JPH06306000A - 新規生理活性物質ｍｋ７６０７およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 下記（Ｉ）式で表される生理活性物質ＭＫ７
６０７および、クルブラリア属に属するＭＫ７６０７生
産菌を培養し、培養物からＭＫ７６０７を採取すること
を特徴とするその製造方法。 【効果】 ＭＫ７６０７は、種々の雑草に有効な除草活
性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、除草活性を有する新規
生理活性物質ＭＫ７６０７およびその製造方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】微生
物の代謝産物は、一種の天然物であり、自然界における
物質循環の中で安全に代謝、分解されるので、作物残
留、公害問題等の環境汚染を引き起こす恐れが少ないと
考えられている。このような背景から、従来より微生物
が生産する種々の生理活性物質が、医薬品、化粧料、動
物薬、農薬等の分野で実用化されてきた。この中で農薬
の分野においては、これまでもっぱら植物病害防除剤、
および植物害虫防除剤に関する開発が盛んに進められて
きたが、ビアラホス（商品名：ハービエース）の登場に
より、除草剤の研究がにわかに注目を集めだした。その
後、ローズビオノール（特開昭４９−５４５８７号公
報）、ストレプトール（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，５１（８），２２７７−２２７９（１９８７））
等の除草活性を有する微生物代謝産物が発表されてきた
が、さらに新しい化合物の出現が望まれていた。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、除草活性
を有する新規な化合物を見いだすべく、微生物の代謝産
物につき探索を進めてきた結果、クルブラリア属（Ｃｕ
ｒｖｕｌａｒｉａ）に属する微生物の培養物中に、強い
除草活性を有する物質が生産されていることを初めて見
いだし、有効物質であるＭＫ７６０７を単離し、その理
化学的性状および生物学的性状を確定することにより本
発明を完成するに至った。

【０００４】即ち本発明の要旨は、下記（Ｉ）式で表さ
れるＭＫ７６０７、その製造方法およびその用途に存す
る。

【０００５】

【化２】

【０００６】以下、本発明につき詳細に説明する。本発
明の新規生理活性物質ＭＫ７６０７は、前記（Ｉ）式に
て表される。ＭＫ７６０７は、例えばクルブラリア属
（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）に属するＭＫ７６０７生産菌
を培養し、その培養物からＭＫ７６０７を単離、精製す
ることによって製造することができる。かかる微生物と
しては、クルブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）に属
し、ＭＫ７６０７を生産する能力を有するものであれば
特に制限はされない。具体的には、本発明者らが落葉落
枝より分離したクルブラリアエラグロステデス（Ｃｕｒ
ｖｕｌａｒｉａ ｅｒａｇｒｏｓｔｉｄｉｓ）Ｄ ２４
５２（以下、「本菌株」または「Ｄ ２４５２号菌」と
略記することがある）等が挙げられる。なお、本菌株
は、通商産業省生命工学工業技術研究所に生工研菌寄第
１３５５７号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５５７）として寄託
されている。本菌株の微生物学的性状は、以下の通りで
ある。

【０００７】Ｉ．形態学的性状 コロニーの生育は、ポテト・デキストロース寒天培地
上、２７℃、７日間培養で旺盛、ビロード状〜綿毛状、
灰色かかった褐色、裏面は灰黒色を呈す。基底菌糸は分
枝する、隔壁を有す、淡褐色、巾５．７〜１０．４μ
ｍ、気生菌糸は分枝する、隔壁を有す、無色。分生子柄
は基底菌糸あるいは気生菌糸より単生する、通常無分
枝、まっすぐかまたはジグザグ状に屈曲する。分生子形
成細胞は頂生、円筒形で先端部はやや膨れる、通常３〜
４個の分生子を単生する。分生子形成後頂部から新しい
分生子柄が伸びて分生子形成細胞が頂生する。分生子柄
は淡褐色〜褐色、上方部は淡色、平滑、隔壁を有す。長
さ１７２μｍに至る。巾３．８〜７．５μｍ、分離痕を
残す。分生子はポロ型分生子、楕円形、まがたま状に湾
曲することはない、３隔壁を有す、両端の細胞は中間部
細胞より小形で淡い褐色を呈する。中間部細胞は褐色〜
濃褐色、平滑、１７．８〜２４．１×８．８〜１３．１
μｍ。分生子基部に突出したへそ（ｈｉｌｕｍ）を欠
く。

【０００８】II．生理学的性状 生育温度（ＰＤＡ上、１週間培養）：１０〜４０℃ 至適温度：２７〜３０℃ 生育ｐＨ（ＬＣＡ液体培地上、２７℃、１週間培養）：
２〜９ 至適ｐＨ：４〜６

