JPH06121834A

JPH06121834A - 抗血小板抗体吸着材

Info

Publication number: JPH06121834A
Application number: JP4274450A
Authority: JP
Inventors: Kazunori Inamori; 和紀稲森; Masahiro Seko; 政弘世古; Hideyuki Yokota; 英之横田; Masakazu Tanaka; 昌和田中
Original assignee: Toyobo Co Ltd
Current assignee: Toyobo Co Ltd
Priority date: 1992-10-13
Filing date: 1992-10-13
Publication date: 1994-05-06

Abstract

(57)【要約】【目的】血液の体外循環療法などに適用することによ
り、何らかの原因で生じた抗血小板抗体を除去すること
が可能な、抗血小板抗体との結合性を有するペプチドま
たは修飾ペプチドを不織布に固定化した抗血小板抗体吸
着材を提供する。【構成】カルボキシル基を有する平均繊維径２ないし
３０μｍの不織布に、抗血小板抗体と結合性を有するペ
プチドまたは修飾ペプチドを固定化した抗血小板抗体吸
着材およびその製法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は何らかの原因により血液
中に産生された自己抗体である抗血小板抗体を、特定の
アミノ酸配列を含有しているペプチドまたはそのペプチ
ド領域を含む有機化合物を固定化した不織布を用いて、
血液の体外循環治療を行なうことにより血液中の抗血小
板抗体と結合させることを特徴とする抗血小板抗体の除
去が可能である抗血小板抗体吸着材に関するものであ
る。本発明は特に抗血小板抗体の存在による血小板数の
減少に起因して、出血，紫斑などの諸症状をもたらす特
発性血小板減少性紫斑病（以下ＩＴＰと言う）のような
疾患に関する治療において非常に有用なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＩＴＰは自己免疫疾患の一種であり、血
小板寿命の短縮，血小板結合免疫グロブリンである抗血
小板抗体の増加を特徴とし、骨髄では巨核球数は正常あ
るいは増加を示し、他の血液疾患の存在を示唆する所見
を認めない免疫性の血小板減少症のうち膠原病，リンパ
増殖性疾患，薬剤アレルギーなどの原因疾患の認められ
ないものを指す。

【０００３】ＩＴＰは急性型と慢性型に分けられる。急
性型は小児に多く見られ、出血症状は激しいが比較的治
癒はしやすい。発症３週間以前に上気道感染，ウイルス
感染などの先行感染が認められることが多い。感染の回
復期に血小板減少を認めることから、形成された免疫複
合体が血小板膜Ｆｃ受容器に結合し、血小板が非特異的
に破壊される免疫複合病の可能性が強い。一方慢性型は
出血症状は弱いが長期間持続し、成人で特に２０才代の
女性に多く、抗血小板抗体による自己免疫病と考えられ
ているものである。

【０００４】抗血小板抗体による血小板数の減少により
見られる症状には個人差があるが、一般的には血小板数
５００００個／μｌ以上では通常出血症状は見られず、
３００００ないし５００００個／μｌでは外傷時の易出
血性，斑状出血，１００００ないし３００００個／μｌ
では露出部への紫斑の出現，月経過多，１００００個／
μｌ以下では血尿，不正性器出血，鼻出血，歯肉出血が
認められ、頭蓋内出血，消化管出血がしばしば直接の死
因となっている。

【０００５】ＩＴＰの治療に際してはその症状の程度に
応じて副腎皮質ホルモン剤の投与，脾臓の摘出，ステロ
イド系免疫抑制剤の投与などが適用される。しかしこう
した薬物療法や摘脾手術では血小板数が効果的には回復
しないような症例も多く存在している。ＩＴＰをはじめ
種々の自己免疫疾患の発生に関するメカニズムはまだ十
分には解明されておらず、こうした患者に対する治療方
法についても絶対的なものは確立されていないのが現状
であり対策が急がれている。

【０００６】こうした自己免疫疾患の治療方法として、
免疫吸着カラムを用いた血液の体外循環による自己抗体
の吸着除去も種々試みられている。たとえば免疫グロブ
リンと結合性を有するプロテインＡを担体に固定化した
カラムの適用も検討されている。しかしプロテインＡは
高価であり、吸着特異性の点で優れず、さらには副作用
の問題も有しておりあまり有用なものではない。また除
去対象物質に対する抗体の固定化カラムも種々検討され
ているが、安全性，保存安定性の問題，抗体が有効に反
応できるような固定化が困難なこと，滅菌方法が限定さ
れるなどの理由から医用機材として用いるには多くの課
題がある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は血液中の抗血
小板抗体を認識して結合性を有するようなペプチドある
いはそれを修飾した有機化合物を固定化した不織布を用
いて、ＩＴＰ患者における血液の体外循環を行なうこと
により抗血小板抗体を特異的に結合させ除去しようとす
るものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は抗血小板抗体の抗原決定基となりうるアミノ酸配列
を含有しているペプチドあるいは修飾ペプチドを固定化
した不織布による抗血小板抗体の除去を要旨とするもの
である。

【０００９】一般にＩＴＰ患者における抗血小板抗体は
血小板膜表面に存在する糖タンパク質の複合体であるＧ
Ｐ２ｂ／３ａやＧＰ１ｂ／９に対する抗体である場合が
多いことが知られている。本発明において固定化される
ペプチド領域は上記血小板膜糖タンパク質の一次構造か
ら種々の方法により抗原決定基となりうる領域を予測お
よびスクリーニングすることにより得られたものである
ことが好ましい。

【００１０】ＧＰ２ｂとＧＰ３ａは骨髄中の骨髄巨核球
またはその前駆細胞において複合体を形成する。血小板
膜表面においてＧＰ２ｂとＧＰ３ａは非共有結合により
１：１の複合体を形成している。ＧＰ２ｂにおける５５
８ないし７４７番目のアミノ酸残基の部分とＧＰ３ａに
おける１１４ないし３０３番目のアミノ酸残基の部分と
で会合していることが推定されている（医学のあゆみ，
１６０，６８１，１９９２）。ＧＰ２ｂ／３ａは血小板
膜表面上に最も多く存在している糖タンパク質である。

【００１１】ＧＰ１ｂはα鎖およびβ鎖から成り、血小
板膜表面においてＧＰ９と非共有的に結合して複合体を
形成すると考えられている（医学のあゆみ，１６０，６
７７，１９９２）。ＧＰ１ｂ／９は非活性状態の血小板
が内皮下組織に存在するｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ
因子を認識する際の膜受容体であり、血小板血栓形成の
ごく初期段階を制御する分子として重要と考えられてい
る。

【００１２】ＧＰ３ａは分子量約１０５キロダルトンの
１本のポリペプチドから成る糖タンパク質であり、すで
にｃＤＮＡがクローニングされている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２６２，３９３９，１９８７）。７６２個
のアミノ酸残基から構成されており、Ｎ末端部には２６
アミノ酸残基から成るシグナルペプチドが存在する。細
胞外の部分は６８９個，膜貫通ドメインは２９個，細胞
質内は４１個のアミノ酸が存在する。４６０ないし６２
７番目のアミノ酸残基から成る領域には３３ないし３８
個のアミノ酸より成るシステインリッチなドメインの繰
返しが４ヵ所存在する。

【００１３】ＧＰ２ｂは分子量が約１４０キロダルトン
であり、約１２５キロダルトンのＨ鎖と約２５キロダル
トンのＬ鎖から構成されておりこれらがＳＳ結合により
結合している。１０３９個のアミノ酸残基から成りその
配列が決定されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２
６２，８４７６，１９８７）。Ｈ鎖には８７１個、Ｌ鎖
には１３７個およびＮ末端部には３０アミノ酸残基から
成るシグナルペプチドが存在する。膜貫通ドメインはＬ
鎖内に存在し２６個の疎水性アミノ酸より構成される。

【００１４】ＧＰ３ａとＧＰ２ｂは骨髄中の骨髄巨核球
またはその前駆細胞において複合体を形成する。血小板
膜表面においてＧＰ２ｂとＧＰ３ａは非共有結合により
１：１の複合体を形成している。ＧＰ２ｂにおける５５
８ないし７４７番目のアミノ酸残基の部分とＧＰ３ａに
おける１１４ないし３０３番目のアミノ酸残基の部分と
で会合していることが推定されている（医学のあゆみ，
１６０，６８１，１９９２）。本分子上にはフィブリノ
ーゲンなどの粘着性タンパク質に対する受容体が潜在す
る。ＧＰ２ｂ／３ａは血小板膜表面上に最も多く存在し
ている糖タンパク質である。

【００１５】ＧＰ１ｂ／９はＧＰ１ｂα鎖，β鎖，ＧＰ
９の３つのサブユニットから構成され、非活性化状態の
血小板が内皮下組織に存在するｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒ
ａｎｄ因子を認識する際の膜受容体であり血小板血栓形
成のごく初期段階を制御する分子として重要と考えられ
ている。α鎖とβ鎖はＳＳ結合で結ばれており、分子量
はそれぞれ１４０キロダルトンと２４キロダルトンであ
る。ＧＰ９は１７ないし１８キロダルトンであり、非共
有結合的にＧＰ１ｂに結合していると考えられる（医学
のあゆみ，１６０，６７７，１９９２）。いずれについ
てもアミノ酸配列が決定されており、α鎖は６１０個
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８
４，５６１５，１９８７）、β鎖は１８１個（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，２１
３５，１９８８）、ＧＰ９は１６０個（Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，６７７３，１
９８９）のアミノ酸残基から成る。

【００１６】上記の各糖タンパク質に関する抗血小板抗
体に対する免疫原性を有するペプチドとしては、最も多
く存在しているＧＰ２ｂ／３ａを例にするとＧＰ３ａの
アミノ酸配列中において、６８ないし７８番目に相当す
るＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，３４９ない
し３６４番目のＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ
−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ，４７５な
いし４９０番目のＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａ
ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ，６１９
ないし６２３番目のＬｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−
Ｇｌｕ，７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａｌａ−Ａ
ｓｎ−Ａｓｎの５つの領域がエンザイムイムノアッセイ
（以下ＥＬＩＳＡ法と言う）により確認された領域であ
る。これらの領域はいずれも親水性の比較的強い領域で
あり、ＧＰ３ａ分子表面に存在している領域であること
が推定される。またＧＰ２ｂに関してはＧｌｕ−Ｔｈｒ
−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（１０６な
いし１１２番目），Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−
Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（１４８ない
し１５６番目），Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（８９６ないし９０３番
目）の３つの領域が抗血小板抗体に対して免疫原性を有
している。これらも親水性の強い領域であり分子表面に
存在することが推定される。またＧＰ１ｂ／９に関して
も数種のペプチドについて抗血小板抗体に対する免疫原
性が確認されている。

【００１７】上記に示した領域は抗血小板抗体との結合
に最小限必要な領域であると考えられる。実際にこうし
たペプチドを用いて抗血小板抗体を除去することを行な
う場合には、血液中に存在する抗血小板抗体との反応様
式に近い状態を再現する必要がある。また血液中に存在
する場合の構造の安定性や、あるいは担体に固定化する
場合には水系溶媒に対する溶解性を大きくしたりするこ
とを考慮する必要があることが多い。

【００１８】そこで上記に示したペプチド領域の一方の
末端または両末端の領域を各タンパク質のアミノ酸配列
に従って領域を延長したり、たとえばリジンのような水
溶性を大きくするようなアミノ酸を数個末端に結合させ
たり、システインのようなアミノ酸を末端に結合させて
担体に固定化しやすくするなどすることが好ましい。実
際に用いるペプチドまたは修飾ペプチドの全アミノ酸残
基数としては６０個以内であることが好ましいが、合成
の困難さやコスト，安定性などを考慮すると３０個以内
がより好ましい。さらに免疫原性を発現するのに要する
高次構造の形成しやすさなども考慮すると１０ないし２
５個までが最適であると言える。

【００１９】また固定化反応や安定性などを考慮して、
たとえばＮ末端をアミド化したり、末端に適当な官能基
を導入したりして上記ペプチドを修飾した有機化合物を
用いることも好ましい。また複数のペプチドを−Ａ−
（ＣＨ₂）_n−Ｂ−（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯを示す）
で示されるような側鎖を用いて結合させたものも抗血小
板抗体との結合性をより高めることが可能である。この
場合のｎの値は１ないし２０が好ましく３ないし１０が
より好ましい。

【００２０】ペプチドの合成の方法については特に限定
されないが、液相合成法よりも固相合成法を適用する方
が操作が簡単である。この場合有機溶媒に不溶性である
支持体に合成するペプチドのＣ末端に対応するアミノ酸
を結合させ、Ｎ末端方向にαカルボキシル基以外のαア
ミノ基などの官能基を保護した対応するアミノ酸を順に
縮合反応により結合させた後、結合した後その保護基を
脱離させる反応を交互に繰返すことによりペプチド鎖を
延長させる。

【００２１】目的とするペプチドを得た後、ペプチド鎖
を支持体から切断および脱保護基を行なう。これにはフ
ッ化水素がしばしば用いられるが、安全性，取扱いやす
さの点からトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭ
ＳＡと言う）を用いるのが適当である。チオアニソー
ル，１，２−エタンジチオールとＴＦＭＳＡ中で反応さ
せ脱保護基を行なった後、トリフルオロ酢酸（以下ＴＦ
Ａと言う）により支持体からの切断を行ないペプチドを
回収する。これを凍結乾燥することによりクルードペプ
チドが得られる。

【００２２】上記クルードペプチドは逆相系カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと言う）
に供することにより分取，精製を行なう。ＨＰＬＣ条件
は通常タンパク質の精製に用いる系を基本として最適化
を行なうのがよい。得られたクロマトピークに相当する
画分を分取しこれを凍結乾燥する。得られた精製ペプチ
ド画分についてマススペクトル分析による分子量解析，
アミノ酸組成分析あるいはアミノ酸配列解析などにより
同定を行なう。

【００２３】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥ
Ｔ），ポリプロピレン（ＰＰ），ポリエチレン（Ｐ
Ｅ），ポリアミド，セルロース（綿）およびビスコース
などが挙げられるが、改質の容易さ、改質後の強度保持
性を考慮するとＰＥＴ，ＰＰ，ＰＥ，綿またはビスコー
スが好ましく、特にＰＥＴ，ＰＰ，綿が好ましい。また
血球成分の粘着性を抑えるためには、繊維径は１ないし
３０μｍが好ましく、３ないし２０μｍがより好まし
い。

【００２４】さらに補体活性，凝固因子活性の抑制およ
び血球粘着を抑制し、リガンドであるペプチド類の導入
を容易に行なうために、カルボキル基の導入された不織
布を担体とすることが好ましい。カルボキル基の含量は
０．０１ないし１ｍｅｑ／ｇが好ましく、０．１ないし
１．０ｍｅｑ／ｇがより好ましい。

【００２５】不織布にカルボキル基を導入する方法は種
々のものが挙げられるが、たとえばＰＰ，ＰＥの場合に
はアクリル酸（ＡＡ），メタクリル酸（ＭＡＡ）または
これらの誘導体を重合時に共重合させて不織布を製造す
る方法がある。またこれらの素材を電子線，紫外線また
はオゾンを照射することによりラジカルやイオンを発生
させ、ＡＡ，ＭＡＡまたはこれらの誘導体をグラフトさ
せる方法がある。この場合には他のビニルモノマーを共
存させることも可能である。

【００２６】綿やビスコースの場合には過ヨウ素酸によ
り酸化してそのグリコール部位を開裂させてアルデヒド
基を導入して、これを酸化してカルボキル基を導入して
もよいし、あるいはアルデヒド基にアンモニア，エチレ
ンジアミン，ヘキサメチレンジアミンのような少なくと
も一級のアミノ基を１個以上有する化合物を反応させて
シッフ塩基を形成し、これを還元してアミノ基を導入し
た後、このアミノ基とＡＡ，ＭＡＡ，およびこれらの誘
導体またはポリアクリル酸（ＰＡＡ），ポリメタクリル
酸（ＰＭＡＡ）およびこれらの誘導体ポリマーとを縮合
させてもよい。この時のＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれら
の誘導体ポリマーの分子量は２００ないし２００００が
好ましく、５００ないし１００００がより好ましい。こ
こでいう誘導体ポリマーとはＡＡまたはＭＡＡのモノマ
ー単位を少なくとも１種類を１０ないし８０モル％以上
を含む他のビニルモノマーとの共重合体を意味するもの
である。

【００２７】さらに電子線照射によりカルボキル基を導
入する方法として、ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘
導体ポリマーとビニル基を１分子中に少なくとも２個以
上有する架橋性モノマーとの混合溶液を不織布にコーテ
ィングし乾燥させた後、電子線を照射してカルボキル基
を導入することができる。この場合のポリマーの分子量
は２００ないし２００００が好ましく、５００ないし１
００００がさらに好ましい。

【００２８】用いる架橋性モノマーとしてはメチレンビ
スアクリルアミド，トリメチロールプロパンジアクリレ
ート，トリメチロールプロパントリアクリレート，テト
ラメチロールメタンテトラアクリレート，トリアリルイ
ソシアヌレートのようなビニル基を複数個有するモノマ
ーの他に、化１の一般式で示される化合物が挙げられ
る。これらの架橋性化合物のうちで化１を用いた場合が
カルボキル基の導入率が最も良好で、カルボキル基濃度
も所望の値に制御することが可能である。化１における
Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃はそれぞれ水素原子またはメチル基を示
す。ｎは１ないし１００の整数を示しているが、３ない
し７０の整数の場合が好ましく、５ないし６０の整数が
さらに好ましい。

【００２９】

【化１】

【００３０】コーティングする溶液の濃度は０．１ない
し２０％、好ましくは０．５ないし１０％であり、用い
る溶媒は架橋性化合物とＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれら
の誘導体ポリマーの両方を溶解する溶媒であればすべて
使用できるが、水，メタノール，エタノール，塩化メチ
レン，クロロホルム，アセトン，ジオキサン，テトラヒ
ドロフランまたはこれらの混合溶媒を用いることができ
る。ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘導体ポリマーと
架橋性化合物との混合比は５０：１ないし１：５０、好
ましくは３０：１ないし１：３０である。コーティング
する混合物は不織布に対して０．５ないし３０ｗｔ％、
好ましくは１ないし２０ｗｔ％である。

【００３１】不織布へのカルボキル基の導入方法を種々
検討したところ、ＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘導
体ポリマーと化１で示される化合物とを混合してコーテ
ィングした後、電子線照射により処理する方法が最も好
ましい。この場合に用いる素材としてはＰＥＴ，ＰＥお
よび綿が好ましく、特にＰＥＴが好ましい照射線量は１
ないし２０Ｍｒａｄ、好ましくは２ないし１０Ｍｒａｄ
である。このようにしてカルボキル基を導入した不織布
はカルボキル基とポリエチレングリコールとの相乗効果
により、血小板，白血球などの粘着がなく血液の補体活
性や凝固系因子の活性化も抑制されており、抗血小板抗
体の吸着，除去に際して血漿と血球成分とを分離した後
血漿から抗体を吸着して血漿と血球成分を再混合して患
者に返す必要がなく全血処理により一段階で抗体を吸着
することができる。

【００３２】カルボキル基の導入された不織布への抗血
小板抗体との結合性を有する上記のようなペプチド類の
固定化に関しても種々の方法がある。この場合リガンド
に用いるペプチドや修飾ペプチドは比較的安定で低分子
量の物質であり、たとえば酵素や抗体のような高分子量
のタンパク質を固定化する場合と比較してその固定化反
応条件は制約が少なくなることも有利な要因の一つであ
る。したがって固定化方法については特に限定されるも
のではないが、以下のような方法によるものが好まし
い。

【００３３】通常は立体障害を小さくすることにより抗
体の吸着効率，結合性の向上させ、また非特異的吸着を
抑えることを目的として、親水性スペーサーを導入し
て、その末端にペプチド類を固定化するのが好ましい。
親水性スペーサーとしては導入したカルボキル基を利用
するのが好ましく、両末端にアミノ基またはグリシジル
基を有するポリエチレングリコールを用いることが好ま
しい。この場合のポリエチレングリコールの分子量は１
００ないし２００００、好ましくは２００ないし１００
００、さらに好ましくは５００ないし５０００である。

【００３４】両末端にアミノ基を有するポリエチレング
リコール（以下ＰＥＯアミンと言う）を用いる場合、ま
ず不織布のカルボキシル基とカルボジイミドなどの縮合
剤を用いてアミド結合により結合させ、次にもう一方の
アミノ基とペプチドのカルボキシル基末端を縮合剤の存
在下に縮合させてアミド基を介した固定化を行なう。

【００３５】またグリシジル基を両末端に有するポリエ
チレングリコールを用いる場合には、まず片端のグリシ
ジル基と不織布のカルボキシル基との反応によりスペー
サーを導入し、次いでもう一方の末端のグリシジル基と
ペプチドのアミノ基とを反応させて固定化を行なう。

【００３６】しかしＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそれらの誘
導体ポリマーと化１を用いてカルボキシル基を導入した
場合においては、グラフトされたＰＡＡ，ＰＭＡＡおよ
びそれらの誘導体ポリマー自体が親水性スペーサーの役
割を果たしており、このことからも好ましいものであ
る。すなわちグラフトされたＰＡＡ，ＰＭＡＡおよびそ
れらの誘導体ポリマーのカルボキシル基とペプチドのア
ミノ基末端を上記の方法により縮合させることにより固
定化が他の方法と比較して有利である。

【００３７】

【実施例】本発明におけるペプチド類のカルボキシル基
を導入した不織布への導入方法は上記に述べたものを基
本とすれば特に限定されるものではない。以下に実施例
を用いて本発明を説明する。

【００３８】＜実施例１＞Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの不織布への固定化（１）ペプチドの合成ＧＰ３ａにおいて免疫原性を有する６８ないし７８番目
までの領域のＮ末端にリジン残基を２個結合させたＬｙ
ｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの
配列を有するペプチドの合成をペプチドシンセサイザー
Ｍｏｄｅｌ４３０Ａ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて固相合成法により行なった。Ｃ末端のセリ
ンの結合した支持体であるＰＡＭセリン（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））０．５ｍｍｏｌ（アプライドバ
イオシステムズ社製）を用いて、Ｎ末端の方向に順に上
記ペプチドシンセサイザーに掲載されている合成プログ
ラムにより脱保護基反応および縮合反応を繰返してペプ
チド鎖を延長した。すなわちＴＦＡおよびジクロロメタ
ン（以下ＤＣＣと言う）により保護基であるｔ−ブトキ
シカルボニル基の除去を行ない、ジクロロメタン（以下
ＤＣＭと言う）で洗浄し、ジイソプロピルエチルアミン
およびＤＣＣで中和した後、ジメチルホルムアミド（以
下ＤＭＦと言う）で洗浄し、ＤＭＦで縮合反応を行な
い、ＤＣＭで洗浄する操作を繰返した。アミノ酸はｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ・Ｈ₂Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ（いずれもアプラ
イドバイオシステムズ社製）の２．０ｍｍｏｌのカート
リッジを用いた。

【００３９】（２）脱保護基，ペプチド鎖の切断上記の反応が終了した支持体１ｇにチオアニソール１ｍ
ｌ，１，２−エタンジチオール０．５ｍｌを加えて１０
分間攪拌した後、氷水で冷やしながらＴＦＡ１０ｍｌを
加えて１０分間攪拌した。さらにＴＦＭＳＡ１ｍｌを加
えて室温で３０分間攪拌した。これにあらかじめ冷やし
ておいたジエチルエーテルを沈殿が現れなくなるまで加
えて攪拌し、ミディアム孔のガラスフィルターを用いて
ジエチルエーテルで共洗いしながら濾過し、ＴＦＡを加
えてペプチドを溶解してエーテル中に補集した。エーテ
ル中のペプチドをファイン孔のガラスフィルターで濾過
し、ガラスフィルター上のペプチドを２Ｎ酢酸に溶解し
て、凍結乾燥を行ないクルードペプチドを得た。

【００４０】（３）ペプチドの精製上記クルードペプチドを再度２Ｎ酢酸に溶解して、０．
２μｍのメンブレンフィルターで濾過した溶液をＨＰＬ
Ｃに供した。ＨＰＬＣはＭｏｄｅｌ１３０Ａシステム
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、カラムは
逆相系のＡｑｕａｐｏｒｅＰｒｅｐ−１０，Ｃ８（ア
プライドバイオシステムズ社製）を用いた。移動相は
０．１％ＴＦＡを含む水をＡ液，０．１％ＴＦＡを含む
７０％アセトニトリル／水（ｖ／ｖ）をＢ液として、Ａ
液からＢ液への濃度直線勾配により溶出した。クロマト
ピークはほぼ単一なものが得られ、相当画分を分取し
た。分取を数回繰返し、これを凍結乾燥することにより
精製ペプチドを得た。得られたペプチドはＢＩＯＩＯＮ
２０マスアナライザー（アプライドバイオシステムズ社
製）により解析して目的ペプチドが得られていることを
確認した。

【００４１】（４）不織布の改質化１においてＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃が水素原子でありｎの値
が１４であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ₂＝Ｃ
Ｈ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）₁₄−ＯＣ−ＣＨ₂＝Ｃ
Ｈ₂）２ｇおよび分子量１００００のＰＡＡ０．２ｇを
２００ｍｌのメタノールに溶解し、１５ｃｍ平方の大き
さに切断した繊維径３．５μｍのＰＥＴ製不織布をこの
溶液に浸した後、５Ｍｒａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄ
の電子線を不織布の両面に照射した。電子線照射の終了
した不織布を水およびメタノールで３回ずつ洗浄を行な
い風乾した。得られた不織布のカルボキシル基含量の定
量を水酸化ナトリウム溶液による滴定により行ない、
０．０８５ｍｅｑ／ｇであった。

【００４２】（５）ペプチドの不織布への導入（３）で得た精製ペプチド２５ｍｇをｐＨ４．５のクエ
ン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行ない、水溶性カルボジ
イミド試薬であるＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミド）１０ｍｇを加え
て氷冷しながら３０分間攪拌した。さらに上記の改質し
た不織布を加えて、室温で２４時間振盪して反応させ
た。反応の終了した不織布を水で３回洗浄して、目的で
ある吸着材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の
窒素含量をマイクロケルダール法により定量して算出し
８５％が導入されていた。

【００４３】（６）ペプチド固定化吸着材の性能評価上記吸着材における上記のＩＴＰ患者の血液を用いて抗
血小板抗体の吸着性能を評価した。一辺７ｃｍの菱形の
ポリカーボネート製モジュールケースの形状およびその
大きさに切断した上記吸着材を２０枚充填したカラムを
組立て、１００Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩水１
００ｍｌ、次いで１Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩
水１００ｍｌでカラム内および血液回路内を洗浄した。
一方クエン酸を添加したＩＴＰ患者の血液（５種類）１
００ｍｌをビーカーに取り、カラムを通して再びビーカ
ーに戻すような血液回路を組み、この装置を用いて血液
流量３０ｍｌ／分で１時間連続して潅流実験を行なっ
た。

【００４４】本処理を行なった後の血清中の抗血小板抗
体量をＥＬＩＳＡ法により定量した（Ａｃｔａ．ｈａｅ
ｍａｔ．，６６，２５１，１９８１）。結果は表１に示
す通りであり、本処理を行なう前の血清での値から算出
した吸着率［％］で示した。またアルブミンの非特異的
吸着に関しても、アルブミンＢーテストワコー（和光純
薬工業製）を用いて定量した。結果は表２に示す通りで
あり、表１と同様に吸着率［％］で示した。また血小板
の粘着性についても本処理を行なう前後の血小板数をコ
ールターカウンターＺＭ型（コールターエレクトロニク
ス社製）を用いて定量することにより調べた。結果は表
３に示す通りであり、血小板数の減少率［％］で示し
た。

【００４５】

【表１】

【００４６】

【表２】

【００４７】

【表３】

【００４８】＜実施例２＞Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌ
ｕの不織布への固定化ＧＰ３ａにおける４７５ないし４９０番目の領域に相当
するＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの配列を有するペプチ
ドの合成に関してもＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ））（アプライドバイオシステム
ズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃ＯＢｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）（いずれもア
プライドバイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同
様にして実施した。合成の終了した支持体の脱保護基，
ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同
定についても実施例１と同様にして行なった。

【００４９】化１においてＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃が水素原子
でありｎの値が９であるポリエチレンジアクリレート
（ＣＨ₂＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）₉−ＯＣ
−ＣＨ ₂＝ＣＨ₂）１ｇおよび分子量４０００のＰＡＡ
１ｇを２００ｍｌのメタノールに溶解し、実施例１と同
様に１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径３．５μｍ
のＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した後、５Ｍｒａｄず
つ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不織布の両面に照射
した。電子線照射の終了した不織布を水およびメタノー
ルで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。得られた不織布の
カルボキシル基含量の定量を水酸化ナトリウム溶液によ
る滴定により行ない、０．３５５ｍｅｑ／ｇであった。

【００５０】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記の改質した不織布を加えて、室温で２
４時間振盪して反応させた。反応の終了した不織布を水
で３回洗浄して、目的である吸着材を得た。ペプチドの
固定化率は実施例１と同様にして求め７８％が導入され
ていた。得られた吸着材の性能評価を実施例１と同様に
して、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅
流実験により行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体
量およびアルブミン量を実施例１と同様にして定量し
た。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率［％］で示
した。血小板粘着性についても実施例１と同様に検討し
た結果を表３に血小板数の減少率［％］で示した。

【００５１】＜実施例３＞Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕの不織布への固
定化ＧＰ３ａにおける７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａ
ｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎの配列の両端を５残基ずつ延長さ
せたＡｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関して
もＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｚｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ
₂Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライドバイオシステムズ
社製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の
終了した支持体の脱保護基については配列中にｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）を含んでいるので、先に１ｇ
の合成を終えた支持体に１，２−エタンジチオール０．
２ｍｌ，ｍ−クレゾール０．８ｍｌ，ジメチルスルフィ
ド３ｍｌ，ＴＦＡ５ｍｌ，ＴＦＭＳＡ１ｍｌを加えて、
氷水で冷やしながら３時間攪拌して反応させた。反応物
をあらかじめ冷やしておいたジエチルエーテルで洗浄し
ながらガラスフィルター（ミディアム孔）で濾過し後に
実施例１で行なった脱保護基反応を行なった。以下ペプ
チド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定に
ついては実施例１と同様にして行なった。

【００５２】分子量１０００のＰＥＯアミンを３０ｇを
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後氷
冷し、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪
拌した。実施例１と同様にして得たカルボキシル基を導
入（０．０８９ｍｅｑ／ｇ）した改質不織布３０枚を、
上記ＰＥＯアミン溶液中で室温で振盪させることにより
２４時間反応させた。反応終了後不織布を水で３回洗浄
して、ＰＥＯアミンを導入した不織布を得た。アミノ基
含量はの定量は塩酸による電位差滴定をＣＯＭＴＩＴＥ
１０１（平沼産業製）を用いて行ない０．０３９ｍｅｑ
／ｇであった。

【００５３】上記ペプチド２５ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
８４％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を
実施例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者
の血液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清
中の抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同
様にして定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸
着率［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１
と同様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］
で示した。

【００５４】＜実施例４＞ＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ−
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｕの不織布への固定化ＧＰ３ａにおける３４９ないし３６４番目の配列のＮ端
にＬｙｓ残基を１つ結合させたＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関しても
ＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂Ｏ，ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂
Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｐｒｏ（いずれもアプライドバイオシステムズ社
製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終
了した支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系Ｈ
ＰＬＣによる精製および同定についても実施例１と同様
にして行なった。

【００５５】分子量５０００のＰＥＯアミンを６ｇをｐ
Ｈ４．５のクエン酸緩衝液５００ｍｌに溶解した後氷冷
し、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。実施例２で得たカルボキシル基を導入（０．３５
８ｍｅｑ／ｇ）した改質不織布３０枚を、上記ＰＥＯア
ミン溶液中で室温で振盪させることにより２４時間反応
させた。反応終了後不織布を水で３回洗浄して、ＰＥＯ
アミンを導入した不織布を得た。アミノ基含量を実施例
３と同様にして定量し０．１４７ｍｅｑ／ｇであった。

【００５６】上記ペプチド５０ｍｇを実施例１と同様に
ｐＨ４．５のクエン酸緩衝液に溶解した後氷冷を行な
い、ＥＤＣ１０ｍｇを加えて氷冷しながら３０分間攪拌
した。さらに上記のＰＥＯアミンの導入された不織布を
加えて、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終
了した不織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を
得た。ペプチドの固定化率を実施例１と同様にして求め
８１％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価は
実施例１と同様のカラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液
を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の抗
血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様にし
て定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００５７】

【比較例】

＜比較例１＞Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの不織布へ
の固定化実施例２で得たＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの綿不織布
への導入を次のようにして実施した。１５ｃｍ平方の大
きさに切断した繊維径１２μｍの綿不織布３０枚を、１
ｗｔ％濃度の過ヨウ素酸ナトリウムを１Ｎ硫酸に溶解し
た溶液５００ｍｌ中に加えて振盪により２２時間反応さ
せた。反応終了後不織布を水で３回洗浄して、アルデヒ
ド基の導入された不織布を得た。アルデヒド含量はオキ
シム法により定量を行ない０．５０ｍｅｑ／ｇであっ
た。

【００５８】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ９．５の炭酸
緩衝液５００ｍｌに溶解して、上記アルデヒド基導入不
織布を加えて振盪により２４時間シッフ塩基反応を行な
った。反応終了後不織布を水で３回洗浄した。ペプチド
の固定化率を実施例１と同様にして求め８９％が導入さ
れていた。次に１ｇの水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ
Ｈ₄）をｐＨ９．０の炭酸緩衝液５００ｍｌに溶解し
て、上記の不織布を加えて振盪により２０時間反応させ
た。反応終了後不織布を水で３回洗浄して目的の吸着材
を得た。得られた吸着材の性能評価を実施例１と同様に
して、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅
流実験により行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体
量およびアルブミン量を実施例１と同様にして定量し
た。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率［％］で示
した。

【００５９】＜比較例２＞Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕの不織布への固定化ＧＰ３ａにおける５６１ないし６７３番目の領域に相当
するＴｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕの配列を有するペプチドの合成に関して、ＰＡＭ
ロイシン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ）（アプライドバイ
オシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙ
ｓ（４−ＣＨ₃ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライド
バイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同様にして
実施した。このペプチド領域も親水性の比較的大きな領
域である。合成の終了した支持体の脱保護基，ペプチド
鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定につい
ても実施例１と同様にして行なった。

【００６０】比較例１と同じ条件を用いてアルデヒド基
を導入（０．５１ｍｅｑ／ｇ）した綿不織布に、上記ペ
プチドの綿不織布への導入を比較例１と同じ反応条件に
より行なった。ペプチドの固定化率は実施例１と同様に
して求め８７％が導入されていた。得られた吸着材の性
能評価を実施例１と同様にして、カラムを組立てた後Ｉ
ＴＰ患者の血液を用いた潅流実験により行なった。処理
後の血清中の抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施
例１と同様にして定量した。結果をそれぞれ表１および
表２に吸着率［％］で示した。血小板粘着性についても
実施例１と同様に検討した結果を表３に血小板数の減少
率［％］で示した。

【００６１】

【発明の効果】本発明により血液中の抗血小板抗体と効
果的に結合させることが可能であり、重症なＩＴＰ患者
の治療に適用が可能である。本発明における抗血小板抗
体吸着材を用いた血液浄化療法は副作用もなく安全であ
り、保存による安定性の面でも優れている。不織布を利
用することにより従来のような血漿分離を必要としない
全血処理による体外循環が可能である。またカルボキシ
ル基が存在することによりリガンドであるペプチド類の
導入も容易である。さらにオートクレーブ処理による蒸
気滅菌を行なってもリガンドとしての活性が低下するこ
とがほとんどない点も医療機材として有利である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成４年１２月２２日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２３】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレ−ト（ＰＥ
Ｔ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリエチレン（Ｐ
Ｅ）、ポリアミド、セルロ−ス（綿）およびビスコ−ス
などが挙げられるが、改質の容易さ、改質後の強度保持
性を考慮するとＰＥＴ、ＰＰ、ＰＥ、綿またはビスコ−
スが好ましく、特にＰＥＴ、ＰＰ、綿が好ましい。また
血球成分の粘着性を抑えるためには、繊維径は１ないし
３０μｍが好ましく３ないし２０μｍがより好ましい。
これらの繊維から構成される不織布としては、本発明の
目的からして、不織布の密度（充填率）は、０．６ｇ／
ｃｍ³以下、より好ましくは０．４ｇ／ｃｍ³以下のも
のである。またその下限としては、接触効率の点から
０．０１ｇ／ｃｍ³以上、より好ましくは０．０２ｇ／
ｃｍ³以上である。

フロントページの続き (72)発明者田中昌和滋賀県大津市堅田二丁目１番１号東洋紡績株式会社総合研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カルボキシル基を含有する平均繊維径１
ないし３０μｍの繊維からなる不織布に、抗血小板抗体
と結合性を有するペプチドまたは修飾ペプチドを固定化
したことを特徴とする抗血小板抗体吸着材。