JPH0694726A - 血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キット - Google Patents
血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キットInfo
- Publication number
- JPH0694726A JPH0694726A JP4243098A JP24309892A JPH0694726A JP H0694726 A JPH0694726 A JP H0694726A JP 4243098 A JP4243098 A JP 4243098A JP 24309892 A JP24309892 A JP 24309892A JP H0694726 A JPH0694726 A JP H0694726A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fibrin
- factor xiii
- fibrinogen
- thrombin
- coagulation time
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
- G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
- G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
- G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
- G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
- G01N2333/91085—Transglutaminases; Factor XIIIq (2.3.2.13)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
Abstract
(57)【要約】
【目的】 血液凝固第ＸIII因子活性の正確、迅速かつ
簡便な測定方法およびそのための試薬キットを提供す
る。 【構成】 検体とフィブリン析出阻害剤とを混合した
後、あるいは検体とフィブリノゲンとフィブリン析出阻
害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カルシウ
ムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、その凝
固時間を標準と比較する。該測定方法のための試薬キッ
トは、トロンビンと、カルシウムイオンと、フィブリン
析出阻害剤よりなり、さらにフィブリノゲンと組み合わ
せることもできる。
簡便な測定方法およびそのための試薬キットを提供す
る。 【構成】 検体とフィブリン析出阻害剤とを混合した
後、あるいは検体とフィブリノゲンとフィブリン析出阻
害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カルシウ
ムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、その凝
固時間を標準と比較する。該測定方法のための試薬キッ
トは、トロンビンと、カルシウムイオンと、フィブリン
析出阻害剤よりなり、さらにフィブリノゲンと組み合わ
せることもできる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血液凝固第ＸIII因子(以
下、第ＸIII因子と称する)の活性測定方法および該測定
用試薬キットに関する。
下、第ＸIII因子と称する)の活性測定方法および該測定
用試薬キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】第ＸIII因子はフィブリン安定化因子と
も呼ばれ、トロンビンとカルシウムイオンにより活性化
されると、血液凝固反応の最終段階においてフィブリン
分子間およびフィブリンと他のタンパク質との間にトラ
ンスグルタミナーゼ反応によって架橋反応を進行させ、
安定なフィブリン塊等を形成し、線溶抵抗性の獲得と繊
維芽細胞の接着担体形成を促進する役割を担うタンパク
質である。平常は血液中に不活性状態で存在するが、出
血などで血液凝固が起こりトロンビンが生成すると、こ
のトロンビンとカルシウムイオンの作用により活性化さ
れ、フィブリンを安定化する。
も呼ばれ、トロンビンとカルシウムイオンにより活性化
されると、血液凝固反応の最終段階においてフィブリン
分子間およびフィブリンと他のタンパク質との間にトラ
ンスグルタミナーゼ反応によって架橋反応を進行させ、
安定なフィブリン塊等を形成し、線溶抵抗性の獲得と繊
維芽細胞の接着担体形成を促進する役割を担うタンパク
質である。平常は血液中に不活性状態で存在するが、出
血などで血液凝固が起こりトロンビンが生成すると、こ
のトロンビンとカルシウムイオンの作用により活性化さ
れ、フィブリンを安定化する。
【０００３】従って、第ＸIII因子が減少もしくは欠損
している血液では、血液凝固時間は正常閾値を示すが、
形成されたフィブリン塊は脆弱であり、後出血などの特
有の現象を呈する他に創傷治癒遅延の傾向を示す。この
ように第ＸIII因子が減少もしくは欠損する事例として
は、先天性の欠乏症、播種性血管内凝固(ＤＩＣ)、重症
肝疾患、悪性腫瘍、白血病、第ＸIII因子インヒビター
獲得者、大手術等が挙げられる。従って、第ＸIII因子
の測定は病気の診断や治療効果を判定する上で重要であ
り、第ＸIII因子の正確、迅速、簡便な測定方法の確立
が要望されている。
している血液では、血液凝固時間は正常閾値を示すが、
形成されたフィブリン塊は脆弱であり、後出血などの特
有の現象を呈する他に創傷治癒遅延の傾向を示す。この
ように第ＸIII因子が減少もしくは欠損する事例として
は、先天性の欠乏症、播種性血管内凝固(ＤＩＣ)、重症
肝疾患、悪性腫瘍、白血病、第ＸIII因子インヒビター
獲得者、大手術等が挙げられる。従って、第ＸIII因子
の測定は病気の診断や治療効果を判定する上で重要であ
り、第ＸIII因子の正確、迅速、簡便な測定方法の確立
が要望されている。
【０００４】しかしながら、これまでの測定方法は、こ
の要望を十分に満足するものではなかった。即ち、第Ｘ
III因子測定の従来法としては、血漿を凝固させたクロ
ット(フィブリン塊)が１％モノクロール酢酸などの希薄
な酸や５〜８mol／lの尿素液によって溶解するか否かを
調べるクロット溶解による定性法、抗体中和や希釈系列
作製後のクロット溶解法による半定量法、その他免疫学
的方法や活性第ＸIII因子のトランスグルタミナーゼ活
性を利用したアミン取り込み法による定量方法が知られ
ている[例えば、日本臨床４７巻、１９８９年増刊号、
８４６〜８４８頁、臨床検査Ｖol．２７、Ｎo．８、８
４８〜８５３頁(１９８３年８月)]が、まず、定性法や
半定量法は正確な第ＸIII因子活性が求まるものではな
い。
の要望を十分に満足するものではなかった。即ち、第Ｘ
III因子測定の従来法としては、血漿を凝固させたクロ
ット(フィブリン塊)が１％モノクロール酢酸などの希薄
な酸や５〜８mol／lの尿素液によって溶解するか否かを
調べるクロット溶解による定性法、抗体中和や希釈系列
作製後のクロット溶解法による半定量法、その他免疫学
的方法や活性第ＸIII因子のトランスグルタミナーゼ活
性を利用したアミン取り込み法による定量方法が知られ
ている[例えば、日本臨床４７巻、１９８９年増刊号、
８４６〜８４８頁、臨床検査Ｖol．２７、Ｎo．８、８
４８〜８５３頁(１９８３年８月)]が、まず、定性法や
半定量法は正確な第ＸIII因子活性が求まるものではな
い。
【０００５】また、免疫学的方法、即ち、第ＸIII因子
に対する抗体を用い、第ＸIII因子を抗原として捕える
方法（例えば、特開昭５９−１９２９６１号、特開昭６
３−１８４０６１号）は、一般的に操作が煩雑であり、
測定に数時間を要する。また、抗原量としての測定であ
るため、生体内での第ＸIII因子活性を正確に反映しな
いという問題点がある。
に対する抗体を用い、第ＸIII因子を抗原として捕える
方法（例えば、特開昭５９−１９２９６１号、特開昭６
３−１８４０６１号）は、一般的に操作が煩雑であり、
測定に数時間を要する。また、抗原量としての測定であ
るため、生体内での第ＸIII因子活性を正確に反映しな
いという問題点がある。
【０００６】さらに、定量的に第ＸIII因子活性を測定
するアミン取り込み法としては、検体中の第ＸIII因子
をトロンビンとカルシウムイオンで活性化し活性第ＸII
I因子を形成させた後、カルボニル基質としてカゼイ
ン、フェニルプロピオニルチオコリン、ブチリルピラゾ
ール等を用い、アミン基質としてモノダンシルカダベリ
ン、プトレシン、グリシンエチルエステル、ヒスタミン
等の合成基質を用いて、カルボニル基質にアミン基質を
取り込ませるラジオアイソトープ法、蛍光法[例えば、
特開昭５８−２１６９５９号]やアミン取り込み反応に
より形成されるアンモニアをＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ
とＧＬＤＨ(グルタミンデヒドロゲナーゼ)およびケトグ
ルタレートを用いＮＡＤまたはＮＡＤＰの生成反応に導
く方法[クリニカル・ケミストリー（Ｃlin．Ｃhem.），
Ｖol．３１，Ｎo．１，３５〜４０頁、１９８５；特開
平１−３０９７００号]がある。これらの方法では検体
中のフィブリノゲンを不活化するために第ＸIII因子を
活性化する前に５６℃で３または４分加温し、冷却する
という操作を必要とする。また、活性化第ＸIII因子測
定の反応時間は１０〜３０分であり、反応停止後、遠心
操作またはカラム操作を必要とする。従って、操作は煩
雑であり、長時間を要し、測定の正確性にも問題があ
