JPH0653076B2 - グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬 - Google Patents
グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬Info
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- JPH0653076B2 JPH0653076B2 JP61122923A JP12292386A JPH0653076B2 JP H0653076 B2 JPH0653076 B2 JP H0653076B2 JP 61122923 A JP61122923 A JP 61122923A JP 12292386 A JP12292386 A JP 12292386A JP H0653076 B2 JPH0653076 B2 JP H0653076B2
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- Japan
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- reagent
- measured
- glucosidase
- measuring
- test solution
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は酵素活性測定試薬に関するものであり、特にグ
リコシル化合物加水分解酵素の酵素活性測定用基質に関
するものである。
リコシル化合物加水分解酵素の酵素活性測定用基質に関
するものである。
（従来の技術） 従来、β−グルクロニダーゼ、シアリダーゼ、β−グル
コシダーゼ、α−グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、
β−ガラクトシダーゼ等のグリコシル化合物加水分解酵
素、エステラーゼ、リパーゼ等のエステル結合加水分解
酵素の活性はｐ−ニトロフェノールを結合させた基質を
用いて糖水解酵素、エステラーゼ、リパーゼを作用さ
せ、遊離してくるＰ−ニトロフェノールを直接比色する
方法がアルカリ性下で比色する方法が用いられていた。
コシダーゼ、α−グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、
β−ガラクトシダーゼ等のグリコシル化合物加水分解酵
素、エステラーゼ、リパーゼ等のエステル結合加水分解
酵素の活性はｐ−ニトロフェノールを結合させた基質を
用いて糖水解酵素、エステラーゼ、リパーゼを作用さ
せ、遊離してくるＰ−ニトロフェノールを直接比色する
方法がアルカリ性下で比色する方法が用いられていた。
ところが、ｐ−ニトロフェノールを用いた方法では目的
とする酵素の至適pHがpH４〜7.5と酸性域から中性域に
存在し、発色基であるｐ−ニトロフェノールの発色pH
（pH９以上）とが異なり、上記記載酵素活性を測定する
ためには、測定感度が不充分であった。測定感度を高め
るためには酵素反応と発色反応を別々に行なう必要があ
り、試薬数及び操作ステップが多く必要となり、酵素活
性を求める場合に一番適当であるといわれている速度分
析（レートアッセイ）法が出来ない欠点がある。
とする酵素の至適pHがpH４〜7.5と酸性域から中性域に
存在し、発色基であるｐ−ニトロフェノールの発色pH
（pH９以上）とが異なり、上記記載酵素活性を測定する
ためには、測定感度が不充分であった。測定感度を高め
るためには酵素反応と発色反応を別々に行なう必要があ
り、試薬数及び操作ステップが多く必要となり、酵素活
性を求める場合に一番適当であるといわれている速度分
析（レートアッセイ）法が出来ない欠点がある。
（発明の解決しようとする問題点） 本発明の目的は定量性に優れたグリコシル化合物加水分
解酵素のレートアッセイが可能となる酵素活性測定試薬
を提供することである。
解酵素のレートアッセイが可能となる酵素活性測定試薬
を提供することである。
（問題点を解決する為の手段） 本発明者らは、上記目的を達成するために種々鋭意検討
したところ、一般式〔Ｉ〕で示される基質を用いること
により体液中のグリコシル化合物加水分解酵素を短時間
に正確簡単にレートアツセイ出来ることを見い出し本発
明に到達した。
したところ、一般式〔Ｉ〕で示される基質を用いること
により体液中のグリコシル化合物加水分解酵素を短時間
に正確簡単にレートアツセイ出来ることを見い出し本発
明に到達した。
すなわち本発明はα−グルコシダーゼ、β−グルコシダ
ーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−フルクトフラノシダ
ーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロシダーゼおよ
びシアリダーゼからなる群から選ばれたグリコシル化合
物加水分解酵素の基質として下記一般式〔Ｉ〕で示され
る化合物を含有することを特徴とするグリコシル化合物
加水分解酵素活性測定試薬である。
ーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−フルクトフラノシダ
ーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロシダーゼおよ
びシアリダーゼからなる群から選ばれたグリコシル化合
物加水分解酵素の基質として下記一般式〔Ｉ〕で示され
る化合物を含有することを特徴とするグリコシル化合物
加水分解酵素活性測定試薬である。
〔式中、Ｘはハロゲン原子、Ｒは−ＳＯ３Ｈを示し、ｌ
は１〜４の数、ｍは１〜４の数、ｎは０〜３の数を示
し、ｌ＋ｍ＋ｎ≦５である。Ａはグルコース、ガラクト
ース、フルクトース、グルクロン酸、キシロースまたは
シアル酸残基を示す。〕 本発明において測定する酵素とはグリコシル化合物加水
分解酵素である。グリコシル化合物加水分解酵素として
は、シアリダーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシ
ダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−フルクトフラノシ
ダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロシダーゼな
どのＯ−グリコシル化合物加水分解酵素が挙げられる。
は１〜４の数、ｍは１〜４の数、ｎは０〜３の数を示
し、ｌ＋ｍ＋ｎ≦５である。Ａはグルコース、ガラクト
ース、フルクトース、グルクロン酸、キシロースまたは
シアル酸残基を示す。〕 本発明において測定する酵素とはグリコシル化合物加水
分解酵素である。グリコシル化合物加水分解酵素として
