JPH0622789A - 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 - Google Patents
光学活性なｄ−アミノ酸の製造法Info
- Publication number
- JPH0622789A JPH0622789A JP20032492A JP20032492A JPH0622789A JP H0622789 A JPH0622789 A JP H0622789A JP 20032492 A JP20032492 A JP 20032492A JP 20032492 A JP20032492 A JP 20032492A JP H0622789 A JPH0622789 A JP H0622789A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- group
- genus
- substituted
- benzoyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
- C12P41/007—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving acyl derivatives of racemic amines
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】Ｎ−置換カルボニル-DL-アミノ酸を微生物によ
り光学分割的に加水分解して、D-アミノ酸及びＮ−置換
カルボニル-L- アミノ酸を取得する方法 【構成】式［Ｉ］（式中、Ｒは水素原子または所望によ
りハロゲン原子により置換されることもある炭素原子数
１ないし１０のアルキル基又はフェニル基を表し、Ｒ1
は所望によりハロゲン原子により置換されることもある
炭素原子数１ないし１０のアルカノイル基またはベンゾ
イル基を表す。）で表されるＮ−置換カルボニル-DL-ア
ミノ酸及び／又はその塩に、ロドコッカス(Rhodococcu
s) 属とピメロバクター（Pimelobacter）属の細菌から
選ばれた微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物を
作用させることにより、光学分割を行うことを特徴とす
るD-アミノ酸及びＮ−置換カルボニル-L- アミノ酸の製
造方法。 【化１】
り光学分割的に加水分解して、D-アミノ酸及びＮ−置換
カルボニル-L- アミノ酸を取得する方法 【構成】式［Ｉ］（式中、Ｒは水素原子または所望によ
りハロゲン原子により置換されることもある炭素原子数
１ないし１０のアルキル基又はフェニル基を表し、Ｒ1
は所望によりハロゲン原子により置換されることもある
炭素原子数１ないし１０のアルカノイル基またはベンゾ
イル基を表す。）で表されるＮ−置換カルボニル-DL-ア
ミノ酸及び／又はその塩に、ロドコッカス(Rhodococcu
s) 属とピメロバクター（Pimelobacter）属の細菌から
選ばれた微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物を
作用させることにより、光学分割を行うことを特徴とす
るD-アミノ酸及びＮ−置換カルボニル-L- アミノ酸の製
造方法。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は安価な化学的合成法で得
られるＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその
塩に微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物を作用
させて酵素的にD-アミノ酸とＮ−置換カルボニル−L-ア
ミノ酸とに光学分割する方法に関するものである。
られるＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその
塩に微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物を作用
させて酵素的にD-アミノ酸とＮ−置換カルボニル−L-ア
ミノ酸とに光学分割する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】農薬、
医薬等の生理活性物質には、D-体をもつものが多い。D-
フェニルアラニンは鎮痛剤、抗生物質の合成原料として
最近注目を集めている。D-フェニルアラニンの生産につ
いては、最近、宮原等が分離方法（特開昭６３−９１０
９７号、三井東圧株式会社）を発表しているが、Ｎ−ベ
ンゾイル-DL-フェニルアラニンのD-アシラーゼについて
の報告は少ない。
医薬等の生理活性物質には、D-体をもつものが多い。D-
フェニルアラニンは鎮痛剤、抗生物質の合成原料として
最近注目を集めている。D-フェニルアラニンの生産につ
いては、最近、宮原等が分離方法（特開昭６３−９１０
９７号、三井東圧株式会社）を発表しているが、Ｎ−ベ
ンゾイル-DL-フェニルアラニンのD-アシラーゼについて
の報告は少ない。
【０００３】Ｎ−アシル-DL-アミノ酸のうちD-体のみの
アシル基を選択的に脱アシル化し、D-アミノ酸を製造す
る方法は従来より知られている。Pseudomonas 属、Alca
ligenes 属、Streptomyces属の各菌株についてD-アミノ
アシラーゼ活性が報告されているが、これらは何れもＮ
−アセチルアミノ酸に作用するアミノアシラーゼである
(Tsai. Y.C., C.P.Tseng, et al; Appl. Environ. Micr
obiol.54 984(1988)、M. モリグチ, K. イケダ；ibi
d. 54 2767(1988) 、K. クボ, et. al; Agric.Biol. C
hem. 42 107(1987)、ibid. 44 1089(1980))。しかし、
何れも活性は弱く、L-アミノアシラーゼ活性も併せて保
持していることから、高活性のD-体のみを生成するD-ア
ミノアシラーゼ生産菌株は少ないと考えられる。
アシル基を選択的に脱アシル化し、D-アミノ酸を製造す
る方法は従来より知られている。Pseudomonas 属、Alca
ligenes 属、Streptomyces属の各菌株についてD-アミノ
アシラーゼ活性が報告されているが、これらは何れもＮ
−アセチルアミノ酸に作用するアミノアシラーゼである
(Tsai. Y.C., C.P.Tseng, et al; Appl. Environ. Micr
obiol.54 984(1988)、M. モリグチ, K. イケダ；ibi
d. 54 2767(1988) 、K. クボ, et. al; Agric.Biol. C
hem. 42 107(1987)、ibid. 44 1089(1980))。しかし、
何れも活性は弱く、L-アミノアシラーゼ活性も併せて保
持していることから、高活性のD-体のみを生成するD-ア
ミノアシラーゼ生産菌株は少ないと考えられる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明等は上記問題点を
解決すべく鋭意努力検討した結果、Ｎ−置換カルボニル
-DL-アミノ酸のうち、D-体だけを選択的に脱置換カルボ
ニル化（例えば脱アセチル化）してD-アミノ酸に変換す
ることの出来る微生物を見い出し、本発明を完成するに
至った。
解決すべく鋭意努力検討した結果、Ｎ−置換カルボニル
-DL-アミノ酸のうち、D-体だけを選択的に脱置換カルボ
ニル化（例えば脱アセチル化）してD-アミノ酸に変換す
ることの出来る微生物を見い出し、本発明を完成するに
至った。
【０００５】即ち、本発明はアミドカルボニル化反応等
により安価に製造できる一般式［Ｉ］
により安価に製造できる一般式［Ｉ］
【化２】 （式中、Ｒは水素原子、炭素原子数１ないし１０のアル
キル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１な
いし１０のアルキル基又はフェニル基を表し、Ｒ1 は炭
素原子数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル
基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１〜５の
アルカノイル基、又はハロゲン原子により置換されたベ
ンゾイル基を表す。）で表されるＮ−置換カルボニル-D
L-アミノ酸及び／又はその塩に、ロドコッカス(Rhodoco
ccus) 属とピメロバクター（Pimelobacter）属の細菌か
ら選ばれた微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物
を作用させることにより、光学分割を行うことを特徴と
するD-アミノ酸及びＮ−置換カルボニル-L- アミノ酸の
製造方法に関するものである。
キル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１な
いし１０のアルキル基又はフェニル基を表し、Ｒ1 は炭
素原子数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル
基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１〜５の
アルカノイル基、又はハロゲン原子により置換されたベ
ンゾイル基を表す。）で表されるＮ−置換カルボニル-D
L-アミノ酸及び／又はその塩に、ロドコッカス(Rhodoco
ccus) 属とピメロバクター（Pimelobacter）属の細菌か
ら選ばれた微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物
を作用させることにより、光学分割を行うことを特徴と
するD-アミノ酸及びＮ−置換カルボニル-L- アミノ酸の
製造方法に関するものである。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。一般式
［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はそ
の塩において、置換基Ｒである炭素原子数１ないし１０
のアルキル基の具体例としてはメチル基、エチル基、ｎ
−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブ
チル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプ
チル基、オクチル基、ノニル基、デシル基及びフェニル
基等が挙げられる。
［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はそ
の塩において、置換基Ｒである炭素原子数１ないし１０
のアルキル基の具体例としてはメチル基、エチル基、ｎ
−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブ
チル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプ
チル基、オクチル基、ノニル基、デシル基及びフェニル
基等が挙げられる。
【０００７】置換カルボニル基Ｒ1 である炭素原子数１
ないし５のアルカノイル基の具体例としてはホルミル
基、アセチル基、プロピオニル基、ｎ−ブチリル基、ｉ
−ブチリル基、ｎ−ペンタノイル基、ｉ−ペンタノイル
基等が挙げられる。
ないし５のアルカノイル基の具体例としてはホルミル
基、アセチル基、プロピオニル基、ｎ−ブチリル基、ｉ
−ブチリル基、ｎ−ペンタノイル基、ｉ−ペンタノイル
基等が挙げられる。
【０００８】置換カルボニル基Ｒ1 であるハロゲン原子
により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基に
おけるハロゲン原子としては塩素、臭素原子等が挙げら
れ、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５の
アルカノイル基の具体例としてはクロロアセチル基、ク
ロロプロピオニル基、クロロブチリル基等が挙げられ
る。
により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基に
おけるハロゲン原子としては塩素、臭素原子等が挙げら
れ、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５の
アルカノイル基の具体例としてはクロロアセチル基、ク
ロロプロピオニル基、クロロブチリル基等が挙げられ
る。
【０００９】置換カルボニル基Ｒ1 であるハロゲン原子
により置換されたベンゾイル基におけるハロゲンとして
は、塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により
置換されたベンゾイル基の具体例としては、クロロベン
ゾイル基、ブロモベンゾイル基等が挙げられる。しかし
ながら、置換カルボニル基Ｒ1 は本微生物酵素で離脱さ
れてD-アミノ酸を生成し得る置換カルボニル基であれば
どの様な基であってもよい。
により置換されたベンゾイル基におけるハロゲンとして
は、塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により
置換されたベンゾイル基の具体例としては、クロロベン
ゾイル基、ブロモベンゾイル基等が挙げられる。しかし
ながら、置換カルボニル基Ｒ1 は本微生物酵素で離脱さ
れてD-アミノ酸を生成し得る置換カルボニル基であれば
どの様な基であってもよい。
【００１０】一般式［Ｉ］のＮ−置換カルボニル基-DL-
アミノ酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
アミノ酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
【００１１】本発明に使用される微生物としてはロドコ
ッカス(Rhodococcus) 属、ピメロバクター（Pimelobact
er）属から選ばれる細菌から選ばれた微生物のうちＮ−
置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその塩のD-体だ
けを選択的に脱置換カルボニル化（例えば、脱アシル
化）してD-アミノ酸に変換することの出来る微生物であ
ればよい。
ッカス(Rhodococcus) 属、ピメロバクター（Pimelobact
er）属から選ばれる細菌から選ばれた微生物のうちＮ−
置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその塩のD-体だ
けを選択的に脱置換カルボニル化（例えば、脱アシル
化）してD-アミノ酸に変換することの出来る微生物であ
ればよい。
【００１２】この様な微生物は一般に入手又は購入が容
易である保存株から選択することも出来るし、又は自然
界から分離することもできる。
易である保存株から選択することも出来るし、又は自然
界から分離することもできる。
【００１３】尚、これらの菌株に変異を生じさせて一層
生産性の高い菌株を得ることも出来る。
生産性の高い菌株を得ることも出来る。
【００１４】又、これら菌株の細胞中に存在する酵素の
生産に関与する遺伝子を切り出し、これを適切なベクタ
ー、例えばプラスミドに挿入し、このベクターを用いて
適当な宿主、例えば大腸菌（Escherichia coli）や枯草
菌（Bacillus subtilis ）或いは放線菌のごとき異種宿
主又は同種宿主を形質転換することにより、本発明の酵
素生産株を人為的に創製することも出来る。
生産に関与する遺伝子を切り出し、これを適切なベクタ
ー、例えばプラスミドに挿入し、このベクターを用いて
適当な宿主、例えば大腸菌（Escherichia coli）や枯草
菌（Bacillus subtilis ）或いは放線菌のごとき異種宿
主又は同種宿主を形質転換することにより、本発明の酵
素生産株を人為的に創製することも出来る。
【００１５】本発明に使用する微生物として埼玉県白岡
町の土壌より分離したロドコッカス・ロドクロス(Rhodo
coccus rhodochrous) 、ピメロバクター・シンプレック
ス（Pimelobacter simplex）が挙げられる。
町の土壌より分離したロドコッカス・ロドクロス(Rhodo
coccus rhodochrous) 、ピメロバクター・シンプレック
ス（Pimelobacter simplex）が挙げられる。
【００１６】これらの微生物の菌学的性質を示すと以下
の通りである。 １．ロドコッカス・ロドクロス ２０３０−２(Rhodoco
ccus rhodochrous ２０３０−２) 株の菌学的性状
の通りである。 １．ロドコッカス・ロドクロス ２０３０−２(Rhodoco
ccus rhodochrous ２０３０−２) 株の菌学的性状
【表１】 試験項目 結果 ─────────────────────────────────── 形態 多形性桿菌 グラム染色性 ＋ 芽胞 − 運動性 − オキシラーゼ − カタラーゼ ＋ rod-coccus cycle ＋ 集落の周辺細胞の伸長 認める 集落の色調 オレンジ形 酸素に対する態度 好気性 細胞壁のジアミノ酸 meso−ジアミノピメリン酸 グリコリル試験 ＋（グリコリル型） 細胞壁の糖組成 アラビノース ＋ ガラクトース ＋ キノン系 ＭＫ−８（Ｈ2 ） チロシン分解 ＋ 尿素分解 ＋ 0.02％アジ化ナトリウム存在下での生育 − ０％ＮａＣｌ存在下での生育 ＋ ５％ＮａＣｌ存在下での生育 ＋ １０℃での生育 ＋ ４０℃での生育 − 資化性 グルコース ＋ マルトース − ｍ−ヒドロキシ安息香酸 ＋ 安息香酸ナトリウム ＋ 乳酸ナトリウム ＋ テストステロン ＋ L-チロシン ＋ ────────────────────────────────── ２０３０−２株の菌学的性質を、バージーズ・マニュア
ル・オブ・システマティク・バクテリオロジーの記載に
照合すると、培養性状、生理学的性質及び糖類から酸の
生成の特徴から２０３０−２株は、ロドコッカス・ロド
クロスの種に属するー菌株と認められる。本菌株は、工
業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号微工研
菌寄第１２４０１号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０１）とし
て寄託されている。
ル・オブ・システマティク・バクテリオロジーの記載に
照合すると、培養性状、生理学的性質及び糖類から酸の
生成の特徴から２０３０−２株は、ロドコッカス・ロド
クロスの種に属するー菌株と認められる。本菌株は、工
業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号微工研
菌寄第１２４０１号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４０１）とし
て寄託されている。
【００１７】２．ピメロバクター・シンプレックス １
５９８−１（Pimelobacter simplex１５９８−１）株の
菌学的性状
５９８−１（Pimelobacter simplex１５９８−１）株の
菌学的性状
【表２】 試験項目 ─────────────────────────────────── 形態 多形性桿菌 グラム染色性 ＋ 芽胞 − 運動性 ＋ オキシラーゼ − カタラーゼ ＋ 集落の色調 特徴的色素を産生せず rod-coccus cycle ＋ 集落の周辺細胞の伸長 認めず 気生菌系の存在 − 酸素に対する態度 好気性 グルコースからの酸の産生 − 細胞壁のジアミノ酸 LL−ジアミノピメリン酸 細胞壁中のグリシンの存在 ＋ グリコリル試験 −（アセチル型） 細胞壁の糖組成 アラビノース − ガラクトース ＋ キノン系 ＭＫ−８（Ｈ4 ） 菌体内ＤＮＡのＧＣ含量（モル％） ７０ ゼラチン液化 ＋ カゼイン分解 ＋ ＤＮＡ分解 ＋ 尿素分解 − 栄養要求性 − 資化性 グルコース ＋ D-マンニトール − L-ラムノース ＋ クエン酸塩 − コハク酸塩 − 馬尿酸塩 − ───────────────────────────────────
【００１８】１５９８−１株の菌学的性質を、バージー
ズ・マニュアル・オブ・システマティク・バクテリオロ
ジーの記載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び
糖類からの酸の生成の特徴等から１５９８−１株は、ピ
メロバクター・シンプレックスの種に属するー菌株と認
められる。本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に微生物受託番号微工研菌寄第１２４００号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２４００）として寄託されている。
ズ・マニュアル・オブ・システマティク・バクテリオロ
ジーの記載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び
糖類からの酸の生成の特徴等から１５９８−１株は、ピ
メロバクター・シンプレックスの種に属するー菌株と認
められる。本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に微生物受託番号微工研菌寄第１２４００号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２４００）として寄託されている。
【００１９】尚、本発明に使用できる微生物株は上記の
例に限定されるものではない。本発明に用いる微生物の
培養は通常、振盪培養或いは通気攪拌深部培養等の好気
的条件下で行う。
例に限定されるものではない。本発明に用いる微生物の
培養は通常、振盪培養或いは通気攪拌深部培養等の好気
的条件下で行う。
【００２０】培養温度は２０〜３７℃で、培養ｐＨは６
〜９で１〜７日間培養する。
〜９で１〜７日間培養する。
【００２１】培地には、使用菌が資化し得る炭素源、窒
素源、無機塩及び微量有機栄養源が含まれる。即ち、炭
素源としてはグルコース、マルトース、デンプン加水分
解液、糖蜜等の炭水化物等も使用できる。
素源、無機塩及び微量有機栄養源が含まれる。即ち、炭
素源としてはグルコース、マルトース、デンプン加水分
解液、糖蜜等の炭水化物等も使用できる。
【００２２】窒素源としてはアンモニア、硫安アンモニ
ウム、塩化アンモニウム等の各種の無機及び有機のアン
モニウム塩類又は肉エキス、酵母エキス、ポリペプト
ン、コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解物等
の天然有機窒素源も使用可能である。
ウム、塩化アンモニウム等の各種の無機及び有機のアン
モニウム塩類又は肉エキス、酵母エキス、ポリペプト
ン、コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解物等
の天然有機窒素源も使用可能である。
【００２３】無機塩としては、マグネシウム、鉄、マン
ガン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、コバルト等
の塩が適宜用いられる。
ガン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、コバルト等
の塩が適宜用いられる。
【００２４】又、目的変換酵素活性を誘導或いは酵素活
性を高めるために、培養初期或いは培養途中に本酵素の
基質となる一般式［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミ
ノ酸及び／又はその塩、或いは本酵素の基質となる一般
式［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又は
その塩の構造類似体等を微生物の生育を妨げない程度添
加し培養することも出来る。
性を高めるために、培養初期或いは培養途中に本酵素の
基質となる一般式［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミ
ノ酸及び／又はその塩、或いは本酵素の基質となる一般
式［Ｉ］のＮ−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又は
その塩の構造類似体等を微生物の生育を妨げない程度添
加し培養することも出来る。
【００２５】上記の方法で得られた培養菌体及び／又は
その培養処理物を用いて本発明の光学分割を行う。
その培養処理物を用いて本発明の光学分割を行う。
【００２６】培養物を遠心分離等により培養菌体と培養
ろ液に分け、置換カルボニル基分解酵素（例えば、脱ア
シル基酵素）が菌体内に存在する場合は、この培養菌体
及び／又は菌体処理物を用いる。
ろ液に分け、置換カルボニル基分解酵素（例えば、脱ア
シル基酵素）が菌体内に存在する場合は、この培養菌体
及び／又は菌体処理物を用いる。
【００２７】ここでいう菌体処理物とは、培養菌体の超
音波処理物、ゴーリン、ホモジナイザー破砕や培養菌体
のアセトンやトルエン等の有機溶媒による処理物、更に
は培養菌体をトライトンＸ−１００等の界面活性剤処理
した物等を示す。
音波処理物、ゴーリン、ホモジナイザー破砕や培養菌体
のアセトンやトルエン等の有機溶媒による処理物、更に
は培養菌体をトライトンＸ−１００等の界面活性剤処理
した物等を示す。
【００２８】又、公知の方法を適宜組合わせて培養菌体
より酵素を精製し、各々異なる精製度の酵素標品を用い
ることも出来る。
より酵素を精製し、各々異なる精製度の酵素標品を用い
ることも出来る。
【００２９】置換カルボニル基分解酵素（例えば、脱ア
シル基酵素）が菌体外に存在する場合は、培養ろ液より
酵素を精製採取して用いる。
シル基酵素）が菌体外に存在する場合は、培養ろ液より
酵素を精製採取して用いる。
【００３０】又、培養菌体、菌体処理物又は異なる精製
度の酵素標品を、公知の方法により担体に固定化し、こ
れを反応に用いることも本発明の好ましい一形態であ
る。
度の酵素標品を、公知の方法により担体に固定化し、こ
れを反応に用いることも本発明の好ましい一形態であ
る。
【００３１】担体としては、固定化処理により酵素が失
活しない限り、どのような担体でもよく、アルギン酸、
カラギーナン、キトサン、ポリアクリルアミド、光架橋
性樹脂等が挙げられる。
活しない限り、どのような担体でもよく、アルギン酸、
カラギーナン、キトサン、ポリアクリルアミド、光架橋
性樹脂等が挙げられる。
【００３２】又、本発明の基質となる一般式［Ｉ］のＮ
−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその塩の濃度
には制限ないが、通常０．０５〜２０％で使用する。
−置換カルボニル-DL-アミノ酸及び／又はその塩の濃度
には制限ないが、通常０．０５〜２０％で使用する。
【００３３】反応温度は１０〜６０℃、好ましくは２０
〜５０℃である。
〜５０℃である。
【００３４】反応ｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の
範囲で０．５〜２４時間反応する。
範囲で０．５〜２４時間反応する。
【００３５】反応液からD-アミノ酸とＮ−置換カルボニ
ル−L-アミノ酸を分離するには、例えば濃縮、等電点沈
澱等による直接晶析法や、イオン交換樹脂処理、膜分離
等の公知の方法により行うことが出来る。
ル−L-アミノ酸を分離するには、例えば濃縮、等電点沈
澱等による直接晶析法や、イオン交換樹脂処理、膜分離
等の公知の方法により行うことが出来る。
【００３６】生成したD-アミノ酸の定性と定量は薄層ク
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーによる
方法を用いることが出来る。
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーによる
方法を用いることが出来る。
【００３７】又、光学的異性体は、旋光度分析、光学異
性体分離カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーに
より判別することが出来る。
性体分離カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーに
より判別することが出来る。
【００３８】尚、未反応のＮ−置換カルボニル−L-アミ
ノ酸は常法により化学的にラセミ化し、再び上述の反応
に供することが出来る。
ノ酸は常法により化学的にラセミ化し、再び上述の反応
に供することが出来る。
【００３９】
【発明の効果】本発明によれば、アミドカルボニル反応
を行い容易に化学合成出来るＮ−置換カルボニル-DL-ア
ミノ酸及び／又はその塩から光学活性体であるD-アミノ
酸及びＮ−置換カルボニル−L-アミノ酸を簡単な工程
で、且つ温和な条件で選択的に製造することができる。
を行い容易に化学合成出来るＮ−置換カルボニル-DL-ア
ミノ酸及び／又はその塩から光学活性体であるD-アミノ
酸及びＮ−置換カルボニル−L-アミノ酸を簡単な工程
で、且つ温和な条件で選択的に製造することができる。
【００４０】本発明に用いる置換カルボニル基分解酵素
は、バリン、メチオニン、フェニルアラニン等のＮ−置
換カルボニル体のD-体の置換カルボニル基のみを効率よ
く分解し、高い光学純度を持つD-アミノ酸を生成する。
は、バリン、メチオニン、フェニルアラニン等のＮ−置
換カルボニル体のD-体の置換カルボニル基のみを効率よ
く分解し、高い光学純度を持つD-アミノ酸を生成する。
【００４１】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明
するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。
するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。
【００４２】実施例 １ ロドコッカス・ロドクロス ２０３０−２株を下記の組
成の培地５ｍｌを入れたφ１８ｍｍの試験管に１白金耳
接種し、２５℃で４８〜７２時間振盪培養した。
成の培地５ｍｌを入れたφ１８ｍｍの試験管に１白金耳
接種し、２５℃で４８〜７２時間振盪培養した。
【００４３】
【表３】 培地組成 ────────────────────────────────── Ｎ−ベンゾイル-DL-フェニルアラニン ５ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ３ｇ ＮａＣｌ ０．１ｇ Ｈ3 ＢＯ3 ０．３ｍｇ ＺｎＣｌ2 ０．７５ｍｇ ＦｅＣｌ3 ・６Ｈ2 Ｏ ２．５ｍｇ （ＮＨ4 ）Ｍｏ7 Ｏ24・４Ｈ2 Ｏ ０．１ｍｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 ３ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．３ｇ ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１ｇ ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ ０．２ｍｇ ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ ０．２ｍｇ ＣｏＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１５ｍｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ｐＨ ７．０ ──────────────────────────────────
【００４４】培養液をＴＬＣにスポットし、展開して変
換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸エチル
で抽出後、酢酸エチル層をメルク社製薄層シリカゲルプ
レート６０Ｆ254 にスポットし、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝７：３の系で展開後、ＵＶランプを照射してその
生成を確認した。又、生成したフェニルアラニンのD-
体、L-体の分析はシリカゲル−ＨＰＴＬＣプレート（メ
ルク社製キラルプレートArt.14285)を用いて行った（展
開溶媒ＭｅＯＨ：Ｈ2 Ｏ：ＣＨ3 ＣＮ＝５０：５０：３
０）。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認した
所、D-フェニルアラニンの生成が認められた。
換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸エチル
で抽出後、酢酸エチル層をメルク社製薄層シリカゲルプ
レート６０Ｆ254 にスポットし、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝７：３の系で展開後、ＵＶランプを照射してその
生成を確認した。又、生成したフェニルアラニンのD-
体、L-体の分析はシリカゲル−ＨＰＴＬＣプレート（メ
ルク社製キラルプレートArt.14285)を用いて行った（展
開溶媒ＭｅＯＨ：Ｈ2 Ｏ：ＣＨ3 ＣＮ＝５０：５０：３
０）。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認した
所、D-フェニルアラニンの生成が認められた。
【００４５】実施例 ２ ロドコッカス・ロドクロス ２０３０−２株をＮＢ培地
が５ｍｌ入ったφ１８ｍｍの試験管に１白金耳接種し、
２５℃で一夜振盪培養した。これを前接種菌として下記
の組成の培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フ
ラスコに１％となるように植菌し、２５℃で７２時間、
１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。この際、培
養開始２４時間後に酵素生産を誘導する意味でＮ−ベン
ゾイル-DL-フェニルアラニンを終濃度０．０５％となる
ように添加し、更に４８時間培養を行った。
が５ｍｌ入ったφ１８ｍｍの試験管に１白金耳接種し、
２５℃で一夜振盪培養した。これを前接種菌として下記
の組成の培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フ
ラスコに１％となるように植菌し、２５℃で７２時間、
１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。この際、培
養開始２４時間後に酵素生産を誘導する意味でＮ−ベン
ゾイル-DL-フェニルアラニンを終濃度０．０５％となる
ように添加し、更に４８時間培養を行った。
【００４６】
【表４】
【００４７】培養液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、
２０分間）し、菌体を得た。得られた菌体を用いて下記
の反応条件に従って変換反応を行った。反応条件；菌体
１０％、基質（Ｎ−ベンゾイル-DL-フェニルアラニ
ン）０．１４％、１０ｍＭ リン酸塩緩衝液 ｐＨ７．
５、３７℃
２０分間）し、菌体を得た。得られた菌体を用いて下記
の反応条件に従って変換反応を行った。反応条件；菌体
１０％、基質（Ｎ−ベンゾイル-DL-フェニルアラニ
ン）０．１４％、１０ｍＭ リン酸塩緩衝液 ｐＨ７．
５、３７℃
【００４８】所定時間培養後の反応液の分析は下記の条
件に従って行った。
件に従って行った。
【表５】 ─────────────────────────────────── Ａ．基質及び生成物の定量分析条件 カラム；CHIRALCEL OD-R（ダイセル化学社製）０．４６×２５ｃｍ 溶離液；ＣＨ3 ＣＮ／０．５Ｍ ＮａＣｌＯ4 −ＨＣｌＯ4 ｐＨ３．０ （６０／４０） 流量 ；０．５ｍｌ／ｍｉｎ． カラム温度；２５℃ 検出器；ＵＶ検出器（２５４ｎｍ） Ｂ．光学活性物質の定量分析条件 カラム；MCI-GEL GRS10W（三菱化成社製）４．６×５０ｍｍ 溶離液；２ｍＭ ＣｕＳＯ4 ，５％ ＭｅＯＨ 流量 ；１ｍｌ／ｍｉｎ． カラム温度；３０℃ 検出器；ＵＶ検出器（２５４ｎｍ） ─────────────────────────────────── 測定結果を下記する。
【００４９】
【表６】 測定結果； ─────────────────────────────────── １．５時間後 変換率 ２２％ D-フェニルアラニン：L-フェニルアラニン＝８３：１７ １９時間後 変換率 ４４．５％ D-フェニルアラニン：L-フェニルアラニン＝８９：１１ ＊ＤＭＳＯを５％含有する場合も同様の結果を与えた。 ───────────────────────────────────
【００５０】実施例 ３ ピメロバクター・シンプレックス １５９８−１株を下
記の培地５ｍｌを入れたφ１８ｍｍの試験管に１白金耳
接種し、２５℃で４８〜７２時間振盪培養した。
記の培地５ｍｌを入れたφ１８ｍｍの試験管に１白金耳
接種し、２５℃で４８〜７２時間振盪培養した。
【００５１】
【表７】 培地組成 ───────────────────────────── Ｎ−ベンゾイル-DL-フェニルアラニン ５ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ２ｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 ７ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２ｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ｐＨ ７．０ ─────────────────────────────
【００５２】培養液をＴＬＣにスポットし、展開して変
換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸エチル
で抽出後、酢酸エチル層をメルク社製薄層シリカゲルプ
レート６０Ｆ254 にスポットし、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝７：３の系で展開後、ＵＶランプを照射してその
生成を確認した。又生成したフェニルアラニンのD-体、
L-体の分析はメルク社のキラルプレートを用いて行った
（展開溶媒 ＭｅＯＨ：Ｈ2 Ｏ：ＣＨ3 ＣＮ＝５０：５
０：３０）。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認
した所D-フェニルアラニンの生成が確認された。
換活性を調べた。安息香酸の検出は培養液を酢酸エチル
で抽出後、酢酸エチル層をメルク社製薄層シリカゲルプ
レート６０Ｆ254 にスポットし、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝７：３の系で展開後、ＵＶランプを照射してその
生成を確認した。又生成したフェニルアラニンのD-体、
L-体の分析はメルク社のキラルプレートを用いて行った
（展開溶媒 ＭｅＯＨ：Ｈ2 Ｏ：ＣＨ3 ＣＮ＝５０：５
０：３０）。ニンヒドリン試薬をかけてその位置を確認
した所D-フェニルアラニンの生成が確認された。
【００５３】培養温度を３０℃、培養時間を７２時間に
した以外は上記の手順に従って培養し、実施例２に記載
の分析条件に従って測定した結果を下記する。
した以外は上記の手順に従って培養し、実施例２に記載
の分析条件に従って測定した結果を下記する。
【表８】 測定結果； ─────────────────────────────── 変換率 ４％（フェニルアラニン生成濃度 ０．０２％） 含有割合 D-フェニルアラニン：L-フェニルアラニン＝１００：０ ────────────────────────────────
【００５４】実施例 ４ ピメロバクター・シンプレックス １５９８−１株をＮ
Ｂ培地が５ｍｌ入ったφ１８ｍｍの試験管に１白金耳接
種し、２５℃で一夜振盪培養した。これを前接種菌とし
て下記の組成の培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の
三角フラスコに１％となるように植菌し、２５℃で７２
時間、１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。
Ｂ培地が５ｍｌ入ったφ１８ｍｍの試験管に１白金耳接
種し、２５℃で一夜振盪培養した。これを前接種菌とし
て下記の組成の培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の
三角フラスコに１％となるように植菌し、２５℃で７２
時間、１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。
【００５５】
【表９】 培地組成 ───────────────────────────── Ｎ−ベンゾイル-DL-フェニルアラニン １ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 ２ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １０ｍｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 ７ｇ （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ３ｇ 酵母抽出物 ５０ｍｇ ＭｎＳＯ4 ・４〜５Ｈ2 Ｏ ８ｍｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ｐＨ ７．０ ─────────────────────────────
【００５６】培養液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、
２０分間）し、菌体を得た。得られた菌体を使用し、下
記の反応条件により所定の時間反応を行った。
２０分間）し、菌体を得た。得られた菌体を使用し、下
記の反応条件により所定の時間反応を行った。
【００５７】反応条件；菌体 １０％、基質（Ｎ−ベン
ゾイル-DL-フェニルアラニン） ０．１４％、１０ｍＭ
リン酸塩緩衝液 ｐＨ７．５、３７℃培養液の分析
は、実施例２に記載の分析条件に従って測定した。
ゾイル-DL-フェニルアラニン） ０．１４％、１０ｍＭ
リン酸塩緩衝液 ｐＨ７．５、３７℃培養液の分析
は、実施例２に記載の分析条件に従って測定した。
【００５８】
【表１０】 ─────────────────────────────────── １時間後 変換率 ２３．６％ D-フェニルアラニン：L-フェニルアラニン＝８５：１５ＤＭＳＯ ５％含有 １時間後 変換率 ２６．１％ D-フェニルアラニン：L-フェニルアラニン＝９０：１０ ───────────────────────────────────
【００５９】実施例 ５ ロドコッカス・ロドクロス ２０３０−２株の粗酵素液
を用いてアセチル体、ベンゾイル体の数種類のアミノ酸
について基質特異性を調べた。
を用いてアセチル体、ベンゾイル体の数種類のアミノ酸
について基質特異性を調べた。
【００６０】用いた基質を下記する：Ｎ−アセチル-DL-
アラニン、Ｎ−ベンゾイル-DL-アラニン、Ｎ−アセチル
-DL-バリン、Ｎ−ベンゾイル-DL-バリン、Ｎ−アセチル
-DL-ロイシン、Ｎ−ベンゾイル-DL-ロイシン、Ｎ−アセ
チル-DL-メチオニン、Ｎ−ベンゾイル-DL-メチオニン、
Ｎ−アセチル-DL-フェニルアラニン、Ｎ−ベンゾイル-D
L-フェニルアラニン。
アラニン、Ｎ−ベンゾイル-DL-アラニン、Ｎ−アセチル
-DL-バリン、Ｎ−ベンゾイル-DL-バリン、Ｎ−アセチル
-DL-ロイシン、Ｎ−ベンゾイル-DL-ロイシン、Ｎ−アセ
チル-DL-メチオニン、Ｎ−ベンゾイル-DL-メチオニン、
Ｎ−アセチル-DL-フェニルアラニン、Ｎ−ベンゾイル-D
L-フェニルアラニン。
【００６１】それぞれの基質について０．２％濃度の５
０％ＤＭＳＯ液を調製し、粗酵素液１００μｌに同量の
基質を添加し、３０℃、１６時間変換反応を行いキラル
プレートで活性を調べた結果、Ｎ−ベンゾイル-DL-バリ
ン、Ｎ−ベンゾイル-DL-メチオニン、Ｎ−ベンゾイル-D
L-フェニルアラニンに対してD-体特異性が顕著に認めら
れ、アセチル体よりもベンゾイル体に特異性が高い結果
が得られた。
０％ＤＭＳＯ液を調製し、粗酵素液１００μｌに同量の
基質を添加し、３０℃、１６時間変換反応を行いキラル
プレートで活性を調べた結果、Ｎ−ベンゾイル-DL-バリ
ン、Ｎ−ベンゾイル-DL-メチオニン、Ｎ−ベンゾイル-D
L-フェニルアラニンに対してD-体特異性が顕著に認めら
れ、アセチル体よりもベンゾイル体に特異性が高い結果
が得られた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 阿久津 佐智子 埼玉県南埼玉郡白岡町大字白岡1470 日産 化学工業株式会社生物科学研究所内 (72)発明者 桑原 正雄 埼玉県南埼玉郡白岡町大字白岡1470 日産 化学工業株式会社生物科学研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 一般式［Ｉ］ 【化１】 （式中、Ｒは水素原子、炭素原子数１ないし１０のアル
キル基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１な
いし１０のアルキル基又はフェニル基を表し、Ｒ1 は炭
素原子数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル
基、ハロゲン原子により置換された炭素原子数１〜５の
アルカノイル基、又はハロゲン原子により置換されたベ
ンゾイル基を表す。）で表されるＮ−置換カルボニル-D
L-アミノ酸及び／又はその塩に、ロドコッカス(Rhodoco
ccus) 属とピメロバクター（Pimelobacter）属の細菌か
ら選ばれた微生物の培養菌体及び／又はその培養処理物
を作用させることにより、光学分割を行うことを特徴と
するD-アミノ酸及びＮ−置換カルボニル-L- アミノ酸の
製造方法。 - 【請求項２】 ロドコッカス(Rhodococcus) 属から選ば
れる細菌がロドコッカス ロドクロス ２０３０−２株
である請求項１記載の製造方法。 - 【請求項３】 ピメロバクター（Pimelobacter）属から
選ばれる細菌がピメロバクター・シンプレックス１５９
８−１株である請求項１記載の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20032492A JPH0622789A (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 |
