JPH07147973A - 新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法 - Google Patents
新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法Info
- Publication number
- JPH07147973A JPH07147973A JP32332693A JP32332693A JPH07147973A JP H07147973 A JPH07147973 A JP H07147973A JP 32332693 A JP32332693 A JP 32332693A JP 32332693 A JP32332693 A JP 32332693A JP H07147973 A JPH07147973 A JP H07147973A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- streptomyces
- keto
- dihydroxy
- 5beta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】ストレプトマイセス属に属する新規微生物及び
この微生物を使用した３α，７α−ジヒドロキシ−１２
−ケト−５β−コラン酸の製造法を提供する。 【構成】ストレプトマイセス属に属し、３α，７α−ジ
ヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の生産能を有
するストレプトマイセス ＩＴＫ５８、及びストレプト
マイセス ＩＴＫ８２並びにこの微生物を３α，７α，
１２α−トリヒドロキシ−５β−コラン酸を含む栄養培
地で培養し、培養物中に３α，７α−ジヒドロキシ−１
２−ケト−５β−コラン酸を生産させ、これを採取す
る。
この微生物を使用した３α，７α−ジヒドロキシ−１２
−ケト−５β−コラン酸の製造法を提供する。 【構成】ストレプトマイセス属に属し、３α，７α−ジ
ヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の生産能を有
するストレプトマイセス ＩＴＫ５８、及びストレプト
マイセス ＩＴＫ８２並びにこの微生物を３α，７α，
１２α−トリヒドロキシ−５β−コラン酸を含む栄養培
地で培養し、培養物中に３α，７α−ジヒドロキシ−１
２−ケト−５β−コラン酸を生産させ、これを採取す
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な微生物を使用し
た３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラ
ン酸の製造に関するものである。詳しくは、本発明はケ
ノデオキシコール酸を製造するための重要中間体である
３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン
酸（以下１２−ケトコール酸と略称する。）を３α，７
α，１２α−トリヒドロキシ−５β−コラン酸（以下コ
ール酸と略称する。）から生産する能力を有する新規な
微生物及びそれを用いた１２ーケトコール酸の製造法に
関するものである。
た３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラ
ン酸の製造に関するものである。詳しくは、本発明はケ
ノデオキシコール酸を製造するための重要中間体である
３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン
酸（以下１２−ケトコール酸と略称する。）を３α，７
α，１２α−トリヒドロキシ−５β−コラン酸（以下コ
ール酸と略称する。）から生産する能力を有する新規な
微生物及びそれを用いた１２ーケトコール酸の製造法に
関するものである。
【０００２】
【従来技術】利胆剤として有用なケノデオキシコール酸
は、胆石溶解剤あるいは利胆剤ウルソデオキシコール酸
の合成中間体でもあり、１２−ケトコール酸から製造さ
れている。１２−ケトコール酸は、コール酸を出発原料
とし数工程を経て１２位の水酸基を化学的に酸化するこ
とにより製造することが知られている。又、微生物を用
いるコール酸から１２−ケトコール酸の製造法として
は、アルスロバスター属の微生物を用いる方法（特公平
１−２０８７３号、特公平２−６２２３４号）、ミクロ