は、シアリダーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシ
ダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−フルクトフラノシ
ダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロシダーゼな
どのＯ−グリコシル化合物加水分解酵素が挙げられる。
本発明において測定する酵素としては至適pHが４〜7.5
付近のものが好ましい。
付近のものが好ましい。
本発明に用いる基質としては上記一般式（Ｉ）で示され
る化合物であり、式中、Ａは測定しようとする酵素に応
じて異なるものである。
る化合物であり、式中、Ａは測定しようとする酵素に応
じて異なるものである。
上記基質は測定しようとする酵素の作用により、下記一
般式（II）で示されるフェノール誘導体を遊離する。遊
離したフェノール誘導体は基質とは異なったスペクトル
吸収を示す。
般式（II）で示されるフェノール誘導体を遊離する。遊
離したフェノール誘導体は基質とは異なったスペクトル
吸収を示す。
（Ｘ，Ｒ，ｌ，ｍ，ｎは前記のものと同じ） このようなフェノール誘導体としては例えば、２−クロ
ロ−４ニトロフェノール、２−ブロモ−４−ニトロフェ
ノール、２−ヨード−４−ニトロフェノール、2,6−ジ
クロロ−４−ニトロフェノール、2,6−ジブロモ−４−
ニトロフェノール、2,6−ジヨード−４−ニトロフェノ
ール、2,3,6−トリクロロ−４−ニトロフェノール、2,
3,6−トリブロモ−４−ニトロフェノール、2,3,6−トリ
ヨード−４−ニトロフェノール、2,4−ジニトロ−６−
クロロフェノールなどのハロゲン化ニトロフェノール。
ロ−４ニトロフェノール、２−ブロモ−４−ニトロフェ
ノール、２−ヨード−４−ニトロフェノール、2,6−ジ
クロロ−４−ニトロフェノール、2,6−ジブロモ−４−
ニトロフェノール、2,6−ジヨード−４−ニトロフェノ
ール、2,3,6−トリクロロ−４−ニトロフェノール、2,
3,6−トリブロモ−４−ニトロフェノール、2,3,6−トリ
ヨード−４−ニトロフェノール、2,4−ジニトロ−６−
クロロフェノールなどのハロゲン化ニトロフェノール。
２−スルホ−３，６−ジクロロ−４−ニトロフェノール
などのスルホン酸基含有ハロゲン化ニトロフェノールお
よびこれらのＮａ塩またはＫ塩等のアルカリ金属塩、ア
ンモニウム塩あるいはアルキルアミン塩があげられる。
などのスルホン酸基含有ハロゲン化ニトロフェノールお
よびこれらのＮａ塩またはＫ塩等のアルカリ金属塩、ア
ンモニウム塩あるいはアルキルアミン塩があげられる。
一般式（Ｉ）において、Ａはグルコース、ガラクトー
ス、フルクトース、グルクロン酸、キシロースまたはシ
アル酸残基を示す。
ス、フルクトース、グルクロン酸、キシロースまたはシ
アル酸残基を示す。
一般式（Ｉ）におけるＡとしては、例えば次のようなも
のがある。
のがある。
これら基質の合成方法について、糖とハロゲン化置換の
ニトロフェノールを反応させる方法は、化学的には糖を
アセチル化し、このアセチル化糖とハロゲン置換ニトロ
フェノールを結合させた後、脱アセチル化することによ
り合成できる（実験化学講座２４、３０４頁、生物化学
II）。
ニトロフェノールを反応させる方法は、化学的には糖を
アセチル化し、このアセチル化糖とハロゲン置換ニトロ
フェノールを結合させた後、脱アセチル化することによ
り合成できる（実験化学講座２４、３０４頁、生物化学
II）。
一般式（Ｉ）で示される化合物の塩としては、ナトリウ
ム、カリウムなどのアルカリ金属塩、あるいはアンモニ
ウム塩あるいはアルキルアミン塩などがある。
ム、カリウムなどのアルカリ金属塩、あるいはアンモニ
ウム塩あるいはアルキルアミン塩などがある。
本発明の試薬のpHはグリコシル化合物加水分解酵素の至
適pH4,0〜7,5を保つ緩衝液であれば、いかなるものでも
良い。例えばクエン酸緩衝液やその他有機酸緩衝液、例
えば酢酸、コハク酸、フタル酸等の緩衝液、グッド緩衝
液、トリス緩衝液等があげられる。
適pH4,0〜7,5を保つ緩衝液であれば、いかなるものでも
良い。例えばクエン酸緩衝液やその他有機酸緩衝液、例
えば酢酸、コハク酸、フタル酸等の緩衝液、グッド緩衝
液、トリス緩衝液等があげられる。
基質濃度としては特に制限がないが、好ましくは最大の
酵素活性を示す濃度が適当である。例えば１ｍＭ以上で
ある。
酵素活性を示す濃度が適当である。例えば１ｍＭ以上で
ある。
本発明の試薬には必要により、界面活性材、防腐剤、塩
化ナトリウム、シクロデキストリン、安定化剤等を加え
てもよい。
化ナトリウム、シクロデキストリン、安定化剤等を加え
てもよい。
本発明のグリコシル化合物加水分解酵素の活性を測定す
る方法としては、試料を該試薬と反応させて生成するア
グリコンの吸光度の変化を直接分光光度計を用いて比色
定量する方法がある。
る方法としては、試料を該試薬と反応させて生成するア
グリコンの吸光度の変化を直接分光光度計を用いて比色
定量する方法がある。
（発明の効果） 本発明のグリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬に
おいて、一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩を基
質として用いることにより、体液中の上記酵素活性を短
時間に正確、かつ簡単にレートアッセイすることができ
る。特にニトロフェノールを結合した基質に比べて酵素
反応と発色反応を１つの系で行なえるという優れた効果
を有する。
おいて、一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩を基
質として用いることにより、体液中の上記酵素活性を短
時間に正確、かつ簡単にレートアッセイすることができ
る。特にニトロフェノールを結合した基質に比べて酵素
反応と発色反応を１つの系で行なえるという優れた効果
を有する。
（実施例） 以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例１． 被検液中のβ−グルコシダーゼ活性量を下記試薬を用い
て下記方法により測定した。
て下記方法により測定した。
１．試薬 2,6-ジクロロ−４−ニトロフェニル−β−Ｄ− グルコピラノサイド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH６．０ ２．測定方法 β−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬２ml
を加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００nm
で測定して発色速度を求めた。反応曲線を第１図に示
し、検量線を第２図に示す。
