JPH0692307B2 - アデニン誘導体の治療的適用 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は新規なウイルス疾患用治療剤、その製法および
用途に関する。

発明の背景 ある種の、アデニンの置換アルキル誘導体は著しい抗ウ
イルス活性を示すことが知られている。かかるアデニン
誘導体には米国特許第4230708号記載の９−（Ｓ）−
（2,3−ジヒドロキシプロピル）アデニン、ホーリィら
〔コレクション・オブ・チェッコスロバーク・ケミカル
・コミュニケーション（Holy et al.,Coll.Czech.Chem.
Comm.）47巻1392〜1407頁1982年〕開示のＤ−エリタデ
ニン、米国特許出願第658438号開示の３−（アデニン−
９−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸エステルなどが
ある。

これらのアデニン誘導体は抗ウイルス剤として広範なス
ペクトルを示すとされているが、その抗ウイルス活性
は、主として麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイル
スおよび水ほう性口内炎ウイルスのようなRNAウイルス
に対するものであって、DNAウイルスについては唯１つ
のウイルス、すなわちワクシニアウイルスのみに対し多
少の作用が認められるに過ぎず、単純ヘルペス、帯状ヘ
ルペスのような大多数のDNAウイルスに対する活性はか
なり少ないか、または全く認められない。

したがって、主としてDNA−ウイルスに対し抗ウイルス
活性を有する抗ウイルスアデニン誘導体が必要であり、
かかる活性を有するアデニン誘導体および治療用組成物
を提供することが本発明の主目的である。

発明の詳説 本発明に従えば、ある種のホスホニルメトキシアルキル
アデニンがワクシニアおよびヘルペスウイルスのような
数種のDNA−ウイルスに対し著しい抗ウイルス活性を示
すが、大多数のRNA−ウイルスに対し不活性であり、か
つ宿主細胞に対する毒性が低いことが判明した。これ
は、抗ウイルス活性が限られた数のアデニン誘導体によ
ってのみ示されること、およびホスホニルメトキシ基の
導入が抗ウイルス活性のかかる著しい変化を誘発するこ
とが予想できないことからみて、驚くべきことである。

本発明のホスホニルメトキシアルキルアデニンは式： 〔式中、R¹はヒドロキシで置換されていることもある低
級アルキレン、特にメチレン、−CH（OH）−CH₂−また
は＝CH−CH₂OH、R²はヒドロキシを意味する。場合によ
り、R¹およびR²は相互に連結して環状エステルを形成す
る。〕 で示すことができる。該化合物は遊離酸形またはアルカ
リ金属、アンモニウムまたはアミン塩のような塩形とす
ることができる。

R¹がメチレンである化合物を除き、式〔Ｉ〕の化合物の
大部分は不斉炭素原子を有し、１つ以上の光学対掌形で
存在する。かかる場合、該化合物の（Ｓ）形およびラセ
ミ体（RS）形だけが十分な抗ウイルス活性を示しうるこ
とに注目すべきである。式〔Ｉ〕の化合物のうち、最良
の抗ウイルス活性は（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２
−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンによって示さ
れる。

式〔Ｉ〕の誘導体の大半は公知化合物（英国特許A-2134
907参照）である。したがって、化合物自体およびその
化学合成は本発明の一部ではない。

該誘導体は一般に少なくとも２つの経路に従い、すなわ
ち（Ａ）９−（ヒドロキシアルキル）アデニンをクロロ
メタンホスホニルクロライドと縮合し、ついでアルカリ
加水分解するか（英国特許A-2134907）、または（Ｂ）
９−（ヒドロキシアルキル）アデニンをｐ−トルエンス
ルホニルオキシメチレンリン酸ジエステルと縮合し、つ
いで該エステル基をトリメチルヨードシランで除去する
ことで製造することができる。ラセミ体混合物は製造の
前後にその成分に分離することができ、生成物が遊離酸
である場合、アルカリ金属、アンモニアまたはアミンと
の反応によって塩に変換することができる。

