JPH0783711B2 - 新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法 - Google Patents
新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法Info
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- JPH0783711B2 JPH0783711B2 JP62161493A JP16149387A JPH0783711B2 JP H0783711 B2 JPH0783711 B2 JP H0783711B2 JP 62161493 A JP62161493 A JP 62161493A JP 16149387 A JP16149387 A JP 16149387A JP H0783711 B2 JPH0783711 B2 JP H0783711B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、アルカリゲネス属に属する細菌により産生さ
れるD-アミノアシラーゼ及び、その生産方法に関するも
のである。
れるD-アミノアシラーゼ及び、その生産方法に関するも
のである。
（従来技術） 従来、シュードモナス・エスピー（Pseudomo-massp.）A
AA6029株（ケミカル・アンド・ファルマシューティカル
・ブリテン（Chemical and Pharmaceutical Bulletin）
26,2698（1978）や、通性メタノール資化性細菌シュー
ドモナス・アミノボ ランス（Pseudomonas aminovoran
s）NCIB9039（特開昭55-42534）や、ストレプトミセス
・オリバアセウス（Steptomyces olivaceus）S-62等の
放線菌（特開昭53-59092）が、D-アミノアシラーゼを生
産することが知られている。
AA6029株（ケミカル・アンド・ファルマシューティカル
・ブリテン（Chemical and Pharmaceutical Bulletin）
26,2698（1978）や、通性メタノール資化性細菌シュー
ドモナス・アミノボ ランス（Pseudomonas aminovoran
s）NCIB9039（特開昭55-42534）や、ストレプトミセス
・オリバアセウス（Steptomyces olivaceus）S-62等の
放線菌（特開昭53-59092）が、D-アミノアシラーゼを生
産することが知られている。
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、これらのD-アミノアシラーゼ生産菌は、
D-アミノアシラーゼ以外にL-アミノアシラーゼも同時に
生産するため、アミノ酸の光学分割に利用するには菌体
を培養後、菌を破砕し精製することによってD-アミノア
シラーゼとL-アミノアシラーゼを分離する必要がある。
これらの操作は煩雑で時間，コストがかかり、また酵素
の安定性も損なわれるため工業的に有利でない。従っ
て、L-アミノアシラーゼを生産しないD-アミノアシラー
ゼ生産菌の発見が望まれている。
D-アミノアシラーゼ以外にL-アミノアシラーゼも同時に
生産するため、アミノ酸の光学分割に利用するには菌体
を培養後、菌を破砕し精製することによってD-アミノア
シラーゼとL-アミノアシラーゼを分離する必要がある。
これらの操作は煩雑で時間，コストがかかり、また酵素
の安定性も損なわれるため工業的に有利でない。従っ
て、L-アミノアシラーゼを生産しないD-アミノアシラー
ゼ生産菌の発見が望まれている。
本発明者は鋭意研究の結果、アルカリゲネス属細菌がD-
アミノアシラーゼのみを生産することを発見し、このD-
アミノアシラーゼを精製し、その理化学的性質及び酵素
化学的性質を明らかにし、本発明に至った。
アミノアシラーゼのみを生産することを発見し、このD-
アミノアシラーゼを精製し、その理化学的性質及び酵素
化学的性質を明らかにし、本発明に至った。
（問題点を解決するための手段） 即ち、本発明は新規なD-アミノアシラーゼ及びその製造
方法である。
方法である。
本発明者は、D-アミノアシラーゼ生産菌をスクリーニン
グするために、コテングタケモドキの生産するアミノ酸
代謝きっ抗体である2-アミノ‐4-クロロ‐4-ペンテン酸
（ACP）のＤ体をN‐アセチル化したN‐アセチル‐D-2-
アミノ‐4-クロロ‐4-ペンテン酸（Ac-D-ACP）を窒素源
として資化できる微生物を検索したところ、以下に掲げ
る菌学的性質を有する細菌が、大分大学の構内の土壌よ
り単離された。
グするために、コテングタケモドキの生産するアミノ酸
代謝きっ抗体である2-アミノ‐4-クロロ‐4-ペンテン酸
（ACP）のＤ体をN‐アセチル化したN‐アセチル‐D-2-
アミノ‐4-クロロ‐4-ペンテン酸（Ac-D-ACP）を窒素源
として資化できる微生物を検索したところ、以下に掲げ
る菌学的性質を有する細菌が、大分大学の構内の土壌よ
り単離された。
以下、本菌株の菌学的性質を詳述する。この菌学的性質
の検討には、マニュアル・フォア・ジ・アイデンティフ
ィケーション・オブ・メディカル・バクテリア第２版
（Manual for the Identifi-cation of Medical Bacter
ia.2nd ed.,Cowan,S.T.＆Steel,K.J.（1974）Cambridge
University Press）に記載されている方法、培地組成
を用いた。
の検討には、マニュアル・フォア・ジ・アイデンティフ
ィケーション・オブ・メディカル・バクテリア第２版
（Manual for the Identifi-cation of Medical Bacter
ia.2nd ed.,Cowan,S.T.＆Steel,K.J.（1974）Cambridge
University Press）に記載されている方法、培地組成
を用いた。
（形態的所見） 1.細胞の形：かん状 2.多形性：なし 3.運動性：あり 4.胞 子：なし 5.グラム染色性：陰性 6.抗酸性：なし （生育状態） 1.ブイヨン寒天平板培養 円形，僅かに盛り上がり，淡褐色，平滑，半透明 2.ゼラチン穿刺培養 液化せず （生理学的性質） 1.硝酸塩の還元：＋ 2.脱窒反応：＋ 3.インドールの生成：− 4.硫化水素の生成：＋ 5.デンプンの加水分解：− 6.クエン酸の利用：＋ 7.色素の生成：− 8.ウレアーゼ：− 9.オキシターゼ：＋ 10.カタラーゼ：＋ 11.O-Fテスト グルコース：− キシロース：酸生成 12.アルギニンの分解：− 13.ビタミン要求性：− 14.酸素に対する態度：好気性 15.生育温度:41℃では生育するが、45℃では生育しな
い。
い。
16.リジンの脱炭酸反応：− 17.オルニチンの脱炭酸反応：− 18.DNAase:− 19.カゼインの加水分解：− 20.レシチナーゼ：− 21.リパーゼ：− 22.Tween80の分解：− 23.エスクリンの分解：− 24.β‐ガラクトシダーゼ：− 25.チロシン：− 26.チトクロームオキシターゼ：＋ 27.レバン産生：− （炭素源の資化性） 1.グルコース：＋ 2.アラビノース：− 3.マンノース：− 4.マンニトール：− 5.N‐アセチルグルコサミン：− 6.マントース：− 7.グルコン酸：＋ 8.Caprate:＋ 9.アジピン酸：＋ 10.リンゴ酸：＋ 11.フェニル酢酸：＋ 12.キシロース：＋ 13.L-アルギニン：− 14.ベタイン：− 15.乳酸：＋ 16.酢酸：＋ （糖からの酸及びガスの生成） ブドウ糖からの酸及びガスの生成はない。
（発明の効果） 以下の菌学的諸性質から、バージェイズ・マニュアル・
オブ・システマティック・バクテリオロジー第１巻（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology vol.1）に
従って検索した結果、この菌株はグラム陰性かん菌
運動性あり 好気性 カタラーゼ陽性 オキシ
ターゼ陽性 ペプトンを含む培地でブドウ糖から酸非
産生 蛍光色素を生産しない ことから、アルカリゲ
ネス属に属する細菌であると考えられる。
オブ・システマティック・バクテリオロジー第１巻（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology vol.1）に
従って検索した結果、この菌株はグラム陰性かん菌
運動性あり 好気性 カタラーゼ陽性 オキシ
ターゼ陽性 ペプトンを含む培地でブドウ糖から酸非
産生 蛍光色素を生産しない ことから、アルカリゲ
ネス属に属する細菌であると考えられる。
アルカリゲネス属に含まれる種について検索を行ったと
ころ、硝酸塩の還元が陽性であること、脱窒反応が陽性
であること、ゼラチンの液化性がないこと、D-グルコー
ス,D-キシロース,D-グルコン酸，アジピン酸の資化性を
有することから、本菌はアルカリゲネス・デニトリフィ
カンス（Alcaligenes denitrificans）に属すると考え
られる。
ころ、硝酸塩の還元が陽性であること、脱窒反応が陽性
であること、ゼラチンの液化性がないこと、D-グルコー
ス,D-キシロース,D-グルコン酸，アジピン酸の資化性を
有することから、本菌はアルカリゲネス・デニトリフィ
カンス（Alcaligenes denitrificans）に属すると考え
られる。
更に、O-F培地でD-キシロースから酸を生成することか
ら、本菌はアルカリゲネス・デニトリフィカンス・サブ
スピーシーズ・キシロースオキシダンス（Alcaligenes
denitrificanssubsp.xy-losoxydans）に属すると考えら
れ、アルカリゲネス・デニトリフィカンス・サブスピー
シーズ・キシロースオキシダンスMI-4株と命名した。
ら、本菌はアルカリゲネス・デニトリフィカンス・サブ
スピーシーズ・キシロースオキシダンス（Alcaligenes
denitrificanssubsp.xy-losoxydans）に属すると考えら
れ、アルカリゲネス・デニトリフィカンス・サブスピー
シーズ・キシロースオキシダンスMI-4株と命名した。
本菌株は、昭和62年６月13日に通産省工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託した。その微生物受託番号は、微
生物菌寄第9413号である。
工業技術研究所に寄託した。その微生物受託番号は、微
生物菌寄第9413号である。
次に、本菌株により生産されるD-アミノアシラーゼの理
化学的性質及び酵素学的性質について記述する。
化学的性質及び酵素学的性質について記述する。
作用：N‐アシル‐D-アミノ酸に作用してD-アミノ
酸と有機酸を生じる。
酸と有機酸を生じる。
基質特異性：N‐アシル‐D-アミノ酸にのみ作用
し、N‐アシル‐L-アミノ酸には全く作用しない。N‐ア
シル‐D-アミノ酸のアミノ酸部分としてはメチオニンに
最も好ましく作用し、フェニルアラニン，アロイソロイ
シン，ロイシン，トリプトファン，ノルロイシン，バリ
ン，アラニン，セリン等にも作用する。また、アシル基
としてはアセチル基，クロロアセチル基が好ましく、ホ
ルミル基，ペンジルオキシカルボニル基（Cbz）にも作
用する。
し、N‐アシル‐L-アミノ酸には全く作用しない。N‐ア
シル‐D-アミノ酸のアミノ酸部分としてはメチオニンに
最も好ましく作用し、フェニルアラニン，アロイソロイ
シン，ロイシン，トリプトファン，ノルロイシン，バリ
ン，アラニン，セリン等にも作用する。また、アシル基
としてはアセチル基，クロロアセチル基が好ましく、ホ
ルミル基，ペンジルオキシカルボニル基（Cbz）にも作
用する。
グリシル‐D-ロイシンに作用し、ジペプチターゼ活性も
有する。
有する。
至適pH:リン酸カリウム緩衝液，トリス‐塩酸緩衝
液ともにpH7.8 至適温度:45℃ 熱安定性:60℃,10分間の熱処理で約20％の残存活性
を有する。
液ともにpH7.8 至適温度:45℃ 熱安定性:60℃,10分間の熱処理で約20％の残存活性
を有する。
活性化剤：塩化マグネシウム，塩化カルシウム，塩
化バリウム，塩化亜鉛，塩化ニッケル，塩化コバルト，
塩化銅（II），塩化鉄（III），硫酸鉄（II），塩化水
銀によって活性化されない。
化バリウム，塩化亜鉛，塩化ニッケル，塩化コバルト，
塩化銅（II），塩化鉄（III），硫酸鉄（II），塩化水
銀によって活性化されない。
阻害剤：塩化水銀によって完全に阻害される。
分子量：アファデックスG-200ゲルろ過で約６万 活性の測定方法：リン酸カリウム緩衝液pH7.8,100u
mol、N‐アセチル‐D-メチオニン10umol及び酵素を含む
1mlの反応液中で20分間反応させ、生成したD-メチオニ
ンをニンヒドリン‐ヒドリンダンチン法（ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー，211,907（195
4）もしくは、アミノ酸分析計によって測定した。尚1U
は、１分間に１μmolのD-メチオニンの生成を触媒する
酵素量とした。
mol、N‐アセチル‐D-メチオニン10umol及び酵素を含む
1mlの反応液中で20分間反応させ、生成したD-メチオニ
ンをニンヒドリン‐ヒドリンダンチン法（ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー，211,907（195
4）もしくは、アミノ酸分析計によって測定した。尚1U
は、１分間に１μmolのD-メチオニンの生成を触媒する
酵素量とした。
本発明のD-アミノアシラーゼは、アルカリゲネス属に属
するD-アミノアシラーゼ生産能を有する微生物をN‐ア
セチル‐DL-メチオニン等の誘導物質を含む培地中で培
養し、培養物からD-アミノアシラーゼを取得することを
特徴とする方法によって製造することが出来る。
するD-アミノアシラーゼ生産能を有する微生物をN‐ア
セチル‐DL-メチオニン等の誘導物質を含む培地中で培
養し、培養物からD-アミノアシラーゼを取得することを
特徴とする方法によって製造することが出来る。
本発明において使用するD-アミノアシラーゼ生産能を有
する微生物は、D-アミノアシラーゼを生産することの出
来るアルカリゲネス属に属するすべての菌株，突然変異
株，変種を含む。それらのうち好ましい菌株は、アルカ
リゲネス・デニトリフィカンス・サブスピーシーズ・キ
シロースオキシダンス（Alcaligenes denitrificanssub
sp.xylosoxydans）MI-4である。
する微生物は、D-アミノアシラーゼを生産することの出
来るアルカリゲネス属に属するすべての菌株，突然変異
株，変種を含む。それらのうち好ましい菌株は、アルカ
リゲネス・デニトリフィカンス・サブスピーシーズ・キ
シロースオキシダンス（Alcaligenes denitrificanssub
sp.xylosoxydans）MI-4である。
アルカリゲネス・デニトリフィカンス・サブスピーシー
ズ・キシロースオキシダンスMI-4の培養は、D-アミノア
シラーゼの誘導物質を含む培地中で行われる。
ズ・キシロースオキシダンスMI-4の培養は、D-アミノア
シラーゼの誘導物質を含む培地中で行われる。
D-アミノアシラーゼの誘導物質としては、N‐アセチル
‐DL-ロイシン，N‐アセチル‐DL-メチオニン，N‐アセ
チル‐DL-バリン，N‐アセチル‐DL-トリプトファン，N
‐アセチルグリシン等があげられるが、N‐アセチル‐D
L-ロイシンが特に好ましい。また、誘導物質としてN‐
アセチル‐DL-メチオニンを用いた時の最適濃度は0.5％
であった。誘導物質以外の培地成分としては、硫安，リ
ン酸塩，酵母エキス等が用いられる。pH7付近で30℃で
約１日培養することによってD-アミノアシラーゼが菌体
中に生産される。
‐DL-ロイシン，N‐アセチル‐DL-メチオニン，N‐アセ
チル‐DL-バリン，N‐アセチル‐DL-トリプトファン，N
‐アセチルグリシン等があげられるが、N‐アセチル‐D
L-ロイシンが特に好ましい。また、誘導物質としてN‐
アセチル‐DL-メチオニンを用いた時の最適濃度は0.5％
であった。誘導物質以外の培地成分としては、硫安，リ
ン酸塩，酵母エキス等が用いられる。pH7付近で30℃で
約１日培養することによってD-アミノアシラーゼが菌体
中に生産される。
生産されたD-アミノアシラーゼの精製は、通常の方法を
組み合わせることによって行われる。例えば、培養物を
遠心分離することにより菌体を回収し、超音波破砕によ
り無細胞抽出液を得、プロタミン処理,DEAE-セルロース
イオン交換クロマトグラフィー，セファデックスG-200
ゲルろ過,DEAE-トヨパール650イオン交換クロマトグラ
フィー（２回）によって約110倍精製される。
組み合わせることによって行われる。例えば、培養物を
遠心分離することにより菌体を回収し、超音波破砕によ
り無細胞抽出液を得、プロタミン処理,DEAE-セルロース
イオン交換クロマトグラフィー，セファデックスG-200
ゲルろ過,DEAE-トヨパール650イオン交換クロマトグラ
フィー（２回）によって約110倍精製される。
以下、実施例により詳しく説明するが、本発明がこれに
限定されるものではない。
限定されるものではない。
（実施例） 実施例１ D-アミノアシラーゼ生産に及ぼす誘導物質の影響 誘導物質0.5％，グルコース１％，硫安１％，KH2PO40.1
％，K2HPO40.1％，MgSO4・7H2O0.01％及び酵母エキス0.
05％を含むpH7.0の500mlの培地中でアルカリゲネス・デ
ニトリフィカンス・サブスピーシーズ・キシロースオキ
シダンスMI-4（以下MI-4株と略す）を22時間培養し、そ
の無細胞抽出液のD-アミノアシラーゼ活性を測定したと
ころ、第１表の結果となった。尚、D-アミノアシラーゼ
は、前記活性測定法に従った。また比活性は、タンパク
1mg当たりのユニット数（U/mg）とし、総活性は培地500
ml当たりのユニット数（Ｕ）とした。
％，K2HPO40.1％，MgSO4・7H2O0.01％及び酵母エキス0.
05％を含むpH7.0の500mlの培地中でアルカリゲネス・デ
ニトリフィカンス・サブスピーシーズ・キシロースオキ
シダンスMI-4（以下MI-4株と略す）を22時間培養し、そ
の無細胞抽出液のD-アミノアシラーゼ活性を測定したと
ころ、第１表の結果となった。尚、D-アミノアシラーゼ
は、前記活性測定法に従った。また比活性は、タンパク
1mg当たりのユニット数（U/mg）とし、総活性は培地500
ml当たりのユニット数（Ｕ）とした。
実施例２ D-アミノアシラーゼ生産におけるN‐アセチル‐DL-メチ
オニンの最適濃度の検討 誘導物質としてN‐アセチル‐DL-メチオニンを各種％含
む実施例１記載の培地中でMI-4株を30℃,22時間培養
し、D-アミノアシラーゼの比活性を測定した。その結果
を第１図に示した。
オニンの最適濃度の検討 誘導物質としてN‐アセチル‐DL-メチオニンを各種％含
む実施例１記載の培地中でMI-4株を30℃,22時間培養
し、D-アミノアシラーゼの比活性を測定した。その結果
を第１図に示した。
実施例３ D-アミノアシラーゼのMI-4株からの精製 MI-4株をN‐アセチル‐DL-メチオニン0.5％を含む実施
例１に記載の培地90lで培養し、遠心分離により菌体を
回収した。回収した菌体150g（湿重量）を10mMリン酸カ
リウム緩衝液pH7.0（以下、緩衝液Ｉと略す）300mlに懸
濁し、超音波により菌体を破砕した。このようにして得
た無細胞抽出液にプロタミン・サルフェートを加え（タ
ンパク1mg当たり0.1mg）、除核酸した。この除核酸した
溶液を緩衝液Ｉに透析した後、緩衝液Ｉに平衡化したDE
AE-セルロースに吸着させた。次にステップ‐ワイズ法
によりNaClで溶出させたところ、0.15〜0.3MNaCl画分で
D-アミノアシラーゼは溶出した。活性画分を濃縮後、ア
ファデックスG-200でゲルろ過した。溶出したD-アミノ
アシラーゼの活性画分を限外ろ過により濃縮後緩衝液Ｉ
に透析し、緩衝液Ｉに平衡化したDEAE-トヨパール650に
吸着させた。ステップ‐ワイズ法によりNaClで溶出させ
たところD-アミノアシラーゼは、０〜0.1MNaCl画分で溶
出した。この活性画分を再びDEAE-トヨパールに吸着さ
せ、同様の手法により溶出させたところ、0.05〜0.1MNa
ClでD-アミノアシラーゼが溶出した。これらの操作によ
りD-アミノアシラーゼの比活性は、約110倍増加した。
精製の要約を第２表に示す。
例１に記載の培地90lで培養し、遠心分離により菌体を
回収した。回収した菌体150g（湿重量）を10mMリン酸カ
リウム緩衝液pH7.0（以下、緩衝液Ｉと略す）300mlに懸
濁し、超音波により菌体を破砕した。このようにして得
た無細胞抽出液にプロタミン・サルフェートを加え（タ
ンパク1mg当たり0.1mg）、除核酸した。この除核酸した
溶液を緩衝液Ｉに透析した後、緩衝液Ｉに平衡化したDE
AE-セルロースに吸着させた。次にステップ‐ワイズ法
によりNaClで溶出させたところ、0.15〜0.3MNaCl画分で
D-アミノアシラーゼは溶出した。活性画分を濃縮後、ア
ファデックスG-200でゲルろ過した。溶出したD-アミノ
アシラーゼの活性画分を限外ろ過により濃縮後緩衝液Ｉ
に透析し、緩衝液Ｉに平衡化したDEAE-トヨパール650に
吸着させた。ステップ‐ワイズ法によりNaClで溶出させ
たところD-アミノアシラーゼは、０〜0.1MNaCl画分で溶
出した。この活性画分を再びDEAE-トヨパールに吸着さ
せ、同様の手法により溶出させたところ、0.05〜0.1MNa
ClでD-アミノアシラーゼが溶出した。これらの操作によ
りD-アミノアシラーゼの比活性は、約110倍増加した。
精製の要約を第２表に示す。
実施例４ D-アミノアシラーゼの基質特異性 実施例３により得た精製酵素を用いて、各種N‐アシル
アミノ酸に対する相対活性を測定した。基質濃度はN‐
アシル‐D-もしくはL-アミノ酸は10mM,N‐アシル‐DL-
アミノ酸は20mMとし、その他の反応条件は前記活性測定
方法に従った。その結果をN‐アセチル‐D-メチオニン
に対する活性を100とした相対活性で第３表に表した。
アミノ酸に対する相対活性を測定した。基質濃度はN‐
アシル‐D-もしくはL-アミノ酸は10mM,N‐アシル‐DL-
アミノ酸は20mMとし、その他の反応条件は前記活性測定
方法に従った。その結果をN‐アセチル‐D-メチオニン
に対する活性を100とした相対活性で第３表に表した。
実施例５ 次にペプチターゼ活性を調べた。各ペプチドの濃度は3m
Mとし、その他の条件は前記活性測定条件に従った。
Mとし、その他の条件は前記活性測定条件に従った。
活性測定の結果をN‐アセチル‐D-メチオニンに対する
活性を100とした相対活性で表し、第４表に示した。
活性を100とした相対活性で表し、第４表に示した。
実施例６ 実施例３で精製した酵素のD-アミノアシラーゼ活性に及
ぼす各種金属イオンの影響を調べた。活性の測定は、活
性の測定方法に記した反応液に各種金属イオンを1mM添
加して行った。その結果を無添加時の活性を100として
表し、第５表に示した。
ぼす各種金属イオンの影響を調べた。活性の測定は、活
性の測定方法に記した反応液に各種金属イオンを1mM添
加して行った。その結果を無添加時の活性を100として
表し、第５表に示した。
実施例７ D-アミノアシラーゼ活性に及ぼす温度の影響 D-アミノアシラーゼ活性を各種温度で測定し、至適温度
を求めたところ、第２図に示したように45℃であった。
を求めたところ、第２図に示したように45℃であった。
実施例８ D-アミノアシラーゼの安定性に及ぼす温度の影響 D-アミノアシラーゼを各温度で10分間放置した後、D-ア
ミノアシラーゼ活性を測定することにより、本酵素の安
定性に及ぼす温度の影響を調べた。
ミノアシラーゼ活性を測定することにより、本酵素の安
定性に及ぼす温度の影響を調べた。
その結果を無処理の酵素活性を100とした相対活性で表
し、第３図に示した。
し、第３図に示した。
実施例９ D-アミノアシラーゼ活性に及ぼすpHの影響 D-アミノアシラーゼ活性に及ぼすpHの影響を調べた。
前記したD-アミノアシラーゼ活性の測定方法のうち、緩
衝液の種類及びpHを変えて活性を測定し、その結果を各
緩衝液,pH7.8での活性を100とした相対活性で表し、第
４図に示した。
衝液の種類及びpHを変えて活性を測定し、その結果を各
緩衝液,pH7.8での活性を100とした相対活性で表し、第
４図に示した。
第１図は実施例２に記したように誘導物質としてN‐ア
セチル‐DL-メチオニンを各種％含む実施例１記載の培
地でMI-4株を30℃,22時間培養して得た菌体の無細胞抽
出液のD-アミノアシラーゼ活性を表したものである。 第２図は実施例７に記したようにD-アミノアシラーゼ活
性に及ぼす温度の影響を図示したものである。D-アミノ
アシラーゼ活性を活性の測定方法に記した反応液中で各
種温度で測定し、45℃におけるD-アミノアシラーゼ活性
を100とした相対活性で表した。 第３図は実施例８に記したようにD-アミノアシラーゼの
安定性に及ぼす温度の影響を図示したものである。D-ア
ミノアシラーゼを各種温度で10分間放置した後、D-アミ
ノアシラーゼ活性を測定し、無処理の酵素活性を100と
した相対活性で表した。 第４図は実施例９に記したようにD-アミノアシラーゼ活
性に及ぼすpHの影響ををずししたものである。リン酸カ
リウム緩衝液，トリス‐塩酸緩衝液の各種pHでD-アミノ
アシラーゼ活性を想定し、各緩衝液におけるpH7.8での
酵素活性を100とした相対活性で表した。
セチル‐DL-メチオニンを各種％含む実施例１記載の培
地でMI-4株を30℃,22時間培養して得た菌体の無細胞抽
出液のD-アミノアシラーゼ活性を表したものである。 第２図は実施例７に記したようにD-アミノアシラーゼ活
性に及ぼす温度の影響を図示したものである。D-アミノ
アシラーゼ活性を活性の測定方法に記した反応液中で各
種温度で測定し、45℃におけるD-アミノアシラーゼ活性
を100とした相対活性で表した。 第３図は実施例８に記したようにD-アミノアシラーゼの
安定性に及ぼす温度の影響を図示したものである。D-ア
ミノアシラーゼを各種温度で10分間放置した後、D-アミ
ノアシラーゼ活性を測定し、無処理の酵素活性を100と
した相対活性で表した。 第４図は実施例９に記したようにD-アミノアシラーゼ活
性に及ぼすpHの影響ををずししたものである。リン酸カ
リウム緩衝液，トリス‐塩酸緩衝液の各種pHでD-アミノ
アシラーゼ活性を想定し、各緩衝液におけるpH7.8での
酵素活性を100とした相対活性で表した。
Claims (2)
- 【請求項１】アルカリゲネス属に属する細菌を培養し、
培養物からＤ−アミノアシラーゼを取得することを特徴
とするＤ−アミノアシラーゼの製造方法。 - 【請求項２】アルカリゲネス属に属する細菌が、アルカ
リゲネス・デニトリフィカンス・サブスピーシーズ・キ
シロースオキシダンス（Alcaligenesdenitrificans sub
sp.xylosoxydans）MI−４である特許請求の範囲第１項
記載のＤ−アミノアシラーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62161493A JPH0783711B2 (ja) | 1987-06-29 | 1987-06-29 | 新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62161493A JPH0783711B2 (ja) | 1987-06-29 | 1987-06-29 | 新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS645488A JPS645488A (en) | 1989-01-10 |
| JPH0783711B2 true JPH0783711B2 (ja) | 1995-09-13 |
Family
ID=15736118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62161493A Expired - Lifetime JPH0783711B2 (ja) | 1987-06-29 | 1987-06-29 | 新規なｄ―アミノアシラーゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0783711B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5219741A (en) * | 1989-09-06 | 1993-06-15 | Degussa Ag | Method of making L-proline using an N-acyl-L-protine acylase |
| DE3929570A1 (de) * | 1989-09-06 | 1991-03-07 | Degussa | Mikrobiologisch hergestellte n-acyl-l-prolin-acylase, verfahren zu ihrer gewinnung und ihre verwendung |
| US5194383A (en) * | 1991-11-21 | 1993-03-16 | National Science Council Of Republic Of China | Process for making L-aminoacylase |
| JPH0622789A (ja) * | 1992-07-03 | 1994-02-01 | Noyaku Bio Technol Kaihatsu Gijutsu Kenkyu Kumiai | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 |
| JPH11318442A (ja) * | 1998-03-17 | 1999-11-24 | Daicel Chem Ind Ltd | Ｄ―アミノアシラ―ゼ |
| AU6222799A (en) * | 1998-10-20 | 2000-05-08 | Chirotech Technology Limited | Aminoacylase and its use in the production of d-aminoacids |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62126976A (ja) * | 1985-11-26 | 1987-06-09 | Agency Of Ind Science & Technol | Ｄ−アミノアシラ−ゼの製造法 |
-
1987
- 1987-06-29 JP JP62161493A patent/JPH0783711B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS645488A (en) | 1989-01-10 |
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