JPH06217712A - 甲殻類用飼料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 甲殻類の養殖において、ビブリオ病をはじ
めとする各種感染症に対し、薬剤が残留せず、安全で、
しかも容易に甲殻類の生残率を改善できる甲殻類用飼料
を提供することにある。 【構成】 ビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉｂｒ
ｉｏ ｓｐ．ＰＪ）由来のペプチドグリカンを含有して
なる甲殻類用飼料。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ビブリオ属細菌由来の
ペプチドグリカンを配合した甲殻類用飼料、特にクルマ
エビ、ウシエビをはじめとする各種甲殻類におけるビブ
リオ病をはじめとする各種感染症に対する抗病性飼料に
関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、クルマエビ、ウシエビ等のエビ類
の養殖は飛躍的に発展しているが、大量過密養殖に起因
する養殖場の環境悪化が引金となって、エビ類の抗病性
が低下し、ビブリオ病をはじめとする各種感染症が多発
し、甚大な被害を被っている。この対策として各種抗菌
剤の投与が頻繁に行われているが、投薬の経費負担が増
大するばかりでなく、耐性菌が出現し投薬効果の上がら
ないケースが益々増加しつつあるのが現状である。

【０００３】また、投薬後、出荷までの休薬が充分でな
い場合には、出荷エビ中に薬剤が残留し、食品衛生上問
題が発生する懸念もある。カニ類では放流用の種苗生産
がすでに行われており、また、天然資源が枯渇しつつあ
る他の有用カニ類についても、その種苗生産技術の開発
が進められているが、初期減耗が少なくないのが現状で
ある。以上の状況から従来の方法とは異なる確実、容易
かつ安全な被害軽減方法の確立が望まれている。

【０００４】クルマエビではグラム陽性菌である豚ビフ
ィズス菌由来のペプチドクリカンが生体防御機能を増強
することが判明しているが、グラム陰性菌由来のペプチ
ドグリカンの効果についての検討例はない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は甲殻類自体が
具えている抗病性を増強させ、ビブリオ病をはじめとす
る各種感染症による被害および成長阻害要因を排除する
甲殻類用飼料を提供し、その結果として養殖場での飼育
成績を改善することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】ペプチドグリカンは細菌
の細胞壁を構成する物質の一種で、最近、腸内菌叢構成
菌由来のペプチドグリカンの免疫賦活作用がヒナ、モル
モットおよび豚で証明されている。昆虫に細菌が感染す
ると、その体液中に数種の抗菌性蛋白が誘導されるが、
蚕では細菌細胞壁由来ペプチドグリカンが脂肪体細胞に
作用し、抗菌性蛋白を誘導することが判明している。

【０００７】数種のビブリオ菌がエビ類の病原細菌とし
て報告されているが、特にビブリオ・エスピー・ピージ
ェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）はエビ類に対し強い
病原性を有する。

【０００８】本発明者らは、上記のことからビブリオ・
エスピー・ピージェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）の
ペプチドグリカンはエビ類固有の生体防御機能を最も強
く刺激する可能性が高いと推察し、また、その効果はエ
ビ類を含む、甲殻類全般に発揮されると考え、種々検討
の結果、ビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉｂｒｉ
ｏ ｓｐ．ＰＪ）の培養菌体から粗精製のペプチドグリ
カンを抽出しものを配合した飼料を、クルマエビ成蝦お
よびウシエビ幼生に給与すれば、顕著な生体防御能の昂
進効果を発揮することを発見し本発明を完成した。

【０００９】本発明のビブリオ・エスピー・ピージェー
（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）由来ペプチドグリカン
は、例えば、次のようにして得られる。すなわち、ビブ
リオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．Ｐ
Ｊ）を５０％海水ブイヨン、食塩を１〜３％の割合で加
えたブイヨンあるいはこれらと同レベルの食塩を含有す
る適当な液体培地で２５℃、２４時間培養し、遠心で集
菌した菌体を出発材料として調製する。ビブリオ属の他
菌種を使用する場合には、各々最適な培地および条件で
培養し、集菌した菌体を出発材料とする。

【００１０】これ以後のペプチドグリカン精製法として
はラウリル硫酸ナトリウムで処理し細胞質を溶出させ、
ラウリル硫酸ナトリウムを除去したのち、各種の酵素で
処理して夾雑物を除去する方法あるいはフレンチプレス
で菌体を破壊し、その遠心沈査を各種の酵素で処理し夾
雑物を除去する方法等任意の方法を採用しうる。

【００１１】得られたペプチドグリカンは噴霧乾燥法、
凍結乾燥法等適当な乾燥法で粉末形態に加工するほうが
保管・取扱・輸送・使用等の面で望ましい。ペプチドグ
リカンは精製したものも使用できるが、粗精製の状態で
も充分にその効果を発揮する。