を加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００nm
で測定して発色速度を求めた。反応曲線を第１図に示
し、検量線を第２図に示す。
第１図および第２図から明らかなように、水溶性基質を
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
実施例２． 被検液中のβ−グルコシダーゼ活性量を下記試薬を用い
て下記方法により測定した。１．試薬 Ａ．2,6−ジブロモ−４−ニトロフェニル−β−Ｄ− グルコピラノサイド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH６．０ ２．測定方法 ａ．β−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変化
を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた
（ブランクはβ−グルコシダーゼ含有液検液にかわり水
を用いる）。
て下記方法により測定した。１．試薬 Ａ．2,6−ジブロモ−４−ニトロフェニル−β−Ｄ− グルコピラノサイド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH６．０ ２．測定方法 ａ．β−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変化
を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた
（ブランクはβ−グルコシダーゼ含有液検液にかわり水
を用いる）。
ｂ．β−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭
酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブランク
はβ−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭
酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブランク
はβ−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
第１表にその結果を示す。
本発明の試薬ＡはpH６．０において十分測定可能な感度
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH６．０において測定
可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定可能
である。
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH６．０において測定
可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定可能
である。
実施例３． 被検液中のα−グルコシダーゼ活性量を下記試薬を用い
て下記方法により測定した。
て下記方法により測定した。
１．試薬 ２−クロロ−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピラ ノサイド ２０ｍＭ リン酸緩衝液 ０．１Ｍ pH７．０ ２．測定方法 α−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬２ml
を加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００nm
で測定して発色速度を求めた。反応曲線を第３図に示
し、検量線を第４図に示す。
を加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００nm
で測定して発色速度を求めた。反応曲線を第３図に示
し、検量線を第４図に示す。
第３図および第４図から明らかなように、水溶性基質を
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
実施例４． 被検液中のα−グルコシダーゼ活性量を下記試薬を用い
て下記方法により測定した。
て下記方法により測定した。
１．試薬 Ａ．２−ブロモニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピラノ サイド ２０ｍＭ リン酸緩衝液 ０．１Ｍ pH７．０ Ｂ．４−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピラノサイド ２０ｍＭ リン酸緩衝液 ０．１Ｍ pH７．０ ２．測定方法 ａ．α−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変化
を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた
（ブランクはα−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水
を用いる。
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変化
を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた
（ブランクはα−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水
を用いる。
ｂ．α−グルコシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭
酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブランク
はα−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭
酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブランク
はα−グルコシダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
第２表にその結果を示す。
本発明の試薬ＡはpH７．０において十分測定可能な感度
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH７．０において測定
可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定可能
である。
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH７．０において測定
可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定可能
である。