前記したように、式〔Ｉ〕の誘導体は宿主細胞に対する
毒性が低い。組織培養細胞についてのこれら誘導体の細
胞毒性作用は100、200または400μg/ml以上の濃度、す
なわち、活性ウイルス抑制濃度よりも非常に高い濃度で
観察されるだけである（以下の第２表参照）。さらに、
式〔Ｉ〕の誘導体はレオウイルス、ラブドウイルス、パ
ラミクソウイルス、エンテロウイルス等の大半のRNAウ
イルスによって感染された組織培養細胞には効果がな
い。しかし、いくつかの該誘導体はマウス中で肉腫性腫
瘍を誘発するモロニーマウス肉腫ウイルス、すなわちレ
トロウイルスに対し、非常に活性である（第３表参
照）。したがって、該誘導体はレトロウイルス全般に有
効であると思われる。式〔Ｉ〕の化合物の主要な標的は
ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス等のDNAウ
イルスによって形成される。かかる化合物は、全ていく
つかの株の単純ヘルペスウイルス・タイプ１および２の
複製を抑制する（第４表参照）。ヘルペスウイルスによ
って引起された病気の治療用組成物に使用される公知の
化合物、例えばアシクロビル、（Ｅ）−５−（２−ブロ
モビニル）−２′−デオキシウリジンおよび５−ヨード
−２′−デオキシウリジンと比較すると、式〔Ｉ〕の化
合物は効果がやや低いが、かかる化合物の欠点、すなわ
ちアシクロビルの低い溶解度、５−ヨード−２′−デオ
キシウリジンの突然変異誘発性、奇形発性、胎芽毒性お
よび発がん性作用を欠いている。式：〔Ｉ〕の化合物の
重要かつ実質的な特徴は、チミジンキナーゼ誘発活性を
欠いているこれらヘルペスウイルス株（TK^-株）に対す
るその効果である。チミジンキナーゼはアシクロビルお
よび（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−２′−デオキ
シウリジンの活性に必須である。したがって、これらは
TK^-ヘルペスウイルスに対し不活性である〔プルソフら
（Prusoff et al.）１〜27貢、「抗ウイルス剤計画の標
的」、編者：デユ・クレルクおよびワーカー（De Clerc
q and Walker）、プレニウムプレス、ニューヨークおよ
びロンドン、1984年参照〕。これに対し、式〔Ｉ〕の化
合物はTK^-ヘルペスウイルスに対する明確な活性を有す
る（第４表参照）。したがって、式〔Ｉ〕の化合物はTK
^-ヘルペスウイルス株に起因する疾患の治療に使用する
ことができ、さらに該化合物はアシクロビルおよび他の
公知の化合物と組合せて用いることもできる。

式〔Ｉ〕の誘導体の抗ウイルス活性は、全く新らしく、
かつ予期せぬものである。アデニン・アラビノシド、５
−エチル−ウラシル・アラビノシド、アシクロビル、５
−ヨード−２′−デオキシ−ウリジンおよび（Ｅ）−
（２−ブロモビニル）−２′−デオキシウリジンのよう
な抗ウイルス活性のヌクレオシド同族体のリン酸エステ
ルが、また抗ウイルス剤として有効であることは公知で
ある。しかしながら、これらのエステルは、単にプロド
ラッグとして作用するもので、該エステルは細胞内に入
る機会を得る直前に、加水分解されて遊離のヌクレオシ
ド同族体を放出する。式〔Ｉ〕の化合物は上記のリン酸
エステルと同じ極性を有する。しかしながら、該化合物
は、何ら加水分解が生じることなくそのまま細胞内に入
り、所望の生物学的作用を発揮するのである。

式〔Ｉ〕の化合物を活性成分として含有する、ウイルス
疾患をヒトおよび動物治療法で治療するための治療用組
成物は粉末、懸濁液、溶液、シロップ、エマルション、
軟こうまたはクリーム形とすることができ、局部的適用
（皮膚、粘膜、目等の外傷）、鼻腔内、直腸内、腟内等
で用いることができ、また経口または非経口（静脈内、
皮膚内、筋肉内、鞘内等）投与に用いることができる。
かかる組成物は式〔Ｉ〕の活性化合物を遊離酸または塩
の形で、中性の特性を有する医薬上許容される賦形剤
（例えば、水性または非水性溶媒、安定化剤、乳化剤、
清浄剤、添加剤）と共に、さらに要すれば色素および芳
香剤と共に合する（例えば、混合、溶解する）ことによ
って製造することができる。治療用組成物中の活性成分
の濃度は疾患および投与法の性質に応じて0.1〜100％と
広範に変化させることができ。さらに、投与される活性
成分の用量は体重1kg当り0.1〜100mgと変化させること
ができる。

実施例 つぎに、式〔Ｉ〕の化合物の抗ウイルス活性を以下の実
施例によって説明するが、これらの用途に制限されるも
のではない。実施例および表において、以下の短縮名を
用いる。

