JP2015027299A - 機能性飼料組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
この免疫抑制によりP. salmonisのような病理学的微生物による再感染の危険性が増加し、P. salmonisが速やかに再集落形成し、抗生物質の投与が繰り返し必要となる。この抗生物質の広汎な再使用により、魚の免疫が低下し、消化管微生物叢のような生物の天然の微生物叢に影響を及ぼす。給餌効率および成長が低いことは、これに関して抗生物質投与の負の効果として報告されているものの幾つかであり、従って経済的問題だけでなく全般的な魚の健康の問題でもある。魚の健康について一般および消費者の認識が高まることによって、水産養殖生産における有効な代替治療および疾患出現の防止の必要性が増している。
実験1
総数が640尾の大西洋サケSalmo salar(160尾/群)で雌雄混合し出発重量が80gの海水に適合させたものに、1日当たり2%体重で4週間給餌した。実際には、魚は自由に飼料に接近できる。魚を6個のタンクに保持した。給餌期間の開始前に、魚にピットを装着して(pit-tagged)異なる群を識別した。魚を、周囲海水温(16℃)に保持した。死亡数を、1日毎に評価した。
投与前期間の最後の給餌の24時間後に、魚を6個のタンクに群当たりタンク当たり25尾の魚となるように均等に混合した(総数100尾/タンク)。魚に、Piscirikettsia salmonisの致死投与量(LD50)の0.2mlを腹腔内投与した。投与後に、魚にヌクレオチドまたはペプチドグリカンを全く添加していない同一対照食餌を30日間与え(投与後)、実験を終了し、最終的死亡数を評価した。
個体群の50%の死亡率水準(LD50)を決定するための正確な用量を、主要な投与前に評価した。給餌実験に用いた同一ストックの魚から総数220尾(Salmo salar)を、4基の700Lタンクに振り分けた。魚の平均重量は、120−150gであった(55尾/タンク)。タンクには、室温の海水を供給した。魚をタンク条件に順応させたならば、既知力価のP.salmonis PSLT8の4種類の希釈物(1/10、1/100、1/1000および1/10,000)を投与した(0.2ml 魚、腹腔内投与、腹内側)。水温および投与された魚の死亡率データーを、30日間にわたって記録した。様々な食餌の給餌期間と平行してLD50を推定した。
死亡率は、累積死亡率(%)として表した。データーは、Log RankおよびWilcoxon検定(Minitab 13.32, State College, PA, USA)の他にKaplan-Meier生存分析を用いて評価した。相対生存率(RPS)は、下記のようにして計算した。
ヌクレオチドおよびペプチドグリカン(PG)を給餌された魚は、対照食餌を与えられた魚と比較して、投与の30日後の検討の終了時までには有意に高い相対生存率(RPS)を示した(表4、図2)(Log-Rank検定:p<0.001;Wilcoxon検定:p<0.001)。対照群における生存の確率は、ヌクレオチドおよびPG 0.05%、ヌクレオチドおよびPG 0.01%およびヌクレオチドおよびPG 0.005%を投与された処置群ではそれぞれ69%、72%および75%であったのと比較して、49%を下回った(図2)。ヌクレオチドとペプチドグリカンの組合せを含んでなる食餌を投与する処置では死亡率に有意な差はなかったが、投与量が低下するにつれて死亡率が低下する明らかな傾向が見られた(図1)。タンク間の偏差は低く、タンクの影響に有意差は見られなかった(Log-Rank検定:p=0.906;Wilcoxon検定:p=0.952)。
総数が900尾の大西洋サケSalmo salar(150尾/処置群、6処置群)で出発重量が80gの海水に適合させたものに、給餌期間の開始前にピットを装着して(pit-tagged)異なる群を識別した。魚を、周囲海水温(16℃)に保持した。死亡数を、1日毎に評価した。魚に、様々な組合せの6種類の食餌を1日当たり2%体重で8週間給餌した: 追加成分を含まない対照食餌、ヌクレオチドを含んでなる食餌、ペプチドグリカンを含んでなる食餌、およびヌクレオチドとペプチドグリカンの組合せを含んでなる食餌(表5)。ヌクレオチドおよび/またはペプチドグリカンの添加を除けば、総ての食餌は通常の飼料成分を含んでいた(表6)。実際には、魚は自由に飼料に接近できる。
4週間の試験用食餌を投与した後(投与前期間)、魚を群当たりタンク当たり25尾ずつ6個のタンクに均等に割り振った(総数150尾/タンク)。魚に、個体群の50%を殺すと予想された投与量(LD50)のPiscirikettsia salmonis 0.2mlを腹腔内(i.p.)投与した。魚に、投与期間中を通じて対照食餌を投与した。死亡した魚は、毎日取り除き、記録した。