る。さらには、ラジオアイソトープ法では放射性物質を
取り扱うために設備にかなりの投資が必要であり経済的
負担も大きい。
するアミン取り込み法としては、検体中の第ＸIII因子
をトロンビンとカルシウムイオンで活性化し活性第ＸII
I因子を形成させた後、カルボニル基質としてカゼイ
ン、フェニルプロピオニルチオコリン、ブチリルピラゾ
ール等を用い、アミン基質としてモノダンシルカダベリ
ン、プトレシン、グリシンエチルエステル、ヒスタミン
等の合成基質を用いて、カルボニル基質にアミン基質を
取り込ませるラジオアイソトープ法、蛍光法[例えば、
特開昭５８−２１６９５９号]やアミン取り込み反応に
より形成されるアンモニアをＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ
とＧＬＤＨ(グルタミンデヒドロゲナーゼ)およびケトグ
ルタレートを用いＮＡＤまたはＮＡＤＰの生成反応に導
く方法[クリニカル・ケミストリー（Ｃlin．Ｃhem.），
Ｖol．３１，Ｎo．１，３５〜４０頁、１９８５；特開
平１−３０９７００号]がある。これらの方法では検体
中のフィブリノゲンを不活化するために第ＸIII因子を
活性化する前に５６℃で３または４分加温し、冷却する
という操作を必要とする。また、活性化第ＸIII因子測
定の反応時間は１０〜３０分であり、反応停止後、遠心
操作またはカラム操作を必要とする。従って、操作は煩
雑であり、長時間を要し、測定の正確性にも問題があ
る。さらには、ラジオアイソトープ法では放射性物質を
取り扱うために設備にかなりの投資が必要であり経済的
負担も大きい。
【０００７】前記したアミン取り込み法のうち、特開平
１−３０９７００号の方法では、フィブリノゲン−フィ
ブリンの影響を除く目的で、フィブリン凝集阻害剤グリ
シン−プロリン−アルギニン−プロリンを用いる。その
フィブリン凝集阻害剤存在下でグルタミン含有ペプチ
ド、例えば、ロイシン−ロイシン−グリシン−プロリン
−グリシン−グルタミン−セリン−リジン−バリン−イ
ソロイシン−グリシンアミドと第１級アミンを用い、形
成されるアンモニアを測定する。この方法では特殊なペ
プチドを用いるため高価となる。また、測定に関与する
反応が多く、誤差を生じ易い。さらには、検体中に存在
するアンモニアも測定に影響し得る。
１−３０９７００号の方法では、フィブリノゲン−フィ
ブリンの影響を除く目的で、フィブリン凝集阻害剤グリ
シン−プロリン−アルギニン−プロリンを用いる。その
フィブリン凝集阻害剤存在下でグルタミン含有ペプチ
ド、例えば、ロイシン−ロイシン−グリシン−プロリン
−グリシン−グルタミン−セリン−リジン−バリン−イ
ソロイシン−グリシンアミドと第１級アミンを用い、形
成されるアンモニアを測定する。この方法では特殊なペ
プチドを用いるため高価となる。また、測定に関与する
反応が多く、誤差を生じ易い。さらには、検体中に存在
するアンモニアも測定に影響し得る。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、この
ような従来法の問題点を解消し、正確、迅速、かつ簡便
な第ＸIII因子活性の測定方法およびかかる測定のため
の試薬キットを提供することにある。
ような従来法の問題点を解消し、正確、迅速、かつ簡便
な第ＸIII因子活性の測定方法およびかかる測定のため
の試薬キットを提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】このような事情に鑑み、
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、トロンビンによ
りフィブリノゲンをフィブリンとし、トロンビンとカル
シウムイオンで第ＸIII因子を活性化し、活性化第ＸIII
因子がフィブリンを架橋させフィブリン塊を形成する一
連の反応をフィブリン析出阻害剤の存在下で行い、形成
されるフィブリン塊が析出する凝固時間を測定し、標準
と比較することにより第ＸIII因子活性が求められるこ
とを見い出し、本発明を完成するに至った。
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、トロンビンによ
りフィブリノゲンをフィブリンとし、トロンビンとカル
シウムイオンで第ＸIII因子を活性化し、活性化第ＸIII
因子がフィブリンを架橋させフィブリン塊を形成する一
連の反応をフィブリン析出阻害剤の存在下で行い、形成
されるフィブリン塊が析出する凝固時間を測定し、標準
と比較することにより第ＸIII因子活性が求められるこ
とを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】即ち、本発明は、検体とフィブリン析出阻
害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カルシウ
ムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、その凝
固時間を標準の凝固時間と比較して検体中の第ＸIII因
子活性を求めることを特徴とする第ＸIII因子活性測定
方法（以下、方法１という）を提供するものである。ま
た、本発明は、検体と、フィブリノゲンと、フィブリン
析出阻害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カ
ルシウムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、
その凝固時間を標準の凝固時間と比較して検体中の第Ｘ
III因子活性を求めることを特徴とする第ＸIII因子活性
測定方法（以下、方法２という）を提供するものであ
る。
害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カルシウ
ムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、その凝
固時間を標準の凝固時間と比較して検体中の第ＸIII因
子活性を求めることを特徴とする第ＸIII因子活性測定
方法（以下、方法１という）を提供するものである。ま
た、本発明は、検体と、フィブリノゲンと、フィブリン
析出阻害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カ
ルシウムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、
その凝固時間を標準の凝固時間と比較して検体中の第Ｘ
III因子活性を求めることを特徴とする第ＸIII因子活性
測定方法（以下、方法２という）を提供するものであ
る。
【００１１】第ＸIII因子の作用は生体内でのフィブリ
ンクロット形成であり、その形成は血液中で生じたフィ
ブリンを基質とし、その架橋反応を行うものである。従
って、方法１により、血液中でのフィブリンクロット形
成能全体を知ることができ、それにより第ＸIII因子活
性が求まる。また、方法２により、第ＸIII因子含有検
体中のフィブリノゲンだけでなく、試薬としてフィブリ
ノゲンを補充することにより、正味の第ＸIII因子活性
をより正確に測定することができる。
ンクロット形成であり、その形成は血液中で生じたフィ
ブリンを基質とし、その架橋反応を行うものである。従
って、方法１により、血液中でのフィブリンクロット形
成能全体を知ることができ、それにより第ＸIII因子活
性が求まる。また、方法２により、第ＸIII因子含有検
体中のフィブリノゲンだけでなく、試薬としてフィブリ
ノゲンを補充することにより、正味の第ＸIII因子活性
をより正確に測定することができる。
【００１２】本発明の測定方法では、従来の方法と異な
り、第ＸIII因子活性を、フィブリン塊が析出する凝固
時間を測定することにより行う。即ち、フィブリノゲン
がトロンビンによりフィブリンとなり、活性化第ＸIII
因子によりフィブリンが架橋され、フィブリン塊となる
反応を第ＸIII因子活性に依存した凝固時間として測定
する方法は従来全く見当たらない。
り、第ＸIII因子活性を、フィブリン塊が析出する凝固
時間を測定することにより行う。即ち、フィブリノゲン
がトロンビンによりフィブリンとなり、活性化第ＸIII
因子によりフィブリンが架橋され、フィブリン塊となる
反応を第ＸIII因子活性に依存した凝固時間として測定
する方法は従来全く見当たらない。
【００１３】例えば、外因系凝固反応のスクリーニング
検査であるプロトロンビン時間や内因系凝固反応のスク
リーニング検査である活性化部分トロンボプラスチン時
間の測定のような凝固時間で測定する方法では、第ＸII
I因子活性に関係なくフィブリン析出が生じ凝固時間が
測定される[ＵＳ−Ａ−３３２３９９５；メディカル・
テクノロジー（Ｍedical Ｔechnology）, Ｖol．１３，
Ｎo．７，７２６〜７２９頁(１９８５ 臨時増刊)]。ま
た、フィブリノゲン量の測定に日常検査として用いられ
ているトロンビン時間法では、フィブリノゲン(検体)に
トロンビンを加えて、フィブリンが生成されるまでの時
間を測定するが、この測定でも第ＸIII因子の存在の有
無に関係なく凝固時間は測定される。即ち、トロンビン
によりフィブリノゲンがフィブリンになるとフィブリン
が重合し、析出が生じ、凝固時間として測定される。従
って、血液凝固反応での凝固時間は第ＸIII因子活性に
依存しないで測定されてしまう。
検査であるプロトロンビン時間や内因系凝固反応のスク
リーニング検査である活性化部分トロンボプラスチン時
間の測定のような凝固時間で測定する方法では、第ＸII
I因子活性に関係なくフィブリン析出が生じ凝固時間が
測定される[ＵＳ−Ａ−３３２３９９５；メディカル・
テクノロジー（Ｍedical Ｔechnology）, Ｖol．１３，
Ｎo．７，７２６〜７２９頁(１９８５ 臨時増刊)]。ま
た、フィブリノゲン量の測定に日常検査として用いられ