MCC:顕微鏡的に検知可能な細胞形態学的変化をもたらす
最小化合物濃度、 MIC₅₀：ウイルスの細胞変性効果を50％抑制する最小化
合物濃度、 ID₅₀：トリチウム(³H)でラベルした下記前駆体のとりこ
みを50％減少させる化合物の濃度 dTHd:2′−デオキシチミジン、 dUrd:2′−デオキシウリジン、 Urd:ウリジン、 Leu:L−ロイシン、 〈セルライン〉 PRK:一次組織培養のウサギ腎細胞、 ベロＢおよびベロ・フロー（Vero Flow）：アフリカミ
ドリザル腎細胞の連続ライン、 ヘラ：ヒト頚部がん細胞の連続ライン、 MO:連続的なネズミ胎児セルライン 〈式〔Ｉ〕の化合物の名称〉 化合物1:（RS）−９−（２（３）ヒドロキシ−３（２）
−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、 化合物2:（RS）−９−（２−ヒドロキシ−３−ホスホニ
ルメトキシプロピル）アデニン 化合物3:（Ｓ）−９−（２−ヒドロキシ−３−ホスホニ
ルメトキシプロピル）アデニン 化合物4:（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニ
ルメトキシプロピル）アデニン 化合物5:（RS）−９−（2,3−ジヒドロキシプロピル）
アデニンの２′,3′−環状Ｏ−ホスホニルメチルエテー
ル 化合物6:9−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニ
ン 〈他の化合物の名称〉 （Ｓ）−DHPA:9−（Ｓ）−（2,3−ジヒドロキシプロピ
ル）アデニン ACV:アシクロビル BVDU:（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−２′−デオ
キシウリジン IDU:5−ヨード−２′−デオキシウリジン 化合物１〜６はつぎのように製造した。化合物１（異性
体混合物）は（RS）−９−（2,3−ジヒドロキシプロピ
ル）アデニンをクロロメチルホスホニルジクロライドと
反応させ、ついでアルカリ処理して製造した。化合物２
はクロマトグラフィー分離により化合物１から単離し
た。化合物３および４は（Ｓ）−９−（2,3−ジヒドロ
キシプロピル）アデニンをクロロメチルホスホニルジク
ロライドと反応させ、アルカリ処理し、ついでイオン交
換樹脂でクロマトグラフィー分離して製造した。化合物
５（異性体の混合物）は化合物１をN,N−ジシクロカル
ボジイミドで環化して合成した。化合物６は９−（２−
ヒドロキシエチル）アデニンをジエチルｐ−トルエンス
ルホニルオキシメタンホスホネートと反応させ、ついで
エステル基を開裂させて製造した。

ペーパークロマトグラフィーおよび電気泳動によって得
られた物性データを第１表に示す。

Rf値は２−プロパノール／濃水性アンモニア／水（7:1:
2、容量／容量）中、ペーパークロマトグラフィーで得
たものである。Eup値はpH7.5でのペーパー電気泳動（20
V/cm）により得たもので、ウリジン３−ホスホネートに
対する移動率を示した。Ｋ値はHPLC〔セパロン・シック
ス・PRS（5/μｍ）（４×200mm、0.7ml/分）、炭酸水素
トリエチルアンモニウム0.05モル/l中メタノール５容量
％、pH7.5〕によって得た。検出は254nmで行なった。Ｋ
＝（tr−to）/to（tr＝反応時間、to＝保圧時間）。

実施例１ 組織培養物中の式〔Ｉ〕の化合物の細胞毒性および抗代
謝活性の測定 ウサギ腎細胞一次培養物を式〔Ｉ〕の化合物溶液を含む
ペトリ皿中で（濃度を１〜400μg/mlに増加）、イーグ
ル最少必須培地を用い72時間インキュベートした。各皿
中の形態学的変化を顕微鏡で評価した。第２表に示した
最小細胞毒性濃度（MCC）は、該細胞の形態学的変化が
用いた実験条件下で観察される該化合物の最小濃度であ
る。

式〔Ｉ〕の化合物の代謝拮抗効果の測定については、イ
ーグル培地中のウサギ腎細胞一次培養物を所定量のラジ
オラベル前駆体の存在下、式〔Ｉ〕の化合物の濃度を増
加させながらインキュベートした。（各皿ごと１μCi、
（³H−メチル）dThd30Ci/ミリモル、（³H‐１′,2′）d
Urd27Ci/ミリモル、（³H‐５）Urd30Ci/ミリモル、（³H
‐4,5）Leu47Ci/ミリモル）。ラベルした前駆体の濃度
はデユ・クレルクら〔バイロケミカル・ファラマコロジ
イ（De Clercq et al.,Biochem.Phramac.）24巻523頁19
75年〕記載のように測定した。該化合物を含有しない対
照と比較した、該前駆体のとりこみを50％減少させる式
〔Ｉ〕の化合物のID₅₀値を第２表に示す。これらの値か
ら明らかなごとく、式〔Ｉ〕の化合物は、全て著しい細
胞毒性を示さず、化合物４および６のみが約100μg/ml
の濃度で２′−デオキシウリジンの細胞内へのとりこみ
に特異的な影響を与えた。

