JPH06507830A - 気体運搬用及び酸素運搬用脂質小胞 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 気体運搬用及び酸素運搬用脂質小胞 ｌ豆皮１１ 本発明は、ある種の特殊目的用脂質小胞、特に空隙を持ち酸素運搬能力を有する 脂質小胞に関する。これらの特殊な脂質小胞は、工業上重要な用途を有する。こ れらの空隙を有する小胞は、ペイント産業用の白色体質顔料として用い得るが、 他方、酸素運搬用小胞は生物科学において特に有用である（例えば、人工酸素供 給剤）。この発明の異なる面は幾分か違っているが、この発明の両面に対するこ こに記載した方法の広い応用可能性は下記の記載より容易に明らかとなろう。

少ラメラ（ｐａｕｃｉｌａｗｅｌｌａｒ　）脂質小胞（例えば、米国特許第４， ９１１，９２８号に記載のもの：その開示を本明細書中に参考として援用する） は、大きい無定形の空隙即ちコアを囲む２〜１０の実質的に球形の脂質二重層を 有する。この脂質二重層は、二重層間に補足された水に結合して水和している。

この中央空隙は、水溶液をカプセル封入することが出来、或は水不混和性の油又 はワックスでコアの一部又は全部を満たすことが出来る。

第一に凍結乾燥法の変法を用いて、水性充満脂質小胞を乾燥させる多くの試みが なされた。最も多い例において、高分子量デキストラン又は他の炭水化物等の凍 結防止剤が、水溶液除去に際して脂質壁構造を保護するために用いられた。この 凍結防止剤なしでは、脱水された二重層はつぶれて、可視の光学的二重縁（ｂｉ ｆｒｉｎｇｅｎｃｅ　）により顕微鏡的にしばしば識別される固体の二重ラメラ 配列を形成する。これらの凍結乾燥法は、ある程度成功し、脂質小胞の再水和（ 及び、その結果の再構成）を可能とする。これらの凍結防止剤は、二重層の周囲 に付着して、再水和に際しての小胞のラメラ骨格からの再形成を可能とする。し かしながら、再水和が液相ではなくて蒸気を用いることによるのでなければ、外 側の水相にカプセル封入した水溶性物質の幾らかの損失があるのが普通である。

凍結防止剤の利用は、脱水における小胞の凝集を防ぐことにより、球形二重層膜 に安定性の測定を与える。これは、少ラメラ脂質小胞について、小胞のコアの崩 壊を防止しない。

少ラメラ小胞の不定形の中央空隙内に不揮発性の疎水性物質（パラフィンワック ス等）をカプセル封入したならば、状況は幾分か異なる。これらの小胞は、壁物 質を引き抜くか又は小胞製造工程において別個の無作用物質（即ち、小胞形成し ない界面活性剤）を加えることによって、疎水性のコアを囲む界面活性剤の単一 層を有する。水を除去する際に、界面活性剤で安定化したワックス液滴は、この 中央コアの崩壊を抑制して、小さい固体の粒子を形成し且つ比較的容易な再水和 へと導（。

二重層内に結合した水溶液より揮発性の液体をカプセル封入する疎水性コアを有 する小胞を形成することは可能であるが、この手順は中央に空隙を有する乾燥し た小胞へ導かない、これらの揮発性物質（例えば、有機溶媒）は、小胞を乾燥さ せる際に、水より先に揮発する。

連続乾燥に際し、揮発性物質により満たされたコアは水を二重層から中央空隙内 に浸出させる。

これらの記載した方法は何れも、気体（又は空気）の満ちた空隙様コアを有する 安定な乾燥脂質小胞な形成する手段を提供しなかった。この特殊な型の小胞は、 ペイント産業及び化粧品産業において特に応用可能性を有するであろう、ペイン ト産業及び化粧品産業に現在第一の白化能力を与える２つの型の白色体質顔料は 、二酸化チタン顔料（Ｔｉ０重）及び空隙を有するポリマー粒子である。Ｔ　ｉ 　Ｏｔが白色体質顔料としての長い歴史を有しているにもかかわらず、ペイント 及び化粧品産業は、この型の重金属白色体質顔料からの脱却を試みてきた。

Ｒｏｈ＋＋　＆　Ｈａａｓは、第一にペイント産業用の白色体質顔料を開発し、 商標Ｒｈｏｐａｑｕｅで販売したが、それは０．２ｍｍより小さい空気空間を有 する小さい高分子法である。この小さいが明確な中央空隙は、光学的散乱を与え てこの粒子を白色体質顔料として作用させる。乾燥可能で且つ同様の中央空隙を 有する脂質小胞は、生物分解性及び価格競争性の更なる利点を有しつつ同じ白化 能力を提供し得るであろう。

