JP3283254B2 - 光学活性アルコールの製法 - Google Patents
光学活性アルコールの製法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は光学活性アルコール
の製造法に関する。さらに詳しくは、式（Ｉ）で表わさ
れる構造のアルコールのエナンチオマー混合物に作用
し、式(II)で表わされる立体配置をもつアルコールを残
存させうる能力を有する微生物あるいはその処理物を作
用させ、残存する式(II)で表わされる立体配置をもつア
ルコールを採取することを特徴とする光学活性アルコー
ルの製造法に関する。
の製造法に関する。さらに詳しくは、式（Ｉ）で表わさ
れる構造のアルコールのエナンチオマー混合物に作用
し、式(II)で表わされる立体配置をもつアルコールを残
存させうる能力を有する微生物あるいはその処理物を作
用させ、残存する式(II)で表わされる立体配置をもつア
ルコールを採取することを特徴とする光学活性アルコー
ルの製造法に関する。
【０００２】
【化２】
【０００３】（式中、 nは０〜３の整数を示す。） 式(II)で表わされる光学活性アルコールは液晶、種々の
医農薬品、例えば抗生物質、抗菌剤、カルシウム拮抗
剤、抗結核剤等の重要合成原料である。
医農薬品、例えば抗生物質、抗菌剤、カルシウム拮抗
剤、抗結核剤等の重要合成原料である。
【０００４】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
前記式(II)で表わされる光学活性２−アミノアルコール
を製造する方法として、２−アミノ−１−ブタノールに
ついては、光学活性酒石酸やＬ−グルタミン酸、Ｌ−マ
ンデル酸などを用いて光学分割する方法（例えばPitre
ら、Chimia, 23, 399-400, 1969)、Ｎ−アシル−（Ｒ，
Ｓ）−２−アミノ−１−ブタノールにアシラーゼを作用
させて、（Ｓ）−２−アミノ−１−ブタノールを採取す
る方法（ＤＥ 2446320、特開昭58−198296号) 、ラセミ
体２−アミノ−１−ブタノールにリパーゼを作用させて
Ｎ−カルバミル−２−アミノ−１−ブタノールを合成し
て光学分割する方法（ＥＰ 222561)、あるいは逆にＮ−
カルバミル−２−アミノ−１−ブタノールアセテートに
酵素を作用させて光学分割する方法（ＥＰ 239122)、リ
パーゼを用いてエステル交換で光学分割する方法（Bevi
nakattiら、Tetrahedron Asymmetry, 1, 583-6, 1990)
、３−アシル−４−エチル−２−オキサゾロンを
（＋）−DIOP−RhCl触媒を用いて還元する方法（ＵＳ 4
150030) などが知られている。
前記式(II)で表わされる光学活性２−アミノアルコール
を製造する方法として、２−アミノ−１−ブタノールに
ついては、光学活性酒石酸やＬ−グルタミン酸、Ｌ−マ
ンデル酸などを用いて光学分割する方法（例えばPitre
ら、Chimia, 23, 399-400, 1969)、Ｎ−アシル−（Ｒ，
Ｓ）−２−アミノ−１−ブタノールにアシラーゼを作用
させて、（Ｓ）−２−アミノ−１−ブタノールを採取す
る方法（ＤＥ 2446320、特開昭58−198296号) 、ラセミ
体２−アミノ−１−ブタノールにリパーゼを作用させて
Ｎ−カルバミル−２−アミノ−１−ブタノールを合成し
て光学分割する方法（ＥＰ 222561)、あるいは逆にＮ−
カルバミル−２−アミノ−１−ブタノールアセテートに
酵素を作用させて光学分割する方法（ＥＰ 239122)、リ
パーゼを用いてエステル交換で光学分割する方法（Bevi
nakattiら、Tetrahedron Asymmetry, 1, 583-6, 1990)
、３−アシル−４−エチル−２−オキサゾロンを
（＋）−DIOP−RhCl触媒を用いて還元する方法（ＵＳ 4
150030) などが知られている。
【０００５】２−アミノ−１−プロパノールについては
ＤあるいはＬ−アラニンエステルを還元する方法（例え
ばＣＳ 209151)、２−アミノ−１−プロパノールのエナ
ンチオマー混合物に馬肝臓由来のアルコールデヒドロゲ
ナーゼを作用させ、（Ｒ）−２−アミノ−１−プロパノ
ールを残存させる方法(Matosら、Bioorg. Chem., 13,12
1-130, 1985)が知られている。
ＤあるいはＬ−アラニンエステルを還元する方法（例え
ばＣＳ 209151)、２−アミノ−１−プロパノールのエナ
ンチオマー混合物に馬肝臓由来のアルコールデヒドロゲ
ナーゼを作用させ、（Ｒ）−２−アミノ−１−プロパノ
ールを残存させる方法(Matosら、Bioorg. Chem., 13,12
1-130, 1985)が知られている。
【０００６】以上述べたように、前記式（Ｉ）で表され
るアルコールのエナンチオマー混合物にシュードモナス
属の微生物を作用させ、式(II)で表される立体配置をも