【０００９】III.分類学的考察 本菌株（Ｄ ２４５２号菌）は、１）分生子柄は無分
枝、まっすぐかまたはジグザグ状に屈曲する、２）分生
子形成細胞は頂生、円筒形で先端部はやや膨れ、通常３
〜４個の分生子をつける、分生子形成後、頂部から新し
い分生子柄が伸びてさらに分生子形成細胞が頂生する、
３）分生子形成様式はポロ型、４）分生子は中間部細胞
が両端細胞より膨潤する特徴を有する。以上の性状よ
り、本菌株（Ｄ ２４５２号菌）は不完全菌亜門（Ｄｅ
ｕｔｅｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）−不完全糸状菌綱（Ｈｙ
ｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ）のＣｕｒｖｕｌａｒｉａ属に帰
属する。

【００１０】Ｍ．Ｂ．Ｅｌｌｉｓ（１９７１，１９７
６）の“ＤｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓＨｙｐｈｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ”及び“Ｍｏｒｅ Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ
Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ”によれば、本属には３５種
が認知されている。これらの菌種は分生子の形状、大き
さ、細胞数、菌着生の宿主の違い等によって識別されて
いる。本菌株（Ｄ ２４５２号菌）は、５）分生子基部
にへそ（ｈｉｌｕｍ）を欠く、６）分生子は平滑、３隔
壁、７）分生子はまがたま状に湾曲せずまっすぐであ
る、８）分生子は楕円形で、上下対称の特徴を有する。
これらの性状について、Ｅｌｌｉｓ（１９７１，１９７
６）の上記文献に従って種の検索を行ったところ、本菌
株（Ｄ ２４５２号菌）はＣｕｒｖｕｌａｒｉａ ｅｒ
ａｇｒｏｓｔｉｄｉｓの形態学的特徴によく合致した。
従って、本菌株（Ｄ ２４５２号菌）はＣｕｒｖｕｌａ
ｒｉａ ｅｒａｇｒｏｓｔｉｄｉｓと同定した。

【００１１】本菌株は、一般的なカビ類に見られるよう
にその性状が変化し易い。例えば、本菌株の、またはこ
の株に由来する突然変異株（自然発生または誘発性）、
形質接合体または遺伝子組換え体であっても、ＭＫ７６
０７物質を生産するものは全て本発明に使用できる。本
発明においては、前記の菌を通常の微生物が利用し得る
栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては、グ
ルコース、水飴、デキストリン、シュクロース、澱粉、
糖蜜、動物油、植物油等を使用できる。また窒素源とし
ては、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿
実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、尿素等を使用できる。その他必
要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸またはその他
のイオンを生成することのできる無機塩類を添加するこ
とも可能である。さらに菌の生育を助け、ＭＫ７６０７
物質の生産を促進するような有機物および／または無機
物を適宜添加することができる。

【００１２】培養法としては、好気的条件下での培養法
が好ましい。培養に適当な温度は１０〜３０℃である
が、本発明においては２０〜３０℃で培養することが好
ましい。ＭＫ７６０７物質の生産は培地や培養条件によ
り異なるが、通常７〜３０日の間で培養物中にその蓄積
量が最高に達する。そこで培養物中のＭＫ７６０７物質
の蓄積量が最高に達した時に反応（培養）を停止し、培
養物から目的とするＭＫ７６０７物質を単離、精製す
る。

【００１３】本発明のＭＫ７６０７物質を培養物から単
離、精製するには、その性状を利用した通常の分離手
段、例えば溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着または
分配カラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等
を単独でまたは適宜組み合わせて使用する。例えば、Ｍ
Ｋ７６０７物質は、培養菌体中からはアセトン−水、メ
タノール−水で抽出される。また、培養液中に蓄積され
たＭＫ７６０７物質は、水と混ざらない有機溶剤、例え
ば酢酸エチル、ブタノール等で脂溶性成分を抽出し除去
することにより、ＭＫ７６０７物質は水層にほとんど含
まれる。ＭＫ７６０７物質を更に精製するには、セファ
デックス ＬＨ−２０およびＧ−１０（ファルマシア社
製）、トヨパール ＨＷ−４０（株式会社東ソー社
製）、活性炭（和光純薬工業社製）等を用いるカラムク
ロマトグラフィーを適宜組み合わせる。

【００１４】以上のような方法により、あるいはこれら
を適宜組み合わせることにより、高純度のＭＫ７６０７
物質が得られる。ＭＫ７６０７物質を有効成分として含
有する除草剤を得るには、必要に応じて他の担体、界面
活性剤あるいは補助剤と混合して、通常除草剤として用
いられる製剤形態、例えば粉剤、粒剤、微粒剤、水和
剤、乳剤、液剤または水溶剤などに調製して使用するの
が望ましい。固体担体としては、例えばタルク、ベント
ナイト、クレー、カオリン、珪藻土、バーミキュライ
ト、炭酸カルシウムなどが挙げられ、液体担体として
は、例えば水、アルコール、酢酸エチル、アセトン、ジ
メチルスルホキシド、シクロヘキサノン、キシレンなど
が挙げられる。また、乳化および／またはぬれ性向上の
ために、例えばアルキル硫酸エステル類、アルキルスル
ホン酸塩類、ポリオキシエチレングリコールエーテル
類、多価アルコールエステル類などの界面活性剤を、さ
らに水和剤の分散性向上を計るための助剤を使用するこ
とも可能である。

【００１５】本発明の除草剤を組成物として用いる場合
のＭＫ７６０７物質の含有量は、例えば水和剤として用
いる場合は１０〜８０重量部、乳剤として用いる場合は
１０〜５０重量部、粉剤として用いる場合は２〜１０重
量部、粒剤として用いる場合は２〜２０重量部が適当で
ある。本発明の除草剤は、水田、畑、果樹園、温室、林
地、非農耕地などにおいて、除草を目的として、それぞ
れの条件に応じて使用される。また、他の農薬類、すな
わち、除草剤、殺虫剤、殺菌剤、植物成長調節剤および
／または肥料などと混合して使用することができる。本
発明の除草剤の使用場所、使用時期、適用量、適用方法
は、適用すべき植物の種類、使用目的により必ずしも一
定ではないが、例えば適用方法として、雑草の茎葉に散
布処理することにより強力な殺草作用を発現する。有効
な雑草の範囲は広く、一年生および多年生の単子葉およ
び双子葉の雑草に対して高い殺草効果を発現する。

【００１６】

【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、ＭＫ７６０
７物質の性状が本発明によって明らかにされたので、そ
れらの性状に基づきＭＫ７６０７物質の製造方法を種々
考案することができる。従って本発明は実施例に限定さ
れるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明に
よって明らかにされたＭＫ７６０７物質の性状に基づい
て、公知の手段を施してＭＫ７６０７物質を生産、濃
縮、抽出、精製する方法をすべて包括する。

【００１７】（実施例） （１）培養 水飴２．０％、大豆粉１．０％、大豆油０．１５％、サ
ングレイン０．２５％ＦｅＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ０．００
０５％，ＮｉＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ ０．００００５％及び
ＣａＣＯ₃ ０．１％を含有する培地（ｐＨ６．０）を
４０ｍｌずつ２００ｍｌ三角フラスコ２０本に分注し、
１２１℃において２０分間高圧滅菌する。これにＤ ２
４５２号菌を１白金耳ずつ植菌し、２６℃において２日
間、２１０回転にて振とう培養する。

【００１８】別に、５００ｍｌ三角フラスコに米６０
ｇ、精製水２０ｍｌを含有する主醗酵培地（ｐＨ６．
０）を調製し、１２１℃において２０分間高圧滅菌す
る。この主醗酵培地に前記種培養液を８ｍｌずつ接種
し、２６℃において１４日間静置培養する。

【００１９】（２）培養物の精製 上記（１）で得られた培養菌体に５０％アセトン水（１
Ｌ）を加え、１時間攪拌後菌体を濾別して菌体抽出液を
得た。菌体抽出液は、減圧下でアセトンを留去して０．
５Ｌの濃縮液とした。この濃縮液をブタノール（０．５
Ｌ）で抽出し脂溶性成分を除去した。抽出後の水層に活
性炭３０ｇを加え室温で３０分間撹拌した。活性炭を濾
別後、水層を減圧下留去し無色残さを得た。この残さを
活性炭カラム（内径４ｃｍ×高さ５０ｃｍ）の上部に載
せ、水を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行った。
ＭＫ７６０７物質を含む画分を濃縮乾固すると無色粉末
を得た。この粉末をメタノールで洗浄することにより、
ＭＫ７６０７無色粉末結晶（６００ｍｇ）を得た。

【００２０】得られるＭＫ７６０７物質の理化学的性状
は次のとおりである。 （１） 色および形状：無色粉末状結晶 （２） 分子式：Ｃ₇ Ｈ₁₂Ｏ₅ （３） マススペクトル （ＥＩ−ＭＳ）：Ｍ／Ｚ １
７６（Ｍ）⁺ （４） 比旋光度：［α］_D ＝＋２１０°（ｃ １．
０，Ｈ₂ Ｏ） （５） 赤外部吸収スペクトル ν^KBr _max ｃｍ^-1：３３００，１６４０，１１００ （６） ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重水中、４００ＭＨ
ｚ б_H ：3.86(1H, dd, J = 3.6, 10.2), 3.89(1H, d
d, J = 3.6, 10.2), 4.16(2H, s), 4.25(1H, d, J = 3.
6), 4.32(1H, dd, J = 4.2, 4.2), 5.85(1H, d, J = 4.
9). （７） ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重水中、１００ＭＨ
ｚ б_c：63.0, 67.0, 67.6, 69.3, 69.6, 125.1, 142.
2. （８） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノールに不溶で、水に可溶である。 （９）塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 この発明者らが発見した生理活性物質の絶対構造は、当
該物質またはそのペンタアセテートのマススペクトル、
ＮＭＲスペクトル（図１、図２および図３）、および当
該物質のペンタパラブロモベンゾアートのＸ線結晶構結
晶構造解析により確認した。

