JPH06218051A - Ｃｄ４陽性細胞捕集材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液の体外循環療法などに適用することに
より、何らかの原因でその割合が過剰になったＣＤ４陽
性細胞を捕集することが可能な、ＣＤ４陽性細胞との結
合性を有するペプチドまたは修飾ペプチドを不織布に固
定化して成るＣＤ４陽性細胞捕集材を提供する。 【構成】 エポキシ基を含有している平均繊維径が１
ないし３０μｍの不織布に、ＣＤ４陽性細胞と結合性を
有するペプチドまたは修飾ペプチドを固定化したことを
特徴とするＣＤ４陽性細胞捕集材。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は特定のアミノ酸配列を有
したペプチドまたはそのペプチド領域を含有する修飾ペ
プチドを固定化した不織布を用いて、その充填カラムに
より血液の体外循環を行なうことにより、ＣＤ４抗原を
マーカーとして細胞表面に有するたとえばヘルパーＴ細
胞の捕集を目的とするＣＤ４陽性（以下ＣＤ４＋と言
う）細胞捕集材に関するものである。本発明は何らかの
原因により免疫系のバランスに支障が生ずることによ
り、ＣＤ４＋細胞の生体内における割合が過大になり免
疫反応が過剰に起こるような種々の自己免疫疾患などの
治療において非常に有用なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＣＤ４分子はヘルパー細胞や一部の単
球，マクロファージの細胞膜表面に分布している分子量
約５５キロダルトンの糖タンパク質であり、胸腺細胞の
約５０％，末梢Ｔ細胞の約７０％に分布する。また成人
Ｔ細胞型白血病細胞や皮膚Ｔ細胞性リンパ腫などにも発
現されている。ヘルパー細胞上のＣＤ４抗原はＴ細胞が
細胞レセプターによりマクロファージから提示された抗
原に結合する際、マクロファージ上の主要組織適合抗原
（以下ＭＨＣと言う）と結合してＴ細胞，抗原，マクロ
ファージ間の会合を安定化する役割をもつ。Ｔ細胞のＣ
Ｄ４分子には非受容体型チロシンキナーゼ分子ｐ５６
^lck が連結し、ＣＤ４の情報伝達分子として機能してい
る。マクロファージ，単球の表面に分布するＣＤ４の生
理的役割に関しては明らかではない。

【０００３】免疫系においてヘルパー細胞は抗原が適切
に応答するのに不可欠であり、Ｂ細胞のほとんどの抗体
応答に必須のものである。ヘルパー細胞は主として抗原
提示細胞の表面に結合した非自己抗原を認識した場合自
身が活性化され、インターロイキン２を分泌してＴ細胞
の増殖を刺激してこれがＢ細胞の活性化を補助してお
り、さらには抗体の産生を促している。またリンパ球を
補助するだけでなくγインターフェロンを分泌すること
によりマクロファージを活性化するヘルパー細胞も存在
する。

【０００４】ヘルパーＴ細胞の他にＴ細胞の亜集団とし
て細胞障害性Ｔ細胞あるいはサプレッサーＴ細胞などが
存在し、その表面マーカーとしてＣＤ８という糖タンパ
ク質が存在する。細胞障害性Ｔ細胞はウイルスに感染し
た細胞を直接破壊し、サプレッサーＴ細胞は主にヘルパ
ーＴ細胞の応答を抑制している。免疫応答の調整に主と
して関与しているのはＣＤ４＋細胞であるヘルパーＴ細
胞とＣＤ８陽性細胞（以下ＣＤ８＋細胞と言う）である
サプレッサーＴ細胞の２つである。正常人ではこれらＣ
Ｄ４＋細胞とＣＤ８＋細胞の両者がバランスよく制御す
ることで、生体内における免疫反応が適当な状態に調節
されている。何らかの原因により両者の数の比率に大き
な変動が生ずると、生体内の免疫系制御システムに異常
が発生し、様々な悪影響を及ぼすことになる。

【０００５】エイズ患者においてはレトロウイルスの一
種であるヒト免疫不全ウイルスによりヘルパーＴ細胞が
破壊され免疫系が正常に機能しなくなっている。したが
って通常であれば発症しないような微生物感染において
も、生体が対応できなくなるものである。この場合には
ＣＤ４＋／ＣＤ８＋の値が正常人と比べて大きく低下し
ている。

【０００６】逆にＣＤ４＋／ＣＤ８＋の値が大きくなる
ものとして、４型アレルギーに属する遅延型過敏症に関
わる疾患がある。遅延型過敏症を誘導するＴ細胞はヘル
パーＴ細胞とは別のものであるが、これもＣＤ４分子を
有している。これに関する疾患としては細胞内寄生性細
菌や真菌などの感染症や、植物，薬剤などによる皮膚炎
の他に、自己抗体が生ずる全身性エリテマトーデスやリ
ウマチ様関節炎などの種々の自己免疫疾患においてもこ
の種のアレルギー機序とＴ細胞により生体内の細胞が障
害され病変が惹起されていると考えられている。

【０００７】種々ある自己免疫疾患の治療方法として
は、その症状の程度に応じて副腎皮質ホルモン剤の投
与，脾臓の摘出，免疫抑制剤の投与などが適用される。
しかしこうした薬物療法や摘脾手術を行なってもは効果
的には回復しないような症例も多く存在している。自己
免疫疾患の発生に関するメカニズムはまだ十分には解明
されておらず、こうした患者に対する治療方法について
も絶対的なものは確立されていないのが現状であり対策
が急がれている。

【０００８】自己免疫疾患の他の治療方法として、免疫
吸着カラムを用いた血液の体外循環による自己抗体の吸
着除去も種々試みられている。たとえば免疫グロブリン
と結合性を有するプロテインＡを担体に固定化したカラ
ムの適用も検討されている。しかしプロテインＡは高価
であり、吸着特異性の点でもあまり優れず、さらには副
作用の生じた症例も報告されており、こうした医用機材
に利用するには種々の問題点が残されている。また除去
対象物質に対する抗体の固定化カラムも種々検討されて
いるが、安全性，保存安定性の問題，抗体が有効に反応
できるような固定化が困難なこと，滅菌方法が限定され
るなどの理由から医用機材として用いるには多くの課題
がある。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は血液細胞表面
に存在するのＣＤ４を認識して結合性を有するようなペ
プチドあるいはその修飾ペプチドを固定化した特定の不
織布を用いて、特にこれを充填したカラムにより血液の
体外循環を行なうことで、ＣＤ４＋細胞を特異的に結合
させ捕集することにより生体内の免疫系バランスを制御
して様々な疾患を治療しようとするものである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は、抗ＣＤ４抗体の相補性決定領域となりうるアミノ
酸配列を含有しているペプチドあるいは修飾ペプチドを
固定化した不織布によるＣＤ４＋細胞の捕集を要旨とす
るものである。

【００１１】本発明は抗ＣＤ４抗体における可変領域を
構成している部分において、特定のアミノ酸配列を有す
るペプチド断片を利用してＣＤ４＋細胞を捕集しようと
するものである。抗体分子の構成している重鎖，軽鎖と
もにＮ末端より約１１０個のアミノ酸残基より成る部分
に可変領域と呼ばれる領域が存在しており、抗体分子に
よりアミノ酸配列が異なっている部分である。さらにこ
の可変領域の中でも分子ごとにアミノ酸配列が比較的類
似している部分と、分子ごとにアミノ酸配列が大きく異
なっている超可変領域と呼ばれる部分とがある。抗体の
抗原に対する結合特異性はこの超可変領域により決定さ
れている。

【００１２】超可変領域は重鎖および軽鎖ともに３ヵ所
ずつ存在しており、２０ないし３０個のアミノ酸残基数
から成る。抗体が抗原と結合する部位である相補性決定
領域と呼ばれる部分はこの超可変領域と一致しており、
この中でも実際に結合に関与している部位は５ないし１
０個のアミノ酸残基から構成される断片として存在して
いる。

【００１３】重鎖ではＮ端より３１ないし３５，５０な
いし６５および９５ないし１０２番目が、軽鎖ではＮ端
より２４ないし３４，５０ないし５６および８９ないし
９７番目が相補性決定領域に相当する断片である。これ
ら合せて６つの領域はそれぞれにループを形成してお
り、これらが１ヵ所にまとまることにより抗原結合部位
を形成しているものである。すなわち抗原結合部位の多
様性はこれらの領域におけるループの長さとアミノ酸配
列のわずかな変化だけで生ずるものである。なおこれ以
外の抗体の機能を果たすのに必要な分子全体の高次構造
は乱されることなく保たれている。

【００１４】抗ＣＤ４抗体としてはＯＫＴ４（オルソ
社），Ｌｅｕ３ａ（ベクトンディキンソン社），Ｔ４
（コールター社）などがある。ＣＤ４は白血球分化抗原
の中では比較的よく研究されており、可変領域の一次構
造が決定されて報告されているものもある。可変領域の
一次構造が既知であれば、これより上記の相補性決定領
域に相当する部位を含有するペプチドを合成することに
よりＣＤ４分子と結合させることが可能である。たとえ
ばＬｅｕ３ａ抗体に関する軽鎖における可変領域のアミ
ノ酸配列（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，１４６
１１，１９９１）を例にすると、Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−
Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ，Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕの３つ
が相補性決定領域に相当する。

【００１５】上記に例示した領域はＣＤ４分子との結合
に最小限必要な領域であると考えられる。実際にこうし
たペプチドを用いてＣＤ４＋細胞を捕集する場合には、
血液中でのＣＤ４分子との反応様式に近い状態を再現す
る必要がある。また血液中に存在する場合の構造の安定
性や、あるいは担体に固定化する場合には水系溶媒に対
する溶解性を大きくしたりすることを考慮する必要があ
ることが多い。

【００１６】そこで上記に示したペプチド領域の一方の
末端または両末端の領域を各タンパク質のアミノ酸配列
に従って領域を延長したり、たとえばリジンのような水
溶性を大きくするようなアミノ酸を数個末端に結合させ
たり、システインのようなアミノ酸を末端に結合させて
担体に固定化しやすくするなどすることが好ましい。実
際に用いるペプチドまたは修飾ペプチドの全アミノ酸残
基数としては７０個以内であることが好ましいが、合成
の困難さやコスト，安定性などを考慮すると３０個以内
がより好ましい。さらに免疫原性を発現するのに要する
高次構造の形成しやすさなども考慮すると１０ないし２
５個が最適であると言える。

【００１７】また固定化反応や安定性などを考慮して、
たとえばＮ末端をアミド化したり、末端に適当な官能基
を導入したりして上記ペプチドを修飾した有機化合物を
用いることも好ましい。また複数のペプチドを−Ａ−
（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ−（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯを示す）
で示されるような側鎖を用いて結合させたものもＣＤ４
＋細胞との結合性をより高めることが可能である。この
場合のｎの値は１ないし２０が好ましく３ないし１０が
より好ましい。

【００１８】ペプチドの合成の方法については特に限定
されないが、液相合成法よりも固相合成法を適用する方
が操作が簡単である。この場合有機溶媒に不溶性である
支持体に合成するペプチドのＣ末端に対応するアミノ酸
を結合させ、Ｎ末端方向にαカルボキシル基以外のαア
ミノ基などの官能基を保護した対応するアミノ酸を順に
縮合反応により結合させた後、結合した後その保護基を
脱離させる反応を交互に繰返すことによりペプチド鎖を
延長させる。

【００１９】目的とするペプチドを得た後、ペプチド鎖
を支持体から切断および脱保護基を行なう。これにはフ
ッ化水素がしばしば用いられるが、安全性，取扱いやす
さの点からトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭ
ＳＡと言う）を用いるのが適当である。チオアニソー
ル，１，２−エタンジチオールとＴＦＭＳＡ中で反応さ
せ脱保護基を行なった後、トリフルオロ酢酸（以下ＴＦ
Ａと言う）により支持体からの切断を行ないペプチドを
回収する。これを凍結乾燥することによりクルードペプ
チドが得られる。

【００２０】上記クルードペプチドは逆相系カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと言う）
に供することにより分取，精製を行なう。ＨＰＬＣ条件
は通常タンパク質の精製に用いる系を基本として最適化
を行なうのがよい。得られたクロマトピークに相当する
画分を分取しこれを凍結乾燥する。得られた精製ペプチ
ド画分についてマススペクトル分析による分子量解析，
アミノ酸組成分析あるいはアミノ酸配列解析などにより
同定を行なう。

【００２１】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥ
Ｔ），ポリプロピレン（ＰＰ），ポリエチレン（Ｐ
Ｅ），ポリアミド，セルロース（綿）およびレーヨンな
どが挙げられるが、改質の容易さや改質後の強度保持性
を考慮すると、ＰＥＴ，ＰＥ，綿またはレーヨンが好ま
しい。

【００２２】不織布にエポキシ基を導入する方法は種々
のものが挙げられる。たとえばＰＰ，ＰＥの場合には、
あらかじめエポキシ基を有するビニル化合物たとえば化
１および化２で表わされるようなグリシジルメタクリレ
ートやグリシジルアクリルアミドなどの化合物を共重合
して不織布を製造する方法がある。またこれらの素材に
電子線，紫外線またはオゾンを照射してラジカルやイオ
ンを発生させ、化１または化２のようなエポキシ基を有
するビニル化合物をグラフト重合させる方法がある。こ
の場合他のビニルモノマーを共存させてもよい。

【００２３】

【化１】

【００２４】

【化２】 上記化１、化２においてＲは水素原子またはメチル基を
示し、ｎは１〜５の数を示す。

【００２５】綿やレーヨンの場合には過ヨウ素酸により
酸化してそのグリコール部位を開裂させてアルデヒド基
を導入して、さらにアンモニア，エチレンジアミン，ヘ
キサメチレンジアミン，ポリエチレンイミンのような少
なくとも一級のアミノ基を１個以上有する化合物を反応
させてシッフ塩基を形成し、これを還元してアミノ基を
導入した後、エピクロルヒドリン，エピブロムヒドリン
などによる処理を行なうことによりエポキシ基を導入す
るのがよい。なおポリエチレンイミンを用いる場合の分
子量は１００ないし１００万が好ましく、２００ないし
１０万がより好ましい。

【００２６】さらに電子線照射によりエポキシ基を導入
する方法としては、化１または化２のようなエポキシ基
を有するビニル化合物を直接または適当な溶媒に溶解し
た後乾燥させ電子線を照射する方法がある。この際にビ
ニル化合物の沸点が低いと乾燥条件で蒸発しグラフト量
の制御が困難であり、この場合には高沸点化合物と混合
して塗布し蒸発を抑えることが好ましい。混合する高沸
点の溶媒としてはエチレングリコール，ジエチレングリ
コール，重合度１０以下のポリエチレングリコール，，
グリセリンなどの多価アルコール類が特に好ましい。

【００２７】また化１および化２で例示されるエポキシ
基を有するビニル化合物のグラフト効率を上げるため
に、多官能性の架橋性ビニル化合物と混合して用いるこ
とが好ましい。これらの架橋性ビニル化合物としては、
メチレンビスアクリルアミド，トリメチロールプロパン
ジアクリレート，トリメチロールプロパントリアクリレ
ート，テトラメチロールメタンテトラアクリレート，ト
リアリルイソシアヌレートのようなビニル基を複数個有
するモノマーの他に、化３のような一般式で示される化
合物が挙げられる。

【００２８】これらの架橋性化合物のうちで化３を用い
た場合がエポキシ基の導入率が最も良好で、エポキシ基
含量を自在に制御することも可能である。化３における
Ｒ¹,Ｒ²,Ｒ³ はそれぞれ水素原子またはメチル基を示
す。またｎは１ないし３００の整数を示す。

【００２９】

【化３】

【００３０】さらに化３と化１および化２で示される化
合物とを混合して用いることによりグラフトしてエポキ
シ基を導入することができる。化３におけるｎの値は２
ないし１５０であることが好ましく、５ないし７０であ
ることがさらに好ましい。

【００３１】これらの化合物を塗布するための溶液の濃
度は０．１ないし２０％、好ましくは０．５ないし１０
％であり、用いる溶媒は架橋性化合物とエポキシ基を含
有する化合物の両方を溶解する溶媒であればすべて使用
できるが、水，メタノール，エタノール，塩化メチレ
ン，クロロホルム，アセトン，ジオキサン，テトラヒド
ロフランまたはこれらの混合溶媒を用いることができ
る。エポキシ基を有する化合物と架橋性化合物との混合
比は５０：１ないし１：５０、好ましくは３０：１ない
し１：３０である。

【００３２】不織布へのエポキシ基の導入方法を種々検
討したところ、化１，化２の単位を１０モル％以上を含
有させて他のビニル化合物と共重合させて得られるポリ
マーと化３で示される化合物とを混合して不織布に塗布
した後、電子線照射によりグラフトさせる方法が簡便で
強度低下などの劣化が少ないことから特に好ましい。こ
の場合に用いられる不織布の素材としてはＰＥＴ，Ｐ
Ｅ，レーヨンおよび綿が好ましく、特にＰＥＴが好まし
い。照射線量は１ないし２０Ｍｒａｄが好ましく、２な
いし１０Ｍｒａｄがさらに好ましい。

【００３３】このようにして導入されるエポキシ基の含
量は１μｅｑ／ｇないし５ｍｅｑ／ｇ、好ましくは１０
μｅｑ／ｇないし３ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは３０
μｅｑ／ｇないし２ｍｅｑ／ｇである。こうして導入さ
れたエポキシ基のペプチド固定化後の残存量は、血小板
のような血球成分の粘着を抑えるためには０．１μｅｑ
／ｇないし１ｍｅｑ／ｇであり、好ましくは０．５μｅ
ｑ／ｇないし０．５ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは１μ
ｅｑ／ｇないし０．３ｍｅｑ／ｇである。

【００３４】上記のように化３で示される化合物とエポ
キシ基を有するポリマーからエポキシ基を導入した場合
は、血小板，白血球などの粘着が少なく、血液の補体活
性や凝固因子活性も抑制されている。したがって抗血小
板抗体の吸着除去に際し血漿と血球成分とを分離した後
血漿から抗体を吸着して血漿と血球成分を再混合して患
者に返す必要がなく全血処理により一段階で抗体を吸着
することができる。この際の不織布の充填密度は０．６
ｇ／ｍｌ以下が好ましく、０．４ｇ／ｍｌ以下がより好
ましい。

【００３５】エポキシ基の導入された不織布への抗血小
板抗体との結合性を有する上記のようなペプチド類の固
定化に関しても種々の方法がある。この場合リガンドに
用いるペプチドや修飾ペプチドは比較的安定で低分子量
の物質であり、たとえば酵素や抗体のような高分子量の
タンパク質を固定化する場合と比較してその固定化反応
条件は制約が少なくなることも有利な要因の一つであ
る。したがって固定化方法については特に限定されるも
のではないが、以下のような方法によるものが好まし
い。

【００３６】通常は立体障害を小さくすることにより抗
体の吸着効率，結合性を向上させ、また非特異的吸着を
抑えることを目的として、親水性スペーサーを導入し
て、その末端にペプチド類を固定化するのが好ましい。
親水性スペーサーとしては導入したエポキシ基を利用で
きるものが好ましく、両末端にアミノ基またはカルボキ
シル基を有するポリエチレングリコールを用いることが
好ましいが、反応収率やその条件のマイルドな点からア
ミノ基の方がより好ましい。この場合のポリエチレング
リコールの分子量は１００ないし２００００、好ましく
は２００ないし１００００、さらに好ましくは５００な
いし５０００である。

【００３７】両末端にアミノ基あるいはカルボキシル基
を有するポリエチレングリコール（以下それぞれＰＥＯ
アミンおよびＰＥＯ酸と言う）を用いる場合、まず不織
布のエポキシ基とアルカリ条件下においてエポキシ基の
開環反応により結合させ、次にもう一方のアミノ基ある
いはカルボキシル基とペプチドのカルボキシル基または
アミノ基末端を縮合剤の存在下に縮合させてアミド基を
介した固定化を行なう。エポキシ基の開環反応を行なう
際に、アミノ基の場合には反応ｐＨは１０ないし１１が
好ましく、カルボキシル基の場合には１２ないし１３が
適当である。

【００３８】しかし化１あるいは化２から得られる誘導
体ポリマーと化３を用いてエポキシ基を導入した場合に
おいては、グラフトされたこれらの誘導体ポリマー自体
が親水性スペーサーの役割を果たしており、このことか
らも好ましいものである。すなわちグラフトされたこれ
らの誘導体ポリマーのエポキシ基とペプチドのアミノ基
末端を上記の方法により縮合させることによる固定化が
他の方法と比較して有利である。

【００３９】

【実施例】本発明におけるペプチド類のエポキシ基を導
入した不織布への導入方法は上記に述べたものを基本と
すれば特に限定されるものではない。以下に実施例を用
いて本発明を説明する。

【００４０】＜実施例１＞ Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−
Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖ
ａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｎの不織布への固定化 （１）ペプチドの合成 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における２０ないし３
８番目までに相当する領域であるＴｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅ
ｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ
−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−
Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｎの配列を有するペプチ
ドの合成をペプチドシンセサイザーＭｏｄｅｌ４３０Ａ
（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて固相合成
法により行なった。Ｃ末端のアスパラギンの結合した支
持体であるＰＡＭアスパラギン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓ
ｎ）０．５ｍｍｏｌ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて、Ｎ末端の方向に順に上記ペプチドシンセ
サイザーに掲載されている合成プログラムにより脱保護
基反応および縮合反応を繰返してペプチド鎖を延長し
た。すなわちＴＦＡおよびジクロロメタン（以下ＤＣＭ
と言う）により保護基であるｔ−ブトキシカルボニル基
の除去を行ない、ＤＣＭで洗浄し、ジイソプロピルエチ
ルアミンおよびＤＣＭで中和した後、ジメチルホルムア
ミド（以下ＤＭＦと言う）で洗浄しＤＣＣで縮合反応を
行ない、ＤＣＭで洗浄する操作を繰返した。アミノ酸は
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ（いずれもアプライ
ドバイオシステムズ社製）の２．０ｍｍｏｌのカートリ
ッジを用いた。

【００４１】（２）脱保護基，ペプチド鎖の切断 上記の反応が終了した支持体１ｇにチオアニソール１ｍ
ｌ，１，２−エタンジチオール０．５ｍｌを加えて１０
分間攪拌した後、氷水で冷やしながらＴＦＡ１０ｍｌを
加えて１０分間攪拌した。さらにＴＦＭＳＡ１ｍｌを加
えて室温で３０分間攪拌した。これにあらかじめ冷やし
ておいたジエチルエーテルを沈殿が現れなくなるまで加
えて攪拌し、ミディアム孔のガラスフィルターを用いて
ジエチルエーテルで共洗いしながら濾過し、ＴＦＡを加
えてペプチドを溶解してエーテル中に捕集した。エーテ
ル中のペプチドをファイン孔のガラスフィルターで濾過
し、ガラスフィルター上のペプチドを２Ｎ酢酸に溶解し
て、凍結乾燥を行ないクルードペプチドを得た。

【００４２】（３）ペプチドの精製 上記クルードペプチドを再度２Ｎ酢酸に溶解して、０．
２μｍのメンブレンフィルターで濾過した溶液をＨＰＬ
Ｃに供した。ＨＰＬＣはＭｏｄｅｌ１３０Ａシステム
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、カラムは
逆相系のＡｑｕａｐｏｒｅ Ｐｒｅｐ−１０，Ｃ８（ア
プライドバイオシステムズ社製）を用いた。移動相は
０．１％ＴＦＡを含む水をＡ液，０．１％ＴＦＡを含む
７０％アセトニトリル／水（ｖ／ｖ）をＢ液として、Ａ
液からＢ液への濃度直線勾配により溶出した。クロマト
ピークはほぼ単一なものが得られ、相当画分を分取し
た。分取を数回繰返し、これを凍結乾燥することにより
精製ペプチドを得た。得られたペプチドはＢＩＯＩＯＮ
２０マスアナライザー（アプライドバイオシステムズ社
製）により解析して目的ペプチドが得られていることを
確認した。

【００４３】（４）不織布の改質 化３においてＲ¹,Ｒ²,Ｒ³ が水素原子でありｎの値が９
であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ₂ ＝ＣＨ−Ｃ
ＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₉ −ＯＣ−ＣＨ₂ ＝ＣＨ₂ ）
１ｇおよび化１におけるＲがメチル基であるグリシジル
メタクリレート０．７５ｍｌを２００ｍｌのメタノール
に溶解し、１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径３．
５μｍのＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した後、５Ｍｒ
ａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不織布の両面
に照射した。電子線照射の終了した不織布を水およびメ
タノールで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。

【００４４】得られた不織布のエポキシ基含量の定量は
次のようにして行なった。不織布約２００ｍｇを精秤
し、０．１Ｎの塩酸−ジオキサン溶液１０ｍｌ，イオン
交換水約５０ｍｌを加えて６０℃で１時間加熱を行なっ
た。これによりエポキシ基は塩酸と反応し、エポキシ環
が開環すると同時に塩酸が消費される。エポキシ基と塩
酸の反応は１：１のモル比で進行するので消費された塩
酸の量がエポキシ基の含量に等しい。したがって加熱を
行なった試料を０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で滴定
することにより、消費された塩酸の量が算出される。こ
の消費された塩酸の量よりエポキシ基の量が得られる。
こうして得られた改質された不織布のエポキシ基の含量
は０．１２ｍｅｑ／ｇであった。

【００４５】（５）ペプチドの不織布への導入 （３）で得た精製ペプチド２５ｍｇをｐＨ１１の炭酸酸
緩衝液に溶解した後、上記の改質した不織布を加えて、
室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終了した不
織布を水で３回洗浄して、目的である捕集材を得た。ペ
プチドの固定化率は反応残液中の窒素含量をマイクロケ
ルダール法により定量して算出し８０％が導入されてい
た。

【００４６】（６）ペプチド固定化捕集材の性能評価 上記捕集材のＣＤ４＋細胞との結合性をヒト血液を用い
て評価した。一辺７ｃｍの菱形のポリカーボネート製モ
ジュールケースの形状およびその大きさに切断した上記
捕集材を２０枚充填したカラムを組立て、１００Ｕ／ｍ
ｌのヘパリンを含む生理食塩水１００ｍｌ、次いで１Ｕ
／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩水１００ｍｌでカラム
内および血液回路内を洗浄した。一方クエン酸を添加し
たヒト血液１００ｍｌをビーカーに取り、カラムを通し
て再びビーカーに戻すような血液回路を組み、この装置
を用いて血液流量３０ｍｌ／分で１時間連続して潅流実
験を行なった。

【００４７】本処理を行なう前後の血清中のＣＤ４＋細
胞およびＣＤ８＋細胞数の変化をフローサイトメトリー
法により定量した。細胞はＦｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ
法により調製を行ない、フルオレセインイソチオシアネ
ートで標識したＬｅｕ３ａおよびＬｅｕ２ａ抗体を用い
て実施した。またフローサイトメトリーはＥＰＩＣＳ−
ＰＲＯＦＩＬＥ２（コールター社製）を用いた。結果は
表１に示す通りであり、本処理を行なう前と比較した各
細胞数の減少率［％］で示した。またアルブミンの非特
異的吸着に関しても、アルブミンＢーテストワコー（和
光純薬工業製）を用いて定量した。結果は表１に示す通
りであり吸着率［％］で示した。また血小板の粘着性に
ついても本処理を行なう前後の血小板数をコールターカ
ウンターＺＭ型（コールターエレクトロニクス社製）を
用いて定量することにより調べた。結果は表１に示す通
りであり血小板数の減少率［％］で示した。

【００４８】

【表１】

【００４９】＜実施例２＞ Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−
Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａ
ｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒの不織
布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における４６ないし６
０番目までに相当する領域であるＧｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒの
配列を有するペプチドの合成に関してもＰＡＭセリン
（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））（アプライドバ
イオシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃ
ｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙ
ｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚｌ）（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）
を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終了し
た支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬ
Ｃによる精製および同定についても実施例１と同様にし
て行なった。

【００５０】化２においてＲが水素原子であり、ｎの値
が１である化合物１０ｍｌ，Ｎ−イソプロピルアクリル
アミド４０ｇ，アリルアミン２ｍｌ，アゾイソブチルニ
トリル０．４ｇをエタノール１６０ｍｌに窒素存在下で
攪拌しながら溶解し、さらに３０分間窒素を送って系内
を完全に窒素置換した。さらに５０℃の湯浴中にて窒素
存在下で２時間の攪拌により重合を行なった。沈殿物を
５０ないし６０℃の蒸留水で洗浄して、デカンテーショ
ンにより水を除去した後４０℃にて減圧乾燥してエポキ
シ基を含有するポリマーを得た。

【００５１】上記ポリマー３ｇをメチレンビスアクリル
アミド０．５ｇとともにメタノール１５０ｍｌに溶解
し、実施例１と同様に１５ｃｍ平方の大きさに切断した
繊維径３．５μｍのＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した
後、５Ｍｒａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不
織布の両面に照射した。電子線照射の終了した不織布を
水およびメタノールで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。
得られた不織布のエポキシ基含量の定量を実施例１と同
様にして行なったところ、０．０７７ｍｅｑ／ｇであっ
た。

【００５２】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ１１の炭酸緩衝液に溶解した後、上記の改質した不
織布を加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反
応の終了した不織布を水で３回洗浄して、目的である捕
集材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の窒素含
量をマイクロケルダール法により定量して算出し７１％
が導入されていた。得られた捕集材の性能評価を実施例
１と同様にして、カラムを組立てた後ヒト血液を用いた
潅流実験により行なった。処理後の血清中のＣＤ４＋細
胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン量を実施例１と
同様にして定量した。結果を表１に減少率［％］で示し
た。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討した
結果を表１に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５３】＜実施例３＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−
Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における８５ないし１
０１番目までに相当する領域であるＧｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ
−Ｐｒｏ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関し
てもＰＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４ＣＨ₃ Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｐｒｏ（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）
を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終了し
た支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬ
Ｃによる精製および同定についても実施例１と同様にし
て行なった。

【００５４】分子量１０００のＰＥＯアミン３０ｇをｐ
Ｈ１１の炭酸酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後、実施例
１と同様にして得たエポキシ基を導入（０．１３ｍｅｑ
／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯアミン溶液
中で室温で振盪させることにより２４時間反応させた。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥＯアミンを
導入した不織布を得た。アミノ基含量はの定量は水酸化
ナトリウム水溶液による滴定により行ない０．０６８ｍ
ｅｑ／ｇであった。

【００５５】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ４．５のクエ
ン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行ない、ＥＤＣ１０ｍｇ
を加えて氷冷しながら３０分間攪拌した。さらに上記の
ＰＥＯアミンの導入された不織布を加えて、室温で２４
時間振盪して反応させた。反応の終了した不織布を水で
３回洗浄して、目的である捕集材を得た。ペプチドの固
定化率を実施例１と同様にして求め７８％が導入されて
いた。得られた吸着材の性能評価を実施例１と同様にし
て、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅流
実験により行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体量
およびアルブミン量を実施例１と同様にして定量した。
結果をそれぞれ表１に吸着率［％］で示した。血小板粘
着性についても実施例１と同様に検討した結果を表１に
血小板数の減少率［％］で示した。

【００５６】＜実施例４＞ Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−
Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の重鎖の可変領域における９４ないし１
０３番目までに相当する領域であるＴｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｙ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関してもＰ
ＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ））
（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ，
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４ＣＨ₃ Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃ
ｌ−Ｚ），（いずれもアプライドバイオシステムズ社
製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終
了した支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系Ｈ
ＰＬＣによる精製および同定についても実施例１と同様
にして行なった。

【００５７】分子量５０００のＰＥＯアミン６ｇをｐＨ
１１の炭酸酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後、実施例２
と同様にして得たエポキシ基を導入（０．０７１ｍｅｑ
／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯアミン溶液
中で室温で振盪させることにより２４時間反応させた。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥＯアミンを
導入した不織布を得た。アミノ基含量はの定量は水酸化
ナトリウム水溶液による滴定により行ない０．０５０ｍ
ｅｑ／ｇであった。

【００５８】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である捕集材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
７１％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価は
実施例１と同様のカラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液
を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の抗
血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様にし
て定量した。結果をそれぞれ表１に吸着率［％］で示し
た。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討した
結果を表１に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５９】

【比較例】

＜比較例１＞ Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−
Ｍｅｔ−Ａｓｎの不織布への固定化 実施例１で得たＴｈｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−
Ｍｅｔ−Ａｓｎの綿不織布への導入を次のようにして実
施した。１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径１２μ
ｍの綿不織布３０枚に、イオン交換水１００ｍｌ，２Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液２００ｍＬ，エピクロルヒドリ
ン８０ｍｌを加えて、室温で振盪により２４時間反応さ
せた。反応終了後不織布を水で３回洗浄して、エポキシ
基の導入された不織布を得た。エポキシ基含量は実施例
１と同様にして定量を行ない０．１５ｍｅｑ／ｇであっ
た。

【００６０】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ１１の炭酸緩
衝液５００ｍｌに溶解して、上記エポキシ基導入不織布
を加えて室温にて振盪により２４時間反応を行なった。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して目的の捕集材を得
た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め８
０％が導入されていた。得られた捕集材の性能評価を実
施例１と同様にして、カラムを組立てた後ヒト血液を用
いた潅流実験により行なった。処理後の血清中のＣＤ４
＋細胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン量を実施例
１と同様にして定量した。結果を表１に減少率［％］で
示した。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討
した結果を表１に血小板数の減少率［％］で示した。

【００６１】＜比較例２＞ Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−
Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｔｈｒの不織布への固定化 抗Ｌｅｕ３抗体の軽鎖の可変領域における１０ないし２
０番目までに相当する領域であるＳｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌ
ａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ
−Ａｌａ−Ｔｈｒの配列を有するペプチドの合成に関し
て、ＰＡＭトレオニン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ・Ｈ₂Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｇｌｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれも
アプライドバイオシステムズ社製）を用いて実施例１と
同様にして実施した。このペプチド領域も親水性の比較
的大きな領域である。合成の終了した支持体の脱保護
基，ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製およ
び同定についても実施例１と同様にして行なった。

【００６２】比較例１と同じ条件を用いてエポキシ基を
導入（０．１８ｍｅｑ／ｇ）した綿不織布に、上記ペプ
チドの綿不織布への導入を比較例１と同じ反応条件によ
り行なった。ペプチドの固定化率は実施例１と同様にし
て求め８０％が導入されていた。得られた捕集材の性能
評価は実施例１と同様にして、カラムを組立てた後ヒト
血液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中
のＣＤ４＋細胞，ＣＤ８＋細胞の量およびアルブミン量
を実施例１と同様にして定量した。結果を表１に減少率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表１に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００６３】

【発明の効果】本発明により血液中のＣＤ４＋細胞と効
果的に結合させることが可能であり、体外循環療法など
により生体内の免疫系バランスを制御することにより種
々の自己免疫疾患の治療へ適用することが可能である。
本発明におけるＣＤ４＋細胞捕集材を用いた血液浄化療
法は他と比較しても副作用もなく安全であり、保存によ
る安定性の面でも非常に優れている。不織布を利用する
ことにより従来のような血漿分離を必要としない全血処
理による体外循環が可能であることも大きな特徴であ
る。またエポキシ基が存在することによりリガンドであ
るペプチド類の導入も容易である。さらにはオートクレ
ーブ処理による蒸気滅菌を行なってもリガンドとしての
活性の低下がほとんどない点でも医療機材として有利で
ある。

フロントページの続き (72)発明者 田中 昌和 滋賀県大津市堅田二丁目１番１号 東洋紡 績株式会社総合研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 表面にエポキシ基を有している平均繊維
   径が１ないし３０μｍの繊維からなる不織布に、抗ＣＤ
   ４抗体における重鎖または軽鎖の可変領域を構成してい
   るアミノ酸配列中の相補性決定領域を形成しうるアミノ
   酸配列のペプチドまたはその修飾ペプチドを固定化した
   ことを特徴とするＣＤ４陽性細胞捕集材。
2. 【請求項２】 請求項第１項記載の修飾ペプチドが、抗
   ＣＤ４抗体の重鎖または軽鎖の可変領域を構成するアミ
   ノ酸配列において相補性決定領域を形成している領域の
   うちの少なくとも１つを含んでおり、その両端または片
   端がアミノ酸，ペプチドまたは−Ａ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ
   −（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯ，ｎは１ないし２０の整
   数）で示されるもののいずれかがペプチド結合により結
   合しているもので、全アミノ酸残基数が７０個以内であ
   ることを特徴とするＣＤ４陽性細胞捕集材。