つ光学活性アルコールを残存させ、残存する光学活性ア
ルコールを採取する方法は、今までまったく知られてい
なかった。
るアルコールのエナンチオマー混合物にシュードモナス
属の微生物を作用させ、式(II)で表される立体配置をも
つ光学活性アルコールを残存させ、残存する光学活性ア
ルコールを採取する方法は、今までまったく知られてい
なかった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は経済的に優
れ、かつ簡便な方法で光学純度の高い、前記式(II)で表
わされる光学活性アルコールを得る方法として、微生物
を作用させる方法に着目し、この目的に適した微生物を
広く自然界より検索した結果、シュードモナス属に属す
る微生物群から選ばれた微生物が、式（Ｉ）で表わされ
るアルコールのエナンチオマー混合物に作用し、式(II)
で表わされる光学活性アルコールを残存させることを見
出し、本発明を完成したものである。
れ、かつ簡便な方法で光学純度の高い、前記式(II)で表
わされる光学活性アルコールを得る方法として、微生物
を作用させる方法に着目し、この目的に適した微生物を
広く自然界より検索した結果、シュードモナス属に属す
る微生物群から選ばれた微生物が、式（Ｉ）で表わされ
るアルコールのエナンチオマー混合物に作用し、式(II)
で表わされる光学活性アルコールを残存させることを見
出し、本発明を完成したものである。
【０００８】すなわち本発明は、シュードモナス属に属
し、式（Ｉ）で表わされる構造のアルコールのエナンチ
オマー混合物に作用し、式(II)で表わされる立体配置を
もつアルコールを残存させうる能力を有する微生物、あ
るいはその処理物を、式（Ｉ）で表わされるアルコール
のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する式(II)で
表わされる立体配置をもつアルコールを採取することを
特徴とする光学活性アルコールの製法、およびシュード
モナス属に属し、かつ、式（Ｉ）で表されるアルコール
のエナンチオマー混合物に作用し、立体特異的に一方の
エナンチオマーのアルコールを代謝、分解する能力を有
する微生物群から選ばれる新規な微生物を提供する。
し、式（Ｉ）で表わされる構造のアルコールのエナンチ
オマー混合物に作用し、式(II)で表わされる立体配置を
もつアルコールを残存させうる能力を有する微生物、あ
るいはその処理物を、式（Ｉ）で表わされるアルコール
のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する式(II)で
表わされる立体配置をもつアルコールを採取することを
特徴とする光学活性アルコールの製法、およびシュード
モナス属に属し、かつ、式（Ｉ）で表されるアルコール
のエナンチオマー混合物に作用し、立体特異的に一方の
エナンチオマーのアルコールを代謝、分解する能力を有
する微生物群から選ばれる新規な微生物を提供する。
【０００９】本発明で用いられる式（Ｉ）で表されるア
ルコールとしては、例えば、２−アミノ−１−プロパノ
ール、２−アミノ−１−ブタノール、２−アミノ−１−
ペンタノールなどが挙げられる。
ルコールとしては、例えば、２−アミノ−１−プロパノ
ール、２−アミノ−１−ブタノール、２−アミノ−１−
ペンタノールなどが挙げられる。
【００１０】本発明に使用する微生物としては、シュー
ドモナス属（Pseudomonas)に属し、式（Ｉ）で表わされ
るアルコールのエナンチオマー混合物に作用し、式(II)
で表わされる光学活性アルコールを残存させる能力を有
する限り、特に制限されない。
ドモナス属（Pseudomonas)に属し、式（Ｉ）で表わされ
るアルコールのエナンチオマー混合物に作用し、式(II)
で表わされる光学活性アルコールを残存させる能力を有
する限り、特に制限されない。
【００１１】具体的には、シュードモナス プチダ（Ps
eudomonas putida) ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュード
モナス スピーシズ（Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13株な
どが挙げられる。これらの微生物は、野性株、変異株、
または細胞融合、もしくは遺伝子操作などの遺伝的手法
により誘導される組み換え株など、いずれの株でも好適
に用いることができる。また、これらの微生物は、少な
くとも一種使用すればよい。
eudomonas putida) ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュード
モナス スピーシズ（Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13株な
どが挙げられる。これらの微生物は、野性株、変異株、
または細胞融合、もしくは遺伝子操作などの遺伝的手法