ているトロンビン時間法では、フィブリノゲン(検体)に
トロンビンを加えて、フィブリンが生成されるまでの時
間を測定するが、この測定でも第ＸIII因子の存在の有
無に関係なく凝固時間は測定される。即ち、トロンビン
によりフィブリノゲンがフィブリンになるとフィブリン
が重合し、析出が生じ、凝固時間として測定される。従
って、血液凝固反応での凝固時間は第ＸIII因子活性に
依存しないで測定されてしまう。
【００１４】このように、フィブリノゲン溶液にトロン
ビン溶液を添加すると、第ＸIII因子に依存しない凝固
が生じる。例えば、フィブリノゲン溶液(２mg／ml)２０
０μlにトロンビン溶液(１００ＮＩＨＵ／ml)１００μl
を添加すると、第ＸIII因子が存在しないにも拘わら
ず、フィブリン析出が生じ、１０秒以内に凝固する。従
って、このままでは第ＸIII因子の測定は行えない。本
発明では、フィブリン析出を阻害し、第ＸIII因子の活
性に応じた凝固が起こる系において凝固時間を測定する
ことにより第ＸIII因子の活性を測定する。この点、前
記特開平１−３０９７００号には、フィブリノゲン−フ
ィブリンの影響を除く目的でフィブリン凝集阻害剤(グ
リシン−プロリン−アルギニン−プロリン)を添加し
て、第ＸIII因子活性を測定することが開示されている
が、検出する方法はアンモニア発生の測定であり、凝固
時間法で測定する本発明の方法とは全く異なるものであ
る。
ビン溶液を添加すると、第ＸIII因子に依存しない凝固
が生じる。例えば、フィブリノゲン溶液(２mg／ml)２０
０μlにトロンビン溶液(１００ＮＩＨＵ／ml)１００μl
を添加すると、第ＸIII因子が存在しないにも拘わら
ず、フィブリン析出が生じ、１０秒以内に凝固する。従
って、このままでは第ＸIII因子の測定は行えない。本
発明では、フィブリン析出を阻害し、第ＸIII因子の活
性に応じた凝固が起こる系において凝固時間を測定する
ことにより第ＸIII因子の活性を測定する。この点、前
記特開平１−３０９７００号には、フィブリノゲン−フ
ィブリンの影響を除く目的でフィブリン凝集阻害剤(グ
リシン−プロリン−アルギニン−プロリン)を添加し
て、第ＸIII因子活性を測定することが開示されている
が、検出する方法はアンモニア発生の測定であり、凝固
時間法で測定する本発明の方法とは全く異なるものであ
る。
【００１５】次に、本発明の測定方法で用いる検体およ
び試薬類について説明する。検体 本発明の方法の対象となる検体は、通常、血漿であり、
全血でもよい。常法に従って被検者から採血し、血漿を
分取する。
び試薬類について説明する。検体 本発明の方法の対象となる検体は、通常、血漿であり、
全血でもよい。常法に従って被検者から採血し、血漿を
分取する。
【００１６】フィブリン析出阻害剤 今回、上記反応でフィブリン析出を阻害する条件、即
ち、フィブリノゲンがトロンビンによりフィブリンとな
り、生成したフィブリンができるだけ長時間析出(重合)
ないし凝固しない条件と、第ＸIII因子がトロンビンと
カルシウムイオンによって活性化され、活性化された第
ＸIII因子はフィブリンを架橋させる作用を発揮できる
条件とが判明し、本発明はかかる知見に基づいてなされ
たものである。
ち、フィブリノゲンがトロンビンによりフィブリンとな
り、生成したフィブリンができるだけ長時間析出(重合)
ないし凝固しない条件と、第ＸIII因子がトロンビンと
カルシウムイオンによって活性化され、活性化された第
ＸIII因子はフィブリンを架橋させる作用を発揮できる
条件とが判明し、本発明はかかる知見に基づいてなされ
たものである。
【００１７】ここに、本明細書中においては、フィブリ
ン析出を阻害する条件および第ＸIII因子活性が発揮さ
れる条件の二つの条件を付与する物質をフィブリン析出
阻害剤という。本発明におけるフィブリン析出阻害剤と
しては、その作用を有するものであればいずれでもよ
く、特に限定されるものではない。その例としては、ヨ
ウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、塩化カルシウム、塩
化マグネシウム等でのナトリウムイオン、カリウムイオ
ン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、ヨウ素イ
オン、塩素イオン等(カルシウムイオンは第ＸIII因子活
性化に必要な成分であるが、フィブリン析出阻害剤とし
ても使用できる)や、尿素、ＳＤＳ(Ｓodium Ｄodecyl
Ｓulfate)のような蛋白変性剤、ジチオスレイトール
(ＤＴＴ)、ジチオエリトリトール(ＤＴＥ)、２−メルカ
プトエタノール、β−チオジグリコールのようなＳＨ試
薬、ＥＤＴＡ(Ｅthylenediamine tetraacetic Ａci
d)、ＥＧＴＡ(Ｅthylene Ｇlycol Ｂis(β−aminoeth
ylether)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−tetraaceticＡcid)のような
キレート試薬、グリシン−プロリン−アルギニン−プロ
リンのようなペプチド、塩化テトラエチルアンモニウ
ム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、コール酸ナトリウム、フェリシアン化カリウ
ム、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エ
チレングリコール、ヘキサメチレングリコール等が挙げ
られる。本発明においては、これらのフィブリン析出阻
害剤のうち１種、あるいは２種以上を組み合わせて用い
ることができる。
ン析出を阻害する条件および第ＸIII因子活性が発揮さ
れる条件の二つの条件を付与する物質をフィブリン析出
阻害剤という。本発明におけるフィブリン析出阻害剤と
しては、その作用を有するものであればいずれでもよ
く、特に限定されるものではない。その例としては、ヨ
ウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、塩化カルシウム、塩
化マグネシウム等でのナトリウムイオン、カリウムイオ
ン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、ヨウ素イ
オン、塩素イオン等(カルシウムイオンは第ＸIII因子活
性化に必要な成分であるが、フィブリン析出阻害剤とし
ても使用できる)や、尿素、ＳＤＳ(Ｓodium Ｄodecyl
Ｓulfate)のような蛋白変性剤、ジチオスレイトール
(ＤＴＴ)、ジチオエリトリトール(ＤＴＥ)、２−メルカ
プトエタノール、β−チオジグリコールのようなＳＨ試
薬、ＥＤＴＡ(Ｅthylenediamine tetraacetic Ａci
d)、ＥＧＴＡ(Ｅthylene Ｇlycol Ｂis(β−aminoeth
ylether)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−tetraaceticＡcid)のような
キレート試薬、グリシン−プロリン−アルギニン−プロ
リンのようなペプチド、塩化テトラエチルアンモニウ
ム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、コール酸ナトリウム、フェリシアン化カリウ
ム、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エ
チレングリコール、ヘキサメチレングリコール等が挙げ
られる。本発明においては、これらのフィブリン析出阻
害剤のうち１種、あるいは２種以上を組み合わせて用い
ることができる。
【００１８】また、フィブリン析出阻害剤は、反応液の
pＨによりその阻害作用が異なる場合があるが、析出阻
害作用が十分に発揮されるｐＨで使用するのが好まし
く、例えば、実施例に示すごとく、弱酸性とすることに
よってフィブリン析出阻害作用が十分発揮される場合
は、緩衝剤を用いてpＨを弱酸性域に調節する。これら
の場合、反応液の最終pＨは５.０〜８.０の範囲、好ま
しくは６.０〜７.０の範囲とし、緩衝剤の濃度は２〜２
０００mmol／lの範囲、好ましくは２０〜４００mmol／l
の範囲とする。pＨ調節用の緩衝剤としてはトリス、バ
ルビタール、イミダゾール、ベロナール、グリシルグリ
シン、ＭＥＳ、Ｂis−Ｔris、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、Ｈ
ＥＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＵＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＵ
Ｓ等が挙げられる。
pＨによりその阻害作用が異なる場合があるが、析出阻
害作用が十分に発揮されるｐＨで使用するのが好まし
く、例えば、実施例に示すごとく、弱酸性とすることに
よってフィブリン析出阻害作用が十分発揮される場合
は、緩衝剤を用いてpＨを弱酸性域に調節する。これら
の場合、反応液の最終pＨは５.０〜８.０の範囲、好ま
しくは６.０〜７.０の範囲とし、緩衝剤の濃度は２〜２
０００mmol／lの範囲、好ましくは２０〜４００mmol／l
の範囲とする。pＨ調節用の緩衝剤としてはトリス、バ
ルビタール、イミダゾール、ベロナール、グリシルグリ
シン、ＭＥＳ、Ｂis−Ｔris、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、Ｈ
ＥＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＵＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＵ
Ｓ等が挙げられる。
【００１９】フィブリン析出阻害剤としての各物質添加