【００１２】本発明においてペプチドグリカンを添加す
る甲殻類用飼料に用いるペプチドグリカン以外の原料と
しては、魚粉、オキアミミール、イカミールを主体と
し、これにコレステロール、穀類、植物性油粕類、粘結
剤（アルギン酸ナトリウム、ＣＭＣ、グアガム等）、レ
シチン、ミネラル混合物、ビタミン混合物等を必要に応
じて適宜選択して用いる。

【００１３】本発明における甲殻類用飼料には、配合飼
料のほか、生餌等と混合して使用される混合飼料が該当
するが、ペレット状、クランブル状、粉状、微粒子状等
の形態、ドライ、モイスト、セミモイスト等の物性およ
び生餌との併用等、特に制限されない。

【００１４】本発明におけるペプチドグリカンの添加量
は、飼料１ｋｇあたり０．１〜２０ｍｇが望ましい。通
常は、上記種々の原料にペプチドグリカンを適量添加し
て、必要に応じて適当な形態・物性に加工して製造する
が、ペプチドグリカンはすでに製造された飼料に吸着な
いしコーティングしてもよい。

【００１５】本発明における甲殻類用飼料は、クルマエ
ビ、ウシエビ、イセエビ、コウライエビ、オニテナガエ
ビ等の海水性、淡水性のすべての有用エビ類およびガザ
ミ、タラバガニ、マツバガニ、ケガニ等の海水性、淡水
性のすべての有用カニ類等の甲殻類に使用できるもので
ある。

【００１６】

【実施例１】ビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉｂ
ｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）を１０ｍｌの１．５％食塩加ハー
トインヒュージョン・ブロス（ｐＨ８．０）で２５℃、
１６時間前培養し、これを３ｌの同培地に移植して２５
℃、２４時間振とう培養し、７０００ｒｐｍにて６０分
遠心分離して約２５ｇ（湿菌量）の菌体を回収した。こ
れを１００ｍｌの３％ＮａＣｌ溶液に浮遊させ、室温で
１ｍｇのＤＮａｓｅを加えよく攪拌し、さらに２％ラウ
リル硫酸ナトリウム／３％ＮａＣｌ溶液を等量加え、よ
く攪拌し、室温で一夜ゆるやかに振とうして溶菌を完結
させた。

【００１７】この溶菌液を精製水で２倍希釈し、５８０
００×ｇで６０分間遠心し、その沈査に同様の条件でラ
ウリル硫酸ナトリウムを作用させ遠心後、得られた沈査
を６Ｍ尿素液にて洗浄する操作を６回反復した。ラウリ
ル硫酸ナトリウムが検出されなくなったことを確認した
後、精製水で遠心洗浄を５回反復後、沈査を凍結乾燥し
た。その結果、約１６０ｍｇの粗精製ペプチドグリカン
粉末を得た。

【００１８】表１の配合割合により原料を配合した後、
粉砕して４０ｋｇの飼料を調製した。

【００１９】

【表１】

【００２０】上記により調製した飼料各２０ｋｇずつに
分け、対照区の飼料用の２０ｋｇには、前日から水で撹
拌溶解せしめた０．３％グアガム溶液のみを４ｌ加え、
本発明区の飼料用の２０ｋｇには、粗精製ペプチドグリ
カン４０ｍｇを溶解せしめた０．３％グアガム溶液を４
ｌ加え、いずれもミキサーにて均一に混合した。その
後、φ２．５ｍｍダイをセットしたペレットミル（上田
鉄工製）で成型した。次いで、温風乾燥械で約６０℃乾
燥し、本発明の甲殻類用飼料および対照飼料を得た。本
発明の飼料中の粗精製ペプチドグリカンの添加量は、飼
料１ｋｇあたり２ｍｇとなる。

【００２１】水温２３〜２４℃の１００ｌ容の水槽２個
に、平均体重２０ｇのクルマエビを２０尾ずつ収容し、
一方の水槽（本発明区）にはペプチドグリカン添加ペレ
ットを、他方の水槽（対照区）には対照飼料（ペプチド
グリカン非添加ペレット）を、いずれも毎日、体重の１
％量ずつ給与し、７日間飼育した。その翌日（８日目）
に両水槽のクルマエビを取揚げ、心臓より採血して、血
球を分離したのち、ＭＥＭ培地中に浮遊し、血液１ｍｇ
あたり１０^７個のラテックス粒子（直径０．８１ミクロ
ン）を混合し、１時間後に血球１００細胞中の粒子取込
み細胞数および取込み総粒子数を計数し、次式に従って
貪食指数を求めた。

【００２２】貪食指数＝（粒子取込み細胞数／１００）
×（取込み総粒子数／１００）×１００

【００２３】試験の結果を表２に示す。すなわち、対照
区の貪食指数（平均値±標準偏差）が９３．３±２６．
７であったのに対し、本発明区では２４５．２±６８．
１となった。

【００２４】

【表２】

【００２５】この結果から、ビブリオ・エスピー・ピー
ジェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）由来の粗精製ペプ
チドグリカンを添加した飼料を給与することにより、ク
ルマエビの血球の貪食活性を顕著に高め得ることは明ら
かである。

【００２６】次に、人為感染系での効果確認試験を実施
した。１００ｌ容の水槽６個に、平均体重１７ｇのクル
マエビを２０尾ずつ収容して、２３〜２４℃の水温下で
行った。本発明区（ペプチドグリカン添加ペレット給
与、人為感染）および感染対照区（ペプチドグリカン非
添加ペレット給与、人為感染）には、各々２群ずつを充
当し、残り２群の一方はペプチドグリカン添加ペレット
を給与する非感染対照区１とし、他方はペプチドグリカ
ン非添加ペレットを給与する非感染対照区２とした。

【００２７】本発明区と非感染対照区１には、上記と同
様に作製した飼料（ペプチドグリカン添加ペレット）を
毎日、体重の１％ずつ給与し、感染対照区と非感染対照
区２には、上記と同様に作製した対照飼料（ペプチドグ
リカン非添加ペレット）を同様に給与して、いずれも７
日間飼育した。

【００２８】その後は全区に対照飼料（ペプチドグリカ
ン非添加ペレット）のみを給与し、２週間飼育後、本発
明区および感染対照区に、１尾あたり１．５×１０^３Ｃ
ＦＵのビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉｂｒｉｏ
ｓｐ．ＰＪ）を筋肉内接種し、非感染対照区１と非感
染対照区２には生理的食塩水のみを接種して、１０日間
に渡って各区の斃死状況を記録し、比較した。

【００２９】試験の結果を表３に示す。すなわち、感染
対照区の２群では平均生残率が２７．５％であったのに
対し、本発明区の２群での平均生残率は８０．０％とな
った。また、非感染対照区１および非感染対照区２の生
残率はいずれも１００％であった。

【００３０】

【表３】

【００３１】以上の結果から、ビブリオ・エスピー・ピ
ージェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ｐｊ）由来の粗精製ベ
ブチドグリカン添加飼料の給与は、クルマエビ成蝦の抗
病性を顕著に増強することが明らかである。

【００３２】

【実施例２】表４の配合割合により、微粉砕した各原料
を配合した後、配合原料１ｋｇあたり２ｍｇの割合で粗
精製ペプチドグリカンを水とともに添加して水分含量７
５％の液状とし、次いでホモジナイズしたのち噴霧乾燥
して本発明のエビの幼生用微粒子飼料を作製した。

【００３３】

【表４】

【００３４】次に、粗精製ペプチドグリカンの添加をし
ない以外は同様の配合、製造条件により対照飼料を調製
した。

【００３５】ゾエア期のウシエビ幼生を２００尾ずつの
４群に分け、いずれも２ｌのビーカーに収容し、エアレ
ーションしながら飼育した。試験期間中の水温は２３〜
２４℃であった。その内の２群には本発明区の飼料を１
日量として１５ｍｇずつ給与し、残りの２群を対照区と
し、対照飼料を同様に給与した。また、植物性プランク
トン（スケレトネマおよびメロシラ）は、１日量として
飼育水１ｍｌあたり１０００〜１２５０細胞を２回に分
けて給与した。６日後に生残尾数を計数し比較した。

【００３６】試験の結果は表５に示すとおり、対照区の
平均生残率が１５．８％であったのに対し、本発明区で
は４０．３％となった。この結果から、ビブリオ・エス
ピー・ピージェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）由来の
粗精製ベブチドグリカンを添加した微粒子飼料を給与す
ることによって、ウシエビ幼生の生残率を顕著に改善で
きることが明らかとなった。

【００３７】

【表５】

【００３８】

【発明の効果】本発明では、ビブリオ・エスピー・ピー
ジェー（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）の培養菌体より得
られるペプチドグリカンを配合した飼料の給与により、
クルマエビやウシエビ等の甲殻類の幼生期から成体まで
の生体防御能を高めることができる。

【００３９】経口摂取されたペプチドグリカンは甲殻類
の血球の貪食機能等を活性化する結果、生残率が高まる
と考えられる。ビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖｉ
ｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）の培養は極めて容易なため、そ
の培養経費は安価であり、飼料へのペプチドグリカンの
添加量もごく微量でよいことから、僅かな経費で甲殻類
の抗病性を顕著に増強させることができる。

【００４０】ペプチドグリカンは熱安定性が高く、それ
を添加した飼料の製造に特別な配慮は不要である。ま
た、ペプチドグリカンは天然物質であり、また甲殻類が
本来備えている生体防御能を高める効果を発揮するの
で、薬剤使用における残留問題や耐性化等の心配は全く
ない。

【００４１】以上のことから、本発明の飼料を甲殻類に
給与することにより、問題となっている各種の自然減耗
要因を排除でき、種苗生産施設における安定生産や養殖
場の生産性向上に伴う経営改善への寄与が期待できる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ビブリオ・エスピー・ピージェー（Ｖ
   ｉｂｒｉｏ ｓｐ．ＰＪ）由来のペプチドグリカンを含
   有してなる甲殻類用飼料。