により誘導される組み換え株など、いずれの株でも好適
に用いることができる。また、これらの微生物は、少な
くとも一種使用すればよい。
【００１２】シュードモナス プチダ（Pseudomonas pu
tida) ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュードモナス スピ
ーシズ（Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13は、本発明者等が
自然界より分離したもので、式（Ｉ）で表わされるアル
コールのエナンチオマーの一方のみを立体特異的に代
謝、分解する能力の高い菌株であり、それぞれ微工研条
寄第3879号（ＦＥＲＭ ＢＰ−3879) 、微工研条寄第38
80号（ＦＥＲＭ ＢＰ−3880）、微工研条寄第3882号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−3882) として、1992年６月３日に工
業技術院微生物工業技術研究所に国際寄託されている。
以下にそれらの菌学的性質を示す。
tida) ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４、シュードモナス スピ
ーシズ（Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13は、本発明者等が
自然界より分離したもので、式（Ｉ）で表わされるアル
コールのエナンチオマーの一方のみを立体特異的に代
謝、分解する能力の高い菌株であり、それぞれ微工研条
寄第3879号（ＦＥＲＭ ＢＰ−3879) 、微工研条寄第38
80号（ＦＥＲＭ ＢＰ−3880）、微工研条寄第3882号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−3882) として、1992年６月３日に工
業技術院微生物工業技術研究所に国際寄託されている。
以下にそれらの菌学的性質を示す。
【００１３】 ＴＲＢ−２株 ＴＲＰ−４株 ＴＲＰ−13株 (a) 形態 (1)細胞の形および大きさ 桿菌 桿菌 桿菌 0.5〜0.6 μm 0.6〜0.8 μm 0.5μm × ×1.5〜4.0μm ×1.0〜3.5μm 1.0〜2.5μm (2)運動性 ＋ ＋ ＋ (3)グラム染色性 − − − (4)胞子の有無 − − − (5)鞭毛 極鞭毛、＞１ 極鞭毛、＞１ 極鞭毛、１ (b) 生理学的性質 (1)オキシダーゼ ＋ ＋ ＋ (2)カタラーゼ ＋ ＋ ＋ (3)アミノペプチダーゼ ＋ ＋ ＋ (4)インドールの生成 − − − (5)ＶＰテスト − − − (6)硝酸塩の還元 − − ＋ (7)脱窒反応 − − ＋ (8)ウレアーゼ ± N.T. N.T. (9)フェニルアラニンデアミナーゼ − − − (10)シュクロースからレバンの生成 − − − (11)レシチナーゼ − − − (12)チロシンの分解 ＋ ＋ N.T. (13)でんぷんの加水分解 − − − (14)ゼラチンの加水分解 − − − (15)カゼインの加水分解 − − − (16)ＤＮＡの加水分解 − − − (17)Tween80 の加水分解 − − − (18)エスクリンの加水分解 − − ＋ (19)３％KOH による溶菌 ＋ ＋ ＋ (20)酸素に対する態度 好気的 好気的 好気的 (21)４℃での生育 − − − (22)37℃での生育 ＋ − ＋ (23)41℃での生育 − − − (24)pH5.6 での生育 ＋ ＋ ＋ (25)Mac-Conkey-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (26)SS-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (27)Cetrimid-Agar 培地での生育 ＋ ＋ ＋ (28)色素の生成 蛍光性 ＋ ＋ − ピロシアニン − − − (29)ＯＦテスト Ｏ Ｏ Ｏ (30)グルコースからガスの生成 − − − (31)酸の生成 グルコース ＋ ＋ ＋ フルクトース ＋ ＋ ＋ キシロース ＋ ＋ ＋ (32)PNPG (β−ガラクトシダーゼ） − − − (33)アルギニンジヒドロラーゼ ＋ ＋ ＋ (34)炭素源の利用 酢酸 ＋ ＋ ＋ アジピン酸 − − ＋ カプロン酸 ＋ ＋ ＋ クエン酸 ＋ ＋ ＋ グリコール酸 ＋ − − レブリン酸 − ＋ N.T. リンゴ酸 ＋ ＋ ＋ マロン酸 ＋ − − フェニル酢酸 − ＋ ＋ Ｌ−アラビノース ＋ − − フルクトース ＋ ＋ N.T. グルコース ＋ ± ＋ マンノース ＋ − − マルトース − − − キシロース ＋ − − マンニトール ＋ − − グルコン酸 ＋ − ± ２−ケトグルコン酸 ＋ − N.T. Ｎ−アセチルグルコサミン − − ± Ｌ−セリン ＋ ＋ − Ｄ−酒石酸 ＋ − N.T. 馬尿酸 ＋ − N.T. Ｌ−酒石酸 ＋ − N.T. ｍ−酒石酸 − ＋ N.T. エタノール ＋ − ＋ 乳酸 ＋ ＋ ＋ スベリン酸 − − − ベンジルアミン ＋ − N.T. アドニトール ＋ − − 酪酸 ＋ N.T. ＋ Ｄ−マンデル酸 − − N.T. トレハロース − − − Ｄ−グルカル酸 − N.T. − Ｌ−ラムノース − − N.T. シトラコン酸 ＋ − N.T. ベンゾイルギ酸 − − − ブチルアミン − ＋ N.T. ｍ−イノシトール − − − Ｌ−マンデル酸 − − − トリプタミン − − N.T. イソ酪酸 − ＋ N.T. セバシン酸 − − ＋ ソルビトール − − − エリスリトール − − N.T. Ｌ−メチオニン N.T. − N.T. アセトアミド N.T. − − イタコン酸 N.T. − N.T. ピメリン酸 N.T. − N.T. シュクロース N.T. − − アゼライン酸 N.T. − ＋ Ｄ−ガラクトース N.T. N.T. ＋ ムコン酸 N.T. N.T. ＋ ゲラニオール N.T. N.T. ＋ プロピレングリコール N.T. N.T. ＋ ｎ−プロパノール N.T. N.T. ＋ N.T.：試験を行っていない 以上の菌学的性質をバージーの細菌分類書〔Bergey's m
anual of SystematicBacteriology(1986)〕に基づいて
分類すると、ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４はシュードモナス
プチダ（Pseudomonas putida) と同定された。ＴＲＰ
−13株は明確に該当する種がなく、シュードモナス属
（Pseudomonas sp.)に属する新菌種であることが明らか
となった。
anual of SystematicBacteriology(1986)〕に基づいて
分類すると、ＴＲＢ−２、ＴＲＰ−４はシュードモナス
プチダ（Pseudomonas putida) と同定された。ＴＲＰ
−13株は明確に該当する種がなく、シュードモナス属
（Pseudomonas sp.)に属する新菌種であることが明らか
となった。
【００１４】本発明に用いる微生物を培養するための培
地は、その微生物が増殖しうるものであれば特に制限は
ない。例えば、炭素源としては、上記微生物が利用可能
であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、
フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖
類、ソルビトール、グリセロール、 1,2−プロパンジオ
ール、 1,3−プロパンジオール、 1,2−ブタンジオー
ル、２−アミノ−１−プロパノール、２−アミノ−１−
ブタノールなどのアルコール類、フマール酸、クエン
酸、酢酸、プロピオン酸などの有機酸類およびその塩
類、パラフィンなどの炭化水素類など、あるいはこれら
の混合物を使用することができる。窒素源としては例え
ば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウムなどの無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アン
モニウム、クエン酸アンモニウムなどの有機酸のアンモ
ニウム塩、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリ
カー、カゼイン加水分解物、尿素、などの無機有機含窒
素化合物、あるいはこれらの混合物を使用することがで
きる。他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類など、通常
の培養に用いられる栄養源を適宜混合して用いることも
できる。また、必要に応じて微生物の増殖を促進する因
子、本発明の目的化合物の生成能力を高める因子、ある
いは培地のpH保持に有効なCaCO3 などの物質も添加でき
る。
地は、その微生物が増殖しうるものであれば特に制限は
ない。例えば、炭素源としては、上記微生物が利用可能
であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、
フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖
類、ソルビトール、グリセロール、 1,2−プロパンジオ
ール、 1,3−プロパンジオール、 1,2−ブタンジオー
ル、２−アミノ−１−プロパノール、２−アミノ−１−
ブタノールなどのアルコール類、フマール酸、クエン
酸、酢酸、プロピオン酸などの有機酸類およびその塩
類、パラフィンなどの炭化水素類など、あるいはこれら
の混合物を使用することができる。窒素源としては例え