コッカス属の微生物を用いる方法（特公平１−５１９９
８号）等が知られており、更にストレプトマイセス ゲ
ラチカス １１６４株を使用することも知られている
（ジャーナル オブ バイオケミストリー第４４巻、１
０９〜１１３頁）。
は、胆石溶解剤あるいは利胆剤ウルソデオキシコール酸
の合成中間体でもあり、１２−ケトコール酸から製造さ
れている。１２−ケトコール酸は、コール酸を出発原料
とし数工程を経て１２位の水酸基を化学的に酸化するこ
とにより製造することが知られている。又、微生物を用
いるコール酸から１２−ケトコール酸の製造法として
は、アルスロバスター属の微生物を用いる方法（特公平
１−２０８７３号、特公平２−６２２３４号）、ミクロ
コッカス属の微生物を用いる方法（特公平１−５１９９
８号）等が知られており、更にストレプトマイセス ゲ
ラチカス １１６４株を使用することも知られている
（ジャーナル オブ バイオケミストリー第４４巻、１
０９〜１１３頁）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来の１２−ケトコー
ル酸の化学的製造法は、コール酸からの工程数が多く反
応収率も充分ではなく、また高価な酸化剤を必要とし加
えて作業上の問題も多い等商業的生産法としては必ずし
も充分とはいえなかった。一方、従来の微生物を使用す
る方法も収率や得られる製品の純度の点で満足出来るも
のではなかった。
ル酸の化学的製造法は、コール酸からの工程数が多く反
応収率も充分ではなく、また高価な酸化剤を必要とし加
えて作業上の問題も多い等商業的生産法としては必ずし
も充分とはいえなかった。一方、従来の微生物を使用す
る方法も収率や得られる製品の純度の点で満足出来るも
のではなかった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、１２−ケトコ
ール酸生産能を有する微生物及びそれを用いたコール酸
から１２−ケトコール酸の効率的製造法を提供するもの
であり、その要旨は１２−ケトコール酸生産能を有する
ストレプトマイセスＩＴＫ５８及びストレプトマイセス
ＩＴＫ８２、並びに該微生物をコール酸を含む栄養培地
で培養して培養物中に１２−ケトコール酸を生産させ、
培養物から１２−ケトコール酸を分離する事よりなる製
造法に存する。
ール酸生産能を有する微生物及びそれを用いたコール酸
から１２−ケトコール酸の効率的製造法を提供するもの
であり、その要旨は１２−ケトコール酸生産能を有する
ストレプトマイセスＩＴＫ５８及びストレプトマイセス
ＩＴＫ８２、並びに該微生物をコール酸を含む栄養培地
で培養して培養物中に１２−ケトコール酸を生産させ、
培養物から１２−ケトコール酸を分離する事よりなる製
造法に存する。
【０００５】以下、本発明を更に詳細に説明する。本発
明は、ストレプトマイセス属に属する菌が栄養培地中で
高濃度のコール酸を効率よく１２−ケトコール酸に変換
するとの新規な知見により達成されたものであり、この
菌をストレプトマイセスＩＴＫ５８（微工研菌寄第１３
９０１号）及びストレプトマイセスＩＴＫ８２（微工研
菌寄第１３９００号）と命名した。これらの菌は、埼玉
県深谷市と春日部市の土壌よりそれぞれ採取したもので
ある。上記の菌は、コール酸の主として７位及び１２位
の水酸基をケトン基に酸化する能力を有し、併せてわず
かではあるがコール酸のケノデオキシコール酸或いはウ
ルソデオキシコール酸への変化能も有している。しか
し、基質コール酸の資化性は有していない。
明は、ストレプトマイセス属に属する菌が栄養培地中で
高濃度のコール酸を効率よく１２−ケトコール酸に変換
するとの新規な知見により達成されたものであり、この
菌をストレプトマイセスＩＴＫ５８（微工研菌寄第１３
９０１号）及びストレプトマイセスＩＴＫ８２（微工研
菌寄第１３９００号）と命名した。これらの菌は、埼玉
県深谷市と春日部市の土壌よりそれぞれ採取したもので
ある。上記の菌は、コール酸の主として７位及び１２位
の水酸基をケトン基に酸化する能力を有し、併せてわず
かではあるがコール酸のケノデオキシコール酸或いはウ
ルソデオキシコール酸への変化能も有している。しか
し、基質コール酸の資化性は有していない。
【０００６】本発明者等は、ストレプトマイセス属に属
するこれらの菌をストレプトマイセスＩＴＫ５８（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ ＩＴＫ５８：微工研菌寄
第１３９０１号）及びストレプトマイセスＩＴＫ８２
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ ＩＴＫ８２：微工
研菌寄第１３９００号）と命名した。これらの菌は、従
来知られているストレプトマイセス ゲラチカスとは異
なる菌株であり、その菌学的性質は以下の表（１）〜表
（４）に示す通りである。
するこれらの菌をストレプトマイセスＩＴＫ５８（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ ＩＴＫ５８：微工研菌寄
第１３９０１号）及びストレプトマイセスＩＴＫ８２
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ ＩＴＫ８２：微工
研菌寄第１３９００号）と命名した。これらの菌は、従
来知られているストレプトマイセス ゲラチカスとは異
なる菌株であり、その菌学的性質は以下の表（１）〜表
（４）に示す通りである。
【０００７】
【表１】
【０００８】
【表２】
【０００９】
【表３】
【００１０】
【表４】
【００１１】
【表５】
【００１２】上記の各表に示した細菌学的性質に基づ
き、バージイズ マニュアル オブディターミネイティ
ブ バクテリオロジイー第７版(1974）及びバージイズ
マニュアル オブ システィマティック バクテリオ
ロジー(1984）にのっとってストレプトマイセスＩＴＫ
５８株及びＩＴＫ８２株の同定を行い、ストレプトマイ
セスＩＴＫ５８株及びＩＴＫ８２株はその形態、ＧＣ含
量及び細胞壁タイプがタイプＩであったことからストレ
プトマイセス属に属する細菌であると同定された。
き、バージイズ マニュアル オブディターミネイティ
ブ バクテリオロジイー第７版(1974）及びバージイズ
マニュアル オブ システィマティック バクテリオ
ロジー(1984）にのっとってストレプトマイセスＩＴＫ
５８株及びＩＴＫ８２株の同定を行い、ストレプトマイ
セスＩＴＫ５８株及びＩＴＫ８２株はその形態、ＧＣ含
量及び細胞壁タイプがタイプＩであったことからストレ
プトマイセス属に属する細菌であると同定された。
【００１３】ストレプトマイセスＩＴＫ５８株は赤色の
色素を産生し、レプトフレキシブルの気菌糸を着生し、
しかも糖の資化性（ラムノース、フルクトース、ラフィ
ノース、マンニトール及びシュークロース）もストレプ
トマイセス ゲラチカスとは異なっていた。また、スト
レプトマイセスＩＴＫ８２株はスパイラルの気菌糸を着
生する点、各種培地での培養性状、及び糖の資化性（ア
ラビノース、ラフィノース及びシュークロース）がスト
レプトマイセス ゲラチカスとは異なっていた。なお、
ストレプトマイセス ゲラチカス ＩＦＯ１２８６６株
は気菌糸の着生が非常に悪かった。従って、本発明で得
られたストレプトマイセス２株はストレプトマイセス
ゲラチカス以外のストレプトマイセス属に属する細菌と
同定された。
色素を産生し、レプトフレキシブルの気菌糸を着生し、
しかも糖の資化性（ラムノース、フルクトース、ラフィ
ノース、マンニトール及びシュークロース）もストレプ
トマイセス ゲラチカスとは異なっていた。また、スト
レプトマイセスＩＴＫ８２株はスパイラルの気菌糸を着
生する点、各種培地での培養性状、及び糖の資化性（ア
ラビノース、ラフィノース及びシュークロース）がスト
レプトマイセス ゲラチカスとは異なっていた。なお、
ストレプトマイセス ゲラチカス ＩＦＯ１２８６６株
は気菌糸の着生が非常に悪かった。従って、本発明で得
られたストレプトマイセス２株はストレプトマイセス
ゲラチカス以外のストレプトマイセス属に属する細菌と
同定された。
【００１４】本発明方法による１２−ケトコール酸及び
／又はその塩の生産は、コール酸塩を高濃度に含む培地
で培養することにより行われる。なお、コール酸塩は通
常コール酸のナトリウム塩、カリウム塩のようなアルカ
リ金属塩が使用される。培養方法は、原則的には一般微
生物の培養方法と同じであるが、通常は液体培地による
振とう培養または通気攪伴培養が用いられる。培地とし
ては上記のコール酸塩を基質として１２−ケトコール酸
及び／又はその塩を生成する微生物が資化利用できる栄
養源を含有するものであれば良い。具体的には炭素源と
してはグルコース、マルトース、グリセリン、デキスト
リン、澱粉、廃糖密等の各種糖質原料が使用され、ま
た、窒素源としてはペプトン、酵母エキス、肉エキス、
エスサンミート、コーンスティープリカー、各種アミノ
酸の他塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等も使用す
ることができる。更に、通常培地に使用されるその他の
微量の無機金属塩類、ビタミン類、生長因子成分等を添
加することが好ましい。
／又はその塩の生産は、コール酸塩を高濃度に含む培地
で培養することにより行われる。なお、コール酸塩は通
常コール酸のナトリウム塩、カリウム塩のようなアルカ
リ金属塩が使用される。培養方法は、原則的には一般微
生物の培養方法と同じであるが、通常は液体培地による
振とう培養または通気攪伴培養が用いられる。培地とし
ては上記のコール酸塩を基質として１２−ケトコール酸
及び／又はその塩を生成する微生物が資化利用できる栄
養源を含有するものであれば良い。具体的には炭素源と
してはグルコース、マルトース、グリセリン、デキスト
リン、澱粉、廃糖密等の各種糖質原料が使用され、ま
た、窒素源としてはペプトン、酵母エキス、肉エキス、
エスサンミート、コーンスティープリカー、各種アミノ
酸の他塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等も使用す
ることができる。更に、通常培地に使用されるその他の
微量の無機金属塩類、ビタミン類、生長因子成分等を添
加することが好ましい。
【００１５】培地中のコール酸及び／又はコール酸塩濃
度は、１〜１００ｇ／ｌの範囲から選ばれる。培養条件
は特に限定されないが、一般的には温度２０〜４０℃、
ｐＨ５〜８、１〜６日程度の条件で実施する。このよう
にして培養液中に産生された１２−ケトコール酸及び／
又はその塩は培養液から分離採取されるが、まず培養液
中の菌体と不溶成分をろ過又は遠心分離により除去す
る。得られた培養液又は上澄液に塩酸などの酸を加えて
酸性にすることにより、１２−ケトコール酸をはじめと
するコール酸及びその塩からの変換物を沈澱させ、次い
で沈澱物を分離する。なお、この際未反応のコール酸塩
はコール酸として沈澱する。
度は、１〜１００ｇ／ｌの範囲から選ばれる。培養条件
は特に限定されないが、一般的には温度２０〜４０℃、
ｐＨ５〜８、１〜６日程度の条件で実施する。このよう
にして培養液中に産生された１２−ケトコール酸及び／
又はその塩は培養液から分離採取されるが、まず培養液
中の菌体と不溶成分をろ過又は遠心分離により除去す
る。得られた培養液又は上澄液に塩酸などの酸を加えて
酸性にすることにより、１２−ケトコール酸をはじめと
するコール酸及びその塩からの変換物を沈澱させ、次い
で沈澱物を分離する。なお、この際未反応のコール酸塩
はコール酸として沈澱する。
【００１６】沈澱物を分離した後のろ液に、例えば酢酸
エチルなどの有機溶剤を加えて残存するコール酸及びそ
の塩からの変換物及び未変換のコール酸を抽出し、その
後抽出液から有機溶剤を留去し、先に取得した沈澱物と
合わせほぼ完全に１２−ケトコール酸をはじめとするコ
ール酸の変換物を回収することができる。又、菌体など
の不溶成分を分離した後の培養液に、直接有機溶剤を加
え１２−ケトコール酸などの変換物を抽出し、溶剤を除
くことにより採取することもできる。この様にして得ら
れた１２−ケトコール酸は、通常行われている再結晶操
作を繰り返したりクロマトグラフィーによる精製処理を
施すことにより高純度の１２ーケトコール酸を得ること
ができる。
エチルなどの有機溶剤を加えて残存するコール酸及びそ
の塩からの変換物及び未変換のコール酸を抽出し、その
後抽出液から有機溶剤を留去し、先に取得した沈澱物と
合わせほぼ完全に１２−ケトコール酸をはじめとするコ
ール酸の変換物を回収することができる。又、菌体など
の不溶成分を分離した後の培養液に、直接有機溶剤を加
え１２−ケトコール酸などの変換物を抽出し、溶剤を除
くことにより採取することもできる。この様にして得ら
れた１２−ケトコール酸は、通常行われている再結晶操
作を繰り返したりクロマトグラフィーによる精製処理を
施すことにより高純度の１２ーケトコール酸を得ること
ができる。
【００１７】別法としては菌体を分離した培養液をSep
Pack C18 に吸着させ、水洗後、メタノールなどの溶離
剤で溶出させ１２ーケトコール酸をはじめとするコール
酸変換物を採取することができる。この様にして得られ
たコール酸変換物を、例えばシリカゲルカラムに吸着さ
せ、クロロホルム−エタノール混合液などで順次溶出さ
せることができる。また、高速液体クロマトグラフィー
により分取することもできる。上記の分離・精製方法は
必要に応じて適宜組み合わせて採用することができる。
本発明方法により得られた１２−ケトコール酸は化学的
還元法により、胆石溶解剤として有用なケノデオキシコ
ール酸に容易に変換することができる。
Pack C18 に吸着させ、水洗後、メタノールなどの溶離
剤で溶出させ１２ーケトコール酸をはじめとするコール
酸変換物を採取することができる。この様にして得られ
たコール酸変換物を、例えばシリカゲルカラムに吸着さ
せ、クロロホルム−エタノール混合液などで順次溶出さ
せることができる。また、高速液体クロマトグラフィー
により分取することもできる。上記の分離・精製方法は
必要に応じて適宜組み合わせて採用することができる。
本発明方法により得られた１２−ケトコール酸は化学的
還元法により、胆石溶解剤として有用なケノデオキシコ
ール酸に容易に変換することができる。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例により詳細に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例に限
定されるものではない。 実施例 １ ストレプトマイセス ＩＴＫ８２株を以下に示す方法で
培養した。イーストエキストラクト２４ｇ、マルトエキ
ストラクト６０ｇ、グルコース２４ｇに水道水を６リッ
ター加えてｐＨを７．３に調整した培地を５００ml容三
角フラスコに１００ml、６０本に分注し、１２０℃で２
０分間、高圧滅菌を行った。予め上記の培地で増殖させ
た菌を、上記の５００ml三角フラスコあたり１０ml接種
したのち、ろ過滅菌したコール酸ナトリウムを１mg/ml
になるように添加し、２７℃にて３日間振とう培養し
た。培養後、濾過により菌体を除いた後、得られた上清
に塩酸を添加し、未変換のコール酸およびその変換物を
沈澱させた。この沈澱物を採取し残りの溶液を酢酸エチ
ルで抽出し、濃縮後、得られた残存物を先の沈澱物と合
わせた。
が、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例に限
定されるものではない。 実施例 １ ストレプトマイセス ＩＴＫ８２株を以下に示す方法で
培養した。イーストエキストラクト２４ｇ、マルトエキ
ストラクト６０ｇ、グルコース２４ｇに水道水を６リッ
ター加えてｐＨを７．３に調整した培地を５００ml容三
角フラスコに１００ml、６０本に分注し、１２０℃で２
０分間、高圧滅菌を行った。予め上記の培地で増殖させ
た菌を、上記の５００ml三角フラスコあたり１０ml接種
したのち、ろ過滅菌したコール酸ナトリウムを１mg/ml
になるように添加し、２７℃にて３日間振とう培養し
た。培養後、濾過により菌体を除いた後、得られた上清
に塩酸を添加し、未変換のコール酸およびその変換物を
沈澱させた。この沈澱物を採取し残りの溶液を酢酸エチ
ルで抽出し、濃縮後、得られた残存物を先の沈澱物と合
わせた。
【００１９】この混合物の一部を取ってメタノールに溶
解し、Ｃ−１８カラムを備えた高速液体クロマトグラフ
ィー（島津製作所製）に注入した。移動層としてアセト
ニトリル／蒸留水／リン酸（54/45/1）を流速１ml／分
で流し、吸光度２１０nmで検出したところ、図１に示す
クロマトグラムがえられた。このクロマトグラムにおけ
るピークＡおよびピークＢは標準品のピークと照合する
ことにより各々１２−ケトコール酸及びコール酸のもの
と一致した。なお、少量のケノデオキシコール酸の生成
も認められた。またピークＡに相当する化合物を分取し
７６０mgの結晶を得た。その融点、マススペクトル、赤
外線吸収スペクトル及びＮＭＲスペクトルにより化合物
の同定を行ったところ、下記に示したように１２−ケト
コール酸であると同定できた。
解し、Ｃ−１８カラムを備えた高速液体クロマトグラフ
ィー（島津製作所製）に注入した。移動層としてアセト
ニトリル／蒸留水／リン酸（54/45/1）を流速１ml／分
で流し、吸光度２１０nmで検出したところ、図１に示す
クロマトグラムがえられた。このクロマトグラムにおけ
るピークＡおよびピークＢは標準品のピークと照合する
ことにより各々１２−ケトコール酸及びコール酸のもの
と一致した。なお、少量のケノデオキシコール酸の生成
も認められた。またピークＡに相当する化合物を分取し
７６０mgの結晶を得た。その融点、マススペクトル、赤
外線吸収スペクトル及びＮＭＲスペクトルにより化合物
の同定を行ったところ、下記に示したように１２−ケト
コール酸であると同定できた。
【００２０】１．融点： 217-218℃ ２．マススペクトル m/e 406 ［Ｍ］+ 388 ［Ｍ］+-H2O 370 ［Ｍ］+-2H2O ３．ＮＭＲスペクトル（500 MHz）Ｃ5Ｄ5Ｎ： ＨＭＳ 1.12 (3H, d) 21-CH3 1.01 (3H, s) 18-CH3 1.05 (3H, s) 19-CH3 3.7 (1H, m) 3β-H 4.08 (1H, ブロード) 7β-H 5.00 (1H, ブロード）3α-OH 5.75 (1H, ブロード) 7α-OH ４．赤外線吸収スペクトルは標準１２ーケトコール酸と
同じであった。
同じであった。
【００２１】実施例 ２ 実施例１においてストレプトマイセスＩＴＫ８２株のか
わりにＩＴＫ５８株を用いる以外は実施例１と同じ方法
により培養し、処理した後、得られた化合物について実
施例１と同じ方法により高速液体クロマトグラフィーを
行うことにより１２ケトコール酸の存在を確認した。そ
のクロマトグラムを図２に示した。又、少量のウルソデ
オキシコール酸の生成も認められた。
わりにＩＴＫ５８株を用いる以外は実施例１と同じ方法
により培養し、処理した後、得られた化合物について実
施例１と同じ方法により高速液体クロマトグラフィーを
行うことにより１２ケトコール酸の存在を確認した。そ
のクロマトグラムを図２に示した。又、少量のウルソデ
オキシコール酸の生成も認められた。
【００２２】実施例 ３ ストレプトマイセスＩＴＫ８２株を次に示す方法で培養
した。Ａ）グリセロールアスパラギン培地（グリセロー
ル：１０ｇ、アスパラギン：１ｇ、燐酸１水素カリウ
ム：１ｇ、硫酸第１鉄：０．００１g、塩化マンガン：
０．００１g、硫酸亜鉛：０．００１g、水道水：１リッ
トル、ｐＨ７．０〜７．４に調整）及びこの培地のグリ
セロールを、各々Ｂ）グルコース、Ｃ）キシロース、
Ｄ）アラビノース、Ｅ）ラムノース、Ｆ）ガラクトー
ス、Ｇ）可溶性デンプンに変え各０．５％添加した培地
をそれぞれ１００mlの三角フラスコに分注し、高圧蒸気
滅菌を行った。予め増菌させた菌液をホモジナイズした
のち０．５ml接種し、コール酸ナトリウム５mg添加した
後、２７℃にて３０時間振とう培養した。培養後、遠心
分離により菌体等を除き上清を得た。この上清をsep pa
ck C18のカラムに吸着させ、水洗後、メタノールにて抽
出した。溶媒を濃縮後、再度メタノールに溶解した後、
実施例１の方法と同様に高速液体クロマトグラフィーに
て、１２−ケトコール酸を定量した。その結果を表
（５）にしめした。
した。Ａ）グリセロールアスパラギン培地（グリセロー
ル：１０ｇ、アスパラギン：１ｇ、燐酸１水素カリウ
ム：１ｇ、硫酸第１鉄：０．００１g、塩化マンガン：
０．００１g、硫酸亜鉛：０．００１g、水道水：１リッ
トル、ｐＨ７．０〜７．４に調整）及びこの培地のグリ
セロールを、各々Ｂ）グルコース、Ｃ）キシロース、
Ｄ）アラビノース、Ｅ）ラムノース、Ｆ）ガラクトー
ス、Ｇ）可溶性デンプンに変え各０．５％添加した培地
をそれぞれ１００mlの三角フラスコに分注し、高圧蒸気
滅菌を行った。予め増菌させた菌液をホモジナイズした
のち０．５ml接種し、コール酸ナトリウム５mg添加した
後、２７℃にて３０時間振とう培養した。培養後、遠心
分離により菌体等を除き上清を得た。この上清をsep pa
ck C18のカラムに吸着させ、水洗後、メタノールにて抽
出した。溶媒を濃縮後、再度メタノールに溶解した後、
実施例１の方法と同様に高速液体クロマトグラフィーに
て、１２−ケトコール酸を定量した。その結果を表
（５）にしめした。
【００２３】
【表６】
【００２４】実施例 ４ ストレプトマイセスＩＴＫ８２を実施例３のグリセロー
ル アスパラギン培地のグリセロールを可溶性デンプン
に変え、さらにアスパラギンに変えて、Ａ）コーンステ
イープリカ、Ｂ）肉エキス、Ｃ）エスサンミート、Ｄ）
カザミノ酸、Ｅ）イーストエキストラクト、Ｆ）ポリペ
プトン、Ｇ）ソイトンを各々０．１％添加した培地を実
施例３の方法に従い５０時間振とう培養したのち、高速
液体クロマトグラフィーにて１２−ケトコール酸を定量
した。その結果を表（６）にしめした。
ル アスパラギン培地のグリセロールを可溶性デンプン
に変え、さらにアスパラギンに変えて、Ａ）コーンステ
イープリカ、Ｂ）肉エキス、Ｃ）エスサンミート、Ｄ）
カザミノ酸、Ｅ）イーストエキストラクト、Ｆ）ポリペ
プトン、Ｇ）ソイトンを各々０．１％添加した培地を実
施例３の方法に従い５０時間振とう培養したのち、高速
液体クロマトグラフィーにて１２−ケトコール酸を定量
した。その結果を表（６）にしめした。
【００２５】
【表７】
【００２６】実施例 ５ ストレプトマイセスＩＴＫ８２株をグリセロール アス
パラギン培地のグリセロールを可溶性デンプンに変え、
アスパラギンをエスサンミートに変えた培地をそれぞれ
１００mlの三角フラスコに２０ml分注し、高圧蒸気滅菌
を行った。コール酸ナトリウムをそれぞれ２０mg、５０
mg、１００mg、１５０mg、２００mg添加し、予め増菌さ
せた菌液を接種し、２７℃にて９６時間振とう培養を行
った。実施例３の方法と同様に処理したのち、高速液体
クロマトグラフィーにて１２−ケトコール酸を定量し
た。その結果を表（７）に示した。
パラギン培地のグリセロールを可溶性デンプンに変え、
アスパラギンをエスサンミートに変えた培地をそれぞれ
１００mlの三角フラスコに２０ml分注し、高圧蒸気滅菌
を行った。コール酸ナトリウムをそれぞれ２０mg、５０
mg、１００mg、１５０mg、２００mg添加し、予め増菌さ
せた菌液を接種し、２７℃にて９６時間振とう培養を行
った。実施例３の方法と同様に処理したのち、高速液体
クロマトグラフィーにて１２−ケトコール酸を定量し
た。その結果を表（７）に示した。
【００２７】
【表８】
【００２８】
【発明の効果】本発明の新規なストレプトマイセス菌を
使用することによりコール酸より１２−ケトコール酸を
極めて簡単な方法により生産することができ、得られた
１２−ケトコール酸は更に化学的還元処理に付すること
により、利胆剤として有用なケノデオキシコール酸に容
易に変換することができる。よって、本発明は工業的に
極めて有用である。
使用することによりコール酸より１２−ケトコール酸を
極めて簡単な方法により生産することができ、得られた
１２−ケトコール酸は更に化学的還元処理に付すること
により、利胆剤として有用なケノデオキシコール酸に容
易に変換することができる。よって、本発明は工業的に
極めて有用である。
【図１】ストレプトマイセスＩＴＫ８２を使用した培養
生成物の高速液体クロマトグラムを示す。縦軸は、相対
吸光度、横軸は保持時間を示す。
生成物の高速液体クロマトグラムを示す。縦軸は、相対
吸光度、横軸は保持時間を示す。
【図２】ストレプトマイセスＩＴＫ５８を使用した培養
生成物の高速液体クロマトグラムを示す。縦軸は、相対
吸光度、横軸は保持時間を示す。
生成物の高速液体クロマトグラムを示す。縦軸は、相対
吸光度、横軸は保持時間を示す。
【符号の説明】 Ａ：１２−ケトコール酸 Ｂ：コール酸
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (3)
- 【請求項１】３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−
５β−コラン酸生産能を有するストレプトマイセスＩＴ
Ｋ５８。 - 【請求項２】３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−
５β−コラン酸生産能を有するストレプトマイセスＩＴ
Ｋ８２。 - 【請求項３】請求項１または請求項２に記載のストレプ
トマイセスＩＴＫ５８またはストレプトマイセスＩＴＫ
８２を、３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−５β−
コラン酸を含む栄養培地で培養して培養物中に３α，７
α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸を生産
させ、培養物から３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケ
ト−５β−コラン酸を分離することを特徴とする３α，
７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32332693A JPH07147973A (ja) | 1993-11-30 | 1993-11-30 | 新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32332693A JPH07147973A (ja) | 1993-11-30 | 1993-11-30 | 新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07147973A true JPH07147973A (ja) | 1995-06-13 |
Family
ID=18153547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32332693A Pending JPH07147973A (ja) | 1993-11-30 | 1993-11-30 | 新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07147973A (ja) |
-
1993
- 1993-11-30 JP JP32332693A patent/JPH07147973A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4394647B2 (ja) | 光学活性テトラヒドロチオフェン誘導体の製造方法、および、光学活性テトラヒドロチオフェン−３−オールの晶析方法 | |
| JP2719377B2 (ja) | ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法 | |
| JPH0775589A (ja) | プロトカテキュ酸の製造方法 | |
| JPH06157582A (ja) | 抗真菌性物質ｂｅ−３１４０５ | |
| JPH0329397B2 (ja) | ||
| JP3981597B2 (ja) | シロ−イノソースの製造法及びシロ−イノシトールの製造法 | |
| JPH07147973A (ja) | 新規ストレプトマイセス菌及びそれを用いた３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造法 | |
| JP3944333B2 (ja) | Ｄ−キロ−イノシトールの新規製造方法 | |
| JP3917069B2 (ja) | ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドの製造方法 | |
| JP3917021B2 (ja) | ７α−ヒドロキシ−プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルバルデヒドおよびその製造方法 | |
| JP3156735B2 (ja) | 新規胆汁酸変換微生物、及び胆汁酸の製造方法 | |
| JP2003501045A (ja) | Ｒｕｓｃｕｓａｃｕｌｅａｔｕｓステロイド配糖体の誘導体の製造方法 | |
| HU204575B (en) | Process for producing 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dion | |
| JPH04211386A (ja) | ３α，１２α−ジヒドロキシ−７−ケト−５β−ビスノルコラン酸及び／又はその塩の製造方法 | |
| JPS6024198A (ja) | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造法 | |
| JPH0573394B2 (ja) | ||
| JP2000093191A (ja) | 光学活性化合物の製造方法 | |
| JPS5910199B2 (ja) | ７α，１２α−ジヒドロキシ−３−ケト−５β−コラン酸の製造方法 | |
| JPS6338038B2 (ja) | ||
| JPH046359B2 (ja) | ||
| JPH0656875A (ja) | 新規マクロライド抗生物質ｓｆ２７５７物質及びその製造法 | |
| JPH0353315B2 (ja) | ||
| JPH06153987A (ja) | １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの新規製造法 | |
| JPH07238082A (ja) | 新規化合物 ｔｇ−４８８ａおよびその製造法 | |
| JPS5863397A (ja) | １２β−ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンの製造方法 |