の反応液中での濃度は、イオンとしてのナトリウムイオ
ン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウム
イオン、ヨウ素イオン、塩素イオンはヨウ化ナトリウ
ム、ヨウ化カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
塩化カルシウム、塩化マグネシウム等の塩であり、添加
濃度は０.１〜５０００mmol／lである。蛋白変性剤とし
ての尿素は０.１〜３０００mmol／l、ＳＤＳは０.０１
〜１.０％(w／v)である。ＳＨ試薬としてのＤＴＴ、Ｄ
ＴＥは０.１〜１０００mmol／l、２−メルカプトエタノ
ールは０.１〜２０００mmol／l、β−チオジグリコール
は０.１〜３０００mmol／lである。キレート試薬として
のＥＤＴＡ、ＥＧＴＡは０.１〜５００mmol／lである。
ペプチドとしてのグリシン−プロリン−アルギニン−プ
ロリンは０.０１〜１０mmol／lである。塩化テトラエチ
ルアンモニウムは０.１〜５０００mmol／l、塩化ベンジ
ルトリエチルアンモニウムは０.１〜３０００mmol／l、
硫酸アンモニウムは０.１〜２０００mmol／l、コール酸
ナトリウムは０.０１〜１０％(w／v)、フェリシアン化
カリウムは０.１〜５００mmol／l、ジメチルスルホキシ
ドは０.０１〜４０％(v／v)、ジメチルホルムアミドは
０.０１〜４０％(v／v)、エチレングリコールは０.０１
〜４０％(v／v)、ヘキサメチレングリコールは０.１〜
５０００mmol／lである。これら物質の好ましい濃度はp
Ｈと各々の物質の組み合わせに応じて適宜選択すること
ができる。
の反応液中での濃度は、イオンとしてのナトリウムイオ
ン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウム
イオン、ヨウ素イオン、塩素イオンはヨウ化ナトリウ
ム、ヨウ化カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
塩化カルシウム、塩化マグネシウム等の塩であり、添加
濃度は０.１〜５０００mmol／lである。蛋白変性剤とし
ての尿素は０.１〜３０００mmol／l、ＳＤＳは０.０１
〜１.０％(w／v)である。ＳＨ試薬としてのＤＴＴ、Ｄ
ＴＥは０.１〜１０００mmol／l、２−メルカプトエタノ
ールは０.１〜２０００mmol／l、β−チオジグリコール
は０.１〜３０００mmol／lである。キレート試薬として
のＥＤＴＡ、ＥＧＴＡは０.１〜５００mmol／lである。
ペプチドとしてのグリシン−プロリン−アルギニン−プ
ロリンは０.０１〜１０mmol／lである。塩化テトラエチ
ルアンモニウムは０.１〜５０００mmol／l、塩化ベンジ
ルトリエチルアンモニウムは０.１〜３０００mmol／l、
硫酸アンモニウムは０.１〜２０００mmol／l、コール酸
ナトリウムは０.０１〜１０％(w／v)、フェリシアン化
カリウムは０.１〜５００mmol／l、ジメチルスルホキシ
ドは０.０１〜４０％(v／v)、ジメチルホルムアミドは
０.０１〜４０％(v／v)、エチレングリコールは０.０１
〜４０％(v／v)、ヘキサメチレングリコールは０.１〜
５０００mmol／lである。これら物質の好ましい濃度はp
Ｈと各々の物質の組み合わせに応じて適宜選択すること
ができる。
【００２０】なお、これまでにフィブリン凝集(析出)を
阻害する物質として、フィブリン析出に影響するものと
して、または、析出フィブリンを溶解するものとして、
グリシン−プロリン−アルギニン残基を有するペプチ
ド、尿素、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、塩化
テトラエチルアンモニウム、酸やイオン強度が知られて
いる[バイオケミストリー（Ｂiochemistry）, Ｖol．１
９、１０１３〜１０１９、１９８０；ブラッド（Ｂloo
d）, Ｖol．５０、６１９〜６２４、１９７７]が、これ
らの物質等はフィブリン同士の重合反応の研究、フィブ
リンモノマー調製やフィブリンクロット溶解のために用
いられたにすぎず、本発明のごとく第ＸIII因子活性を
凝固時間法で測定する方法に用いられていたものではな
い。
阻害する物質として、フィブリン析出に影響するものと
して、または、析出フィブリンを溶解するものとして、
グリシン−プロリン−アルギニン残基を有するペプチ
ド、尿素、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、塩化
テトラエチルアンモニウム、酸やイオン強度が知られて
いる[バイオケミストリー（Ｂiochemistry）, Ｖol．１
９、１０１３〜１０１９、１９８０；ブラッド（Ｂloo
d）, Ｖol．５０、６１９〜６２４、１９７７]が、これ
らの物質等はフィブリン同士の重合反応の研究、フィブ
リンモノマー調製やフィブリンクロット溶解のために用
いられたにすぎず、本発明のごとく第ＸIII因子活性を
凝固時間法で測定する方法に用いられていたものではな
い。
【００２１】トロンビン、フィブリノゲン、カルシウム
イオン 本発明の測定方法では、フィブリノゲンおよびトロンビ
ンとして、ヒト、ウシ、ウマ、ヤギ等の血液由来のもの
が使用できる。カルシウムイオンとしては、塩化カルシ
ウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩からのも
のが使用できる。これらの試薬およびフィブリン析出阻
害剤はいずれも商業的に入手可能である。また、フィブ
リノゲン試薬、トロンビン試薬およびフィブリン析出阻
害剤試薬は必要に応じてpＨ調節し、pＨ調節の緩衝剤と
しては、トリス、バルビタール、イミダゾール、ベロナ
ール、グリシルグリシンやＭＥＳ、Ｂis−Ｔris、ＡＤ
Ａ、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＵＳ
Ｏ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ等が挙げられる。これらの緩衝剤
も商業的に入手可能である。
イオン 本発明の測定方法では、フィブリノゲンおよびトロンビ
ンとして、ヒト、ウシ、ウマ、ヤギ等の血液由来のもの
が使用できる。カルシウムイオンとしては、塩化カルシ
ウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩からのも
のが使用できる。これらの試薬およびフィブリン析出阻
害剤はいずれも商業的に入手可能である。また、フィブ
リノゲン試薬、トロンビン試薬およびフィブリン析出阻
害剤試薬は必要に応じてpＨ調節し、pＨ調節の緩衝剤と
しては、トリス、バルビタール、イミダゾール、ベロナ
ール、グリシルグリシンやＭＥＳ、Ｂis−Ｔris、ＡＤ
Ａ、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＵＳ
Ｏ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ等が挙げられる。これらの緩衝剤
も商業的に入手可能である。
【００２２】各試薬の濃度は適時選択することができる
が、フィブリノゲン試薬のフィブリノゲン量は反応液中
で０.０１〜１００mg／ml、好ましくは０.５〜１０mg／
mlが望ましい。トロンビン試薬のトロンビンは反応液中
で１〜２００００ＮＩＨＵ／ml、好ましくは２０〜５０
０ＮＩＨＵ／mlが望ましい。トロンビン試薬は、一般
に、検体とフィブリノゲン試薬とフィブリン析出阻害試
薬の混合液１００μl当り、２０〜３００μl程度の割合
で用いられる。カルシウムイオンはフィブリノゲン試
薬、フィブリン析出阻害試薬、トロンビン試薬の何れか
または何れにも処方してもよいが、反応液中での濃度
は、０.１〜１０００mmol／l、好ましくは５〜１００mm
ol／lが望ましい。なお、フィブリノゲン試薬、トロン
ビン試薬のpＨ、濃度および緩衝剤の種類はそれぞれ選
択することができる。
が、フィブリノゲン試薬のフィブリノゲン量は反応液中
で０.０１〜１００mg／ml、好ましくは０.５〜１０mg／
mlが望ましい。トロンビン試薬のトロンビンは反応液中
で１〜２００００ＮＩＨＵ／ml、好ましくは２０〜５０
０ＮＩＨＵ／mlが望ましい。トロンビン試薬は、一般
に、検体とフィブリノゲン試薬とフィブリン析出阻害試
薬の混合液１００μl当り、２０〜３００μl程度の割合
で用いられる。カルシウムイオンはフィブリノゲン試
薬、フィブリン析出阻害試薬、トロンビン試薬の何れか
または何れにも処方してもよいが、反応液中での濃度
は、０.１〜１０００mmol／l、好ましくは５〜１００mm
ol／lが望ましい。なお、フィブリノゲン試薬、トロン
ビン試薬のpＨ、濃度および緩衝剤の種類はそれぞれ選
択することができる。
【００２３】さらに、本発明による測定においては、各
種物質の影響の除去、試薬の性能や品質の維持、製造等
を目的として、フィブリノゲン試薬、フィブリン析出阻
害試薬、トロンビン試薬に各種の物質を適時添加するこ
ともできる。その例としては、イプシロンアミノカプロ
ン酸、トラネキサム酸、アプロチニン等の抗線溶剤、ポ
リブレン、プロタミン等のヘパリン阻害物質、アジ化ナ
トリウム、硫酸ゲンタマイシン、チメロサール等の防腐
剤、トリトンＸ−１００、ツィーン−２０等の界面活性
剤等の他に、糖類、アミノ酸類、アルブミン等のタンパ
ク質、ポリエチレングリコール、グリセロール等の物質
が挙げられる。
種物質の影響の除去、試薬の性能や品質の維持、製造等
を目的として、フィブリノゲン試薬、フィブリン析出阻
害試薬、トロンビン試薬に各種の物質を適時添加するこ
ともできる。その例としては、イプシロンアミノカプロ
ン酸、トラネキサム酸、アプロチニン等の抗線溶剤、ポ
リブレン、プロタミン等のヘパリン阻害物質、アジ化ナ
トリウム、硫酸ゲンタマイシン、チメロサール等の防腐
剤、トリトンＸ−１００、ツィーン−２０等の界面活性
剤等の他に、糖類、アミノ酸類、アルブミン等のタンパ
ク質、ポリエチレングリコール、グリセロール等の物質
が挙げられる。
【００２４】次に、本発明の測定方法の具体的操作につ
いて説明する。本発明による第ＸIII因子活性測定の方
法１としてのフィブリノゲン試薬を用いない方法におい
ては、所定量の検体血漿あるいはその希釈液とフィブリ
ン析出阻害剤試薬を混合し、１５〜４５℃、通常、３７
℃で１〜１０分、好ましくは２〜５分間加温後、トロン
ビン試薬を添加し、同温度で凝固時間を測定することに
より行う。フィブリン析出阻害試薬をトロンビン試薬に
処方してもよい。その場合は検体のみをあらかじめ加温
する。方法２においては、所定量の検体血漿あるいはそ
の希釈液と、フィブリノゲン試薬と、フィブリン析出阻
害試薬とを混合し、１５〜４５℃、通常、３７℃で１〜
１０分、好ましくは、２〜５分間加温後、トロンビン試
薬を添加し、同温度で凝固時間を測定することにより行
う。フィブリン析出阻害剤はフィブリノゲン試薬、トロ
ンビン試薬のいずれか、または両方に処方してもよい
し、別試薬としてもよい。別試薬とした場合は、トロン
ビン試薬添加前に検体とフィブリノゲン試薬の混合液に
添加するが、添加の順序は特に限定されるものではな
い。本発明の測定方法における温度および加温時間は厳
密ではなく、前記範囲から選択される一定の反応温度が
達成されれば足りる。別途、標準として正常血漿を希釈
液または第ＸIII因子欠乏血漿で種々の濃度に希釈し、
同様にして凝固時間を測定し、希釈度に対して凝固時間
をプロットして検量線を得る。得られた検量線より、正
常血漿の第ＸIII因子活性に対する割合として表示する
ことにより検体中の第ＸIII因子活性が求まる。
いて説明する。本発明による第ＸIII因子活性測定の方
法１としてのフィブリノゲン試薬を用いない方法におい
ては、所定量の検体血漿あるいはその希釈液とフィブリ
ン析出阻害剤試薬を混合し、１５〜４５℃、通常、３７
℃で１〜１０分、好ましくは２〜５分間加温後、トロン
ビン試薬を添加し、同温度で凝固時間を測定することに
より行う。フィブリン析出阻害試薬をトロンビン試薬に
処方してもよい。その場合は検体のみをあらかじめ加温
する。方法２においては、所定量の検体血漿あるいはそ
の希釈液と、フィブリノゲン試薬と、フィブリン析出阻
害試薬とを混合し、１５〜４５℃、通常、３７℃で１〜
１０分、好ましくは、２〜５分間加温後、トロンビン試
薬を添加し、同温度で凝固時間を測定することにより行
う。フィブリン析出阻害剤はフィブリノゲン試薬、トロ
ンビン試薬のいずれか、または両方に処方してもよい
し、別試薬としてもよい。別試薬とした場合は、トロン
ビン試薬添加前に検体とフィブリノゲン試薬の混合液に
添加するが、添加の順序は特に限定されるものではな
い。本発明の測定方法における温度および加温時間は厳
密ではなく、前記範囲から選択される一定の反応温度が
達成されれば足りる。別途、標準として正常血漿を希釈
液または第ＸIII因子欠乏血漿で種々の濃度に希釈し、
同様にして凝固時間を測定し、希釈度に対して凝固時間
をプロットして検量線を得る。得られた検量線より、正
常血漿の第ＸIII因子活性に対する割合として表示する
ことにより検体中の第ＸIII因子活性が求まる。
【００２５】検体を希釈する場合は、通常、生理的食塩
水またはpＨ５.５〜８.５の緩衝液、例えば、ミカエリ
ス緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、オーレン・ベロナール
緩衝液、イミダゾール緩衝液、ＨＥＰＥＳ、ＢＥＳ、Ｍ
ＯＰＳ等のグッド緩衝液等を用いて行い、それら希釈溶
液にフィブリノゲンやフィブリン析出阻害剤を含有させ
ることもできる。
水またはpＨ５.５〜８.５の緩衝液、例えば、ミカエリ
ス緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、オーレン・ベロナール
緩衝液、イミダゾール緩衝液、ＨＥＰＥＳ、ＢＥＳ、Ｍ
ＯＰＳ等のグッド緩衝液等を用いて行い、それら希釈溶
液にフィブリノゲンやフィブリン析出阻害剤を含有させ
ることもできる。
【００２６】かくして、本発明の測定方法によれば、正
確かつ迅速、簡便に第ＸIII因子の活性が測定できる。
即ち、前記の試薬を用いる前記操作により、検体中の第
ＸIII因子の活性に依存した凝固時間が生じ、簡単な通
常の血液凝固時間測定機器を用いるだけで、正確な第Ｘ
III因子の活性の測定を行うことができる。また、測定
に要する正味の時間は約５分と短時間である。
確かつ迅速、簡便に第ＸIII因子の活性が測定できる。
即ち、前記の試薬を用いる前記操作により、検体中の第
ＸIII因子の活性に依存した凝固時間が生じ、簡単な通
常の血液凝固時間測定機器を用いるだけで、正確な第Ｘ
III因子の活性の測定を行うことができる。また、測定
に要する正味の時間は約５分と短時間である。
【００２７】また、本発明は、トロンビンと、カルシウ
ムイオンと、フィブリン析出阻害剤よりなる第ＸIII因
子活性を凝固時間法で測定する試薬キット（方法１に対
応）、およびフィブリノゲンと、トロンビンと、カルシ
ウムイオンと、フィブリン析出阻害剤よりなる第ＸIII
因子活性を凝固時間法で測定する試薬キット（方法２に
対応）を提供するものである。試薬キットの構成試薬の
フィブリノゲン試薬、フィブリン析出阻害試薬、トロン
ビン試薬において、フィブリノゲン試薬、トロンビン試
薬にフィブリン析出阻害試薬の一部、または、全部を含
有させてもよい。また、カルシウムイオンはフィブリノ
ゲン試薬、トロンビン試薬、フィブリン析出阻害試薬の
いずれか、または、それぞれに含有させることができ
る。なお、カルシウムイオンはフィブリン析出阻害剤と
しても使用できる。
ムイオンと、フィブリン析出阻害剤よりなる第ＸIII因
子活性を凝固時間法で測定する試薬キット（方法１に対
応）、およびフィブリノゲンと、トロンビンと、カルシ
ウムイオンと、フィブリン析出阻害剤よりなる第ＸIII
因子活性を凝固時間法で測定する試薬キット（方法２に
対応）を提供するものである。試薬キットの構成試薬の
フィブリノゲン試薬、フィブリン析出阻害試薬、トロン
ビン試薬において、フィブリノゲン試薬、トロンビン試
薬にフィブリン析出阻害試薬の一部、または、全部を含
有させてもよい。また、カルシウムイオンはフィブリノ
ゲン試薬、トロンビン試薬、フィブリン析出阻害試薬の
いずれか、または、それぞれに含有させることができ
る。なお、カルシウムイオンはフィブリン析出阻害剤と
しても使用できる。
【００２８】本発明の第ＸIII因子の活性測定用試薬キ
ットは、構成試薬を混合したもの、あるいは各構成試薬
の集合体とすることができる。混合試薬、あるいは各構
成試薬は、常法に従って、賦形剤と共に反応液中で所定
の濃度になるように精製水や緩衝剤に溶解した剤形の、
そのまま直接、測定に供することのできる形態、あるい
は使用時、適時、所望の濃度に希釈する濃厚液の形態、
さらには、凍結乾燥品の形態とすることができる。この
うち、凍結乾燥品の形態が通常採用される形態であり、
使用に際し精製水または緩衝液で復元する。また、各構
成試薬は同一の形態あるいは別の形態とすることができ
る。
ットは、構成試薬を混合したもの、あるいは各構成試薬
の集合体とすることができる。混合試薬、あるいは各構
成試薬は、常法に従って、賦形剤と共に反応液中で所定
の濃度になるように精製水や緩衝剤に溶解した剤形の、
そのまま直接、測定に供することのできる形態、あるい
は使用時、適時、所望の濃度に希釈する濃厚液の形態、
さらには、凍結乾燥品の形態とすることができる。この
うち、凍結乾燥品の形態が通常採用される形態であり、
使用に際し精製水または緩衝液で復元する。また、各構
成試薬は同一の形態あるいは別の形態とすることができ
る。
【００２９】
【実施例】次に参考例および実施例を挙げて本発明をさ
らに詳しく説明する。参考例１ 検体として、市販管理正常血漿カリプラズマ(登録商
標、フランス国、ビオメリュー社製)又は、第ＸＩＩＩ
因子欠乏血漿(米国、シグマ社製)５０μlに０.３mol／l
塩化ナトリウムで溶解したヒト血漿由来フィブリノゲン
(米国、シグマ社製、フラクションＩ)１５mg／mlの溶液
５０μlを加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７
℃、２分間加温後、２０mmol／l塩化カルシウムで溶解
したトロンビン(フランス国、ビオメリュー社製、フィ
ブリノゲンキットの構成品)１００ＮＩＨＵ／ml溶液１
００μlを添加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−
４(アメルング社製)で測定した。試料溶液５０μl中に
緩衝剤を添加し、その種類とpＨでの凝固時間の関係を
調べた。その結果を表１に示す(濃度とpＨは試料溶液中
である)。
らに詳しく説明する。参考例１ 検体として、市販管理正常血漿カリプラズマ(登録商
標、フランス国、ビオメリュー社製)又は、第ＸＩＩＩ
因子欠乏血漿(米国、シグマ社製)５０μlに０.３mol／l
塩化ナトリウムで溶解したヒト血漿由来フィブリノゲン
(米国、シグマ社製、フラクションＩ)１５mg／mlの溶液
５０μlを加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７
℃、２分間加温後、２０mmol／l塩化カルシウムで溶解
したトロンビン(フランス国、ビオメリュー社製、フィ
ブリノゲンキットの構成品)１００ＮＩＨＵ／ml溶液１
００μlを添加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−
４(アメルング社製)で測定した。試料溶液５０μl中に
緩衝剤を添加し、その種類とpＨでの凝固時間の関係を