実施例２ 組織培養物中の式〔Ｉ〕の化合物の抗ウイルス作用の測
定 細胞培養物にウイルスを細胞の半分の感染に要するのウ
イルス用量の100倍(100CCID₅₀)で感染させた。感染１時
間後、該細胞をイーグル培地の存在下、該培地に含まれ
る式〔Ｉ〕の化合物の濃度を増加させながらさらにイン
キュベートした。分析される一連の化合物を種々の濃度
で用い、ウイルスの細胞変性作用の50％抑制に要する最
小化合物濃度(MIC₅₀)をロゼンタールおよびスケクマイ
スター〔「組織培養」（Rosenthal and Schechmaister,
“Tissure Culture"）ペルガモン・プレス、ニューヨー
ク510頁1973年〕の方法で測定した。第３表に示したデ
ーターから、式〔Ｉ〕の化合物はワクシニアウイルス、
単純ヘルペスウイルス・タイプ１および２、およびモロ
ニー肉腫ウイルスを抑制することが明らかである。

実施例３ ヘルペスウイルスに対する式〔Ｉ〕の化合物の抗ウイル
ス作用の測定 実施例２記載の方法により、種々の株の単純ヘルペスウ
イルス・タイプ１および２(100CCID₅₀)を感染させた一
次培養のウサギ腎細胞（PRK）、および種々の株の水痘
帯状ウイルスおよびサイトメガロウイルス20PFU（プラ
ーク形成単位）を感染させたヒト胎児の肺（HEL）を用
いて実験を行なった。式〔Ｉ〕の化合物の効果の評価は
第４および５表に示す。これらのデーターにより、全て
の該化合物がTK^-突然変異体を含め、記載したウイルス
に対し活性であることが証明された。この点では、化合
物４が最も有効なものであった。

実施例４ 単純ヘルペスウイルス・タイプ１およびワクシニアウイ
ルスの生じた増殖に対する式〔Ｉ〕の化合物の効果 ウサギ腎細胞一次培養物（PRK）に、単純ヘルペスウイ
ルス・タイプ１（KOS株）またはワクシニアウイルスを1
0⁴・⁵PFU/0.5ml（PFU＝１プラーク形成単位）のウイル
ス用量で、実施例２と同様に感染させた。ついで、該細
胞をイーグル培地中の式〔Ｉ〕の化合物（100μg/ml）
にさらした。

１、24、48および72時間後に得られたウイルスをPRK細
胞中のプラークの数の測定によって測定した。第６表に
示したデーターにより、テストした全ての化合物（化合
物１、２、４、５および６）が単純ヘルペスウイルス・
タイプ１（KOS）およびワクシニアウイルスの収量を、
ウイルス感染後１、２または３日後の測定で10000〜100
000倍減少させたことが証明された。

実施例Ａ 化合物４を発熱性物質非含有精製水中に溶解してヒトま
たは動物の経口用の0.1％水溶液を製造した。

実施例Ｂ 化合物４を多価アルコールを少なくとも30％含有する水
溶性軟こう基剤と混合してヒトまたは動物の局部用途の
１％軟こう剤を製造した。

実施例Ｃ 化合物４を結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤およ
び表面活性剤と混合し、得られた混合物を活性成分を20
％含有する錠剤に打錠した。かかる錠剤はヒトへの経口
投与に用いることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 エリク・ド・クレルク ベルギー国 ベー− 3000 ルーベン、ミ ンデルブローデルスストラート 10番ピー ／エイ・レガーインステイテュート (72)発明者 アントニン・ホリー チェッコスロバキア国 16610 プラハ６ 番ピー／エイ・インスティテュート・オ ブ・オーガニック・ケミストリー・アン ド・バイオケミストリー・チェッコスロバ ク・アカデミー・オブ・サイエンシス (72)発明者 イファン・ローゼンベルク チェッコスロバキア国 16610 プラハ ６番ピー／エイ・インスティテュート・オ ブ・オーガニック・ケミストリー・アン ド・バイオケミストリー・チェッコスロバ ク・アカデミー・オブ・サイエンシ (56)参考文献 特開 昭52−105195（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−54589（ＪＰ，Ａ)

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】活性成分として式： 〔式中、R¹はメチレン、−CH（OH）−CH₂−または R²はヒドロキシを意味する。ただし、R¹がメチレン以外
   である場合、R¹とR²は相互に連結して環状エステル基を
   形成してもよい。〕 で示される遊離酸または塩形のホスホニルメトキシアル
   キルアデニン（該アデニン誘導体は、R¹がメチレン以外
   である場合（RS）または（Ｓ）形である。）を含有する
   ウイルス疾患治療用組成物。
2. 【請求項２】活性成分として（Ｓ）−９−（３−ヒドロ
   キシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンを含
   有する特許請求の範囲第１項記載の組成物。