ば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウムなどの無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アン
モニウム、クエン酸アンモニウムなどの有機酸のアンモ
ニウム塩、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリ
カー、カゼイン加水分解物、尿素、などの無機有機含窒
素化合物、あるいはこれらの混合物を使用することがで
きる。他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類など、通常
の培養に用いられる栄養源を適宜混合して用いることも
できる。また、必要に応じて微生物の増殖を促進する因
子、本発明の目的化合物の生成能力を高める因子、ある
いは培地のpH保持に有効なCaCO3 などの物質も添加でき
る。
【００１５】培養方法としては培地pHは 3.0〜10.0、好
ましくは４〜８、培養温度は20〜45℃、好ましくは25〜
37℃で、嫌気的あるいは好気的に、その微生物の生育に
適した条件下５〜120 時間、好ましくは12〜72時間程度
培養する。
ましくは４〜８、培養温度は20〜45℃、好ましくは25〜
37℃で、嫌気的あるいは好気的に、その微生物の生育に
適した条件下５〜120 時間、好ましくは12〜72時間程度
培養する。
【００１６】式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナン
チオマー混合物から式 (II)で表わされる光学活性なア
ルコールを生成する方法としては、培養液をそのまま用
い、該培養液に式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナ
ンチオマー混合物を添加する方法、遠心分離などによ
り、菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄した
後、緩衝液、水などに再懸濁したものに、式（Ｉ）で表
わされるアルコールのエナンチオマー混合物を添加し反
応させる方法などがある。この反応の際、グルコース、
シュクロースなどの炭素源をエネルギー源として添加し
たほうがよい場合もある。また、菌体は生菌体のままで
もよいし、菌体破砕物、アセトン処理、凍結乾燥などの
処理を施したものでもよい。また、これらの菌体あるい
は菌体処理物を、例えばポリアクリルアミドゲル法、含
硫多糖ゲル法（カラギーナンゲル法など）、アルギン酸
ゲル法、寒天ゲル法など公知の方法で固定化して用いる
こともできる。さらに、菌体処理物から、公知の方法を
組み合わせて精製取得した酵素も使用できる。
チオマー混合物から式 (II)で表わされる光学活性なア
ルコールを生成する方法としては、培養液をそのまま用
い、該培養液に式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナ
ンチオマー混合物を添加する方法、遠心分離などによ
り、菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄した
後、緩衝液、水などに再懸濁したものに、式（Ｉ）で表
わされるアルコールのエナンチオマー混合物を添加し反
応させる方法などがある。この反応の際、グルコース、
シュクロースなどの炭素源をエネルギー源として添加し
たほうがよい場合もある。また、菌体は生菌体のままで
もよいし、菌体破砕物、アセトン処理、凍結乾燥などの
処理を施したものでもよい。また、これらの菌体あるい
は菌体処理物を、例えばポリアクリルアミドゲル法、含
硫多糖ゲル法（カラギーナンゲル法など）、アルギン酸
ゲル法、寒天ゲル法など公知の方法で固定化して用いる
こともできる。さらに、菌体処理物から、公知の方法を
組み合わせて精製取得した酵素も使用できる。
【００１７】式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナン
チオマー混合物はそのまま、あるいは水に溶解し、また
は反応に影響を与えないような有機溶媒に溶解したり、
界面活性剤などに分散させたり、反応始めから一括にあ
るいは分割して添加してもよい。
チオマー混合物はそのまま、あるいは水に溶解し、また
は反応に影響を与えないような有機溶媒に溶解したり、
界面活性剤などに分散させたり、反応始めから一括にあ
るいは分割して添加してもよい。
【００１８】反応はpH３〜10、好ましくはpH５〜９の範
囲で、温度は10〜60℃、好ましくは20〜40℃の範囲で、
１〜120 時間程度、攪拌下あるいは静置下で行う。基質
である式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナンチオマ
ー混合物の濃度は特に制限されないが、１〜40重量％程
度が好ましい。また必要に応じてNaOH，CaCO3, HCl,H2S
O4 などで反応液のpHを保持すると、良好な結果が得ら