【００２１】（製剤例）

【表１】 （１）液剤 ＭＫ７６０７物質 ３０部 ポリオキシエチレンラウリルエーテル ２０部 リン酸一ナトリウム １部 リン酸二ナトリウム ４部 水 ４５部 をよく混合して液剤とする。

【００２２】

【表２】 （２）水和剤 ＭＫ７６０７物質 ５０部 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム ５部 高級アルコール硫酸ナトリウム １０部 ポリビニルアルコール ２部 珪藻土 ３３部 をよく混合し、粉砕して水和剤とする。

【００２３】（試験例）ＭＫ７６０７物質の畑地茎葉処
理による殺草効果をポット試験により調べた。直径９ｃ
ｍのプラスチックポットに畑土壌を充填し、オオイヌタ
デ、アオビユ、アメリカセンダングサ、エノコログサを
播種した。所定の大きさに生育した時点で、所定濃度の
ＭＫ７６０７物質水溶液に展着剤ネオエステリンを２０
００ｐｐｍになるように添加し、２ｍｌ／ポットを茎葉
散布処理した。処理後１４日における殺草効果を表１に
示した。

【００２４】

【表３】 表 １ ─────────────────────────────────── ＭＫ７６０７物質濃度（ｐｐｍ） ３００ １０００ ３０００ ─────────────────────────────────── オオイヌタデ １ ５ ５ アオビユ １ ４ ５ アメリカセンダングサ １ ２．５ ４．５ エノコログサ １ ３ ４ ─────────────────────────────────── 殺草効果：０；効果なし １；２０％の効果 ２；４０％の効果 ３；６０％の効果 ４；８０％の効果 ５；１００％の効果

【００２５】

【発明の効果】上記試験例から明らかなように本発明の
ＭＫ７６０７物質は、除草活性を有しており、除草剤と
しての有用性が期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＭＫ７６０７物質の重水溶液中での４００ＭＨ
ｚ ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。

【図２】ＭＫ７６０７物質の重水溶液中での１００ＭＨ
ｚ ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを表す。

【図３】ＭＫ７６０７物質ペンタアセテートの重クロロ
ホルム溶液中での４００ＭＨｚ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を表す。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成５年６月２５日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２０】得られるＭＫ７６０７物質の理化学的性状
は次のとおりである。 （１） 色および形状：無色粉末状結晶 （２） 分子式：Ｃ₇ Ｈ₁₂Ｏ₅ （３） マススペクトル （ＦＤ−ＭＳ）：Ｍ／Ｚ １
７７（ＭＨ⁺） （４） 比旋光度：［α］_D ＝＋２１０°（ｃ １．
０，Ｈ₂ Ｏ） （５） 赤外部吸収スペクトル ν^KBr _max ｃｍ^-1：３３００，１６４０，１１００ （６） ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重水中、４００ＭＨ
ｚ б_H ：3.86(1H, dd, J = 3.6, 10.2), 3.89(1H, d
d, J = 3.6, 10.2), 4.16(2H, s), 4.25(1H, d, J = 3.
6), 4.32(1H, dd, J = 4.2, 4.2), 5.85(1H, d, J = 4.
9). （７） ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重水中、１００ＭＨ
ｚ б_c：63.0, 67.0, 67.6, 69.3, 69.6, 125.1, 142.
2. （８） 溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノールに不溶で、水に可溶である。 （９）塩基性、酸性、中性の区別：中性物質 この発明者らが発見した生理活性物質の絶対構造は、当
該物質またはそのペンタアセテートのマススペクトル、
ＮＭＲスペクトル（図１、図２および図３）、および当
該物質のペンタパラブロモベンゾアートのＸ線結晶構造
解析により確認した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 三川 隆 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地 三 菱化成株式会社総合研究所内 (72)発明者 上野 滋 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 播磨谷 健蔵 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 岩田 道顕 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明 治製菓株式会社薬品総合研究所内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記（Ｉ）式で表されるＭＫ７６０７。 【化１】
2. 【請求項２】 クルブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉ
   ａ）に属する、ＭＫ７６０７生産菌を培養し、その培養
   物から請求項１記載のＭＫ７６０７を採取することを特
   徴とするＭＫ７６０７の製造方法。
3. 【請求項３】 請求項１記載のＭＫ７６０７を有効成分
   とすることを特徴とする除草剤。