JPH06218050A - 抗血小板抗体吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液の体外循環療法などににより、何らか
の原因で生じた抗血小板抗体を除去することが可能な、
抗血小板抗体との結合性を有するペプチドまたは修飾ペ
プチドを不織布に固定化した抗血小板抗体吸着材を提供
する。 【構成】 エポキシ基を有した平均繊維径が１ないし
３０μｍの不織布に、抗血小板抗体との結合性を有する
ペプチドまたは修飾ペプチドを固定化したことを特徴と
する抗血小板抗体吸着材およびその製法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は何らかの原因により血液
中に産生された自己抗体である抗血小板抗体を、特定の
アミノ酸配列を含有しているペプチドまたはそのペプチ
ド領域を含む有機化合物（修飾ペプチド）を固定化した
不織布を用いて、血液の体外循環治療を行なうことによ
り血液中の抗血小板抗体と結合させることを特徴とする
抗血小板抗体の除去が可能である抗血小板抗体吸着材に
関するものである。本発明は主として抗血小板抗体の存
在による血小板数の減少に起因して、出血，紫斑などの
諸症状をもたらす特発性血小板減少性紫斑病（以下ＩＴ
Ｐと言う）のような疾患に関する治療において非常に有
用なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＩＴＰは自己免疫疾患の一種であり、血
小板寿命の短縮，血小板結合免疫グロブリンである抗血
小板抗体の増加を特徴としている。骨髄では巨核球数は
正常あるいは増加を示し、他の血液疾患の存在を示唆す
る所見を認めない免疫性の血小板減少症のうち膠原病，
リンパ増殖性疾患，薬剤アレルギーなどの原因疾患の認
められないものを指す。

【０００３】ＩＴＰは急性型と慢性型に大別される。急
性型は小児に多く見られ、出血症状は激しいが比較的治
癒はしやすい。発症３週間以前に上気道感染，ウイルス
感染などの先行感染が認められることが多い。感染の回
復期に血小板減少を認めることから、形成された免疫複
合体が血小板膜Ｆｃ受容器に結合し、血小板が非特異的
に破壊される免疫複合病の可能性が強い。一方慢性型は
出血症状は弱いが長期間持続し、成人で特に２０才代の
女性に多く、抗血小板抗体による自己免疫病と考えられ
ているものである。

【０００４】抗血小板抗体による血小板数の減少により
見られる症状には個人差があるが、一般的には血小板数
５００００個／μｌ以上では通常出血症状は見られず、
３００００ないし５００００個／μｌでは外傷時の易出
血性，斑状出血，１００００ないし３００００個／μｌ
では露出部への紫斑の出現，月経過多，１００００個／
μｌ以下では血尿，不正性器出血，鼻出血，歯肉出血が
認められ、頭蓋内出血，消化管出血がしばしば直接の死
因となっている。

【０００５】ＩＴＰの治療に際してはその症状の程度に
応じて副腎皮質ホルモン剤の投与，脾臓の摘出，免疫抑
制剤の投与などが適用される。しかしこうした薬物療法
や摘脾手術を行なっても血小板数が効果的には回復しな
いような症例も多く確認されている。ＩＴＰをはじめほ
とんどの自己免疫疾患の発生に関するメカニズムはまだ
十分な解明がなされておらず、したがって治療方法に関
しても絶対的なものは確立されていないのが現状であり
対策が急がれている。

【０００６】こうした自己免疫疾患の治療方法として、
免疫吸着カラムを用いた血液の体外循環による自己抗体
の吸着除去も種々試みられている。たとえば免疫グロブ
リンと結合性を有するプロテインＡを担体に固定化した
カラムの適用も検討されている。しかしプロテインＡは
高価であり、他の有用成分の非特異的吸着を抑えられな
いことや、さらには種々の副作用が生ずる症例も確認さ
れていることからあまり有用なものとは言えない。また
除去対象物質に対する抗体の固定化カラムも種々検討さ
れているが、安全性，保存安定性の問題，抗原抗体反応
が有効に作用できるような固定化が困難なこと，滅菌方
法が限定されるなどの理由から医用機材として用いるに
は多くの課題が残されている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は血液中の抗血
小板抗体を認識して結合性を有するようなペプチドある
いは修飾ペプチドを固定化した不織布を提供して、これ
を充填したカラムを用いた血液の体外循環を行なうこと
を主な目的とする。こうして抗血小板抗体を特異的に結
合させ除去することにより、特にＩＴＰのような難治性
の疾患を治療しようとするものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は抗血小板抗体の抗原決定基を形成しうるアミノ酸配
列を有したペプチドあるいは修飾ペプチドを固定化した
特定の不織布を、血液浄化吸着材として体外循環療法に
用いることによる抗血小板抗体の除去を要旨とするもの
である。

【０００９】一般にＩＴＰ患者における抗血小板抗体は
血小板膜表面に存在する糖タンパク質の複合体であるＧ
Ｐ２ｂ／３ａやＧＰ１ｂ／９に対する抗体である場合が
多いことが知られている。本発明において固定化される
ペプチド領域は上記血小板膜糖タンパク質の一次構造か
ら種々の方法により抗原決定基となりうる領域を予測お
よびスクリーニングすることにより得られたものであ
る。

【００１０】ＧＰ２ｂとＧＰ３ａは骨髄中の骨髄巨核球
またはその前駆細胞において複合体を形成する。血小板
膜表面においてＧＰ２ｂとＧＰ３ａは非共有結合により
１：１の複合体を形成している。ＧＰ２ｂにおける５５
８ないし７４７番目のアミノ酸残基の部分とＧＰ３ａに
おける１１４ないし３０３番目のアミノ酸残基の部分と
で会合していることが推定されている（医学のあゆみ，
１６０，６８１，１９９２）。ＧＰ２ｂ／３ａは血小板
膜表面上に最も多く存在している糖タンパク質である。

【００１１】またＧＰ１ｂはα鎖およびβ鎖から成り、
血小板膜表面においてＧＰ９と非共有的に結合して複合
体を形成すると考えられている（医学のあゆみ，１６
０，６７７，１９９２）。ＧＰ１ｂ／９は非活性状態の
血小板が内皮下組織に存在するｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒ
ａｎｄ因子を認識する際の膜受容体であり、血小板血栓
形成のごく初期段階を制御する分子として重要と考えら
れている。

【００１２】ＧＰ３ａは分子量約１０５キロダルトンの
１本のポリペプチドから成る糖タンパク質であり、すで
にｃＤＮＡがクローニングされている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２６２，３９３９，１９８７）。７６２個
のアミノ酸残基から構成されており、Ｎ末端部には２６
アミノ酸残基から成るシグナルペプチドが存在する。細
胞外の部分は６８９個，膜貫通ドメインは２９個，細胞
質内は４１個のアミノ酸が存在する。４６０ないし６２
７番目のアミノ酸残基から成る領域には３３ないし３８
個のアミノ酸より成るシステインリッチなドメインの繰
返しが４ヵ所存在する。

【００１３】ＧＰ２ｂは分子量が約１４０キロダルトン
であり、約１２５キロダルトンのＨ鎖と約２５キロダル
トンのＬ鎖から構成されておりこれらがＳＳ結合により
結合している。１０３９個のアミノ酸残基から成りその
配列が決定されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２
６２，８４７６，１９８７）。Ｈ鎖には８７１個、Ｌ鎖
には１３７個およびＮ末端部には３０アミノ酸残基から
成るシグナルペプチドが存在する。膜貫通ドメインはＬ
鎖内に存在し２６個の疎水性アミノ酸より構成される。

【００１４】ＧＰ１ｂ／９はＧＰ１ｂα鎖，β鎖，ＧＰ
９の３つのサブユニットから構成され、非活性化状態の
血小板が内皮下組織に存在するｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒ
ａｎｄ因子を認識する際の膜受容体であり血小板血栓形
成のごく初期段階を制御する分子として重要と考えられ
ている。α鎖とβ鎖はＳＳ結合で結ばれており、分子量
はそれぞれ１４０キロダルトンと２４キロダルトンであ
る。ＧＰ９は１７ないし１８キロダルトンであり、非共
有結合的にＧＰ１ｂに結合していると考えられる（医学
のあゆみ，１６０，６７７，１９９２）。いずれについ
てもアミノ酸配列が決定されており、α鎖は６１０個
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８
４，５６１５，１９８７）、β鎖は１８１個（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，２１
３５，１９８８）、ＧＰ９は１６０個（Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，６７７３，１
９８９）のアミノ酸残基から成る。

【００１５】上記の各糖タンパク質に関する抗血小板抗
体に対する免疫原性を有するペプチドとしては、最も多
く存在しているＧＰ２ｂ／３ａを例にするとＧＰ３ａの
アミノ酸配列中において、６８ないし７８番目に相当す
るＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，３４９ない
し３６４番目のＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ
−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ，４７５な
いし４９０番目のＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａ
ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ，６１９
ないし６２３番目のＬｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−
Ｇｌｕ，７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａｌａ−Ａ
ｓｎ−Ａｓｎの５つの領域がエンザイムイムノアッセイ
（以下ＥＬＩＳＡ法と言う）により確認された領域であ
る。これらの領域はいずれも親水性の比較的強い領域で
あり、ＧＰ３ａ分子表面に存在している領域であること
が推定される。またＧＰ２ｂに関してはＧｌｕ−Ｔｈｒ
−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（１０６な
いし１１２番目），Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−
Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（１４８ない
し１５６番目），Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（８９６ないし９０３番
目）の３つの領域が抗血小板抗体に対して免疫原性を有
している。これらも親水性の強い領域であり分子表面に
存在することが推定される。またＧＰ１ｂ／９に関して
も数種のペプチドについて抗血小板抗体に対する免疫原
性が確認されている。

【００１６】上記に示した領域は抗血小板抗体との結合
に最小限必要な領域であると考えられる。実際にこうし
たペプチドを用いて抗血小板抗体を除去することを行な
う場合には、血液中に存在する抗血小板抗体との反応様
式に近い状態を再現する必要がある。また血液中に存在
する場合の構造の安定性や水和性、あるいは担体に固定
化する場合には水系溶媒に対する溶解性を大きくしたり
することを考慮する必要があることが多い。

【００１７】そこで上記に示したペプチド領域の一方の
末端または両末端の領域を各タンパク質のアミノ酸配列
に従って領域を延長したり、たとえばリジンのような水
溶性を大きくするようなアミノ酸を数個末端に結合させ
たり、システインのようなアミノ酸を末端に結合させて
担体に固定化しやすくするなどすることが好ましい。実
際に用いるペプチドまたは修飾ペプチドの全アミノ酸残
基数としては６０個以内であることが好ましいが、合成
の困難さやコスト，安定性などを考慮すると３０個以内
がより好ましい。さらに免疫原性を発現するのに要する
高次構造の形成しやすさなども考慮すると１０ないし２
５個までが最適であると言える。

【００１８】また固定化反応や安定性などを考慮して、
たとえばＮ末端をアミド化したり、末端に適当な官能基
を導入したりして上記ペプチドを修飾した有機化合物を
用いることも好ましい。また複数のペプチドを−Ａ−
（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ−（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯを示す）
で示されるような側鎖を用いて結合させたものも抗血小
板抗体との結合性をより高めることが可能である。この
場合のｎの値は１ないし２０が好ましく３ないし１０が
より好ましい。

【００１９】ペプチドの合成の方法については特に限定
されないが、液相合成法よりも固相合成法を適用する方
が操作が簡単である。この場合有機溶媒に不溶性である
支持体に合成するペプチドのＣ末端に対応するアミノ酸
を結合させ、Ｎ末端方向にαカルボキシル基以外のαア
ミノ基などの官能基を保護した対応するアミノ酸を順に
縮合反応により結合させた後、結合した後その保護基を
脱離させる反応を交互に繰返すことによりペプチド鎖を
延長させる。

【００２０】目的とするペプチドを得た後、ペプチド鎖
を支持体から切断および脱保護基を行なう。これにはフ
ッ化水素がしばしば用いられるが、安全性，取扱いやす
さの点からトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭ
ＳＡと言う）を用いるのが適当である。チオアニソー
ル，１，２−エタンジチオールとＴＦＭＳＡ中で反応さ
せ脱保護基を行なった後、トリフルオロ酢酸（以下ＴＦ
Ａと言う）により支持体からの切断を行ないペプチドを
回収する。これを凍結乾燥することによりクルードペプ
チドが得られる。

【００２１】上記クルードペプチドは逆相系カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと言う）
に供することにより分取，精製を行なう。ＨＰＬＣ条件
は通常タンパク質の精製に用いる系を基本として最適化
を行なうのがよい。得られたクロマトピークに相当する
画分を分取しこれを凍結乾燥する。得られた精製ペプチ
ド画分についてマススペクトル分析による分子量解析，
アミノ酸組成分析あるいはアミノ酸配列解析などにより
同定を行なう。

【００２２】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥ
Ｔ），ポリプロピレン（ＰＰ），ポリエチレン（Ｐ
Ｅ），ポリアミド，セルロース（綿）およびレーヨンな
どが挙げられるが、改質の容易さや改質後の強度保持性
を考慮すると、ＰＥＴ，ＰＥ，綿またはレーヨンが好ま
しい。

【００２３】不織布にエポキシ基を導入する方法は種々
のものが挙げられる。たとえばＰＰ，ＰＥの場合には、
あらかじめエポキシ基を有するビニル化合物たとえば化
１および化２で表わされるようなグリシジルメタクリレ
ートやグリシジルアミノプロピルアクリレートなどの化
合物を共重合して不織布を製造する方法がある。またこ
れらの素材に電子線，紫外線またはオゾンを照射してラ
ジカルやイオンを発生させ、化１または化２のようなエ
ポキシ基を有するビニル化合物をグラフト重合させる方
法がある。この場合他のビニルモノマーを共存させても
よい。

【００２４】

【化１】

【００２５】

【化２】 上記化１、化２においてＲは水素またはメチル基を示
し、ｎは１ないし５の数を示す。

【００２６】綿やレーヨンの場合には過ヨウ素酸により
酸化してそのグリコール部位を開裂させてアルデヒド基
を導入して、さらにアンモニア，エチレンジアミン，ヘ
キサメチレンジアミン，ポリエチレンイミンのような少
なくとも一級のアミノ基を１個以上有する化合物を反応
させてシッフ塩基を形成し、これを還元してアミノ基を
導入した後、エピクロルヒドリン，エピブロムヒドリン
などによる処理を行なうことによりエポキシ基を導入す
るのがよい。なおポリエチレンイミンを用いる場合の分
子量は１００ないし１００万が好ましく、２００ないし
１０万がより好ましい。

【００２７】さらに電子線照射によりエポキシ基を導入
する方法としては、化１または化２のようなエポキシ基
を有するビニル化合物を直接または適当な溶媒に溶解し
た後乾燥させ電子線を照射する方法がある。この際にビ
ニル化合物の沸点が低いと乾燥条件で蒸発しグラフト量
の制御が困難であり、この場合には高沸点化合物と混合
して塗布し蒸発を抑えることが好ましい。混合する高沸
点の溶媒としてはエチレングリコール，ジエチレングリ
コール，重合度１０以下のポリエチレングリコール，，
グリセリンなどの多価アルコール類が特に好ましい。

【００２８】また化１および化２で例示されるエポキシ
基を有するビニル化合物のグラフト効率を上げるため
に、多官能性の架橋性ビニル化合物と混合して用いるこ
とが好ましい。これらの架橋性ビニル化合物としては、
メチレンビスアクリルアミド，トリメチロールプロパン
ジアクリレート，トリメチロールプロパントリアクリレ
ート，テトラメチロールメタンテトラアクリレート，ト
リアリルイソシアヌレートのようなビニル基を複数個有
するモノマーの他に、化３のような一般式で示される化
合物が挙げられる。

【００２９】これらの架橋性化合物のうちで化３を用い
た場合がエポキシ基の導入率が最も良好で、エポキシ基
含量を自在に制御することも可能である。化３における
Ｒ¹,Ｒ²,Ｒ³ はそれぞれ水素原子またはメチル基を示
す。またｎは１ないし３００の整数を示す。

【００３０】

【化３】

【００３１】さらに化３と化１および化２で示される化
合物とを混合して用いることによりグラフトしてエポキ
シ基を導入することができる。化３におけるｎの値は２
ないし１５０であることが好ましく、５ないし７０であ
ることがさらに好ましい。

【００３２】これらの化合物を塗布するための溶液の濃
度は０．１ないし２０％、好ましくは０．５ないし１０
％であり、用いる溶媒は架橋性化合物とエポキシ基を含
有する化合物の両方を溶解する溶媒であればすべて使用
できるが、水，メタノール，エタノール，塩化メチレ
ン，クロロホルム，アセトン，ジオキサン，テトラヒド
ロフランまたはこれらの混合溶媒を用いることができ
る。エポキシ基を有する化合物と架橋性化合物との混合
比は５０：１ないし１：５０、好ましくは３０：１ない
し１：３０である。

【００３３】不織布へのエポキシ基の導入方法を種々検
討したところ、化１，化２の単位を１０モル％以上を含
有させて他のビニル化合物と共重合させて得られるポリ
マーと化３で示される化合物とを混合して不織布に塗布
した後、電子線照射によりグラフトさせる方法が簡便で
強度低下などの劣化が少ないことから特に好ましい。こ
の場合に用いられる不織布の素材としてはＰＥＴ，Ｐ
Ｅ，レーヨンおよび綿が好ましく、特にＰＥＴが好まし
い。照射線量は１ないし２０Ｍｒａｄが好ましく、２な
いし１０Ｍｒａｄがさらに好ましい。

【００３４】このようにして導入されるエポキシ基の含
量は１μｅｑ／ｇないし５ｍｅｑ／ｇ、好ましくは１０
μｅｑ／ｇないし３ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは３０
μｅｑ／ｇないし２ｍｅｑ／ｇである。こうして導入さ
れたエポキシ基のペプチド固定化後の残存量は、血小板
のような血球成分の粘着を抑えるためには０．１μｅｑ
／ｇないし１ｍｅｑ／ｇであり、好ましくは０．５μｅ
ｑ／ｇないし０．５ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは１μ
ｅｑ／ｇないし０．３ｍｅｑ／ｇである。

【００３５】上記のように化３で示される化合物とエポ
キシ基を有するポリマーからエポキシ基を導入した場合
は、血小板，白血球などの粘着が少なく、血液の補体活
性や凝固因子活性も抑制されている。したがって抗血小
板抗体の吸着除去に際し血漿と血球成分とを分離した後
血漿から抗体を吸着して血漿と血球成分を再混合して患
者に返す必要がなく全血処理により一段階で抗体を吸着
することができる。この際の不織布の充填密度は０．６
ｇ／ｍｌ以下が好ましく、０．４ｇ／ｍｌ以下がより好
ましい。

【００３６】エポキシ基の導入された不織布への抗血小
板抗体との結合性を有する上記のようなペプチド類の固
定化に関しても種々の方法がある。この場合リガンドに
用いるペプチドや修飾ペプチドは比較的安定で低分子量
の物質であり、たとえば酵素や抗体のような高分子量の
タンパク質を固定化する場合と比較してその固定化反応
条件は制約が少なくなることも有利な要因の一つであ
る。したがって固定化方法については特に限定されるも
のではないが、以下のような方法によるものが好まし
い。

【００３７】通常は立体障害を小さくすることにより抗
体の吸着効率，結合性を向上させ、また非特異的吸着を
抑えることを目的として、親水性スペーサーを導入し
て、その末端にペプチド類を固定化するのが好ましい。
親水性スペーサーとしては導入したエポキシ基を利用で
きるものが好ましく、両末端にアミノ基またはカルボキ
シル基を有するポリエチレングリコールを用いることが
好ましいが、反応収率やその条件のマイルドな点からア
ミノ基の方がより好ましい。この場合のポリエチレング
リコールの分子量は１００ないし２００００、好ましく
は２００ないし１００００、さらに好ましくは５００な
いし５０００である。

【００３８】両末端にアミノ基あるいはカルボキシル基
を有するポリエチレングリコール（以下それぞれＰＥＯ
アミンおよびＰＥＯ酸と言う）を用いる場合、まず不織
布のエポキシ基とアルカリ条件下においてエポキシ基の
開環反応により結合させ、次にもう一方のアミノ基ある
いはカルボキシル基とペプチドのカルボキシル基または
アミノ基末端を縮合剤の存在下に縮合させてアミド基を
介した固定化を行なう。エポキシ基の開環反応を行なう
際に、アミノ基の場合には反応ｐＨは１０ないし１１が
好ましく、カルボキシル基の場合には１２ないし１３が
適当である。

【００３９】しかし化１あるいは化２から得られる誘導
体ポリマーと化３を用いてエポキシ基を導入した場合に
おいては、グラフトされたこれらの誘導体ポリマー自体
が親水性スペーサーの役割を果たしており、このことか
らも好ましいものである。すなわちグラフトされたこれ
らの誘導体ポリマーのエポキシ基とペプチドのアミノ基
末端を上記の方法により縮合させることによる固定化が
他の方法と比較して有利である。

【００４０】

【実施例】本発明におけるペプチド類のアミノ基を導入
した不織布への導入方法は上記に述べたものを基本とす
れば特に限定されるものではない。以下に実施例を用い
て本発明を説明する。

【００４１】＜実施例１＞ Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの不織布への固定化 （１）ペプチドの合成 ＧＰ３ａにおいて免疫原性を有する６８ないし７８番目
までの領域のＮ末端にリジン残基を２個結合させたＬｙ
ｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの
配列を有するペプチドの合成をペプチドシンセサイザー
Ｍｏｄｅｌ４３０Ａ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて固相合成法により行なった。Ｃ末端のセリ
ンの結合した支持体であるＰＡＭセリン（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））０．５ｍｍｏｌ（アプライドバ
イオシステムズ社製）を用いて、Ｎ末端の方向に順に上
記ペプチドシンセサイザーに掲載されている合成プログ
ラムにより脱保護基反応および縮合反応を繰返してペプ
チド鎖を延長した。すなわちＴＦＡおよびジクロロメタ
ン（以下ＤＣＭと言う）により保護基であるｔ−ブトキ
シカルボニル基の除去を行ないＤＣＭで洗浄し、ジイソ
プロピルエチルアミンおよびＤＣＭで中和した後、ジメ
チルホルムアミド（以下ＤＭＦと言う）で洗浄し、ＤＣ
Ｃで縮合反応を行ない、ＤＣＭで洗浄する操作を繰返し
た。アミノ酸はｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ
（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）の２．０
ｍｍｏｌのカートリッジを用いた。

【００４２】（２）脱保護基，ペプチド鎖の切断 上記の反応が終了した支持体１ｇにチオアニソール１ｍ
ｌ，１，２−エタンジチオール０．５ｍｌを加えて１０
分間攪拌した後、氷水で冷やしながらＴＦＡ１０ｍｌを
加えて１０分間攪拌した。さらにＴＦＭＳＡ１ｍｌを加
えて室温で３０分間攪拌した。これにあらかじめ冷やし
ておいたジエチルエーテルを沈殿が現れなくなるまで加
えて攪拌し、ミディアム孔のガラスフィルターを用いて
ジエチルエーテルで共洗いしながら濾過し、ＴＦＡを加
えてペプチドを溶解してエーテル中に補集した。エーテ
ル中のペプチドをファイン孔のガラスフィルターで濾過
し、ガラスフィルター上のペプチドを２Ｎ酢酸に溶解し
て、凍結乾燥を行ないクルードペプチドを得た。

【００４３】（３）ペプチドの精製 上記クルードペプチドを再度２Ｎ酢酸に溶解して、０．
２μｍのメンブレンフィルターで濾過した溶液をＨＰＬ
Ｃに供した。ＨＰＬＣはＭｏｄｅｌ１３０Ａシステム
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、カラムは
逆相系のＡｑｕａｐｏｒｅ Ｐｒｅｐ−１０，Ｃ８（ア
プライドバイオシステムズ社製）を用いた。移動相は
０．１％ＴＦＡを含む水をＡ液，０．１％ＴＦＡを含む
７０％アセトニトリル／水（ｖ／ｖ）をＢ液として、Ａ
液からＢ液への濃度直線勾配により溶出した。クロマト
ピークはほぼ単一なものが得られ、相当画分を分取し
た。分取を数回繰返し、これを凍結乾燥することにより
精製ペプチドを得た。得られたペプチドはＢＩＯＩＯＮ
２０マスアナライザー（アプライドバイオシステムズ社
製）により解析して目的ペプチドが得られていることを
確認した。

【００４４】（４）不織布の改質 化３においてＲ¹,Ｒ²,Ｒ³ が水素原子でありｎの値が９
であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ₂ ＝ＣＨ−Ｃ
ＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₉ −ＯＣ−ＣＨ₂ ＝ＣＨ₂ ）
１ｇおよび化１におけるＲがメチル基であるグリシジル
メタクリレート０．７５ｍｌを２００ｍｌのメタノール
に溶解し、１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径３．
５μｍのＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した後、５Ｍｒ
ａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不織布の両面
に照射した。電子線照射の終了した不織布を水およびメ
タノールで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。

【００４５】得られた不織布のエポキシ基含量の定量は
次のようにして行なった。不織布約２００ｍｇを精秤
し、０．１Ｎの塩酸−ジオキサン溶液１０ｍｌ，イオン
交換水約５０ｍｌを加えて６０℃で１時間加熱を行なっ
た。これによりエポキシ基は塩酸と反応し、エポキシ環
が開環すると同時に塩酸が消費される。エポキシ基と塩
酸の反応は１：１のモル比で進行するので消費された塩
酸の量がエポキシ基の含量に等しい。したがって加熱を
行なった試料を０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で滴定
することにより、消費された塩酸の量が算出される。こ
の消費された塩酸の量よりエポキシ基の量が得られる。
こうして得られた改質された不織布のエポキシ基の含量
は０．１１ｍｅｑ／ｇであった。

【００４６】（５）ペプチドの不織布への導入 （３）で得た精製ペプチド２５ｍｇをｐＨ１１の炭酸酸
緩衝液に溶解した後、上記の改質した不織布を加えて、
室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終了した不
織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を得た。ペ
プチドの固定化率は反応残液中の窒素含量をマイクロケ
ルダール法により定量して算出し７８％が導入されてい
た。

【００４７】（６）ペプチド固定化吸着材の性能評価 上記吸着材における上記のＩＴＰ患者の血液を用いて抗
血小板抗体の吸着性能を評価した。一辺７ｃｍの菱形の
ポリカーボネート製モジュールケースの形状およびその
大きさに切断した上記吸着材を２０枚充填したカラムを
組立て、１００Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩水１
００ｍｌ、次いで１Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩
水１００ｍｌでカラム内および血液回路内を洗浄した。
一方クエン酸を添加したＩＴＰ患者の血液（５種類）１
００ｍｌをビーカーに取り、カラムを通して再びビーカ
ーに戻すような血液回路を組み、この装置を用いて血液
流量３０ｍｌ／分で１時間連続して潅流実験を行なっ
た。

【００４８】本処理を行なった後の血清中の抗血小板抗
体量をＥＬＩＳＡ法により定量した（Ａｃｔａ．ｈａｅ
ｍａｔ．，６６，２５１，１９８１）。結果は表１に示
す通りであり、本処理を行なう前の血清での値から算出
した吸着率［％］で示した。またアルブミンの非特異的
吸着に関しても、アルブミンＢーテストワコー（和光純
薬工業製）を用いて定量した。結果は表２に示す通りで
あり、表１と同様に吸着率［％］で示した。また血小板
の粘着性についても本処理を行なう前後の血小板数をコ
ールターカウンターＺＭ型（コールターエレクトロニク
ス社製）を用いて定量することにより調べた。結果は表
３に示す通りであり、血小板数の減少率［％］で示し
た。

【００４９】

【表１】

【００５０】

【表２】

【００５１】

【表３】

【００５２】＜実施例２＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌ
ｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける４７５ないし４９０番目の領域に相当
するＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの配列を有するペプチ
ドの合成に関してもＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ））（アプライドバイオシステム
ズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃ ＯＢｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）（いずれもア
プライドバイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同
様にして実施した。合成の終了した支持体の脱保護基，
ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同
定についても実施例１と同様にして行なった。

【００５３】化２においてＲ¹ が水素原子であり、ｎの
値が１である化合物１０ｍｌ，Ｎ−イソプロピルアクリ
ルアミド４０ｇ，アリルアミン２ｍｌ，アゾイソブチル
ニトリル０．４ｇをエタノール１６０ｍｌに窒素存在下
で攪拌しながら溶解し、さらに３０分間窒素を送って系
内を完全に窒素置換した。さらに５０℃の湯浴中にて窒
素存在下で２時間の攪拌により重合を行なった。沈殿物
を５０ないし６０℃の蒸留水で洗浄して、デカンテーシ
ョンにより水を除去した後４０℃にて減圧乾燥してエポ
キシ基を含有するポリマーを得た。

【００５４】上記ポリマー３ｇをメチレンビスアクリル
アミド０．５ｇとともにメタノール１５０ｍｌに溶解
し、実施例１と同様に１５ｃｍ平方の大きさに切断した
繊維径３．５μｍのＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した
後、５Ｍｒａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不
織布の両面に照射した。電子線照射の終了した不織布を
水およびメタノールで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。
得られた不織布のエポキシ基含量の定量を実施例１と同
様にして行なったところ、０．０７８ｍｅｑ／ｇであっ
た。

【００５５】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ１１の炭酸酸緩衝液に溶解した後、上記の改質した
不織布を加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。
反応の終了した不織布を水で３回洗浄して、目的である
吸着材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の窒素
含量をマイクロケルダール法により定量して算出し７１
％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を実施
例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血
液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の
抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様に
して定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００５６】＜実施例３＞ Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕの不織布への固
定化 ＧＰ３ａにおける７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａ
ｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎの配列の両端を５残基ずつ延長さ
せたＡｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関して
もＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｚｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ
₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライドバイオシステムズ
社製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の
終了した支持体の脱保護基については配列中にｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）を含んでいるので、先に１ｇ
の合成を終えた支持体に１，２−エタンジチオール０．
２ｍｌ，ｍ−クレゾール０．８ｍｌ，ジメチルスルフィ
ド３ｍｌ，ＴＦＡ５ｍｌ，ＴＦＭＳＡ１ｍｌを加えて、
氷水で冷やしながら３時間攪拌して反応させた。反応物
をあらかじめ冷やしておいたジエチルエーテルで洗浄し
ながらガラスフィルター（ミディアム孔）で濾過し後に
実施例１で行なった脱保護基反応を行なった。以下ペプ
チド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定に
ついては実施例１と同様にして行なった。

【００５７】分子量１０００のＰＥＯアミン３０ｇをｐ
Ｈ１１の炭酸酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後、実施例
１と同様にして得たエポキシ基を導入（０．１３ｍｅｑ
／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯアミン溶液
中で室温で振盪させることにより２４時間反応させた。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥＯアミンを
導入した不織布を得た。アミノ基含量はの定量は水酸化
ナトリウム水溶液による滴定により行ない０．０６６ｍ
ｅｑ／ｇであった。

【００５８】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ４．５のクエ
ン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行ない、ＥＤＣ１０ｍｇ
を加えて氷冷しながら３０分間攪拌した。さらに上記の
ＰＥＯアミンの導入された不織布を加えて、室温で２４
時間振盪して反応させた。反応の終了した不織布を水で
３回洗浄して、目的である吸着材を得た。ペプチドの固
定化率を実施例１と同様にして求め８０％が導入されて
いた。得られた吸着材の性能評価を実施例１と同様にし
て、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅流
実験により行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体量
およびアルブミン量を実施例１と同様にして定量した。
結果をそれぞれ表１および表２に吸着率［％］で示し
た。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討した
結果を表３に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５９】＜実施例４＞ ＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ−
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける３４９ないし３６４番目の配列のＮ端
にＬｙｓ残基を１つ結合させたＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関しても
ＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂
Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｐｒｏ（いずれもアプライドバイオシステムズ社
製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終
了した支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系Ｈ
ＰＬＣによる精製および同定についても、実施例１と同
様にして行なった。

【００６０】分子量５０００のＰＥＯアミン６ｇをｐＨ
１１の炭酸酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後、実施例２
と同様にして得たエポキシ基を導入（０．０７０ｍｅｑ
／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯアミン溶液
中で室温で振盪させることにより２４時間反応させた。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥＯアミンを
導入した不織布を得た。アミノ基含量はの定量は水酸化
ナトリウム水溶液による滴定により行ない０．０５１ｍ
ｅｑ／ｇであった。

【００６１】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
７１％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価は
実施例１と同様のカラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液
を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の抗
血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様にし
て定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００６２】

【比較例】

＜比較例１＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの不織布へ
の固定化 実施例２で得たＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの綿不織布
への導入を次のようにして実施した。１５ｃｍ平方の大
きさに切断した繊維径１２μｍの綿不織布３０枚に、イ
オン交換水１００ｍｌ，２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２
００ｍＬ，エピクロルヒドリン８０ｍｌを加えて、室温
で振盪により２４時間反応させた。反応終了後不織布を
水で３回洗浄して、エポキシ基の導入された不織布を得
た。エポキシ基含量は実施例１と同様にして定量を行な
い０．１５ｍｅｑ／ｇであった。

【００６３】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ１１の炭酸緩
衝液５００ｍｌに溶解して、上記エポキシ基導入不織布
を加えて室温にて振盪により２４時間反応を行なった。
反応終了後不織布を水で３回洗浄して目的の吸着材を得
た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め８
１％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を実
施例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の
血液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中
の抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様
にして定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着
率［％］で示した。

【００６４】＜比較例２＞ Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける５６１ないし６７３番目の領域に相当
するＴｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕの配列を有するペプチドの合成に関して、ＰＡＭ
ロイシン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ）（アプライドバイ
オシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙ
ｓ（４−ＣＨ₃ ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライド
バイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同様にして
実施した。このペプチド領域も親水性の比較的大きな領
域である。合成の終了した支持体の脱保護基，ペプチド
鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定につい
ても実施例１と同様にして行なった。

【００６５】比較例１と同じ条件を用いてエポキシ基を
導入（０．１６ｍｅｑ／ｇ）した綿不織布に、上記ペプ
チドの綿不織布への導入を比較例１と同じ反応条件によ
り行なった。ペプチドの固定化率は実施例１と同様にし
て求め８０％が導入されていた。得られた吸着材の性能
評価を実施例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴ
Ｐ患者の血液を用いた潅流実験により行なった。処理後
の血清中の抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例
１と同様にして定量した。結果をそれぞれ表１および表
２に吸着率［％］で示した。血小板粘着性についても実
施例１と同様に検討した結果を表３に血小板数の減少率
［％］で示した。

【００６６】

【発明の効果】本発明により血液中の抗血小板抗体と効
果的に結合させて除去することが可能であり、特に重症
なＩＴＰ患者の治療に適用が可能である。本発明におけ
る抗血小板抗体吸着材を用いた血液浄化療法は副作用な
どの危険性がない安全なものであり、保存による安定性
の面でも優れている。また不織布を利用することにより
従来のような血漿分離を必要としない全血処理による体
外循環が可能となったことは画期的な特徴である。また
エポキシ基が存在することによりリガンドであるペプチ
ド類の導入も容易である。さらにはオートクレーブ処理
による蒸気滅菌を行なってもリガンドとしての活性低下
がほとんど生ずることのない点からも、医療機材として
非常に有利な要因と言える。

フロントページの続き (72)発明者 田中 昌和 滋賀県大津市堅田二丁目１番１号 東洋紡 績株式会社総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 表面にエポキシ基を有した平均繊維径が
   １ないし３０μｍの繊維からなる不織布に、抗血小板抗
   体との結合性を有するペプチドあるいは修飾ペプチドを
   固定化したことを特徴とする抗血小板抗体吸着材。