この型の気体充満した中央を有する脂質小胞は、水性充満小胞、不揮発性の疎水 性充満小胞、又は高度に揮発性の疎水性物質を満たした小胞からは製造出来ない ので、本発明は、この問題を解決するための試みとして、中程度に揮発性の液体 の利用に関する。ここで用いる場合、用語「中程度に揮発性の液体」は、水より 揮発性でないが小胞の二重層構造を形成する脂質よりは揮発性である液体を意味 する。これらの中程度に揮発性の液体は、空気乾燥、真空乾燥又は凍結乾燥に際 してそれらが脂質小胞から浸出し得るが、カプセル封入した水溶液より遅い速度 で浸出するだけの蒸気圧を有する。従って、実質的に小胞内にカプセル封入した 水溶液、並びに小胞を囲む水溶液のすべてが、中程度に揮発性の液体より前に蒸 発し、中程度に揮発性の液体は水を除去する際に小胞に構造を与える。

この中程度に揮発性の液体についての他の要求は、水溶液及び小胞を形成する脂 質中での実質的な不混和性並びに実質的な脂質との非反応性を含んだ。これらの すべての要求に合致する物質のクラスはペルフルオロカーボンである。ペルフル オロカーボンは、第一に、すべての水素をフッ素で置換したアルカン又はシクロ アルカンである。これらのペルフルオロカーボンのあるもの（ペルフルオロデカ リン及びペルフルオロトリプロピルアミン）は、第一に、付加的利点を有する； それらは酸素運搬体として機能し得る。殆どのペルフルオロカーボンは、約２の 密度を有し、高い空気及び酸素運搬能力をもち、及び実質的に殆どの物質と非反 応性である。酸素に冨むペルフルオロカーボンのカプセル封入は、それらの工２ ・ビトロにおける高い酸素化能力の故に、化粧品又は発酵における利用について 相当な価値を有するであろう。

更に、これらの物質は、相当数の医療用の利用についても有望である１例えば、 これらの物質は、外傷後の点滴として、放射線療法に対する点滴に、傷の潅流に 、血管形成外科又は放射線造影において用いるならば有利であろう。

従って、この発明の目的は、ペルフルオロカーボン及び他の適当に揮発性の液体 をカプセル封入する方法を提供することである。

この発明の他の目的は、気体充満脂質小胞を形成する方法を提供することである 。

この発明の更なる目的は、種々の工業的応用において用い得る白色体質顔料を提 供することである。

この発明のこれらの及び他の目的及び特徴は、下記の説明より明らかとなろう。

免ユ立ｌ上 本発明は、一つの面において、中程度に揮発性の液体を内部にカプセル封入して 有する少ラメラ脂質小胞の製造方法並びにその小胞自体を叙述する。他の面にお いて、この発明は、気体充満少ラメラ脂質小胞な叙述する。

これらの気体充満小胞は、中程度に揮発性の液体を気体で置換して気体が充満し た中央空隙を残すことによって製造する。この気体充満少ラメラ脂質小胞は、ペ イント産業用の白色体質顔料として用いることが出来、同時に、この中程度に揮 発性の液体を有する小胞は酸素運搬体として相当の有用性を有する。

中程度に揮発性の液体を内部にカプセル封入して有する少ラメラ脂質小胞は、大 きい不定形の中央空隙を囲む２〜１０の脂質二重層を有する。これらの小胞を製 造する第一ステップは、壁形成脂質及び壁に取り込まれるべき任意の他の脂溶性 物質をブレンドすることによって脂質相を形成することである。しばしば用いら れる一つの脂溶性物質は、熱相転移を援助するコレステロール等のステロールで ある。この中程度に揮発性の液体から区別される任意の油を中央空隙内にカプセ ル封入するべきであるならば、それをこの段階に加え又はもっと後で「常温充填 （ｃｏｌｄ　１ｏａｄ　）　Ｊすることが出来る。この脂質相を、次いで、穏や か乃至中程度の剪断にて過剰の水相で水和して少ラメラ脂質小胞を形成する。こ の脂質相内に油を加えるならば、その油は中央コアの少な（とも一部を満たす。