LD50を、様々な食餌の給餌期間と平行して実験1に記載したように評価した。LD50評価についての魚の平均重量は、80gであった(55尾/タンク)。
統計学的評価は、実験1に記載した通りに行った。
LD50用量を投与し、約50%の対照個体群における死亡率水準を得た。最終的な対照死亡率は、53%に達した(表8、図4)。現行の投与研究には、有意なタンクに基づく効果はないと思われる(p=0.967)。
実験1においてヌクレオチドとペプチドグリカンの組合せを給餌したところ、負の対照(市販の食餌)と比較してPiscirickettsia salmonisに対する耐性が有意に増加した。試験群(ペプチドグリカン+ヌクレオチド)間の生存率には有意差はなかったが、実験1では投与量を低くすると生存率は増加する傾向があった。
4g kg−1より低いおよび高い投与量では、いずれも死亡率を増加させることが報告された。同様な用量範囲の効果はブラックタイガーエビ(Penaeus monodon)で観察され、改良された生存率が低めの最適用量で達成された(Boonyaratpalin S. et al. (1995)「ブラックタイガーエビPenaeus monodonの成長、生存、免疫応答およびストレス耐性に対するBrevibacterium lactofermentumから調製したペプチドグリカンの効果」: アジアの水産養殖における疾患II. M. Shariff, J.R. Arthur & RP. Subasinghe (監修), p. 469-477. Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, Philippines)。
PG;最終投与量6mg kg−1体重)で魚に投与したときに、最良の結果を得た。
ペプチドグリカンという用語は、ペプチドグリカンの物質群に属する総ての一般に記載されているおよび未だに記載されていない化合物を包含する。
Claims (39)
- 通常の飼料成分を含んでなる飼料組成物であって、ペプチドグリカンおよびヌクレオチドを含んでなることを特徴とする、飼料組成物。
- 上記ペプチドグリカンが、0.001−0.01重量%、好ましくは0.001−0.005重量%、最も好ましくは0.005重量%の範囲である、請求項1に記載の飼料組成物。
- ヌクレオチドが、0.05%−1重量%、好ましくは0.1−0.5重量%、最も好ましくは0.2重量%の範囲である、請求項1に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、4より大きく、更に好ましくは20より大きく、更に好ましくは40より大きい、請求項1に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きい、請求項1に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、20より大きく、かつペプチドグルカンの量が、飼料組成物の重量の0.001−0.01%の範囲である、請求項1に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きく、かつペプチドグルカンの量が、飼料組成物の重量の0.001−0.01%の範囲である、請求項6に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、20より大きく、かつペプチドグルカンの量が、飼料組成物の重量に対して0.01%未満であり、好ましくは約0.05以下である、請求項6に記載の飼料組成物。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きく、かつペプチドグルカンの量が、飼料組成物の重量に対して0.01%未満であり、好ましくは約0.005%以下である、請求項6に記載の飼料組成物。
- ヌクレオチドの量が飼料組成物の総重量の約0.2%であり、ペプチドグルカンの量が約0.005%である、請求項1に記載の飼料組成物。
- ヌクレオチドが、アデノシン一リン酸、シチジン一リン酸、グアノシン一リン酸、ウリジン一リン酸、チミジン一リン酸を含んでなる群から選択される、請求項1〜10のいずれか一項に記載の飼料組成物。
- 組成物が、更に他の免疫刺激および/または抗炎症成分を含んでなる、請求項1〜11のいずれか一項に記載の飼料組成物。
- 動物の感染性疾患の予防および/もしくは処置、並び/または疾患の症状の軽減のための医薬組成物および/または栄養組成物および/または機能性飼料の製造ための、通常の飼料成分、ヌクレオチドおよびペプチドグリカンを含んでなる組成物の使用。
- 上記ペプチドグルカンが、0.001−0.01重量%、好ましくは0.001−0.005重量%、最も好ましくは0.005重量%の範囲である、請求項13に記載の使用。