実施例５． 被検液中のβ−グルクロニダーゼ活性量を下記試薬を用
いて下記方法により測定した。
いて下記方法により測定した。
１．試薬 ２−スルホ−3,6−ジクロロ−４−ニトロフェニル−β
−Ｄ− グルクロニド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH５．０ ２．測定方法 β−グルクロニダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬２
mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００
nmで測定して発色速度を求めた。反応曲線を第５図に示
し、検量線を第６図に示す。
−Ｄ− グルクロニド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH５．０ ２．測定方法 β−グルクロニダーゼ含有被検液５０μｌに上記試薬２
mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４００
nmで測定して発色速度を求めた。反応曲線を第５図に示
し、検量線を第６図に示す。
第５図および第６図から明らかなように、水溶性基質を
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ簡単にレー
トアッセイすることができる。
実施例６． 被検液中のβ−グルクロニダーゼ活性量を下記試薬を用
いて下記方法により測定した。
いて下記方法により測定した。
１．試薬 Ａ．２−スルホ−3,6−ジクロロ−４−ニトロフェニル −β−Ｄ−グルクロニド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH５．０ Ｂ．４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロニド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液 ０．１Ｍ pH５．０ ２．測定方法 ａ．β−グルクロニダーゼ含有被検液５０μｌに上記試
薬Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変
化を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求め
た（ブランクはβ−グルクロニダーゼ含有液検液にかわ
り水を用いる）。
薬Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で３分間加温後、吸光度変
化を波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求め
た（ブランクはβ−グルクロニダーゼ含有液検液にかわ
り水を用いる）。
ｂ．β−グルクロニダーゼ含有被検液５０μｌに上記試
薬Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ
炭酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応
を停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブラン
クはβ−グルクロニダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
薬Ａ，Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ
炭酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応
を停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した（ブラン
クはβ−グルクロニダーゼ含有被検液にかわり水を用い
る）。
第３表にその結果を示す。
本発明の試薬ＡはpH５．０において十分測定可能な感度
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH５．０において全く
測定可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定
可能である。
を有する試薬であるが、試薬ＢはpH５．０において全く
測定可能レベルになく、アルカリ条件においてのみ測定
可能である。
実施例７． 被検液中のシリアダーゼ活性量を下記試薬を用いて下記
方法により測定した。
方法により測定した。
１．試薬 Ａ．２−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）− Ｎ−アセチルノイラミン酸 ２０ｍＭ 酢酸緩衝液（pH６．０） ０．１Ｍ Ｂ．２−（４−ニトロフェニル）−Ｎ−アセチル ノイラミン酸 ２０ｍＭ 酢酸緩衝液（pH６．０） ０．１Ｍ ２．測定方法 ａ．シアリダーゼ含有被検液５０μｌに、上記試薬Ａ、
Ｂ２mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４
００nmで測定して、１分間の吸光度変化を求めた。ブラ
ンクはシアリダーゼ含有被検液に代わり、水を用いた。
Ｂ２mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長４
００nmで測定して、１分間の吸光度変化を求めた。ブラ
ンクはシアリダーゼ含有被検液に代わり、水を用いた。
ｂ．シアリダーゼ含有被検液５０μｌに、上記試薬Ａ、
Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭酸ソ
ーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を停止
させ、波長４００nmの吸光度を測定した。ブランクはシ
アリダーゼ含有被検液に代わり、水を用いた。
Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ炭酸ソ
ーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応を停止
させ、波長４００nmの吸光度を測定した。ブランクはシ
アリダーゼ含有被検液に代わり、水を用いた。
下記表にその結果を示す。
実施例８ 被検液中のβ−ガラクトシダーゼ活性量を下記試薬を用
いて下記方法により測定した。
いて下記方法により測定した。
１．試薬 Ａ．２−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）− β−ガラクトピラノサイド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液（pH６．０） ０．１Ｍ Ｂ．２−（４−ニトロフェニル）−β−Ｄ−ガラ クトピラノサイド ２０ｍＭ 酢酸緩衝液（pH６．０） ０．１Ｍ ２．測定方法 ａ．β−ガラクトシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試
