自動分離装置を提供している。（請求項２
５） 上記第一カラムは主として前処理用として用い、第三カ
ラムは主として分離分析用として用いている。
【００１９】上記請求項２５に記載の装置は、請求項１
の装置が１０通りの分離分析モードを選択して行える構
成としているのに対して、下記の最も多用される２通り
の分離分析モード（ＨＣ法、ＢＦ法）を選択して、か
つ、選択した分離分析モードを単独であるいは連続して
行える構成としている。(請求項２７) 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分を含む画分を試料の導入方向と同一
方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入する
ハートカット法（ＨＣ法）の分離分析モードと； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記分析用の第三カラムに導入するバックラッシ
ュ法（ＢＦ法）の分離分析モード。
の装置が１０通りの分離分析モードを選択して行える構
成としているのに対して、下記の最も多用される２通り
の分離分析モード（ＨＣ法、ＢＦ法）を選択して、か
つ、選択した分離分析モードを単独であるいは連続して
行える構成としている。(請求項２７) 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分を含む画分を試料の導入方向と同一
方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入する
ハートカット法（ＨＣ法）の分離分析モードと； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記分析用の第三カラムに導入するバックラッシ
ュ法（ＢＦ法）の分離分析モード。
【００２０】上記のように、最も多用されるＨＣ法とＢ
Ｆ法とを２通りの分離分析モードのみをカラムスイッチ
ング法で選択して行える構成としているため、装置の構
成部品を、前記請求項１に記載の装置の構成部品よりも
大幅に減少している。即ち、上記ポンプとして、上記第
一カラムに送られ、該第一カラムで試料を目的成分と不
要成分とに分離して溶出させる第一移動相を送液する第
一ポンプと、上記第一カラムあるいは第三カラムに送ら
れて、これらカラムで捕捉された目的成分を溶出させる
第二移動相を送液する第二ポンプとの２個のポンプを備
え、上記バルブとして、上記第一カラムと第一ポンプを
接続する流路および第一カラムと第二ポンプを接続する
流路に介設して第一移動相および第二移動相の第一カラ
ムへの導入を制御している第一６方バルブと、上記第一
６方バルブと第三カラムを接続する流路および第一６方
バルブと廃液部とを接続する流路に介設し、第一カラム
と第三カラムの連通を制御すると共に第二移動相の第三
カラムへの導入を制御する第三６方バルブの２個のバル
ブを備え、かつ、上記検出器を第三カラムの下流側に接
続する構成としている。（請求項２６）
Ｆ法とを２通りの分離分析モードのみをカラムスイッチ
ング法で選択して行える構成としているため、装置の構
成部品を、前記請求項１に記載の装置の構成部品よりも
大幅に減少している。即ち、上記ポンプとして、上記第
一カラムに送られ、該第一カラムで試料を目的成分と不
要成分とに分離して溶出させる第一移動相を送液する第
一ポンプと、上記第一カラムあるいは第三カラムに送ら
れて、これらカラムで捕捉された目的成分を溶出させる
第二移動相を送液する第二ポンプとの２個のポンプを備
え、上記バルブとして、上記第一カラムと第一ポンプを
接続する流路および第一カラムと第二ポンプを接続する
流路に介設して第一移動相および第二移動相の第一カラ
ムへの導入を制御している第一６方バルブと、上記第一
６方バルブと第三カラムを接続する流路および第一６方
バルブと廃液部とを接続する流路に介設し、第一カラム
と第三カラムの連通を制御すると共に第二移動相の第三
カラムへの導入を制御する第三６方バルブの２個のバル
ブを備え、かつ、上記検出器を第三カラムの下流側に接
続する構成としている。（請求項２６）
【００２１】また、本発明は、請求項１に記載した装置
における前処理用の第一カラムを分離分析用の第一カラ
ムに、分離／濃縮用の第二カラムをトラップ用のカラム
に代え、かつ、質量分析計からなる検出手段を取り付け
ることによりＬＣ／ＭＳ専用の試料の自動分離装置を提
供している。即ち、上記第一カラムと第二カラムとを異
なる流路で接続する複数の配管と、上記配管に介設した
複数のバルブと、上記第一カラムおよび／あるいは第二
カラムに移動相を送液するポンプと、上記第一カラムお
よび／あるいは第二カラムからの溶出液を分析する質量
分析計と、上記バルブの動作を制御する制御手段とを備
え、複数の分析モードのうちから選択された分析モード
が連続して行えるように上記第一カラムおよび／あるい
は第二カラムと質量分析計との連通流路を自動切替する
構成としていることを特徴とする質量分析計と直結した
試料の自動分離装置を提供している。（請求項２８） 尚、請求項１、請求項２５および上記請求項２７に記載
の試料の自動分離装置におては、いずれも、使用するカ
ラムとして、試料の分離が出来るものであれば、全ゆる
ものが使用でき、何等限定されない。
における前処理用の第一カラムを分離分析用の第一カラ
ムに、分離／濃縮用の第二カラムをトラップ用のカラム
に代え、かつ、質量分析計からなる検出手段を取り付け
ることによりＬＣ／ＭＳ専用の試料の自動分離装置を提
供している。即ち、上記第一カラムと第二カラムとを異
なる流路で接続する複数の配管と、上記配管に介設した
複数のバルブと、上記第一カラムおよび／あるいは第二
カラムに移動相を送液するポンプと、上記第一カラムお
よび／あるいは第二カラムからの溶出液を分析する質量
分析計と、上記バルブの動作を制御する制御手段とを備
え、複数の分析モードのうちから選択された分析モード
が連続して行えるように上記第一カラムおよび／あるい
は第二カラムと質量分析計との連通流路を自動切替する
構成としていることを特徴とする質量分析計と直結した
試料の自動分離装置を提供している。（請求項２８） 尚、請求項１、請求項２５および上記請求項２７に記載
の試料の自動分離装置におては、いずれも、使用するカ
ラムとして、試料の分離が出来るものであれば、全ゆる
ものが使用でき、何等限定されない。
【００２２】上記請求項２８に記載の装置は、ＬＣ／Ｍ
Ｓ専用であるため、請求項１に記載した装置が１０通り
の分離分析モードを選択して行えるようにしているのに
対して、下記の、10の２通りの分離分析モードが行え
る構成となる。(請求項２９) 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法に更に目的成分の分離、濃縮、脱塩のいず
れかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード。
Ｓ専用であるため、請求項１に記載した装置が１０通り
の分離分析モードを選択して行えるようにしているのに
対して、下記の、10の２通りの分離分析モードが行え
る構成となる。(請求項２９) 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法に更に目的成分の分離、濃縮、脱塩のいず
れかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード。
【００２３】
【作用】本発明の請求項１の装置では、１台の装置上
に、３本のカラム（前処理及び／あるいは分離用、分離
及び／或いは濃縮用および分離分析用の３本のカラム）
を設置し、これらカラムを夫々異なる複数の配管で接続
し、これら配管にバルブを介設しているため、これらバ
ルブを切り替えることにより、選択した分離分析モード
に応じて、上記カラムを所要の回路で連通させることが
でき、バルブの切り替え動作のみで、複数の分離分析モ
ードの中から選択した分離分析モードを採用することが
出来る。また、上記カラムに移動相を送液するポンプも
付設し、これらポンプと上記カラムとの連通も上記バル
ブの切り替えにより任意のカラムに移動相を送液できる
ため、上記のように、複数の分析モードの中から選択し
た分離分析モードをバルブの切り替えだけで行う事が出
来る。即ち、選択した分離分析モードに応じて、カラム
装着位置および配管を交換する必要がなく、上記バルブ
を自動制御することにより、１台の装置で選択した分離
分析モードを実施することができるが、本装置に設置し
ている他の手段、ポンプ、検出器、試料注入装置、検出
器に付設した記録計などもバルブを制御する制御手段に
より合目的的に自動制御出来る構成としておくことが好
ましい。
に、３本のカラム（前処理及び／あるいは分離用、分離
及び／或いは濃縮用および分離分析用の３本のカラム）
を設置し、これらカラムを夫々異なる複数の配管で接続
し、これら配管にバルブを介設しているため、これらバ
ルブを切り替えることにより、選択した分離分析モード
に応じて、上記カラムを所要の回路で連通させることが
でき、バルブの切り替え動作のみで、複数の分離分析モ
ードの中から選択した分離分析モードを採用することが
出来る。また、上記カラムに移動相を送液するポンプも
付設し、これらポンプと上記カラムとの連通も上記バル
ブの切り替えにより任意のカラムに移動相を送液できる
ため、上記のように、複数の分析モードの中から選択し
た分離分析モードをバルブの切り替えだけで行う事が出
来る。即ち、選択した分離分析モードに応じて、カラム
装着位置および配管を交換する必要がなく、上記バルブ
を自動制御することにより、１台の装置で選択した分離
分析モードを実施することができるが、本装置に設置し
ている他の手段、ポンプ、検出器、試料注入装置、検出
器に付設した記録計などもバルブを制御する制御手段に
より合目的的に自動制御出来る構成としておくことが好
ましい。
【００２４】上記試料の自動分離装置は、試料の分離が
必要な分野において、他の装置と組み合わせることによ
り、広範囲の利用が可能となる。特に、分離した試料を
検出する手段を付設すると、各種分野において、試料の
分離状態を検出する必要がある場合に好適に利用でき
る。（請求項２） よって、この検出手段としては、試料の自動分離装置が
用いられる分野に対応して、適宜な検出手段が用いられ
る。
必要な分野において、他の装置と組み合わせることによ
り、広範囲の利用が可能となる。特に、分離した試料を
検出する手段を付設すると、各種分野において、試料の
分離状態を検出する必要がある場合に好適に利用でき
る。（請求項２） よって、この検出手段としては、試料の自動分離装置が
用いられる分野に対応して、適宜な検出手段が用いられ
る。
【００２５】医薬開発分野において、生体試料等の分離
分析を行う場合には、第一カラム、第二カラムあるいは
第三カラムからの溶出液のクロマトグラムを検出する検
出器を付設することが好ましく、かつ、該検出器とし
て、分離分析する試料に対応した適宜な検出器が用いら
れる。（請求項３および請求項４） 特に、上記検出器にインテグレーターなどの記録計を付
設しておくと、検出結果を自動的に記録測定できる利点
がある。上記クロマトグラフィー検出器を付設した場合
には、分離分析が行えるモードは上記〜の８通りの
モードである。
分析を行う場合には、第一カラム、第二カラムあるいは
第三カラムからの溶出液のクロマトグラムを検出する検
出器を付設することが好ましく、かつ、該検出器とし
て、分離分析する試料に対応した適宜な検出器が用いら
れる。（請求項３および請求項４） 特に、上記検出器にインテグレーターなどの記録計を付
設しておくと、検出結果を自動的に記録測定できる利点
がある。上記クロマトグラフィー検出器を付設した場合
には、分離分析が行えるモードは上記〜の８通りの
モードである。
【００２６】また、上記検出手段として、上記クロマト
グラフイー検出器に代えて、質量分析計を用いると、揮
発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相系の分
析、フローインジェクション分析を行うことができる。
（請求項５） 上記質量分析計を付設した場合には、分離分析が行える
モードは上記、10の２通りのモードである。
グラフイー検出器に代えて、質量分析計を用いると、揮
発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相系の分
析、フローインジェクション分析を行うことができる。
（請求項５） 上記質量分析計を付設した場合には、分離分析が行える
モードは上記、10の２通りのモードである。
【００２７】本発明の試料の自動分離装置において、第
一移動相、第二移動相および第三移動相を送液するポン
プは、夫々、各移動相を、所要のカラムに、所定時に所
定量送液することが自動的にでき、多数の分析モードの
自動化を可能とする。詳しくは、第一ポンプにより、い
ずれの分離分析モードを用いる場合も、第一カラムに第
一移動相を送液し、該第一カラムで、試料を目的成分を
含む画分と不要成分とに自動的に分離する前処理を行っ
ている。また、ＨＣ法の分析モードでは、上記第一カラ
ムで分離された目的成分を含む画分を第三カラムへ導入
している。更に、各カラムに第一移動相を導入して、分
析に先立ってカラムのコンデショニングを行わせること
ができる。（請求項６） また、第二ポンプは、ＨＣ法の分析モードでは、第三カ
ラムに分析用の第二移動相を送給している。ＢＦ法の分
析モードでは第一カラムのフロント側に吸着した目的成
分を含む画分を逆方向へ溶出させて、目的成分を含む画
分の拡散を防止しながら第三カラムに導入している。ま
た、ＨＣ法およびＢＦ法に濃縮過程を加える場合には第
二カラムに濃縮用の第二移動相を送液して第二カラムで
目的成分を含む画分の濃縮を行わせている。（請求項
７） また、第三ポンプは、ＨＣ法およびＢＦ法に濃縮過程を
加える分析モードでは、分析カラムに対して第三移動相
を送液している。（請求項８）
一移動相、第二移動相および第三移動相を送液するポン
プは、夫々、各移動相を、所要のカラムに、所定時に所
定量送液することが自動的にでき、多数の分析モードの
自動化を可能とする。詳しくは、第一ポンプにより、い
ずれの分離分析モードを用いる場合も、第一カラムに第
一移動相を送液し、該第一カラムで、試料を目的成分を
含む画分と不要成分とに自動的に分離する前処理を行っ
ている。また、ＨＣ法の分析モードでは、上記第一カラ
ムで分離された目的成分を含む画分を第三カラムへ導入
している。更に、各カラムに第一移動相を導入して、分
析に先立ってカラムのコンデショニングを行わせること
ができる。（請求項６） また、第二ポンプは、ＨＣ法の分析モードでは、第三カ
ラムに分析用の第二移動相を送給している。ＢＦ法の分
析モードでは第一カラムのフロント側に吸着した目的成
分を含む画分を逆方向へ溶出させて、目的成分を含む画
分の拡散を防止しながら第三カラムに導入している。ま
た、ＨＣ法およびＢＦ法に濃縮過程を加える場合には第
二カラムに濃縮用の第二移動相を送液して第二カラムで
目的成分を含む画分の濃縮を行わせている。（請求項
７） また、第三ポンプは、ＨＣ法およびＢＦ法に濃縮過程を
加える分析モードでは、分析カラムに対して第三移動相
を送液している。（請求項８）
【００２８】本発明の試料の自動分離装置は、全自動装
置であるが、試料注入装置として、マニュアルインジェ
クターを第二カラムおよび第三カラムに付設すると、該
マニュアルインジェクターから第二カラム或いは第三カ
ラムに試料を直接注入して、該第二カラムあるいは第三
カラムのクロマトグラムを検出することにより、第二、
第三カラムを装置より抜き取ることなく分離状況の確認
を行うことができるため好ましい。（請求項９、請求項
１０）
置であるが、試料注入装置として、マニュアルインジェ
クターを第二カラムおよび第三カラムに付設すると、該
マニュアルインジェクターから第二カラム或いは第三カ
ラムに試料を直接注入して、該第二カラムあるいは第三
カラムのクロマトグラムを検出することにより、第二、
第三カラムを装置より抜き取ることなく分離状況の確認
を行うことができるため好ましい。（請求項９、請求項
１０）
【００２９】また、本発明の試料の自動分離装置におい
ては、多数の分離分析モードを流路を切り替えて選択し
て行うことより、流路の切り替えが極めて複雑となるた
め、上記バルブとして６方バルブを用いている。６方バ
ルブを用いると、１つのバルブにより複数の流路の切り
替えができ、必要なバルブの設置個数を少なくできる。
（請求項１１） 上記６方バルブとして、第一６方バルブから第六６方バ
ルブの６台の６方バルブを用いると、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを選択して行える試料の自
動分離装置において、バルブの必要個数を６台と極めて
少なくすることができる。（請求項１８） 尚、必ずしも、６台の６方バルブを用いる必要はなく、
第一６方バルブから第六６方バルブのうちの少なくとも
１台の６方バルブを用いて流路切り替えの効率化を図
り、他のバルブをオン・オフバルブ、三方バルブ等の組
み合わせとしても良い事は言うまでもない。（請求項１
２、１３、１４、１５、１６、１７） さらに、上記６方バルブのうち、第三６方バルブには１
組の隣接する２つのポートを常時連通している短絡通路
を設ける構成として、上記１２通りの分離分析モードを
選択して行えるようにしている。（請求項１９）
ては、多数の分離分析モードを流路を切り替えて選択し
て行うことより、流路の切り替えが極めて複雑となるた
め、上記バルブとして６方バルブを用いている。６方バ
ルブを用いると、１つのバルブにより複数の流路の切り
替えができ、必要なバルブの設置個数を少なくできる。
（請求項１１） 上記６方バルブとして、第一６方バルブから第六６方バ
ルブの６台の６方バルブを用いると、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを選択して行える試料の自
動分離装置において、バルブの必要個数を６台と極めて
少なくすることができる。（請求項１８） 尚、必ずしも、６台の６方バルブを用いる必要はなく、
第一６方バルブから第六６方バルブのうちの少なくとも
１台の６方バルブを用いて流路切り替えの効率化を図
り、他のバルブをオン・オフバルブ、三方バルブ等の組
み合わせとしても良い事は言うまでもない。（請求項１
２、１３、１４、１５、１６、１７） さらに、上記６方バルブのうち、第三６方バルブには１
組の隣接する２つのポートを常時連通している短絡通路
を設ける構成として、上記１２通りの分離分析モードを
選択して行えるようにしている。（請求項１９）
【００３０】また、上記装置に、第一カラムに試料を注
入する試料注入装置、好ましくは、オートサンプラーを
取り付け、前以て、試料の自動供給時間、自動供給量を
設定しているため、１回の自動分析が終了すると、２回
目の試料の自動供給を行うことができ、無人化で、連続
して分離分析を行うことができる。（請求項２０、請求
項２１） さらに、上記制御手段を、予め分離手順が入力されたコ
ンピュータにより自動制御しているため、上記選択され
た分離分析モードを全自動、無人化で行うことができ
る。しかも、順次行う複数の分離分析モードを設定して
おくと、夜間等において、必要な複数の分離分析を順次
自動的に行わせておくことが可能となる。（請求項２
２）
入する試料注入装置、好ましくは、オートサンプラーを
取り付け、前以て、試料の自動供給時間、自動供給量を
設定しているため、１回の自動分析が終了すると、２回
目の試料の自動供給を行うことができ、無人化で、連続
して分離分析を行うことができる。（請求項２０、請求
項２１） さらに、上記制御手段を、予め分離手順が入力されたコ
ンピュータにより自動制御しているため、上記選択され
た分離分析モードを全自動、無人化で行うことができ
る。しかも、順次行う複数の分離分析モードを設定して
おくと、夜間等において、必要な複数の分離分析を順次
自動的に行わせておくことが可能となる。（請求項２
２）
【００３１】本発明の請求項１に記載の試料の自動分離
装置では、請求項２３に記載の１０通りの分離分析用モ
ードにおける試料の分離を選択して行うことができる。
上記１０通りの分離分析モードは、自動前処理が必要な
試料の分離分析において必要とされる分析分離モードの
殆ど全てを含み、よって、本発明に係わる１台の装置に
より、自動前処理が必要な分離分析、例えば、生体試料
分析に必要な分離分析を自動的に選択して行うことが可
能となる。（請求項２３） 即ち、基本的なＨＣ法、ＢＦ法のみのカラムスイッチン
グも当然可能であり、かつ、ＨＣ法からＢＦ法への変換
も切り換えもバルブを切り替えるだけで行うことができ
る。さらに、カラムスイッチングを複数回行う応用的カ
ラムスイッチングの場合にも、切り換えるバルブの選定
を変えるだけでできる。したがって、異種カラムスイッ
チング手法を連続的に実行できる。その結果、生体試料
分析をはじめ、環境測定、食品中の目的物の分析の前処
理、分離分析をオンライン化でき、精度、再現性の向上
かつ省力化を図ることができる。尚、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを全て行う構成とすること
に限定されず、少なくとも１以上の分離分析モードをカ
ラムスイッチング法で切り替え、さらに、好ましくは、
選択した分離分析モードを連続して行う事ができる構成
とすれば、本発明の範囲に含まれるものである。（請求
項２３）
装置では、請求項２３に記載の１０通りの分離分析用モ
ードにおける試料の分離を選択して行うことができる。
上記１０通りの分離分析モードは、自動前処理が必要な
試料の分離分析において必要とされる分析分離モードの
殆ど全てを含み、よって、本発明に係わる１台の装置に
より、自動前処理が必要な分離分析、例えば、生体試料
分析に必要な分離分析を自動的に選択して行うことが可
能となる。（請求項２３） 即ち、基本的なＨＣ法、ＢＦ法のみのカラムスイッチン
グも当然可能であり、かつ、ＨＣ法からＢＦ法への変換
も切り換えもバルブを切り替えるだけで行うことができ
る。さらに、カラムスイッチングを複数回行う応用的カ
ラムスイッチングの場合にも、切り換えるバルブの選定
を変えるだけでできる。したがって、異種カラムスイッ
チング手法を連続的に実行できる。その結果、生体試料
分析をはじめ、環境測定、食品中の目的物の分析の前処
理、分離分析をオンライン化でき、精度、再現性の向上
かつ省力化を図ることができる。尚、請求項２３に記載
の１０通りの分離分析モードを全て行う構成とすること
に限定されず、少なくとも１以上の分離分析モードをカ
ラムスイッチング法で切り替え、さらに、好ましくは、
選択した分離分析モードを連続して行う事ができる構成
とすれば、本発明の範囲に含まれるものである。（請求
項２３）
【００３２】請求項２５から請求項２７に記載の装置
は、生体試料分析において最も多用されるＨＣ法とＢＦ
法とをカラムスイッチング法により切り替えて行えるよ
うにしたものである。分離分析モードを上記ＨＣ法とＢ
Ｆ法の２通りとしているため、上記１０通りの分離分離
モードを選択して行える装置に対して、第二カラム、第
三ポンプおよび第二、四、五、六６方バルブを不要と
し、必要な６方バルブを第一６方バルブと第三６方バル
ブの２台とすることができる。よって、試料および移動
相の流路を短くでき、その分、分離分析時間の短縮化が
図れる。
は、生体試料分析において最も多用されるＨＣ法とＢＦ
法とをカラムスイッチング法により切り替えて行えるよ
うにしたものである。分離分析モードを上記ＨＣ法とＢ
Ｆ法の２通りとしているため、上記１０通りの分離分離
モードを選択して行える装置に対して、第二カラム、第
三ポンプおよび第二、四、五、六６方バルブを不要と
し、必要な６方バルブを第一６方バルブと第三６方バル
ブの２台とすることができる。よって、試料および移動
相の流路を短くでき、その分、分離分析時間の短縮化が
図れる。
【００３３】請求項２８および２９に記載の装置は、Ｌ
Ｃ／ＭＳ専用装置であり、上記１０通りの分離分析モー
ドのうちの２通りのＬＣ／ＭＳ直結法による分析モード
が選択して行えるようにしたものである。上記２通りの
分析モードは上記１０通りの分離分析が可能な試料の分
離装置において、質量分析計を付設しても行うことがで
きるが、上記２通りの質量分析のみを行う場合に本装置
が好適に用いられる。本装置は、上記１０通りの分離分
析が行える分離装置において、第一カラムを分離分析カ
ラムとして、第二カラムをトラップカラムとして用いる
ことができるので、選択する分離分析モードに対応して
１台の装置で併用できる。更に、不要となる第三カラム
は、連結管に変えることも可能である。
Ｃ／ＭＳ専用装置であり、上記１０通りの分離分析モー
ドのうちの２通りのＬＣ／ＭＳ直結法による分析モード
が選択して行えるようにしたものである。上記２通りの
分析モードは上記１０通りの分離分析が可能な試料の分
離装置において、質量分析計を付設しても行うことがで
きるが、上記２通りの質量分析のみを行う場合に本装置
が好適に用いられる。本装置は、上記１０通りの分離分
析が行える分離装置において、第一カラムを分離分析カ
ラムとして、第二カラムをトラップカラムとして用いる
ことができるので、選択する分離分析モードに対応して
１台の装置で併用できる。更に、不要となる第三カラム
は、連結管に変えることも可能である。
【００３４】ＬＣ／ＭＳによる分析は、上記したよう
に、揮発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相
系の分析、フローインジェクション分析に用いられる
が、いずれのＬＣ／ＭＳによる分析も本装置を用いてバ
ルブの切り替えのみで対応できる。
に、揮発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相
系の分析、フローインジェクション分析に用いられる
が、いずれのＬＣ／ＭＳによる分析も本装置を用いてバ
ルブの切り替えのみで対応できる。
【００３５】
【実施例】以下、本発明を図面に示す実施例により詳細
に説明する。図１に示す第１実施例の装置は、試料の分
離装置に、溶出液のクロマトグラムを検出する検出器を
付設し、全自動式の高速液体クロマトグラフィー装置と
したものである。上記液体クロマトグラフィー装置は、
前処理用の第一カラムＣ１、分離及び／或いは濃縮用
（以下、濃縮用とのみ略す）の第二カラムＣ２および分
離分析用の第三カラムＣ３の３本のカラムと、第一６方
バルブＶ１から第六６方バルブＶ６からなる６台の６方
バルブと、第一ポンプＰ１から第三ポンプＰ３からなる
３台のポンプと、２台のマニュアルインジェクタ−ＭＩ
１、ＭＩ２と、１台のオートサンプラーＡＳと、１台の
紫外可視線型の検出器ＤＥＴと、該検出器ＤＥＴの検出
結果を記録する記録機（図示せず）を１つの基台上に配
置している。さらに、上記６方バルブＶ１〜Ｖ６、ポン
プＰ１〜Ｐ３およびオートサンプラーＡＳとを自動制御
するコントローラＣＴＲからなる制御手段、該コントロ
ーラＣＴＲに駆動信号を出力するコンピュータＣＰＵ、
該コンピュータにプログラムを入力するキーボードＫＢ
を備え、コントローラ、コンピュータおよびキーボード
は上記基台上に付設しても良いし、あるいは、別に設置
して信号線を介して上記バルブ、ポンプおよびオートサ
プラーと接続しても良い。
に説明する。図１に示す第１実施例の装置は、試料の分
離装置に、溶出液のクロマトグラムを検出する検出器を
付設し、全自動式の高速液体クロマトグラフィー装置と
したものである。上記液体クロマトグラフィー装置は、
前処理用の第一カラムＣ１、分離及び／或いは濃縮用
（以下、濃縮用とのみ略す）の第二カラムＣ２および分
離分析用の第三カラムＣ３の３本のカラムと、第一６方
バルブＶ１から第六６方バルブＶ６からなる６台の６方
バルブと、第一ポンプＰ１から第三ポンプＰ３からなる
３台のポンプと、２台のマニュアルインジェクタ−ＭＩ
１、ＭＩ２と、１台のオートサンプラーＡＳと、１台の
紫外可視線型の検出器ＤＥＴと、該検出器ＤＥＴの検出
結果を記録する記録機（図示せず）を１つの基台上に配
置している。さらに、上記６方バルブＶ１〜Ｖ６、ポン
プＰ１〜Ｐ３およびオートサンプラーＡＳとを自動制御
するコントローラＣＴＲからなる制御手段、該コントロ
ーラＣＴＲに駆動信号を出力するコンピュータＣＰＵ、
該コンピュータにプログラムを入力するキーボードＫＢ
を備え、コントローラ、コンピュータおよびキーボード
は上記基台上に付設しても良いし、あるいは、別に設置
して信号線を介して上記バルブ、ポンプおよびオートサ
プラーと接続しても良い。
【００３６】上記第一ポンプＰ１は図２以下において図
中太実線で流れを示す第一移動相１０を送液するもので
あり、第二ポンプＰ２は図中太点線で示す第二移動相２
０を送液するものであり、第三ポンプＰ３は図中太一点
鎖線で示す第三移動相３０を送液するものである。
中太実線で流れを示す第一移動相１０を送液するもので
あり、第二ポンプＰ２は図中太点線で示す第二移動相２
０を送液するものであり、第三ポンプＰ３は図中太一点
鎖線で示す第三移動相３０を送液するものである。
【００３７】上記第一移動相１０は前処理用の第一カラ
ムＣ１に送液され、該第一カラムＣ１で、試料を目的成
分と不要成分とに分離する溶離液である。上記第二移動
相２０はＨＣ法あるいはＢＦ法を用いる場合は、分析用
の第三カラムＣ３に送液され、該第三カラムＣ３に捕捉
された目的成分を分離する溶離液である。また、ＨＣ法
あるいはＢＦ法に濃縮過程を加える分析モードでは第二
カラムＣ２で目的成分を濃縮する液である。上記第三移
動相３０はＨＣ法あるいはＢＦ法に濃縮過程を加える分
析モードで、第三カラムＣ３に捕捉された目的成分を分
離する溶離液である。
ムＣ１に送液され、該第一カラムＣ１で、試料を目的成
分と不要成分とに分離する溶離液である。上記第二移動
相２０はＨＣ法あるいはＢＦ法を用いる場合は、分析用
の第三カラムＣ３に送液され、該第三カラムＣ３に捕捉
された目的成分を分離する溶離液である。また、ＨＣ法
あるいはＢＦ法に濃縮過程を加える分析モードでは第二
カラムＣ２で目的成分を濃縮する液である。上記第三移
動相３０はＨＣ法あるいはＢＦ法に濃縮過程を加える分
析モードで、第三カラムＣ３に捕捉された目的成分を分
離する溶離液である。
【００３８】上記カラムＣ１〜Ｃ３、６方バルブＶ１〜
Ｖ６等は、図１において実線で示すように配管ｔ１〜ｔ
２０で連結している。これら配管ｔ１〜ｔ２０として
は、内径０.１mm〜１.０mmの任意のステンレス細管等を
用いることが出来るが、０.１mm〜０.５mmの内径のもの
が好ましい。
Ｖ６等は、図１において実線で示すように配管ｔ１〜ｔ
２０で連結している。これら配管ｔ１〜ｔ２０として
は、内径０.１mm〜１.０mmの任意のステンレス細管等を
用いることが出来るが、０.１mm〜０.５mmの内径のもの
が好ましい。
【００３９】上記６方バルブは、従来公知の６方バルブ
と同様の構成で、夫々独立した６個のポートａ〜ｆを備
え、ポートａ−ｂ、ｃ−ｄ、ｅ−ｆとが連通する状態１
と、ｂ−ｃ、ｄ−ｅ、ｆ−ａとが連通する状態２とに自
動切り替えされるものである。これらバルブの切り替え
は、予めコンピュータに入力されたプログラムに基づ
き、コンピュータよりコントローラＣＲＴへ出力された
信号に従い、コントローラにより駆動されて自動切換動
作される。
と同様の構成で、夫々独立した６個のポートａ〜ｆを備
え、ポートａ−ｂ、ｃ−ｄ、ｅ−ｆとが連通する状態１
と、ｂ−ｃ、ｄ−ｅ、ｆ−ａとが連通する状態２とに自
動切り替えされるものである。これらバルブの切り替え
は、予めコンピュータに入力されたプログラムに基づ
き、コンピュータよりコントローラＣＲＴへ出力された
信号に従い、コントローラにより駆動されて自動切換動
作される。
【００４０】上記第一６方バルブＶ１は、そのポート１
ｅには配管ｔ１を接続し、該配管ｔ１に試料導入用のオ
ートサンプラーＡＳを接続し、その上流に第一移動相１
０を送給する第一ポンプＰ１を接続している。また、第
一６方バルブＶ１のポート１ｆを第一カラムＣ１の一端
ポートに配管ｔ２を介して接続し、ポート１ｃを第一カ
ラムＣ１の他端ポートに配管ｔ３を介して接続し、ポー
ト１ｄを第三６方バルブＶ３のポート３ｄと配管ｔ４を
介して接続し、ポート１ａを第三６方バルブＶ３のポー
ト３ｂに配管ｔ６を介して接続し、ポート１ｂを第二６
方バルブＶ２のポート２ａに配管ｔ５を介して接続して
いる。
ｅには配管ｔ１を接続し、該配管ｔ１に試料導入用のオ
ートサンプラーＡＳを接続し、その上流に第一移動相１
０を送給する第一ポンプＰ１を接続している。また、第
一６方バルブＶ１のポート１ｆを第一カラムＣ１の一端
ポートに配管ｔ２を介して接続し、ポート１ｃを第一カ
ラムＣ１の他端ポートに配管ｔ３を介して接続し、ポー
ト１ｄを第三６方バルブＶ３のポート３ｄと配管ｔ４を
介して接続し、ポート１ａを第三６方バルブＶ３のポー
ト３ｂに配管ｔ６を介して接続し、ポート１ｂを第二６
方バルブＶ２のポート２ａに配管ｔ５を介して接続して
いる。
【００４１】上記第二６方バルブＶ２は、そのポート２
ｂを第二ポンプＰ２に配管ｔ７を介して接続し、ポート
２ｃは配管ｔ８の一端と接続し、該配管ｔ８を分岐し、
分岐管ｔ８ー１を第二カラムＣ２に接続する一方、分岐
管ｔ８ー２を第四６方バルブＶ４のポート４ｆと接続し
ている。
ｂを第二ポンプＰ２に配管ｔ７を介して接続し、ポート
２ｃは配管ｔ８の一端と接続し、該配管ｔ８を分岐し、
分岐管ｔ８ー１を第二カラムＣ２に接続する一方、分岐
管ｔ８ー２を第四６方バルブＶ４のポート４ｆと接続し
ている。
【００４２】上記第三６方バルブＶ３は、そのポート３
ａを配管ｔ９を介して第五６方バルブＶ５のポート５ｂ
と接続し、ポート３ｃを配管ｔ１０を介して第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｅと接続している。また、ポート３
ｅと３ｆには短絡通路３ｇを設け、バルブの切換動作に
係からず、ポート３ｅと３ｆとを常時連通させている。
ａを配管ｔ９を介して第五６方バルブＶ５のポート５ｂ
と接続し、ポート３ｃを配管ｔ１０を介して第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｅと接続している。また、ポート３
ｅと３ｆには短絡通路３ｇを設け、バルブの切換動作に
係からず、ポート３ｅと３ｆとを常時連通させている。
【００４３】上記第四６方バルブＶ４は、そのポート４
ａを配管ｔ１１を介して第五６方バルブＶ５のポート５
ｆと接続し、ポート４ｂを配管ｔ１２を介して第三ポン
プＰ３に接続し、ポート４ｃを配管ｔ１３を介して第一
マニュアルインジェクターＭＩ１を介して第二カラムＣ
２の一端ポートに接続している。該第二カラムＣ２の他
端ポートには前記したように分岐管ｔ８−１を接続して
いる。また、ポート４ｄを配管ｔ１９を介して廃棄部
（図示せず）と接続している。
ａを配管ｔ１１を介して第五６方バルブＶ５のポート５
ｆと接続し、ポート４ｂを配管ｔ１２を介して第三ポン
プＰ３に接続し、ポート４ｃを配管ｔ１３を介して第一
マニュアルインジェクターＭＩ１を介して第二カラムＣ
２の一端ポートに接続している。該第二カラムＣ２の他
端ポートには前記したように分岐管ｔ８−１を接続して
いる。また、ポート４ｄを配管ｔ１９を介して廃棄部
（図示せず）と接続している。
【００４４】上記第五６方バルブＶ５は、そのポート５
ａを第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラム
Ｃ３を介してポート５ｄに配管ｔ１４を介して接続し、
ポート５ｃを配管ｔ１５を介して第六６方バルブＶ６の
ポート６ｆに接続し、ポート５ｅを配管ｔ１６を介して
第六６方バルブＶ６のポート６ｄに接続している。上記
カラムの入口に取り付ける第一および第二マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、ＭＩ２は、各カラムの分離状況を
容易に把握出来るように設けている。
ａを第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラム
Ｃ３を介してポート５ｄに配管ｔ１４を介して接続し、
ポート５ｃを配管ｔ１５を介して第六６方バルブＶ６の
ポート６ｆに接続し、ポート５ｅを配管ｔ１６を介して
第六６方バルブＶ６のポート６ｄに接続している。上記
カラムの入口に取り付ける第一および第二マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、ＭＩ２は、各カラムの分離状況を
容易に把握出来るように設けている。
【００４５】上記第六６方バルブＶ６は、そのポート６
ａ、６ｃを配管ｔ１７、ｔ１８を介して廃棄部（図示せ
ず）と接続し、ポート６ｅを配管ｔ２０を介して検出器
ＤＥＴと接続している。尚、上記廃棄部へ接続する配管
ｔ１７〜１９には、カラムスイッチングに伴うカラム圧
の変動を防ぐために、任意の背圧を設定できるレデュー
シングバルブ（図示せず）を取り付けているのが望まし
い。
ａ、６ｃを配管ｔ１７、ｔ１８を介して廃棄部（図示せ
ず）と接続し、ポート６ｅを配管ｔ２０を介して検出器
ＤＥＴと接続している。尚、上記廃棄部へ接続する配管
ｔ１７〜１９には、カラムスイッチングに伴うカラム圧
の変動を防ぐために、任意の背圧を設定できるレデュー
シングバルブ（図示せず）を取り付けているのが望まし
い。
【００４６】上記のように、第一移動相１０を送給する
第一ポンプＰ１は配管ｔ１を介して第一６方バルブＶ１
に接続し、第二移動相２０を送給する第二ポンプＰ２は
配管ｔ７を介して第二６方バルブＶ２に接続し、第三移
動相３０を送給する第三ポンプＰ３は配管ｔ１２を介し
て第四６方バルブＶ４に接続している。
第一ポンプＰ１は配管ｔ１を介して第一６方バルブＶ１
に接続し、第二移動相２０を送給する第二ポンプＰ２は
配管ｔ７を介して第二６方バルブＶ２に接続し、第三移
動相３０を送給する第三ポンプＰ３は配管ｔ１２を介し
て第四６方バルブＶ４に接続している。
【００４７】上記分離装置にクロマトグラフィー検出器
を付設した構成からなる高速液体クロマトグラフ装置で
選択して行なうことが出来る分離分析モードは下記の８
通りである。 ＨＣ法 ＢＦ法 ＨＣ法に濃縮を加えた方法 ＢＦ法に濃縮を加えた方法 第一カラムＣ１での分離状況の確認 第二カラムＣ２での分離状況の確認 第三カラムＣ３での分離状況の確認 複数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分
離分析モード からなる上記〜の各分析モードを、生体試料の場合
について、下記に詳述する。
を付設した構成からなる高速液体クロマトグラフ装置で
選択して行なうことが出来る分離分析モードは下記の８
通りである。 ＨＣ法 ＢＦ法 ＨＣ法に濃縮を加えた方法 ＢＦ法に濃縮を加えた方法 第一カラムＣ１での分離状況の確認 第二カラムＣ２での分離状況の確認 第三カラムＣ３での分離状況の確認 複数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分
離分析モード からなる上記〜の各分析モードを、生体試料の場合
について、下記に詳述する。
【００４８】まず、上記のＨＣ法は、前記したよう
に、前処理用の第一カラムＣ１において、目的成分ピー
クのみカッティングし、第一カラムＣ１に導入する第一
移動相で分析用の第三カラムＣ３に導入する方法であ
る。該ＨＣ法では、前処理用の第一カラムＣ１と分析用
の第三カラムＣ３の２本のカラムを用い、濃縮用の第二
カラムＣ２は使用しない。
に、前処理用の第一カラムＣ１において、目的成分ピー
クのみカッティングし、第一カラムＣ１に導入する第一
移動相で分析用の第三カラムＣ３に導入する方法であ
る。該ＨＣ法では、前処理用の第一カラムＣ１と分析用
の第三カラムＣ３の２本のカラムを用い、濃縮用の第二
カラムＣ２は使用しない。
【００４９】前処理用の第一カラムＣ１としては、生体
試料の場合、サイズ排除（ＧＰＣ）カラム、内面逆相
（ＩＳＲＰ）カラム等の制限浸透型カラムが用いられ
る。これらのカラムでは、生体試料中のタンパク成分、
イオン性および高極性物質がほとんど保持されず溶出す
る。これらの成分と分離された薬物および代謝物画分
(ＨＣ画分)を、分析用の第三カラムＣ３へ導入し、分離
定量している。尚、上記内面逆層（ＩＳＲＰ）カラムで
保持しにくい場合は、サイズ排除（ＧＰＣ）カラムも適
用できる。
試料の場合、サイズ排除（ＧＰＣ）カラム、内面逆相
（ＩＳＲＰ）カラム等の制限浸透型カラムが用いられ
る。これらのカラムでは、生体試料中のタンパク成分、
イオン性および高極性物質がほとんど保持されず溶出す
る。これらの成分と分離された薬物および代謝物画分
(ＨＣ画分)を、分析用の第三カラムＣ３へ導入し、分離
定量している。尚、上記内面逆層（ＩＳＲＰ）カラムで
保持しにくい場合は、サイズ排除（ＧＰＣ）カラムも適
用できる。
【００５０】上記ＨＣ法を用いる分析モードを図２およ
び図３を参照して説明する。尚、以下の説明において、
前記したように、第一から第六の６方バルＶ１〜Ｖ６に
各ポートが、夫々、ポートａとｂ、ｃとｄ、ｅとｆが連
通する状態を状態１とし、ｂとｃ、ｄとｅ、ｆとａが連
通する状態を状態２と称する。また、図面中において、
連通したポートを細実線で結び、連通していないポート
は線で結んでいない。
び図３を参照して説明する。尚、以下の説明において、
前記したように、第一から第六の６方バルＶ１〜Ｖ６に
各ポートが、夫々、ポートａとｂ、ｃとｄ、ｅとｆが連
通する状態を状態１とし、ｂとｃ、ｄとｅ、ｆとａが連
通する状態を状態２と称する。また、図面中において、
連通したポートを細実線で結び、連通していないポート
は線で結んでいない。
【００５１】(１)まず、コントローラＣＴＲからの信号
で、第一から第六の６方バルブＶ１〜Ｖ６を図２に示す
初期状態とする。該初期状態では、第四６方バルブＶ４
のみ状態２とし、他の６方バルブは状態１となる。ま
ず、第一移動相１０を図２中で太実線で示すように、第
一ポンプＰ１、オートサンプラＡＳ、第一バルブＶ１を
経て前処理用の第一カラムＣ１に送液する。詳しくは、
第一移動相１０は配管ｔ１、第一バルブＶ１のポート１
ｅ→１f、配管ｔ２を通り、前処理用の第一カラム１Ｃ
１に導入され、第一移動相１０により第一カラムＣ１を
コンディショニングする。
で、第一から第六の６方バルブＶ１〜Ｖ６を図２に示す
初期状態とする。該初期状態では、第四６方バルブＶ４
のみ状態２とし、他の６方バルブは状態１となる。ま
ず、第一移動相１０を図２中で太実線で示すように、第
一ポンプＰ１、オートサンプラＡＳ、第一バルブＶ１を
経て前処理用の第一カラムＣ１に送液する。詳しくは、
第一移動相１０は配管ｔ１、第一バルブＶ１のポート１
ｅ→１f、配管ｔ２を通り、前処理用の第一カラム１Ｃ
１に導入され、第一移動相１０により第一カラムＣ１を
コンディショニングする。
【００５２】第一カラムＣ１から溶出した第一移動相１
０は配管ｔ３、第一バルブＶ１のポート１c→１d、配管
ｔ４、第三バルブＶ３のポート３d→３c、配管ｔ１０、
第四バルブＶ４のポート４e→４d、配管ｔ１９を経て廃
液部へ排出される。ついで、試料をオートサンプラーＡ
Ｓから注入し、第一バルブＶ１を経て第一カラムＣ１に
導入する。該第一カラムＣ１より目的成分が溶出する前
までの不要成分は、上記第一移動相１０の流路を経て廃
液部へ排出される。
０は配管ｔ３、第一バルブＶ１のポート１c→１d、配管
ｔ４、第三バルブＶ３のポート３d→３c、配管ｔ１０、
第四バルブＶ４のポート４e→４d、配管ｔ１９を経て廃
液部へ排出される。ついで、試料をオートサンプラーＡ
Ｓから注入し、第一バルブＶ１を経て第一カラムＣ１に
導入する。該第一カラムＣ１より目的成分が溶出する前
までの不要成分は、上記第一移動相１０の流路を経て廃
液部へ排出される。
【００５３】同時に、第二ポンプ２Ｐ２から第二移動相
２０を図２中で太点線で示すように、第二バルブＶ２、
第一バルブＶ１、第三バルブＶ３、第五バルブＶ５を経
て分析用の第三カラムＣ３に送液する。詳しくは、第二
ポンプＰ２より配管ｔ７、第二バルブＶ２のポート２b
→２a、配管ｔ５、第一バルブＶ１のポート１b→１a、
配管ｔ６、第三バルブＶ３のポート３ｂ→３a、配管ｔ
９、第五バルブＶ５のポート５b→５a、配管ｔ１４、第
二マニュアルインジェクターＭＩ２を経て第三カラムＣ
３へ導入される。
２０を図２中で太点線で示すように、第二バルブＶ２、
第一バルブＶ１、第三バルブＶ３、第五バルブＶ５を経
て分析用の第三カラムＣ３に送液する。詳しくは、第二
ポンプＰ２より配管ｔ７、第二バルブＶ２のポート２b
→２a、配管ｔ５、第一バルブＶ１のポート１b→１a、
配管ｔ６、第三バルブＶ３のポート３ｂ→３a、配管ｔ
９、第五バルブＶ５のポート５b→５a、配管ｔ１４、第
二マニュアルインジェクターＭＩ２を経て第三カラムＣ
３へ導入される。
【００５４】第三カラムＣ３から第二移動相２０は、第
五バルブＶ５のポート５d→５c、配管ｔ１５、第六バル
ブＶ６のポート６f→６e、配管ｔ２０を通り、検出器Ｄ
ＥＴを経て廃液部に排出される。尚、第三ポンプＰ３は
休止している。
五バルブＶ５のポート５d→５c、配管ｔ１５、第六バル
ブＶ６のポート６f→６e、配管ｔ２０を通り、検出器Ｄ
ＥＴを経て廃液部に排出される。尚、第三ポンプＰ３は
休止している。
【００５５】(２)ついで、図３に示すように、目的成分
を含む画分が前処理用の第一カラムＣ１から溶出する直
前に、第三６方バルブＶ３を切り替え、状態２にする。
この状態とすることで、第一ポンプＰ１から送液する第
一移動相１０で、図３中で太実線で示すように、第一カ
ラムＣ１から目的成分を分析用の第三カラムＣ３に導入
する。即ち、第一移動相１０は第一ポンプＰ１からオー
トサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポ
ート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ
３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３e、短絡通路３
ｅ→３ｆ、３f→３a、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５の
ポート５b→５a、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェ
クターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５の
ポート５d→５c、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６f→６e、検出器ＤＥＴを流れる。よって、この第
一移動相１０により目的成分は第一カラムＣ１から第三
カラムＣ３へ導入される。
を含む画分が前処理用の第一カラムＣ１から溶出する直
前に、第三６方バルブＶ３を切り替え、状態２にする。
この状態とすることで、第一ポンプＰ１から送液する第
一移動相１０で、図３中で太実線で示すように、第一カ
ラムＣ１から目的成分を分析用の第三カラムＣ３に導入
する。即ち、第一移動相１０は第一ポンプＰ１からオー
トサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポ
ート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ
３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３e、短絡通路３
ｅ→３ｆ、３f→３a、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５の
ポート５b→５a、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェ
クターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５の
ポート５d→５c、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６f→６e、検出器ＤＥＴを流れる。よって、この第
一移動相１０により目的成分は第一カラムＣ１から第三
カラムＣ３へ導入される。
【００５６】この時、第二ポンプＰ２から送液される第
二移動相２０は用いないので、第二移動相２０は、図３
中で太点線で示すように、第二６方バルブＶ２のポート
２b→２a、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１b
→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→
３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→
４ｄ、配管ｔ１９を経て廃液部へ排出される。
二移動相２０は用いないので、第二移動相２０は、図３
中で太点線で示すように、第二６方バルブＶ２のポート
２b→２a、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１b
→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→
３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→
４ｄ、配管ｔ１９を経て廃液部へ排出される。
【００５７】(３)目的成分を含む画分が全て第三カラム
Ｃ３へ到達した後、再び第三６方バルブＶ３を切り替
え、状態１に戻し、図２の状態とする。第二ポンプＰ２
から送液される第二移動相２０は前述の(１)の太点線で
示す流路を経て、第三カラムＣ３へ至り、目的成分は第
三カラムＣ３中で第二移動相２０により分離分析され、
第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、
第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を
経て検出器ＤＥＴに導入される。上記検出器ＤＥＴには
インテグレーター(記録機)を接続しているので、第三カ
ラムＣ３のクロマトグラムが得られる。
Ｃ３へ到達した後、再び第三６方バルブＶ３を切り替
え、状態１に戻し、図２の状態とする。第二ポンプＰ２
から送液される第二移動相２０は前述の(１)の太点線で
示す流路を経て、第三カラムＣ３へ至り、目的成分は第
三カラムＣ３中で第二移動相２０により分離分析され、
第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、
第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を
経て検出器ＤＥＴに導入される。上記検出器ＤＥＴには
インテグレーター(記録機)を接続しているので、第三カ
ラムＣ３のクロマトグラムが得られる。
【００５８】上記分析にかかる時間は、上記（１）の動
作が分析開始から４.５分、（２）の動作が分析開始後
の４.５〜７分、（３）の動作が分析開始後の７分から
始まり、それに併せて６方バルブの切り替えを行うよう
にタイムプログラムを設定しており、予め設定した時間
に切り替え信号を送ることにより、分析開始から分析終
了までを自動制御で行っている。
作が分析開始から４.５分、（２）の動作が分析開始後
の４.５〜７分、（３）の動作が分析開始後の７分から
始まり、それに併せて６方バルブの切り替えを行うよう
にタイムプログラムを設定しており、予め設定した時間
に切り替え信号を送ることにより、分析開始から分析終
了までを自動制御で行っている。
【００５９】
【実験例１】試料に(5R,6S)-6-[(R)-1-ヒドロキシエチ
ル］-2-(3-ピリジル)-2-ペネム-3-カルボキシリックア
シッド(以下、化合物Ａと称す)を用いて、上記のＨＣ
法で分析した。分析条件を下記の表１に示す。
ル］-2-(3-ピリジル)-2-ペネム-3-カルボキシリックア
シッド(以下、化合物Ａと称す)を用いて、上記のＨＣ
法で分析した。分析条件を下記の表１に示す。
【００６０】
【表１】
【００６１】上記試料は、上記化合物Ａを約１mgを精秤
し、１ｍｏｌ／ｌＭＯＰＳ緩衝液(pＨ５)で１mg／mlに
調製した。これを１ＭＭＯＰＳ緩衝液で５および１０μ
g／mlに希釈した。ラットの血漿を０.４５μmのメンブ
ランフィルターでろ過した後、化合物Ａを１０μg／ml
溶液と等量混合し、添加試料とした(血漿中濃度１０μg
／ml相当)。また、ろ過した血漿と１ＭＭＯＰＳ溶液と
等量混合したものをコントロールプラズマとして調製し
た。本装置において、前処理用の第一カラムＣ１にはＧ
ＰＣカラムを用い、分析用の第三カラムＣ３にはＯＤＳ
カラムを用いた。
し、１ｍｏｌ／ｌＭＯＰＳ緩衝液(pＨ５)で１mg／mlに
調製した。これを１ＭＭＯＰＳ緩衝液で５および１０μ
g／mlに希釈した。ラットの血漿を０.４５μmのメンブ
ランフィルターでろ過した後、化合物Ａを１０μg／ml
溶液と等量混合し、添加試料とした(血漿中濃度１０μg
／ml相当)。また、ろ過した血漿と１ＭＭＯＰＳ溶液と
等量混合したものをコントロールプラズマとして調製し
た。本装置において、前処理用の第一カラムＣ１にはＧ
ＰＣカラムを用い、分析用の第三カラムＣ３にはＯＤＳ
カラムを用いた。
【００６２】まず、図２に示す上記（１）の状態とし
て、血漿試料を注入後、４.５分まで前処理用の第一カ
ラムＣ１においてタンパクなどの高分子物質を溶出させ
た(図２、太実線)。その間、分析用の第三カラムＣ３に
は第二ポンプＰ２より第二移動相２０を送液した(図
２、太点線)。ついで、注入後４.５〜７.０分に、図３
に示す上記（２）の状態に切り替え、第一カラムＣ１と
第三カラムＣ３を接続し、７分後、再びバルブ３を切り
替えて第三カラムＣ３において分離定量を行った(図
３、太実線)。
て、血漿試料を注入後、４.５分まで前処理用の第一カ
ラムＣ１においてタンパクなどの高分子物質を溶出させ
た(図２、太実線)。その間、分析用の第三カラムＣ３に
は第二ポンプＰ２より第二移動相２０を送液した(図
２、太点線)。ついで、注入後４.５〜７.０分に、図３
に示す上記（２）の状態に切り替え、第一カラムＣ１と
第三カラムＣ３を接続し、７分後、再びバルブ３を切り
替えて第三カラムＣ３において分離定量を行った(図
３、太実線)。
【００６３】上記分析モードで得られた上記化合物Ａの
クロマトグラムを図４に示す。カラムスイッチングによ
る分析効率、ピーク形状に及ぼす効果を比較するため
に、本装置を用いて得られたクロマトグラムと分析用の
第三カラムＣ３のみで得られたクロマトグラムのみかけ
のピークシャープ性、ピーク対称性、ピークシャープ性
を比較した。みかけのピークシャープ性、ピーク対称
性、ピークシャープ性を表すパラメーターを以下の計算
式を用いた算出した。即ち、図１６を参照して説明する
と、 みかけのピークシャープ性＝１６×(tR／tW)2 (tR:保持時間(分)、tW:ピーク幅(分) ピーク対称性＝b／a ピークシャープ性＝Ｈ／ＷH/2 (Ｈ:ピーク高さ、
ＷH/2:半値幅）
クロマトグラムを図４に示す。カラムスイッチングによ
る分析効率、ピーク形状に及ぼす効果を比較するため
に、本装置を用いて得られたクロマトグラムと分析用の
第三カラムＣ３のみで得られたクロマトグラムのみかけ
のピークシャープ性、ピーク対称性、ピークシャープ性
を比較した。みかけのピークシャープ性、ピーク対称
性、ピークシャープ性を表すパラメーターを以下の計算
式を用いた算出した。即ち、図１６を参照して説明する
と、 みかけのピークシャープ性＝１６×(tR／tW)2 (tR:保持時間(分)、tW:ピーク幅(分) ピーク対称性＝b／a ピークシャープ性＝Ｈ／ＷH/2 (Ｈ:ピーク高さ、
ＷH/2:半値幅）
【００６４】上記ＨＣ法の分離分析モードを本装置で
行った場合におけるピーク面積は、第三カラムＣ３だけ
を用いて単独で分析した場合と同じピーク面積が得られ
た。また、本装置と第三カラムＣ３だけを用いた場合に
おけるクロマトグラムの評価の結果を下記の表２に示
す。
行った場合におけるピーク面積は、第三カラムＣ３だけ
を用いて単独で分析した場合と同じピーク面積が得られ
た。また、本装置と第三カラムＣ３だけを用いた場合に
おけるクロマトグラムの評価の結果を下記の表２に示
す。
【００６５】
【表２】
【００６６】第１実施例の本発明の装置を用いた場合
は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合に比べて、みか
けのピークシャープ性は５５倍、ピークのシャープ性は
５倍の値を示し、良好な効果を示した。
は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合に比べて、みか
けのピークシャープ性は５５倍、ピークのシャープ性は
５倍の値を示し、良好な効果を示した。
【００６７】次に、上記のＢＦ法について説明する。
ＢＦ法はＨＣ法と同様に、前処理カラムの第一カラムＣ
１と分析カラムの第三カラムＣ３の２本のカラムを用
い、濃縮用の第二カラムＣ２は用いない。
ＢＦ法はＨＣ法と同様に、前処理カラムの第一カラムＣ
１と分析カラムの第三カラムＣ３の２本のカラムを用
い、濃縮用の第二カラムＣ２は用いない。
【００６８】上記ＢＦ法を用いる分析モードを図５およ
び図６を参照して説明する。 （１)まず、図５に示す初期状態では、第一、第二、第
三、第五、第六６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ５、Ｖ
６を状態１とし、第四６方バルブＶ４のみを状態２とす
る。第一ポンプＰ１から第一移動相１０を、図５中に太
実線で示すように、第一バルブＶ１を通して第一カラム
Ｃ１に送液した後、廃液している。即ち、第一移動相１
０をオートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１e→１f、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配
管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１c→１d、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３c、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４e→４ｄ、配管ｔ１
９を通して廃液部へ排出している。
び図６を参照して説明する。 （１)まず、図５に示す初期状態では、第一、第二、第
三、第五、第六６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ５、Ｖ
６を状態１とし、第四６方バルブＶ４のみを状態２とす
る。第一ポンプＰ１から第一移動相１０を、図５中に太
実線で示すように、第一バルブＶ１を通して第一カラム
Ｃ１に送液した後、廃液している。即ち、第一移動相１
０をオートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１e→１f、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配
管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１c→１d、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３c、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４e→４ｄ、配管ｔ１
９を通して廃液部へ排出している。
【００６９】第一カラムＣ１から溶出する不要成分は、
上記第一移動相１０により、上記流路により排出され
る。目的成分は第一カラムＣ１のフロント側（上流側）
に保持されたままの状態である。同時に、第二ポンプＰ
２から第二移動相２０を図５中に太点線で示すように、
第二６方バルブＶ２、第一６方バルブＶ１、第三６方バ
ルブＶ３、第五６方バルブＶ５を経て第三カラムＣ３に
送液し、第三カラムＣ３をコンデショニングした後、第
五６方バルブＶ５、第六６方バルブＶ６を通して排出し
ている。即ち、第二移動相２０を第二ポンプＰ２より、
配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２b→２a、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１b→１a、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３b→３a、配管ｔ９、
第五６方バルブＶ５のポート５b→５a、配管ｔ１４、第
二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に
至り、第三カラムＣ３をコンディショニングした後、第
五６方バルブＶ５のポート５d→５c、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６f→６e、配管ｔ２０、検出器
ＤＥＴを経て廃液に排出される。
上記第一移動相１０により、上記流路により排出され
る。目的成分は第一カラムＣ１のフロント側（上流側）
に保持されたままの状態である。同時に、第二ポンプＰ
２から第二移動相２０を図５中に太点線で示すように、
第二６方バルブＶ２、第一６方バルブＶ１、第三６方バ
ルブＶ３、第五６方バルブＶ５を経て第三カラムＣ３に
送液し、第三カラムＣ３をコンデショニングした後、第
五６方バルブＶ５、第六６方バルブＶ６を通して排出し
ている。即ち、第二移動相２０を第二ポンプＰ２より、
配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２b→２a、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１b→１a、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３b→３a、配管ｔ９、
第五６方バルブＶ５のポート５b→５a、配管ｔ１４、第
二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に
至り、第三カラムＣ３をコンディショニングした後、第
五６方バルブＶ５のポート５d→５c、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６f→６e、配管ｔ２０、検出器
ＤＥＴを経て廃液に排出される。
【００７０】(２)上記(１)の動作において第一カラムＣ
１より不要成分の溶出が完了すると同時に、第一６方バ
ルブＶ１を状態２に切り替えて、図６の状態とする。第
二ポンプＰ２より送液する第二移動相２０の流路を図６
中で太点線で示すように切り替え、第二移動相２０を第
一カラムＣ１から第三カラムＣ３へと導入して、第一カ
ラムＣ１のフロント側に保持されている目的成分を第二
移動相２０により第三カラムＣ３に導入する。
１より不要成分の溶出が完了すると同時に、第一６方バ
ルブＶ１を状態２に切り替えて、図６の状態とする。第
二ポンプＰ２より送液する第二移動相２０の流路を図６
中で太点線で示すように切り替え、第二移動相２０を第
一カラムＣ１から第三カラムＣ３へと導入して、第一カ
ラムＣ１のフロント側に保持されている目的成分を第二
移動相２０により第三カラムＣ３に導入する。
【００７１】即ち、第二移動相２０を第二ポンプＰ２よ
り、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２b→２
ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１
ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管ｔ２、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブ
Ｖ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュアル
インジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至る。この第
二移動相２０の移動で、第一カラムＣ１に保持された目
的成分を第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入され
る。さらに、第二移動相２０は第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出器ＤＥＴへ送液
される。上記過程で、第二移動相２０は第一カラムＣ１
を逆方向に流れ、第一カラムＣ１のフロントに保持され
た目的成分を拡散することなく第三カラムＣ３へ導入す
る。
り、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２b→２
ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１
ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管ｔ２、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブ
Ｖ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュアル
インジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至る。この第
二移動相２０の移動で、第一カラムＣ１に保持された目
的成分を第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入され
る。さらに、第二移動相２０は第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出器ＤＥＴへ送液
される。上記過程で、第二移動相２０は第一カラムＣ１
を逆方向に流れ、第一カラムＣ１のフロントに保持され
た目的成分を拡散することなく第三カラムＣ３へ導入す
る。
【００７２】(３)目的成分を含む画分が全て第三カラム
Ｃ３へ導入された後、再び、第一６方バルブＶ１を状態
１に戻し、図５に示す状態とする。第三カラムＣ３に
は、第二移動相２０が前述の（１）の太点線で示す流路
により送液され、該第二移動相２０により第三カラムＣ
３に導入されている目的成分が分離分析される。第二移
動相２０が第三カラムＣ３より第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を通って検出器ＤＥＴに導
入されることより、第三カラムＣ３の分離分析状態が検
出器ＤＥＴで常時検出され、目的成分のクロマトグラム
が得られる。この時、第一カラムＣ１には第一移動相１
０が第一ポンプＰ１より太実線で示すように送液され
て、次の分析のために第一カラムＣ１のコンディショニ
ングを行う。
Ｃ３へ導入された後、再び、第一６方バルブＶ１を状態
１に戻し、図５に示す状態とする。第三カラムＣ３に
は、第二移動相２０が前述の（１）の太点線で示す流路
により送液され、該第二移動相２０により第三カラムＣ
３に導入されている目的成分が分離分析される。第二移
動相２０が第三カラムＣ３より第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２０を通って検出器ＤＥＴに導
入されることより、第三カラムＣ３の分離分析状態が検
出器ＤＥＴで常時検出され、目的成分のクロマトグラム
が得られる。この時、第一カラムＣ１には第一移動相１
０が第一ポンプＰ１より太実線で示すように送液され
て、次の分析のために第一カラムＣ１のコンディショニ
ングを行う。
【００７３】
【実験例２】試料に4-(4-アミジノベンゾイルグリシル)
-2-オキソピペラジン-1,3-ジアセチックアシッド（以
下、化合物Ｂと称す）を用いて、上記のＢＦ法で分析
を行った。分析条件を前記表１に示す。試料は上記化合
物Ｂを約１mgを精秤し、０.０２Ｍリン酸−カリウム水
溶液(ｐＨ３.５)で１mg／kgに調製した。これを０.０２
Ｍリン酸−カリウム水溶液を用いて５および１０μg／m
lに希釈した。０.４５μmのメンブランフィルターでろ
過したラットの血漿と、１０μg／mlの化合物Ｂの溶液
と等量混合し、添加試料とした(血漿中濃度１０μg／ml
相当)。また、ろ過した血漿と０.０２Ｍリン酸−カリウ
ム水溶液と等量混合したものをコントロールプラズマと
して、調製した。本装置において、前処理用の第一カラ
ムＣ１には内面逆相系カラムのＢＳＡ−ＯＤＳカラム
を、分析用の第三カラムＣ３にはＯＤＳカラムを用い
た。
-2-オキソピペラジン-1,3-ジアセチックアシッド（以
下、化合物Ｂと称す）を用いて、上記のＢＦ法で分析
を行った。分析条件を前記表１に示す。試料は上記化合
物Ｂを約１mgを精秤し、０.０２Ｍリン酸−カリウム水
溶液(ｐＨ３.５)で１mg／kgに調製した。これを０.０２
Ｍリン酸−カリウム水溶液を用いて５および１０μg／m
lに希釈した。０.４５μmのメンブランフィルターでろ
過したラットの血漿と、１０μg／mlの化合物Ｂの溶液
と等量混合し、添加試料とした(血漿中濃度１０μg／ml
相当)。また、ろ過した血漿と０.０２Ｍリン酸−カリウ
ム水溶液と等量混合したものをコントロールプラズマと
して、調製した。本装置において、前処理用の第一カラ
ムＣ１には内面逆相系カラムのＢＳＡ−ＯＤＳカラム
を、分析用の第三カラムＣ３にはＯＤＳカラムを用い
た。
【００７４】まず、図５に示す上記（１）の初期状態と
して、血漿試料注入後、５.４分まで第一移動相１０に
よってタンパクなどの高分子物質、イオン性および高極
性夾雑物を溶出させた。(図５、太実線) その間、第三カラムＣ３は第二ポンプＰ２より第二移動
相２０を送液した。(図５、太点線） 注入後、５.５〜７.５分の間、図６に示す上記（２）の
状態に切り替え、第一６方バルブＶ１を切り替え、第一
カラムＣ１と第三カラムＣ３を接続した。(図６、太点
線) その後、第一６方バルブＶ１を切り替えて上記（３）と
し、図５に示す元の状態に戻し、第三カラムＣ３におい
て分離定量を行った(図５、太点線)。得られたクロマト
グラムを図７に示す。
して、血漿試料注入後、５.４分まで第一移動相１０に
よってタンパクなどの高分子物質、イオン性および高極
性夾雑物を溶出させた。(図５、太実線) その間、第三カラムＣ３は第二ポンプＰ２より第二移動
相２０を送液した。(図５、太点線） 注入後、５.５〜７.５分の間、図６に示す上記（２）の
状態に切り替え、第一６方バルブＶ１を切り替え、第一
カラムＣ１と第三カラムＣ３を接続した。(図６、太点
線) その後、第一６方バルブＶ１を切り替えて上記（３）と
し、図５に示す元の状態に戻し、第三カラムＣ３におい
て分離定量を行った(図５、太点線)。得られたクロマト
グラムを図７に示す。
【００７５】本装置を用いて分析した際の上記化合物Ｂ
のピーク面積は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合の
９７.５％であった。また、両者におけるクロマトグラ
ムの評価の結果を前記表２に示す。本装置を用いた場合
は第三カラムＣ３を単独で用いた場合に比べて、みかけ
のピークシャープ性が３.２倍になり、ピークのシャー
プ性も２.１倍に向上し、良好な分析効率を示した。
のピーク面積は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合の
９７.５％であった。また、両者におけるクロマトグラ
ムの評価の結果を前記表２に示す。本装置を用いた場合
は第三カラムＣ３を単独で用いた場合に比べて、みかけ
のピークシャープ性が３.２倍になり、ピークのシャー
プ性も２.１倍に向上し、良好な分析効率を示した。
【００７６】次に、上記の、ＨＣ法に分離或いは／及
び濃縮を加えた分離分析モード（ＨＣ法→ＢＦ法）につ
いて説明する。該分析モードは、上記ＨＣ法によるカラ
ムスイッチングでは目的成分の拡散がおこる場合があっ
たり、ＨＣ法のみでは分離が不充分であったりするた
め、ＨＣ法の後にＢＦ法による濃縮を行う方法である。
即ち、試料が生体試料である場合、前処理用の第一カラ
ムをＣ１において、目的成分からタンパク成分、イオン
性および高極性物質との分離を行うが、薬物とその代謝
物の一斉分析などでは前処理カラムにおいてＨＣ画分が
拡散し、ピーク幅が大きくなる場合がある。広いピーク
幅をもつ画分を分析カラムに導入すると、分析カラムの
カラム効率が減少し、分離機構が乱れる。
び濃縮を加えた分離分析モード（ＨＣ法→ＢＦ法）につ
いて説明する。該分析モードは、上記ＨＣ法によるカラ
ムスイッチングでは目的成分の拡散がおこる場合があっ
たり、ＨＣ法のみでは分離が不充分であったりするた
め、ＨＣ法の後にＢＦ法による濃縮を行う方法である。
即ち、試料が生体試料である場合、前処理用の第一カラ
ムをＣ１において、目的成分からタンパク成分、イオン
性および高極性物質との分離を行うが、薬物とその代謝
物の一斉分析などでは前処理カラムにおいてＨＣ画分が
拡散し、ピーク幅が大きくなる場合がある。広いピーク
幅をもつ画分を分析カラムに導入すると、分析カラムの
カラム効率が減少し、分離機構が乱れる。
【００７７】よって、このの分析モードでは、前処理
カラムの第一カラムＣ１、濃縮用の第二カラムＣ２およ
び分析用の第三カラムＣ３の３本のカラムを用いてお
り、ＨＣ画分を逆相系カラムからなる第二カラムＣ２に
一旦保持させる。この際、濃縮用の第二カラムＣ２での
目的成分の保持を強め、拡散を防ぐために、より高極性
の第二移動相(水、緩衝液など)２０を第二ポンプＰ２よ
り分岐管ｔ８−１を通して添加する。さらに、濃縮用の
第二カラムＣ２に吸着した目的成分を逆方向から低極性
の第三移動相(分析カラム用移動相)３０で一挙に溶出さ
せ、分析用の第三カラムＣ３へ導入し、分離分析してい
る。尚、前処理用の第一カラムＣ１において不揮発性緩
衝液を用いた場合、分岐管ｔ８−２から第二カラムＣ２
に水を送液すると、濃縮用の第二カラムＣ２において脱
塩され、後述するＬＣ／ＭＳ分析にも適用が可能とな
る。
カラムの第一カラムＣ１、濃縮用の第二カラムＣ２およ
び分析用の第三カラムＣ３の３本のカラムを用いてお
り、ＨＣ画分を逆相系カラムからなる第二カラムＣ２に
一旦保持させる。この際、濃縮用の第二カラムＣ２での
目的成分の保持を強め、拡散を防ぐために、より高極性
の第二移動相(水、緩衝液など)２０を第二ポンプＰ２よ
り分岐管ｔ８−１を通して添加する。さらに、濃縮用の
第二カラムＣ２に吸着した目的成分を逆方向から低極性
の第三移動相(分析カラム用移動相)３０で一挙に溶出さ
せ、分析用の第三カラムＣ３へ導入し、分離分析してい
る。尚、前処理用の第一カラムＣ１において不揮発性緩
衝液を用いた場合、分岐管ｔ８−２から第二カラムＣ２
に水を送液すると、濃縮用の第二カラムＣ２において脱
塩され、後述するＬＣ／ＭＳ分析にも適用が可能とな
る。
【００７８】上記ＨＣ法に濃縮過程を加えた分析モード
における高速液体クロマトグラフィー装置の動作を図８
から図１０を参照して説明する。
における高速液体クロマトグラフィー装置の動作を図８
から図１０を参照して説明する。
【００７９】(１)図８に示すように、各バルブの初期状
態は、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ
２は状態２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バ
ルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、第六
６方バルブＶ６は状態２とする。オートサンプラーＡＳ
より試料を注入すると共に、第一ポンプＰ１より第一移
動相１０を注入し、該第一移動相１０により試料を、第
一６方バルブＶ１のポート１e→１ｆ、配管ｔ２を通し
て第一カラムＣ１に導入する。第一カラムＣ１で、目的
成分以外は図８中で太実線で示すように、配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ→３ｆ→３ａ、配管
ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ
１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ
１７を経て廃液部に排出される。
態は、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ
２は状態２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バ
ルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、第六
６方バルブＶ６は状態２とする。オートサンプラーＡＳ
より試料を注入すると共に、第一ポンプＰ１より第一移
動相１０を注入し、該第一移動相１０により試料を、第
一６方バルブＶ１のポート１e→１ｆ、配管ｔ２を通し
て第一カラムＣ１に導入する。第一カラムＣ１で、目的
成分以外は図８中で太実線で示すように、配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ→３ｆ→３ａ、配管
ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ
１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ
１７を経て廃液部に排出される。
【００８０】この時、第二ポンプＰ２より第二移動相２
０を送液する、第二移動相２０は、図８中で太点線で示
すように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配
管ｔ８、分岐管ｔ８−１、濃縮用の第二カラムＣ２、第
一マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バルブＶ
４のポート４c→４dの流路で流れ、第二カラムＣ２をコ
ンディショニングする。なお、配管ｔ８が分岐している
ため、第二移動相２０は分岐管ｔ８−２から第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一６方バル
ブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６方バルブ
Ｖ２のポート２ａ→２ｆへと至るが、ポート２ｆは密栓
されているためこれ以上進めない。
０を送液する、第二移動相２０は、図８中で太点線で示
すように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配
管ｔ８、分岐管ｔ８−１、濃縮用の第二カラムＣ２、第
一マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バルブＶ
４のポート４c→４dの流路で流れ、第二カラムＣ２をコ
ンディショニングする。なお、配管ｔ８が分岐している
ため、第二移動相２０は分岐管ｔ８−２から第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一６方バル
ブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６方バルブ
Ｖ２のポート２ａ→２ｆへと至るが、ポート２ｆは密栓
されているためこれ以上進めない。
【００８１】また、同時に第三ポンプＰ３により第三移
動相３０を送液し、図８中で太一点鎖線で示すように流
通させる。即ち、第三移動相３０は第三ポンプＰ３、配
管ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配
管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配
管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三
カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、
配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、
配管ｔ２０、検出器ＤＥＴの流路を流れ、第三カラムＣ
３をコンディショニングする。
動相３０を送液し、図８中で太一点鎖線で示すように流
通させる。即ち、第三移動相３０は第三ポンプＰ３、配
管ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配
管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配
管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第三
カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、
配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、
配管ｔ２０、検出器ＤＥＴの流路を流れ、第三カラムＣ
３をコンディショニングする。
【００８２】(２)第一カラムＣ１より目的成分が溶出す
る直前に、第三６方バルブＶ３のみを状態１に切り替え
て、図９に示す状態とする。この時、第一移動相１０
は、図９中で太実線で示すように、配管ｔ１、第一６方
バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラム
Ｃ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４
ｆ、分岐管ｔ８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２、第一
マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バルブＶ４
のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ１９から廃棄部へと流れ、
第一カラムＣ１に保持されている目的成分は、第一移動
相１０により、第一カラムＣ１より第二カラムＣ２に導
入される。
る直前に、第三６方バルブＶ３のみを状態１に切り替え
て、図９に示す状態とする。この時、第一移動相１０
は、図９中で太実線で示すように、配管ｔ１、第一６方
バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラム
Ｃ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４
ｆ、分岐管ｔ８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２、第一
マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バルブＶ４
のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ１９から廃棄部へと流れ、
第一カラムＣ１に保持されている目的成分は、第一移動
相１０により、第一カラムＣ１より第二カラムＣ２に導
入される。
【００８３】同時に、第二Ｐ２から第二移動相２０が配
管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管
ｔ８へ流れ、分岐管ｔ８−１で第一移動相１０と合流
し、第二カラムＣ２、第一マニュアルインジェクターＭ
Ｉ１、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ
１９を流れる。このように、第二カラムＣ２を第一移動
相１０と共に第二移動相２０が流れる。よって、第二移
動相２０として第一移動相１０より極性の高いものを選
択すると第一移動相１０は希釈され、目的成分は第二カ
ラムＣ２で拡散することなく、第二カラムＣ２のフロン
ト側で保持される。目的成分は第二カラムＣ２で濃縮さ
れ、また不要成分の除去も行われる。
管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管
ｔ８へ流れ、分岐管ｔ８−１で第一移動相１０と合流
し、第二カラムＣ２、第一マニュアルインジェクターＭ
Ｉ１、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ
１９を流れる。このように、第二カラムＣ２を第一移動
相１０と共に第二移動相２０が流れる。よって、第二移
動相２０として第一移動相１０より極性の高いものを選
択すると第一移動相１０は希釈され、目的成分は第二カ
ラムＣ２で拡散することなく、第二カラムＣ２のフロン
ト側で保持される。目的成分は第二カラムＣ２で濃縮さ
れ、また不要成分の除去も行われる。
【００８４】この間、図９で太一点鎖線で示すように、
第三ポンプＰ３より送液される第三移動相３０が上記
（１）と同一の流路で流れ、第四６方バルブＶ４のポー
ト４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポー
ト５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェク
ターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴを流れる。
第三ポンプＰ３より送液される第三移動相３０が上記
（１）と同一の流路で流れ、第四６方バルブＶ４のポー
ト４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポー
ト５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェク
ターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポ
ート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポ
ート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴを流れる。
【００８５】(３)第二カラムＣ２で目的成分の濃縮が完
了した後、第二６方バルブＶ２を状態１に、第三６方バ
ルブＶ３を状態２に、第四６方バルブＶ４を状態２に同
時に切り替えて、図１０の状態とする。この時、第三ポ
ンプＰ３より送液される第三移動相３０は図１０で太一
点鎖線で示すように、第二カラムＣ２から第三カラムＣ
３を経て検出器ＤＥＴへと流れる、即ち、第三移動相３
０は第三ポンプＰ３から配管ｔ１２、第四６方バルブＶ
４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２、分岐管ｔ８−
１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４
ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５
ａ、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ
２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ
→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ
→６ｅ、検出器ＤＥＴを経て流れ、第二カラムＣ２の濃
縮された目的成分を第三カラムＣ３へ導入する。第二カ
ラムＣ２のフロントに保持されていた目的成分は第三移
動相３０によって逆方向に移動するため、拡散すること
なく第三カラムＣ３へ導入される。
了した後、第二６方バルブＶ２を状態１に、第三６方バ
ルブＶ３を状態２に、第四６方バルブＶ４を状態２に同
時に切り替えて、図１０の状態とする。この時、第三ポ
ンプＰ３より送液される第三移動相３０は図１０で太一
点鎖線で示すように、第二カラムＣ２から第三カラムＣ
３を経て検出器ＤＥＴへと流れる、即ち、第三移動相３
０は第三ポンプＰ３から配管ｔ１２、第四６方バルブＶ
４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２、分岐管ｔ８−
１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４
ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５
ａ、配管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ
２、第三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ
→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ
→６ｅ、検出器ＤＥＴを経て流れ、第二カラムＣ２の濃
縮された目的成分を第三カラムＣ３へ導入する。第二カ
ラムＣ２のフロントに保持されていた目的成分は第三移
動相３０によって逆方向に移動するため、拡散すること
なく第三カラムＣ３へ導入される。
【００８６】この間、第一ポンプＰ１より第一移動相１
０は、図１０で実線で示すように、オートサンプラーＡ
Ｓ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポンプ１ｅ→１
ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バ
ルブＶ１のポンプ１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バル
ブＶ３のポート３d→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ
→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→
５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→
６ａ、配管ｔ１７を経て廃液部へ排出される。
０は、図１０で実線で示すように、オートサンプラーＡ
Ｓ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポンプ１ｅ→１
ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バ
ルブＶ１のポンプ１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バル
ブＶ３のポート３d→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ
→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→
５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→
６ａ、配管ｔ１７を経て廃液部へ排出される。
【００８７】また、第二ポンプＰ２より第二移動相２０
が図１０中で太点線で示すように、配管ｔ７、第二６方
バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バル
ブＶ４のポート４ｅ→４ｄ、配管１９を経て廃液部へ排
出される。
が図１０中で太点線で示すように、配管ｔ７、第二６方
バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バル
ブＶ４のポート４ｅ→４ｄ、配管１９を経て廃液部へ排
出される。
【００８８】(４)目的成分が第二カラムＣ２から第三カ
ラムＣ３へ全て導入された後、再びバルブを（１）の初
期状態に切り替え、図８に示す状態に戻す。第三カラム
Ｃ３には図８中で太一点鎖線で示すように第三移動相３
０が導入され、第三カラムＣ３に導入されている目的成
分は第三移動相３０により分離分析され、第三カラムＣ
３は常に検出器ＤＥＴにより検出されるため、第三カラ
ムＣ２での目的成分のクロマトグラムが得られる。第一
移動相１０は図１０中で太実線で示すように流れて第一
カラムＣ１をコンデショニングし、第二移動相２０は図
１０中で太点線で示すように流れて、第二カラムＣ２を
コンディショニングし、次の分析に備える。
ラムＣ３へ全て導入された後、再びバルブを（１）の初
期状態に切り替え、図８に示す状態に戻す。第三カラム
Ｃ３には図８中で太一点鎖線で示すように第三移動相３
０が導入され、第三カラムＣ３に導入されている目的成
分は第三移動相３０により分離分析され、第三カラムＣ
３は常に検出器ＤＥＴにより検出されるため、第三カラ
ムＣ２での目的成分のクロマトグラムが得られる。第一
移動相１０は図１０中で太実線で示すように流れて第一
カラムＣ１をコンデショニングし、第二移動相２０は図
１０中で太点線で示すように流れて、第二カラムＣ２を
コンディショニングし、次の分析に備える。
【００８９】
【実験例３】試料に2-(7-クロロ-1,8-ナフチリジン-2-
イル)-3-〔(1,4-ジオキサ-8-アザスピロ-[4,5]デカ-8-
イル)カルボニルメチル〕イソインドリン-1-オン（以
下、化合物Ｃと称す）と2-(7-クロロ-1,8-ナフチリジン
-2-イル)-3-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)カルボニ
ル-メチルイソインドリン-1-オン（以下、化合物Ｄと称
す）を用いて、上記のモードの分析を行った。分析条
件を前記表１に示す。上記試料は、上記化合物Ｃおよび
上記化合物Ｄを約１mgを精秤し、メタノールで１mg／ml
に調製した。さらに１５％アセトニトリル／０.０２Ｍ
リン酸バッファー(pＨ６)＋０.１Ｍ塩化ナトリウム溶液
(第一移動相)で５.１０μg／mlの上記化合物Ｃと上記化
合物Ｄの混合液を調製した。０.４５μmのメンブランフ
ィルターでろ過したラットの血漿と、１０μg／mlの上
記化合物Ｃと上記化合物Ｄの混合液を等量混合し、添加
試料として(血漿中濃度１０μg／ml相当)。また、ろ過
した血漿と第一移動相を等量混合したものをコントロル
プラズマとして、調製した。本装置の前処理用の第一カ
ラムＣ１にはＧＰＣカラムを用い、濃縮用の第二カラム
Ｃ２にはＯＤＳカラムを用い、分析用の第三カラムＣ３
には光学分割用のカラムを用いた。
イル)-3-〔(1,4-ジオキサ-8-アザスピロ-[4,5]デカ-8-
イル)カルボニルメチル〕イソインドリン-1-オン（以
下、化合物Ｃと称す）と2-(7-クロロ-1,8-ナフチリジン
-2-イル)-3-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)カルボニ
ル-メチルイソインドリン-1-オン（以下、化合物Ｄと称
す）を用いて、上記のモードの分析を行った。分析条
件を前記表１に示す。上記試料は、上記化合物Ｃおよび
上記化合物Ｄを約１mgを精秤し、メタノールで１mg／ml
に調製した。さらに１５％アセトニトリル／０.０２Ｍ
リン酸バッファー(pＨ６)＋０.１Ｍ塩化ナトリウム溶液
(第一移動相)で５.１０μg／mlの上記化合物Ｃと上記化
合物Ｄの混合液を調製した。０.４５μmのメンブランフ
ィルターでろ過したラットの血漿と、１０μg／mlの上
記化合物Ｃと上記化合物Ｄの混合液を等量混合し、添加
試料として(血漿中濃度１０μg／ml相当)。また、ろ過
した血漿と第一移動相を等量混合したものをコントロル
プラズマとして、調製した。本装置の前処理用の第一カ
ラムＣ１にはＧＰＣカラムを用い、濃縮用の第二カラム
Ｃ２にはＯＤＳカラムを用い、分析用の第三カラムＣ３
には光学分割用のカラムを用いた。
【００９０】装置は、まず、上記（１）の初期状態とし
て、血漿試料注入後、１０分まで前処理用の第一カラム
Ｃ１において、タンパクなどの高分子を溶出させ、除タ
ンパクを行った(図８中、太実線)。ついで、１０〜１５
分は、上記（２）の状態とし、水で希釈しながら濃縮用
の第二カラムＣ２に化合物Ｃおよび化合物Ｄの画分を保
持させ、高極性物質を洗いだした(図９中、太実線およ
び太点線)。この間、第三カラムＣ３には第三ポンプＰ
３より第三移動相３を送液した。(図９中、太一点鎖
線)。ついで、１５〜１７分は、上記（３）の状態とし
て、第二カラムＣ２と第三カラムＣ３を接続し、第二カ
ラムＣ２に吸着した目的成分を第三カラムＣ３に導入し
た(図面１０中、太一点鎖線)。その後、上記（４）の状
態とし、第三カラムＣ３において分離および光学分割を
おこなった(図８中、一点鎖線)。その間、第一カラムＣ
１および第二カラムＣ２には第一ポンプＰ１、第二ポン
プＰ２より第一移動相１０、第二移動相２０を送液して
コンディショニングした(図８中、太実線および太点線)
て、血漿試料注入後、１０分まで前処理用の第一カラム
Ｃ１において、タンパクなどの高分子を溶出させ、除タ
ンパクを行った(図８中、太実線)。ついで、１０〜１５
分は、上記（２）の状態とし、水で希釈しながら濃縮用
の第二カラムＣ２に化合物Ｃおよび化合物Ｄの画分を保
持させ、高極性物質を洗いだした(図９中、太実線およ
び太点線)。この間、第三カラムＣ３には第三ポンプＰ
３より第三移動相３を送液した。(図９中、太一点鎖
線)。ついで、１５〜１７分は、上記（３）の状態とし
て、第二カラムＣ２と第三カラムＣ３を接続し、第二カ
ラムＣ２に吸着した目的成分を第三カラムＣ３に導入し
た(図面１０中、太一点鎖線)。その後、上記（４）の状
態とし、第三カラムＣ３において分離および光学分割を
おこなった(図８中、一点鎖線)。その間、第一カラムＣ
１および第二カラムＣ２には第一ポンプＰ１、第二ポン
プＰ２より第一移動相１０、第二移動相２０を送液して
コンディショニングした(図８中、太実線および太点線)
【００９１】得られたクロマトグラムを図１１に示す。
また、上記化合物Ｃのピークにおいて本装置を用いた場
合と、第三カラムＣ３を単独で用いてで分析した場合の
クロマトグラムの評価の結果を前記表２に示す。ピーク
のシャープ性、対称性はほぼ同様の値を示したが、みか
けのピークシャープ性は(＋)−化合物Ｃでは５.０倍、
(−)−化合物Ｃでは３.５倍の値を示し、良好な結果を
示した。上記結果より、上記分析モードの血漿試料の直
接注入による、薬物の未変化体と代謝物の一斉光学分割
が可能であることが確認された。
また、上記化合物Ｃのピークにおいて本装置を用いた場
合と、第三カラムＣ３を単独で用いてで分析した場合の
クロマトグラムの評価の結果を前記表２に示す。ピーク
のシャープ性、対称性はほぼ同様の値を示したが、みか
けのピークシャープ性は(＋)−化合物Ｃでは５.０倍、
(−)−化合物Ｃでは３.５倍の値を示し、良好な結果を
示した。上記結果より、上記分析モードの血漿試料の直
接注入による、薬物の未変化体と代謝物の一斉光学分割
が可能であることが確認された。
【００９２】次に、上記の、ＢＦ法に濃縮を加えた分
析モード（ＢＦ法→ＢＦ法）を説明する。一回の上記Ｂ
Ｆ法によるカラムスイッチングでは夾雑物の影響などで
十分な分離が得られない場合あり、この場合に、異種モ
ードの分離を加えてＢＦ法を２回行うモードである。例
えば、極性の高い薬物の分析では生体中の内因性物質と
の分離が、前処理用の第一カラムＣ１と分析用の第三カ
ラムＣ３の２本では困難であるため、異種の分離モード
を濃縮過程に導入することで、効果的な分離を得る場合
に用いられる。
析モード（ＢＦ法→ＢＦ法）を説明する。一回の上記Ｂ
Ｆ法によるカラムスイッチングでは夾雑物の影響などで
十分な分離が得られない場合あり、この場合に、異種モ
ードの分離を加えてＢＦ法を２回行うモードである。例
えば、極性の高い薬物の分析では生体中の内因性物質と
の分離が、前処理用の第一カラムＣ１と分析用の第三カ
ラムＣ３の２本では困難であるため、異種の分離モード
を濃縮過程に導入することで、効果的な分離を得る場合
に用いられる。
【００９３】即ち、前処理及び／あるいは分離用の第一
カラムＣ１において目的成分を吸着させ、タンパク成
分、イオン性および高極性物質との分離を行う。その
後、濃縮用の第二カラムＣ２からの第二移動相２０によ
りＢＦ法で目的成分を前処理用の第一カラムＣ１から濃
縮用の第二カラムＣ２へ導入する。該濃縮用の第二カラ
ムＣ２はＣ１と分離モードの異なるものを効率的な濃縮
及び分離を図った。
カラムＣ１において目的成分を吸着させ、タンパク成
分、イオン性および高極性物質との分離を行う。その
後、濃縮用の第二カラムＣ２からの第二移動相２０によ
りＢＦ法で目的成分を前処理用の第一カラムＣ１から濃
縮用の第二カラムＣ２へ導入する。該濃縮用の第二カラ
ムＣ２はＣ１と分離モードの異なるものを効率的な濃縮
及び分離を図った。
【００９４】上記ＢＦ法に濃縮過程を加えた分析モード
における高速液体クロマトグラフィー装置の動作を図１
２から図１４を参照して説明する。
における高速液体クロマトグラフィー装置の動作を図１
２から図１４を参照して説明する。
【００９５】(１)図１２に示す初期状態において、第一
６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ２は状態
２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バルブＶ４
は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、第六６方バル
ブＶ６は状態２とする。この（１）の状態における第一
移動相１０、第二移動相２０、第三移動相３０の流れ
は、図１２において、太実線、太点線、太一点鎖線で示
す通りで、前記の分析モードの（１）と同様である。
６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ２は状態
２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バルブＶ４
は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、第六６方バル
ブＶ６は状態２とする。この（１）の状態における第一
移動相１０、第二移動相２０、第三移動相３０の流れ
は、図１２において、太実線、太点線、太一点鎖線で示
す通りで、前記の分析モードの（１）と同様である。
【００９６】オートサンプラーＡＳより試料を注入する
と共に、第一ポンプＰ１より第一移動相１０を注入し、
該第一移動相１０により試料を、第一６方バルブＶ１の
ポート１e→１f、配管ｔ２を通して第一カラムＣ１に導
入する。第一カラムＣ１で、目的成分はフロントに保持
した状態で、目的成分以外は図１２中で太実線で示すよ
うに、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１c→１
d、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３e→
３f→３a、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５b
→５c、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６f→
６a、配管ｔ１７を経て廃液部に排出される。
と共に、第一ポンプＰ１より第一移動相１０を注入し、
該第一移動相１０により試料を、第一６方バルブＶ１の
ポート１e→１f、配管ｔ２を通して第一カラムＣ１に導
入する。第一カラムＣ１で、目的成分はフロントに保持
した状態で、目的成分以外は図１２中で太実線で示すよ
うに、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１c→１
d、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３d→３e→
３f→３a、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５b
→５c、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６f→
６a、配管ｔ１７を経て廃液部に排出される。
【００９７】この時、第二ポンプＰ２より第二移動相２
０を送液する。第二移動相２０は、図１２中で太点線で
示すように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、
配管ｔ８ー２、分岐管ｔ８−１、濃縮用の第二カラムＣ
２、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｃ→４ｄの流路で流れ、第二カラム
Ｃ２をコンディショニングする。なお、配管ｔ８が分岐
しているため、第二移動相２０は分岐管ｔ８−２から第
四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第
三６方バルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一
６方バルブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６
方バルブＶ２のポート２ａ→２ｆへと至るが、ポート２
ｆは密栓されているためこれ以上進めない。
０を送液する。第二移動相２０は、図１２中で太点線で
示すように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、
配管ｔ８ー２、分岐管ｔ８−１、濃縮用の第二カラムＣ
２、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｃ→４ｄの流路で流れ、第二カラム
Ｃ２をコンディショニングする。なお、配管ｔ８が分岐
しているため、第二移動相２０は分岐管ｔ８−２から第
四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第
三６方バルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一
６方バルブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６
方バルブＶ２のポート２ａ→２ｆへと至るが、ポート２
ｆは密栓されているためこれ以上進めない。
【００９８】また、同時に第三ポンプＰ３により第三移
動相３０を送液し、図１２中で太一点鎖線で示すように
流通させる。即ち、第三移動相３０は第三ポンプＰ３、
配管ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、
配管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第
三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５
ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６
ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴの流路を流れ、第三カラ
ムＣ３をコンディショニングする。
動相３０を送液し、図１２中で太一点鎖線で示すように
流通させる。即ち、第三移動相３０は第三ポンプＰ３、
配管ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、
配管ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２、第
三カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５
ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６
ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴの流路を流れ、第三カラ
ムＣ３をコンディショニングする。
【００９９】(２)不要成分が第一カラムＣ１から溶出し
た後、目的成分を第一カラムＣ１より第二カラムＣ２に
導入するため、第一６方バルブＶ１を状態２に切り替え
て、図１３に示す状態とする。この時、第二ポンプＰ２
から送液される第二移動相２０は、図１３中で太点線で
示すように流れる。即ち、配管ｔ７、第二６方バルブＶ
２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１
のポート１ｂ→１ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管
ｔ２、第一６方バルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ
８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２、第一マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４
のポート４ｃ→４ｄ、配管１９より廃棄部へと流れる。
よって、第一カラムＣ１のフロントに保持された目的成
分は拡散することなく第一カラムＣ１を逆方向に溶出
し、第二カラムＣ２へ導入される。
た後、目的成分を第一カラムＣ１より第二カラムＣ２に
導入するため、第一６方バルブＶ１を状態２に切り替え
て、図１３に示す状態とする。この時、第二ポンプＰ２
から送液される第二移動相２０は、図１３中で太点線で
示すように流れる。即ち、配管ｔ７、第二６方バルブＶ
２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１
のポート１ｂ→１ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管
ｔ２、第一６方バルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ
８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２、第一マニュアルイ
ンジェクターＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４
のポート４ｃ→４ｄ、配管１９より廃棄部へと流れる。
よって、第一カラムＣ１のフロントに保持された目的成
分は拡散することなく第一カラムＣ１を逆方向に溶出
し、第二カラムＣ２へ導入される。
【０１００】この間、第一移動相１０は用いないので、
図１３中で太実線で示すように、第一ポンプＰ１から、
オートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１
のポート１ｅ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３の
ポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、
配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配
管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配
管ｔ１７を経て廃液部に排出される。また、第三ポンプ
Ｐ３より溶出する第三移動相３０は、図１３中で太一点
鎖線で示すように、第三ポンプＰ３、配管ｔ１２、第四
６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五
６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二
マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第
五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第
六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検
出器ＤＥＴの経て排出される。
図１３中で太実線で示すように、第一ポンプＰ１から、
オートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１
のポート１ｅ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３の
ポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、
配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配
管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配
管ｔ１７を経て廃液部に排出される。また、第三ポンプ
Ｐ３より溶出する第三移動相３０は、図１３中で太一点
鎖線で示すように、第三ポンプＰ３、配管ｔ１２、第四
６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五
６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二
マニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第
五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第
六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検
出器ＤＥＴの経て排出される。
【０１０１】(３)目的成分が全て第一カラムＣ１から第
二カラムＣ２へ移動した後、再びバルブを初期状態に戻
し、図１２の状態とする。よって、第一移動相１０、第
二移動相２０および第三移動相３０の流れは、上記
（１）と同一であるため、説明を省略する。この時、目
的成分は第二カラムＣ２のフロントで保持されており、
第二カラムＣ２中の目的成分以外の不要成分は、第二ポ
ンプＰ２より送液されて、第１２図中で太点線で示す流
れの第二移動相２０により洗浄される。
二カラムＣ２へ移動した後、再びバルブを初期状態に戻
し、図１２の状態とする。よって、第一移動相１０、第
二移動相２０および第三移動相３０の流れは、上記
（１）と同一であるため、説明を省略する。この時、目
的成分は第二カラムＣ２のフロントで保持されており、
第二カラムＣ２中の目的成分以外の不要成分は、第二ポ
ンプＰ２より送液されて、第１２図中で太点線で示す流
れの第二移動相２０により洗浄される。
【０１０２】(４)第二カラムＣ２において目的成分の濃
縮および不要成分の洗浄が終了した後、第２六方Ｖ２を
状態１に、第四６方バルブＶ４を状態２に切り替え、図
１４に示す状態とする。この時、第三ポンプＰ３より送
液される第三移動相３０は、図１４中で太一点鎖線で示
すように、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配
管ｔ１３、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、第二
カラムＣ２、分岐管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バル
ブＶ４のポート４ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バル
ブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュア
ルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バ
ルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥ
Ｔへと流れる。従って、第二カラムＣ２のフロントに保
持されていた目的成分は第三移動相３０によって第二カ
ラムＣ２から逆方向に拡散することなく第三カラムＣ３
へ移動する。
縮および不要成分の洗浄が終了した後、第２六方Ｖ２を
状態１に、第四６方バルブＶ４を状態２に切り替え、図
１４に示す状態とする。この時、第三ポンプＰ３より送
液される第三移動相３０は、図１４中で太一点鎖線で示
すように、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配
管ｔ１３、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、第二
カラムＣ２、分岐管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バル
ブＶ４のポート４ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バル
ブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュア
ルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バ
ルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥ
Ｔへと流れる。従って、第二カラムＣ２のフロントに保
持されていた目的成分は第三移動相３０によって第二カ
ラムＣ２から逆方向に拡散することなく第三カラムＣ３
へ移動する。
【０１０３】この間、第二ポートＰ２より送液される第
二移動相２０は用いないので、図１４中で太点線で示す
ように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１
７を経て廃液へ排出される。 同様に、第一移動相１０
も用いないので、図１４中で太実線で示すように、配管
ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ
２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポ
ート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポ
ート４ｅ→４ｄ、配管ｔ１９を経て廃液部へ排出され
る。
二移動相２０は用いないので、図１４中で太点線で示す
ように、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１
７を経て廃液へ排出される。 同様に、第一移動相１０
も用いないので、図１４中で太実線で示すように、配管
ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ
２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポ
ート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポ
ート４ｅ→４ｄ、配管ｔ１９を経て廃液部へ排出され
る。
【０１０４】(５)目的成分が全て第二カラムＣ２より第
三カラムＣ３へ移動した後、全部のバルブを初期状態に
戻し、図１２に示す状態とする。第三カラムＣ３中の目
的成分は、上記(１)の流路に従って流れる第三移動相３
０により第三カラムＣ３で分離分析され、検出器ＤＥＴ
で検出される。また、同時に、第一移動相１０および第
二移動相２０は上記(１)の流路にしたがって流れ、夫々
第一カラムＣ１および第二カラムＣ２をコンディショニ
ングし、次の分析に備える。
三カラムＣ３へ移動した後、全部のバルブを初期状態に
戻し、図１２に示す状態とする。第三カラムＣ３中の目
的成分は、上記(１)の流路に従って流れる第三移動相３
０により第三カラムＣ３で分離分析され、検出器ＤＥＴ
で検出される。また、同時に、第一移動相１０および第
二移動相２０は上記(１)の流路にしたがって流れ、夫々
第一カラムＣ１および第二カラムＣ２をコンディショニ
ングし、次の分析に備える。
【０１０５】
【実験例４】上記の分析モードで、試料に2-0-(3カル
ボキシプロピル)-アスコルビックアシッド（以下、化合
物Ｅと称す）、2-0-(3カルボキシプロピル)-アスコルビ
ックアシッド 3-(1-グルクロネート)（以下、化合物Ｆ
と称す）を用いて分析した。分析条件は前記表１に示
す。試料は、上記化合物Ｅと化合物Ｆを夫々約１mg精秤
し、０.０２Ｍリン酸−カリウム水溶液（pＨ３.５）で
１mg/mｌに調製した。さらに０.０２Ｍ−カリウム＋０.
００５Ｍテトラブチルアンモニウム水溶液（第一移動
相）で５.１０μg/ml化合物ＥとＦの混合液を調製し
た。０.４５μmのメンブランフィルターで濾過したラッ
トの血漿と１０μg/mlの化合物ＥとＦの混合液とを等量
混合し、添加試料とした（血漿中濃度１０μg/ml相
当）。また、濾過した血漿と第一移動相を等量混合した
ものをコントロールプラズマとして、調製した。本装置
において、前処理用の第一カラムＣ１にＯＤＳカラムを
用い、濃縮用の第二カラムＣ２にはアミノプロピル型の
カラムを用いた。分析用の第三カラムＣ３にＯＤＳカラ
ムを用いた。
ボキシプロピル)-アスコルビックアシッド（以下、化合
物Ｅと称す）、2-0-(3カルボキシプロピル)-アスコルビ
ックアシッド 3-(1-グルクロネート)（以下、化合物Ｆ
と称す）を用いて分析した。分析条件は前記表１に示
す。試料は、上記化合物Ｅと化合物Ｆを夫々約１mg精秤
し、０.０２Ｍリン酸−カリウム水溶液（pＨ３.５）で
１mg/mｌに調製した。さらに０.０２Ｍ−カリウム＋０.
００５Ｍテトラブチルアンモニウム水溶液（第一移動
相）で５.１０μg/ml化合物ＥとＦの混合液を調製し
た。０.４５μmのメンブランフィルターで濾過したラッ
トの血漿と１０μg/mlの化合物ＥとＦの混合液とを等量
混合し、添加試料とした（血漿中濃度１０μg/ml相
当）。また、濾過した血漿と第一移動相を等量混合した
ものをコントロールプラズマとして、調製した。本装置
において、前処理用の第一カラムＣ１にＯＤＳカラムを
用い、濃縮用の第二カラムＣ２にはアミノプロピル型の
カラムを用いた。分析用の第三カラムＣ３にＯＤＳカラ
ムを用いた。
【０１０６】装置を、まず、上記（１）の初期状態と
し、血漿試料注入後、５分は第一カラムＣ１でタンパク
成分およびイオン性高極性物質の除去を行った（図１２
中、太実線） ついで、５.０〜７.３分は上記（２）の状態に切り替
え、ＢＦ法により目的成分を含む画分を第二カラムＣ２
へ導入し（図１３中、太点線）、ついで、７.３〜９.３
分は上記（３）の状態に切り替え、第二カラムＣ２で化
合物ＥとＦを吸着、濃縮させた。（図１２中、太点線） ついで、９.３〜１２.７分は上記（４）の状態に切り替
え、第二カラムＣ２と第三カラムＣ３を接続し、ＢＦ法
により第三カラムＣ３へ目的成分を含む画分を導入し
た。（図１４中、太−点鎖線） ついで、上記（５）の状態に切り替え、第三カラムＣ３
において分離分析をおこなった。（図１２中、太−点鎖
線）
し、血漿試料注入後、５分は第一カラムＣ１でタンパク
成分およびイオン性高極性物質の除去を行った（図１２
中、太実線） ついで、５.０〜７.３分は上記（２）の状態に切り替
え、ＢＦ法により目的成分を含む画分を第二カラムＣ２
へ導入し（図１３中、太点線）、ついで、７.３〜９.３
分は上記（３）の状態に切り替え、第二カラムＣ２で化
合物ＥとＦを吸着、濃縮させた。（図１２中、太点線） ついで、９.３〜１２.７分は上記（４）の状態に切り替
え、第二カラムＣ２と第三カラムＣ３を接続し、ＢＦ法
により第三カラムＣ３へ目的成分を含む画分を導入し
た。（図１４中、太−点鎖線） ついで、上記（５）の状態に切り替え、第三カラムＣ３
において分離分析をおこなった。（図１２中、太−点鎖
線）
【０１０７】得られたクロマトグラムを図１５に示す。
本装置で分析した化合物Ｅおよび化合物Ｆのピーク面積
は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合の、それぞれの
１０１.８％、１０５.０％であり、良好な回収が得られ
た。また、両分析法におけるクロマトグラムの評価の結
果を前記表２に示す。ピークのシャープ性はほぼ同等の
値を示したが、ピークの対称性は１.３倍向上し、みか
けのピークシャープ性は３.３倍高くなり、良好な結果
を示した。
本装置で分析した化合物Ｅおよび化合物Ｆのピーク面積
は、第三カラムＣ３を単独で用いた場合の、それぞれの
１０１.８％、１０５.０％であり、良好な回収が得られ
た。また、両分析法におけるクロマトグラムの評価の結
果を前記表２に示す。ピークのシャープ性はほぼ同等の
値を示したが、ピークの対称性は１.３倍向上し、みか
けのピークシャープ性は３.３倍高くなり、良好な結果
を示した。
【０１０８】上記したように、のＨＣ法とのＢＦ法
とは初期状態が同一であるため、ＨＣ法からＢＦ法への
変換は、カラムスイッチング時に切り替えるバルブを第
三６方バルブＶ３から第一６方バルブＶ１に変えるだけ
でよい。また、上記のモードからのモードへ切り替
える際も、各方法の初期状態は決定されており、また切
り替えるバルブも各方法によって定まるため、どの時間
に切り替えを行うかだけをシステムコントローラーのタ
イムプログラムに設定すればよい。また、異なるカラム
スイッチング法を連続して自動的に行う場合は、タイム
プログラムを設定して行えばよい。
とは初期状態が同一であるため、ＨＣ法からＢＦ法への
変換は、カラムスイッチング時に切り替えるバルブを第
三６方バルブＶ３から第一６方バルブＶ１に変えるだけ
でよい。また、上記のモードからのモードへ切り替
える際も、各方法の初期状態は決定されており、また切
り替えるバルブも各方法によって定まるため、どの時間
に切り替えを行うかだけをシステムコントローラーのタ
イムプログラムに設定すればよい。また、異なるカラム
スイッチング法を連続して自動的に行う場合は、タイム
プログラムを設定して行えばよい。
【０１０９】上記、およびの第一、第二および第
三カラムＣ１、Ｃ２、Ｃ３における分離状況の確認は、
各カラムでの目的成分が保持されているか、保持されて
いないか、いつ溶出されるか等の分離状況を確認するも
のである。上記いずれのカラムの分離状況を確認するモ
ードでも、カラムを装置から取り外すことなく行うこと
が出来る。
三カラムＣ１、Ｃ２、Ｃ３における分離状況の確認は、
各カラムでの目的成分が保持されているか、保持されて
いないか、いつ溶出されるか等の分離状況を確認するも
のである。上記いずれのカラムの分離状況を確認するモ
ードでも、カラムを装置から取り外すことなく行うこと
が出来る。
【０１１０】まず、上記の第一カラムＣ１における分
離状況を確認する分離分析モードでは、図１７に示すよ
うに、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ
２は任意、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バル
ブＶ４は任意、第五６方バルブＶ５は状態２、第六６方
バルブＶ６は状態１とする。
離状況を確認する分離分析モードでは、図１７に示すよ
うに、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バルブＶ
２は任意、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６方バル
ブＶ４は任意、第五６方バルブＶ５は状態２、第六６方
バルブＶ６は状態１とする。
【０１１１】この状態で、オートサンプラーＡＳより試
料を注入すると共に、図１７中で太実線で示すように、
第一移動相１０を第一ポンプＰ１より送液する。試料は
第一移動相１０により、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１
のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２より第一カラムＣ１に導
入される。該第一カラムＣ１で、まず、目的成分以外の
不要成分が溶出して、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３の３
ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２
０、検出器ＤＥＴへと送られ、検出器ＤＥＴで検出され
る。ついで、第一カラムＣ１から目的成分を含む画分が
溶出して、上記目的成分以外と同一の流路で流れ、検出
器ＤＥＴで検出される。この結果、図１８に示す如き、
第一カラムＣ１のクロマトグラムが得られる。この分離
分析モード時には、第二ポンプＰ２、第三ポンプＰ３は
休止している。
料を注入すると共に、図１７中で太実線で示すように、
第一移動相１０を第一ポンプＰ１より送液する。試料は
第一移動相１０により、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１
のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２より第一カラムＣ１に導
入される。該第一カラムＣ１で、まず、目的成分以外の
不要成分が溶出して、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３の３
ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２
０、検出器ＤＥＴへと送られ、検出器ＤＥＴで検出され
る。ついで、第一カラムＣ１から目的成分を含む画分が
溶出して、上記目的成分以外と同一の流路で流れ、検出
器ＤＥＴで検出される。この結果、図１８に示す如き、
第一カラムＣ１のクロマトグラムが得られる。この分離
分析モード時には、第二ポンプＰ２、第三ポンプＰ３は
休止している。
【０１１２】上記の第二カラムＣ２における分離状況
を確認する分離分析モードでは、図１９に示すように、
第一、第二および第三６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３は任
意とし、第四６方バルブＶ４は状態２、第五６方バルブ
Ｖ５は状態１、第六６方バルブＶ６は状態２とする。
を確認する分離分析モードでは、図１９に示すように、
第一、第二および第三６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３は任
意とし、第四６方バルブＶ４は状態２、第五６方バルブ
Ｖ５は状態１、第六６方バルブＶ６は状態２とする。
【０１１３】この状態で、第二移動相２０を第三ポンプ
Ｐ３より送液し、図１９中で太点線に示すように、第四
６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一
マニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２、分
岐管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート
４ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート
５ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート
６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴへと流れる。
Ｐ３より送液し、図１９中で太点線に示すように、第四
６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一
マニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２、分
岐管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート
４ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート
５ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート
６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、検出器ＤＥＴへと流れる。
【０１１４】上記第一マニュアルインジェクターＭＩ１
から試料を注入すると、第二カラムＣ２で試料が第二移
動相２０で分離され、まず、目的成分以外が溶出して検
出器ＤＥＴで検出され、その後、目的成分が溶出して検
出器ＤＥＴで検出され、前記第一カラムＣ１の検出と同
様な図１８に示す如きクロマトグラムが得られる。ま
た、本分離分析モードでは第一ポンプＰ１、第二ポンプ
Ｐ２は休止している。
から試料を注入すると、第二カラムＣ２で試料が第二移
動相２０で分離され、まず、目的成分以外が溶出して検
出器ＤＥＴで検出され、その後、目的成分が溶出して検
出器ＤＥＴで検出され、前記第一カラムＣ１の検出と同
様な図１８に示す如きクロマトグラムが得られる。ま
た、本分離分析モードでは第一ポンプＰ１、第二ポンプ
Ｐ２は休止している。
【０１１５】上記の第三カラムＣ３の分離状況を確認
する分離分析モードでは、図２０に示すように、第一、
第二、第三６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３は任意とし、第
四６方バルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態
２、第六６方バルブＶ６は状態２とする。
する分離分析モードでは、図２０に示すように、第一、
第二、第三６方バルブＶ１、Ｖ２、Ｖ３は任意とし、第
四６方バルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態
２、第六６方バルブＶ６は状態２とする。
【０１１６】図２０中で、太−点鎖線で示すように、第
三ポンプＰ３より第三移動相３０を送液し、第四６方バ
ルブＶ４のポンプ４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュ
アルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方
バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方
バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出
器ＤＥＴに流す。
三ポンプＰ３より第三移動相３０を送液し、第四６方バ
ルブＶ４のポンプ４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、配管ｔ１４、第二マニュ
アルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、第五６方
バルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方
バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出
器ＤＥＴに流す。
【０１１７】このとき、第三カラムＣ３は常に検出器Ｄ
ＥＴによって検出されるため、第二マニュアルインジェ
クターＭＩ２より試料を注入すると、第三カラムＣ３で
第三移動相３０で分離され、まず、目的成分以外が溶出
して検出器ＤＥＴで検出され、その後、目的成分が溶出
して検出器ＤＥＴで検出され、前記図１８と同様のクロ
マトグラムが得られる。この分離分析モードでは第一ポ
ンプＰ１および第二ポンプＰ２は休止している。
ＥＴによって検出されるため、第二マニュアルインジェ
クターＭＩ２より試料を注入すると、第三カラムＣ３で
第三移動相３０で分離され、まず、目的成分以外が溶出
して検出器ＤＥＴで検出され、その後、目的成分が溶出
して検出器ＤＥＴで検出され、前記図１８と同様のクロ
マトグラムが得られる。この分離分析モードでは第一ポ
ンプＰ１および第二ポンプＰ２は休止している。
【０１１８】一つの試料中に複数の極性物質と複数の疎
水性物質が含まれる場合、単一カラムで全ての成分を分
析するのは困難である。この場合、本装置を用いて以下
のように分離分析することができる。即ち、上記の複
数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分離分
析モードを以下のように実施出来る。尚、上記の分離
分析モードを実行する場合には、図２２から図２５に示
すように、配管ｔ１９に第二のクロマトグラムを検出す
る検出器ＤＥＴを接続し、配管ｔ２０に取り付けている
検出器ＤＥＴと併せて２個の検出器ＤＥＴを用いてい
る。
水性物質が含まれる場合、単一カラムで全ての成分を分
析するのは困難である。この場合、本装置を用いて以下
のように分離分析することができる。即ち、上記の複
数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分離分
析モードを以下のように実施出来る。尚、上記の分離
分析モードを実行する場合には、図２２から図２５に示
すように、配管ｔ１９に第二のクロマトグラムを検出す
る検出器ＤＥＴを接続し、配管ｔ２０に取り付けている
検出器ＤＥＴと併せて２個の検出器ＤＥＴを用いてい
る。
【０１１９】まず、図２１に示す不要成分（Ｘ）が、第
一カラムＣ１より溶出される時、図２２に示すように、
第一６方バルブＶ１を状態１、第二６方バルブＶ２を状
態１、第三６方バルブＶ３を状態２、第四６方バルブＶ
４を状態１、第五６方バルブＶ５を状態２、第六６方バ
ルブＶ６を状態２とする。
一カラムＣ１より溶出される時、図２２に示すように、
第一６方バルブＶ１を状態１、第二６方バルブＶ２を状
態１、第三６方バルブＶ３を状態２、第四６方バルブＶ
４を状態１、第五６方バルブＶ５を状態２、第六６方バ
ルブＶ６を状態２とする。
【０１２０】この状態で、第一ポンプＰ１より送液され
る第一移動相１０は、図２２で太実線で示すように、配
管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管
ｔ２より第一カラムＣ１に流入する。第一カラムＣ１よ
り、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て
廃棄部へ排出される。
る第一移動相１０は、図２２で太実線で示すように、配
管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管
ｔ２より第一カラムＣ１に流入する。第一カラムＣ１よ
り、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て
廃棄部へ排出される。
【０１２１】また、第二ポンプＰ２より送液される第二
移動相２０は、図２２で太点線で示すように、配管ｔ
７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ
５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ
８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２に流入する。第二カ
ラムＣ２からの送出液は、第一マニュアルインジェクタ
ーＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４
ｃ→４ｄ、配管ｔ１９より検出器ＤＥＴを通り廃棄部へ
排出される。
移動相２０は、図２２で太点線で示すように、配管ｔ
７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ
５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ
８−２、ｔ８−１、第二カラムＣ２に流入する。第二カ
ラムＣ２からの送出液は、第一マニュアルインジェクタ
ーＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４
ｃ→４ｄ、配管ｔ１９より検出器ＤＥＴを通り廃棄部へ
排出される。
【０１２２】また、第三ポンプＰ３より送液される第三
移動相３０は、図２２で太−点鎖線で示すように、配管
ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポンプ４ｂ→４ａ、配管
ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポンプ５ｆ→５ａ、配管
ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２から第三
カラムＣ３に流入する。第三カラムＣ３から第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バ
ルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出器
ＤＥＴに至り、排出される。
移動相３０は、図２２で太−点鎖線で示すように、配管
ｔ１２、第四６方バルブＶ４のポンプ４ｂ→４ａ、配管
ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポンプ５ｆ→５ａ、配管
ｔ１４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２から第三
カラムＣ３に流入する。第三カラムＣ３から第五６方バ
ルブＶ５のポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バ
ルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て検出器
ＤＥＴに至り、排出される。
【０１２３】次に、図２１に示す極性物質の目的成分
（Ｙ）が、第一カラムＣ１より溶出する直前に、第三６
方バルブＶ３を状態１に切り替え、図２３に示す状態と
する。第一カラムＣ１より溶出される成分は、図２３で
太実線で示すように、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポ
ート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポ
ート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ８−２、ｔ８−１を経て第二
カラムＣ２に導入される。このとき第二移動相２０は、
図２３で太点線で示すように、配管ｔ７、第二６方バル
ブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ
３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５
のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６
のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄部へ排出さ
れる。
（Ｙ）が、第一カラムＣ１より溶出する直前に、第三６
方バルブＶ３を状態１に切り替え、図２３に示す状態と
する。第一カラムＣ１より溶出される成分は、図２３で
太実線で示すように、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポ
ート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポ
ート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ８−２、ｔ８−１を経て第二
カラムＣ２に導入される。このとき第二移動相２０は、
図２３で太点線で示すように、配管ｔ７、第二６方バル
ブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ
３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５
のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６
のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄部へ排出さ
れる。
【０１２４】あるいは同時に、図２４に示すように、第
二６方バルブＶ２を状態２に替えて第二移動相２０を第
二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管ｔ８、分岐
管ｔ８−１へと流し、第一移動相１０と合流し、第一移
動相１０を希釈しながら第二カラムＣ２に流入し、目的
成分を第二カラムＣ２に導入してもよい。
二６方バルブＶ２を状態２に替えて第二移動相２０を第
二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管ｔ８、分岐
管ｔ８−１へと流し、第一移動相１０と合流し、第一移
動相１０を希釈しながら第二カラムＣ２に流入し、目的
成分を第二カラムＣ２に導入してもよい。
【０１２５】目的成分をすべて第二カラムＣ２に導入し
たのちは、図２２に示す初期状態と同様にし、第二移動
相２０により目的成分（Ｙ）の分離を第二カラムＣ２で
行う。
たのちは、図２２に示す初期状態と同様にし、第二移動
相２０により目的成分（Ｙ）の分離を第二カラムＣ２で
行う。
【０１２６】図２１に示すように、さらに、疎水性の目
的成分（Ｚ）が第一カラムＣ１より溶出する直前に、第
三６方バルブＶ３を状態２に、第五６方バルブＶ５を状
態１に切り替えて、図２５に示す状態とする。
的成分（Ｚ）が第一カラムＣ１より溶出する直前に、第
三６方バルブＶ３を状態２に、第五６方バルブＶ５を状
態１に切り替えて、図２５に示す状態とする。
【０１２７】第一ポンプＰ１から送液される第一移動相
１０が、図２５で太実線で示すように、第一カラムＣ１
から溶出した後、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポー
ト１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート
３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１
４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２を経て第三カ
ラムＣ３に至り、第一カラムＣ１から目的成分Ｚを第三
カラムＣ３に導入する。この時、第二ポンプＰ２より送
液される第二移動相２０は、図２５で太点線で示すよう
に、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２
ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ２に
至り、引き続き目的成分（Ｙ）の分離分析を第二カラム
Ｃ２にて行う。第三ポンプＰ３より送液される第三移動
相３０は、図２５で太−点鎖線で示すように、配管ｔ１
２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１
１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、配管ｔ１
６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｃ、配管ｔ１
８から廃棄部へ排出される。
１０が、図２５で太実線で示すように、第一カラムＣ１
から溶出した後、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポー
ト１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート
３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１
４、第二マニュアルインジェクターＭＩ２を経て第三カ
ラムＣ３に至り、第一カラムＣ１から目的成分Ｚを第三
カラムＣ３に導入する。この時、第二ポンプＰ２より送
液される第二移動相２０は、図２５で太点線で示すよう
に、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２
ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ２に
至り、引き続き目的成分（Ｙ）の分離分析を第二カラム
Ｃ２にて行う。第三ポンプＰ３より送液される第三移動
相３０は、図２５で太−点鎖線で示すように、配管ｔ１
２、第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１
１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、配管ｔ１
６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｃ、配管ｔ１
８から廃棄部へ排出される。
【０１２８】目的成分Ｚが全て第三カラムＣ３に導入さ
れた後、図２２の初期状態に戻し、目的成分（Ｚ）の分
離分析を第三カラムＣ３で行う。
れた後、図２２の初期状態に戻し、目的成分（Ｚ）の分
離分析を第三カラムＣ３で行う。
【０１２９】図２６は本発明の第２実施例を示し、上記
第１実施例ではクロマトグラフィー検出器ＤＥＴを分離
装置に付設していたのに対し、第２実施例では、質量分
析計を付設したものである。
第１実施例ではクロマトグラフィー検出器ＤＥＴを分離
装置に付設していたのに対し、第２実施例では、質量分
析計を付設したものである。
【０１３０】第２実施例のＬＣ／ＭＳ装置では、混合物
を成分毎に分離するために第一カラムに流す溶離液ＭＰ
Ａとして第一移動相１０を適用し、溶出した液を希釈し
て分析目的成分をトラップカラムの第二カラムに捕捉さ
れやすくする溶液ＭＰＢとして第二移動相２０を適用
し、該第二カラムに捕捉された分析目的成分を溶離する
ための溶離液ＭＰＣとして第三移動相３０を適用してい
る。また、第２実施例では、第二カラムＣ２をトラッピ
ングカラム（ＴＣ）に、第一カラムＣ１を通常の分離カ
ラムに当てはめている。このように、第２実施例の装置
は、第１実施例の装置における検出器ＤＥＴに代えて質
量分析計ＭＳを取り付けている点だけが相違し、他の構
成は第１実施例と同様であるため、装置の説明は同一符
号を付して省略する。
を成分毎に分離するために第一カラムに流す溶離液ＭＰ
Ａとして第一移動相１０を適用し、溶出した液を希釈し
て分析目的成分をトラップカラムの第二カラムに捕捉さ
れやすくする溶液ＭＰＢとして第二移動相２０を適用
し、該第二カラムに捕捉された分析目的成分を溶離する
ための溶離液ＭＰＣとして第三移動相３０を適用してい
る。また、第２実施例では、第二カラムＣ２をトラッピ
ングカラム（ＴＣ）に、第一カラムＣ１を通常の分離カ
ラムに当てはめている。このように、第２実施例の装置
は、第１実施例の装置における検出器ＤＥＴに代えて質
量分析計ＭＳを取り付けている点だけが相違し、他の構
成は第１実施例と同様であるため、装置の説明は同一符
号を付して省略する。
【０１３１】図２６に示す試料の分離装置に質量分析計
ＭＳを付設した第２実施例の装置では、下記の２つの分
析モード、10を選択して行うことが出来る。前記した
ように、第１実施例では８通りの分離分析モードが選択
して行えると共に、第２実施例では２通りの分離分析モ
ードが選択して行えるため、クロマトグラフィー検出器
ＤＥＴあるいは質量分析計ＭＳを付設していない試料の
分離装置自体は、１０通りの分離分析モードを行うため
の試料の分離装置として用いることが出来る。
ＭＳを付設した第２実施例の装置では、下記の２つの分
析モード、10を選択して行うことが出来る。前記した
ように、第１実施例では８通りの分離分析モードが選択
して行えると共に、第２実施例では２通りの分離分析モ
ードが選択して行えるため、クロマトグラフィー検出器
ＤＥＴあるいは質量分析計ＭＳを付設していない試料の
分離装置自体は、１０通りの分離分析モードを行うため
の試料の分離装置として用いることが出来る。
【０１３２】第２実施例の分離分析モードは、下記の
、10の２通りである。 分析目的成分の全量をＭＳに導入する分離分析モー
ド；10上記ＨＣ法に更に目的成分を分離、濃縮、脱塩の
いずれかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード
であり、この10の分離分析モードは、 （ａ）上記第一カラムから溶出した目的成分を第二カラ
ムに捕捉する分離分析モード； （ｂ）上記第二カラムに捕捉された成分を質量分析計に
導入する分離分析モード； （ｃ）上記第二カラムおよび質量分析計を第二移動相で
洗浄し、第一カラムからの溶出液は廃棄部へ排出する分
離分析モード を含むものである。
、10の２通りである。 分析目的成分の全量をＭＳに導入する分離分析モー
ド；10上記ＨＣ法に更に目的成分を分離、濃縮、脱塩の
いずれかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード
であり、この10の分離分析モードは、 （ａ）上記第一カラムから溶出した目的成分を第二カラ
ムに捕捉する分離分析モード； （ｂ）上記第二カラムに捕捉された成分を質量分析計に
導入する分離分析モード； （ｃ）上記第二カラムおよび質量分析計を第二移動相で
洗浄し、第一カラムからの溶出液は廃棄部へ排出する分
離分析モード を含むものである。
【０１３３】上記分析モードを行う場合、図２７に示
すように、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バル
ブＶ２は状態２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６
方バルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、
第六６方バルブＶ６は状態１とする。
すように、第一６方バルブＶ１は状態１、第二６方バル
ブＶ２は状態２、第三６方バルブＶ３は状態２、第四６
方バルブＶ４は状態１、第五６方バルブＶ５は状態２、
第六６方バルブＶ６は状態１とする。
【０１３４】この状態で、オートサンプラーＡＳより試
料を注入し、また、第一ポンプＰ１より第一移動相１０
（ＭＰＡ）を送液する。第一移動相１０は、配管ｔ１か
ら第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、
第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポー
ト１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート
３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２
０を経て質量分析計ＭＳに至る。従って、第一カラムＣ
１で第一移動相１０により分離された溶出液はすべて、
質量分析計ＭＳのＭＳイオン源部１２へ直接導入され
る。即ち、分析目的成分の全量を質量分析計ＭＳへ導入
する。
料を注入し、また、第一ポンプＰ１より第一移動相１０
（ＭＰＡ）を送液する。第一移動相１０は、配管ｔ１か
ら第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、
第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポー
ト１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート
３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ
９、第五６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１
５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ｅ、配管ｔ２
０を経て質量分析計ＭＳに至る。従って、第一カラムＣ
１で第一移動相１０により分離された溶出液はすべて、
質量分析計ＭＳのＭＳイオン源部１２へ直接導入され
る。即ち、分析目的成分の全量を質量分析計ＭＳへ導入
する。
【０１３５】第二ポンプＰ２より送液される第二移動相
２０（ＭＰＢ）が、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポ
ート２ｂ→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１、トラップ
カラムとなる第二カラムＣ２、第一マニュアルインジェ
クターＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポー
ト４ｃ→４ｄ、配管ｔ１９を経て廃棄部へ排出される。
よって、トラップカラムである第二カラムＣ２は洗浄液
である第二移動相２０によって洗浄される。
２０（ＭＰＢ）が、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポ
ート２ｂ→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１、トラップ
カラムとなる第二カラムＣ２、第一マニュアルインジェ
クターＭＩ１、配管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポー
ト４ｃ→４ｄ、配管ｔ１９を経て廃棄部へ排出される。
よって、トラップカラムである第二カラムＣ２は洗浄液
である第二移動相２０によって洗浄される。
【０１３６】上記分離分析モード10のうちの（ａ）の分
離目的成分をトラップカラム（第二カラムＣ２）に捕捉
する場合は、図２８に示すように、第一６方バルブＶ１
は状態１、第二６方バルブＶ２は状態２、第三６方バル
ブＶ３は状態１、第四６方バルブＶ４は状態１、第五６
方バルブＶ５は状態１、第六６方バルブＶ６は状態２と
する。
離目的成分をトラップカラム（第二カラムＣ２）に捕捉
する場合は、図２８に示すように、第一６方バルブＶ１
は状態１、第二６方バルブＶ２は状態２、第三６方バル
ブＶ３は状態１、第四６方バルブＶ４は状態１、第五６
方バルブＶ５は状態１、第六６方バルブＶ６は状態２と
する。
【０１３７】第一ポンプＰ１より第一移動相１０（ＭＰ
Ａ）を送液して、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポン
プ１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１に導入する。
第一カラムＣ１で試料を分離し、溶出液を配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四
６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ８−２、
ｔ８−１、第二カラムＣ２に流入する。この時、第二ポ
ンプＰ２より第二移動相２０（ＭＰＢ）を送液し、配管
ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管ｔ
８、分岐管ｔ８−１、第二カラムＣ２へと流入し、上記
第一移動相１０は分岐管ｔ８−１で第二移動相２０で希
釈され、合流液となり、第二カラムＣ２に流入する。ト
ラップカラムの第二カラムＣ２で、合流液に溶解してい
る分析目的成分はただちに捕捉される。捕捉された目的
成分以外の溶出液は第一マニュアルインジェクターＭＩ
１、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ１
９を経て廃棄部へ排出される。
Ａ）を送液して、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポン
プ１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１に導入する。
第一カラムＣ１で試料を分離し、溶出液を配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０、第四
６方バルブＶ４のポート４ｅ→４ｆ、分岐管ｔ８−２、
ｔ８−１、第二カラムＣ２に流入する。この時、第二ポ
ンプＰ２より第二移動相２０（ＭＰＢ）を送液し、配管
ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ→２ｃ、配管ｔ
８、分岐管ｔ８−１、第二カラムＣ２へと流入し、上記
第一移動相１０は分岐管ｔ８−１で第二移動相２０で希
釈され、合流液となり、第二カラムＣ２に流入する。ト
ラップカラムの第二カラムＣ２で、合流液に溶解してい
る分析目的成分はただちに捕捉される。捕捉された目的
成分以外の溶出液は第一マニュアルインジェクターＭＩ
１、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配管ｔ１
９を経て廃棄部へ排出される。
【０１３８】また、不揮発性塩を含まぬ溶離用の第三移
動相３０（ＭＰＣ）を、第三ポンプＰ３より送液し、第
四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第
五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第
六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経
て質量分析計ＭＳへ導入し、ＭＳイオン源１２および流
路を洗浄する。
動相３０（ＭＰＣ）を、第三ポンプＰ３より送液し、第
四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、配管ｔ１１、第
五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第
六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経
て質量分析計ＭＳへ導入し、ＭＳイオン源１２および流
路を洗浄する。
【０１３９】上記分析モード10の（ｂ）のトラップカラ
ムに捕捉された分析目的成分を質量分析計ＭＳのＭＳイ
オン源部に導入する場合、図２９に示すように、第一６
方バルブＶ１を状態１、第二６方バルブＶ２を状態１、
第三６方バルブＶ３を状態２、第四６方バルブＶ４を状
態２、第五６方バルブＶ５を状態１、第六６方バルブＶ
６を状態２とする。
ムに捕捉された分析目的成分を質量分析計ＭＳのＭＳイ
オン源部に導入する場合、図２９に示すように、第一６
方バルブＶ１を状態１、第二６方バルブＶ２を状態１、
第三６方バルブＶ３を状態２、第四６方バルブＶ４を状
態２、第五６方バルブＶ５を状態１、第六６方バルブＶ
６を状態２とする。
【０１４０】第一カラムＣ１から溶出する第一移動相１
０は配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第三
カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、
配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、
配管ｔ１７を経て廃棄部に排出される。
０は配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第三
カラムＣ３、第五６方バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、
配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、
配管ｔ１７を経て廃棄部に排出される。
【０１４１】不揮発性塩を含まぬ溶離用の第三移動相３
０が第三ポンプＰ３より送液され、配管ｔ１２、第四６
方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マ
ニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２を流
れ、該第二カラムＣ２に逆方向に流入する。第二カラム
Ｃ２より溶出した目的成分を含む第三移動相３０は分岐
管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４
ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５
ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６
ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て質量分析計ＭＳのＭＳイオ
ン源部１２に導入される。このＭＳイオン源部１２で、
分析目的成分はイオン化されマススペクトルを与える。
０が第三ポンプＰ３より送液され、配管ｔ１２、第四６
方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マ
ニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２を流
れ、該第二カラムＣ２に逆方向に流入する。第二カラム
Ｃ２より溶出した目的成分を含む第三移動相３０は分岐
管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４
ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５
ｆ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６
ｄ→６ｅ、配管ｔ２０を経て質量分析計ＭＳのＭＳイオ
ン源部１２に導入される。このＭＳイオン源部１２で、
分析目的成分はイオン化されマススペクトルを与える。
【０１４２】一方、第二ポンプＰ２より送液される第二
移動相２０は、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート
２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１
ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ
→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ
→４ｄ、配管１９を経て廃棄部へ排出される。
移動相２０は、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート
２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１
ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ
→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バルブＶ４のポート４ｅ
→４ｄ、配管１９を経て廃棄部へ排出される。
【０１４３】上記分析モード10の（ｃ）のトラップカラ
ム（第二カラムＣ２）を洗浄液で洗浄、脱塩を行う時
は、図３０に示すように、第一６方バルブＶ１を状態
１、第二６方バルブＶ２を状態２、第三６方バルブＶ３
を状態２、第四６方バルブＶ４を状態１、第五６方バル
ブＶ５を状態１、第六６方バルブＶ６を状態２とする。
ム（第二カラムＣ２）を洗浄液で洗浄、脱塩を行う時
は、図３０に示すように、第一６方バルブＶ１を状態
１、第二６方バルブＶ２を状態２、第三６方バルブＶ３
を状態２、第四６方バルブＶ４を状態１、第五６方バル
ブＶ５を状態１、第六６方バルブＶ６を状態２とする。
【０１４４】第一ポンプＰ１から第一移動相１０を送液
し、第一カラムＣ１をコンディショニングする。該第一
カラムＣ１から溶出する第一移動相１０を配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポ
ート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポー
ト５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第三カラムＣ３、第五６方
バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方
バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄
部へ排出される。
し、第一カラムＣ１をコンディショニングする。該第一
カラムＣ１から溶出する第一移動相１０を配管ｔ３、第
一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三
６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポ
ート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポー
ト５ｂ→５ａ、配管ｔ１４、第三カラムＣ３、第五６方
バルブＶ５のポート５ｄ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方
バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄
部へ排出される。
【０１４５】また、第二ポンプＰ２より第二移動相２０
を送液し、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ
→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ
２へ流入し、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、配
管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配
管ｔ１９を通り、廃棄部へ排出している。
を送液し、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ
→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ
２へ流入し、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、配
管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配
管ｔ１９を通り、廃棄部へ排出している。
【０１４６】上記した過程で第二移動相２０に不揮発性
の塩を含まない溶出液を用いれば、トラップカラムの第
二カラムＣ２で捕捉された目的成分の脱塩が行える。こ
の第二移動相２０は、分岐管ｔ８−２から第四６方バル
ブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６方バルブＶ
２のポート２ａ→２ｆへ至るが、ポート２ｆは密栓され
ているため、これ以上は進めない。
の塩を含まない溶出液を用いれば、トラップカラムの第
二カラムＣ２で捕捉された目的成分の脱塩が行える。こ
の第二移動相２０は、分岐管ｔ８−２から第四６方バル
ブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一６方バルブ
Ｖ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６方バルブＶ
２のポート２ａ→２ｆへ至るが、ポート２ｆは密栓され
ているため、これ以上は進めない。
【０１４７】一方、第三ポンプＰ３より送液される第三
移動相３０は第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、
配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、
配管ｔ２０、質量分析計ＭＳのＭＳイオン源１２に導入
し、ＭＳイオン源１２を洗浄する。
移動相３０は第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ｅ、
配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、
配管ｔ２０、質量分析計ＭＳのＭＳイオン源１２に導入
し、ＭＳイオン源１２を洗浄する。
【０１４８】以上のように、試料の自動分離装置に質量
分析計ＭＳを直結することにより、２つの分離分析モー
ドを、バルブの切り替えのみでおこなうことが可能であ
る。上記分離分析モード、10は、第一６方バルブＶ１
〜第六６方バルブＶ６の初期状態のみで規定されるの
で、いずれの分離分析モード間の切り替えもシステムコ
ントローラーのタイムプログラムによって容易に設定で
きる。
分析計ＭＳを直結することにより、２つの分離分析モー
ドを、バルブの切り替えのみでおこなうことが可能であ
る。上記分離分析モード、10は、第一６方バルブＶ１
〜第六６方バルブＶ６の初期状態のみで規定されるの
で、いずれの分離分析モード間の切り替えもシステムコ
ントローラーのタイムプログラムによって容易に設定で
きる。
【０１４９】上記第２実施例のＬＣ／ＭＳ装置は、第１
実施例の液体クロマトグラフィー装置のクロマトグラフ
ィー検出器ＤＥＴに替えて質量分析計ＭＳを取り付けた
ものであるが、図３１に示す第３実施例は、配管ｔ１４
に介設している第二マニュアルインジェクターＭＩ２お
よび第三カラムＣ３を除いて、連結管１５を取り付けた
ものである。
実施例の液体クロマトグラフィー装置のクロマトグラフ
ィー検出器ＤＥＴに替えて質量分析計ＭＳを取り付けた
ものであるが、図３１に示す第３実施例は、配管ｔ１４
に介設している第二マニュアルインジェクターＭＩ２お
よび第三カラムＣ３を除いて、連結管１５を取り付けた
ものである。
【０１５０】上記第３実施例の構成とした場合も、当然
のことながら、第２実施例と同様に上記、10の２通り
の分離分析モードを選択して行う事ができる。上記お
よび10の（ａ）の分離分析モードは第２実施例と同一で
あるため、説明を省略する。
のことながら、第２実施例と同様に上記、10の２通り
の分離分析モードを選択して行う事ができる。上記お
よび10の（ａ）の分離分析モードは第２実施例と同一で
あるため、説明を省略する。
【０１５１】上記10の（ｃ）の分析モードでは、図３２
に示すように、第一６方バルブＶ１を状態１、第二６方
バルブＶ２を状態１、第三６方バルブＶ３を状態２、第
四６方バルブＶ４を状態２、第五６方バルブＶ５を状態
２、第六６方バルブＶ６を状態２と、第２実施例と第五
６方バルブＶ５の切り替え状態だけを変えている。上記
分離分析では、第一カラムＣ１から溶出する第一移動相
１０は配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て
廃棄部に排出される。
に示すように、第一６方バルブＶ１を状態１、第二６方
バルブＶ２を状態１、第三６方バルブＶ３を状態２、第
四６方バルブＶ４を状態２、第五６方バルブＶ５を状態
２、第六６方バルブＶ６を状態２と、第２実施例と第五
６方バルブＶ５の切り替え状態だけを変えている。上記
分離分析では、第一カラムＣ１から溶出する第一移動相
１０は配管ｔ３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１
ｄ、配管ｔ４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３
ｅ、短絡通路３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五
６方バルブＶ５のポート５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六
６方バルブＶ６のポート６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て
廃棄部に排出される。
【０１５２】不揮発性塩を含まぬ溶離用の第三移動相３
０が第三ポンプＰ３より送液され、配管ｔ１２、第四６
方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マ
ニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２を流
れ、該第二カラムＣ２に逆方向に流入する。第二カラム
Ｃ２より溶出した目的成分を含む第三移動相３０は分岐
管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４
ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５
ｆ→５ａ、連結管１５、ポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１
６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２
０を経て質量分析計ＭＳのＭＳイオン源部１２に導入さ
れる。このＭＳイオン源部１２で、分析目的成分はイオ
ン化されマススペクトルを与える。
０が第三ポンプＰ３より送液され、配管ｔ１２、第四６
方バルブＶ４のポート４ｂ→４ｃ、配管ｔ１３、第一マ
ニュアルインジェクターＭＩ１、第二カラムＣ２を流
れ、該第二カラムＣ２に逆方向に流入する。第二カラム
Ｃ２より溶出した目的成分を含む第三移動相３０は分岐
管ｔ８−１、ｔ８−２、第四６方バルブＶ４のポート４
ｆ→４ａ、配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５
ｆ→５ａ、連結管１５、ポート５ｄ→５ｅ、配管ｔ１
６、第六６方バルブＶ６のポート６ｄ→６ｅ、配管ｔ２
０を経て質量分析計ＭＳのＭＳイオン源部１２に導入さ
れる。このＭＳイオン源部１２で、分析目的成分はイオ
ン化されマススペクトルを与える。
【０１５３】一方、第二ポンプＰ２より送液される第二
移動相２０は、第２実施例と同様に、配管ｔ７、第二６
方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方
バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｅ→４ｄ、配管１９を経て廃棄部へ
排出される。
移動相２０は、第２実施例と同様に、配管ｔ７、第二６
方バルブＶ２のポート２ｂ→２ａ、配管ｔ５、第一６方
バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１０、第四６方バ
ルブＶ４のポート４ｅ→４ｄ、配管１９を経て廃棄部へ
排出される。
【０１５４】上記分析モード10の（ｂ）のトラップカラ
ム（第二カラムＣ２）を第二移動相で洗浄、脱塩を行う
時は、図３３に示すように、第一６方バルブＶ１を状態
１、第二６方バルブＶ２を状態２、第三６方バルブＶ３
を状態２、第四６方バルブＶ４を状態１、第五６方バル
ブＶ５を状態２、第六６方バルブＶ６を状態２とし、第
２実施例と第五６方バルブＶ５の状態のみを変えてい
る。
ム（第二カラムＣ２）を第二移動相で洗浄、脱塩を行う
時は、図３３に示すように、第一６方バルブＶ１を状態
１、第二６方バルブＶ２を状態２、第三６方バルブＶ３
を状態２、第四６方バルブＶ４を状態１、第五６方バル
ブＶ５を状態２、第六６方バルブＶ６を状態２とし、第
２実施例と第五６方バルブＶ５の状態のみを変えてい
る。
【０１５５】上記分析モード10の（ｃ）では、該第一カ
ラムＣ１から溶出する第一移動相１０を配管ｔ３、第一
６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６
方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポー
ト３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート
５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート
６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄部へ排出される。
ラムＣ１から溶出する第一移動相１０を配管ｔ３、第一
６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６
方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路３ｇ、ポー
ト３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第五６方バルブＶ５のポート
５ｂ→５ｃ、配管ｔ１５、第六６方バルブＶ６のポート
６ｆ→６ａ、配管ｔ１７を経て廃棄部へ排出される。
【０１５６】また、第二ポンプＰ２より第二移動相２０
を送液し、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ
→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ
２へ流入し、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、配
管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配
管ｔ１９を通り、廃棄部へ排出している。
を送液し、配管ｔ７、第二６方バルブＶ２のポート２ｂ
→２ｃ、配管ｔ８、分岐管ｔ８−１を経て第二カラムＣ
２へ流入し、第一マニュアルインジェクターＭＩ１、配
管ｔ１３、第四６方バルブＶ４のポート４ｃ→４ｄ、配
管ｔ１９を通り、廃棄部へ排出している。
【０１５７】上記した過程で、第２実施例と同様、第二
移動相２０に不揮発性塩の溶出液を用いれば、トラップ
カラムの第二カラムＣ２で捕捉された目的成分の脱塩が
行える。この第二移動相２０は、分岐管ｔ８−２から第
四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第
三６方バルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一
６方バルブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６
方バルブＶ２のポート２ａ→２ｆへ至るが、ポート２ｆ
は密栓されているため、これ以上は進めない。
移動相２０に不揮発性塩の溶出液を用いれば、トラップ
カラムの第二カラムＣ２で捕捉された目的成分の脱塩が
行える。この第二移動相２０は、分岐管ｔ８−２から第
四６方バルブＶ４のポート４ｆ→４ｅ、配管ｔ１０、第
三６方バルブＶ３のポート３ｃ→３ｂ、配管ｔ６、第一
６方バルブＶ１のポート１ａ→１ｂ、配管ｔ５、第二６
方バルブＶ２のポート２ａ→２ｆへ至るが、ポート２ｆ
は密栓されているため、これ以上は進めない。
【０１５８】一方、第三ポンプＰ３より送液される第三
移動相３０は第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、
配管ｔ１４、連結管１５、第五６方バルブＶ５のポート
５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート
６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、質量分析計ＭＳのＭＳイオン
源１２に導入し、ＭＳイオン源１２を洗浄する。
移動相３０は第四６方バルブＶ４のポート４ｂ→４ａ、
配管ｔ１１、第五６方バルブＶ５のポート５ｆ→５ａ、
配管ｔ１４、連結管１５、第五６方バルブＶ５のポート
５ｄ→５ｅ、配管ｔ１６、第六６方バルブＶ６のポート
６ｄ→６ｅ、配管ｔ２０、質量分析計ＭＳのＭＳイオン
源１２に導入し、ＭＳイオン源１２を洗浄する。
【０１５９】上記第１実施例及び第２実施例は３本のカ
ラム、６台の６方バルブおよび、３個のポンプを備えた
試料の自動分離装置を備え、また、第３実施例は第２実
施例の装置のうち１本のカラムを取り除いて連結管を用
いた構成のみを代えたものであるが、図３４に示す第４
実施例の試料の自動分離装置および該装置にクロマトグ
ラフィー検出器ＤＥＴを付設した液体クロマトグラフィ
ー装置は、カラムを前処理用の第一カラムＣ１と分離分
析用の第三カラムＣ３の２本の第二カラムと、第一６方
バルブＶ１と第三６方バルブＶ３の２台の６方バルブ、
および、第一ポンプＰ１と第二ポンプＰ２の２個のポン
プを備えた簡単な構成の試料の自動分離装置を備え、分
離分析モードのうち、基本モードで最も多用されるＨＣ
法とＢＦ法との２通りの分離分析モードを選択して行え
るようにした液体クロマトグラフィー装置である。
ラム、６台の６方バルブおよび、３個のポンプを備えた
試料の自動分離装置を備え、また、第３実施例は第２実
施例の装置のうち１本のカラムを取り除いて連結管を用
いた構成のみを代えたものであるが、図３４に示す第４
実施例の試料の自動分離装置および該装置にクロマトグ
ラフィー検出器ＤＥＴを付設した液体クロマトグラフィ
ー装置は、カラムを前処理用の第一カラムＣ１と分離分
析用の第三カラムＣ３の２本の第二カラムと、第一６方
バルブＶ１と第三６方バルブＶ３の２台の６方バルブ、
および、第一ポンプＰ１と第二ポンプＰ２の２個のポン
プを備えた簡単な構成の試料の自動分離装置を備え、分
離分析モードのうち、基本モードで最も多用されるＨＣ
法とＢＦ法との２通りの分離分析モードを選択して行え
るようにした液体クロマトグラフィー装置である。
【０１６０】上記第４実施例の装置は、第一カラムＣ１
の一端を配管ｔ２、第一６方バルブＶ１のポート１ｆに
接続し、第一カラムＣ１の他端を配管ｔ３を介して第一
６方バルブＶ１のポート１ｃに接続している。第一ポン
プＰ１は、オートサンプラーＡＳ、配管ｔ１を介して第
一６方バルブＶ１のポート１ｅに接続している。上記第
一６方バルブＶ１のポート１ａは配管ｔ６を介して第三
６方バルブＶ３のポート３ｂと接続し、ポート１ｄは配
管ｔ４を介してポート３ｄと接続し、ポート１ｂは配管
ｔ５を介して第二ポンプＰ２と接続している。
の一端を配管ｔ２、第一６方バルブＶ１のポート１ｆに
接続し、第一カラムＣ１の他端を配管ｔ３を介して第一
６方バルブＶ１のポート１ｃに接続している。第一ポン
プＰ１は、オートサンプラーＡＳ、配管ｔ１を介して第
一６方バルブＶ１のポート１ｅに接続している。上記第
一６方バルブＶ１のポート１ａは配管ｔ６を介して第三
６方バルブＶ３のポート３ｂと接続し、ポート１ｄは配
管ｔ４を介してポート３ｄと接続し、ポート１ｂは配管
ｔ５を介して第二ポンプＰ２と接続している。
【０１６１】上記第三６方バルブＶ３のポート３ａは配
管ｔ９を介して第三カラムＣ３に接続し、第三カラムＣ
３を配管ｔ１５を介して検出器ＤＥＴに接続している。
また、第三６方バルブＶ３のポート３ｃは配管ｔ１０を
介して廃棄部に接続している。ポート３ｅと３ｆとは短
絡通路３ｇを介して常時連通している。上記オートサン
プラーＡＳ、第一ポンプＰ１および第二ポンプＰ２、第
一６方バルブＶ１および第三６方バルブＶ３はコントロ
ーラＣＴＲにより自動作動し、該コントローラＣＴＲは
コンピュータＣＰＵにより自動制御している。
管ｔ９を介して第三カラムＣ３に接続し、第三カラムＣ
３を配管ｔ１５を介して検出器ＤＥＴに接続している。
また、第三６方バルブＶ３のポート３ｃは配管ｔ１０を
介して廃棄部に接続している。ポート３ｅと３ｆとは短
絡通路３ｇを介して常時連通している。上記オートサン
プラーＡＳ、第一ポンプＰ１および第二ポンプＰ２、第
一６方バルブＶ１および第三６方バルブＶ３はコントロ
ーラＣＴＲにより自動作動し、該コントローラＣＴＲは
コンピュータＣＰＵにより自動制御している。
【０１６２】上記第４実施例は、上記したように、ＨＣ
法とＢＦ法の分離分析モードを選択して行うことができ
る。まず、ＨＣ法について、図３５及び図３６を参照し
て説明する。尚、以下の説明において、前記したよう
に、第一６方バルブＶ１および第三６方バルブＶ３の各
ポートが、夫々、ポートａとｂ、ｃとｄ、ｅとｆが連通
する状態を状態１とし、ｂとｃ、ｄとｅ、ｆとａが連通
する状態を状態２と称する。 （１）まず、初期状態において、図３５に示すように、
コントローラＣＴＲからの信号で、第一及び第三６方バ
ルブＶ１、Ｖ３は状態１となる。まず、第一移動相１０
を図３５中で太実線で示すように、第一ポンプＰ１、オ
ートサンプラーＡＳ、第一バルブＶ１を経て前処理用の
第一カラムＣ１に送液する。詳しくは、第一移動相１０
は配管ｔ１、第一バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管
ｔ２を通り、前処理用の第一カラムＣ１に導入され、第
一移動相１０により第一カラムＣ１をコンディショニン
グする。
法とＢＦ法の分離分析モードを選択して行うことができ
る。まず、ＨＣ法について、図３５及び図３６を参照し
て説明する。尚、以下の説明において、前記したよう
に、第一６方バルブＶ１および第三６方バルブＶ３の各
ポートが、夫々、ポートａとｂ、ｃとｄ、ｅとｆが連通
する状態を状態１とし、ｂとｃ、ｄとｅ、ｆとａが連通
する状態を状態２と称する。 （１）まず、初期状態において、図３５に示すように、
コントローラＣＴＲからの信号で、第一及び第三６方バ
ルブＶ１、Ｖ３は状態１となる。まず、第一移動相１０
を図３５中で太実線で示すように、第一ポンプＰ１、オ
ートサンプラーＡＳ、第一バルブＶ１を経て前処理用の
第一カラムＣ１に送液する。詳しくは、第一移動相１０
は配管ｔ１、第一バルブＶ１のポート１ｅ→１ｆ、配管
ｔ２を通り、前処理用の第一カラムＣ１に導入され、第
一移動相１０により第一カラムＣ１をコンディショニン
グする。
【０１６３】第一カラムＣ１から溶出した第一移動相１
０は配管ｔ３、第一バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配
管ｔ４、第三バルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１
０を経て廃棄部へ排出される。ついで、試料をオートサ
ンプラーＡＳから注入し、第一バルブＶ１を経て第一カ
ラムＣ１に導入する。該第一カラムＣ１より目的成分が
溶出する前までの不要成分は、上記第一移動相１０の流
路を経て廃棄部へ排出される。
０は配管ｔ３、第一バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配
管ｔ４、第三バルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１
０を経て廃棄部へ排出される。ついで、試料をオートサ
ンプラーＡＳから注入し、第一バルブＶ１を経て第一カ
ラムＣ１に導入する。該第一カラムＣ１より目的成分が
溶出する前までの不要成分は、上記第一移動相１０の流
路を経て廃棄部へ排出される。
【０１６４】同時に、第二ポンプＰ２から第二移動相２
０を図３５中で太点線で示すように、第一バルブＶ１、
第三バルブＶ３を経て分析用の第三カラムＣ３に送液す
る。詳しくは、第二ポンプＰ２より配管ｔ５、第一バル
ブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三バルブＶ３
のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアルインジ
ェクターＭＩ２を経て第三カラムＣ３へ導入される。
０を図３５中で太点線で示すように、第一バルブＶ１、
第三バルブＶ３を経て分析用の第三カラムＣ３に送液す
る。詳しくは、第二ポンプＰ２より配管ｔ５、第一バル
ブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三バルブＶ３
のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアルインジ
ェクターＭＩ２を経て第三カラムＣ３へ導入される。
【０１６５】（２）次いで、図３６に示すように、目的
成分（Ｂ）が前処理用の第一カラムＣ１から溶出する直
前に、第三６方バルブＶ３を切り替え、状態２にする。
この状態とすることで、第一ポンプＰ１から送液する第
一移動相１０で、図３６中で太実線で示すように、第一
カラムＣ１から目的成分を分析用の第三カラムＣ３に導
入する。即ち、第一移動相１０は第一ポンプＰ１からオ
ートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ
３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路
３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアルイ
ンジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、配管ｔ１５、検
出器ＤＥＴを流れる。よって、この第一移動相１０によ
り目的成分は第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入
される。
成分（Ｂ）が前処理用の第一カラムＣ１から溶出する直
前に、第三６方バルブＶ３を切り替え、状態２にする。
この状態とすることで、第一ポンプＰ１から送液する第
一移動相１０で、図３６中で太実線で示すように、第一
カラムＣ１から目的成分を分析用の第三カラムＣ３に導
入する。即ち、第一移動相１０は第一ポンプＰ１からオ
ートサンプラーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１の
ポート１ｅ→１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ
３、第一６方バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ
４、第三６方バルブＶ３のポート３ｄ→３ｅ、短絡通路
３ｇ、ポート３ｆ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアルイ
ンジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３、配管ｔ１５、検
出器ＤＥＴを流れる。よって、この第一移動相１０によ
り目的成分は第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入
される。
【０１６６】この時、第二ポンプＰ２から送液される第
二移動相２０は用いないので、第二移動相２０は、図３
６中で太点線で示すように、第二ポンプＰ２より、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０より廃棄部へ排出される。
二移動相２０は用いないので、第二移動相２０は、図３
６中で太点線で示すように、第二ポンプＰ２より、配管
ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ
６、第三６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ｃ、配管ｔ１
０より廃棄部へ排出される。
【０１６７】（３）目的成分を含む画分が全て第三カラ
ムＣ３へ到達した後、再び第三６方バルブＶ３を切り替
え、状態１に戻し、図３５の状態とする。第二ポンプＰ
２から送液される第二移動相２０は前述の（１）の太点
線で示す流路を経て、第三カラムＣ３へ至り、目的成分
は第三カラムＣ３中で第二移動相２０により分離分析さ
れ、配管ｔ１５を経て検出器ＤＥＴに導入される。上記
検出器ＤＥＴにはインテグレーター（記録機）を接続し
ているので、第三カラムＣ３のクロマトグラムが得られ
る。
ムＣ３へ到達した後、再び第三６方バルブＶ３を切り替
え、状態１に戻し、図３５の状態とする。第二ポンプＰ
２から送液される第二移動相２０は前述の（１）の太点
線で示す流路を経て、第三カラムＣ３へ至り、目的成分
は第三カラムＣ３中で第二移動相２０により分離分析さ
れ、配管ｔ１５を経て検出器ＤＥＴに導入される。上記
検出器ＤＥＴにはインテグレーター（記録機）を接続し
ているので、第三カラムＣ３のクロマトグラムが得られ
る。
【０１６８】次に、上記ＢＦ法を用いる分離分析モード
を図３７および図３８を参照して説明する。 （１）まず、図３７に示す初期状態では、第一、第三６
方バルブＶ１、Ｖ３を状態１とする。第一ポンプＰ１か
ら第一移動相１０を、図３７中に太実線で示すように、
第一バルブＶ１を通して第一カラムＣ１に送液した後、
廃液している。即ち、第一移動相１０をオートサンプラ
ーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→
１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方
バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０より廃液して
いる。
を図３７および図３８を参照して説明する。 （１）まず、図３７に示す初期状態では、第一、第三６
方バルブＶ１、Ｖ３を状態１とする。第一ポンプＰ１か
ら第一移動相１０を、図３７中に太実線で示すように、
第一バルブＶ１を通して第一カラムＣ１に送液した後、
廃液している。即ち、第一移動相１０をオートサンプラ
ーＡＳ、配管ｔ１、第一６方バルブＶ１のポート１ｅ→
１ｆ、配管ｔ２、第一カラムＣ１、配管ｔ３、第一６方
バルブＶ１のポート１ｃ→１ｄ、配管ｔ４、第三６方バ
ルブＶ３のポート３ｄ→３ｃ、配管ｔ１０より廃液して
いる。
【０１６９】第一カラムＣ１から溶出する不要成分は、
上記第一移動相１０により、上記流路により排出され
る。目的成分は第一カラムＣ１のフロント側（上流側）
に保持されたままの状態である。同時に、第二ポンプＰ
２から第二移動相２０を図３７中に太点線で示すよう
に、第二移動相２０と第二ポンプＰ２より配管ｔ５、第
一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三
６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マ
ニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至
り、第三カラムＣ３をコンディショニングした後、配管
ｔ１５、検出器ＤＥＴを経て廃液に排出される。
上記第一移動相１０により、上記流路により排出され
る。目的成分は第一カラムＣ１のフロント側（上流側）
に保持されたままの状態である。同時に、第二ポンプＰ
２から第二移動相２０を図３７中に太点線で示すよう
に、第二移動相２０と第二ポンプＰ２より配管ｔ５、第
一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１ａ、配管ｔ６、第三
６方バルブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マ
ニュアルインジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至
り、第三カラムＣ３をコンディショニングした後、配管
ｔ１５、検出器ＤＥＴを経て廃液に排出される。
【０１７０】（２）上記（１）の動作において第一カラ
ムＣ１より不要成分の溶出が完了すると同時に、第一６
方バルブＶ１を状態２に切り替えて、図３８の状態とす
る。第二ポンプＰ２より送液する第二移動相２０の流路
を図３８中で太点線で示すように切り替え、第二移動相
２０を第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へと導入し
て、第一カラムＣ１のフロント側に保持されている目的
成分を第二移動相２０により第三カラムＣ３に導入す
る。
ムＣ１より不要成分の溶出が完了すると同時に、第一６
方バルブＶ１を状態２に切り替えて、図３８の状態とす
る。第二ポンプＰ２より送液する第二移動相２０の流路
を図３８中で太点線で示すように切り替え、第二移動相
２０を第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へと導入し
て、第一カラムＣ１のフロント側に保持されている目的
成分を第二移動相２０により第三カラムＣ３に導入す
る。
【０１７１】即ち、第二移動相２０を第二ポンプＰ２よ
り、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１
ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管ｔ２、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアル
インジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至る。この第
二移動相２０の移動で、第一カラムＣ１に保持された目
的成分が第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入され
る。さらに、第二移動相２０は配管ｔ１５を経て検出器
ＤＥＴへ送液される。上記過程で、第二移動相２０は第
一カラムＣ１を逆方向に流れ、第一カラムＣ１のフロン
トに保持された目的成分を拡散することなく第三カラム
Ｃ３へ導入する。
り、配管ｔ５、第一６方バルブＶ１のポート１ｂ→１
ｃ、配管ｔ３、第一カラムＣ１、配管ｔ２、第一６方バ
ルブＶ１のポート１ｆ→１ａ、配管ｔ６、第三６方バル
ブＶ３のポート３ｂ→３ａ、配管ｔ９、第二マニュアル
インジェクターＭＩ２、第三カラムＣ３に至る。この第
二移動相２０の移動で、第一カラムＣ１に保持された目
的成分が第一カラムＣ１から第三カラムＣ３へ導入され
る。さらに、第二移動相２０は配管ｔ１５を経て検出器
ＤＥＴへ送液される。上記過程で、第二移動相２０は第
一カラムＣ１を逆方向に流れ、第一カラムＣ１のフロン
トに保持された目的成分を拡散することなく第三カラム
Ｃ３へ導入する。
【０１７２】（３）目的成分が全て第三カラムＣ３へ導
入された後、再び、第一６方バルブＶ１を状態１に戻
し、図３７に示す状態とする。第三カラムＣ３には、第
二移動相２０が前述の（１）の太点線で示す流路により
送液され、該第二移動相２０により第三カラムＣ３に導
入されている目的成分が分離分析される。第二移動相２
０が第三カラムＣ３より配管ｔ１５を通って検出器ＤＥ
Ｔに導入されることにより、第三カラムＣ３の分離分析
状態が検出器ＤＥＴで常時検出され、目的成分のクロマ
トグラムが得られる。この時、第一カラムＣ１には第一
移動相１０が第一ポンプＰ１より太実線で示すように送
液されて、次の分析のために第一カラムＣ１のコンディ
ショニングを行う。
入された後、再び、第一６方バルブＶ１を状態１に戻
し、図３７に示す状態とする。第三カラムＣ３には、第
二移動相２０が前述の（１）の太点線で示す流路により
送液され、該第二移動相２０により第三カラムＣ３に導
入されている目的成分が分離分析される。第二移動相２
０が第三カラムＣ３より配管ｔ１５を通って検出器ＤＥ
Ｔに導入されることにより、第三カラムＣ３の分離分析
状態が検出器ＤＥＴで常時検出され、目的成分のクロマ
トグラムが得られる。この時、第一カラムＣ１には第一
移動相１０が第一ポンプＰ１より太実線で示すように送
液されて、次の分析のために第一カラムＣ１のコンディ
ショニングを行う。
【０１７３】上記のように、ＨＣ法とＢＦ法の２通りの
分離分析モードを選択して行う場合には、６方バルブを
２台、カラムを前処理用の第一カラムと分離分析用の第
三カラムの２本のカラム、ポンプを第一移動相を送液す
る第一ポンプと、第二移動相を送液する第二ポンプの２
本だけで良くなり、装置の部品を大幅に減少できると共
に、配管の個数も減少でき、装置全体をシンプルな構成
とすることができる。
分離分析モードを選択して行う場合には、６方バルブを
２台、カラムを前処理用の第一カラムと分離分析用の第
三カラムの２本のカラム、ポンプを第一移動相を送液す
る第一ポンプと、第二移動相を送液する第二ポンプの２
本だけで良くなり、装置の部品を大幅に減少できると共
に、配管の個数も減少でき、装置全体をシンプルな構成
とすることができる。
【０１７４】
【発明の効果】以上の説明より明らかなように、本発明
の請求項１に係わる試料の自動分離装置によれば、試料
の粗分離を行う前処理用の第一カラムと、分離或いは／
および濃縮を行う第二カラムと、分離分析用の第三カラ
ムの３本のカラムを備え、これらカラムを複数の配管で
接続すると共に、これら配管に自動切り替えのバルブを
介設し、かつ、上記カラムに所要の移動相を送液するポ
ンプを設け、上記バルブおよびポンプを予めプログラム
入力した手順に従って自動制御する構成としているた
め、多数の分離分析モードのうちから選択されたモード
に対応するカラムスイッチングを全自動で行うことがで
きる。このように、多数の分離分析モードを１台の装置
で行うことができるため、試料に応じて多数のモードの
うちから最も適したモードを選択できる。
の請求項１に係わる試料の自動分離装置によれば、試料
の粗分離を行う前処理用の第一カラムと、分離或いは／
および濃縮を行う第二カラムと、分離分析用の第三カラ
ムの３本のカラムを備え、これらカラムを複数の配管で
接続すると共に、これら配管に自動切り替えのバルブを
介設し、かつ、上記カラムに所要の移動相を送液するポ
ンプを設け、上記バルブおよびポンプを予めプログラム
入力した手順に従って自動制御する構成としているた
め、多数の分離分析モードのうちから選択されたモード
に対応するカラムスイッチングを全自動で行うことがで
きる。このように、多数の分離分析モードを１台の装置
で行うことができるため、試料に応じて多数のモードの
うちから最も適したモードを選択できる。
【０１７５】例えば、薬物によっては、血漿中で分解さ
れやすく、速やかに用手法によって除蛋白などの前処理
する必要があるが、このような薬物に対しては、除蛋白
を目的にするのではなく、感度を上げるため、ＨＣ法あ
るいはＢＦ法を用いることもできる。また、感度をあげ
るために多量に試料を注入する場合では、ＨＣ法→ＢＦ
法を用い、注入回数を増やすと、数mlの試料の測定が可
能となり、生体試料分析のみならず、環境測定、食品試
料分析などにおいても利用できる。
れやすく、速やかに用手法によって除蛋白などの前処理
する必要があるが、このような薬物に対しては、除蛋白
を目的にするのではなく、感度を上げるため、ＨＣ法あ
るいはＢＦ法を用いることもできる。また、感度をあげ
るために多量に試料を注入する場合では、ＨＣ法→ＢＦ
法を用い、注入回数を増やすと、数mlの試料の測定が可
能となり、生体試料分析のみならず、環境測定、食品試
料分析などにおいても利用できる。
【０１７６】上記試料の自動分離装置は、試料の分離が
必要な分野において、他の装置と組み合わせることによ
り、広範囲の利用が可能となる。特に、分離した試料を
検出する手段を付設すると、各種分野において、試料の
分離状態を検出する必要がある場合に好適に利用でき
る。（請求項２） よって、この検出手段としては、試料の自動分離装置が
用いられる分野に対応して、適宜な検出手段が用いられ
る。
必要な分野において、他の装置と組み合わせることによ
り、広範囲の利用が可能となる。特に、分離した試料を
検出する手段を付設すると、各種分野において、試料の
分離状態を検出する必要がある場合に好適に利用でき
る。（請求項２） よって、この検出手段としては、試料の自動分離装置が
用いられる分野に対応して、適宜な検出手段が用いられ
る。
【０１７７】生体試料等の分離分析を行う場合には、上
記試料の自動分離装置にクロマトグラム検出器を付設
し、該検出器で上記複数のカラムを備えた自動分離装置
からの溶出液を検出すると、前記実験例に記載したよう
に、みかけのピークシャープ性はいずれの方法において
も、分析カラム単独の場合に比べて、真のピークシャー
プ性は同等かそれ以上の効果が得られる。（請求項３お
よび請求項４）
記試料の自動分離装置にクロマトグラム検出器を付設
し、該検出器で上記複数のカラムを備えた自動分離装置
からの溶出液を検出すると、前記実験例に記載したよう
に、みかけのピークシャープ性はいずれの方法において
も、分析カラム単独の場合に比べて、真のピークシャー
プ性は同等かそれ以上の効果が得られる。（請求項３お
よび請求項４）
【０１７８】また、上記検出手段として、上記クロマト
グラフィー検出器に代えて、質量分析計を用いた場合、
揮発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相系の
分析、フローインジェクション分析を行うことができ
る。即ち、１台の試料の自動分離装置を、検出手段を取
り換えるだけで、液体クロマトグラフ装置として、ま
た、該液体クロマトグラムに質量分析計を直結して用い
るＬＣ／ＭＳによる分析に利用することができる。（請
求項５）
グラフィー検出器に代えて、質量分析計を用いた場合、
揮発性移動相系の分析、脱塩による不揮発性移動相系の
分析、フローインジェクション分析を行うことができ
る。即ち、１台の試料の自動分離装置を、検出手段を取
り換えるだけで、液体クロマトグラフ装置として、ま
た、該液体クロマトグラムに質量分析計を直結して用い
るＬＣ／ＭＳによる分析に利用することができる。（請
求項５）
【０１７９】また、本発明の試料の自動分離装置では第
一、第二、第三のポンプを備え、第一ポンプからは、各
分析モードにおいて前処理用の第一カラムに試料を目的
成分と不要成分とに分離する第一移動相を送液し、第二
ポンプからはＨＣ法あるいはＢＦ法による分析モードで
は第三カラムに捕捉された目的成分を分離すると共にＨ
Ｃ法→ＢＦ法あるいはＢＦ法→ＢＦ法では目的成分の濃
縮を行う第二移動相を送液し、さらに、第三ポンプから
はＨＣ法→ＢＦ法およびＢＦ法→ＢＦ法では第三カラム
に捕捉された目的成分を分離する第三移動相を送液する
ため、ＨＣ法、ＢＦ法、ＨＣ法→ＢＦ法、ＢＦ法→ＢＦ
法を、１台の装置により選択して行うことができる。さ
らに、上記したポンプから所要の移動相を所要のカラム
に送液しているため、前記した１０通りの分析モードを
行うことができる。このように、異種分離モードを組み
合わせることができ、分離性能を向上させる事ができ
る。（請求項６、７、８）
一、第二、第三のポンプを備え、第一ポンプからは、各
分析モードにおいて前処理用の第一カラムに試料を目的
成分と不要成分とに分離する第一移動相を送液し、第二
ポンプからはＨＣ法あるいはＢＦ法による分析モードで
は第三カラムに捕捉された目的成分を分離すると共にＨ
Ｃ法→ＢＦ法あるいはＢＦ法→ＢＦ法では目的成分の濃
縮を行う第二移動相を送液し、さらに、第三ポンプから
はＨＣ法→ＢＦ法およびＢＦ法→ＢＦ法では第三カラム
に捕捉された目的成分を分離する第三移動相を送液する
ため、ＨＣ法、ＢＦ法、ＨＣ法→ＢＦ法、ＢＦ法→ＢＦ
法を、１台の装置により選択して行うことができる。さ
らに、上記したポンプから所要の移動相を所要のカラム
に送液しているため、前記した１０通りの分析モードを
行うことができる。このように、異種分離モードを組み
合わせることができ、分離性能を向上させる事ができ
る。（請求項６、７、８）
【０１８０】さらに、本発明の試料の自動分離装置で
は、マニュアルインジェクター等の試料注入装置を第二
カラムおよび第三カラムに付設しているため、該試料注
入装置から第二カラム或いは第三カラムに試料を直接注
入して、該第二カラムあるいは第三カラムのクロマトグ
ラムを検出することにより、第二、第三カラムを装置よ
り抜き取ることなく分離状況の確認を行うことができ
る。（請求項９、請求項１０）
は、マニュアルインジェクター等の試料注入装置を第二
カラムおよび第三カラムに付設しているため、該試料注
入装置から第二カラム或いは第三カラムに試料を直接注
入して、該第二カラムあるいは第三カラムのクロマトグ
ラムを検出することにより、第二、第三カラムを装置よ
り抜き取ることなく分離状況の確認を行うことができ
る。（請求項９、請求項１０）
【０１８１】また、本発明の試料の自動分離装置におい
ては、３つのカラムの連通流路を、多数の分離分析モー
ドの内から選択したモードに応じて切り替える必要があ
り、そのため、上記３つのカラムを接続する配管に多数
の流路切替バルブを設置する必要がある。本装置では、
このバルブとして６方バルブを用いて、１つのバルブで
複数の流路切り替えを可能としているため、６台の６方
バルブを用いるだけで、１０通りの多数の分離分析モー
ドを選択して行うことができる。特に、上記６台の６方
バルブを、上記３本のカラムおよび上記３個のポンプと
の適宜に組み合わせていることにより、１台の装置で多
種のカラムスイッチングを行うことができ、その結果、
カラムの交換、流路の組み替え等の繁雑な操作をするこ
となく、単に、プログラムを設定してコンピュータに入
力するだけで、上記１０通りの分離分析モードを選択し
て行うことが出来る。(請求項１１〜１９）
ては、３つのカラムの連通流路を、多数の分離分析モー
ドの内から選択したモードに応じて切り替える必要があ
り、そのため、上記３つのカラムを接続する配管に多数
の流路切替バルブを設置する必要がある。本装置では、
このバルブとして６方バルブを用いて、１つのバルブで
複数の流路切り替えを可能としているため、６台の６方
バルブを用いるだけで、１０通りの多数の分離分析モー
ドを選択して行うことができる。特に、上記６台の６方
バルブを、上記３本のカラムおよび上記３個のポンプと
の適宜に組み合わせていることにより、１台の装置で多
種のカラムスイッチングを行うことができ、その結果、
カラムの交換、流路の組み替え等の繁雑な操作をするこ
となく、単に、プログラムを設定してコンピュータに入
力するだけで、上記１０通りの分離分析モードを選択し
て行うことが出来る。(請求項１１〜１９）
【０１８２】また、本発明の試料の自動分離装置では、
第一カラムに試料を注入するオートサンプラー等の試料
注入装置を取り付け、前以て、試料の自動供給時間、自
動供給量を設定しているため、１回の自動分析が終了す
ると、２回目の試料の自動供給を行うことができ、無人
化で、連続して分離分析を行うことができる。（請求項
２０、請求項２１） さらに、上記したように、 コンピュータにプログラムを
入力しておくだけで、コントローラにより、 オートサン
プラー、 バルブ、ポンプなどの周辺装置を自動的に動作
させて、プログラムで設定している順序にしたがって全
自動で選択した分離分析を行わせることが出来る。よっ
て、この種の分離分析を行う場合は人手を有し、労力集
約的な要素が強かったが、この点、本装置では大幅な省
力化を図ることが出来る。（請求項２２）
第一カラムに試料を注入するオートサンプラー等の試料
注入装置を取り付け、前以て、試料の自動供給時間、自
動供給量を設定しているため、１回の自動分析が終了す
ると、２回目の試料の自動供給を行うことができ、無人
化で、連続して分離分析を行うことができる。（請求項
２０、請求項２１） さらに、上記したように、 コンピュータにプログラムを
入力しておくだけで、コントローラにより、 オートサン
プラー、 バルブ、ポンプなどの周辺装置を自動的に動作
させて、プログラムで設定している順序にしたがって全
自動で選択した分離分析を行わせることが出来る。よっ
て、この種の分離分析を行う場合は人手を有し、労力集
約的な要素が強かったが、この点、本装置では大幅な省
力化を図ることが出来る。（請求項２２）
【０１８３】本発明の試料の自動分離装置では、上記し
たように、バルブ、カラムおよびポンプを適宜に組み合
わせているために、１０通りの分離分析モードを選択し
て行うことができる。特に、生体試料では、試料に対応
して異なるモードで分離分析を行う必要があるため、こ
の種の分離分析に必要な殆ど全てのモードの分離分析が
可能な本装置は、生体試料の分離分析装置として、極め
て有効に用いることが出来る。（請求項２３、２４）
たように、バルブ、カラムおよびポンプを適宜に組み合
わせているために、１０通りの分離分析モードを選択し
て行うことができる。特に、生体試料では、試料に対応
して異なるモードで分離分析を行う必要があるため、こ
の種の分離分析に必要な殆ど全てのモードの分離分析が
可能な本装置は、生体試料の分離分析装置として、極め
て有効に用いることが出来る。（請求項２３、２４）
【０１８４】また、請求項２５から請求項２７に記載の
装置では、２台のバルブ、２本のカラム、２個のポンプ
を用いるだけの極めて簡単な装置で、生体試料分析にお
いて最も多用されるＨＣ法とＢＦ法とをカラムスイッチ
ング法により切り替えて行うことが出来る。よって、上
記ＨＣ法とＢＦ法の２つの分離分析モードだけで良い場
合には、有効な装置となる。
装置では、２台のバルブ、２本のカラム、２個のポンプ
を用いるだけの極めて簡単な装置で、生体試料分析にお
いて最も多用されるＨＣ法とＢＦ法とをカラムスイッチ
ング法により切り替えて行うことが出来る。よって、上
記ＨＣ法とＢＦ法の２つの分離分析モードだけで良い場
合には、有効な装置となる。
【０１８５】さらに、請求項２８および請求項２９に記
載の質量分析計と直結した場合には、揮発性移動相系
の分析、フローインジェクション分析に用いられる
が、本発明の分離装置は脱塩操作を行わせることが可能
であるため、不揮発性塩を含む移動相を用いた場合
も、ＬＣ／ＭＳで分析することが出来る。また、上記試
料の分離装置の第三カラムを除いて連結管をとりつけて
も、上記〜の分析が可能であり、本発明の試料の自
動分離装置は多用途に利用できる利点がある。
載の質量分析計と直結した場合には、揮発性移動相系
の分析、フローインジェクション分析に用いられる
が、本発明の分離装置は脱塩操作を行わせることが可能
であるため、不揮発性塩を含む移動相を用いた場合
も、ＬＣ／ＭＳで分析することが出来る。また、上記試
料の分離装置の第三カラムを除いて連結管をとりつけて
も、上記〜の分析が可能であり、本発明の試料の自
動分離装置は多用途に利用できる利点がある。
【図１】本発明の第１実施例の装置の概略図である。
【図２】第１実施例の装置によりＨＣ法の分離を行った
場合の第一工程の流路を示す概略図である。
場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図３】第１実施例の装置によりＨＣ法の分離を行った
第二工程の流路を示す概略図である。
第二工程の流路を示す概略図である。
【図４】第１実施例の装置によりＨＣ法の分離を行った
場合のクロマトグラムである。
場合のクロマトグラムである。
【図５】第１実施例の装置によりＢＦ法の分離を行った
場合の第一工程の流路を示す概略図である。
場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図６】第１実施例の装置によりＢＦ法の分離を行った
場合の第二工程の流路を示す概略図である。
場合の第二工程の流路を示す概略図である。
【図７】第１実施例の装置によりＢＦ法の分離を行った
場合のクロマトグラムである。
場合のクロマトグラムである。
【図８】第１実施例の装置によりＨＣ法→ＢＦ法の分離
を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図９】第１実施例の装置によりＨＣ法→ＢＦ法の分離
を行った第二工程の流路を示す概略図である。
を行った第二工程の流路を示す概略図である。
【図１０】第１実施例の装置によりＨＣ法→ＢＦ法の分
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
【図１１】第１実施例の装置によりＨＣ法→ＢＦ法の分
離を行った場合のクロマトグラムである。
離を行った場合のクロマトグラムである。
【図１２】第１実施例の装置によりＢＦ法→ＢＦ法の分
離を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図１３】第１実施例の装置によりＢＦ法→ＢＦ法の分
離を行った場合の第二工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第二工程の流路を示す概略図である。
【図１４】第１実施例の装置によりＢＦ法→ＢＦ法の分
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
【図１５】第１実施例の装置によりＢＦ法→ＢＦ法の分
離を行った場合のクロマトグラムである。
離を行った場合のクロマトグラムである。
【図１６】クロマトグラムの説明図である。
【図１７】第１実施例の装置により第一カラムの分離確
認を行った場合の流路を示す概略図である。
認を行った場合の流路を示す概略図である。
【図１８】第１実施例の装置により第一カラムの分離確
認を行った場合のクロマトグラムである。
認を行った場合のクロマトグラムである。
【図１９】第１実施例の装置により第二カラムの分離確
認を行った場合の流路を示す概略図である。
認を行った場合の流路を示す概略図である。
【図２０】第１実施例の装置により第三カラムの分離確
認を行った場合の流路を示す概略図である。
認を行った場合の流路を示す概略図である。
【図２１】多成分系の試料の分離モードを示す図面であ
る。
る。
【図２２】第１実施例の装置による多成分系の試料の分
離を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図２３】第１実施例の装置により多成分系の試料の分
離を行った場合の第二工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第二工程の流路を示す概略図である。
【図２４】第１実施例の装置による多成分系の試料の分
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第三工程の流路を示す概略図である。
【図２５】第１実施例の装置により多成分系の試料の分
離を行った場合の第四工程の流路を示す概略図である。
離を行った場合の第四工程の流路を示す概略図である。
【図２６】第２実施例の装置を示す概略図である。
【図２７】第２実施例の装置により目的成分を全量ＭＳ
に導入した場合の流路を示す概略図である。
に導入した場合の流路を示す概略図である。
【図２８】第２実施例の装置により分析目的成分をトラ
ップカラムに捕捉した場合の流路を示す概略図である。
ップカラムに捕捉した場合の流路を示す概略図である。
【図２９】第２実施例の装置により分析目的成分を溶離
後にＭＳに導入した場合の流路を示す概略図である。
後にＭＳに導入した場合の流路を示す概略図である。
【図３０】第２実施例の装置により洗浄、脱塩を行った
場合の流路を示す概略図である。
場合の流路を示す概略図である。
【図３１】第３実施例の装置の概略図である。
【図３２】第３実施例の装置により分析目的成分を溶離
後にＭＳに導入した場合の流路を示す概略図である。
後にＭＳに導入した場合の流路を示す概略図である。
【図３３】第３実施例の装置により洗浄、脱塩を行った
場合の流路を示す概略図である。
場合の流路を示す概略図である。
【図３４】第４実施例の装置の概略図である。
【図３５】第４実施例の装置によりＨＣ法の分離を行っ
た場合の第一工程の流路を示す概略図である。
た場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図３６】第４実施例の装置によりＨＣ法の分離を行っ
た場合の第二工程の流路を示す概略図である。
た場合の第二工程の流路を示す概略図である。
【図３７】第４実施例の装置によりＢＦ法の分離を行っ
た場合の第一工程の流路を示す概略図である。
た場合の第一工程の流路を示す概略図である。
【図３８】第４実施例の装置によりＢＦ法の分離を行っ
た場合の第二工程の流路を示す概略図である。
た場合の第二工程の流路を示す概略図である。
Ｃ１ 第一カラム Ｃ２ 第二カラム Ｃ３ 第三カラム Ｐ１ 第一ポンプ Ｐ２ 第二ポンプ Ｐ３ 第三ポンプ Ｖ１ 第一６方バルブ Ｖ２ 第二６方バルブ Ｖ３ 第三６方バルブ Ｖ４ 第四６方バルブ Ｖ５ 第五６方バルブ Ｖ６ 第六６方バルブ ＤＥＴ 検出器 ＡＳ オートサンプラー ＭＩ マニュアルインジェクター ＣＴＲ コントローラ ＣＰＵ コンピュータ ＭＳ 質量分析計 ｔ１〜ｔ２０ 配管 １０ 第一移動相 ２０ 第二移動相 ３０ 第三移動相 １５ 連結管
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 30/88 Ｅ
Claims (29)
- 【請求項１】 第一カラム、第二カラムおよび第三カラ
ムと、 上記第一カラム、第二カラム及び第三カラムを異なる流
路で接続する複数の配管と、 上記配管に介設した複数のバルブと、 上記第一カラム、第二カラム、第三カラムのうちの少な
くとも１つのカラムに移動相を送液するポンプと、 上記バルブの動作を制御する制御手段とを備え、 複数の分離分析モードのうちから選択された分離分析モ
ードとなるように上記第一カラム、第二カラム、第三カ
ラムの連通流路を全自動的に切り替える構成としている
ことを特徴とする試料の自動分離装置。 - 【請求項２】 上記第一カラム、第二カラム、第三カラ
ムのうちの少なくとも１つのカラムからの溶出液を検出
する検出手段を備えている請求項１に記載の試料の自動
分離装置。 - 【請求項３】 上記検出手段として、上記溶出液のクロ
マトグラムを検出する検出器を用いている請求項２に記
載の試料の自動分離装置。 - 【請求項４】 上記検出器として、紫外可視検出器、蛍
光検出器、示差屈折計、赤外線分光光度計、原子吸光光
度計、光散乱検出器、旋光度検出器、化学発光検出器、
誘導プラズマ発光光度計、電気化学検出器、電導度検出
器、水素炎イオン化検出器、エレクトロンキャプチャー
検出器、磁気共鳴分光器、差圧計のうちの少なくとも１
つを用いている請求項３に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項５】 上記検出手段として、質量分析計を用い
ている請求項２に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項６】 上記ポンプとして、上記第一カラムに送
られ、該第一カラムで試料を目的成分を含む画分と不要
成分とに分離して溶出させる第一移動相を送液する第一
ポンプを備えている前記請求項のいずれか１項に記載の
試料の自動分離装置。 - 【請求項７】 上記ポンプとして、上記第二カラムに送
られて該第二カラムで目的成分を含む画分を分離及び／
或いは濃縮する第二移動相、あるいは上記第三カラムに
送られて第三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を
分離して溶出させる分離分析用第二移動相を送液する第
二ポンプを備えている前記請求項のいずれか１項に記載
の自動試料の分離装置。 - 【請求項８】 上記ポンプとして、上記第三カラムに送
られ、第三カラムで捕捉された目的成分を含む画分を分
離する第三移動相を送液する第三ポンプを備えている前
記請求項のいずれか１項に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項９】 上記第二カラム及び第三カラムの入口に
試料注入装置を付設している前記請求項のいずれか１項
に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１０】 上記試料注入装置はマニュアルインジ
ェクターからなる請求項９に記載の試料の自動分離装
置。 - 【請求項１１】 上記バルブは６方バルブからなる前記
請求項のいずれか１項に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１２】 上記バルブとして、上記第一カラムと
第一ポンプを接続する流路に介設し、第一移動相の第一
カラムへの導入を制御している第一６方バルブを備えて
いる前記請求項のいずれか１項にに記載の試料の自動分
離装置。 - 【請求項１３】 上記バルブとして、上記第一カラム、
第二カラムおよび第三カラムと第二ポンプを接続する流
路に介設し、第二移動相のこれらカラムに選択的に導入
している第二６方バルブを備えている前記請求項のいず
れか１項に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１４】 上記バルブとして、上記第一カラム、
第二カラムおよび第三カラムを夫々接続する流路に介設
し、第一カラム、第二カラム、第三カラムの連通を制御
する第三６方バルブを備えている前記請求項のいずれか
１項に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１５】 上記バルブとして、上記第三カラムお
よび第二カラムと第三ポンプとを接続する流路に介設し
て、第三移動相を第三カラムあるいは第二カラムに選択
的に導入する第四６方バルブを備えている前記請求項の
いずれか１項に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１６】 上記バルブとして、上記第一、第二、
第三ポンプと第三カラムとを接続する流路に介設し、第
三カラムへの移動相の導入を制御している第五６方バル
ブを備えている前記請求項のいずれか１項に記載の試料
の自動分離装置。 - 【請求項１７】 上記バルブとして、第三カラムを検出
器および廃棄部に接続する流路に介設している第六６方
バルブを備えている前記請求項のいずれか１項に記載の
試料の自動分離装置。 - 【請求項１８】 上記バルブとして、第一、第二、第
三、第四、第五および第六６方バルブからなる６台のバ
ルブを備え、 上記第一６方バルブのポートは、第一ポンプ、第一カラ
ム、第二６方バルブおよび第三６方バルブと配管を介し
て夫々接続し、 上記第二６方バルブのポートは、第二ポンプ、第二カラ
ム、第一６方バルブ、第四６方バルブと配管を介して夫
々接続し、 上記第三６方バルブのポートは、第一６方バルブ、第四
６方バルブ、第五６方バルブと配管を介して夫々接続
し、 上記第四６方バルブのポートは、第三ポンプ、第二ポン
プ、第二カラム、第三６方バルブ、第五６方バルブ、廃
棄部と配管を介して夫々接続し、 上記第五６方バルブのポートは、第三カラムの両端ポー
ト、第三６方バルブ、第四６方バルブ、第六６方バルブ
と配管を介して夫々接続し、 上記第六６方バルブのポートは、第五６方バルブ、検出
器、廃棄部と配管を介して夫々接続している請求項１１
に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項１９】 上記第三６方バルブには１組の隣接す
る２つのポートを常時連通している短絡通路を設けてい
る前記請求項１４あるいは請求項１８に記載の試料の自
動分離装置。 - 【請求項２０】 上記第一カラムに試料を注入する試料
注入装置を備えている前記請求項のいずれか１項に記載
の試料の自動分離装置。 - 【請求項２１】 上記試料注入装置はオートサンプラー
である請求項２０に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項２２】 上記制御手段は、予め、１つの分離分
析モードあるいは次々と連続して選択した分離分析モー
ドの分離手順が入力されたコンピュータにより制御さ
れ、上記選択された分離分析モードを全自動で行う構成
としている前記請求項のいずれか１項に記載の試料の自
動分離装置。 - 【請求項２３】 上記複数の分離分析モードは、 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分をを含む画分を試料の導入方向と同
一方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入す
るハートカット法（ＨＣ法）による分離分析モード； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記第三カラムに導入するバックラッシュ法（Ｂ
Ｆ法）による分離分析モード； 上記ＨＣ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加える
分離分析モード； 上記ＢＦ法に更に分離及び／或いは濃縮工程を加える
分離分析モード； 上記第一カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第二カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 上記第三カラムの分離状況を確認する分離分析モー
ド； 複数のＨＣ法あるいはＨＣ法とＢＦ法を並行させる分
離分析モード； 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法に更に目的成分の分離、濃縮、脱塩のいず
れかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード； のうちの少なくとも２以上のモードである請求項１に記
載の試料の自動分離装置。 - 【請求項２４】 上記複数の分離分析モードは、請求項
２３に記載のから10の１０通りの分離分析モードから
なり、これら１０通りの分離分析モードのうちの１つ或
いは次々と連続して選択した分離分析モードを選択して
行える構成としている請求項１に記載の試料の自動分離
装置。 - 【請求項２５】 第一カラムおよび第三カラムと、 上記第一カラムと第三カラムとを異なる流路で接続する
複数の配管と、 上記配管に介設した複数のバルブと、 上記第一カラムおよび／あるいは第三カラムに移動相を
送液するポンプと、 上記第一カラムおよび／あるいは第三カラムからの溶出
液のクロマトグラムを検出する検出器と、 上記バルブの動作を制御する制御手段とを備え、 複数の分析モードのうちから選択された分離分析モード
となるように上記第一カラムと第三カラムの連通流路を
自動的に切り替える構成としていることを特徴とする試
料の自動分離装置。 - 【請求項２６】 上記ポンプとして、 上記第一カラムに送られ、該第一カラムで試料を目的成
分を含む画分と不要成分とに分離して溶出させる第一移
動相を送液する第一ポンプと、 上記第一カラムあるいは第三カラムに送られて、これら
カラムで捕捉された目的成分を溶出させる第二移動相を
送液する第二ポンプを備え、 上記バルブとして、 上記第一カラムと第一ポンプを接続する流路および第一
カラムと第二ポンプを接続する流路に介設して第一移動
相および第二移動相の第一カラムへの導入を制御してい
る第一６方バルブと、 上記第一６方バルブと第三カラムを接続する流路および
第一６方バルブと廃液部とを接続する流路に介設し、第
一カラムと第三カラムの連通を制御すると共に第二移動
相の第三カラムへの導入を制御する第三６方バルブを備
え、 上記検出器を第三カラムの下流側に接続していることを
特徴とする請求項２５に記載の試料の自動分離装置。 - 【請求項２７】 上記複数の分離分析モードとして、 上記第一移動相により、第一カラムで不要成分を溶出
させた後に目的成分を含む画分を試料の導入方向と同一
方向より溶出させて上記分析用の第三カラムに導入する
ハートカット法（ＨＣ法）の分離分析モードと； 上記第一カラムで上記第一移動相により目的成分を含
む画分を吸着させた後に第一カラムに試料の導入方向と
逆方向から導入する上記第二移動相により逆方向へ溶出
させて上記分析用の第三カラムに導入するバックラッシ
ュ法（ＢＦ法）の分離分析モードとを備え、 上記分離分析モードを選択して行える構成としている請
求項２５または請求項２６に記載の試料の自動分離装
置。 - 【請求項２８】 第一カラムおよび第二カラムと、 上記第一カラムと第二カラムとを異なる流路で接続する
複数の配管と、 上記配管に介設した複数のバルブと、 上記第一カラムおよび／あるいは第二カラムに移動相を
送液するポンプと、 上記第一カラムおよび／あるいは第二カラムからの溶出
液を分析する質量分析計と、 上記バルブの動作を制御する制御手段とを備え、 複数の分析モードのうちから選択された分離分析モード
を行えるように上記第一カラムおよび／あるいは第二カ
ラムと質量分析計との連通流路を自動切替する構成とし
ていることを特徴とする質量分析計と直結した試料の自
動分離装置。 - 【請求項２９】 上記複数の分析モードとして、少なく
とも、 上記第一カラムからの溶出液を質量分析計のイオン源
部へ直接全量導入する分離分析モード； 10上記ＨＣ法に更に目的成分の分離、濃縮、脱塩のいず
れかを行って質量分析計へ導入する分離分析モード の２通りの分離分析モードを備えている請求項２８に記
載の試料の自動分離装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6019705A JPH07229885A (ja) | 1994-02-16 | 1994-02-16 | 試料の自動分離装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6019705A JPH07229885A (ja) | 1994-02-16 | 1994-02-16 | 試料の自動分離装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07229885A true JPH07229885A (ja) | 1995-08-29 |
Family
ID=12006700
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6019705A Withdrawn JPH07229885A (ja) | 1994-02-16 | 1994-02-16 | 試料の自動分離装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07229885A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2023119944A1 (ja) * | 2021-12-21 | 2023-06-29 | 株式会社島津製作所 | 液体クロマトグラフ |
-
1994
- 1994-02-16 JP JP6019705A patent/JPH07229885A/ja not_active Withdrawn
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US11300548B2 (en) | 2019-07-01 | 2022-04-12 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Liquid chromatography systems |
| WO2023119944A1 (ja) * | 2021-12-21 | 2023-06-29 | 株式会社島津製作所 | 液体クロマトグラフ |
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|---|---|---|---|
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