調べた。その結果を表１に示す(濃度とpＨは試料溶液中
である)。
【００３０】
【表１】
【００３１】pＨの低下で正常血漿および第ＸIII因子欠
乏血漿とも凝固時間が延長し、フィブリン析出が抑制さ
れた。しかし、正常血漿と第ＸIII因子欠乏血漿での凝
固時間に差は特に認められない。
乏血漿とも凝固時間が延長し、フィブリン析出が抑制さ
れた。しかし、正常血漿と第ＸIII因子欠乏血漿での凝
固時間に差は特に認められない。
【００３２】実施例１ 検体として、市販管理正常血漿カリプラズマ、または、
第ＸIII因子欠乏血漿５０μlに０.３mol／l塩化ナトリ
ウム、０.２mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ７.０で溶解したヒ
ト血漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを
加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７℃、２分間
加温後、２０mmol／l塩化カルシウムで溶解したトロン
ビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００μlを添加し、凝固
時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で測定した。試料溶液
５０μl中に各種物質を添加し、その効果を調べた。そ
の結果を表２に示す(添加濃度は試料溶液中における濃
度である)。
第ＸIII因子欠乏血漿５０μlに０.３mol／l塩化ナトリ
ウム、０.２mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ７.０で溶解したヒ
ト血漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを
加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７℃、２分間
加温後、２０mmol／l塩化カルシウムで溶解したトロン
ビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００μlを添加し、凝固
時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で測定した。試料溶液
５０μl中に各種物質を添加し、その効果を調べた。そ
の結果を表２に示す(添加濃度は試料溶液中における濃
度である)。
【００３３】
【表２】
【００３４】各種物質の添加により凝固時間は延長し、
尿素、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、塩化マグネ
シウム、ＳＤＳ、塩化ベンジルトリエチルアンモニウ
ム、コール酸ナトリウムでは正常血漿と第ＸIII因子欠
乏血漿の凝固時間差、即ち、第ＸIII因子活性の有無に
よる凝固時間差が５.０秒以上生じ、フィブリン析出阻
害剤としての効果が認められた。本検討条件ではＧly−
Ｐro−Ａrg−Ｐro、ＤＴＴ、ＤＴＥ、ＥＤＴＡ、ＥＧＴ
Ａでフィブリン析出阻害剤としての効果はほとんど認め
られない。
尿素、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、塩化マグネ
シウム、ＳＤＳ、塩化ベンジルトリエチルアンモニウ
ム、コール酸ナトリウムでは正常血漿と第ＸIII因子欠
乏血漿の凝固時間差、即ち、第ＸIII因子活性の有無に
よる凝固時間差が５.０秒以上生じ、フィブリン析出阻
害剤としての効果が認められた。本検討条件ではＧly−
Ｐro−Ａrg−Ｐro、ＤＴＴ、ＤＴＥ、ＥＤＴＡ、ＥＧＴ
Ａでフィブリン析出阻害剤としての効果はほとんど認め
られない。
【００３５】実施例２ 検体として、市販管理正常血漿カリプラズマ、または、
第ＸIII因子欠乏血漿５０μlに１.０mol／l塩化ナトリ
ウム、０.２mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解したヒ
ト血漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを
加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７℃、２分間
加温後、４０mmol／l塩化カルシウム、０.２mol／l Ｈ
ＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解したトロンビン１００ＮＩＨ
Ｕ／ml溶液１００μlを添加し、凝固時間を凝固時間測
定機器ＫＣ−４で測定した。試料溶液５０μl中に各種
物質を添加し、その効果を調べた。その結果を表３に示
す(添加濃度は試料溶液中における濃度である)。
第ＸIII因子欠乏血漿５０μlに１.０mol／l塩化ナトリ
ウム、０.２mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解したヒ
ト血漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを
加え、さらに試料溶液５０μl添加後、３７℃、２分間
加温後、４０mmol／l塩化カルシウム、０.２mol／l Ｈ
ＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解したトロンビン１００ＮＩＨ
Ｕ／ml溶液１００μlを添加し、凝固時間を凝固時間測
定機器ＫＣ−４で測定した。試料溶液５０μl中に各種
物質を添加し、その効果を調べた。その結果を表３に示
す(添加濃度は試料溶液中における濃度である)。
【００３６】
【表３】
【００３７】塩化ナトリウム、塩化カルシウムの高濃度
および弱酸性の条件下で、各種物質の添加により凝固時
間は延長し、尿素、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウ
ム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ＤＴＴ、ＤＴ
Ｅ、２−メルカプトエタノール、β−ジチオグリコー
ル、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、グリシン−プロリン−アルギ
ニン−プロリン、塩化テトラエチルアンモニウム、塩化
ベンジルトリエチルアンモニウム、硫酸アンモニウム、
コール酸ナトリウム、フェリシアン化カリウム、ジメチ
ルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エチレングリ
コール、ヘキサメチレングリコールで正常血漿と第ＸII
I因子欠乏血漿の凝固時間差、即ち、第ＸIII因子活性の
有無による凝固時間差が５.０秒以上生じ、フィブリン
析出阻害剤としての効果が認められた。実施例２では実
施例１で認められなかった多くの物質にフィブリン析出
阻害効果を認めた。実施例１と２は塩濃度、緩衝剤濃度
とpＨが異なり、実施例２では実施例１より添加物質の
低濃度でその効果が認められた。
および弱酸性の条件下で、各種物質の添加により凝固時
間は延長し、尿素、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウ
ム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ＤＴＴ、ＤＴ
Ｅ、２−メルカプトエタノール、β−ジチオグリコー
ル、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、グリシン−プロリン−アルギ
ニン−プロリン、塩化テトラエチルアンモニウム、塩化
ベンジルトリエチルアンモニウム、硫酸アンモニウム、
コール酸ナトリウム、フェリシアン化カリウム、ジメチ
ルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エチレングリ
コール、ヘキサメチレングリコールで正常血漿と第ＸII
I因子欠乏血漿の凝固時間差、即ち、第ＸIII因子活性の
有無による凝固時間差が５.０秒以上生じ、フィブリン
析出阻害剤としての効果が認められた。実施例２では実
施例１で認められなかった多くの物質にフィブリン析出
阻害効果を認めた。実施例１と２は塩濃度、緩衝剤濃度
とpＨが異なり、実施例２では実施例１より添加物質の
低濃度でその効果が認められた。
【００３８】実施例３ 市販管理正常血漿カリプラズマ(第ＸIII因子活性を１０
０％とする)と、第ＸIII因子欠乏血漿(第ＸＩＩＩ因子
活性を０％とする)を混合し、第ＸIII因子活性１００
％、５０％、２５％、１２．５％の検体を調製した。そ
れら検体１００μlにフィブリン析出阻害試薬として、
３mmol／l ＤＴＴと０.４mol／lヨウ化ナトリウムを含
む溶液５０μl添加後、３７℃、２分間加温後、８０mmo
l／l塩化カルシウム、０.４mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.
６で溶解したトロンビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００
μlを添加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で
測定した。その結果を図１に示す。
０％とする)と、第ＸIII因子欠乏血漿(第ＸＩＩＩ因子
活性を０％とする)を混合し、第ＸIII因子活性１００
％、５０％、２５％、１２．５％の検体を調製した。そ
れら検体１００μlにフィブリン析出阻害試薬として、
３mmol／l ＤＴＴと０.４mol／lヨウ化ナトリウムを含
む溶液５０μl添加後、３７℃、２分間加温後、８０mmo
l／l塩化カルシウム、０.４mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.