れる場合もある。
囲で、温度は10〜60℃、好ましくは20〜40℃の範囲で、
１〜120 時間程度、攪拌下あるいは静置下で行う。基質
である式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナンチオマ
ー混合物の濃度は特に制限されないが、１〜40重量％程
度が好ましい。また必要に応じてNaOH，CaCO3, HCl,H2S
O4 などで反応液のpHを保持すると、良好な結果が得ら
れる場合もある。
【００１９】反応によって残存生成した式(II)で表わさ
れる光学活性アルコールの採取は、反応液から直接ある
いは菌体分離後、有機溶媒による抽出、蒸留、カラムク
ロマトグラフィーなどの通常の精製方法を用いれば容易
に行うことができる。また、反応の副生物にアルデヒ
ド、ケトールが生じる場合には、亜硫酸水素ナトリウム
で処理し、除去することも効果的な方法である。
れる光学活性アルコールの採取は、反応液から直接ある
いは菌体分離後、有機溶媒による抽出、蒸留、カラムク
ロマトグラフィーなどの通常の精製方法を用いれば容易
に行うことができる。また、反応の副生物にアルデヒ
ド、ケトールが生じる場合には、亜硫酸水素ナトリウム
で処理し、除去することも効果的な方法である。
【００２０】
【実施例】以下、実施例にて本発明を具体的に説明する
が、本発明はこれら実施例にのみ限定されるものではな
い。尚、例中の％は特記しない限り重量基準である。
が、本発明はこれら実施例にのみ限定されるものではな
い。尚、例中の％は特記しない限り重量基準である。
【００２１】実施例１〜２ 下記に示す菌体調製用培地50mlを500ml 容坂口フラスコ
に分注し、 121℃、15分間滅菌した。冷却後、シュード
モナス スピーシズ (Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13株の
前培養液（下記に示す前培養培地を用い、５ml／φ21mm
試験管、30℃、24時間培養）を0.5 ml植菌した。30℃、
48時間振とう培養した後、遠心集菌し、生菌体を得た。
これを脱イオン水に懸濁し、25mlとなるようにした。表
１に示す各種ラセミ体アルコールの500mM 溶液をそれぞ
れ調製し（NaOHにて、中和し、pH７とした）、菌体懸濁
液2.5ml 、基質溶液2.5ml 、CaCO3 0.05ｇを混合し、φ
21mm試験管中30℃、12〜24時間振とう反応させた。反応
終了後遠心分離にて菌体を除去し上清を得た。得られた
上清中のアルコールの光学純度、それぞれのエナンチオ
マーの収率を表２及び表３に示す条件でそれぞれ測定し
た。尚、光学純度の測定はすべてダイセル化学工業
（株）製光学分割カラムを用いる高速液体クロマトグラ
フィーによった（φ4.6 ×250mm)。測定結果を表１に示
す。
に分注し、 121℃、15分間滅菌した。冷却後、シュード
モナス スピーシズ (Pseudomonas sp.)ＴＲＰ−13株の
前培養液（下記に示す前培養培地を用い、５ml／φ21mm
試験管、30℃、24時間培養）を0.5 ml植菌した。30℃、
48時間振とう培養した後、遠心集菌し、生菌体を得た。
これを脱イオン水に懸濁し、25mlとなるようにした。表
１に示す各種ラセミ体アルコールの500mM 溶液をそれぞ
れ調製し（NaOHにて、中和し、pH７とした）、菌体懸濁
液2.5ml 、基質溶液2.5ml 、CaCO3 0.05ｇを混合し、φ
21mm試験管中30℃、12〜24時間振とう反応させた。反応
終了後遠心分離にて菌体を除去し上清を得た。得られた
上清中のアルコールの光学純度、それぞれのエナンチオ
マーの収率を表２及び表３に示す条件でそれぞれ測定し
た。尚、光学純度の測定はすべてダイセル化学工業
（株）製光学分割カラムを用いる高速液体クロマトグラ
フィーによった（φ4.6 ×250mm)。測定結果を表１に示
す。
【００２２】＜前培養培地＞ グルコース 0.5％ 肉エキス 0.3％ 酵母エキス 0.3％ ポリペプトン 0.5％ KH2PO4 0.07％ (NH4)2HPO4 0.13％ MgSO4・7H2O 0.05％ pH7.2 ＜菌体調製用培地＞ ラセミ 1,2−プロパンジオール 1.0％ 肉エキス 0.1％ 酵母エキス 0.1％ ポリペプトン 0.2％ KH2PO4 0.07％ (NH4)2HPO4 0.13％ MgSO4・7H2O 0.05％ pH7.2
【００２３】
【表１】
【００２４】
【表２】
【００２５】注） *1 TSK-Gel ODS80-TM ：東ソー（株）製、φ 4.6×25
0mm *2 KPB ：カリウムリン酸緩衝液 SDS ：ドデシル硫酸ナトリウム
0mm *2 KPB ：カリウムリン酸緩衝液 SDS ：ドデシル硫酸ナトリウム
【００２６】
【表３】
【００２７】注） *1 Phcb：フェニルイソシアネートを用いるフェニルカ
ルバモイル化 実施例３〜４ 実施例１〜２のＴＲＰ−13株と同様にして、シュードモ