油を加えなければ、そのコアは水性水和溶液で満たされる。

これらの小胞を、次いで、米国特許出願筒５９８゜１２０号に記載の技術を用い て、中程度に揮発性の液体で「常温充填」することが出来る。好ましくは、これ らの小胞で運ぶべき任意の油をこの段階で同じ手順を用いて充填する。簡単には 、これらの形成した小胞な穏やか乃至中程度の剪断条件下で中程度に揮発性の液 体と混合し、それにより、中程度に揮発性の液体を中央空隙内にカプセル封入し 且つ幾らかの（又はすべての）水をコアから追い出す。

ある種の環境下においては、これらの小胞の中程度に揮発性の液体での「高温充 填（ｈｏｔ　ｌｏａｄｉｎｇ　）　Ｊが好ましい。これは、中程度に揮発性の液 体を水和の前に脂質相内に分散又は予備混合することにより達成される。これは 、水和及び混合ステップを同時に行うことを可能にする。しかしながら、「高温 充填」技術を用いる場合は、水和中に脂質相を均質に維持するように特に注意し なければならない。

中程度に揮発性の液体を内部にカプセル封入して有する少ラメラ脂質小胞なその まま用いるならば、それらは、単に、反応物質から分離される。しかしながら、 気体充満（例えば、空気充満）した少ラメラ脂質小胞を形成するならば、水溶液 及び中程度に揮発性の液体は除去されなければならない。これは、これらの小胞 を例えば空気乾燥、真空乾燥又は凍結乾燥することにより両液体を蒸発させるこ とによって達成される。真空乾燥が好ましい。気体充満少ラメラ脂質小胞は、そ れらの屈折特性の故に白色体質顔料として用いることが出来る。

多様な壁形成脂質物質がこの発明において利用可能である。非イオン性脂質（例 えば、非イオン性界面活性剤）が好ましい。これらの非イオン性脂質は、好まし くは、ポリエチレン脂肪酸エステル、ポリエチレン脂肪酸エーテル、ジェタノー ルアミド、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アミノ酸 アミン、ポリオキシエチレンソルビクンエステル、ポリオキシグリセロールモノ 及びジエステル、グリセロールモノ及びジステアレート、グリセロールモノ及び ジオレエート、グリセロールモノ及びジパルミテート並びにこれらの混合物であ る。最も好ましい脂質は、約４０℃以上の溶融温度を有する。非イオン性脂質に 加λて、サルコシネート（サルコシンアミド）、ベタイン等のある種の帯電した 脂質、及びモノマー及びダイマーのアルキドが有用であることが見出された。更 に、ホスファチジルコリン等のリン脂質を用いることが出来る。

付加的な構造支持物質を加えて小胞を更に安定化することが出来る。この付加的 物質は、好ましくは、重合に際して小胞に付加的構造支持を与える水溶性の重合 可能な物質である。好ましい水溶性重合可能物質はゼラチン、アクリレート、ア クリルアミド、アルギネート、カルボキシメチルセルロース及び類似ポリマーで ある。

この発明において有用な中程度に揮発性の物質は、下記の特徴に合致しなければ ならない； ｌ、　それは、小胞内の水溶液より揮発性が低（なければならない。

２、　それは、小胞の壁を形成する脂質より揮発性でなければならない。

３、　それは、脂質小胞の構造的完全性を損傷することなく脂質小胞から蒸発し 又は揮発し得る。

４　それは、実質的に水溶液と不混和性である。

５、　それは、実質的に壁構造を形成する脂質と不混和性である。

６、　それは、実質的に壁構造を形成する脂質と非反応性である。

これらの特徴は、ある種のシリコーン及びある種のミネラルスピリット等の幾つ かの物質には合致するが、ペルフルオロカーボンが好ましい、最も好ましいペル フルオロカーボンは、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロヘキサン、ペルフル オロオクタン及びペルフルオロジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロトリプロ ピルアミン、オクタフルオロシクロブタン及びこれらの混合物である。最も好ま しいペルフルオロカーボンは、ペルフルオロデカリン及びペルフルオロトリプロ ピルアミン等の酸素運搬分子である。

記したように、油を小胞の中央空隙内に取り込むことも出来る。油を用いるなら ば、それは、二重層を形成する脂質、水溶液、及び前記の中程度に揮発性の液体 と不混和性であるべきである。油は、小胞の中央空隙内に取り込まれ得るある種 の脂溶性物質のキャリアーとして作用し得る。同様に、水溶性物質は、それらが 乾燥に際して小胞より大きい結晶を形成しないならば、水相内で運ばれ得る。

日の・　な：日 本発明は、気体充満した又は中程度に揮発性の液体を満たしたコアを有する小胞 の製造方法及びそれらの小胞自体を提供する。中程度に揮発性の液体を有する小 胞は、それら自体を例えば酸素運搬体として用いることが出来、或は気体充満小 胞の製造工程における中間体として用いることが出来る。

水性又は油充満した中央空隙を有する少ラメラ脂質小胞は、米国特許第４，９１ １，９２８号又は第４，８５５．０９０号に開示されたような標準的技術を用い て製造することが出来る（その開示も又本明細書中に参考として援用する）。こ れらの小胞を、次いで、予備成形した小胞を、好ましくは穏やか乃至中程度の剪 断条件下で、中程度に揮発性の液体と混合することによって中程度に揮発性の液 体で「常温充填」する、米国特許出願第５９８．１２０号に記載の様なシリンジ 技術が好ましい。この技術は、半径１ｍｍのオリフィスを通る約５〜５０　ｍ　 ／　ｓの相対流速にほぼ等しい液体剪断を与える。

ペルフルオロカーボンが、好ましい中程度に揮発性の液体であるが、ある種のシ リコーン油又は揮発性ミネラルスピリット等の他の物質も又用いることが出来る 。第一の要求は、脂質壁構造との非反応性、中程度に揮発性の液体及び脂質及び 水溶液（並びに、カプセル封入するべき任意の油）の間の不混和性、並びに小胞 を損傷することな（、水が蒸発するより遅い速度で小胞がら蒸発する能力である 。水溶液及び中程度に揮発性の液体の蒸発は、種々の方法によって行ない得る。

しかしながら、高熱蒸発は、もし過剰の熱を加えると脂質構造それ自体が溶融し て、それにより、小胞を劣化させ及びこの手順の目的を挫折させるので、用いる べきでない、同様に、過度の高真空は用いることが出来ない。凍結乾燥は、脂質 を除去する有効な方法であるが、大量生産でなければ、不必要に高価となるであ ろう。

下記の実施例は、本発明を一層明確に説明するであろう。

夾１口」↓ この実施例において、多くの異なる小胞を、ポリオキシエチレン−９グリセリル モノステアレート及びコレステロールを壁形成物質として用いて作成した。先ず 、３：ｌの比のポリオキシエチレン−９グリセリルモノステアレート及びコレス テロールを約７０’Ｃ（これらの反応物質の易流動性を得るのに十分である）に 加熱して脂質相を形成した。この脂質相を、約６５℃で、リン酸緩衝塩溶液から なる水相で水和した。ある実験においては、ゼラチンを水相の一部として加えた 。水和は、約２ｍｌの脂質を２５ｍ１のシリンジ内に、約８ｍｌの水相を第二の ２５ｍ１シリンジ内に入れ、これらの２つのシリンジな直径１ｍｍのオリフィス を有する活栓な介して結合することにより達成した。小胞な、物質な活栓を通し て約２分間にわたって前後にシリンジで注入することにより作成した。これは、 小胞形成に必要な剪断を与える。事実、「剪断混合」　（米国特許第４，９１１ ，９３８号にて定義された用語）を与＾る方法は、満足できるものであろう。

約５ｍｌの小胞を１ｍｌの試験溶液とブレンドして、約２分間にわたって再度シ リンジ注入を繰り返した。この試験溶液は、水（「０」で示す）、ペルフルオロ オクタン（ペルフルオロカーボン）又はシクロメチコン（シリコーン油）であっ た、これらの小胞を、次いで、分離し、光学顕微鏡下で観察して小胞形成を確認 し、スライドガラス上に置いて一晩乾燥した。表１に、各試験試料の成分を列挙 する。

人」よ り　１％　ペルフルオロオクタン Ｅ　１％　シクロメチコン Ｆ　１／２％　ペルフルオロオクタン Ｇ　１／２％　シクロメチコン Ｉ　Ｏシクロメチコン Ｉ　Ｏペルフルオロカーボン １１２ｉ１の後、−滴の油を各試料の上に置き、その試料を直接又は光学顕微鏡 下で調べた。試料Ａは、顕微鏡下で俺かに顕著な濁りを示したが、試料Ｂ及びＣ はゼラチン様であった。試料Ａ−Ｃは、何れも中程度に揮発性の油を含んでいな かったので、単なる水、１％ゼラチン、及び１／２％ゼラチン水相（小胞形成に 使用）についてのコントロールを与えた。しかしながら、ペルフルオロカーボン 試料及びシクロメチコン試料は、すべて、幾らかのレベルの小胞の不透明性を示 した（中央空隙における光の屈折を示した）、特に、試料りは、強く白色且つ顆 粒状であった。高倍率の顕微鏡下で、すべての不透明試料は、ぎっしり詰まった 高度に屈折する中央空隙を有する顆粒からなることが示された。再水和に際して 、典型的な球形小胞として分離した顆粒は、幾らかのゼラチン薄片と結合した。

試料Ｅ（ペルフルオロオクタンをシクロメチコンに換えた以外試料りと同一）は 、試料りよりは強くない白色であったが、やはり白色を示した。同様に、試料Ｆ は、強く白色であり（試料Ｅより白い）且つ顆粒状であった。再水和に際し、不 規則な形状の小胞が明白であった。試料Ｇは白いが試料Ｆより強（なかった。試 料Ｈも又試料Ｅ及びＧと類似した白色顆粒を示したが、他方、試料■は卵形法の 不透明シートを形成した。

再水和に際し、小胞は、中程度に揮発性の液体で作成したすべての試料において 改善した。

この実施例は、乾燥の後に、中程度に揮発性の液体小胞中に形成された空隙が明 確に存在することを示す。更に、それは、ペルフルオロカーボンに似た物質が、 大きい白色強度（即ち、屈折性）の故に好ましいことを示す。

ｌＬｆ辻ｌ この実施例において、実施例１に記載した試験と類似の試験を行なった（但し、 小胞を形成するために用いた脂質は、ポリオキシエチレン−９グリセリルモノス テアレートの代りにポリオキシエチレン−４ステアリルアルコールであった）。

再び、脂質相を約７０℃に加熱し、水相を約６５℃に加熱し、及びこれらの相を 実施例１に記載のシリンジ法を用いてブレンドした。これらの小胞を室温に冷却 した後に、５ｍｌの小胞を、水、シクロメチコン（Ｄａｍ　Ｃｏｒｎｉｎｇ　３ ４４　）又はベルフルオロオクタンと、５ｍｌの小胞：　１ｍｌの中程度に揮発 性の液体の比で、前述のシリンジ技術を用いて混合した。

試料を真空乾燥し且つ空気中に２日間！いて乾燥を確実にし及び各試料を光学顕 微鏡により油上で観察した。

表２に、種々の試料の形成に用いた物質を列挙する。

８　１％　Ｏ Ｃ１／２％　Ｏ Ｄ　０％　シクロメチコン Ｅ　０％　ペルフルオロオクタン Ｆ　１％　シクロメチコン ロ　１％　ペルフルオロオクタン Ｈ１／２％　シクロメチコン Ｉ　１／２％　ペルフルオロオクタン 再び、最初の３つの試料（Ａ〜Ｃ）は、他の試料に対するコントロールとして働 く、直接的光学顕微鏡観察において、乾燥した小胞上に油的を置くことにより、 溶液は、中程度に揮発性の液体を用いないならば、単に濁ったに過ぎない、乾燥 前に、不均一な大きい小胞が明白であった。これらの物質は小胞内へ再水和しな かった。

試料りも又油上で濁って見えたが、コントロール試料より幾分か不透明であった 。再水和に際し、小胞は、改良されて、二重層構造がやはり存在することを示し ている。類似の結果が、試料Ｆ及びＨから予想されるが、水和において、何も観 察されなかった。

試料Ｅ（カプセル封入したペルフルオロオクタンを含む）は、実施例１に記載し たのと同様の結果を示した。

この試料は、油上で見たとき、白色且つ不透明であり、小胞のネットワークを示 している。再水和において、分離した小胞が多数あった。同様に、試料Ｇも又不 透明であるがそれらの小胞は殆ど墳れなかったようである。再水和において、こ れらの小胞は、試料Ｅのものよりしっかりと保持された（例えば、それらは、そ れ程は流れなかった）。試料Ｇに対する再水和した小胞は、規定の小胞のシート 形態であった。試料Ｉは、試料Ｇと類似の結果を与えた。

この実施例は、中程度の揮発性の液体を有する小胞製造のための記載した手順が 中央空隙を有する小胞な脱水において形成するであろうこと及び小胞が再水和に おいて形成され得ることを確立する。

及ＭＪＩユ この実施例においては、実施例１及び２におけるのと同じ手順及び材料で行なっ た（但し、用いた脂質は、グリセロールモノステアレートであった）。同様の結 果が得られたが、中程度に揮発性の液体がな（では小胞を再水和する能力はなく 、油上でシクロメチコン小胞についてはワックス様表面に淡い濁り、及びペルフ ルオロオクタン小胞については小胞の不透明ネットワークを伴った。１％ゼラチ ンを加えると、ペルフルオロオクタン小胞の中空部は、光観察において明らかに 明白であった。

再び、中程度に揮発性の液体を満たした小胞のすべては再水和可能であった。

この実施例においては、異なる脂質、ジメチルジステアリルアミン（Ａｒｏｓｕ ｒｆ　）を、容器壁内の第一の脂質として用いた。１２．２１ｇのジメチルジス テアリルアミンの脂質相を２．７４ｇのコレステロールとブレンドして１００℃ に加熱した。約２ｍｌの加熱した脂質を、次いで、８ｍｌの水溶液（脱イオン水 、１％ゼラチン、又は１／２％ゼラチンの何れか）と、実施例１に記載のシリン ジ技術を用いてブレンドして小胞を形成した。これらの小胞を冷却し及び５ｍｌ の小胞な１ｍｌのペルフルオロオクタンとシリンジでブレンドした。その結果生 じたペルフルオロオクタン含有小胞を乾燥して油上で観察した。すべての３種の ペルフルオロオクタン欅品は、屈折性の縁を有する粒子の不透明ネットワークを 示した。

再水和において、これらの小胞は、非常に粘着性であり且つシートになった。

１立１ この実施例においては、水溶性染料、クリスタルバイオレットを、充填技術に伴 って何が実際に起きるかを測定するための水和溶液に加えた。約４ｍｌのポリオ キシエチレン−９グリセリルモノステアレートを７０℃に加熱し且つ１６ｍ１の ０．５％クリスタルバイオレット溶液と実施例１に記載のシリンジ技術を用いて ブレンドした。これらの小胞を室温に冷却し、１０ｍ１の小胞を、実施例１に記 載のシリンジ技術を用いて、２ｍｌのペルフルオロデカリンとブレンドした。そ の結果生じた小胞を、３５００分子量カットオフの透析バッグに入れて１００倍 容０蒸留水に対して一晩透析した。この透析ステップは、小胞内にカプセル封入 されなかった任意のクリスタルバイオレットを除去するためであった。透析の後 に、小胞の青色が残り、クリスタルバイオレットの小胞内の水溶液中への取り込 みを示した。これらの小胞を、次いで、真空下で乾燥して非常に顆粒状となった 。

これらの小胞を凍結乾燥し且っ再水和したところ青色が再出現し、水溶液からの 水が乾燥ステップによって追い出されるときに染料それ自体は乾燥した小胞内に 保持されることを示した。再透析においては、少量の染料しか放出されなかった 。この方法は、水溶性の活性物質の乾燥貯蔵を提供することが出来るであろう。

支五Ｍ玉 この実施例は、油溶性物質を運ぶこの発明の小胞の能力を記載する。試験した特 定の油溶性物質は、染料、オイルレッドＯであった。

先ず、これらの小胞を、４ｍｌのポリオキシエチレン−９グリセリルモノステア レートを１６ｍ１の脱イオン水と、実施例１のシリンジ技術を用いてブレンドす ることによって作成した８これらの小胞の分離及び室温への冷却の後に、１０ｍ １の形成された小胞を２ｍｌの鉱油中の０．１％オイルレッノド　（Ｄｒａｋｅ ｏｌ　１９）とブレンドした。この染料含有油及び小胞を、実施例１の手順によ って約２分間シリンジ注入してこの油のカプセル封入を与えた。約１２ｍ１の油 充満小胞を、次いで、２ｍｌのペルフルオロデカリンと、実施例１のシリンジ技 術を用いてブレンドした。この試料を、ペルフルオロ出かりんの添加の前後にお いて、光学顕微鏡下で観察した。観察の後に、これらの小胞を１５分間３５００ ｒｐｍで遠心分離した。何らの染料又はペルフルオロデカリンの分離も観察され なかった。

光学顕微鏡検査（１０００Ｘ）は、ペルフルオロデカリンの添加前に、油が実質 的に充満した中央空隙を示した。しかしながら、ペルフルオロデカリンの添加の 後に、中央空隙は、油とペルフルオロデカリンとの明白な区別を示した（実質的 に、平坦な境界を有する）。これは、恐らく、これら２つの物質の間の表面張力 の違いによるものであろう。

乾燥後、これらの小胞は、油中心を有する顆粒形態であった。これらの顆粒を、 次いで、凍結乾燥しそして小胞内へと再水和した。痕跡的な遊離の油しか再水和 において放出されなかった。

前述の実施例は、純粋に説明のためであり明らかに非制限的なものである。当業 者は、この発明を実施するためにここに記載された技術の内においてなし得る他 の改変及び変形物を認識するであろう。かかる他の改変及び技術は、下記の請求 の範囲内にある。

国際調査報告 Ａｌ１４ＮＩ１１６＋ｌｌＡ＠ａｌｌ（ｊＭＡＮ６ンコ・、’ｌ：；Ｑ’７ｎｌ ；Ａ４フロントページの続き （７２）発明者　マドウール、ラジブ アメリカ合衆国　０３０６３　ニューハンプシャー、ナシュア、ハンプシャー　 ドライブ

Claims (34)

【特許請求の範囲】
1. １．内部にカプセル封入した中程度に揮発性の液体を有する２〜１０の脂質二重 層で囲まれた大きい不定形の中央空隙を含む少ラメラ脂質小胞であって、この中 程度に揮発性の液体が下記の特性を有する少ラメラ脂質小胞ａ）それは、水溶液 より揮発性でなく、ｂ）前記の脂質二重層を形成する脂質及び任意の物質より揮 発性であり、 ｃ）前記の脂質小胞から該脂質小胞の構造的完全性を損傷することなく蒸発する ことが出来、ｄ）実質的に水溶液と不混和性であり、ｅ）実質的に前記の脂質二 重層を形成する脂質と不混和性であり、 ｆ）実質的に前記の脂質二重層中の脂質と非反応性である。
2. ２．前記の中程度に揮発性の液体がペルフルオロカーボンを含む、請求項１に記 載の少ラメラ脂質小胞。
3. ３．前記のペルフルオロカーボンを、ベルフルオロデカリン、ペルフルオロヘキ サン、ペルフルオロオクタン、ペルフルオロジメチルシクロヘキサン、ペルフル オロトリプロピルアミン、オクタフルオロシクロブタン及びこれらの混合物から なる群より選択する、請求項２に記載の少ラメラ脂質小胞。
4. ４．前記のペルフルオロカーボンが酸素運搬分子を含む、請求項３に記載の少ラ メラ脂質小胞。
5. ５．更に油を含み、該油が前記の脂質、水溶液及び中程度に揮発性の液体と不混 和性である、請求項１に記載の少ラメラ脂質小胞。
6. ６．前記の油が運搬される油溶性物質をその中に有する、請求項５に記載の少ラ メラ脂質小胞。
7. ７．前記の脂質が少なくとも約４０℃の溶融温度を有する脂質を含む、請求項１ に記載の少ラメラ脂質小胞。
8. ８．前記の脂質が非イオン性脂質を含心、請求項７に記載の少ラメラ脂質小胞。
9. ９．前記の非イオン性脂質を、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシ エチレン脂肪酸エーテル、ジエタノールアミド、長鎖アシルヘキソサミド、長鎖 アシルアミノ酸アミド、長鎖アミノ酸アミン、ポリオキシエチレンソルビタンエ ステル、ポリオキシエチレングリセリルモノ及びジエステル、グリセロールモノ 及びジステアレート、グリセロールモノ及びジオレエート、グリセロールモノ及 びジパルミテート、及びこれらの混合物からなる群より選択する、請求項８に記 載の少ラメラ脂質小胞。
10. １０．前記の脂質を、サルコシンアミド、ベタイン、並びにモノマー及びダイマ ーのアルキドからなる群より選択する、請求項１に記載の少ラメラ脂質小胞。
11. １１．前記の脂質がリン脂質を含む、請求項１に記載の少ラメラ脂質小胞。
12. １２．更に、重合して前記の脂質二重層に付加的な構造的支持を与え得る水溶性 ポリマーを含む、請求項１に記載の少ラメラ脂質小胞。
13. １３．前記のポリマーを、ゼラチン、アクリレート、アクリルアミド、カルボキ シメチルセルロース、アルギネート、及びこれらの混合物からなる群より選択す る、請求項１２に記載の少ラメラ脂質小胞。
14. １４．大きい不定形の中央空隙を屈む２−１０の脂質二重層を含み、該中央空隙 が実質的に気体で満たされた、気体充満少ラメラ脂質小胞。
15. １５．前記の脂質が少なくとも約４０℃の溶融温度を有する脂質を含む、請求項 １４に記載の気体充満少ラメラ脂質小胞。
16. １６．前記の脂質が非イオン性脂質を含む、請求項１５に記載の少ラメラ脂質小 胞。
17. １７．前記の非イオン性脂質を、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキ シエチレン脂肪酸エーテル、ジエタノールアミド、長鎖アシルヘキソサミド、長 鎖アシルアミノ酸アミド、長鎖アミノ酸アミン、ポリオキシエチレンソルビタン エステル、ポリオキシエチレンクリセリルモノ及びジエステル、グリセロールモ ノ及びジステアレート、グリセロールモノ及びジオレエート、グリセロールモノ 及びジパルミテート、及びこれらの混合物からなる群より選択する、請求項１６ に記載の少ラメラ脂質小胞。
18. １８．前記の脂質を、サルコシンアミド、ベタイン、並びにモノマー及びダイマ ーのアルキドからなる群より選択する、請求項１５に記載の少ラメラ脂質小胞。
19. １９．前記の脂質がリン脂質を含む、請求項１５に記載の少ラメラ脂質小胞。
20. ２０．更に、重合して前記の脂質二重層に付加的な構造的支持を与え得る水溶性 ポリマーを含む、請求項１４に記載の少ラメラ脂質小胞。
21. ２１．前記のポリマーを、ゼラチン、アクリレート、アクリルアミド、カルボキ シメチルセルロース、アルギネート及びこれらの混合物からなる群より選択する 、請求項２０に記載の少ラメラ脂質小胞。
22. ２２．実質的に不定形の気体充満した中央空隙を囲む２〜１０の脂質二重層を有 する気体充満少ラメラ脂質小胞の製造方法であって、下記のステップ：ａ）第一 の構造的壁物質として用いるべき脂質を、水溶液で水和して中央空隙内に該水溶 液を満たした少ラメラ脂質小胞を形成し、 ｂ）前記の脂質小胞を、（１）実質的に前記の脂質と不混和性であり、（２）実 質的に水溶液と不混和性であり、（３）水溶液より揮発性でなく、（４）前記の 脂質より揮発性であり、（５）実質的に脂質と非反応性であり、（６）前記の脂 質から前記の少ラメラ脂質小胞の構造的完全性を損傷することなく蒸発し得る中 程度に揮発性の液体と混合して中程度に揮発性の液体を満たした少ラメラ脂質小 胞を形成し、ｃ）前記の水溶液及び中程度に揮発性の物質を、前記の少ラメラ脂 質小胞の構造的完全性を損傷することなく前記の少ラメラ脂質小胞から除去し、 それにより、前記の気体充満少ラメラ小胞を形成することを合心、上記の製造方 法。
23. ２３．前記の除去のステップが空気乾燥を含む、請求項２２に記載の方法。
24. ２４．前記の除去のステップが真空乾燥を含む、請求項２２に記載の方法。
25. ２５．前記の除去のステップが凍結乾燥を含む、請求項２２に記載の方法。
26. ２６．前記の中程度に揮発性の液体がペルフルオロカーボンを含む請求項２２に 記載の方法。
27. ２７．前記のペルフルオロカーボンを、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロヘ キサン、ペルフルオロオクタン、ペルフルオロジメチルシクロヘキサン、ペルフ ルオロトリプロピルアミン、オクタフルオロシクロブタン、及びこれらの混合物 からなる群より選択する、請求項２６に記載の少ラメラ小胞。
28. ２８．前記の脂質が少なくとも約４０℃の溶融温度を有する脂質を含む、請求項 ２２に記載の少ラメラ脂質小胞。
29. ２９．前記の混合ステップが、更に、前記の脂質と不混和性であり且つ前記の中 程度に揮発性の液体中で不混和性の油を混合することを含む、請求項２２に記載 の方法。
30. ３０．前記の水溶液が、更に、重合して前記の脂質二重層に付加的な構造的支持 を形成し得る水溶性ポリマーを含む、請求項２２に記載の方法。
31. ３１．前記のポリマーを、ゼラチン、アクリレート、アクリルアミド、カルボキ シメチルセルロース、アルギネート、及びこれらの混合物からなる群より選択す る、請求項３０に記載の少ラメラ脂質小胞。
32. ３２．前記の中程度に揮発性の液体を水和の前に前記の脂質中で分散させするス テップを含み、それにより、前記の脂質を水和するステップと前記の脂質小胞を 前記の中程度に揮発性の液体と混合するステップを同時に行う請求項２２に記載 の方法。
33. ３３．請求項１４に記載の気体充満した小胞を含む白色体質顔料。
34. ３４．請求項２に記載のペルフルオロカーボン充満小胞を含む酸素運搬体。