６で溶解したトロンビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００
μlを添加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で
測定した。その結果を図１に示す。
【００３９】方法１としてのフィブリノゲンを試薬とし
て用いない第ＸIII因子活性測定で、第ＸIII因子活性と
凝固時間は両対数グラフ上で直線関係が認められ、第Ｘ
III因子活性が定量性よく測定された。
て用いない第ＸIII因子活性測定で、第ＸIII因子活性と
凝固時間は両対数グラフ上で直線関係が認められ、第Ｘ
III因子活性が定量性よく測定された。
【００４０】実施例４ 市販管理正常血漿カリプラズマ(第ＸIII因子活性を１０
０％とする)と第ＸIII因子欠乏血漿(第ＸIII因子活性を
０％とする)を混合し、第ＸIII因子活性１００％、５０
％、２５％、１２.５％の検体を調製した。それら検体
５０μlに０.３mol／l塩化ナトリウムで溶解したヒト血
漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを加
え、さらにフィブリン析出阻害試薬として、４０mmol／
l ＤＴＴと０.１mol／lヨウ化ナトリウムを含む溶液５
０μl添加後、３７℃、２分間加温後、４０mmol／l塩化
カルシウム、０.４mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解
したトロンビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００μlを添
加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で測定し
た。その結果を図２に示す。
０％とする)と第ＸIII因子欠乏血漿(第ＸIII因子活性を
０％とする)を混合し、第ＸIII因子活性１００％、５０
％、２５％、１２.５％の検体を調製した。それら検体
５０μlに０.３mol／l塩化ナトリウムで溶解したヒト血
漿由来フィブリノゲン１５mg／mlの溶液５０μlを加
え、さらにフィブリン析出阻害試薬として、４０mmol／
l ＤＴＴと０.１mol／lヨウ化ナトリウムを含む溶液５
０μl添加後、３７℃、２分間加温後、４０mmol／l塩化
カルシウム、０.４mol／l ＨＥＰＥＳ pＨ６.６で溶解
したトロンビン１００ＮＩＨＵ／ml溶液１００μlを添
加し、凝固時間を凝固時間測定機器ＫＣ−４で測定し
た。その結果を図２に示す。
【００４１】方法２としてのフィブリノゲンを試薬とし
て用いる方法で、第ＸIII因子活性と凝固時間は片対数
グラフ上（横軸が対数軸である）で直線関係が認めら
れ、第ＸIII因子活性が定量性よく測定された。
て用いる方法で、第ＸIII因子活性と凝固時間は片対数
グラフ上（横軸が対数軸である）で直線関係が認めら
れ、第ＸIII因子活性が定量性よく測定された。
【００４２】実施例５ トロンビン（濃度１００ＮＩＨＵ／ml）、カルシウムイ
オン（濃度８０mmol／ｌ）およびＨＥＰＥＳ ０.４mol
／ｌ、ｐＨ６.６よりなるトロンビン溶液と、フィブリ
ン析出阻害剤としてのＤＴＴ（３mmol／ｌ）、ヨウ化ナ
トリウム（０.４mol／ｌ）よりなるフィブリン析出阻害
剤溶液とを組み合わせて本発明の第ＸIII因子活性測定
用試薬キットを得た。
オン（濃度８０mmol／ｌ）およびＨＥＰＥＳ ０.４mol
／ｌ、ｐＨ６.６よりなるトロンビン溶液と、フィブリ
ン析出阻害剤としてのＤＴＴ（３mmol／ｌ）、ヨウ化ナ
トリウム（０.４mol／ｌ）よりなるフィブリン析出阻害
剤溶液とを組み合わせて本発明の第ＸIII因子活性測定
用試薬キットを得た。
【００４３】実施例６ フィブリノゲン（濃度１５mg／ml）、塩化ナトリウム
（濃度０.３mol／ｌ）よりなるフィブリノゲン溶液と、
トロンビン（濃度１００ＮＩＨＵ／ml）、カルシウムイ
オン（濃度４０mmol／ｌ）およびＨＥＰＥＳ ０.４mol
／ｌ、ｐＨ６.６よりなるトロンビン溶液と、フィブリ
ン析出阻害剤としてのＤＴＴ４０mmol／ｌ、ヨウ化ナト
リウム０.１mol／ｌよりなるフィブリン析出阻害剤溶液
とを組み合わせて本発明の第ＸIII因子活性測定用試薬
キットを得た。
（濃度０.３mol／ｌ）よりなるフィブリノゲン溶液と、
トロンビン（濃度１００ＮＩＨＵ／ml）、カルシウムイ
オン（濃度４０mmol／ｌ）およびＨＥＰＥＳ ０.４mol
／ｌ、ｐＨ６.６よりなるトロンビン溶液と、フィブリ
ン析出阻害剤としてのＤＴＴ４０mmol／ｌ、ヨウ化ナト
リウム０.１mol／ｌよりなるフィブリン析出阻害剤溶液
とを組み合わせて本発明の第ＸIII因子活性測定用試薬
キットを得た。
【００４４】
【発明の効果】以上述べた通り、本発明の第ＸIII因子
活性測定方法は第ＸIII因子の生体内での反応に近い反
応系を利用する方法であり、測定感度が高く、かつ正確
な値を得ることができる方法である。また、その測定操
作は極めて簡単であり、迅速に行うことができ、通常の
臨床検査に適用できる有用な方法である。
活性測定方法は第ＸIII因子の生体内での反応に近い反
応系を利用する方法であり、測定感度が高く、かつ正確
な値を得ることができる方法である。また、その測定操
作は極めて簡単であり、迅速に行うことができ、通常の
臨床検査に適用できる有用な方法である。
【図１】 実施例３において、フィブリノゲンを試薬と
して用いない方法１で、種々の濃度の検体を用いて測定
した第ＸIII因子活性と凝固時間の関係を示すグラフで
ある。
して用いない方法１で、種々の濃度の検体を用いて測定
した第ＸIII因子活性と凝固時間の関係を示すグラフで
ある。
【図２】 実施例４において、フィブリノゲンを試薬と
して用いる方法２で、種々の濃度の検体を用いて測定し
た第ＸIII因子活性と凝固時間の関係を示すグラフであ
る。
して用いる方法２で、種々の濃度の検体を用いて測定し
た第ＸIII因子活性と凝固時間の関係を示すグラフであ
る。
Claims (4)
- 【請求項１】 検体とフィブリン析出阻害剤とを混合し
た後、トロンビン溶液を加え、カルシウムイオン存在下
でフィブリン凝固時間を測定し、その凝固時間を標準の
凝固時間と比較して検体中の第ＸIII因子活性を求める
ことを特徴とする第ＸIII因子活性測定方法。 - 【請求項２】 検体と、フィブリノゲンと、フィブリン
析出阻害剤とを混合した後、トロンビン溶液を加え、カ
ルシウムイオン存在下でフィブリン凝固時間を測定し、
その凝固時間を標準の凝固時間と比較して検体中の第Ｘ
III因子活性を求めることを特徴とする第ＸIII因子活性
測定方法。 - 【請求項３】 トロンビンと、カルシウムイオンと、フ
ィブリン析出阻害剤とからなる、第ＸIII因子活性を凝
固時間法で測定することを特徴とする第ＸIII因子活性
測定用試薬キット。 - 【請求項４】 フィブリノゲンと、トロンビンと、カル
シウムイオンと、フィブリン析出阻害剤とからなる、第
ＸIII因子活性を凝固時間法で測定することを特徴とす
る第ＸIII因子活性測定用試薬キット。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24309892A JP3224607B2 (ja) | 1992-09-11 | 1992-09-11 | 血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キット |
| PCT/JP1993/001247 WO1994007145A1 (fr) | 1992-09-11 | 1993-09-03 | Procede de determination de l'activite du facteur de coagulation sanguine xiii et trousse de reactifs appropries |
| EP93919610A EP0632270A4 (en) | 1992-09-11 | 1993-09-03 | METHOD FOR DETERMINING THE ACTIVITY OF BLOOD COAGINING FACTOR XIII AND REAGENT SET THEREFOR. |
| US08/232,221 US5508202A (en) | 1992-09-11 | 1993-09-03 | Method of determining blood coagulation factor XIII activity and kit of reagents for the determination |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24309892A JP3224607B2 (ja) | 1992-09-11 | 1992-09-11 | 血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0694726A true JPH0694726A (ja) | 1994-04-08 |
| JP3224607B2 JP3224607B2 (ja) | 2001-11-05 |
Family
ID=17098764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24309892A Expired - Fee Related JP3224607B2 (ja) | 1992-09-11 | 1992-09-11 | 血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キット |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5508202A (ja) |
| EP (1) | EP0632270A4 (ja) |
| JP (1) | JP3224607B2 (ja) |
| WO (1) | WO1994007145A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003507713A (ja) * | 1999-08-12 | 2003-02-25 | アクゾ・ノーベル・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 患者サンプル中の止血機能障害の存在を予測する方法 |
| WO2020166961A1 (ko) * | 2019-02-14 | 2020-08-20 | 주식회사 앤씨비아이티 | 지혈효소 및 카르복시메틸 키토산을 포함하는 혈액응고 검사용 조성물 및 그의 용도 |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2994557B2 (ja) * | 1994-09-02 | 1999-12-27 | 株式会社アズウェル | フィブリノゲン測定方法およびその測定試薬 |
| US5708591A (en) | 1995-02-14 | 1998-01-13 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of congenital and acquired imbalances and therapeutic conditions |
| US6321164B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-11-20 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade |
| US6898532B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-05-24 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| DE19602673A1 (de) * | 1996-01-25 | 1997-08-07 | Pereg Gmbh | Synthetische Testanschmutzung |
| KR100222292B1 (ko) * | 1997-06-18 | 1999-10-01 | 허일섭 | 피브린 단량체를 이용한 혈액 응고 제 13인자의활성 측정방법 |
| JP4176157B2 (ja) * | 1997-07-23 | 2008-11-05 | 株式会社トクヤマ | 凝固パラメーターの決定方法 |
| US6502040B2 (en) | 1997-12-31 | 2002-12-31 | Biomerieux, Inc. | Method for presenting thrombosis and hemostasis assay data |
| JP4486260B2 (ja) | 1999-02-04 | 2010-06-23 | バイオメリュー・インコーポレイテッド | 患者サンプルにおける止血機能不全の存在を予測するための方法および装置 |
| US7179612B2 (en) | 2000-06-09 | 2007-02-20 | Biomerieux, Inc. | Method for detecting a lipoprotein-acute phase protein complex and predicting an increased risk of system failure or mortality |