薬Ａ、Ｂ２mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を
波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた。
ブランクはβ−ガラクトシダーゼ含有液検液に代わり水
を用いた。
薬Ａ、Ｂ２mlを加えて３７℃で反応させ、その吸光度を
波長４００nmで測定して１分間の吸光度変化を求めた。
ブランクはβ−ガラクトシダーゼ含有液検液に代わり水
を用いた。
ｂ．β−ガラクトシダーゼ含有被検液５０μｌに上記試
薬Ａ、Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ
炭酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応
を停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した。ブラン
クはβ−ガラクトシダーゼ含有被検液に代わり、水を用
いた。
薬Ａ、Ｂ２mlを加えて３７℃で５分間反応後、０．１Ｍ
炭酸ソーダ水２mlを添加し、アルカリ条件下にして反応
を停止させ、波長４００nmの吸光度を測定した。ブラン
クはβ−ガラクトシダーゼ含有被検液に代わり、水を用
いた。
下記表にその結果を示す。
【図面の簡単な説明】 第１図は本発明実施例１の反応曲線を示す。 第２図は本発明実施例１の検量線を示す。 第３図は本発明実施例３の反応曲線を示す。 第４図は本発明実施例３の検量線を示す。 第５図は本発明実施例５の反応曲線を示す。 第６図は本発明実施例５の検量線を示す。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−2199（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−28400（ＪＰ，Ａ) 特公 昭57−53079（ＪＰ，Ｂ２) 欧州特許出願公開97506（ＥＰ，Ａ)
Claims (1)
- 【請求項１】α−グルコシダーゼ、β−グルコシダー
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−フルクトフラノシダー
ゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロキシダーゼおよ
びシアリダーゼからなる群から選ばれたグリコシル化合
物加水分解酵素基質として下記一般式〔Ｉ〕で示される
化合物を含有することを特徴とするグルコシル化合物加
水分解酵素活性測定試薬。 〔式中、Ｘはハロゲン原子、Ｒは−ＳＯ３Ｈを示し、ｌ
は１〜４の数、ｍは１〜４の数、ｎは０〜３の数を示
し、ｌ＋ｍ＋ｎ≦５である。Ａはグルコース、ガラクト
ース、フルクトース、グルクロン酸、キシロースまたは
シアル酸残基を示す。〕
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61122923A JPH0653076B2 (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61122923A JPH0653076B2 (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33193193A Division JPH07106160B2 (ja) | 1993-12-27 | 1993-12-27 | エステル結合加水分解酵素活性測定試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62278998A JPS62278998A (ja) | 1987-12-03 |
| JPH0653076B2 true JPH0653076B2 (ja) | 1994-07-20 |
Family
ID=14847950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61122923A Expired - Lifetime JPH0653076B2 (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0653076B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL85581A (en) * | 1987-05-21 | 1992-05-25 | Technicon Instr | Substrate for beta-galactosidase comprising derivatives of 4-nitrophenyl-beta-d-galactopyranoside and beta-galactosidase immunoassay containing said substrate |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5753079A (en) * | 1980-09-17 | 1982-03-29 | Toshiba Electric Equip | Table tap |
| AU1498883A (en) * | 1982-06-21 | 1984-01-05 | State Of Queensland, The | Method for diagnosis of mastitis using enzyme, n-acetyl-b-d -glucosaminidase |
| JPS602199A (ja) * | 1983-06-21 | 1985-01-08 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
| JPS6128400A (ja) * | 1984-07-19 | 1986-02-08 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼ活性測定法および測定用試薬 |
| JPS62264298A (ja) * | 1986-05-12 | 1987-11-17 | 三井建設株式会社 | 覆工コンクリ−トの打設方法 |
-
1986
- 1986-05-28 JP JP61122923A patent/JPH0653076B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62278998A (ja) | 1987-12-03 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |