JPH06269498A - 抗血小板抗体吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液の体外循環療法などににより、何らかの
原因で生じた抗血小板抗体を除去することが可能な、抗
血小板抗体との結合性を有するペプチドまたは修飾ペプ
チドを不織布に固定化した抗血小板抗体吸着材を提供す
る。 【構成】 式：−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｘ（ＸはＣｌ，
Ｂｒ，Ｉいずれかの原子，ｎは１ないし１０の整数）で
示されるような官能基を有した平均繊維径が１ないし３
０μｍの不織布に、抗血小板抗体との結合性を有するペ
プチドまたは修飾ペプチドを固定化したことを特徴とす
る抗血小板抗体吸着材。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は何らかの原因により血液
中に産生された自己抗体である抗血小板抗体を、特定の
アミノ酸配列より構成されるペプチドあるいはそのペプ
チド領域を含む有機化合物（修飾ペプチド）を固定化し
た不織布を用いて、血液の体外循環治療を行なうことに
より血液中の抗血小板抗体と結合させることを特徴とす
る抗血小板抗体の除去が可能である抗血小板抗体吸着材
に関するものである。本発明は主として抗血小板抗体の
存在による血小板数の減少に起因して、出血，紫斑など
の諸症状をもたらす特発性血小板減少性紫斑病（以下Ｉ
ＴＰと言う）のような疾患に関する治療への適用に関し
て非常に有用なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＩＴＰは自己免疫疾患の一種であり、血
小板寿命の短縮，血小板結合免疫グロブリンである抗血
小板抗体の増加を特徴としている。骨髄では巨核球数は
正常あるいは増加を示し、他の血液疾患の存在を示唆す
る所見を認めない免疫性の血小板減少症のうち膠原病，
リンパ増殖性疾患，薬剤アレルギーなどの原因疾患の認
められないものを指す。

【０００３】ＩＴＰは急性型と慢性型に大別される。急
性型は小児に多く見られ、出血症状は激しいが比較的治
癒はしやすい。発症３週間以前に上気道感染，ウイルス
感染などの先行感染が認められることが多い。感染の回
復期に血小板減少を認めることから、形成された免疫複
合体が血小板膜Ｆｃ受容器に結合し、血小板が非特異的
に破壊される免疫複合病の可能性が強い。一方慢性型は
出血症状は弱いが長期間持続し、成人で特に２０才代の
女性に多く、抗血小板抗体による自己免疫病と考えられ
ているものである。

【０００４】抗血小板抗体による血小板数の減少により
見られる症状には個人差があるが、一般的には血小板数
５００００個／μｌ以上では通常出血症状は見られず、
３００００ないし５００００個／μｌでは外傷時の易出
血性，斑状出血，１００００ないし３００００個／μｌ
では露出部への紫斑の出現，月経過多，１００００個／
μｌ以下では血尿，不正性器出血，鼻出血，歯肉出血が
認められ、頭蓋内出血，消化管出血がしばしば直接の死
因となっている。

【０００５】ＩＴＰの治療に際してはその症状の程度に
応じて副腎皮質ホルモン剤の投与，脾臓の摘出，免疫抑
制剤の投与などが適用される。しかしこうした薬物療法
や摘脾手術を行なっても血小板数が効果的には回復しな
いような症例も多く確認されている。さらには安全性や
患者への負担の大きさなどを考慮しても、必ずしもこう
した治療法が十分に満足なものとは言えない。ＩＴＰを
はじめほとんどの自己免疫疾患の発生に関するメカニズ
ムはまだ十分な解明がなされておらず、したがって治療
方法に関しても絶対的なものは確立されていないのが現
状であり対策が急がれている。

【０００６】こうした自己免疫疾患の治療方法に際し
て、免疫吸着カラムを用いた血液の体外循環による自己
抗体の吸着除去も種々試みられている。たとえば免疫グ
ロブリンと結合性を有するプロテインＡを担体に固定化
したカラムの適用も検討されている。しかしプロテイン
Ａは高価であり、他の有用成分の非特異的吸着を抑えら
れないことや、さらには種々の副作用が生ずる症例も確
認されていることからあまり有用なものとは言えない。
また除去対象物質に対する抗体の固定化カラムも種々検
討されているが、安全性，保存安定性の問題，抗原抗体
反応が有効に作用できるような固定化が困難なこと，滅
菌方法が限定されるなどの理由から医用機材として用い
るには非常に多くの課題が残されている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は血液中の抗血
小板抗体を認識して結合性を有するようなペプチドある
いは修飾ペプチドを固定化した不織布を提供して、主と
してこれを充填したカラムを用いた血液の体外循環を行
なうことを目的とする。こうして抗血小板抗体を特異的
に結合させ除去することにより、特にＩＴＰのような難
治性疾患の治療に貢献しようとするものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は抗血小板抗体の抗原決定基を形成しうるアミノ酸配
列を含有したペプチドあるいは修飾ペプチドを固定化し
た不織布を、血液浄化吸着材として体外循環療法に適用
することによる抗血小板抗体の除去を要旨とするもので
ある。

【０００９】一般にＩＴＰ患者における抗血小板抗体は
血小板膜表面に存在する糖タンパク質の複合体であるＧ
Ｐ２ｂ／３ａやＧＰ１ｂ／９に対する抗体である場合が
多いことが知られている。本発明において固定化される
ペプチド領域は上記血小板膜糖タンパク質の一次構造か
ら種々の方法により抗原決定基となりうる領域を予測お
よびスクリーニングすることにより得られたものであ
る。

【００１０】ＧＰ２ｂとＧＰ３ａは骨髄中の骨髄巨核球
またはその前駆細胞において複合体を形成する。血小板
膜表面においてＧＰ２ｂとＧＰ３ａは非共有結合により
１：１の複合体を形成している。ＧＰ２ｂにおける５５
８ないし７４７番目のアミノ酸残基の部分とＧＰ３ａに
おける１１４ないし３０３番目のアミノ酸残基の部分と
で会合していることが推定されている（医学のあゆみ，
１６０，６８１，１９９２）。ＧＰ２ｂ／３ａは血小板
膜表面上に最も多く存在している糖タンパク質である。

【００１１】またＧＰ１ｂはα鎖およびβ鎖から成り、
血小板膜表面においてＧＰ９と非共有的に結合して複合
体を形成すると考えられている（医学のあゆみ，１６
０，６７７，１９９２）。ＧＰ１ｂ／９は非活性状態の
血小板が内皮下組織に存在するｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒ
ａｎｄ因子を認識する際の膜受容体であり、血小板血栓
形成のごく初期段階を制御する分子として重要と考えら
れている。

【００１２】ＧＰ３ａは分子量約１０５キロダルトンの
１本のポリペプチドから成る糖タンパク質であり、すで
にｃＤＮＡがクローニングされている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２６２，３９３９，１９８７）。７６２個
のアミノ酸残基から構成されており、Ｎ末端部には２６
アミノ酸残基から成るシグナルペプチドが存在する。細
胞外の部分は６８９個，膜貫通ドメインは２９個，細胞
質内は４１個のアミノ酸が存在する。４６０ないし６２
７番目のアミノ酸残基から成る領域には３３ないし３８
個のアミノ酸より成るシステインリッチなドメインの繰
返しが４ヵ所存在する。

【００１３】ＧＰ２ｂは分子量が約１４０キロダルトン
であり、約１２５キロダルトンのＨ鎖と約２５キロダル
トンのＬ鎖から構成されておりこれらがＳＳ結合により
結合している。１０３９個のアミノ酸残基から成りその
配列が決定されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２
６２，８４７６，１９８７）。Ｈ鎖には８７１個、Ｌ鎖
には１３７個およびＮ末端部には３０アミノ酸残基から
成るシグナルペプチドが存在する。膜貫通ドメインはＬ
鎖内に存在し２６個の疎水性アミノ酸より構成される。

【００１４】ＧＰ１ｂ／９はＧＰ１ｂα鎖，β鎖，ＧＰ
９の３つのサブユニットから構成され、非活性化状態の
血小板が内皮下組織に存在するｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒ
ａｎｄ因子を認識する際の膜受容体であり血小板血栓形
成のごく初期段階を制御する分子として重要と考えられ
ている。α鎖とβ鎖はＳＳ結合で結ばれており、分子量
はそれぞれ１４０キロダルトンと２４キロダルトンであ
る。ＧＰ９は１７ないし１８キロダルトンであり、非共
有結合的にＧＰ１ｂに結合していると考えられる（医学
のあゆみ，１６０，６７７，１９９２）。いずれについ
てもアミノ酸配列が決定されており、α鎖は６１０個
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８
４，５６１５，１９８７）、β鎖は１８１個（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，２１
３５，１９８８）、ＧＰ９は１６０個（Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，６７７３，１
９８９）のアミノ酸残基から成る。

【００１５】上記の各糖タンパク質に関する抗血小板抗
体に対する免疫原性を有するペプチドとしては、最も多
く存在しているＧＰ２ｂ／３ａを例にするとＧＰ３ａの
アミノ酸配列中において、６８ないし７８番目に相当す
るＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，３４９ない
し３６４番目のＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ
−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ，４７５な
いし４９０番目のＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａ
ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ，６１９
ないし６２３番目のＬｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−
Ｇｌｕ，７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａｌａ−Ａ
ｓｎ−Ａｓｎの５つの領域がエンザイムイムノアッセイ
（以下ＥＬＩＳＡ法と言う）により確認された領域であ
る。これらの領域はいずれも親水性の比較的強い領域で
あり、ＧＰ３ａ分子表面に存在している領域であること
が推定される。

【００１６】ＧＰ２ｂに関してはＧｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（１０６ないし１
１２番目），Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ（１４８ないし１５
６番目），Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（８９６ないし９０３番目）の
３つの領域が抗血小板抗体に対して免疫原性を有してい
る。これらも親水性の強い領域であり分子表面に存在す
ることが推定される。

【００１７】またＧＰ１ｂ／９に関しても数種のペプチ
ドについて抗血小板抗体に対する免疫原性が確認されて
いる。ＧＰ１ｂα鎖ではＡｓｐ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｕ（２２２ないし２２５番目），Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｕ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｖａｌ（２８０ないし２８９番目），Ｔｈｒ−Ｌｙｓ
−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（３００ないし３０４番
目），Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ（３１９ないし
３２２番目），Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｔｈ
ｒ（３４０ないし３４４番目），Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｈｉ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（４６７ないし４７２番
目），Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（５４
０ないし５４４番目），Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ（５７３ないし５７６番目），Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ（５９１ないし５９４番目）の９領域が、β
鎖ではＰｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（８３
ないし８７番目），Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−
Ａｒｇ−Ａｌａ（１５６ないし１６１番目），Ａｒｇ−
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（１
７５ないし１８１番目）の３領域が抗血小板抗体に対す
る免疫原性領域である。さらにＧＰ９においてもＴｈｒ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ（１ないし５番
目），Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（４６ないし４
９番目），Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（６６ないし６８番
目），Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｒｇ（８６
ないし９０番目）の４領域が免疫原性領域である。

【００１８】上記に示した領域は抗血小板抗体との結合
に最小限必要な領域であると考えられる。実際にこうし
たペプチドを用いて抗血小板抗体を除去することを行な
う場合には、血液中に存在する抗血小板抗体との反応様
式に近い状態を再現する必要がある。また血液中に存在
する場合の構造の安定性や水和性、あるいは担体に固定
化する場合には水系溶媒に対する溶解性を大きくしたり
することを考慮する必要があることが多い。

【００１９】そこで上記に示したペプチド領域の一方の
末端または両末端の領域を各タンパク質のアミノ酸配列
に従って領域を延長したり、たとえばリジンのような水
溶性を大きくするようなアミノ酸を数個末端に結合させ
たり、システインのようなアミノ酸を末端に結合させて
担体に固定化しやすくするなどすることが好ましい。実
際に用いるペプチドまたは修飾ペプチドの全アミノ酸残
基数としては６０個以内であることが好ましいが、合成
の困難さやコスト，安定性などを考慮すると３０個以内
がより好ましい。さらに免疫原性を発現するのに要する
高次構造の形成しやすさなども考慮すると１０ないし２
５個までが最適であると言える。

【００２０】また固定化反応や安定性などを考慮して、
たとえばＮ末端をアミド化したり、末端に適当な官能基
を導入したりして上記ペプチドを修飾した有機化合物を
用いることも好ましい。また複数のペプチドを−Ａ−
（ＣＨ₂ ）_n −Ｂ−（Ａ，ＢはＮＨまたはＣＯを示す）
で示されるような側鎖を用いて結合させたものも抗血小
板抗体との結合性をより高めることが可能である。この
場合のｎの値は１ないし２０が好ましく３ないし１０が
より好ましい。

【００２１】ペプチドの合成の方法については特に限定
されるものではないが、一般に液相合成法よりも固相合
成法を適用する方が操作が簡単である。この場合有機溶
媒に不溶性である支持体に合成するペプチドのＣ末端に
対応するアミノ酸を結合させ、Ｎ末端方向にαカルボキ
シル基以外のαアミノ基などの官能基を保護した対応す
るアミノ酸を順に縮合反応により結合させた後、結合し
た後その保護基を脱離させる反応を交互に繰返すことに
よりペプチド鎖を延長させる。

【００２２】目的とするペプチドを得た後、ペプチド鎖
を支持体から切断および脱保護基を行なう。これにはフ
ッ化水素がしばしば用いられるが、安全性，取扱いやす
さの点からトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭ
ＳＡと言う）を用いるのが適当である。チオアニソー
ル，１，２−エタンジチオールとＴＦＭＳＡ中で反応さ
せ脱保護基を行なった後、トリフルオロ酢酸（以下ＴＦ
Ａと言う）により支持体からの切断を行ないペプチドを
回収する。これを凍結乾燥することによりクルードペプ
チドが得られる。

【００２３】上記クルードペプチドは逆相系カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと言う）
に供することにより分取，精製を行なう。ＨＰＬＣ条件
は通常タンパク質の精製に用いる系を基本として最適化
を行なうのがよい。得られたクロマトピークに相当する
画分を分取しこれを凍結乾燥する。得られた精製ペプチ
ド画分についてマススペクトル分析による分子量解析，
アミノ酸組成分析あるいはアミノ酸配列解析などの手法
により同定および確認を行なう。

【００２４】上記ペプチドあるいは修飾ペプチドを固定
化する場合に用いる不織布の種類は特に限定されるもの
ではないが、血液浄化に用いる場合には血液中成分と接
触した際の補体系や凝固系などへの影響を考慮する必要
性があることから、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥ
Ｔ），ポリプロピレン（ＰＰ），ポリエチレン（Ｐ
Ｅ），ポリアミド，セルロース（綿）およびレーヨンな
どが挙げられるが、改質の容易さや改質後の強度保持性
を考慮すると、ＰＥＴ，ＰＥ，綿またはレーヨンが好ま
しい。

【００２５】不織布に化学式：−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −
Ｘ（ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉいずれかの原子，ｎは１ないし
１０の整数を表わす；以下官能基１と言う）で示される
ような官能基を導入する方法は種々のものが挙げられ
る。たとえばＰＰ，ＰＥの場合には、あらかじめ脱ハロ
ゲン化水素反応が可能なアミノ基，イミノ基，水酸基，
ヒドラジド基などの官能基を有する化合物をＸ−ＣＯ−
（ＣＨ₂ ）_n −Ｘ（以下化合物１と言う）で示されるよ
うな化合物と反応させ、得られた化合物を共重合して不
織布を製造する方法がある。この場合の脱ハロゲン化水
素反応させる官能基としては、反応の容易さの点からア
ミノ基が最も好ましい。

【００２６】不織布にアミノ基を導入するには種々のも
のが挙げられるが、たとえばＰＰ，ＰＥの場合には、あ
らかじめアミノ基を有するビニル化合物たとえば化１お
よび化２で表わされるような化合物を共重合して不織布
を製造する方法がある。またこれらの素材に電子線，紫
外線またはオゾンを照射してラジカルやイオンを発生さ
せ、化１または化２のようなアミノ基を有するビニル化
合物をグラフト重合させる方法がある。この場合他のビ
ニルモノマーを共存させてもよい。

【００２７】

【化１】

【００２８】

【化２】 化１、化２においてＲ¹ は水素原子またはメチル基を、
Ｒ² とＲ³ は水素原子またはメチル基であって少なくと
も一方が水素原子であることを示し、ｎは１ないし５の
数である。

【００２９】上記のようにして得たアミノ基を含有する
不織布を上記化合物１と適当な溶媒中で反応させること
により上記官能基１の導入が可能である。ここでハロゲ
ン原子Ｘはいずれでも可能であるが、反応効率や副反応
の少なさなどを考慮するとＢｒ，Ｉが好ましく、Ｂｒが
より好ましい。同様にｎの値は１ないし１０が適当であ
るが、１ないし５がより好ましい。

【００３０】綿やレーヨンの場合には過ヨウ素酸により
酸化してそのグリコール部位を開裂させてアルデヒド基
を導入して、さらにアンモニア，エチレンジアミン，ヘ
キサメチレンジアミン，ポリエチレンイミンのような少
なくとも一級のアミノ基を１個以上有する化合物を反応
させてシッフ塩基を形成し、これを還元してアミノ基を
導入した後、化合物１と適当な溶媒中で反応させること
により官能基１を導入するのがよい。なおポリエチレン
イミンを用いる場合の分子量は１００ないし１００万が
好ましく、２００ないし１０万がより好ましい。

【００３１】さらに電子線照射により官能基１を導入す
る方法としては、化合物１をあらかじめ上記のような一
級のアミノ基を含有する化合物と反応させて得られた化
合物を化３に示すようなビニル化合物を直接または適当
な溶媒に溶解した後乾燥させ電子線を照射する方法があ
る。この際にビニル化合物の沸点が低いと乾燥条件で蒸
発しグラフト量の制御が困難であり、この場合には高沸
点化合物と混合して塗布し蒸発を抑えることが好まし
い。混合する高沸点溶媒としてはエチレングリコール，
ジエチレングリコール，重合度１０以下のポリエチレン
グリコール，グリセリンなどの多価アルコール類が特に
好ましい。

【００３２】

【化３】 化３においてＲ¹,Ｒ²,Ｒ³ は水素原子またはメチル基を
示し、ｎは１〜３００の数を示す。

【００３３】またグラフト効率を向上させるために、多
官能性の架橋性ビニル化合物と混合して用いることが好
ましい。これらの架橋性ビニル化合物としては、メチレ
ンビスアクリルアミド，トリメチロールプロパンジアク
リレート，トリメチロールプロパントリアクリレート，
テトラメチロールメタンテトラアクリレート，トリアリ
ルイソシアヌレートまたは化３のようなビニル基を複数
個有するモノマーが挙げられる。架橋性ビニル化合物の
うち化３を用いた場合グラフト効率が高く、またスペー
サー効果もあり特に好ましい。化３におけるｎの値は１
ないし１５０であることが好ましく、５ないし５０であ
ることがより好ましい。

【００３４】またグラフト効率を向上させるために、多
官能性の架橋性ビニル化合物と混合して用いることが好
ましい。これらの架橋性ビニル化合物としては、メチレ
ンビスアクリルアミド，トリメチロールプロパンジアク
リレート，トリメチロールプロパントリアクリレート，
テトラメチロールメタンテトラアクリレート，トリアリ
ルイソシアヌレートのようなビニル基を複数個有するモ
ノマーが挙げられる。

【００３５】これらの化合物を塗布するのに用いる溶媒
は架橋性化合物と目的の官能基を有する化合物の両方を
溶解するものであればすべて使用できるが、水，メタノ
ール，エタノール，塩化メチレン，クロロホルム，アセ
トン，ジオキサン，テトラヒドロフランまたはこれらの
混合溶媒を用いることが可能である。上記官能基を有す
る化合物と架橋性化合物との混合比は５０：１ないし
１：５０、好ましくは３０：１ないし１：３０である。
この場合に用いられる不織布の素材としてはＰＥＴ，Ｐ
Ｅ，レーヨンおよび綿が好ましく、特にＰＥＴが好まし
い。照射線量は１ないし２０Ｍｒａｄが好ましく、２な
いし１０Ｍｒａｄがさらに好ましい。

【００３６】このようにして導入される官能基１の含量
は１μｅｑ／ｇないし５ｍｅｑ／ｇ、好ましくは１０μ
ｅｑ／ｇないし３ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは３０μ
ｅｑ／ｇないし２ｍｅｑ／ｇである。こうして導入され
た官能基１のペプチド固定化後の残存量は、血小板のよ
うな血球成分の粘着を抑えるためには０．１μｅｑ／ｇ
ないし１ｍｅｑ／ｇであり、好ましくは０．５μｅｑ／
ｇないし０．５ｍｅｑ／ｇ、さらに好ましくは１μｅｑ
／ｇないし０．３ｍｅｑ／ｇである。

【００３７】こうして得られた不織布は血小板，白血球
などの粘着が少なく、血液の補体活性や凝固因子活性も
抑制されている。したがって抗血小板抗体の吸着除去に
際し血漿と血球成分とを分離した後血漿から抗体を吸着
して血漿と血球成分を再混合して患者に返す必要がなく
全血処理により一段階で抗体を吸着することができる。
この際の不織布の充填密度は０．６ｇ／ｍｌ以下が好ま
しく、０．４ｇ／ｍｌ以下がより好ましい。

【００３８】上記官能基の導入された不織布への抗血小
板抗体との結合性を有する上記のようなペプチド類の固
定化については、ｐＨ８ないし１０の緩衝液中で反応さ
せることにより容易に行なうことができる。この場合リ
ガンドに用いるペプチドや修飾ペプチドは比較的安定で
低分子量の物質であり、たとえば酵素や抗体のような高
分子量のタンパク質を固定化する場合と比較してその固
定化反応条件は制約が少なくなることも有利な要因の一
つである。

【００３９】通常は立体障害を小さくすることにより抗
体の吸着効率，結合性を向上させ、また非特異的吸着を
抑えることを目的として、親水性スペーサーを導入し
て、その末端にペプチド類を固定化するのが好ましい。
親水性スペーサーとしては導入した官能基を利用できる
ものが好ましく、両末端にアミノ基またはカルボキシル
基を有するポリエチレングリコールを用いることが好ま
しいが、反応収率やその条件のマイルドな点からアミノ
基の方がより好ましい。この場合のポリエチレングリコ
ールの分子量は１００ないし２００００、好ましくは２
００ないし１００００、さらに好ましくは５００ないし
５０００である。

【００４０】両末端にアミノ基あるいはカルボキシル基
を有するポリエチレングリコール（以下それぞれＰＥＯ
アミンおよびＰＥＯ酸と言う）を用いる場合、まず不織
布の官能基と適当な溶媒中にて反応させることにより結
合させ、次にもう一方のアミノ基あるいはカルボキシル
基とペプチドのカルボキシル基またはアミノ基末端を縮
合剤の存在下に縮合させてアミド基を介した固定化を行
なう。

【００４１】しかし上記のようにして得た不織布におい
ては、グラフトされたこれらの誘導体ポリマー自体が親
水性スペーサーの役割を果たしており、このことからも
好ましいものである。すなわちグラフトされたこれらの
誘導体ポリマーのハロアルキル基とペプチドのアミノ基
末端を上記の方法により脱ハロゲン化水素させることに
よる固定化が他の方法と比較して有利である。

【００４２】

【実施例】本発明におけるペプチド類の目的の官能基を
導入した不織布への導入方法は上記に述べたものを基本
とすれば特に限定されるものではない。以下に実施例を
用いて本発明を説明する。

【００４３】＜実施例１＞ Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの不織布への固定化 （１）ペプチドの合成 ＧＰ３ａにおいて免疫原性を有する６８ないし７８番目
までの領域のＮ末端にリジン残基を２個結合させたＬｙ
ｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの
配列を有するペプチドの合成をペプチドシンセサイザー
Ｍｏｄｅｌ４３０Ａ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて固相合成法により行なった。Ｃ末端のセリ
ンの結合した支持体であるＰＡＭセリン（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））０．５ｍｍｏｌ（アプライドバ
イオシステムズ社製）を用いて、Ｎ末端の方向に順に上
記ペプチドシンセサイザーに掲載されている合成プログ
ラムにより脱保護基反応および縮合反応を繰返してペプ
チド鎖を延長した。すなわちＴＦＡおよびジクロロメタ
ン（以下ＤＣＭと言う）により保護基であるｔ−ブトキ
シカルボニル基の除去を行ないＤＣＭで洗浄し、ジイソ
プロピルエチルアミンおよびＤＣＭで中和した後、ジメ
チルホルムアミド（以下ＤＭＦと言う）で洗浄し、ＤＣ
Ｃで縮合反応を行ない、ＤＣＭで洗浄する操作を繰返し
た。アミノ酸はｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ
（いずれもアプライドバイオシステムズ社製）の２．０
ｍｍｏｌのカートリッジを用いた。

【００４４】（２）脱保護基，ペプチド鎖の切断 上記の反応が終了した支持体１ｇにチオアニソール１ｍ
ｌ，１，２−エタンジチオール０．５ｍｌを加えて１０
分間攪拌した後、氷水で冷やしながらＴＦＡ１０ｍｌを
加えて１０分間攪拌した。さらにＴＦＭＳＡ１ｍｌを加
えて室温で３０分間攪拌した。これにあらかじめ冷やし
ておいたジエチルエーテルを沈殿が現れなくなるまで加
えて攪拌し、ミディアム孔のガラスフィルターを用いて
ジエチルエーテルで共洗いしながら濾過し、ＴＦＡを加
えてペプチドを溶解してエーテル中に補集した。エーテ
ル中のペプチドをファイン孔のガラスフィルターで濾過
し、ガラスフィルター上のペプチドを２Ｎ酢酸に溶解し
て、凍結乾燥を行ないクルードペプチドを得た。

【００４５】（３）ペプチドの精製 上記クルードペプチドを再度２Ｎ酢酸に溶解して、０．
２μｍのメンブレンフィルターで濾過した溶液をＨＰＬ
Ｃに供した。ＨＰＬＣはＭｏｄｅｌ１３０Ａシステム
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、カラムは
逆相系のＡｑｕａｐｏｒｅ Ｐｒｅｐ−１０，Ｃ８（ア
プライドバイオシステムズ社製）を用いた。移動相は
０．１％ＴＦＡを含む水をＡ液，０．１％ＴＦＡを含む
７０％アセトニトリル／水（ｖ／ｖ）をＢ液として、Ａ
液からＢ液への濃度直線勾配により溶出した。クロマト
ピークはほぼ単一なものが得られ、相当画分を分取し
た。分取を数回繰返し、これを凍結乾燥することにより
精製ペプチドを得た。得られたペプチドはＢＩＯＩＯＮ
２０マスアナライザー（アプライドバイオシステムズ社
製）により解析して目的ペプチドが得られていることを
確認した。

【００４６】（４）不織布の改質 テトラエチレンペンタミン３．８ｇをジオキサン１００
ｍｌに溶解し、窒素気流下攪拌しながら氷冷した。一方
化合物１におけるＸがＢｒでありｎが１であるブロモア
セチルブロミド２０．１ｇをジオキサン３０ｍｌに溶解
し２０分間で滴下して、氷冷下２０分間反応し、４０℃
で１時間、６０℃で２時間反応させた後、生成した沈殿
を濾過した。さらにこの沈殿物をジオキサンで洗浄した
後、減圧乾燥した（得られた沈殿物を化合物２とす
る）。

【００４７】化３においてＲ₁,Ｒ₂,Ｒ₃ が水素原子であ
りｎの値が９であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ
₂ ＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₉ −ＯＣ−ＣＨ
₂ ＝ＣＨ₂ ）１ｇを５００ｍｇの上記化合物２とともに
２００ｍｌのメタノールに溶解し、１５ｃｍ平方の大き
さに切断した繊維径３．５μｍのＰＥＴ製不織布をこの
溶液に浸した後、５Ｍｒａｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄ
の電子線を不織布の両面に照射した。電子線照射の終了
した不織布を水およびメタノールで３回ずつ洗浄を行な
い風乾した。得られた不織布の官能基１の含量は元素分
析によりＢｒ含量を求めることにより算出したところ
０．１０ｍｅｑ／ｇであった。

【００４８】（５）ペプチドの不織布への導入 （３）で得た精製ペプチド２５ｍｇをｐＨ８．５のリン
酸緩衝液に溶解した後、上記の改質した不織布を加え
て、室温で２４時間振盪して反応させた。反応の終了し
た不織布を水で３回洗浄して、目的である吸着材を得
た。ペプチドの固定化率は反応残液中の窒素含量をマイ
クロケルダール法により定量して算出し７４％が導入さ
れていた。

【００４９】（６）ペプチド固定化吸着材の性能評価 上記吸着材における上記のＩＴＰ患者の血液を用いて抗
血小板抗体の吸着性能を評価した。一辺７ｃｍの菱形の
ポリカーボネート製モジュールケースの形状およびその
大きさに切断した上記吸着材を２０枚充填したカラムを
組立て、１００Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩水１
００ｍｌ、次いで１Ｕ／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩
水１００ｍｌでカラム内および血液回路内を洗浄した。
一方クエン酸を添加したＩＴＰ患者の血液（５種類）１
００ｍｌをビーカーに取り、カラムを通して再びビーカ
ーに戻すような血液回路を組み、この装置を用いて血液
流量３０ｍｌ／分で１時間連続して潅流実験を行なっ
た。

【００５０】本処理を行なった後の血清中の抗血小板抗
体量をＥＬＩＳＡ法により定量した（Ａｃｔａ．ｈａｅ
ｍａｔ．，６６，２５１，１９８１）。結果は表１に示
す通りであり、本処理を行なう前の血清での値から算出
した吸着率［％］で示した。またアルブミンの非特異的
吸着に関しても、アルブミンＢーテストワコー（和光純
薬工業製）を用いて定量した。結果は表２に示す通りで
あり、表１と同様に吸着率［％］で示した。また血小板
の粘着性についても本処理を行なう前後の血小板数をコ
ールターカウンターＺＭ型（コールターエレクトロニク
ス社製）を用いて定量することにより調べた。結果は表
３に示す通りであり、血小板数の減少率［％］で示し
た。

【００５１】

【表１】

【００５２】

【表２】

【００５３】

【表３】

【００５４】＜実施例２＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌ
ｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける４７５ないし４９０番目の領域に相当
するＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの配列を有するペプチ
ドの合成に関してもＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ））（アプライドバイオシステム
ズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃ ＯＢｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）（いずれもア
プライドバイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同
様にして実施した。合成の終了した支持体の脱保護基，
ペプチド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同
定についても実施例１と同様にして行なった。

【００５５】実施例１と同じ方法により官能基１を導入
した不織布（導入量０．０９ｍｅｑ／ｇ）に上記ペプチ
ドの固定化を実施例１と同様にして行ない、目的である
吸着材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の窒素
含量をマイクロケルダール法により定量して算出し７２
％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を実施
例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血
液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の
抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様に
して定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００５６】＜実施例３＞ Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕの不織布への固
定化 ＧＰ３ａにおける７４１ないし７４４番目のＴｈｒ−Ａ
ｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎの配列の両端を５残基ずつ延長さ
せたＡｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関して
もＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｚｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ
₂ Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓ
ｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライドバイオシステムズ
社製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の
終了した支持体の脱保護基については配列中にｔ−Ｂｏ
ｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）を含んでいるので、先に１ｇ
の合成を終えた支持体に１，２−エタンジチオール０．
２ｍｌ，ｍ−クレゾール０．８ｍｌ，ジメチルスルフィ
ド３ｍｌ，ＴＦＡ５ｍｌ，ＴＦＭＳＡ１ｍｌを加えて、
氷水で冷やしながら３時間攪拌して反応させた。反応物
をあらかじめ冷やしておいたジエチルエーテルで洗浄し
ながらガラスフィルター（ミディアム孔）で濾過し後に
実施例１で行なった脱保護基反応を行なった。以下ペプ
チド鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定に
ついては実施例１と同様にして行なった。

【００５７】化３においてＲ₁,Ｒ₂,Ｒ₃ が水素原子であ
りｎの値が９であるポリエチレンジアクリレート（ＣＨ
₂ ＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ ＣＨ₂ Ｏ）₉ −ＯＣ−ＣＨ
₂ ＝ＣＨ₂ ）６００ｍｇおよび分子量１００００のポリ
エチレンイミン５００ｍｇを２００ｍｌのメタノールに
溶解し、１５ｃｍ平方の大きさに切断した繊維径３．５
μｍのＰＥＴ製不織布をこの溶液に浸した後、５Ｍｒａ
ｄずつ合わせて１０Ｍｒａｄの電子線を不織布の両面に
照射した。電子線照射の終了した不織布を水およびメタ
ノールで３回ずつ洗浄を行ない風乾した。得られた不織
布のアミノ基含量の定量は塩酸による電位差滴定をＣＯ
ＭＴＩＴＥ１０１（平沼産業製）を用いて行ない０．２
５ｍｅｑ／ｇであった。

【００５８】さらにブロモアセチルブロミド３．０ｇを
無水ジオキサン１００ｍｌに溶解し、改質不織布３０枚
を加えて室温で振盪させることにより２４時間反応させ
た。反応終了後不織布を水およびメタノールで３回洗浄
を行ない風乾した。得られた不織布の官能基１の含量は
元素分析によりＢｒ含量を求めることにより算出したと
ころ０．１３ｍｅｑ／ｇであった。

【００５９】上記ペプチド２５ｍｇを実施例１と同様に
して固定化を行ない、目的である吸着材を得た。ペプチ
ドの固定化率は反応残液中の窒素含量をマイクロケルダ
ール法により定量して算出し７０％が導入されていた。
得られた吸着材の性能評価を実施例１と同様にして、カ
ラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅流実験に
より行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体量および
アルブミン量を実施例１と同様にして定量した。結果を
それぞれ表１および表２に吸着率［％］で示した。血小
板粘着性についても実施例１と同様に検討した結果を表
３に血小板数の減少率［％］で示した。

【００６０】＜実施例４＞ ＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ−
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける３４９ないし３６４番目の配列のＮ端
にＬｙｓ残基を１つ結合させたＬｙｓーＧｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｕの配列を有するペプチドの合成に関しても
ＰＡＭグルタミン酸（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ））（アプライドバイオシステムズ社製）およびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｙ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ・１／２Ｈ₂ Ｏ，ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ・Ｈ₂
Ｏ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ
−Ｌ−Ｐｒｏ（いずれもアプライドバイオシステムズ社
製）を用いて実施例１と同様にして実施した。合成の終
了した支持体の脱保護基，ペプチド鎖の切断，逆相系Ｈ
ＰＬＣによる精製および同定についても、実施例１と同
様にして行なった。

【００６１】実施例３と同じ方法により官能基１を導入
した不織布（導入量０．１５ｍｅｑ／ｇ）に上記ペプチ
ドの固定化を実施例１と同様にして行ない、目的である
吸着材を得た。ペプチドの固定化率は反応残液中の窒素
含量をマイクロケルダール法により定量して算出し７１
％が導入されていた。得られた吸着材の性能評価を実施
例１と同様にして、カラムを組立てた後ＩＴＰ患者の血
液を用いた潅流実験により行なった。処理後の血清中の
抗血小板抗体量およびアルブミン量を実施例１と同様に
して定量した。結果をそれぞれ表１および表２に吸着率
［％］で示した。血小板粘着性についても実施例１と同
様に検討した結果を表３に血小板数の減少率［％］で示
した。

【００６２】

【比較例】

＜比較例１＞ Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの不織布へ
の固定化 実施例２で得たＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｕの綿不織布
への導入を次のようにして実施した。１５ｃｍ平方の大
きさに切断した繊維径１２μｍの綿不織布３０枚に、１
ｗｔ％濃度の過ヨウ素酸ナトリウムを１Ｎ硫酸に溶解し
た溶液５００ｍｌ中に加えて振盪により２２時間反応さ
せた。反応終了後不織布を水で３回洗浄してアルデヒド
基を導入した。アルデヒド含量はオキシム法により定量
を行ない０．５１ｍｅｑ／ｇであった。

【００６３】上記ペプチド２５ｍｇをｐＨ９．５の炭酸
緩衝液２００ｍｌに溶解して上記不織布を加え振盪によ
り２４時間反応させた。反応終了後不織布を水で３回洗
浄した後ｐＨ９．０の炭酸緩衝液２００ｍｌ中に加え、
さらに水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄ ）１ｇを加
えて振盪により２０時間反応させた。反応終了後不織布
を水で３回洗浄して目的である吸着材を得た。ペプチド
の固定化率は反応残液中の窒素含量をマイクロケルダー
ル法により定量して算出し７４％が導入されていた。得
られた吸着材の性能評価を実施例１と同様にして、カラ
ムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅流実験によ
り行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体量およびア
ルブミン量を実施例１と同様にして定量した。結果をそ
れぞれ表１および表２に吸着率［％］で示した。血小板
粘着性についても実施例１と同様に検討した結果を表３
に血小板数の減少率［％］で示した。

【００６４】＜比較例２＞ Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕの不織布への固定化 ＧＰ３ａにおける５６１ないし６７３番目の領域に相当
するＴｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕの配列を有するペプチドの合成に関して、ＰＡＭ
ロイシン（ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ）（アプライドバイ
オシステムズ社製）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｙ，ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ，ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｙ
ｓ（４−ＣＨ₃ ＯＢｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ），ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），ｔ
−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（いずれもアプライド
バイオシステムズ社製）を用いて実施例１と同様にして
実施した。このペプチド領域も親水性の比較的大きな領
域である。合成の終了した支持体の脱保護基，ペプチド
鎖の切断，逆相系ＨＰＬＣによる精製および同定につい
ても実施例１と同様にして行なった。

【００６５】比較例１と同様の方法により、綿不織布に
上記ペプチドの導入を行なった。ペプチドの固定化率は
実施例１と同様にして求め７８％が導入されていた。得
られた吸着材の性能評価を実施例１と同様にして、カラ
ムを組立てた後ＩＴＰ患者の血液を用いた潅流実験によ
り行なった。処理後の血清中の抗血小板抗体量およびア
ルブミン量を実施例１と同様にして定量した。結果をそ
れぞれ表１および表２に吸着率［％］で示した。血小板
粘着性についても実施例１と同様に検討した結果を表３
に血小板数の減少率［％］で示した。

【００６６】

【発明の効果】本発明により血液中の抗血小板抗体と効
果的に結合させて除去することが可能であり、特に重症
なＩＴＰ患者の治療に適用が可能である。本発明におけ
る抗血小板抗体吸着材を用いた血液浄化療法は副作用な
どの危険性が少ない安全なものであり、保存による安定
性の面でも非常に優れている。また不織布を利用するこ
とにより従来のような血漿分離を必要としない全血処理
による体外循環が可能となったことはコスト面，簡便さ
などの点から画期的な特徴である。またアミノ基との反
応が容易な官能基１が存在することによりリガンドであ
るペプチド類の導入も容易である。さらにはオートクレ
ーブ処理による蒸気滅菌を行なってもリガンドとしての
活性低下がほとんど生ずることのない点からも、医療機
材として非常に有利な要因と言える。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 昌和 滋賀県大津市堅田二丁目１番１号 東洋紡 績株式会社総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 表面に化学式：−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −
   Ｘ（ＸはＣｌ，Ｂｒ，Ｉいずれかの原子，ｎは１ないし
   １０の整数を表わす）で示されるような官能基が導入さ
   れた平均繊維径が１ないし３０μｍの不織布に、抗血小
   板抗体との結合親和性を有するペプチドあるいは修飾ペ
   プチドが固定化されて成る抗血小板抗体吸着材。