| AU2001287423B2 (en) * | 2000-08-21 | 2007-04-05 | Queen's University At Kingston | Methods and kits for separation and detection of proteins in biological samples |
| US6645768B1 (en) * | 2000-10-27 | 2003-11-11 | Biomerieux, Inc. | Reagent and kit for determining global coagulability and hemostatic potential |
| US6743596B1 (en) * | 2000-10-27 | 2004-06-01 | Biomerieux, Inc. | Method of determining global coagulability hemostatic potential |
| DE10222234A1 (de) * | 2002-05-16 | 2003-11-27 | Roche Diagnostics Gmbh | Kontroll- und Kalibrationsmaterial für Blutgerinnungstests |
| EP1672369A1 (de) * | 2004-12-16 | 2006-06-21 | Roche Diagnostics GmbH | Verfahren zur Bestimmung von Blutkoagulationsparametern, insbesondere in Durchflussmesssystemen |
| CA2672651C (en) | 2006-12-15 | 2014-03-11 | Lifebond Ltd. | Gelatin-transglutaminase hemostatic dressings and sealants |
| WO2010046468A1 (en) * | 2008-10-24 | 2010-04-29 | Novo Nordisk Health Care Ag | Method of quality control testing a factor xiii containing sample |
| DE102009048198A1 (de) * | 2009-10-05 | 2011-04-21 | Siemens Healthcare Diagnostics Products Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Faktor XIII mittels NAD(P)H-Analoga |
| DE102009048199A1 (de) * | 2009-10-05 | 2011-04-21 | Siemens Healthcare Diagnostics Products Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Faktor XIII mit Hilfe von Referenzmaterial auf Plasmabasis |
| JP5796860B2 (ja) | 2009-12-22 | 2015-10-21 | ライフボンド リミテッドＬｉｆｅｂｏｎｄ Ｌｔｄ | 架橋マトリックスの特性を調節するための酵素的架橋剤の改変 |
| EP4343774A2 (en) | 2016-04-15 | 2024-03-27 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment |
| CN108344875B (zh) * | 2017-01-22 | 2021-11-02 | 上海长岛生物技术有限公司 | 提高活化部分凝血活酶时间试剂对肝素敏感性的方法及用途 |
| US10896749B2 (en) | 2017-01-27 | 2021-01-19 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Drug monitoring tool |
| CN110257475B (zh) * | 2019-06-28 | 2023-05-02 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 纤维蛋白原检测试剂及其制备方法及检测试剂制品 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3323995A (en) * | 1963-05-20 | 1967-06-06 | Univ Northwestern | Method of inhibiting the crosslinking of fibrin in blood |
| DE2622180C3 (de) * | 1976-05-19 | 1978-10-26 | Eckart Dr.Med. 4006 Erkrath Jacobi | Verfahren zur Bestimmung des fibrinstabilisierenden Faktors (Fakt XIID, insbesondere im menschlichen Blut |
| JPS6035119B2 (ja) * | 1982-06-11 | 1985-08-13 | 株式会社 ヤトロン | 血漿中のｘ３因子を測定する方法 |
| JPS59192961A (ja) * | 1983-04-15 | 1984-11-01 | Green Cross Corp:The | 血液凝固第「じ」因子測定用試薬 |
| JPS63184061A (ja) * | 1986-10-01 | 1988-07-29 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | 血液凝固第１０３因子ａ↓２ｂ↓２複合体の定量方法 |
| DE3811647A1 (de) * | 1988-04-07 | 1989-10-26 | Behringwerke Ag | Verfahren und verpackung enthaltend mittel zur kinetischen bestimmung von faktor xiii |
| JP2954239B2 (ja) * | 1989-08-07 | 1999-09-27 | 清水製薬株式会社 | 全血用簡易血液凝固能検査用具 |
| JP3180824B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-06-25 | シスメックス株式会社 | 血液凝固試薬 |
| DE4133946A1 (de) * | 1991-10-14 | 1993-04-15 | Behringwerke Ag | Funktioneller test und reagenz zur bestimmung von fibrinogen |
-
1992
- 1992-09-11 JP JP24309892A patent/JP3224607B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-09-03 US US08/232,221 patent/US5508202A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-09-03 EP EP93919610A patent/EP0632270A4/en not_active Withdrawn
- 1993-09-03 WO PCT/JP1993/001247 patent/WO1994007145A1/ja not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003507713A (ja) * | 1999-08-12 | 2003-02-25 | アクゾ・ノーベル・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 患者サンプル中の止血機能障害の存在を予測する方法 |
| WO2020166961A1 (ko) * | 2019-02-14 | 2020-08-20 | 주식회사 앤씨비아이티 | 지혈효소 및 카르복시메틸 키토산을 포함하는 혈액응고 검사용 조성물 및 그의 용도 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5508202A (en) | 1996-04-16 |
| WO1994007145A1 (fr) | 1994-03-31 |
| JP3224607B2 (ja) | 2001-11-05 |
| EP0632270A4 (en) | 1996-12-11 |
| EP0632270A1 (en) | 1995-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3224607B2 (ja) | 血液凝固第ｘｉｉｉ因子活性測定方法および該測定用試薬キット | |
| Fickenscher et al. | A photometric assay for blood coagulation factor XIII | |
| Fletcher et al. | The proteolysis of fibrinogen by plasmin: the identification of thrombin-clottable fibrinogen derivatives which polymerize abnormally | |
| JP4486999B2 (ja) | 凝固パラメーターを決定するためのキット | |
| JP3684451B2 (ja) | 血小板凝集の測定法 | |
| JP2994557B2 (ja) | フィブリノゲン測定方法およびその測定試薬 | |
| EP0336353B1 (de) | Verfahren zur kinetischen Bestimmung von Faktor XIII | |
| US5646007A (en) | Method for determination of antithrombin III activity and reagent kit therefor | |
| EP2434290B1 (en) | Blood coagulation time prolonging agent | |
| US6100050A (en) | Factor VIII:Ca chromogenic assay | |
| Lane et al. | Dysfibrinogenaemia characterized by abnormal fibrin monomer polymerization and normal fibrinopeptide A release | |
| EP0491895B1 (en) | FACTOR VIII:Ca CHROMOGENIC ASSAY | |
| Hellstern et al. | Determination of factor XIII activity and of factor XIII inhibitors using an ammonium-sensitive electrode | |
| EP0166690B1 (en) | Analytical process and means for measuring protease inhibitor capacity of serum | |
| US5200322A (en) | Method for assaying protein C and measuring kit for the same | |
| JP3188005B2 (ja) | 酵素阻害物質の測定法 | |
| JP6033084B2 (ja) | 血漿に基づく参照材料を用いた第ｘｉｉｉ因子の測定方法 | |
| CN117567597B (zh) | 一种抗凝血酶Ⅲ及抗Xa活性检测试剂盒 | |
| JP4311796B2 (ja) | アンチトロンビンｉｉｉの測定法 | |
| EP0260707A2 (en) | Method for assaying plasma protein and measuring kit for the same | |
| JP2000501295A (ja) | 精製フィブリン単量体を基質に用いる血液凝固▲ｘｉｉｉ▼因子の酵素活性測定方法 | |
| CN114958963A (zh) | 一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒及其应用 | |
| SU1436073A1 (ru) | Способ определени плазминогена в эуглобулиновой фракции крови | |
| JP2000300292A (ja) | アンモニアの測定方法 | |
| Lijnen et al. | General Discussion and Conclusions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20010724 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |