JPH0630790A - 光学活性１，２−プロパンジオールの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 1,2−プロパンジオールのエナンチオマー混合
物に作用し、どちらか一方のエナンチオマーのみを残存
させうる能力を有する微生物あるいはその処理物を、1,
2 −プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用さ
せ、残存する光学活性1,2 −プロパンジオールを採取し
て光学活性1,2 −プロパンジオールを得る。 【効果】 簡便に光学純度の高い光学活性1,2 −プロパ
ンジオールを製造することを可能にさせ、工業的に極め
て有利である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は光学活性1,2 −プロパン
ジオールの製造法に関する。さらに詳しくは、1,2 −プ
ロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用し、どち
らか一方のエナンチオマーのみを残存させうる能力を有
する微生物あるいはその処理物を作用させ、残存する光
学活性1,2 −プロパンジオールを採取することを特徴と
する光学活性1,2 −プロパンジオールの製造法に関す
る。光学活性1,2 −プロパンジオールは液晶、種々の医
農薬品、例えば抗菌剤の重要合成原料として有用であ
る。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
光学活性1,2 −プロパンジオールを製造する方法として
は、(1) 糖類を原料とし、微生物の発酵によって (R)−
1,2 −プロパンジオールを製造する方法（例えばBIO/TE
CHNOLOGY, ４, 651−654, 1986)、(2) グリセロールデ
ヒドロゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼなどの酵
素を用いてヒドロキシアセトンを不斉還元し、(R) −1,
2 −プロパンジオールを製造する方法、あるいは、1,2
−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に該酵素を
作用させて (S)−1,2 −プロパンジオールを残存させる
方法 (J.Org.Chem., 51, 25−36, 1986、Bioorg.Che
m., 13, 121−130, 1985)、(3) 1,2 −プロパンジオー
ルのエナンチオマー混合物に酵母を作用させて(S)−1,2
−プロパンジオールを残存させる方法(J.Mol.Catal.,
60, L33−L35, 1990)、(4) 光学活性なルテニウム−Ｂ
ＩＮＡＰ触媒を用いてヒドロキシアセトンを不斉還元す
る方法（特開昭63−316744号) 、(5) 光学活性乳酸エス
テルを還元する方法や、(6) 光学活性なラクチドを還元
する方法（特開平２−72129 号) 、(7) 光学活性な光学
分割剤を用いて光学分割する方法（特開昭61−44888
号、特開昭64−75435 号) 等が知られている。

【０００３】(1) は得られる1,2 −プロパンジオールの
光学純度は高いが、原料の糖に対して収率が低く、ま
た、培養液中に蓄積する濃度も低い。さらに、副生物も
多く1,2 −プロパンジオールの精製も容易ではない。
(2) は精製した酵素を用いねばならず、また、高価なＮ
ＡＤ（Ｐ）などの補酵素およびその補酵素を再生するた
めグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼまたはギ酸
デヒドロゲナーゼ等の酵素も必要であり、安価な製造法
ではない。(3) は得られる (S)−1,2 −プロパンジオー
ルの光学純度が35％e.e.と低い欠点があり、(4) は高価
な光学活性触媒を用いねばならないこと、原料のヒドロ
キシアセトンがラセミ体の 1,2−プロパンジオールに比
べはるかに高価であるという欠点がある。(5),(6) はエ
ステル化、あるいはラクチド化した後、高価な還元触媒
を必要とし、操作も繁雑である。また、原料のＬ−乳酸
は安価であるが、Ｄ−乳酸は高価で、(R) −1,2 −プロ
パンジオールを (S)−1,2 −プロパンジオールと同様に
は得られない。(7) は光学分割剤の合成が困難かつ高価
であり、工業レベルでの実施は容易ではない。以上述べ
たように (1)〜(7) の方法は経済的かつ簡便な方法では
なく、安価に光学活性 1,2−プロパンジオールを製造す
る工業的な製法の確立が望まれていた。

【０００４】また、特開平２−128699号において小倉ら
は、(S) −1,2 −ジオールの製法として、1,2 −ブタン
ジオール以上のアルキル鎖長の直鎖の1,2 −ジオールに
ついて、1,2 −ジオールのエナンチオマー混合物に微生
物を作用させ、光学純度の高い (S)−1,2 −ジオールを
採取する方法を開示しているが、1,2 −プロパンジオー
ルについては全く記載されていない。また、同著者等は
(Agri.Biol.Chem.,54(7), 1819−1827, 1990) におい
て、1,2 −プロパンジオールに微生物を作用させたが、
(S) −1,2 −プロパンジオールの収率、光学純度とも50
％を超えたものはなかったと述べている。このように、
1,2 −プロパンジオールのエナンチオマー混合物に微生
物を作用させ、光学純度の極めて高い1,2 −プロパンジ
オールを採取する方法は、今までまったく知られていな
かった。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者等は経済的に優
れ、かつ簡便な方法で光学純度の高い光学活性1,2 −プ
ロパンジオールを得る方法として、微生物を作用させる
方法に着目し、この目的に適した微生物を広く自然界よ
り検索した結果、シュードモナス属に属する微生物群か
ら選ばれた微生物が、1,2 −プロパンジオールのエナン
チオマー混合物に作用し、(R) −1,2 −プロパンジオー
ルを残存させること、および、シュードモナス属に属す
る微生物群から選ばれた微生物が、1,2 −プロパンジオ
ールのエナンチオマー混合物に作用し、(S) −1,2 −プ
ロパンジオールを残存させることを見出し、本発明を完
成したものである。

【０００６】すなわち本発明は、1,2 −プロパンジオー
ルのエナンチオマー混合物に作用して (R)−1,2 −プロ
パンジオールを残存させうる能力を有する微生物あるい
はその処理物を、1,2 −プロパンジオールのエナンチオ
マー混合物に作用させ、残存する (R)−1,2 −プロパン
ジオールを採取することを特徴とする (R)−1,2 −プロ
パンジオールの製法を提供するものである。また、本発
明は、シュードモナス属に属し、1,2 −プロパンジオー
ルのエナンチオマー混合物に作用して (S)−1,2 −プロ
パンジオールを残存させうる能力を有する微生物あるい
はその処理物を、1,2 −プロパンジオールのエナンチオ
マー混合物に作用させ、残存する (S)−1,2 −プロパン
ジオールを採取することを特徴とする (S)−1,2 −プロ
パンジオールの製法を提供するものである。

【０００７】更に本発明は、シュードモナス属に属し、
かつ、立体特異的に一方のエナンチオマーの1,2 −プロ
パンジオールを代謝、分解する能力を有する微生物群か
ら選ばれた新規な微生物を提供するものである。

【０００８】本発明において、 (R)−1,2 −プロパンジ
オールを製造する際に使用する微生物としては、1,2 −
プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用して
(R) −1,2 −プロパンジオールを残存させる能力を有す
る微生物である限り特に制限されないが、特にシュード
モナス(Pseudomonas) 属に属する微生物群から選ばれる
ものが好ましい。また、 (S)−1,2 −プロパンジオール
を製造する際に使用する微生物としては、シュードモナ
ス (Pseudomonas)属に属し、1,2 −プロパンジオールの
エナンチオマー混合物に作用し、(S) −1,2 −プロパン
ジオールを残存させる能力を有する微生物である限り特
に制限されない。シュードモナス (Pseudomonas)属に属
する微生物のうち、 (R)−体を残存させるものとして
は、シュードモナス プチダ (Pseudomonas putida) Ｔ
ＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュードモナス スピーシズ
(Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13などが挙げられ、 (S)−
体を残存させるものとしては、シュードモナス プチダ
(Pseudomonas putida) ＴＲＰ−７などがあげられる。
これらの微生物は、野性株、変異株、または細胞融合も
しくは、遺伝子操作などの遺伝的手法により誘導される
組み換え株など、いずれの株でも好適に用いることがで
きる。また、これらの微生物は、少なくとも一種使用す
ればよい。

【０００９】シュードモナス プチダ (Pseudomonas pu
tida) ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュードモナス スピ
ーシズ (Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13、シュードモナス
プチダ (Pseudomonas putida) ＴＲＰ−７株は、本発
明者等が自然界より分離したもので、一方のエナンチオ
マーの1,2 −プロパンジオールのみを立体特異的に代
謝、分解する能力の高い菌株であり、それぞれ微工研条
寄第3879号（ＦＥＲＭＢＰ−3879) 、微工研条寄第3880
号（ＦＥＲＭ ＢＰ−3880）、微工研条寄第3882号（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−3882）、微工研条寄第3881号（ＦＥＲＭ
ＢＰ−3881）として工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託されている。以下にそれらの菌学的性質を示す。
尚、下記の記載中、N.T.は試験を行っていないことを示
す。

【００１０】 (a) 形態 ＴＲＢ−２株 ＴＲＰ−４株 ＴＲＰ−13株 (1)細胞の形および大きさ 桿 菌 桿 菌 桿 菌 0.5〜0.6 μm 0.6〜0.8 μm 0.5μm × × 1.5〜4.0 μm × 1.0〜3.5 μm 1.0 〜2.5μm (2)運動性 ＋ ＋ ＋ (3)グラム染色性 − − − (4)胞子の有無 − − − (5)鞭毛 極鞭毛、＞１ 極鞭毛、＞１ 極鞭毛、１ (b) 生理学的性質 ＴＲＢ−２株 ＴＲＰ−４株 ＴＲＰ−13株 (1)オキシダーゼ ＋ ＋ ＋ (2)カタラーゼ ＋ ＋ ＋ (3)アミノペプチダーゼ ＋ ＋ ＋ (4)インドールの生成 − − − (5)ＶＰテスト − − − (6)硝酸塩の還元 − − ＋ (7)脱窒反応 − − ＋ (8)ウレアーゼ ± N.T. N.T. (9)フェニルアラニンデアミナーゼ − − − (10)シュクロースからレバンの生成 − − − (11)レシチナーゼ − − − (12)チロシンの分解 ＋ ＋ N.T. (13)でんぷんの加水分解 − − − (14)ゼラチンの加水分解 − − − (15)カゼインの加水分解 − − − (16)ＤＮＡの加水分解 − − − (17)Tween80 の加水分解 − − − (18)エスクリンの加水分解 − − ＋ (19)３％KOH による溶菌 ＋ ＋ ＋ (20)酸素に対する態度 好気的 好気的 好気的 (21)４℃での生育 − − − (22)37℃での生育 ＋ − ＋ (23)41℃での生育 − − − (24)pH5.6 での生育 ＋ ＋ ＋ (25)Mac-Conkey-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (26)SS-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (27)Cetrimid-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (28)色素の生成 蛍光性 ＋ ＋ − ピロシアニン − − − (29)ＯＦテスト Ｏ Ｏ Ｏ (30)グルコースからガスの生成 − − − (31)酸の生成 グルコース ＋ ＋ ＋ フルクトース ＋ ＋ ＋ キシロース ＋ ＋ ＋ (32)PNPG（β−ガラクトシダーゼ） − − − (33)アルギニンジヒドロラーゼ ＋ ＋ ＋ (34)炭素源の利用 酢酸 ＋ ＋ ＋ アジピン酸 − − ＋ カプロン酸 ＋ ＋ ＋ クエン酸 ＋ ＋ ＋ グリコール酸 ＋ − − レブリン酸 − ＋ N.T. リンゴ酸 ＋ ＋ ＋ マロン酸 ＋ − − フェニル酢酸 − ＋ ＋ Ｌ−アラビノース ＋ − − フルクトース ＋ ＋ N.T. グルコース ＋ ± ＋ マンノース ＋ − − マルトース − − − キシロース ＋ − − マンニトール ＋ − − グルコン酸 ＋ − ± ２−ケトグルコン酸 ＋ − N.T. Ｎ−アセチルグルコサミン − − ± Ｌ−セリン ＋ ＋ − Ｄ−酒石酸 ＋ − N.T. 馬尿酸 ＋ − N.T. Ｌ−酒石酸 ＋ − N.T. ｍ−酒石酸 − ＋ N.T. エタノール ＋ − ＋ 乳酸 ＋ ＋ ＋ スベリン酸 − − − ベンジルアミン ＋ − N.T. アドニトール ＋ − − 酪酸 ＋ N.T. ＋ Ｄ−マンデル酸 − − N.T. トレハロース − − − Ｄ−グルカル酸 − N.T. − Ｌ−ラムノース − − N.T. シトラコン酸 ＋ − N.T. ベンゾイルギ酸 − − − ブチルアミン − ＋ N.T. ｍ−イノシトール − − − Ｌ−マンデル酸 − − − トリプタミン − − N.T. イソ酪酸 − ＋ N.T. セバシン酸 − − ＋ ソルビトール − − − エリスリトール − − N.T. Ｌ−メチオニン N.T. − N.T. アセトアミド N.T. − − イタコン酸 N.T. − N.T. ピメリン酸 N.T. − N.T. シュクロース N.T. − − アゼライン酸 N.T. − ＋ Ｄ−ガラクトース N.T. N.T. ＋ ムコン酸 N.T. N.T. ＋ ゲラニオール N.T. N.T. ＋ プロピレングリコール N.T. N.T. ＋ ｎ−プロパノール N.T. N.T. ＋。

【００１１】 ＴＲＰ−７株 (a) 形態 (1)細胞の形および大きさ 桿 菌 0.5〜0.6 μm × 1.5〜18.0μm (2)運動性 ＋ (3)グラム染色性 − (4)胞子の有無 − (5)鞭毛 極鞭毛、＞１ (b) 生理学的性質 (1)オキシダーゼ ＋ (2)カタラーゼ ＋ (3)アミノペプチダーゼ ＋ (4)インドールの生成 − (5)ＶＰテスト − (6)硝酸塩の還元 − (7)脱窒反応 − (8)ウレアーゼ ＋ (9)フェニルアラニンデアミナーゼ − (10)シュクロースからレバンの生成 − (11)レシチナーゼ − (12)でんぷんの加水分解 − (13)ゼラチンの加水分解 − (14)カゼインの加水分解 − (15)ＤＮＡの加水分解 − (16)Tween80 の加水分解 ＋ (17)エスクリンの加水分解 − (18)３％KOH による溶菌 ＋ (19)酸素に対する態度 好気的 (20)４℃での生育 ＋ (21)37℃での生育 − (22)41℃での生育 − (23)pH5.6 での生育 ＋ (24)Mac-Conkey-Agar 培地での生育 ＋ (25)SS-Agar 培地での生育 ＋ (26)Cetrimid-Agar 培地での生育 ＋ (27)色素の生成 蛍光性 ＋ ピロシアニン − (28)ＯＦテスト Ｏ (29)グルコースからガスの生成 − (30)酸の生成 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ (31)PNPG（β−ガラクトシダーゼ） − (32)アルギニンジヒドロラーゼ ＋ (33)炭素源の利用 アジピン酸 − カプロン酸 ＋ クエン酸 ＋ レブリン酸 ＋ リンゴ酸 ＋ フェニル酢酸 ＋ Ｌ−アラビノース − フルクトース ＋ グルコース ＋ マンノース ＋ マルトース − マンニトール ＋ グルコン酸 ＋ Ｎ−アセチルグルコサミン − Ｌ−バリン ＋ アドニトール − トレハロース ＋ Ｄ−グルカル酸 ＋ ベンゾイルギ酸 ＋ ブチルアミン ＋ ｍ−イノシトール − セバシン酸 − ソルビトール − アセトアミド − シュクロース − アゼライン酸 − Ｄ−ガラクトース ＋ ムコン酸 ＋ ゲラニオール − グリシン − ｎ−ブタノール ＋ Ｄ−アラニン ＋ アントラニル酸 − Ｌ−トリプトファン − Ｌ−キヌレン酸 − α−アミルアミン − 以上の菌学的性質をバージーの細菌分類書〔Bergey's m
anual of SystematicBacteriology (1986) 〕に基づい
て分類すると、ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、ＴＲＰ−７は
シュードモナス プチダ (Pseudomonas putida) と同定
された。ＴＲＰ−13株は明確に該当する種がなく、シュ
ードモナス (Pseudomonas)属に属する新菌種であること
が明らかとなった。

【００１２】本発明に用いる微生物を培養するための培
地は、その微生物が増殖しうるものであれば特に制限は
ない。例えば、炭素源としては、上記微生物が利用可能
であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、
フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖
類、ソルビトール、グリセロール、1,2 −プロパンジオ
ール、1,3 −プロパンジオールなどのアルコール類、フ
マール酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸などの有機酸
類およびその塩類、パラフィンなどの炭化水素類などあ
るいはこれらの混合物を使用することができる。窒素源
としては例えば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウムなどの無機酸のアンモニウム
塩、フマル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウムなど
の有機酸のアンモニウム塩、肉エキス、酵母エキス、コ
ーンスティープリカー、カゼイン加水分解物、尿素、な
どの無機有機含窒素化合物、あるいはこれらの混合物を
使用することができる。他に無機塩、微量金属塩、ビタ
ミン類など、通常の培養に用いられる栄養源を適宜混合
して用いることができる。また、必要に応じて微生物の
増殖を促進する因子、本発明の目的化合物の生成能力を
高める因子、あるいは培地のpH保持に有効なCaCO₃ など
の物質も添加できる。

【００１３】培養方法としては培地pHは3.0 〜10.0、好
ましくは４〜８、培養温度は20〜45℃、好ましくは25〜
37℃で、嫌気的あるいは好気的に、その微生物の生育に
適した条件下５〜120 時間、好ましくは12〜72時間程度
培養する。

【００１４】1,2 −プロパンジオールのエナンチオマー
混合物から光学活性な1,2 −プロパンジオールを生成さ
せる方法としては、培養液をそのまま用い、該培養液に
1,2−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を添加
する方法、遠心分離などにより、菌体を分離し、これを
そのまま、あるいは洗浄した後、緩衝液、水などに再懸
濁したものに、1,2 −プロパンジオールのエナンチオマ
ー混合物を添加し反応させる方法などがある。この反応
の際、グルコース、シュクロースなどの炭素源をエネル
ギー源として添加したほうがよい場合もある。また、菌
体は生菌体のままでもよいし、菌体破砕物、アセトン処
理、凍結乾燥などの処理を施したものでもよい。また、
これらの菌体あるいは菌体処理物を、例えばポリアクリ
ルアミドゲル法、含硫多糖ゲル法（カラギーナンゲル法
など）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法など公知の方法
で固定化して用いることもできる。さらに、菌体処理物
から、公知の方法を組み合わせて精製取得した酵素も使
用できる。

【００１５】1,2 −プロパンジオールのエナンチオマー
混合物はそのまま、あるいは、水に溶解しまたは反応に
影響を与えないような有機溶媒に溶解したり、界面活性
剤などに分散させたりして、反応始めから一括にあるい
は分割して添加してもよい。反応はpH３〜10、好ましく
はpH５〜９の範囲で、温度は10〜60℃、好ましくは20〜
40℃の範囲で、１〜120 時間程度、攪拌下あるいは静置
下で行う。基質である1,2 −プロパンジオールのエナン
チオマー混合物の濃度は特に限定されないが、１〜40％
程度が好ましい。また、必要に応じてNaOH、CaCO₃ 、HC
l 、H₂SO₄ などで反応液のpHを保持すると、良好な結果
が得られる場合もある。

【００１６】反応によって残存生成した光学活性1,2 −
プロパンジオールの採取は反応液から直接あるいは菌体
分離後、有機溶媒による抽出、蒸留、カラムクロマトグ
ラフィーなどの通常の精製方法を用いれば容易に行うこ
とができる。また、反応の副生物にアルデヒド、ケトン
が生じる場合には、亜硫酸水素ナトリウムで処理し、除
去することも効果的な方法である。

【００１７】

【実施例】以下本発明を具体的に実施例にて説明する
が、本発明はこれらの実施例にのみに限定されるもので
はない。例中の％は特記しない限り重量基準である。
尚、実施例における反応液中の1,2 −プロパンジオール
の定量はガスクロマトグラフィー〔カラム：Thermon 30
00 ５％／chromosorb W 80〜100 メッシュ（φ３mm×
2.1 ｍ) 、温度140 ℃〕により容易に行うことができ、
光学純度は反応により得られた光学活性1,2 −プロパン
ジオールを常法により、フェニルイソシアネートと反応
させフェニルカルバモイル化した後、光学分割カラムを
用いた高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル
化学工業製キラルセルＯＤ、溶媒：ｎ−ヘキサン／２−
プロパノール＝16：３、波長254nm 、流速1.0 ml／分、
温度45℃）により測定した（保持時間：(R) 体14.2分、
(S) 体23.5分）。

【００１８】実施例１ 下記組成の菌体調製用培地50mlを500ml 容坂口フラスコ
に入れ、滅菌後表１に示した微生物をそれぞれ植菌し、
30℃で50時間振とう培養を行った。続いて、遠心分離で
菌体を分離し、生菌体を得た。 ＜菌体調製用培地＞ ラセミ 1,2−プロパンジオール 1.0 ％ 肉エキス 0.1 ％ 酵母エキス 0.1 ％ ポリペプトン 0.2 ％ KH₂PO₄ 0.07 ％ (NH₄)₂HPO₄ 0.13 ％ MgSO₄・7H₂O 0.05 ％ pH7.2 次に生菌体を脱イオン水に懸濁し25mlとした。これを1
2.5mlずつ500ml 容坂口フラスコに入れ12％ラセミ 1,2
−プロパンジオール／６％CaCO₃ の混合液をフラスコＡ
には12.5ml、フラスコＢには8.34ml入れた。フラスコＢ
にはさらに脱イオン水4.16mlを加えて、30℃で48時間振
とう反応させた（終濃度、フラスコＡ：６％ 1,2−プロ
パンジオール、３％CaCO₃ 、フラスコＢ：４％ 1,2−プ
ロパンジオール、２％CaCO₃)。

【００１９】反応終了後、遠心分離にて除菌し、得られ
た上澄液２mlを塩化ナトリウムで飽和させた後、酢酸エ
チル２mlを用いて残存する 1,2−プロパンジオールを抽
出した。抽出液を脱溶媒後、残渣にフェニルイソシアネ
ート50μl を加えて、フェニルカルバモイル化した。こ
れに高速液体クロマトグラフィー移動相２ml（ｎ−ヘキ
サン／２−プロパノール〔16：３〕）を加えて溶解さ
せ、高速液体クロマトグラフィーにて光学純度を測定し
た。また、先の上澄液を蒸留水にて適宜希釈した後、ガ
スクロマトグラフィーにて1,2 −プロパンジオールを定
量した。得られた 1,2−プロパンジオールの絶対配置、
および光学純度、残存量を表１に示す。

【００２０】

【表１】

【００２１】実施例２ シュードモナス スピーシズＴＲＰ−13、シュードモナ
ス プチダＴＲＰ−７株について実施例１と同様の培
地、方法で培地50mlを500ml 容坂口フラスコで30℃、50
時間、培養した。遠心集菌後脱イオン水に懸濁してそれ
ぞれ25mlとした。実施例１と同様に菌体懸濁液を12.5ml
ずつ２本の500ml 容坂口フラスコに分注し、フラスコＡ
には20％ラセミ 1,2−プロパンジオール／10％CaCO₃ 混
合液10ml、脱イオン水2.5ml(終濃度：８％ 1,2−プロパ
ンジオール、４％CaCO₃)、フラスコＢには20％ラセミ
1,2−プロパンジオール／10％CaCO₃ 混合液12.5ml（終
濃度：10％ 1,2−プロパンジオール、５％CaCO₃)を加
え、30℃、72時間振とう反応させた。反応終了後実施例
１と同様にして1,2 −プロパンジオールの残存量、光学
純度、絶対配置を調べ、その結果を表２にまとめた。

【００２２】

【表２】

【００２３】実施例３ Ｂ．ブラウン社製２リットル小型培養槽に実施例１と同
様の培地を1.2 リットル仕込み、121 ℃、15分間滅菌し
た。冷却後、シュードモナス スピーシズＴＲＰ−13株
を下記に示す培地にて30℃、25時間、振とう培養（10ml
／φ21mm試験管）して得た培養液12mlを無菌的に接種
し、30℃、700rpm、0.5vvmの条件で18.5時間培養した。 ＜培 地＞ グルコース 0.5 ％ 肉エキス 0.3 ％ 酵母エキス 0.3 ％ ポリペプトン 0.5 ％ KH₂PO₄ 0.07 ％ (NH₄)₂HPO₄ 0.13 ％ MgSO₄・7H₂O 0.05 ％ pH7.2 培養終了後１リットル分の培養液を遠心分離し、生菌体
を得、次いでこれを脱イオン水に懸濁し、200ml とし
た。これに800ml の7.5 ％ラセミ 1,2−プロパンジオー
ル／3.75％CaCO₃ 混合液を加え（終濃度：６％ 1,2−プ
ロパンジオール、３％CaCO₃)、上記の小型培養槽にて、
30℃、700rpm、0.5vvmにて79.5時間反応を行った。反応
終了時点の(R) −1,2 −プロパンジオールの光学純度は
99.8％ee、(R) −1,2 −プロパンジオールの収率は97.7
％であった。

【００２４】反応終了液を遠心分離して上清を得、次い
でミリポア社製の限外ろ過膜（分子量１万カット）を通
して、高分子物質を除いた。これをロータリーエバポレ
ーターで106 ｇまで濃縮し、析出した白色結晶をろ過に
て除いた。ロ液を再び濃縮し、40.2ｇとした。この濃縮
液に対して、酢酸エチルにて抽出を行った。酢酸エチル
層を集め、脱溶媒した。この残渣に亜硫酸水素ナトリウ
ムの飽和水溶液５mlを加え、室温１時間攪拌した。これ
をジエチルエーテルにて抽出し、エーテル層を得た後、
無水硫酸ナトリウムにて乾燥後脱溶媒した。残渣を５mm
Hgにて蒸留し、精製(R) −1,2 −プロパンジオール8.6
ｇを得た。ガスクロマトグラフィー面積比98.4％、光学
純度99.3％e.e.、〔α〕²⁵ _D −23.8°（ｃ＝0.992 、H₂
O)。

【００２５】

【発明の効果】本発明の微生物を用いた光学活性1,2 −
プロパンジオールの製法は、簡便に光学純度の高い光学
活性1,2 −プロパンジオールを製造することを可能にさ
せるものであり、工業的に極めて有利である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:40） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:40）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 1,2 −プロパンジオールのエナンチオマ
   ー混合物に作用して(R) −1,2 −プロパンジオールを残
   存させうる能力を有する微生物あるいはその処理物を、
   1,2 −プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用
   させ、残存する (R)−1,2 −プロパンジオールを採取す
   ることを特徴とする (R)−1,2 −プロパンジオールの製
   法。
2. 【請求項２】 シュードモナス属に属し、1,2 −プロパ
   ンジオールのエナンチオマー混合物に作用して (S)−1,
   2 −プロパンジオールを残存させうる能力を有する微生
   物あるいはその処理物を、1,2 −プロパンジオールのエ
   ナンチオマー混合物に作用させ、残存する (S)−1,2 −
   プロパンジオールを採取することを特徴とする (S)−1,
   2 −プロパンジオールの製法。
3. 【請求項３】 微生物が、シュードモナス属に属する微
   生物群から選ばれ、1,2 −プロパンジオールのエナンチ
   オマー混合物に作用して (R)−1,2 −プロパンジオール
   を残存させうる能力を有する微生物である請求項１記載
   の (R)−1,2−プロパンジオールの製法。
4. 【請求項４】 シュードモナス属に属し、かつ、立体特
   異的に一方のエナンチオマーの1,2 −プロパンジオール
   を代謝、分解する能力を有する微生物群から選ばれた新
   規な微生物。