ナス プチダ（Pseudomonas putida) ＴＲＢ−２株につ
いても全く同様の方法にて、ラセミ体アルコールと反応
させた。残存する光学活性アルコールの測定も同様にし
て行った。結果を表４に示す。
ルバモイル化 実施例３〜４ 実施例１〜２のＴＲＰ−13株と同様にして、シュードモ
ナス プチダ（Pseudomonas putida) ＴＲＢ−２株につ
いても全く同様の方法にて、ラセミ体アルコールと反応
させた。残存する光学活性アルコールの測定も同様にし
て行った。結果を表４に示す。
【００２８】
【表４】
【００２９】実施例５〜６ 実施例１〜２のＴＲＰ−13株と同様にして、シュードモ
ナス プチダ（Pseudomonas putida) ＴＲＰ−４株につ
いても全く同様の方法にて、ラセミ体アルコールと反応
させた。残存する光学活性アルコールの測定も同様にし
て行った。結果を表５に示す。
ナス プチダ（Pseudomonas putida) ＴＲＰ−４株につ
いても全く同様の方法にて、ラセミ体アルコールと反応
させた。残存する光学活性アルコールの測定も同様にし
て行った。結果を表５に示す。
【００３０】
【表５】
【００３１】
【発明の効果】本発明の微生物を用いた光学活性アルコ
ールの製法は、簡便に光学純度の高い光学活性アルコー
ルを製造することを可能にさせるものであり、工業的に
極めて有利である。
ールの製法は、簡便に光学純度の高い光学活性アルコー
ルを製造することを可能にさせるものであり、工業的に
極めて有利である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:40） Ｃ１２Ｒ 1:40）
Claims (1)
- 【請求項１】 シュードモナス属に属し、式（Ｉ）で表
わされる構造のアルコールのエナンチオマー混合物に作
用し、式(II)で表わされる立体配置をもつアルコールを
残存させうる能力を有する微生物、あるいはその処理物
を、式（Ｉ）で表わされるアルコールのエナンチオマー
混合物に作用させ、残存する式(II)で表わされる立体配
置をもつアルコールを採取することを特徴とする光学活
性アルコールの製法。 【化１】 （式中、 nは０〜３の整数を示す。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001061391A JP3283254B2 (ja) | 1992-11-27 | 2001-03-06 | 光学活性アルコールの製法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-318400 | 1992-11-27 | ||
| JP31840092 | 1992-11-27 | ||
| JP2001061391A JP3283254B2 (ja) | 1992-11-27 | 2001-03-06 | 光学活性アルコールの製法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP01220593A Division JP3184651B2 (ja) | 1992-11-27 | 1993-01-28 | 光学活性アルコールの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001245692A JP2001245692A (ja) | 2001-09-11 |
| JP3283254B2 true JP3283254B2 (ja) | 2002-05-20 |
Family
ID=26569356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001061391A Expired - Fee Related JP3283254B2 (ja) | 1992-11-27 | 2001-03-06 | 光学活性アルコールの製法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3283254B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109781891A (zh) * | 2019-02-16 | 2019-05-21 | 安徽诺全药业有限公司 | 一种手性2-氨基正丁醇的液相检测方法 |
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2001
- 2001-03-06 JP JP2001061391A patent/JP3283254B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2001245692A (ja) | 2001-09-11 |
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