| PCT/JP1993/000910 WO1994001577A1 (en) | 1992-07-03 | 1993-07-02 | Process for producing optically active d-amino acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20032492A JPH0622789A (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0622789A true JPH0622789A (ja) | 1994-02-01 |
Family
ID=16422407
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20032492A Pending JPH0622789A (ja) | 1992-07-03 | 1992-07-03 | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0622789A (ja) |
| WO (1) | WO1994001577A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8598685B2 (en) | 2009-09-04 | 2013-12-03 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | GaN single crystal substrate and method of manufacturing thereof and GaN-based semiconductor device and method of manufacturing thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0783711B2 (ja) * | 1987-06-29 | 1995-09-13 | ダイセル化学工業株式会社 | 新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法 |
| JPH0394696A (ja) * | 1988-09-05 | 1991-04-19 | Nissan Chem Ind Ltd | 光学活性体の製造方法 |
| JP2869793B2 (ja) * | 1989-03-07 | 1999-03-10 | 第一化学薬品株式会社 | 酸性ｄ―アミノ酸に作用するｄ―アミノアシラーゼ及びその製造法 |
-
1992
- 1992-07-03 JP JP20032492A patent/JPH0622789A/ja active Pending
-
1993
- 1993-07-02 WO PCT/JP1993/000910 patent/WO1994001577A1/ja active Application Filing
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8598685B2 (en) | 2009-09-04 | 2013-12-03 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | GaN single crystal substrate and method of manufacturing thereof and GaN-based semiconductor device and method of manufacturing thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1994001577A1 (en) | 1994-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2720140B2 (ja) | フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 | |
| JP3218133B2 (ja) | フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 | |
| JPH0552195B2 (ja) | ||
| IE911637A1 (en) | Biocatalytic process for the production of l-(-)-carnitine from crotonobetaine and strains of proteeae for use in said process | |
| JPH04365491A (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造法 | |
| US5215897A (en) | Process for producing L-amino acids | |
| JP2670838B2 (ja) | Ｌ―α―アミノ酸類の製造方法 | |
| JPH0622789A (ja) | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 | |
| JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
| JPH04218385A (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 | |
| JPH04222591A (ja) | Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 | |
| JPH0822228B2 (ja) | アミノ酸アミド加水分解酵素及びその使用 | |
| JPH1042886A (ja) | 微生物によるβ−アラニンの製造法 | |
| JPS6319158B2 (ja) | ||
| WO1996031616A1 (fr) | Procede de production d'acide l-2-aminoadipique | |
| JPH0889266A (ja) | Ｌ−γ−グルタミルアミド化合物の製造方法 | |
| JP2614460B2 (ja) | ジ‐ｄ‐フラクトシルフラノース２，６′：６，２′ジアンハイドライドの製造法 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| JPH027635B2 (ja) | ||
| JPH0574353B2 (ja) | ||
| JP2819181B2 (ja) | 微生物によるシチジンの製造方法 | |
| JPH027636B2 (ja) | ||
| JPH051716B2 (ja) | ||
| JPH0789948B2 (ja) | ２▲’▼−デオキシシチジンの製造方法 | |
| JPH08173175A (ja) | α−ヒドロキシ−４−メチルチオ酪酸の製造方法 |