- ヌクレオチドが、0.05重量%−1重量%、好ましくは0.1−0.5重量%、最も好ましくは0.2重量%の範囲である、請求項13に記載の使用。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、4より大きく、更に好ましくは20より大きく、更に好ましくは40より大きい、請求項13に記載の使用。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きい、請求項13に記載の使用。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、20より大きく、かつペプチドグルカンの量が飼料組成物の重量の0.001−0.01%の範囲である、請求項13に記載の使用。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きく、かつペプチドグルカンの量が飼料組成物の重量の0.001−0.01%の範囲である、請求項18に記載の使用。
- ペプチドグルカンに対するヌクレオチドの重量比が、40より大きく、かつペプチドグルカンの量が飼料組成物の重量に対して0.01%未満であり、好ましくは約0.005%以下である、請求項18に記載の使用。
- ヌクレオチドの量が飼料組成物の総重量の約0.2%であり、かつペプチドグルカンの量が約0.005%である、請求項13に記載の使用。
- ヌクレオチドが、アデノシン一リン酸、シチジン一リン酸、グアノシン一リン酸、ウリジン一リン酸、チミジン一リン酸を含んでなる群から選択される、請求項13〜21のいずれか一項に記載の使用。
- 組成物が、更に他の免疫刺激および/または抗炎症成分を含んでなる、請求項13〜21のいずれか一項に記載の使用。
- 動物の感染性疾患に関連する症状を防止または軽減するための機能性飼料組成物としての請求項13〜23のいずれか一項に記載の使用。
- 感染体に攻撃された魚の生存および/または成長を増加させるための、請求項13〜23のいずれか一項に記載の使用。
- 感染が、Piscirikettsia salmonis、Moritella viscosa、Francisella種,マウス・ロット、連鎖球菌感染症、ビブリオ感染症のような細菌、膵臓疾患、NSAV、鰓炎症(GI)、心臓・骨格筋炎症(HSMI)、サケ伝染性貧血症(ISA)ウイルス、サプロレグニオシス、およびウミシラミ感染症によって引き起こされる、請求項13〜25のいずれか一項に記載の使用。
- 動物が、水生動物である、請求項13〜26のいずれか一項に記載の使用。
- 水生動物が、魚類、甲殻類または軟体動物である、請求項27に記載の使用。
- 魚類が、サケ、カレイ、または任意の他の養殖可能な魚種である、請求項28に記載の使用。
- 魚類が、大西洋サケSalmo salarである、請求項29に記載の使用。
- 動物の感染性疾患に関連する症状を防止または軽減するための、請求項13に記載の使用。
- 感染後の効果的回復および/または感染による抗生物質処置のための、および/または再感染の危険を軽減するための、請求項13に記載の使用。
- 抗生物質と組み合わせたおよび/または抗生物質処置の前の感染症の改良処置のための、請求項13に記載の使用。
- 感染症に罹りやすい魚類の給餌方法であって、請求項1〜12のいずれか一項に記載の組成物を、感染体に攻撃される前の期間、感染中または魚が感染してしまった後に魚に供給することを特徴とする、方法。
- 組成物を感染前の1〜12週間、更に好ましくは2〜6週間、最も好ましくは4週間の時期に給餌する、請求項34に記載の方法。
- 魚にヌクレオチドを更に含んでなる通常の飼料組成物を所定期間給餌した後、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物を給餌する、請求項34に記載の方法。
- ヌクレオチドを更に含んでなる飼料組成物を1〜8週間、好ましくは2〜4週間、最も好ましくは3週間給餌する、請求項36に記載の方法。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の飼料組成物を1〜12週間、好ましくは1週間給餌する、請求項34〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 感染が、Piscirikettsia salmonis、Moritella viscosa、Francisella種,マウス・ロット、連鎖球菌感染症、ビブリオ感染症のような細菌、膵臓疾患、NSAV、鰓炎症(GI)、心臓・骨格筋炎症(HSMI)、サケ伝染性貧血症(ISA)ウイルス、サプロレグニオシス、およびウミシラミ感染症によって引き起こされる、請求項34〜38のいずれか一項に記載の方法。
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